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UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA








VALIDACION DEL METODO ESPECTROFOTOMETRICO (3500-Fe D) DE LA
FENANTROLINA PARA DETERMINACION DE HIERRO TOTAL EN AGUA
POTABLE.

TRABAJO DE GRADUACION PRESENTADO POR
DIANA VIRGINIA GARCIA MENENDEZ
GUILLERMO ERNESTO MELGAR SANTIAGO

PARA OPTAR AL GRADO DE
LICENCIATURA EN QUIMICA Y FARMACIA

MARZO 2011

SAN SALVADOR, EL SALVADOR, CENTRO AMERICA.
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR


RECTOR
MSc. RUFINO ANTONIO QUEZADA SANCHEZ

SECRETARIO GENERAL
LIC. DOUGLAS VLADIMIR ALFARO CHAVEZ



FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA


DECANO
LIC. SALVADOR CASTILLO AREVALO

SECRETARIA
MSc. MORENA LIZETTE MARTINEZ DE DIAZ



COMITE DE TRABAJO DE GRADUACION



COORDINADORA GENERAL:
Licda. Mara Concepcin Odette Rauda Acevedo.



ASESORAS DE AREA DE CONTROL DE CALIDAD DE PRODUCTOS
FARMACEUTICOS, COSMETICOS Y VETERINARIOS:
Licda. Zenia Ivonne Arvalo de Mrquez.
MSc. Roco Ruano de Sandoval.


DOCENTES DIRECTORES:
Lic. Henry Hernndez Contreras.
Licda. Rosa Mirian Rivas Larn.




AGRADECIMIENTOS.

Primero a Dios Todopoderoso por haberme dado la sabidura y la gua
necesaria para poder terminar mi primer triunfo profesional.

Adems agradezco a mis Padres por haber sido un pilar muy importante en la
culminacin de mi carrera profesional, ya que me apoyaron incondicionalmente
y me impulsaron siempre a seguir hasta lograr finalmente con este trabajo de
investigacin mi primer xito profesional. Asimismo agradezco a todas las
personas que han estado siempre a mi lado en todo este proceso, ya que han
sido parte muy importante en mi vida ayudndome con su apoyo y cario ya
que me dieron la fuerza necesaria para seguir adelante.

Agradecimientos a mis Docentes Directores por los conocimientos brindados y
su gua, ya que fueron el timn de este barco para poder llegar a la meta de
este trabajo de investigacin.

A todos muchas gracias por su infinito amor.


Diana Garca

AGRADECIMIENTO.

Agradezco a Dios Todopoderoso, Creador de los cielos y la tierra por darme
sabidura e inteligencia, pues reconozco que de no ser por El no hubiese
finalizado esta etapa de mi vida. Bien dicen las Santas Escrituras: Porque ha
inclinado a m su odo; por tanto le invocare en todos mis das. Clemente es
Jehov, y justo; S, misericordioso es nuestro Dios.

A mi Madre de la cual siento mucho orgullo y dicha, que bendicin ser su hijo,
gracias por su amor incondicional; a mi Ta Roxana pues sin ser su hijo me ha
tratado como si lo fuera, que Dios la bendiga, a mi Abuelo (Pap) y mi To Mario
quienes han sido mis padres, dndome principios valores y carcter, haciendo
de mi un hombre. Aunque usted no pueda leer estas lneas Pap, agradezco a
Dios por darme la oportunidad de expresrselas en vida y como le dije lo Amo
Pap.

As tambin me siento dichoso por tener a una gran mujer por novia
(Jacqueline) y si Dios me lo permite y Tu tambin en un futuro seas mi esposa.

Agradezco a mis asesores de tesis por su gua y esmero durante todo el
proceso.

Finalmente, pero no menos importante a mi amiga y compaera de tesis Diana
a quien ms que una amiga considero una hermana. Y sin planearlo hemos
terminado juntos esta etapa, que gusto de que sea a tu lado, que Dios te
bendiga con su amor.


Guillermo Melgar















INDICE
Pg.
Resumen
Captulo I
1.0 Introduccin xviii

Capitulo II
2.0 Objetivos

Capitulo III
3.0 Marco Terico 23
3.1 Generalidades del agua potable 23
3.2 Definicin de hierro 24
3.2.1Determinacion de hierro por medio del mtodo espectrofotomtrico
(3500-Fe D) de la fenantrolina 24
3.3 Fundamentos de la espectroscopa ultravioleta-visible 25
3.3.1 Ley de Beer 26
3.4 Validacin de mtodos analticos 27
3.5 Procedimientos de Operacin Estndar (POEs) 29
3.5.1 Ventajas de los POEs 30
3.5.2 Contenido de los procedimientos de operacin estndar 31
3.6 Documentacin 31
3.6.1 Protocolo de validacin 31
3.6.2 Informe de validacin 32
3.7 Parmetros de desempeo 32
3.7.1 Exactitud 32
3.7.2 Precisin 33
3.7.3 Linealidad 34
3.7.4 Intervalo 35
3.7.5 Especificidad 35
3.7.6 Lmite de deteccin 36
3.7.7 Lmite de cuantificacin 36
3.7.8 Robustez 37

Capitulo IV
4.0 Diseo Metodolgico 39
4.1 Tipo de estudio 39
4.2 Investigacin bibliogrfica 39
4.3 Parte experimental 34
4.3.1 Instrumental 40
4.3.2 Reactivos 40
4.3.3 Procedimiento hierro total 41
4.3.4 Protocolo de validacin y registro de resultados para la determinacin
de hierro total en agua potable 42
4.3.5 Evaluacin de los parmetros de desempeo del mtodo 43
4.3.5.1 Exactitud 43
4.3.5.2 Precisin del mtodo 44
4.3.5.3 Especificidad
45
4.3.5.4 Lmite de cuantificacin 46
4.3.5.5 Lmite de deteccin 48
4.3.5.6 Linealidad 48
4.3.5.7 Intervalo 50
4.3.5.8 Robustez 50
4.4 Criterios de aceptacin 51
Captulo V
5.0 Resultados y Discusin de resultados 57

Captulo VI
6.0 Conclusiones 83

Captulo VII
7.0 Recomendaciones 86
Bibliografa
Glosario
Anexos

INDICE DE ANEXOS

ANEXO N
1. Mtodo Oficial de la APHA, Mtodo de la Fenantrolina
2. Partes y funcionamiento del equipo espectrofotomtrico Shimadsu UV
1800
3. Certificado de anlisis del estndar de hierro
4. Procedimiento de Operacin Estndar
5. Grfica de linealidad del Mtodo Espectrofotomtrico (3500-Fe D)
6. Ejemplo de cascada de dilucin para la preparacin de solucin estndar
7. Clculos y resultados para el informe de validacin
8. Tabla t-Student










INDICE DE CUADROS

CUADRO N N Pg
1. Criterios de aceptacin 53
2. Protocolo de Validacin para
Mtodo Espectrofotomtrico
(3500-Fe D) 54
3. Informe de Validacin para Mtodo
Espectrofotomtrico (3500-Fe D) 75
4. Resumen de datos obtenidos para Mtodo
Espectrofotomtrico (3500-Fe D) 82











INDICE DE TABLAS

TABLA N N Pg
1. Resultados de exactitud de hierro total
en agua potable 58
2. Resultado de repetibilidad de hierro
total en agua potable 61
3. Resultados de especificidad de hierro
total en agua potable 62
4. Resultados del lmite de cuantificacin
de hierro total en agua potable 63
5. Resultados de los blancos de hierro
total en agua potable 65
6. Resultados del lmite de deteccin de
hierro total en agua potable 66
7. Resultados de la linealidad de hierro
total en agua potable 67
8. Resultados de la comprobacin de la
linealidad de hierro total en agua potable 70
9. Resultados de la robustez para la
determinacin de hierro total en agua potable 73

SIMBOLOS Y ABREVIATURAS

APHA American Public Health Asosiation.
r
2
Coeficiente de determinacin.
CONACYT Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologia.
CV Coeficiente de variacin.
CV
x/y
Coeficiente de variacin de regresin.
S Desviacin estndar.
S
b
Desviacin estndar de los blancos.
S
y/x
Desviacin estndar de regresin.
d
i
Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin
respecto a la media aritmtica de la condicin normal.
EPA Environmental Protection agency (Agencia de Proteccin
Ambiental de EE.UU).
IC(b
1
) Intervalo de confianza para la pendiente.
IC(
o
) intervalo de confianza para la ordenada al origen.
IEC International Electrotechnical Commission (Comisin
Electrotcnica Internacional).
ISO International Organization for Standadizacion (Organizacin
Internacional para la Estandarizacin).
LC Lmite de cuantificacin.
LD Lmite de deteccin.
Mayor o igual.
y Media aritmtica
Menor o igual.
NSO Norma Salvadorea Obligatoria.

o
Ordenada al origen.
ppm Partes por milln.
b
1
Pendiente.

R Porcentaje de recuperacin.
E Sumatoria.
E
y
Sumatoria de datos obtenidos de los ensayos.
UV Ultravioleta.


















RESUMEN

El presente trabajo muestra en detalle el proceso que se lleva a cabo en la
validacin del mtodo analtico, especficamente el Mtodo de la Fenantrolina
en la determinacin de hierro total en agua potable. Para lo cual se caracteriz
el analito en estudio y se trabaj con el Mtodo Oficial del Libro de Mtodos
Normalizados para el Anlisis de Aguas Potables y Residuales con nmero
3500-Fe D, el cual detalla todas las consideraciones y procedimientos a seguir
para el desarrollo del mtodo en un laboratorio de anlisis. As tambin este
parmetro est normalizado en la Norma Salvadorea Obligatoria (NSO
13.07.01:04) Agua, Agua Potable (1 actualizacin).

En el desarrollo de esta validacin por ser un mtodo oficial se realizaron los
siguientes parmetros: exactitud, precisin, especificidad, lmite de
cuantificacin, lmite de deteccin, linealidad, intervalo y robustez. Para cada
uno de estos parmetros se muestra el cumplimiento de su criterio de
aceptacin en la determinacin de la impureza en estudio. Los resultados
obtenidos de la parte experimental fueron los siguientes: una exactitud con un
CV 58.27%, precisin en trminos de repetibilidad con un CV 7.11%,
especificidad con un resultado que se debi nicamente al analito en estudio,
limite de cuantificacin y limite de deteccin con un r
2
0.998983, linealidad con
r
2
0.999995 y un CV
x/y
0.26%, adems de un intervalo de confianza que
comprende de 0.1 a 2.0 mg/L de hierro y una diferencia absoluta de la media
aritmtica de 0.2 a temperatura baja y 0.007 a temperatura alta lo que
comprueba la robustez del mtodo. Llevndose acabo dichos parmetros bajo
las condiciones del Laboratorio Fisicoqumico de Aguas de la Facultad de
Qumica y Farmacia de la Universidad de El Salvador.

Basndose en los resultados obtenidos se puede decir, que el Mtodo
Espectrofotomtrico (3500-Fe D) de la Fenantrolina para la determinacin de
hierro total en agua potable es confiable y seguro, por lo que puede utilizarse en
actividades de proyeccin social de la Facultad de Qumica y Farmacia de la
Universidad de El Salvador; ya que es un mtodo prctico, de bajo costo, o
puede ser utilizado como un recurso didctico.



















CAPITULO I
INTRODUCCION











I. INTRODUCCION

El anlisis de agua es de gran importancia, pues a travs de l es posible
conocer si sta es apta para consumo humano, para lo cual debe estar excenta
de organismos capaces de causar enfermedades y elementos o sustancias que
pueden producir efectos fisiolgicos perjudiciales. Para realizar dichos anlisis,
es necesario utilizar mtodos analticos, por medio de los cuales puedan
determinarse si se esta dando cumplimiento a valores especificados por
normativas nacionales o internacionales.


Para obtener resultados que sean lo suficientemente confiables, se necesita
implementar sistemas de aseguramiento de calidad, los cuales pueden lograrse
mediante el empleo de mtodos analticos validados.


Validar un mtodo analtico no es ms que la realizacin de una serie de
pruebas adecuadas y documentadas; que permitan dar cumplimiento a las
especificaciones y atributos de calidad, demostrando stos que el mtodo es
apropiado para los propsitos requeridos.


El presente trabajo pretende realizar la validacin del mtodo analtico para la
medicin de hierro total en agua potable; por el Mtodo Espectrofotomtrico de
la Fenantrolina, Mtodo Oficial del libro Mtodos Normalizados para el anlisis
de aguas potables y residuales con nmero 3500-Fe D. El hierro total es un
parmetro, normalizado por la Norma Salvadorea Obligatoria (NSO
13.07.01:04) Agua, Agua Potable (1 actualizacin); los anlisis se realizarn
en el Laboratorio Fisicoqumico de Aguas de la Facultad de Qumica y Farmacia
de la Universidad de El Salvador, durante los meses de Octubre a Noviembre
xviii
de 2010. Perodo en el cual se espera obtener evidencia experimental y
documental, del cumplimiento de los parmetros de desempeo del Mtodo
Espectrofotomtrico de la Fenantrolina.


Para validar este mtodo que es oficial, se han seleccionado los siguientes
parmetros: exactitud, precisin (repetibilidad), especificidad, lmite de
deteccin, lmite de cuantificacin, linealidad, intervalo y robustez. El desarrollo
de estos parmetros se realiz con estndar de hierro trazable al nist. (ver anexo N
3). Mediante esta validacin se pretende determinar hierro total en agua potable,
aumentar la confiabilidad de los resultados obtenidos y a la vez tener la opcin
de que sea un mtodo a considerar por en el Laboratorio Fisicoqumico de
Aguas, para futuras determinaciones.













xix










CAPITULO II
OBJETIVOS.











2.0. OBJETIVOS


2.1 OBJETIVO GENERAL
Validar el Mtodo Espectrofotomtrico (3500-Fe D) de la Fenantrolina para
la determinacin de hierro total en agua potable.


2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
2.2.1 Elaborar una propuesta de protocolo de validacin para la
determinacin de hierro total en agua potable estableciendo el
cumplimiento de los parmetros de desempeo.


2.2.2 Desarrollar los procedimientos de operacin de los parmetros de
desempeo: Exactitud, precisin (repetibilidad), especificidad,
lmite de cuantificacin, lmite de deteccin, linealidad, rango;
aplicando el mtodo de estudio y estableciendo los criterios de
aceptacin.


2.2.3 Definir factores que puedan influir en el Mtodo y afectar los
resultados tanto cuantitativamente como cualitativamente,
mediante el estudio conocido como Robustez.


2.2.4 Interpretar los resultados obtenidos en cada parmetro de estudio,
por medio de tcnicas estadsticas para establecer si cumplen con
los criterios de aceptacin.


2.2.5 Elaborar el reporte de validacin segn los resultados obtenidos.











CAPITULO III
MARCO TEORICO











3.0. MARCO TEORICO
3.1 Generalidades del agua potable.
(7)


Se denomina agua potable o agua de consumo humano al agua bebible
en el sentido que puede ser consumida por personas y animales sin
riesgo de contraer enfermedades. El trmino se aplica al agua que ha
sido tratada para su consumo humano segn las normas de calidad
especificadas por las autoridades locales e internacionales.


En la Unin Europea la normativa 98/83/EU establece valores mximos y
mnimos para el contenido en minerales, diferentes iones como cloruros,
nitratos, nitritos, amonio, calcio, magnesio, fosfato, arsnico, etc.,
adems de los grmenes patgenos. Los controles sobre el agua potable
suelen ser ms severos que los controles aplicados sobre las aguas
minerales embotelladas.
Las causas de la no potabilidad son:
- Bacterias
- Virus.
- Minerales (en forma de partculas o disueltos)
- Productos txicos
- Depsitos o partculas en suspensin.


Tomando en consideracin que las causas de no potabilizacin
involucran parmetros fisicoqumicos y bacteriolgicos; haciendo nfasis
en el aspecto fisicoqumico, puede decirse que las fuentes de
contaminacin de agua son producidas en su mayora por desechos
23
industriales de distintas reas, como pueden ser: textil, agrcola, qumica,
minera, etc. Incorporando sustancias y elementos que son altamente
perjudiciales a la salud en cantidades que se encuentren arriba de los
valores permitidos por la NSO 13.07.01:04; entre estos elementos se
encuentran los metales: arsnico, cadmio, cianuro, cromo, manganeso,
mercurio, plomo, hierro entre otros.

3.2 Definicin de hierro.
(8)


El hierro es uno de los contaminantes que con ms frecuencia se
encuentra en el agua potable. La agencia de la proteccin del medio
ambiente (EPA) refiere al hierro como contaminante secundario. Esto
significa que el EPA ha fijado que el hierro es una consideracin esttica
ms bien que una consideracin de la salud. Segn la EPA si usted tiene
hierro en un exceso de 0.3 miligramo por litro en agua potable,
probablemente ser notorio el color salobre, el sedimento oxidado, el
sabor amargo o metlico, las manchas marrn-verdes, bebidas
descoloradas. Cuando el hierro viene en contacto con oxgeno, cambia a
un compuesto rojizo que pueda descolorar los accesorios de cuarto de
bao y el lavadero. Ocurre naturalmente de la roca o puede ser
introducido por los materiales de plomera. En este tiempo, no hay
efectos perjudiciales hacia la salud conocidos, a causa de la cantidad
hierro elevada en el agua potable.
Existen varios mtodos para el anlisis de hierro total entre ellos:

3.2.1 La determinacin de por medio del Mtodo Espectrofotomtrico
(3500-Fe D) de Fenantrolina.
(1)


El Mtodo de Fenantrolina consiste en dar un tratamiento a la muestra el
cual reduce al hierro a estado ferroso, por ebullicin con acido clorhdrico
24
e hidroxilamina y se trata con 1,10-fenantrolina, hasta obtener un pH
entre 3.2 a 3.3 dando la formacin de un complejo rojo-naranja, siendo
este un quelato de tres molculas de fenantrolina por cada tomo de
hierro ferroso; la solucin coloreada obedece a la ley de Beer.


3.3 Fundamentos de la espectroscopa ultravioletavisible.
(9)


El principio de la espectroscopa ultravioletavisible involucra la
absorcin de radiacin ultravioletavisible por una molcula, causando la
promocin de un electrn de un estado basal a un estado excitado. La
longitud de onda comprende entre 160 y 780 nm.


La absorcin de radiacin UVvisible por una especie se da en 2 etapas:
- Excitacin electrnica
- Relajacin. Puede ser por:
- Emisin de calor
- Reaccin fotoqumica
- Emisin de fluorescencia / fosforescencia


Las bandas que aparecen en un espectro UVvisible son anchas, ya que
se superponen transiciones vibracionales y electrnicas.


La excitacin corresponde a los electrones de enlace, por ello los picos
de absorcin pueden correlacionarse con los tipos de enlaces. Por este
motivo la espectroscopia UVvisible es vlida para identificar grupos
funcionales en una molcula.



25



3.3.1 Ley de Beer.
(4)

Cuando un rayo de luz monocromtico pasa a travs de un medio
absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a medida que
aumenta la concentracin de la sustancia absorbente en el medio.

sol. absorbente
concentracin C
rayo incidente rayo emergente
luz monocrom.
intensidad (P
0
) intensidad (P)
b
Espesor de la solucin

La ecuacin que expresa esta ley es la siguiente:
abC
P
Po
A = = log
Donde:
A: absorbancia
a: absortividad
C: concentracin.
b: longitud de la trayectoria de la radiacin.


De acuerdo con esta ley, la absorbancia (a) est relacionada linealmente
con la concentracin (c) de las especies absorbentes y con la longitud de
la trayectoria de la radiacin (b) en el medio absorbente.


La absorbancia es la cantidad de intensidad de luz que absorbe una
muestra y la absortividad es la medida de la cantidad de luz absorbida
por una solucin. Dado que la absorbancia es una cantidad
26
adimensional, la absortividad debe tener unidades que cancelen las
unidades de b y c, por ejemplo, si c tiene unidades de gramos por litro
(gL
-1
) y b esta en centmetros (cm), la absortividad tiene unidades de
litros por gramo por centmetros (Lg
-1
cm
-1
).

Cuando la concentracin se expresa en mol por litro (mol L) y b en
centmetros, la constante de proporcionalidad se denomina absortividad
molar y se expresa con el smbolo . Por tanto, bc A c = . Donde tiene
unidades de litro por mol centmetro (L mol
-1
cm
-1
).


3.4 Validacin de mtodos analticos.
(6)


Frecuentemente, los laboratorios tanto del sector qumico, industrial,
farmacutico y ambiental manifiestan la necesidad de implementar
sistemas que puedan asegurar la calidad establecidas bajo normas
internacionales, con el propsito de lograr los niveles mas elevados de
confiabilidad, tanto en materiales, equipos, metodologas y en la calidad
de los datos que se generan a partir de ellos.
(6)



Uno de los elementos primordiales que proveen calidad a los laboratorios
es el empleo de mtodos analticos validados. La validacin de mtodos
analticos es el proceso por el cual se demuestra por estudios de
laboratorios que la capacidad del mtodo satisface los requisitos para la
aplicacin analtica deseada; es decir cumple con su propsito. Por lo
que la validacin de mtodos analticos segn la Norma Salvadorea
ISO/IEC17025:2005 contiene los requisitos generales para la
competencia de laboratorios de prueba y calibracin.


27
Ya que la validacin es establecida por medios de estudios
experimentales, que demuestran cientficamente que el procedimiento
analtico posee las caractersticas de desempeo adecuadas, para dar
cumplimiento a los requerimientos de las aplicaciones analticas
adecuadas.


En funcin de la aplicacin analtica de un mtodo los parmetros de
desempeo a estudiar pueden ser
(3)
:
- Precisin/adecuabilidad del sistema
- Linealidad del sistema
- Especificidad*
- Exactitud* y repetibilidad*
- Linealidad del mtodo*
- Precisin del mtodo* o precisin intermedia
- Estabilidad analtica de la muestra
- Lmite de deteccin*
- Lmite de cuantificacin*
- Robustez*
- Tolerancia.

Nota: Se determinaran los parmetros de desempeo sealados con asterisco;
Esperando dar de esta manera cumplimiento a los requisitos establecidos por la
norma salvadorea ISO/IEC 17025:2005.







28
3.5 Procedimientos de Operacin Estndar (POEs)

Los Procedimientos de Operacin Estndar (POEs) son procedimientos
escritos y aprobados segn normas de correcta elaboracin y control de
calidad que describen, de forma especfica, las actividades que se llevan
a cabo; por lo que llegan a ser una gua en el momento de una
operacin, ya que provee instrucciones detalladas por escrito que
especifican la manera de cmo debe efectuarse una prueba o
procedimiento administrativo o cmo operar, mantener y calibrar un
equipo.


El original de la versin de un POEs se conserva en un archivo central, y
se distribuye copias del mismo a los puntos donde se efecta el
procedimiento.


Una de las caractersticas invalorables de la aplicacin de los POES, es
la posibilidad de responder inmediatamente frente a fallas en la calidad
de los productos o procedimiento analtico. Sin olvidar que un buen
procedimiento, tiende a minimizar la aparicin de tales fallas.


Entonces, ms all de la obligatoriedad de los POES, es indispensable
entender que el uso de estas operaciones que es parte integrante de los
procesos de fabricacin y que, por ello son complementarios de las
Buenas Prcticas de Manufactura (BPM).







29
3.5.1 Ventajas de los POEs

La planificacin, estructuracin y desarrollo de las actividades de un
laboratorio utilizando POEs, presenta numerosas ventajas, como las que
se mencionan a continuacin:
- Mejora la organizacin y ejecucin de las actividades.
- Facilita el trabajo al personal, tanto de carcter tcnico como
administrativo.
- Facilita el entrenamiento de nuevo personal.
- Proporciona uniformidad en la utilizacin de los equipos, de toma de
muestras y de anlisis, reduciendo las posibilidades de error.
- Facilita delegar funciones.
- Garantiza el registro de los datos primarios.
- Proporciona datos comparativos entre s, tanto dentro del propio
laboratorio como con otros laboratorios, a lo largo del tiempo.


3.5.2 Contenido de los procedimientos de operacin estndar

En un procedimiento pueden figurar, como mnimo, los siguientes
apartados:
- Titulo: Establece la accin que se pretende ejecutar.
- Objetivo: Explica clara y brevemente el objetivo del procedimiento.
- Alcance: Establece el lugar para cumplir el procedimiento.
- Principio: Establece el fundamento de un mtodo. (Este apartado se
utilizar cuando fuese necesario y aplique.)
- Equipo, materiales y reactivos a utilizar: Se dar un detalle especfico de
cada uno.
- Responsabilidades: Determina el personal que es idneo para el
cumplimiento del proceso de operacin.
- Desarrollo: Es la descripcin detallada del procedimiento.
30
- Referencia: Especifica el material bibliogrfico del cual fundamenta el
proceso.

3.6 Documentacin.
(5)

3.6.1 Protocolo de validacin

Cuando se realiza la validacin de un mtodo analtico es necesario
contar con la documentacin que sea capaz de evidenciar un objetivo,
definicin del sistema a validar, identificacin de los parmetros, diseo
del plan experimental y criterios de aceptacin. Este debe ser especifico
para determinado mtodo; debiendo ir firmado y fechado por las
personas responsables de la validacin y aprobacin del mismo.


El esquema de un protocolo de validacin puede incluir los puntos
siguientes:
- Objetivo: finalidad de la validacin.
- Responsables: relacin de las personas que llevan a cabo las validacin
y de las que la aprobarn.
- Parmetros a estudiar: los parmetros se seleccionan en funcin de las
caractersticas de la muestra, tipo de mtodo analtico y rango de
concentracin del analito.
- Muestra(s): el muestreo se realizar de acuerdo con procedimientos
escritos, en los cuales se indicarn los sistemas de identificacin y
tratamiento previo de las muestras.
- Equipo(s): se han de identificar los equipos implicados en el proceso de
validacin y comprobar que estn convenientemente calificados,
reflejando esto en el informe de validacin.
31
- Mtodos analticos: existiran mtodos que describen el procedimiento
para la determinacin de los parmetros a evaluar, con indicacin de
reactivos, patrones, materiales, tcnicas y clculos.
- Criterios de aceptacin: se establecern para cada uno de los
parmetros y estarn basados en las necesidades o la finalidad del
mtodo y en la informacin recogida en la fase de desarrollo del
procedimiento analtico.
- Registro de resultados: este incluir el nmero de muestras, fecha del
anlisis, as como tambin el analista que realizar el parmetro,
absorbancia correspondiente al nmero de muestra en estudio y la
concentracin de muestra de la misma.

3.6.2 Informe de validacin
El contenido del informe de validacin debe abarcar los siguientes datos:
titulo, resultados, anlisis de resultados, cuadro comparativo con criterios
de aceptacin, conclusiones.


3.7 Parmetros de desempeo.
(5)

3.7.1 Exactitud
La exactitud de un procedimiento analtico expresa la proximidad entre el
valor que es aceptado convencionalmente como valor verdadero o un
valor de referencia y el valor experimental encontrado.


No debe confundirse la exactitud y precisin. Pues la precisin esta
relacionada con la dispersin de una serie de mediciones, pero no da
ninguna indicacin de lo cerca que esta el valor verdadero. Para que un
mtodo sea exacto requiere de un cierto grado de precisin.
32
Para definicin de exactitud surge el principal problema de cual es el
valor aceptado como verdadero de un determinado analito; el valor
verdadero en muchos casos se desconoce, pero cuando se disponen de
patrones de referencia certificados, el valor de dicho patrn es el que se
acepta como verdadero, por lo que la exactitud puede evaluarse
aplicando el mtodo sobre dicho patrn.


La exactitud experimentalmente se establece a travs del rango
especificado en el procedimiento analtico, pudiendo ser evaluado con un
mnimo de tres niveles de concentracin cada uno por triplicado y
debiendo ser reportado su resultado como porcentaje de recobro de la
cantidad del estndar de referencia o por la diferencia entre el porcentaje
promedio del ensayo y el valor aceptado como verdadero.


3.6.2 Precisin
La precisin expresa el grado de concordancia entre una serie de
medidas y tomas mltiples a partir de una misma muestra homognea en
las condiciones prescritas.


El objetivo de estudiar la precisin en un mtodo es conocer la
variabilidad que pudiera haber en el mismo, esta variabilidad pudiera
deberse a errores inherentes al mtodo de ensayo, entre los factores que
influyen en las causas de error sobre los resultados podemos tener: error
del analista, error del equipo o instrumental, error causado por reactivos,
etc. De aqu la importancia de estudiar este parmetro. En la precisin se
puede considerar tres niveles: repetibilidad, precisin intermedia,
reproducibilidad.


33
Repetibilidad: estudia la variabilidad del mtodo efectuando una serie de
anlisis sobre la misma muestra en las mismas condiciones operativas,
en un mismo laboratorio y en un periodo de corto.
Precisin intermedia: estudia la variabilidad del mtodo efectuando una
serie de anlisis sobre la misma muestra pero en condiciones operativas
diferentes y en un mismo da.


La precisin del mtodo analtico se expresa generalmente como el
coeficiente de variacin (CV) de una serie de medidas de igual manera
que la repetibilidad.
La reproducibilidad estudia la variabilidad del mtodo bajo condiciones
operativas diferentes y en distintos laboratorios.


La precisin se determina con el clculo de la desviacin estndar
relativa o coeficiente de variacin, y se expresa dando el valor medio
obtenido junto con el mas-menos de la variabilidad de los resultados.


3.6.3 Linealidad
La linealidad es la capacidad del mtodo para proporcionar resultados
que son directamente proporcionales a la concentracin del analito en la
muestra dentro de un rango establecido.


Siempre que sea posible se buscar una respuesta de tipo lineal que
facilitar su trazado, interpolacin e interpretacin, para lo cual se espera
obtener resultados de prueba que sean directamente proporcionales del
analito en muestra. Por lo que se evala tanto por inspeccin visual de
un grfico respuesta analtica vrs concentracin del analito, como
tambin por mtodos estadsticos como: regresin lineal, coeficiente de
34
determinacin, intervalo de confianza de la pendiente, intervalo de
confianza de la ordenada al origen y el coeficiente de variacin de
regresin.


3.6.4 Intervalo
Se define como intervalo la concentracin superior e inferior del analito
para el cual se ha demostrado la correcta precisin, exactitud y la
linealidad del mtodo descrito.


El intervalo se expresa normalmente en las mismas unidades que los
resultados de las pruebas, obtenidos mediante el mtodo analtico.


3.6.5 Especificidad
La especificidad es la capacidad de un mtodo analtico para medir o
cuantificar simultneamente o separadamente los analitos de inters de
forma inequvoca, en presencia de otras sustancias qumicas que pueden
estar presentes en la muestra. Puesto que es muy difcil declarar que no
exista interferencia en la determinacin de un analito, pues existe la
posibilidad de encontrar alguna sustancia, desconocida, que interfiera.


En este estudio, como norma general, se comparan los resultados de los
anlisis de muestras con o sin analito en presencia o ausencia de
impurezas. Y los resultados del estudio se vinculan principalmente al
origen de la muestra, su preparacin y las condiciones instrumentales,
por lo que cualquier cambio en estos factores supone reconsiderar el
estudio antes realizado.



35

3.6.6 Lmite de deteccin.
(3) (5)

Se entiende por lmite de deteccin a la minima cantidad de analito en la
muestra, que se puede detectar aunque no necesariamente cuantificar
bajo dichas condiciones experimentales.


Este trmino no debe confundirse ni asociarse con el de sensibilidad,
puesto que este mtodo de anlisis se utiliza para discriminar pequeas
concentraciones o masas de analitos.


Lo que se pretende alcanzar con el lmite de deteccin es que el mtodo
es realmente capaz de detectar la concentracin lmite, por medio de una
seal que se medir con certeza, pudiendo detectar su presencia sin
incurrir en falsos positivos.


La concentracin del analito que, cuando se procesa a travs del mtodo
completo, produce una seal con una probabilidad del 99% de ser
diferente del blanco. Para siete replicas de la muestra, la media debe ser
3,14s veces superior al blanco.


3.6.7 Lmite de cuantificacin.
(3) (5)

Se entender por lmite de cuantificacin la minima cantidad de analito
presente en la muestra, que se puede cuantificar, bajo condiciones
descritas, con una adecuada precisin y exactitud.
El valor lmite cuantitativo es nicamente indicativo y normalmente no
debe usarse para tomar decisiones.



36

3.6.8 Robustez
La robustez de un mtodo analtico es la medida de sus capacidades
para permanecer inalterado ante pequeas pero deliberadas variaciones
en ciertos parmetros, proporcionando fiabilidad durante el empleo en
rutina. Este estudio surgi con el fin de resolver problemas que se
planteaban en la transferencia de mtodos analticos entre laboratorios
surgiendo este con el fin de identificar los factores potencialmente crtico,
surgiendo la necesidad de evaluar las fuentes de variaciones del mtodo
en anlisis.


Se recomienda llevar acabo la robustez en el desarrollo del mtodo y no
en la validacin propiamente dicha, pues puede caerse en el error de
validar un mtodo que sea poco robusto, incurriendo malos resultados y
prdida de tiempo y dinero, por lo que es recomendable de realizar un
estudio de robustez donde los mrgenes en los que el mtodo es robusto
puedan estos incluirse como parte final del mtodo, dotndolo as de una
cierta flexibilidad.









37









CAPITULO IV
DISEO METODOLOGICO











4.0 DISEO METODOLOGICO


4.1 Tipo de estudio
El estudio que se realiz es de tipo experimental, transversal y
prospectivo. Experimental pues se realizaron ensayos en el Laboratorio
Fisicoqumico de Aguas de la Facultad de Qumica y Farmacia de la
Universidad de El Salvador; Transversal, debido a que la investigacin se
realiz en un tiempo determinado, comprendido entre junio-octubre del
presente ao, e interesa estudiar el problema en el presente y
prospectivo ya que a medida se desarrollaba la validacin del mtodo
se cumpla con cada objetivo del estudio, adems, este trabajo podr
tener aplicacin en el futuro.


4.2 Investigacin bibliogrfica
Para la elaboracin del presente trabajo se realiz una revisin
bibliogrfica en:
- Biblioteca de la Facultad de Qumica y Farmacia de la Universidad de El
Salvador.
- Biblioteca de la Facultad de Ingeniera y Arquitectura de la Universidad
de El Salvador.
- Biblioteca central de la Universidad de El Salvador.
- Biblioteca de la Universidad Alberto Masferrer.
- Documentacin electrnica.


4.3 Parte experimental.
(1)

Se realizaron los anlisis en el Laboratorio Fisicoqumico de Aguas de la
Facultad de Qumica y Farmacia de La Universidad de El Salvador,
implementando la metodologa recomendada por el libro oficial Mtodos
39
Normalizados para el Anlisis de Aguas Potables y Residuales. Edicin
17. Captulo 3500-Fe D: Mtodo de Fenantrolina.
Los anlisis se realizaron con soluciones estndar de hierro, a
concentraciones que sern especificadas en el procedimiento de cada
uno de los parmetros de desempeo que se desarrollaron. Cabe
mencionar que si se deseara ensayar con muestras de agua potable, es
necesario llevar simultneamente un estndar control de hierro, para la
verificacin de los resultados obtenidos. (Ver anexo N 4)


4.3.1 Instrumental
(1)

a) Equipo:
Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800, para utilizarlo a una longitud de
onda de 510 nm, que proporciona un trayecto luminoso de 1 cm o ms
largo, (ver anexo N 3).
Balanza Adventurer OHAUS (Analtica) y balanza Mettler NT4800 Delta
Ranger (Semianaltica)
b) Materiales de vidrio, lavados con acido: Lvese todo el material de vidrio
con acido clorhdrico concentrado (HCl) y enjuguese con agua destilada
antes de utilizarlo, con objeto de eliminar depsitos de oxido de hierro.
Materiales de vidrio: Clase A.


4.3.2 Reactivos
(1)

Se utilizaron reactivos bajos en hierro. Para preparar las soluciones
patrn y soluciones reactivos, se empleo agua destilada que fue
previamente analizada, encontrndose en ella una concentracin de
0.01ppm de hierro. Almacnense los reactivos en botellas con tapn de
vidrio.
40
Las soluciones de HCl y acetato de amonio son estables indefinidamente
si estn hermticamente tapadas. Las soluciones de hidroxilamina, de
fenantrolina son estables durante varios meses.
a) cido clorhdrico, HCl concentrado con menos de 0.00005 por 100 de
hierro.
b) Solucin de hidroxilamina: disulvanse 10 g de NH
2
OH
.
HCl EN 100 mL
de agua.
c) Solucin tampn de acetato de amonio: disulvanse 250 g de
NH
4
C
2
H
3
O
2
en 150 mL de agua. Adanse 700 mL acido actico
concentrado (glacial). Como incluso el NH
4
C
2
H
3
O
2
de buena calidad
contiene una cantidad significativa de hierro, preprense nuevos
patrones de referencia con cada preparacin del tampn.
d) Solucin de acetato de sodio: disulvanse 200 g de NaC
2
H
3
O
2
.
3H2O en
800 mL de agua.
e) Solucin de fenantrolina: disulvanse 100 mg de monohidrato de 1,10-
fenantrolina, C
12
H
8
N
2
.
H
2
O, en 100 mL de agua por agitacin y
calentamiento a 80 C, no hervir. Descrtese la solucin si se oscurece.
El calentamiento es innecesario si se aaden al agua dos gotas de HCl
concentrado. (Nota: un mililitro de este reactivo es suficiente para no ms
de 100 g Fe).
f) Soluciones de hierro patrn: se prepara a partir de un estndar de hierro,
a una concentracin de 1000g/mL de hierro, con nmero de lote
H50597 y fecha de vencimiento 31 de Diciembre de 2011. (Ver anexo N 1)


4.3.3 Procedimiento
(1)

Hierro total:
a) Mzclese cuidadosamente la solucin estndar y mdanse 50.0 mL en
un erlenmeyer de 125 mL. Si este volumen de muestra contiene ms de
41
200 g de hierro, utilcese una porcin ms pequea medida con
precisin y dilyase hasta 50.0 mL.
b) Adanse 2 mL de HCl concentrado y 1 mL de solucin NH
2
OH
.
HCl
(solucin de hidroxilamina).
c) Adanse unas cuantas perlas de ebullicin y calintese hasta ebullicin.
Para asegurar la disolucin de todo el hierro, continese la ebullicin
hasta que el volumen se reduzca entre 15 y 20 mL, (si la muestra ha sido
sometida a combustin seca, disulvase el residuo en 2mL de HCL
concentrado y 5 mL de agua. Verificar el tiempo al que se llega esta
condicin).
d) Enfrese hasta temperatura ambiente y psese a un matraz volumtrico
de 50.0 o 100.0 mL.
e) Adanse 10 mL de solucin tampn de NH
4
C
2
H
3
O
2
(acetato de amonio)
y 4 mL de solucin fenantrolina y dilyase con agua hasta la seal.
f) Homogenizar la solucin cuidadosamente y djese al menos durante 10
a 15 minutos para que se desarrolle el color al mximo.
g) Realizar las lecturas de la muestra a 510 nm, en el espectrofotmetro
Shimadzu UV 1800.


4.3.4 Protocolo de validacin y registro de resultados para la
determinacin de hierro total en agua potable.
El protocolo de validacin se hizo en base a los parmetros de
desempeo a estudiar, donde se documentar el resultado obtenido del
desarrollo de cada parmetro en estudio y poder verificar si cumple con
el criterio de aceptacin correspondiente. Adems se contar con un
formato de registro de resultados con el fin de evidenciar por cada
parmetro todos los anlisis realizados. (Cuadro N2).


42
4.3.5 Evaluacin de los parmetros de desempeo del mtodo.
(5)


4.3.5.1 Exactitud
La exactitud del mtodo se demostr analizando tres niveles de
concentracin de soluciones estndar de hierro, con concentraciones de
0.2 mg/mL, 0.5 mg/mL y 1.0 mg/mL, cada uno de estos por triplicado,
realizando as nueve determinaciones en total.


Procedimiento:
a) Se Prepar una solucin estndar a una concentracin de 1.0 mg/mL de
hierro y partiendo de sta se prepararon dos diluciones de 0.5 mg/mL de
hierro y 0.2 mg/mL.
b) Se realiz a cada una de estas soluciones el tratamiento de muestra
segn procedimiento de hierro total, por triplicado para cada
concentracin.
c) Se hicieron las lecturas en el espectrofotmetro Shimadzu UV-1800, a
una longitud de onda de 510 nm.
d) Se calcul el coeficiente de variacin e intervalo de confianza utilizando
las formulas siguientes:

Media Aritmtica
n
y
y

=
Desviacin estndar
) 1 (
) ( ) (
2 2

=

n n
y y n
S

Coeficiente de variacin
100 - =
y
s
CV
43

Intervalo de confianza para la media poblacional
n
S
t y IC
n o 1 . 975 . ) (
=




4.3.4.2 Precisin del mtodo
- Repetibilidad
Se realiz con la preparacin de una solucin estndar correspondiente a
0.30 mg/mL de hierro), esta se analiz por sextuplicado, manteniendo las
condiciones de: da, analista, instrumento y laboratorio. La estimacin de
la repetibilidad del mtodo se realiz con el clculo del coeficiente de
variacin de las respuestas obtenidas y con los intervalos de confianza
de cada nivel de concentracin estudiada.
Procedimiento:
a) Se prepar una solucin estndar a una concentracin de 0.30 mg/mL de
hierro.
b) Se realiz a esta solucin el tratamiento de muestra segn procedimiento
de hierro total, ste se hizo por sextuplicado.
c) Se Hicieron lecturas en el espectrofotmetro Shimadzu UV-1800, a una
longitud de onda de 510 nm.
d) Se calcul el coeficiente de variacin e intervalo de confianza utilizando
las formulas siguientes:

Media aritmtica.
n
y
y

=

Desviacin estndar
) 1 (
) ( ) (
2 2

=

n n
y y n
S
44
Coeficiente de variacin
100 - =
y
s
CV
Intervalo de confianza para la media poblacional
n
S
t y IC
n o 1 . 975 . ) (
=



4.3.4.3 Especificidad
Con la especificidad se pretendi demostrar que el mtodo es capaz de
identificar de forma inequvoca al analito, para lo cual se prepararon dos
soluciones de hierro al 100% y a una de estas se le adiciono plomo como
contaminante a una concentracin de 0.01 mg/L (valor mximo
permisible segn NSO 13.07.01.04). Luego se procedi a analizarlas
segn el mtodo de hierro total, para leer ambas soluciones a 510 nm en
el espectrofotmetro Shimadzu UV 1800, esperando obtener un valor de
absorbancia igual para ambas soluciones.

El Mtodo Oficial de Fenantrolina determinado por el APHA enlista
sustancias que pueden ser interferentes, como son: oxidantes fuertes,
cianuro, nitrito, fosfatos, bismuto, cadmio, mercurio, molibdato y plata.
Pero de igual manera hace referencia que con un exceso de
hidroxilamina dichos interferentes son eliminados, por lo que en la
evaluacin de este parmetro se utilizar plomo para comprobar la
especificidad del mtodo, ya que los compuestos antes mencionados ya
no son interferentes, pues se eliminan durante el desarrollo del mtodo.
Por lo que se espera como resultado de este parmetro nicamente la
respuesta del analito en estudio el cul ser el hierro.




45
4.3.2.4 Limite de cuantificacin.
(3)

Para este procedimiento se prepararon cuatro concentraciones obtenidas
por dilucin a partir de una solucin 0.2 mg/mL de hierro;
simultneamente se prepararon cinco blancos. Luego se calculo el valor
de la pendiente (b
1
), el coeficiente de determinacin (r
2
) y el intervalo de
confianza de la pendiente y para los blancos se calcul la desviacin
estndar.


Procedimiento:
a) Se prepararon cinco soluciones con las siguientes concentraciones: 0.2
mg/mL, 0.1 mg/mL, 0.05 mg/mL, 0.002 mg/mL, 0.005 mg/mL de hierro.
b) Se realiz a cada una de estas soluciones el tratamiento de muestra
segn procedimiento para la determinacin de hierro total, por triplicado
para cada concentracin.
c) Se hicieron lecturas en el espectrofotmetro Shimadzu UV-1800, a una
longitud de onda de 510 nm.
d) Se calcul el lmite de cuantificacin. Utilizando las siguientes
ecuaciones:

Pendiente

=
2 2
1
) ( x x n
y x xy n
b



Coeficiente de determinacin





=
) ) ( ) ( )( ) ( ) ( (
)) )( ( ) ( (
2 2 2 2
2
2
y y n x x n
y x xy n
r


46
Intervalo de confianza para la pendiente

2
0 1
2


=

n
y b xy b y
S
x
y

n
x
x
S Sb
x y


=
2
2
/ 1
) (
1


1 2 975 . 0 1 1
, ) (
b n
S t b IC

= |

n
x b y
b
o

=
1



Para los blancos se calcul la desviacin estndar (Sb) de estos, por la
siguiente ecuacin:

) 1 (
) ( ) (
2 2


=

n n
y y n
S
b


Lmite de cuantificacin
1
10
b
S
LC
b
-
=

Donde:
LC= lmite de cuantificacin.
S
b
= desviacin estndar de los blancos.
b
1
= pendiente




47
4.3.2.5 Limite de deteccin.
(3)

Se determin preparando tres niveles de concentracin, los cuales
fueron valores menores que el lmite cuantificable, simultneamente se
prepararon cinco blancos.
Para establecer este parmetro se procedi al clculo de la pendiente
(b
1
), el coeficiente de determinacin (r
2
) y el intervalo de confianza para
la pendiente (IC(
1
)), mediante la siguiente ecuacin:

1
3
b
xS
LD
b
=


Para los blancos se calcul la desviacin estndar (Sb) de estos, por la
siguiente ecuacin:





4.3.2.6 Linealidad
Se hizo analizando cinco soluciones estndar de hierro por triplicado con
concentraciones de 0.20, 0.50, 1.00, 1.50 y 2.00 mg/mL de hierro, de
esta manera se pudo elaborar la curva de calibracin concentracin vrs
absorbancia. Adems se utiliz el mtodo de estimacin por mnimos
cuadrados para calcular el valor de la pendiente (b
1
), la ordenada al
origen (b
o
), coeficiente de determinacin (r
2
), intervalo de confianza de la
pendiente (IC(
1
)), intervalo de confianza para la ordenada al origen
(IC(
o
)) y el coeficiente de variacin de regresin (CV
x/y
)
.




48
) 1 (
) ( ) (
2 2


=

n n
y y n
S
b
Procedimiento:
a) Se prepar una muestra a concentracin de 2.0 mg/mL de hierro y
partiendo de esta se prepararn cuatro diluciones de 1.5 mg/mL , 1.0
mg/mL, 0.5 mg/mL y 0.2 mg/mL de hierro.
b) Se realizarn a cada una de estas soluciones el tratamiento de muestra
segn procedimiento para la determinacin de hierro total, por triplicado
para cada concentracin.
c) Se hicieron lecturas en el espectrofotmetro Shimadzu UV-1800, a una
longitud de onda de 510 nm.
d) Se calcul la pendiente, ordenada al origen, coeficiente de
determinacin, intervalo de confianza de la pendiente, intervalo de
confianza para la ordenada al origen y coeficiente de variacin de
regresin, utilizando las frmulas siguientes:

Pendiente

=
2 2
1
) ( x x n
y x xy n
b

Ordenada al origen
n
x b y
b
o

=
1


Coeficiente de determinacin





=
) ) ( ) ( )( ) ( ) ( (
)) )( ( ) ( (
2 2 2 2
2
2
y y n x x n
y x xy n
r


Intervalo de confianza para la pendiente

2
0 1
2


=

n
y b xy b y
S
x y

49
n
x
x
S Sb
x y


=
2
2
/ 1
) (
1


1 2 975 . 0 1 1
, ) (
b n
S t b IC

= |


Intervalo de confianza para la ordenada al origen

0 2 , 975 . 0 0 0
) (
b n
S t b IC

= |

n
x
x

=
_


n
x
x
x
n
S Sb
x y


+ =
2
2
2
/ 0
) (
) ( 1


Coeficiente de variacin de regresin
100 .
/
/

=
y
S
CV
x y
x y


4.3.2.7 Intervalo (rango)
Este parmetro se estableci mediante el valor mximo cuantificable
obtenido en la linealidad y el valor mnimo obtenido en el lmite de
cuantificacin, tomando en cuenta que estos no deben presentar una
desviacin de la ley de Beer.


4.3.2.8 Robustez
Se establecieron los factores propios del mtodo los cuales se
consideran crticos, estos fueron: temperatura (bala, normal y alta) y
humedad. La temperatura baja se trabaj a 16.3C y humedad de 62%,
la temperatura normal fu de 20.9C y humedad de 38%, la temperatura
alta de 31.1C y 35% de humedad; la evaluacin de este parmetro se
50
realiz con dos repeticiones de una solucin estndar de hierro con
concentracin de 0.20 mg/mL de para cada temperatura y humedad
especificados.
Se procedi a calcular la media aritmtica de las condiciones ambientes
y condiciones controladas, luego se calcul la diferencia absoluta de
cada condicin respecto a condicin normal. Las frmulas que se
utilizaron son las siguientes:


Media aritmtica a temperatura ambiente
o
o
o
n
y
y

=
n
o
= nmero de mediciones a temperatura ambiente.
y
o
= temperatura a condicin normal.


Media aritmtica para el anlisis de temperatura controladas
i
i
i
n
y
y

=
n
i
= numero de mediciones a temperatura controlada.
y
i
= temperatura a condiciones controladas.

Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin respecto a
la media aritmtica de la condicin normal.
o i i
y y d =


4.4 Criterios de aceptacin
Son los criterios que se establecen para cada parmetro de desempeo,
con el fin de evaluar los resultados del estudio, estos criterios deben de
51
mantenerse a lo largo de toda la validacin y cualquier cambio debe de
ser justificado.
A continuacin se presentan los criterios de aceptacin para cada
parmetro en estudio. (Cuadro N1)



















52
CUADRO N1 CRITERIOS DE ACEPTACION
53
Parmetros Criterios de Aceptacin Referencia

Exactitud
El coeficiente de variacin:
Comprende de 50-120% para impurezas.
El valor de la media poblacional ( y )
debe incluirse dentro del intervalo.
Ortega Aguirre L. y Otros.
2001. Validacin de Mtodos
Analticos.Barcelona Espaa.
(5)

Precisin
(Repetibilidad)
(5)

El coeficiente de variacin para
soluciones menores a 1 ppm debe ser
11%
El valor de la media poblacional ( y )
debe incluirse dentro del intervalo.
Ortega Aguirre L. y Otros.
2001. Validacin de Mtodos
Analticos. Barcelona
Espaa.
(5)

Especificidad

La respuesta del mtodo debe ser debida
nicamente al analto

Colegio Nacional de Qumicos
Farmacuticos Bilogos. Gua
de Validacin de Mtodos
Analticos Mxico. AC. Edicin
2002.Volumen nico.
(3)

Lmite de
cuantificacin
r
2
0.98
El IC(
1
), no debe incluir el cero
Ortega Aguirre L. y Otros.
2001. Validacin de Mtodos
Analticos. Barcelona Espaa
(5)

Lmite de
Deteccin
r
2
0.98
El IC(
1
), no debe incluir el cero
Ortega Aguirre L. y Otros.
2001. Validacin de Mtodos
Analticos. Barcelona
Espaa.
(5)



Linealidad del
Mtodo
Cantidad adicionada vs cantidad
recuperada:
r
2
0.98

El IC(
1
), el valor de la pendiente debe
incluirse en el intervalo.

El IC(
0
), el valor de la ordenada debe
incluir el intervalo.
El CV
y/x
, no mayor de 3% si es qumico o
espectrofotomtrico.

Ortega Aguirre L. y Otros.
2001. Validacin de Mtodos
Analticos. Barcelona
Espaa.
(5)

Intervalo

Debe incluir la concentracin inferior y
superior del analto, con adecuada
precisin, exactitud y linealidad.

Ortega Aguirre L. y Otros.
2001. Validacin de Mtodos
Analticos. Barcelona
Espaa.
(5)

Colegio Nacional de Qumicos
Farmacuticos Bilogos. Gua
de Validacin de Mtodos
Analticos Mxico. AC. Edicin
2002.Volumen nico.
(3)

Robustez

di 3% para mtodos qumicos o
espectrofotomtricos.

Colegio Nacional de Qumicos
Farmacuticos Bilogos. Gua
de Validacin de Mtodos
Analticos Mxico. AC. Edicin
2002.Volumen nico.

CUADRO N2 PROTOCOLO DE VALIDACIN PARA METODO
ESPECTROFOTOMETRICO (3500Fe-D)


LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar (Ver anexo N 3)
Nombre Concentracin Lote vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 1/6
OBJETIVO.
Demostrar mediante este documento que el mtodo analtico espectrofotomtrico para la
determinacin de hierro total en agua potable, cumple con los requerimientos de: exactitud,
precisin (repetibilidad), especificidad, lmite de cuantificacin, lmite de deteccin, linealidad,
robustez, intervalo.

ALCANCE.
Mtodo de anlisis que se utiliza para determinar Hierro total en agua potable en
concentraciones de 0.1 mg/mL a 2.0 mg/mL utilizando el Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800

MATERIALES
Erlenmeyer 125 mL
Baln volumtrico 50.0 mL
Pipeta volumtrica 50.0 mL
Pipeta volumtrica 10.0 mL
Pipeta volumtrica 4.0 mL
Pipeta volumtrica 2.0 mL
Pipeta volumtrica 1.0 mL

REACTIVOS (ver anexo N1)
cido clorhdrico concentrado
Solucin de hidroxilamina
Solucin tampn de acetato de amonio
Solucin de fenantrolina
Solucin de hierro de reserva
Solucin de hierro patrn


54

LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar
Nombre Concentracin Lote vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotometro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 2/6

PARAMETROS DE DESEMPEO.
Para validar el mtodo se estudiaron el siguiente parmetro:
Exactitud
Precisin (Repetibilidad)
Especificidad
Limite de cuantificacin
Limite de deteccin
Linealidad
Intervalo
Robustez

RESULTADOS

Resultados

Parmetro Criterio de Aceptacin

Conforme No conforme




BIBLIOGRAFIA

1 Ortega Aguirre L. y Otros. 2001. Validacin de Mtodos Analticos. Barcelona Espaa.
Pginas 33-36, 46-47, 54-58, 68-70,75-77 y 85.
2 Lpez Luz M. 2009. Determinacin de Parmetros de Desempeo en Mtodos
Analticos Espectrofotomtricos Especficos para Cuantificar Fsforo y Potasio en
Suelos Utilizados para Cultivos de Caf. Licenciatura en Qumica y Farmacia. San
salvador El salvador. Universidad de El Salvador. Pgina 27.


55









CAPITULO V
RESULTADOS Y DISCUSION DE RESULTADOS











5.0 RESULTADOS Y DISCUSION DE RESULTADOS

Se elabor una propuesta de validacin para determinacin de hierro total en
agua potable, donde se puede observar el desarrollo y cumplimiento de los
parmetros de desempeo, obtenindose resultados los cuales se interpretaron
en cada parmetro en estudio valindose de tcnicas estadsticas para
establecer el cumplimiento de las mismas. (Ver cuadro N2).

Se desarrollaron los procedimientos de operacin de los parmetros de
desempeo: exactitud, precisin (repetibilidad), especificidad, lmite de
cuantificacin, limite deteccin, linealidad e intervalo; aplicando a cada uno de
stos el mtodo de estudio 3500Fe-D, y evaluados con sus respectivos criterios
de aceptacin por medio de tcnicas estadsticas. A continuacin se presenta el
desarrollo de cada parmetro estudiado:


5.1 Determinacin de la exactitud del mtodo espectrofotomtrico
(3500-Fe D)
La exactitud del mtodo se realiz de la siguiente manera: un analista
prepar una serie de nueve muestras, adicionndole a cada serie una
cantidad conocida de hierro (0.2, 0.5, 1.0 mg/L), para poder obtener tres
concentraciones diferentes.


Se calcul la media aritmtica, desviacin estndar, coeficiente de
variacin e intervalo de confianza para la media poblacional, utilizando
las siguientes formulas:

Media Aritmtica
n
y
y

=

57
Desviacin estndar
) 1 (
) ( ) (
2 2

=

n n
y y n
S

Coeficiente de variacin
100 - =
y
s
CV

Intervalo de confianza para la media poblacional
n
S
t y IC
n o 1 . 975 . ) (
=




TABLA N1 RESULTADOS DE EXACTITUD DE HIERRO TOTAL EN
AGUA POTABLE


N REPLICA

Concentracin
Original (ppm)

Concentracin
Obtenida ppm
(X)

Propiedad
medida
Absorbancia
(Y)

Y
2

1 0.2 0.282 0.061 3.721x10-
3

2 0.5 0.485 0.101 10.201x10
-3

3 1.0 1.095 0.219 47.961x10
-3

4 0.2 0.259 0.057 3.249x10
-3

5 0.5 0.492 0.102 10.404x10
-3

6 1.0 1.125 0.225 50.625x10
-3

7 0.2 0.254 0.056 3.136x10
-3

8 0.5 0.486 0.101 10.201x10
-3

9 1.0 1.133 0.226 51.076x10
-3


Y
=1.148
Y
2
=0.190574

La tabla N1 muestra los resultados de tres niveles de concentracin,
cada una por triplicado, de las muestras en estudio, en el mismo da con
el mismo analista e instrumento.
Se muestra el promedio aritmtico ( y ), Desviacin Estndar (S),
Coeficiente de Variacin (CV), as como el intervalo de confianza para la
media poblacional (IC()).
58
A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:

-Media Aritmtica:
1275 . 0
9
148 . 1
= = y

-Desviacin Estndar
0743 . 0
) 1 9 ( 9
) 148 . 1 ( ) 190574 . 0 ( 9
2
=

= S


-Coeficiente de Variacin
% 27 . 58 100
1275 . 0
0743 . 0
= - = CV

-Intervalo de Confianza (ver anexo N 8).

El valor de tabla de la distribucin t de Student, se determina para un t
de 0.975, n-1 grados de libertad, siendo n el numero de replicas.

Ejemplo: n = 9 para n-1, corresponde a 9-1 = 8 y para ocho grados de
libertad el de t de Student de tabla es de 2.306.

= =
9
0743 . 0
306 . 2 1275 . 0
) (
IC 0.0698 , 0.1841

El valor obtenido del Coeficiente de Variacin es aceptable debido a que
se encuentra dentro del rango establecido del 50 al 120% para mtodos
que determinan impurezas; demostrando que no existe una apreciable
variabilidad en los datos. Adems al determinar el Intervalo de Confianza
59
puedo observarse que la media poblacional se encontr dentro del
intervalo calculado.


5.2 Determinacin de la Precisin del Mtodo (Repetibilidad)
Espectrofotomtrico (3500-Fe D)
La evaluacin de la repetibilidad se realiz por un analista, el mismo da y
mismo instrumento preparando un sextuplicado de la concentracin de
0.30 mg/L. Mediante el clculo de la media aritmtica, desviacin
estndar, coeficiente de variacin e intervalo de confianza de la media
poblacional, utilizando las siguientes formulas:


Media Aritmtica
n
y
y

=
Desviacin estndar
) 1 (
) ( ) (
2 2

=

n n
y y n
S

Coeficiente de variacin
100 - =
y
s
CV

Intervalo de confianza para la media poblacional
n
S
t y IC
n o 1 . 975 . ) (
=



A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:



60
TABLA N2 RESULTADOS DE REPETIBILIDAD DE HIERRO TOTAL
EN AGUA POTABLE


N REPLICA

Concentracin
Original (ppm)

Concentracin
Obtenida ppm
(X)

Propiedad
medida
Absorbancia
(Y)

Y
2

1 0.3 0.267 0.058 3.364x10
-3

2 0.3 0.320 0.069 4.761x10
-3

3 0.3 0.278 0.061 3.721x10
-3

4 0.3 0.250 0.055 3.025x10
-3

5 0.3 0.260 0.057 3.249x10
-3

6 0.3 0.298 0.063 3.969x10
-3


Y
=0.363
Y
2
=0.022089

La tabla N2 muestra los resultados de un nivel de concentracin, por
sextuplicado, de la muestra en estudio.
Se muestra el promedio aritmtico ( y ), Desviacin Estndar (S),
Coeficiente de Variacin (CV), intervalo de confianza de la media
poblacional (IC
()
)
A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:

-Media Aritmtica:
0605 . 0
6
363 . 0
= = y

-Desviacin Estndar
0043 . 0
) 1 6 ( 6
) 363 . 0 ( ) 022089 . 0 ( 6
2
=

= S

-Coeficiente de Variacin
% 11 . 7 100
0605 . 0
0043 . 0
= - = CV

61
-Intervalo de Confianza
= =
6
0043 . 0
306 . 2 06005 . 0
) (
IC 0.0564 , 0.0645

El valor obtenido con el Coeficiente de Variacin es un valor aceptable
puesto que es un valor menor de 11% el cual es un valor propuesto de la
concentracin en funcin de la concentracin del analito, para el anlisis
de impurezas
(5)
. La media poblacional se encontr dentro del intervalo
de confianza por lo que se considera un valor que cumple con los
requerimientos establecidos

5.3 Determinacin de la especificidad del Mtodo Espectrofotomtrico
(3500-Fe D)
Para la determinacin de la especificidad se selecciono una sustancia la
cual se considera un contaminante del agua y que suele encontrarse con
frecuencia. Se prepararon dos muestras a concentracin de 0.2 mg/L de
hierro y se contamin una de ellas con plomo a 0.01mg/L.
Mostrndose en el Tabla N3 los resultados obtenidos


N| REPLICA
Concentracin
Original ppm
Concentracin de
muestra ppm (X)
Propiedad medida
Absorbancia (Y)
1 (contaminada) 0.2 0.255 0.056
2 (Normal) 0.2 0.263 0.057

La respuesta analtica se debe nicamente al analito en estudio, ya que
se puede comprobar esto debido a que las absorbancias obtenidas no
variaron significativamente, comparados con los otros parmetros en los
que se utilizo la concentracin de 0.2 mg/L de hierro.




62
5.4 Determinacin del Lmite de Cuantificacin del Mtodo
Espectrofotomtrico (3500-Fe D)
Se realiz el lmite de cuantificacin utilizando muestras con
concentraciones de: 0.2, 0.1, 0.05, 0.002, 0.005 mg/L de hierro,
simultneamente se utilizaron cinco blancos para cada determinacin.


TABLA N4 RESULTADOS DEL LMITE DE CUANTIFICACIN PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)


N
REPL
ICAS

Concentra
cin real

Concentra
cin
Obtenida
(X) ppm

Propiedad
medida
Absorbancia
(Y)

X
2


Y
2


XY
1 0.2 0.206 0.047 42.436x10
-3
2.209x10
-3
9.3741124x10
-3

2 0.1 0.137 0.033 18.769x10
-3
1.089x10
-3
2.0439441x10
-3

3 0.05 0.000 0.000 0.00 0.00 0.00
4 0.02 0.000 0.000 0.00 0.00 0.00
5 0.005 0.000 0.000 0.00 0.00 0.00

X
=0.343
Y
=0.08
X
2
=0.061205
Y
2
=3.298x10
-3

XY
=0.014303

Con los datos obtenidos por las partes por milln de la tabla N 4 para
determinar hierro total se calculo la pendiente (b
1
), coeficiente de
determinacin (r
2
).

Pendiente

=
2 2
1
) ( x x n
y x xy n
b

Coeficiente de determinacin





=
) ) ( ) ( )( ) ( ) ( (
)) )( ( ) ( (
2 2 2 2
2
2
y y n x x n
y x xy n
r




63
Intervalo de confianza para la pendiente
1 2 975 . 0 1 1
, ) (
b n
S t b IC

= |

2
0 1
2


=

n
y b xy b y
S
x
y



n
x
x
S Sb
x y


=
2
2
/ 1
) (
1

A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:

Pendiente

231319 . 0
) 343 . 0 ( ) 061205 . 0 ( 5
) 08 . 0 )( 343 . 0 ( ) 014203 . 0 ( 5
2
1
=

= b

Coeficiente de determinacin

998983 . 0
) ) 08 . 0 ( ) 10 298 . 3 ( 5 ))( 343 . 0 ( ) 061205 . 0 ( 5 (
)) 08 . 0 )( 343 . 0 ( ) 014203 . 0 ( 5 (
2 3
2
2
=


=

x
r

Intervalo de confianza para la pendiente


000828 . 0
2 5
) 08 . 0 )( 10 314976 . 1 ( ) 014203 . 0 )( 231319 . 0 ( 10 298 . 3
) 4 3
=


=

x x
S
x
y



004265 . 0
5
) 343 . 0 (
061205 . 0
1
000828 . 0
2
1
=

= Sb
= = ) 004265 . 0 182 . 3 ( 231319 . 0 ) (
1
x IC | 0.217747 , 0.244890



64
TABLA N5 RESULTADO DE LOS BLANCOS DE HIERRO TOTAL

Blanco N
Propiedad medida
Absorbancia (Y)
Y
2

1 0.001 1x10
-6

2 0.0 0.0
3 0.0 0.0
4 0.0 0.0
5 0.0 0.0

Y
= 1x10
-3

Y
2
= 1x10
-6



Para los blancos se calculo la desviacin estndar (Sb) de estos, por la
siguiente ecuacin:




Limite de cuantificacin

019324 . 0
231319 . 0
00447 . 0 10
=
-
= LC


En el lmite de cuantificacin se comprob de forma prctica a travs del
Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800, que el equipo es capaz de
cuantificar hasta 0.1mg/L; con la ayuda de clculos estadsticos se
determino un valor de 0.01mg/L para la determinacin de hierro total.
Adems el valor de la pendiente se encuentra dentro del intervalo de
confianza de la misma y el coeficiente de determinacin es mayor de
0.98.




65
00447 . 0
) 1 5 ( 5
) 10 1 ( ) 10 1 ( 5
2 3 6
=


=

x x
S
b
5.5 Determinacin del Lmite de Deteccin del Mtodo
Espectrofotomtrico (3500-Fe D)
Se realiz preparando tres niveles de concentracin de hierro, los cuales
fueron menores de 0.1mg/L (Que es el lmite inferior cuantificable por el
equipo Shimadzu UV1800), siendo estas 0.05, 0.002, 0.005 mg/L;
preparndose simultneamente cinco blancos

TABLA N6 RESULTADOS DEL LMITE DE DETECCIN PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)


Debido a que se obtuvieron respuesta analticas no confiables, se realiz
el clculo del lmite de deteccin de manera terico, mediante siguiente
frmula:
005797 . 0
231319 . 0
000447 . 0 . 3
= =
x
LD


Los valores de Sb
1
y de b
1
fueron tomados de los datos del lmite
cuantificable, si se observa el valor terico detectable es similar a la
ltima concertacin leda por el quipo.
Demostrando que el equipo es capaz de emitir una seal a esta
concentracin.




66

N
REPLI
CAS

Concentra
cin real

Concentra
cin
Obtenida
(X) ppm

Propiedad
medida
Absorbanci
a (Y)

X
2


Y
2


XY
1 0.05 -0.047 -0.002 0.00 0.00 0.00
2 0.02 0.001 0.007 0.00 0.00 0.00
3 0.005 -0.062 -0.005 0.00 0.00 0.00

X
=0.00
Y
=0.000
X
2
=0.00
Y
2
=0.00
XY
=0.00
5.6 Determinacin de la Linealidad del Mtodo Espectrofotomtrico
(3500-Fe D)
La linealidad del mtodo se realizo de la siguiente manera, Primero, se
procedi a la elaboracin de la curva de calibracin, para lo cual fue
necesaria la preparacin de cinco soluciones estndar a concentraciones
de: 0.2, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 mg/L de hierro, en el siguiente cuadro se
muestran los valores obtenidos al determinar la curva de calibracin:

TABLA N7 RESULTADOS DE LA LINEALIDAD DEL MTODO PARA
LA DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)



Con los datos obtenidos se procedi al clculo de la curva de calibracin
concentracin vrs absorbancia. Adems se utiliz el mtodo de
estimacin por mnimos cuadrados para calcular el valor de la pendiente
(b
1
), la ordenada al origen (b
o
), coeficiente de determinacin (r
2
), intervalo
de confianza de la pendiente (IC(
1
)), intervalo de confianza para la
ordenada al origen (IC(
o
)) y el coeficiente de variacin de regresin
(CV
x/y
)
.


Pendiente

=
2 2
1
) ( x x n
y x xy n
b

67

N
REPLI
CAS

Concentra
cin real

Propiedad
medida
Absorbanci
a (Y)

X
2


Y
2


XY
1 0.2 0.052 0.04 2.704x10
-3
0.0104
2 0.5 0.105 0.25 11.025x10
-3
0.0525
3 1.0 0.194 1.00 37.636x10-
3
0.1940
4 1.5 0.303 2.250 91.809x10
-3
0,4545
5 2.0 0.392 4.000 153.664x10
-3
0.7840

x
=5.2
Y
=1.046
X
2
=7.54
Y
2
=0.296838
XY
=1.4954
Ordenada al origen
n
x b y
b
o

=
1



Coeficiente de determinacin





=
) ) ( ) ( )( ) ( ) ( (
)) )( ( ) ( (
2 2 2 2
2
2
y y n x x n
y x xy n
r


Intervalo de confianza para la pendiente

2
0 1
2


=

n
y b xy b y
S
x
y



n
x
x
S Sb
x y


=
2
2
/ 1
) (
1



1 2 975 . 0 1 1
, ) (
b n
S t b IC

= |

Intervalo de confianza para la ordenada al origen

0 2 , 975 . 0 0 0
) (
b n
S t b IC

= |

n
x
x

=
_


n
x
x
x
n
S Sb
x y


+ =
2
2
2
/ 0
) (
) ( 1





68
Coeficiente de variacin de regresin
100 .
/
/

=
y
S
CV
x y
x y

A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:

Pendiente

191163 . 0
) 2 . 5 ( ) 54 . 7 ( 5
) 046 . 1 )( 2 . 5 ( ) 4954 . 1 ( 5
2
1
=

= b

Coeficiente de determinacin

998662 . 0
) ) 064 . 1 ( ) 296838 . 0 ( 5 ))( 2 . 5 ( ) 54 . 7 ( 5 (
)) 046 . 1 )( 2 . 5 ( ) 4954 . 1 ( 5 (
2
2
2
=


= r

Intervalo de confianza para la pendiente


005913 . 0
2 5
) 046 . 1 )( 0010390 . 0 ( ) 4954 . 1 )( 0191163 . 0 ( 296838 . 0
=


=
x
y
S


684867 . 0
5
) 2 . 5 (
54 . 7
1
0005913 .
2
1
=

= Sb

= = ) 004049 . 0 182 . 3 ( 191163 . 0 ) (
1
x IC | 0.178279 , 0.204046


Intervalo de confianza para la ordenada al origen

5
2 . 5
_
= x

004972 . 0
5
) 2 . 5 (
54 . 7
) 04 . 1 (
5
1
005913 . 0
2
2
0
=

+ = Sb
69
= = ) 004972 . 0 182 . 3 ( 010390 . 0 ) (
0
x IC | -0.005430 , 0.026210

Coeficiente de variacin de regresin
% 82 . 2 100
2092 . 0
005913 . 0
/
= = x CV
x y



De esta forma se pudo comprobar que la curva de calibracin posee las
caractersticas adecuadas, puesto que se da cumplimiento estadstico en
el valor de:
La pendiente con su respectivo intervalo, estando comprendido el valor
de pendiente en el intervalo establecido.
La ordenada al origen y su respectivo intervalo, estando comprendido el
valor de pendiente en el intervalo establecido de la misma.
Un valor de coeficiente de determinacin mayor de 0.98.
Un coeficiente de variacin de regresin no mayor de un 3 %.

TABLA N8 RESULTADOS OBTENIDOS CON LOS CUALES SE
COMPROBO LA LINEALIDAD DEL METODO. (Ver anexo N 2).


N
REPLI
CAS

Concent
racin
real

Concentraci
n Obtenida
(X) ppm

Propiedad
medida
Absorbanci
a (Y)

X
2


Y
2


XY
1 0.2 0.282 0.061 0.079524 3.721x10
-3
17.202x10
-3

2 0.2 0.173 0.040 0.029929 1.600x10
-3
6.920x10
-3

3 0.2 0.259 0.057 0.067081 3.249x10
-3
14.763x10
-3

4 0.5 0.485 0.101 0.235225 10.201x10
-3
48.985x10
-3

5 0.5 0.406 0.085 0.164836 7.225x10
-3
34.510x10
-3

6 0.5 0.455 0.095 0.207025 9.025x10
-3
43.225x10
-3

7 1.0 1.165 0.232 1.357225 53.824x10
-3
270.280x10
-3

8 1.0 1.018 0.204 1.036324 41.616x10
-3
207.672x10
-3

9 1.0 1.125 0.225 1.265625 50.625x10
-3
253.125x10
-3

10 1.5 1.683 0.333 2.832489 110.889x10
-3
560.439x10
-3

11 1.5 1.468 0.291 2.155024 84.681x10
-3
427.188x10
-3

12 1.5 1.635 0.323 2.673225 104.329x10
-3
528.105x10
-3

13 2.0 2.271 0.447 5.157441 199.809x10
-3
1.015137
14 2.0 2.019 0.398 4.076361 158.404x10
-3
803.562x10
-3

15 2.0 2.095 0.413 4.389025 170.569x10
-3
865.235x10
-3


X
=16.539
Y
=3.305
X
2
=25.726359
Y
2
=1.009767
XY
=5.096348
70
A continuacin se muestran los resultados obtenidos:


999995 . 0
006560 . 0
193880 . 0
2203 . 0
1026 . 1
2
0
1
=
=
=
=
=

r
b
b
y
x


= = ) 00008 . 0 182 . 3 ( 193880 . 0 ) (
1
x IC | 0.1937072 , 0.1940528
= = ) 0005832 . 0 . 0 182 . 3 ( 006560 . 0 ) (
0
x IC | 0.0059768 , 0.0071432
% 26 . 0
/
=
x y
CV

Con los resultados estadsticos obtenidos puede notarse que se est
comprobando la linealidad del mtodo, al cumplirse los criterios de
aceptacin en lo correspondiente a:
La pendiente con su respectivo intervalo, estando comprendido el valor
de pendiente en el intervalo establecido.
La ordenada al origen y su respectivo intervalo, estando comprendido el
valor de pendiente en el intervalo establecido de la misma.
Un valor de coeficiente de determinacin mayor de 0.98
Un coeficiente de variacin de regresin no mayor de un 3 %

5.7 Determinacin del Intervalo del Mtodo Espectrofotomtrico
(3500Fe-D)
El intervalo del mtodo se determin considerando que debe estar
conformado conformar por el valor mximo cuantificable de la linealidad y
el valor mnimo del lmite de cuantificacin, donde estos valores no
71
presentan desviacin de la Ley de Beer. Por lo que el intervalo del
mtodo es:
0.1 mg/L-2.0 mg/L.


Por medio de la robustez se definieron los factores que influyen en el mtodo
3500Fe-D pudiendo estos afectar los resultados ya se de manera cuantitativa
como cualitativa. Dichos factores fueron temperatura y humedad. A
continuacin se presenta el desarrollo de dicho estudio:

5.8 Determinacin de la Robustez del Mtodo Espectrofotomtrico
(3500Fe-D)
La robustez se realiz con el anlisis de tres soluciones estndar a una
concentracin de 0.2mg/L cada una, evaluando la temperatura y la
humedad. Mediante el clculo de la media aritmtica de la condicin
normal de operacin, la media aritmtica del anlisis de cada condicin
de operacin, diferente a la condicin normal y diferencia absoluta de la
media aritmtica de cada condicin respecto a la media aritmtica de la
condicin normal, utilizando las siguientes formulas:
Media aritmtica a temperatura ambiente (condicin normal)
o
o
o
n
y
y

=
n
o
= nmero de muestras a temperatura ambiente.
y
o
= temperatura a condicin normal.

Media aritmtica para el anlisis de temperatura controladas
i
i
i
n
y
y

=
n
i
= numero de muestras a temperatura controlada.
y
i
= temperatura a condiciones controladas.
72
Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin respecto a
la media aritmtica de la condicin normal.
o i i
y y d =


TABLA N9 RESULTADOS DE LA ROBUSTEZ PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)

Condicin
Baja Controlada(Normal) Alta
Muestra 16.3C / 62%
(y
1
)
20.9C / 38%
humedad (y
0
)
31.1C / 35%
humedad (y
2
)
1 0.030 0.049 0.042
2 0.028 0.049 0.042
3 y
1
=0.058 y
0
=0.098 y
2
=0.084


A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:
Media aritmtica a temperatura controlada (condicin normal)
049 . 0
2
098 . 0
= =
o
y

Media aritmtica para el anlisis de temperatura alta.
042 . 0
2
084 . 0
2
= = y

Media aritmtica para el anlisis de temperatura baja.
029 . 0
2
058 . 0
1
= = y


Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin respecto a
la media aritmtica de la condicin normal.
o i i
y y d =
73
0 1 1
y y d =
02 . 0 049 . 0 029 . 0
1
= = d

0 2 2
y y d =
007 . 0 049 . 0 042 . 0
2
= = d


El valor de la diferencia absoluta de la media aritmtica de cada
condicin respecto a la normal no es mayor de un 3%, y los valores de
absorbancia no reflejan variacin a diferentes condiciones.


A continuacin se presenta el reporte de validacin de los resultados obtenidos,
durante la realizacin del mtodo 3500-Fe D, comprobndose el cumplimiento
de dicho mtodo por medio de los parmetros de desempeo.











74
CUADRO N3 INFORME DE VALIDACION PARA METODO
ESPECTROFOTOMETRICO (3500Fe-D)


LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar (Ver anexoN 3)
Nombre Concentracin Lote vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 1/6
OBJETIVO.
Demostrar mediante este documento que el mtodo analtico espectrofotomtrico para la
determinacin de hierro total en agua potable, cumple con los requerimientos de: exactitud,
precisin (repetibilidad), especificidad, lmite de cuantificacin, lmite de deteccin, linealidad,
robustez, intervalo.

ALCANCE.
Mtodo de anlisis que se utiliza para determinar Hierro total en agua potable de una
concentracin de 0.1 mg/mL a 2.0 mg/mL utilizando el Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800

MATERIALES
Erlenmeyer 125 mL
Baln volumtrico 50.0 mL
Pipeta volumtrica 50.0 mL
Pipeta volumtrica 10.0 mL
Pipeta volumtrica 4.0 mL
Pipeta volumtrica 2.0 mL
Pipeta volumtrica 1.0 mL

REACTIVOS (ver anexo N1)
cido clorhdrico concentrado
Solucin de hidroxilamina
Solucin tampn de acetato de amonio
Solucin de fenantrolina
Solucin de hierro de reserva
Solucin de hierro patrn





75

LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar
Nombre Concentracin Lote vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotometro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 2/6

PARAMETROS DE DESEMPEO. (ver anexo N 7)
Para validar el mtodo se estudiaron el siguiente parmetro:

EXACTITUD (Ver anexo N 7, Tabla N1)

RESULTADOS

Resultados

CV= 58.27%


y = 0.1275

IC()= 0.0698 , 0.1841
Parmetro Criterio de Aceptacin


Exactitud

El coeficiente de variacin:
Comprende de 50-120% para impurezas.

El valor de la media poblacional ( y )
debe incluirse dentro del intervalo.


Conforme No conforme

Si es conforme










76

LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar
Nombre Concentracin Lote vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotometro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 3/6

PRECISION (REPETIBILIDAD) (Ver anexo N 7, Tabla N2)

RESULTADOS

Resultados

CV= 7.11%


y = 0.0605

IC()= 0.0564 , 0.0645
Parmetro Criterio de Aceptacin



Precisin (Repetibilidad)

El coeficiente de variacin para soluciones
menores a 1 ppm debe ser
11%

El valor de la media poblacional ( y )
debe incluirse dentro del intervalo.

Conforme No conforme

Si es conforme












77

LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar
Nombre Concentracin Lote Vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 4/6

ESPECIFICIDAD (Ver anexo N 7, Tabla N3)

RESULTADOS

Resultados
0.2 mg/L de hierro

Parmetro Criterio de Aceptacin

Especificidad

La respuesta del mtodo debe ser debida
nicamente al analto
Conforme No conforme

Si es conforme


LIMITE DE CUANTIFICACION (Ver anexo N 7, Tabla N4 y 4.1)

Resultados
r
2
= 0.998983

IC
(1)
= 0.217747 , 0.2244890 LC= 0.019324
Parmetro Criterio de Aceptacin

Lmite de Cuantificacin
r
2
0.98
El IC(
1
), no debe incluir el cero
Conforme No conforme
Si es conforme







78

LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar
Nombre Concentracin Lote Vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotometro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 5/6

LIMITE DE DETECCION (Ver anexo N 7, Tabla N5)

RESULTADOS

Resultados
r
2
= 0.998983

IC
(1)
= 0.217747 , 0.2244890 LD= 0.005797
Parmetro Criterio de Aceptacin

Lmite de Deteccin
r
2
0.98
El IC(
1
), no debe in luir el cero
Conforme No conforme
Si es conforme



LINEALIDAD (Ver anexo N 7, Tabla N6)
Resultados
r
2
= 0.999995 IC
(1)
= 0.1937072, 0.01940528 IC
(o)
= 0.0059768 , 0.0071432 CV
y/x
= 0.26%

Parmetro Criterio de Aceptacin



Linealidad del Mtodo
Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:
r
2
0.98
El IC(
1
), el valor de la pendiente debe
incluirse en el intervalo.
El IC(
0
), el valor de la ordenada debe incluir
el intervalo.
El CV
y/x
, no mayor de 3% si es qumico o
espectrofotomtrico.
Conform No onforme
Si es conforme





79

LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS
TITULO: Protocolo para determinar parmetros de desempeo en el mtodo analtico
espectrofotomtrico (3500-Fe D) de fenantrolina, para la determinacin de hierro total en agua
potable.
Estndar
Nombre Concentracin Lote vencimiento
Hierro en cido Ntrico 5% 1000 ug/mL H50597 31/12/2011
Equipos
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Balanza Analtica Adventurer OHAUS 27/09/2010
Nombre Modelo Fecha de calibracin
Espectrofotmetro Shimadzu UV 1800 14/10/2009
Fecha de emisin Fecha de revisin Fecha de aprobacin Pagina N:
15-10-2010 16-10-2010 18-10-2010 6/6

INTERVALO (Ver anexo N7)

RESULTADOS

Resultados
0.1 mg/L 2.0 mg/L de hierro

Parmetro Criterio de Aceptacin

Intervalo
Debe incluir la concentracin inferior y
superior del analito, con adecuada precisin,
exactitud y linealidad.
Conforme No conforme

Si es conforme


ROBUSTEZ (Ver anexo N7, Tabla N7)

Resultados
d
1
= 0.02 d
2
=0.007
Parmetro Criterio de Aceptacin

Robustez
di 3% para mtodos qumicos o
espectrofotomtricos.

Conforme No conforme
Si es conforme







80
CUADRO N4 RESUMEN DE DATOS OBTENIDOS PARA METODO
ESPECTROFOTOMETRICO (3500-Fe D)

Parmetros
Evaluados
Criterio de Aceptacin Resultado Dictamen


Exactitud
CV: 50-120% para impurezas.
(5)
CV= 58.27%



Cumple
y : debe incluirse dentro del
intervalo.
(5)
IC()= 0.0698 , 0.1841
y = 0.1275

Precisin
(Repetibilidad)
CV: 11% para soluciones
menores a 1ppm
(5)
CV= 7.11%



Cumple
y : debe incluirse dentro del
intervalo.
(5)
IC()= 0.0564 , 0.0645
y = 0.1275

Especificidad
La respuesta del mtodo debe
ser debida nicamente al analito
en estudio
(5)

0.2mg/L Fe

Cumple
Lmite de
Cuantificacin
r
2
0.98
(5)
r
2
=0.998983
Cumple
IC(
1
), no debe incluir el cero.
(3)
IC(
1
)= 0.217747 ,
0.2244890
Lmite de
Deteccin
r
2
0.98
(3)
r
2
=0.998983
Cumple
IC(
1
), no debe incluir el cero.
(3)
IC(
1
)= 0.217747 ,
0.2244890



Linealidad



r
2
0.98
(3)
r
2
0.999995


Cumple
IC(
1
), el valor de la pendiente
debe incluirse en el intervalo.
(3)
IC(
1
) = 0.1937072 ,
0.01940528
IC(
0
), el valor de la ordenada
debe incluir el intervalo.
(3)
IC(
0
) = 0.0059768 ,
0.0071432
CV
y/x
no mayor de 3% si es
qumico o espectrofotomtrico
(3)
CV
y/x
= 0.26%

Intervalo
Debe incluir la concentracin
inferior y superior del analito,
con adecuada precisin,
exactitud y linealidad
(5)

0.1 mg/L 2.0 mg/L
de hierro

Cumple
Robustez |di| 3% para mtodos qumicos
o espectrofotomtricos
(3)
di= 0.02
di=0.007
Cumple






81









CAPITULO VI
CONCLUSIONES











6.0 CONCLUSIONES



1. Los resultados obtenidos de los parmetros de desempeo de la
validacin del Mtodo Espectrofotomtrico de la Fenantrolina para
determinacin de hierro total en agua potable, demuestran ser: exactos,
precisos y lineales; en un rango de concentraciones en parte por milln
(mg/L), que comprenden desde el valor mnimo del lmite cuantificable
hasta el valor mximo cuantificable de la linealidad (0.1 - 2.0 mg/L). Lo
que contribuye a una mayor credibilidad en los resultados de los anlisis
que se realizaron.


2. En la determinacin de la exactitud y precisin se obtuvieron datos con
poca variabilidad entre ellos, tanto en los resultados de intervalo de
confianza que demuestra que el valor de la media poblacional posee
fiabilidad en la estimacin realizada, al encontrarse dentro del intervalo
establecido, como el resultado de coeficiente de variacin (CV), el cual
fue del 58.27% para la exactitud, cumpliendo as con el criterio de
aceptacin que establece que el valor del coeficiente de variacin debe
estar dentro del rango del 50 al 120%; y para la precisin obtuvo un CV
del 7.11% valor que resulto ser menor al criterio de aceptacin, donde
este dice que debe ser menor al 11% para impurezas a una
concentracin de analito menor a 1 ppm.


3. El Mtodo Espectrofotomtrico de la Fenantrolina para la determinacin
de hierro total en agua potable resulta ser especfico, pues este es capaz
de identificar el hierro en forma inequvoca, brindando una mayor
confiabilidad al momento de aplicar dicho mtodo.
83
4. El lmite de cuantificacin, demuestra que el mtodo posee un lmite
cuantificable de 0.1mg/L, que es la menor concentracin fiable, pues el
valor de la pendiente se encuentra dentro del intervalo de confianza de la
misma y el coeficiente de determinacin es mayor de 0.98, con lo que se
da cumplimiento a los criterios de aceptacin para este parmetro.


5. En el lmite de deteccin el analito en estudio demostr que a las
concentraciones evaluadas es capaz de emitir una seal, que no
necesariamente es cuantificable, pero s debe cumplir con exactitud y
precisin tal como lo expresa la bibliografa, dicho valor fue determinado
a travs de la frmula.


6. La determinacin de la linealidad produjo resultados aceptables como un
coeficiente de determinacin mayor de 0.98, siendo este de 0.999995, lo
que demuestra una correlacin entre la concentracin del analto y la
respuesta analtica (Absorbancia); adems de un coeficiente de variacin
de regresin menor de un 3%, demostrando as la linealidad del mtodo.

7. El parmetro de la robustez aplicado al mtodo en estudio, demostr en
sus resultados que la diferencia absoluta de la media poblacional, para
dicho mtodo se mantiene estable ante variaciones de humedad y
temperatura en el Laboratorio Fisicoqumico de Aguas de la Facultad de
Qumica y Farmacia de la Universidad de El Salvador, al ser estos
resultados menores al 3% segn criterio de aceptacin para mtodos
qumicos o espectrofotomtricos.



84








CAPITULO VII
RECOMENDACIONES












RECOMENDACIONES


1. Desarrollar el Mtodo Analtico de la Fenantrolina, verificando
constantemente la etapa de ebullicin de la muestra, para evitar que la
ebullicin sea violenta y ocasionar perdidas del analito o contaminacin
entre muestras.


2. Validar el procedimiento de lavado de cristalera ya que resulta crtico al
momento de realizar anlisis de metales como el Hierro; en este proceso
debe eliminarse cualquier tipo de interferencias. Utilizar cristalera clase
A, en el desarrollo del Mtodo Analtico de la Fenantrolina.


3. Implementar el Mtodo de Primeras Entradas, Primeras Salidas (PEPS),
este consiste bsicamente en darle salida del inventario a aquellos
productos que tiene mayor tiempo de ingreso, por lo que quedaran
aquellos productos comprados ms recientemente.

4. Utilizar agua destilada libre de Hierro o con una concentracin mnima
que no afecte el anlisis de determinacin de hierro, pudiendo dar falsos
positivos.

5. Que las Autoridades de la Facultad de Qumica y Farmacia de la
Universidad de El Salvador, para la compra de insumos que sern tiles,
en el desarrollo de validacin de los procedimientos analticos dentro del
Laboratorio Fisicoqumico de Aguas.



86









BIBLIOGRAFIA












BIBLIOGRAFIA

1. APHA, AWWA, WPCF. 1992. Mtodos Normalizados para el Anlisis de
Aguas potables y Residuales. 17 edicin. Madrid Espaa. Ediciones
Das Snchez. S.A. Pginas 3-112 a 3-115.


2. CONACYT. (Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa). NSR ISO/IEC
17025:2005. Norma Salvadorea


3. Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos. Gua de
Validacin de Mtodos Analticos Mxico. AC. Edicin 2002.Volumen
nico. Pginas 33-36, 59-87.


4. Skoog, y otros. Anlisis Instrumental. 7 edicin. Mxico. Mc Graw
Hill/INTERAMERICANA DE MEXICO, S.A. DE C.V. pginas 577 y 578.


5. Ortega Aguirre L. y Otros. 2001. Validacin de Mtodos Analticos.
Barcelona Espaa. Pginas 33-36, 46-47, 54-58, 68-70,75-77 y 85.


6. Lpez Luz M. 2009. Determinacin de Parmetros de Desempeo en
Mtodos Analticos Espectrofotomtricos Especficos para Cuantificar
Fsforo y Potasio en Suelos Utilizados para Cultivos de Caf.
Licenciatura en Qumica y Farmacia. San salvador El salvador.
Universidad de El Salvador. Pgina 27.


7. http://es.Wikipedia.org/wiki/Agua_potable.


8. http://hierroenagua/La Prueba del Agua. mht

9. www.fq.uh.cu/dpto/qf/docencia/pregrado/estruc_2/uv_descargas/v_1.pdf






































GLOSARIO
(3,5)


Anlisis: Estudio de una muestra para determinar sus composicin o
naturaleza qumica.


Analito: Especie qumica que se analiza.


Blanco: puede ser un blanco de reactivo o un blanco muestra problema que
contenga todos los ingredientes de la muestra excepto los analitos.


Calidad: Conjunto de propiedades y caractersticas de un proceso que le
confiere su aptitud para satisfacer las necesidades establecidas o implcitas.


Cantidad nominal: es la cantidad o concentracin terica de un analito.
Cuando se trabaja con concentraciones relativas se le da un valor de cien.


Coeficiente de aceptacin: Probabilidad en porcentaje, de que un resultado de
una medida este comprendido en el intervalo de aceptacin o entre los limites
de aceptacin.


Control de calidad: Conjunto de medidas que, segn una metodologa de
anlisis de muestra, aseguran que el proceso se encuentra bajo control.
Proceso de regulacin a travs del cual se puede medir la calidad real,
comparada con las normas o especificaciones y actuar sobre la diferencia.

Coeficiente de variacin: es la desviacin estndar expresada en funcin de
la media. Normalmente se expresa en porcentaje.


Desviacin estndar: estadstico bsico indicativo de la dispersin o
variabilidad de los resultados.


Especificidad: capacidad de un mtodo analtico para obtener una respuesta
debida nicamente al analito del inters y no a otros componentes de la
muestra.


Evaluacin de calidad: Procedimiento para la determinacin de la calidad de
las medidas de laboratorio mediante el empleo de datos a partir de las medidas
de control de calidad internas y externas.


Garanta de calidad: Plan que define el funcionamiento del laboratorio
especifica las medidas utilizadas para producir datos de una nueva precisin y
un sesgo conocido.


Intervalo (rango): concentraciones incluidas entre la concentracin superior e
inferiores del analito (incluyendo estas), para las cuales se a demostrado que el
mtodo es preciso, exacto y lineal.


Limite de cuantificacin: concentracin mnima del analito que puede ser
determinada con precisin y exactitud aceptada, bajo las condiciones de
operacin establecidas.


Limite de deteccin: concentracin mnima del analito en una muestra, que
puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones
de operacin establecidas.


Linealidad: capacidad del mtodo para proporcionar resultados directamente o
por medio de transformaciones matemticas definidas, proporcionales a las
concentraciones de analito en las muestra dentro de un rango establecido.


Mtodo analtico: descripcin de la secuencia de actividades, recursos
materiales y parmetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el anlisis de
un componente especfico de la muestra.


Muestra: Parte representativa de la materia muestra del anlisis.


Parmetros de desempeo: parmetro especifico a estudiar en un protocolo
de validacin.


Precisin: capacidad de un mtodo para proporcionar resultados prximos
entre s. Grado de dispersin de los resultados analticos respecto a su valor
medio.


Protocolo de validacin: descripcin de pruebas especificas para demostrar
que un proceso da resultados que cumplen con los criterios preestablecidos de
manera consistente.


Repetibilidad: evala la precisin del mtodo efectuando una serie de anlisis
sobre la misma muestra en las mismas condiciones operativas (aparatos,
reactivos, analista) en un mismo laboratorio y en un mismo periodo de tiempo
corto.


Robustez: capacidad del mtodo analtico para mantener su desempeo al
presentarse variaciones pequeas pero deliberadas, en los parmetros de
desempeo del mtodo.


Sesgo: Desviacin consistente de valores medidos a partir del valor verdadero,
originada por errores sistemticos durante un procedimiento.


Validacin: establecimiento de la evidencia documental que un procedimiento
analtico conducir con un alto grado de seguridad a la obtencin de resultados
precisos y exactos dentro de las especificaciones y atributos de calidad
previamente establecidos.




































ANEXO N1
MTODO OFICIAL DE LA APHA, MTODO DE LA
FENANTROLINA.


































ANEXO N2
PARTES Y FUNCIONAMIENTO DEL EQUIPO ESPECTROFOTOMTRICO
SHIMADZU UV 1800











ESPECTROFOTMETRO SHIMADZU UV-1800
















PARTES DEL EQUIPO
1. SWITCH DE ENCENDIDOAPAGADO
2. COMPARTIMIENTO DE LA MUESTRA
3. PANEL DE CONTROL
4. PANTALLA
5. COMPARTIMIENTO DE LAMPARAS
Conectividad directa a computadora por medio de puerto USB
Manejo y configuracin por medio de computadora por medio del software UV Probe 2.31
4
2
3
5
1
Espectrofotmetro UV-VIS de 1nm
ancho de banda, eficiencia en la
lectura, confiabilidad de datos en
una unidad compacta
con atributos de un equipo de
primera lnea. Pantalla de cristal
lquido con un men sencillo.
Rango de longitud de onda de
190-1100 nm con un ancho de
banda espectral mejor que 1nm.
Puede ser usado de forma
independiente o conectado con
una PC. Tiene puerto USB
FUNCIONAMIENTO DEL EQUIPO

1. Activar la fuente (On).
2. Encender el equipo (PC).
3. Encender el equipo (Shimadzu 1800) y esperar chequeo.
4. Dar doble click en el programa (UV Prove 2.31) ubicado en el escritorio.
5. Presionar la tecla F4 Ubicado en el teclado de la (PC).
6. Estando dentro del programa UV Prove 2.31, seleccionar el icono
Connect.











7. Seleccionar el icono mtodo.











8. Al dar click en mtodo se desplegar una venta, en la que hay que
seleccionar la longitud de onda.












9. Luego dar click el botn Add y dar siguiente













10. Confirmar la longitud de onda en la que se trabajar, y dar siguiente












11. Digitar las unidades de trabajo y dar siguiente





12. Dar click nuevamente en siguiente








13. Nombrar el mtodo, escribir el ttulo, escribir nombre del analista.





14. Dar click nuevamente en siguiente







15. Nombrar el mtodo, escribir el ttulo, escribir nombre del analista.














16. Para dar por terminado el proceso dar click en finalizar


Creado el mtodo se puede proceder a la correccin con el blanco y luego a la
toma de lecturas de las muestras en estudio. El proceso es el siguiente:
a. Para corregir con los blancos dar click en la tecla
b. Luego de la correccin proceder a la toma de lecturas, colocar la muestra
el en porta celdas, dar click en la longitud de onda.




Luego se ilumina el botn , dar click para tomar la lectura.









ANEXO N 3

Figura N1 Certificado de anlisis del estndar de hierro.












ANEXO 4
PROCEDIMIENTO DE OPERACIN ESTNDAR













logo

PROCEDIMIENTO DE OPERACIN ESTANDAR

CODIGO: LF 910 DVG 1582 02

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA
LABORATORIO FISICOQUIMICO DE AGUAS

HOJA: 1 DE 3


FECHA:_______/_______/_______/

REVISION N: 1


VIGENTE DESDE:

TITULO: Procedimiento analtico, para la determinacin de hierro total
en agua potable, por el mtodo oficial de la fenantrolina.

COPIA N: 1

Objetivo
Describir el procedimiento adecuado, para la determinacin de hierro total en agua potable, por el mtodo oficial de la
fenantrolina y de esta manera evitar errores en la determinacin del mismo.

Alcance
Aplicable al Laboratorio Fisicoqumico de Aguas, en la determinacin de hierro total en agua potable, por el mtodo
oficial de la fenantrolina, el cual tiene un lmite mximo permisible de 0.30 mg/L de hierro, segn la Norma Salvadorea
de Agua.

Principio
Se disuelve el hierro, se reduce al estado ferroso por ebullicin con acido e hidroxilamina y se trata con 1.10-fenantrolina
a pH de 3,2 a 3,3. El complejo rojo-naranja que se forma es un quelato de tres molculas de fenantrolina por cada tomo
de hierro ferroso.

Equipo, Materiales y Reactivos

- Equipo: Shimadzu, Hot plate.

- Materiales: 4 Beakers de 10mL
1 Beaker de 50mL
4 Probetas de 10mL
1 Probeta de 50mL
1 Erlenmeyer de 125mL
1 Matraz volumtrico de 50 100mL
3 Agitadores de vidrio

- Reactivos: Acido clorhdrico concentrado con menos de 0,00005 por 100 de hierro.
Solucin de hidroxilamina.
Solucin tampn de acetato de amonio.
Solucin de acetato de sodio.
Solucin de fenantrolina.
Solucin de hierro de reserva.
Solucin de hierro patrn.






REDACTADO POR :


VERIFICADO POR:

APROBADO POR:

ANEXO N5






CONCENTRACION vrs ABSORBANCIA





Figura N2 Grfica linealidad del Mtodo Espectrofotomtrico (3500Fe-D).






















ANEXO N6
EJEMPLO DE CASCADA DE DILUCION PARA LA PREPARACION
DE SOLUCIN ESTANDAR












Diluciones realizadas para la preparacin de las soluciones estndar

Se parti de un estndar de hierro de concentracin de 1000g/mL, de este se
tom una alcuota de 50.0mL se pas a un baln volumtrico de 250 mL,
llevndose a volumen con agua destilada, sta fue la solucin madre de la cual
se tomaron alcuotas para preparar los estndares a utilizar en cada parmetro
de estudio.

A continuacin se ejemplifica las cascadas de dilucin:

1000 g/mL


50.0 mL 250.0 mL (200g)



0.5 mL 100.0 mL (1.0g)





























ANEXO N7
CALCULOS Y RESULTADOS PARA EL PROTOCOLO DE
VALIDACION











TABLA N1 RESULTADOS DE EXACTITUD DE HIERRO TOTAL EN
AGUA POTABLE


N REPLICA

Concentracin
Original (ppm)

Concentracin
Obtenida ppm
(X)

Propiedad
medida
Absorbancia
(Y)

Y
2

1 0.2 0.282 0.061 3.721x10-
3

2 0.5 0.485 0.101 10.201x10
-3

3 1.0 1.095 0.219 47.961x10
-3

4 0.2 0.259 0.057 3.249x10
-3

5 0.5 0.492 0.102 10.404x10
-3

6 1.0 1.125 0.225 50.625x10
-3

7 0.2 0.254 0.056 3.136x10
-3

8 0.5 0.486 0.101 10.201x10
-3

9 1.0 1.133 0.226 51.076x10
-3


Y
=1.148
Y
2
=0.190574

A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:

-Media Aritmtica:
1275 . 0
9
148 . 1
= = y

-Desviacin Estndar
0743 . 0
) 1 9 ( 9
) 148 . 1 ( ) 190574 . 0 ( 9
2
=

= S

-Coeficiente de Variacin
% 27 . 58 100
1275 . 0
0743 . 0
= - = CV

-Intervalo de Confianza
El valor de tabla de la distribucin t de Student, se determina para un t
de 0.975, n-1 grados de libertad, siendo n el nmero de rplicas.
Ejemplo: n = 9 para n-1, corresponde a 9-1 = 8 y para ocho grados de
libertad el de t de Student de tabla es de 2.306.

= =
9
0743 . 0
306 . 2 1275 . 0
) (
IC 0.0698 , 0.1841


TABLA N2 RESULTADOS DE REPETIBILIDAD DE HIERRO TOTAL
EN AGUA POTABLE


N REPLICA

Concentracin
Original (ppm)

Concentracin
Obtenida ppm
(X)

Propiedad
medida
Absorbancia
(Y)

Y
2

1 0.3 0.267 0.058 3.364x10
-3

2 0.3 0.320 0.069 4.761x10
-3

3 0.3 0.278 0.061 3.721x10
-3

4 0.3 0.250 0.055 3.025x10
-3

5 0.3 0.260 0.057 3.249x10
-3

6 0.3 0.298 0.063 3.969x10
-3


Y
=0.363
Y
2
=0.022089

A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:

-Media Aritmtica:
0605 . 0
6
363 . 0
= = y

-Desviacin Estndar
0043 . 0
) 1 6 ( 6
) 363 . 0 ( ) 022089 . 0 ( 6
2
=

= S

-Coeficiente de Variacin
% 11 . 7 100
0605 . 0
0043 . 0
= - = CV

-Intervalo de Confianza
= =
6
0043 . 0
306 . 2 06005 . 0
) (
IC 0.0564 , 0.0645


TABLA N3 RESULTADOS DE LA ESPECIFICIDAD DE HIERRO
TOTAL EN AGUA POTABLE


N REPLICA
Concentracin
Original ppm
Concentracin de
muestra ppm (X)
Propiedad medida
Absorbancia (Y)
1 (contaminada) 0.2 0.255 0.056
2 (Normal) 0.2 0.263 0.057


TABLA N4 RESULTADOS DEL LMITE DE CUANTIFICACIN PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)


N
REPL
ICAS

Concentra
cin real

Concentra
cin
Obtenida
(X) ppm

Propiedad
medida
Absorbancia
(Y)

X
2


Y
2


XY
1 0.2 0.206 0.047 42.436x10
-3
2.209x10
-3
9.3741124x10
-3

2 0.1 0.137 0.033 18.769x10
-3
1.089x10
-3
2.0439441x10
-3

3 0.05 0.000 0.000 0.00 0.00 0.00
4 0.02 0.000 0.000 0.00 0.00 0.00
5 0.005 0.000 0.000 0.00 0.00 0.00

X
=0.343
Y
=0.08
X
2
=0.061205
Y
2
=3.298x10
-3

XY
=0.014303

A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:

Pendiente

231319 . 0
) 343 . 0 ( ) 061205 . 0 ( 5
) 08 . 0 )( 343 . 0 ( ) 014203 . 0 ( 5
2
1
=

= b





Coeficiente de determinacin

998983 . 0
) ) 08 . 0 ( ) 10 298 . 3 ( 5 ))( 343 . 0 ( ) 061205 . 0 ( 5 (
)) 08 . 0 )( 343 . 0 ( ) 014203 . 0 ( 5 (
2 3
2
2
=


=

x
r

Intervalo de confianza para la pendiente


000828 . 0
2 5
) 08 . 0 )( 10 314976 . 1 ( ) 014203 . 0 )( 231319 . 0 ( 10 298 . 3
) 4 3
=


=

x x
S
x
y



004265 . 0
5
) 343 . 0 (
061205 . 0
1
000828 . 0
2
1
=

= Sb

= = ) 004265 . 0 182 . 3 ( 231319 . 0 ) (
1
x IC | 0.217747 , 0.244890


TABLA N4.1 RESULTADO DE LOS BLANCOS DE HIERRO TOTAL

Blanco N
Propiedad medida
Absorbancia (Y)
Y
2

1 0.001 1x10
-6

2 0.0 0.0
3 0.0 0.0
4 0.0 0.0
5 0.0 0.0

Y
= 1x10
-3

Y
2
= 1x10
-6



Para los blancos se calcul la desviacin estndar (Sb) de estos, por la
siguiente ecuacin:






00447 . 0
) 1 5 ( 5
) 10 1 ( ) 10 1 ( 5
2 3 6
=


=

x x
S
b
Lmite de cuantificacin
019324 . 0
231319 . 0
00447 . 0 10
=
-
= LC


TABLA N5 RESULTADOS DEL LMITE DE DETECCIN PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)


Debido a que se obtuvieron respuesta analticas no confiables, se realiz el
clculo del lmite de deteccin de manera terico, mediante siguiente frmula:
005797 . 0
231319 . 0
000447 . 0 . 3
= =
x
LD


TABLA N6 RESULTADOS DE LA LINEALIDAD DEL MTODO PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)


N
REPLI
CAS

Concent
racin
real

Concentraci
n Obtenida
(X) ppm

Propiedad
medida
Absorbanci
a (Y)

X
2


Y
2


XY
1 0.2 0.282 0.061 0.079524 3.721x10
-3
17.202x10
-3

2 0.2 0.173 0.040 0.029929 1.600x10
-3
6.920x10
-3

3 0.2 0.259 0.057 0.067081 3.249x10
-3
14.763x10
-3

4 0.5 0.485 0.101 0.235225 10.201x10
-3
48.985x10
-3

5 0.5 0.406 0.085 0.164836 7.225x10
-3
34.510x10
-3

6 0.5 0.455 0.095 0.207025 9.025x10
-3
43.225x10
-3

7 1.0 1.165 0.232 1.357225 53.824x10
-3
270.280x10
-3

8 1.0 1.018 0.204 1.036324 41.616x10
-3
207.672x10
-3

9 1.0 1.125 0.225 1.265625 50.625x10
-3
253.125x10
-3

10 1.5 1.683 0.333 2.832489 110.889x10
-3
560.439x10
-3

11 1.5 1.468 0.291 2.155024 84.681x10
-3
427.188x10
-3

12 1.5 1.635 0.323 2.673225 104.329x10
-3
528.105x10
-3

13 2.0 2.271 0.447 5.157441 199.809x10
-3
1.015137
14 2.0 2.019 0.398 4.076361 158.404x10
-3
803.562x10
-3


N
REPLI
CAS

Concentra
cin real

Concentra
cin
Obtenida
(X) ppm

Propiedad
medida
Absorbanci
a (Y)

X
2


Y
2


XY
1 0.05 -0.047 -0.002 0.00 0.00 0.00
2 0.02 0.001 0.007 0.00 0.00 0.00
3 0.005 -0.062 -0.005 0.00 0.00 0.00

X
=0.00
Y
=0.000
X
2
=0.00
Y
2
=0.00
XY
=0.00
15 2.0 2.095 0.413 4.389025 170.569x10
-3
865.235x10
-3


X
=16.539
Y
=3.305
X
2
=25.726359
Y
2
=1.009767
XY
=5.096348


A continuacin se muestran los resultados obtenidos:


999995 . 0
006560 . 0
193880 . 0
2203 . 0
1026 . 1
2
0
1
=
=
=
=
=

r
b
b
y
x


= = ) 00008 . 0 182 . 3 ( 193880 . 0 ) (
1
x IC | 0.1937072 , 0.1940528

= = ) 0005832 . 0 . 0 182 . 3 ( 006560 . 0 ) (
0
x IC | 0.0059768 , 0.0071432

% 26 . 0
/
=
x y
CV


DETERMINACIN DEL INTERVALO DEL MTODO
ESPECTROFOTOMTRICO (3500FE-D)
El intervalo del mtodo se determin considerando que debe estar
conformado conformar por el valor mximo cuantificable de la linealidad y
el valor mnimo del lmite de cuantificacin, donde estos valores no
presentan desviacin de la Ley de Beer. Por lo que el intervalo del
mtodo es:
0.1 mg/L-2.0 mg/L.




TABLA N7 RESULTADOS DE LA ROBUSTEZ PARA LA
DETERMINACIN DE HIERRO TOTAL (3500-FE D)

Condicin
Baja Controlada(Normal) Alta
Muestra 16.3C / 62%
(y
1
)
20.9C / 38%
humedad (y
0
)
31.1C / 35%
humedad (y
2
)
1 0.030 0.049 0.042
2 0.028 0.049 0.042
3 y
1
=0.058 y
0
=0.098 y
2
=0.084


A continuacin se ejemplifica como se realizaron los clculos:
Media aritmtica a temperatura controlada (condicin normal)
049 . 0
2
098 . 0
= =
o
y
Media aritmtica para el anlisis de temperatura alta.
042 . 0
2
084 . 0
2
= = y
Media aritmtica para el anlisis de temperatura baja.
029 . 0
2
058 . 0
1
= = y

Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin respecto a
la media aritmtica de la condicin normal.
0 1
y y d
t
=
02 . 0 049 . 0 029 . 0 = =
t
d

0 2
y y d
t
=
007 . 0 049 . 0 042 . 0 = =
t
d














ANEXO N 8
TABLA t-STUDENT