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Presentacin
Bio-Aventura es un programa de educacin que invita a descubrir y explorar el mundo de la biotecnologa agrcola, dirigido a maestros de educacin secundaria, nios y nias, tanto en zonas rurales como urbanas. Este programa definido como la Exploracin al Mundo de la biotecnologa agrcola ha sido concebido como una manera de entender el uso, impacto, potenciales riesgos y beneficios de la biotecnologa agrcola. Ha sido creado para introducir, ampliar y fortalecer las bases del conocimiento y la comprensin de los docentes y estudiantes sobre esta aplicacin tecnolgica. Bio-Aventura busca abrir espacios que faciliten el entendimiento de la sociedad y el mejoramiento de la formacin de los docentes, principales promotores y multiplicadores del conocimiento, en relacin con los nuevos avances tecnolgicos logrados a partir de las ciencias biolgicas. A travs de la exploracin en el mundo de la biotecnologa agrcola el docente cuenta con una nueva fuente de material de capacitacin con contenidos cientficos y de fcil comprensin, con herramientas guas para que la biotecnologa vegetal sea una ciencia ms VIVA, que puede ser introducida en forma didctica y sencilla en los contenidos temticos escolares. Como punto de partida para el desarrollo temtico, se inicia desde la base del conocimiento con el objeto de lograr un mejor entendimiento de los conceptos y en el transcurso del programa se presenta un carcter integral de la informacin. Lo ms importante para Bio-Aventura es permitir a los docentes y alumnos, viajar por el mundo de la biologa vegetal moderna, guiados pero libres, para explorar esta nueva experiencia y permitir el anlisis y razonamiento como vehculo para lograr una real apropiacin del conocimiento. Los invitamos a explorar y descubrir la naturaleza desde una perspectiva tecnolgica, que les permitir acercar los desarrollos cientficos a la cotidianidad a travs de una divertida Bio-Aventura.
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Presentacin
ISBN 958-33-6854-7
Mdulo 1
Mdulo 1
Contenido
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
Mdulo 1
Dinmica:
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola
2. Reconocer las diferencias entre las clulas procariotas y eucariotas para un mejor entendimiento de la complejidad de stas y la importancia de su material gentico.
SECUENCIA
Membrana celular - Citoplasma - Organelos - Material gentico
Tiras de papel con los nombres de las estructuras celulares Baln de icopor grande dividido en dos mitades Tarros de plastilina de colores Palillos y palos de pincho Pelotas de icopor de diferentes tamaos Globos redondos y largos
CONTENIDOS
1. Teora celular 2. Clulas: procariotas y eucariotas
Contexto Imagnese que el baln de icopor es una clula. Coloque las tiras de papel enrolladas con los nombres de los componentes de las clulas en una de las mitades del baln de icopor. Extraiga por parejas o grupos una tira de papel e identifique el organelo o estructura celular que le corresponda representar. Represente con los materiales suministrados, cada organelo. Presntela al grupo y ubquela en la clula, utilizando para esto el baln de icopor. Cuando todos los organelos hayan sido ubicados, una las dos mitades del baln. Tenga presente que ciertos organelos estn estrechamente interrelacionadas en su funcionamiento, de lo cual depende su ubicacin (por ejemplo el retculo endoplasmtico es contiguo al ncleo). Reflexin La clula, mnima unidad de todo ser vivo, es una estructura tridimensional que est conformada por un conjunto de organelos con funciones especficas, para mantener viva a la clula. La clula est separada del ambiente circundante por la membrana celular y en su interior estn distribuidas los organelos.
Teora Celular En 1839 el botnico Mattias Schleiden y el zologo Theodor Schwan formularon la teora que todos los seres vivos estn formados por clulas. Sin embargo, fue necesario esperar 50 aos para que los cientficos entendieran otros conceptos bsicos de la clula. Las clulas vivas son producidas por otras clulas vivas, La ms pequea unidad viviente en estructura y funcin es la clula y Todos los organismos vivos estn constituidos por una o ms clulas. Con base en estos tres conceptos nace la teora celular. La idea de que la clula representa la unidad de la vida, es un concepto que con el transcurso de los aos ha sido apoyado de acuerdo con las siguientes evidencias: 1. Todos los seres vivos existen en alguna forma celular 2. Toda clula proviene de la divisin celular de otra clula preexistente 3. La informacin hereditaria pasa de la clula progenitora a la clula hija
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Una breve historia de la vida en la tierra 4.500 3.500 1.500 500 millones millones millones millones de de de de aos aos aos aos Se form la tierra Surgen primeras formas de vida - clulas procariotas Surgen clulas nucleadas - clulas eucariotas Explosin Cmbrica - Surgen organismos multicelulares - clulas eucariotas
flagelo (procaritico)
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Clula animal
mitocondria
centrolo
membrana plasmtica
filamentos intermedios
citoplasma
vescula
microtbulos
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A diferencia de las procariotas el material gentico (ADN) en las clulas eucariotas se encuentra rodeado por una membrana nuclear, conformando el ncleo. Esta separacin fsica de la informacin gentica del resto de la clula, genera consecuencias importantes para su funcionamiento, en especial en los procesos de transcripcin (sntesis de ARN a partir del ADN en el ncleo) y traduccin (lectura del ARN y formacin de cadenas proteicas en los ribosomas en la regin citoplasmtica), que sern tratadas ms adelante. La organizacin del material gentico en las clulas eucariotas es ms compleja que la procariotas, debido a que cuentan con informacin de 100 a 1000 veces ms importante en tamao, aunque no en nmero de genes.
La clula vegetal
cloroplastos mitocondria ncleo aparato de Golgi
pared celular
ribosomas
vacuola
filamentos intermedios
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Revisados los conceptos anteriores, entremos a explorar con ms detalle el citoplasma y los principales organelos de la clula eucariota: Como ya se plante, en el citoplasma se encuentran algunos organelos delimitados por su membrana como son la mitocondria y el cloroplasto (en clulas vegetales): Las mitocondrias constituyen la central energtica de la clula. Son de forma ovalada, tienen doble membrana y su funcin es la respiracin celular. Emplean el oxgeno que proviene del medio y rompen las molculas con enlaces altamente energticos como la glucosa, para liberar la energa utilizable para las actividades celulares en forma de Adenosin Trifosfato (ATP), moneda energtica de la clula. En caso necesario pueden a partir de compuestos intermedios (cidos grasos y protenas), generar tambin ATP. Los cloroplastos se presentan slo en las clulas vegetales, son los organelos responsables de la fotosntesis, proceso en el cual la energa lumnica del sol es atrapada y utilizada para la sntesis de compuestos ricos en energa como la glucosa.
mitocondria cloroplastos
eubacterios
ancestral ncleo
cloroplastos
cianobacteria
mitocondrias
Se cree que tanto las mitocondrias como los cloroplastos aparecen en el proceso evolutivo de las clulas como consecuencia de un evento simbitico (relacin de dos organismos para mutuo beneficio), cuando clulas procariotas que cumplan funciones similares a las mitocondrias actuales o a la de los cloroplastos, se alojan clulas ms grandes y permanecen en el interior de stas sin ser digeridas. As las clulas ms grandes les brindaron proteccin y nutrientes a las ms pequeas y a su vez estas ltimas, les suministraron a las clulas grandes, energa a travs de un proceso similar a la respiracin celular y la fotosntesis.
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En el citoplasma se ubican otras estructuras membranosas como el retculo endoplasmtico, asociado a la sntesis de protenas y de lpidos y el aparato de golgi, asociado a la clasificacin, alteracin qumica y ensamblaje de biomolculas como por ej. la formacin de glucolpidos y glucoprotenas, etc. Igualmente se encuentran vesculas membranosas en las cuales las sustancias producidas o no en la clula viajan hacia el interior o exterior de la clula, los lisosomas tipo de vescula relativamente grande con enzimas para la digestin intracelular. Las vacuolas alimenticias vesculas con partculas de alimento a las 5 cuales se unen los lisosomas para digerirlo, peroxisomas vesculas grandes con A enzimas encargadas de la degradacin del perxido de hidrgeno, que es altamente txico para la clula y resulta del metabolismo celular. En las clulas vegetales se encuentra una gran vacuola central con solucin acuosa y desechos, que le da presin de turgencia en su interior y le proporciona soporte a la clula. Otros organelos son los ribosomas los cuales pueden estar temporalmente libres en el citoplasma o se asocian al retculo endoplsmico (RE rugoso). Los ribosomas estn constituidos por dos unidades la subunidad pequea y la grande y participan en la sntesis de protenas.
Ribosomas
Subunidad grande
3
G G A U G G C G
Subunidad pequea
Ahora conozcamos la otra gran regin de la clula eucariota: El Ncleo El ncleo est conformado por una envoltura nuclear y en su interior se encuentran los cromosomas, compuestos por el cido desoxirribonucleico ADN. En eucariotes el ADN est rodeado de protenas histonas y no histonas, que lo protegen y estabilizan. En el ncleo se encuentra codificada la informacin gentica que pasa de una clula progenitora a la clula hija. En la siguiente seccin se profundizar sobre esta temtica.
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Repaso de Conceptos Claves: La Clula Existen clulas procariotas y eucariotas cada una con diferentes niveles de complejidad. La clula procariota presenta estructuras genticas extracromosomales independientes, llamadas plsmidos. La clula eucariota esta constituida por dos grandes regiones intracelulares: citoplasma y ncleo.
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OBJETIVOS
1. Identificar las principales caractersticas y organizacin de las molculas responsables de la herencia (ADN, ARN y protenas). 2. Comparar el nivel de complejidad del genoma de eucariotas en relacin con el genoma de procariotas.
SECUENCIA
ADN - Cromosoma - Gen - Genoma
CONTENIDOS
1. 2. 3. 4. Definicin y estructura del ADN Cromosoma Genes y genoma Definicin y estructura del ARN y las protenas
El ADN es el material gentico responsable de la herencia y de las caractersticas fsicas y metablicas de un organismo. La unidad bsica del ADN, conocida como nucletido, est conformada por la unin de una molcula de fosfato (P), un azcar (desoxirribosa) y una base nitrogenada: Adenina (A), Timina (T), Citosina (C) y Guanina (G). La molcula de ADN consta de dos cadenas lineales que se unen entre s por complementariedad entre sus nucletidos (A=T y G =C), formando una doble hlice, que semeja una escalera en caracol. La parte externa de esta estructura helicoidal o las barandas de la escalera en caracol, est conformada por unidades de azcar-fosfato y los peldaos de la escalera los conforman las bases nitrogenadas, que se unen complementariamente por puentes de hidrgeno.
Contexto Repartir los roles de las diferentes organelos por grupos. A partir de las funciones de los diferentes organelos y estructuras celulares, identificados en la anterior seccin, hacer que cada grupo reflexione sobre la importancia del ADN en la clula y qu le pasara a la funcin de cada organelo que representa, si el ADN se desnaturaliza y deja de cumplir su funcin en la clula. Reflexin La importancia del ADN como codificador de la informacin hereditaria y necesaria para el funcionamiento de la clula.
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El modelo de Watson & Crick: En 1953, despus de prolongados esfuerzos de investigacin Watson y Crick, propusieron la estructura del ADN y llegaron a la siguientes conclusiones utilizando tcnicas de cromatografa y difraccin de rayos X: Dos cadenas lineales de nucletidos estn enrollados alrededor de un eje formando una hlice con giro a la derecha Las dos cadenas son antiparalelas. Una va en sentido C-5-C-3 y la otra al contrario C-3-C-5 (los dos extremos de una cadena lineal de ADN son diferentes: El extremo 5 tiene un fosfato no enlazado o libre; el extremo 3 tiene un azcar no enlazado o libre) Las bases de las dos cadenas estn apiladas con una distancia de 3.4 Angstrms* Las bases nitrogenadas se unen por puentes de hidrgeno con complementariedad A-T y G-C entre las dos cadenas Cada vuelta completa de la hlice es de 34 Angstrm, es decir, hay 10 bases por cada vuelta
Cromosoma
Enrollamiento En cualquier segmento de la molcula ADN se alternan el surco mayor y el surco menor La doble hlice mide 20 Angstrm de dimetro
* Un Angstrms es igual a 0.0000001 mm
Nucleosoma
Ideas para discutir: Un ncleo de una clula humana tiene 0.006 mm de dimetro y almacena 2 m de ADN Cmo se explica que una molcula tan larga est contenida en una estructura tan pequea como el ncleo? Claves para el docente: La respuesta est en el enrollamiento y empaquetamiento del ADN
Doble hlice
Cromatina
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Las clulas eucariotas contienen mayor cantidad de ADN que las procariotas. El ADN forma un complejo con protenas histonas y no histonas, formando la cromatina, que significa hebras teidas por el color que toma con colorantes especficos. La cromatina se encuentra organizada a manera de cuentas de un collar en nucleosomas, que constituyen la unidad de empaquetamiento fundamental de la cromatina . Esto pone en evidencia el alto nivel de compactacin del ADN de las clulas eucariotas.
Metas de Comprensin Construye una estructura tridimensional de un cromosoma y una doble hlice Materiales sugeridos - Cromosoma - Estropajo, hilo alambre -ADN - Alambre, mangueras, bolas de icopor, papel, etc.
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cariotipo
ADN
P P
D C
D A
D
P
D
P P
D D D
P
Exones / Intrones
Regiones Intergnicas
20 kb 20 kb 20 kb
Drosophila
Intrn Exn
20 kb Humano
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Transposon
Por otra parte, los genes han sido clasificados de acuerdo con sus secuencias, de las cuales se reconocen:
Elemento transponible A B C D E F
Repetitivas funcionales: secuencias de nucletidos que codifican alguna caracterstica y se encuentran en mltiples copias. A Funcionales no codificantes: secuencias simples de ADN que no codifican para ARN o protena. Sin funcin conocida. Altamente repetitivas. Transponibles, conocidos tambin como Elemento transponible genes saltarines, elementos controladores, genes mviles o transposones; secuencias capaces de moverse dentro de un mismo cromosoma o a diferentes cromosomas. El conjunto de genes de un organismo vivo se conoce como genoma y su tamao es variable de acuerdo con el organismo.
Transposn
Otros Genes
Elemento transponible
Angiospermas Aves Mamferos Reptiles Anfibios Teleosteos Cartilaginosos Equinodermos Crustceos Insectos Moluscos Gusanos Mohos Algas Hongos Gram+ GramMicoplasma
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El tamao del genoma no es medido por el nmero de cromosomas sino en unidades de miles de pares de nucletidos (kilobases Kb).
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El ADN es la molcula de la vida
Ideas para discutir con los estudiantes: El tamao del genoma est relacionado con la cantidad de informacin que codifican? Claves para el docente: No existe relacin, por que en los genomas grandes existen muchas secuencias que no codifican informacin (intrones) pero que amplan el tamao del genoma.
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Grandes hitos en la historia del material gentico y su papel en la herencia 1866 Mendel publica sus hallazgos sobre la transmisin de caracteres hereditarios y propone las leyes de la segregacin que conducirn al concepto del gen . 1869 Meiescher asla por primera vez ADN a partir de ncleos de pus y lo define como nuclena. Describe su composicin qumica e identifica la presencia de fsforo, lo que distingue a esta molcula de las protenas. 1900-1920 Se establece la teora cromosmica de la herencia. 1910-1930 Se determina la composicin de las bases de los cidos nucleicos y la diferencia entre el ADN y el ARN. 1928 Griffith realiza el clsico experimento de transfeccin in vivo de neumococos no virulentos mediante coinfeccin con neumococos virulentos en ratones. 1930-1933 Dawson y Sia realizan la transfeccin bacteriana empleando extracto celular de neumococos virulentos muertos.
1943 Schrorindger postula que el material gentico hereditario es un mensaje qumico codificado. 1944 Se identifica el principio de transformacin de Griffith por mtodo enzimtico propuesto por Avery, Mac Leod y Mac Carty. 1948 Boivin y Vendrely afirman que el ADN contenido en los ncleos de las clulas eucariotas constituye el soporte de los caracteres hereditarios. 1952 Hershey y Chase identifican la naturaleza qumica del material gentico de un bacterifago (virus que ataca una bacteria). 1953 Watson y Criack establecen la estructura molecular de la doble hlice del ADN. Gamow propone el concepto de cdigo gentico y plantea cmo descifrarlo y estudiar cmo funcionan los genes. Se inicia la era de la biologa moderna. 1956 Con los estudios de Fraenkel-Conrat se identifica el material gentico del virus del mosaico del tabaco (TMV). 1961-1966 Se descifra el cdigo gentico y se dilucidan los mecanismos de expresin en bacterias. 1975 Nace la Ingeniera Gentica.
ARN
Cmo se expresa la informacin almacenada en el ADN?... Para ello se requiere un intermediario, EL CIDO RIBONUCLICO (ARN) El ARN, molcula conformada por nucletidos como en el ADN. A diferencia de ste, el azcar desoxirribosa es reemplazada por la ribosa y la base nitrogenada Timina por el Uracilo. Existen tres tipos de ARN: El ARN mensajero, ARNm, es una molcula de tamao variable cuya misin es dirigir la informacin codificada en el ADN para la sntesis de protenas. En eucariotas las secuencias de ARNm (transcrito a partir del ADN), que no codifican para protenas son removidas, proceso conocido como maduracin del ARNm. El ARN ribosomal, ARNr, se encuentra en los ribosomas, organelo implicado en la sntesis de protenas. Los ARNr son extremadamente abundantes y constituyen por lo menos un 80% del ARN que se encuentran en clulas eucariotas.
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El ARN de transferencia ARNt, cuya funcin es reconocer un aminocido especfico y transferirlo en el proceso de sntesis las protenas a la cadena proteica naciente, de acuerdo con la informacin especfica que le proporciona el ARNm. As, todos y cada uno de los ARN participan en la sntesis de protenas, cumpliendo funciones especficas.
PROTENAS
Metas de comprensin 1. La estructura y organizacin de la molcula de ADN, es la base para comprender la complementariedad entre las dos cadenas, en la conformacin de la doble hlice y la codificacin de la informacin gentica. 2. Estructura y organizacin del ARN Materiales Cartulina de diferentes colores. Cuatro colores para representar con cada uno de las bases nitrogenadas del ADN: A, T, G, C y un quinto color para representar la base nitrogenada adicional que se encuentra en el ARN, el uracilo. Tijeras y cinta adhesiva. Procedimiento Disear figuras de nucletidos con la cartulina, tal como se indica en la figura, buscando que cada uno est representado de diferente color. Cuidar que el molde de la adenina sea complementario y encaje con el molde de la timina. Igualmente que sean complementarios los moldes de la guanina con la citosina (para el ADN) y el uracilo con la adenina (para el ARN). Construir tambin figuras adicionales de desoxirribosa y cido fosfrico (ADN) y de ribosa de tal manera que ensamblen con cualquier figura de las bases nitrogenadas. Fabricar varios moldes repetidos de estas unidades, para luego ensamblar estas figuras y representar la estructura lineal del ADN (con la desoxirribosa y el cido fosfrico hacia fuera y las bases hacia adentro, imitando la forma de una escalera en caracol). Ensamblar tambin una cadena simple de ARNm, siguiendo de forma similar los pasos anteriores. Recuerde que para el ARN la timina debe ser reemplazada por el uracilo. Forme con las figuras de cartulina una cadena lineal de ADN con una secuencia de 10 nucletidos. Si un gen es un segmento conformado al menos por algunos o varios nucletidos, represente a travs de diferentes combinatorias de nucletidos (conformando un vocablo), algunos de los genes que podran estar codificando para determinada caracterstica.
Son molculas de gran tamao, formadas por varias centenas de molculas pequeas llamadas aminocidos ligadas entre s, que reciben el nombre de pptidos. De acuerdo con la secuencia de aminocidos, las molculas de protenas tienen caractersticas qumicas especficas y cumplen funciones especiales. Por ejemplo algunas cumplen funciones estructurales y hacen parte de las estructuras de las clulas y de los organismos vivos, mientras que otras como las enzimas, regulan las reacciones qumicas del metabolismo de los seres vivos. Las enzimas, ciertas hormonas y la albmina son protenas producidas por las clulas, que regulan la rapidez y especificidad de las miles de reacciones qumicas celulares. Estas reacciones son fundamentales para todos los fenmenos vitales, como la respiracin, crecimiento, fotosntesis, digestin, entre otros.
Repaso de conceptos claves: El ADN Molcula de doble hlice, constituida por nucletidos complementarios de AGCT. La informacin gentica contenida en los genes es expresada en protenas usando como intermediario el ARN. El ADN de las clulas eucariotas est compuesto por exones e intrones.
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OBJETIVOS
1. Revisar los principales conceptos implicados en el proceso de replicacin del ADN, transcripcin a ARN y traduccin a protenas 2. Integrar la maquinaria implicada en la transferencia de la informacin y la expresin de caractersticas 3. Comprender los sistemas de control de la expresin gentica en procariotes y eucariotes
SECUENCIA
Replicacin - Transcripcin - Traduccin
CONTENIDOS
1. Del gen a la protena 2. Regulacin de la expresin de los genes 2. Transcripcin 3. Traduccin
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REPLICACIN:
Replicacin
ADN polimerasa
Hebra retardado 5
Protenas de estabilizacin
Cuando ocurre la divisin celular, el material gentico se debe duplicar para pasar la informacin a la generacin celular siguiente. El proceso mediante el cual se duplica el ADN, se denomina replicacin. Se lleva a cabo en condiciones naturales de la clula in vivo o bajo condiciones controladas en el laboratorio in vitro. El principio de la replicacin exige que las dos cadenas por las que est formado el ADN se separen mediante la accin de una enzima la helicasa, liberando las dos cadenas moldes.
Para que las cadenas sean replicadas se requiere de nucletidos y una enzima ADN polimerasa en el medio celular que une los nucletidos. Esta enzima reconoce los nucletidos y los une de manera complementaria a la cadena molde (G-C y A-T). En el proceso de replicacin una cadena es replicada en forma fragmentada dando origen a los fragmentos de Okasaki. Las enzimas encargadas de unir los fragmentos que se estn sintetizando de manera fraccionada son las ligasas. En la otra cadena la replicacin es continua.
TRANSCRIPCIN: Replicacin
Burbuja de transcripcin ARN polimerasa
La transcripcin ocurre en forma similar al de la replicacin. En este proceso el ADN se vuelve a leer, esta vez originando una molcula de ARN. As, el ARN se fabrica a partir de nucletidos que se unen de manera complementaria al ADN para que con la ayuda de la enzima ARN
polimerasa se fabrique una cadena de ARN a partir de una de ADN. El ADN se transcribe a ARN reemplazndose la Timina por el Uracilo.
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TRADUCCIN:
Replicacin
his ser ser arg gly ala phe gly cys
glu
his Aminocido met ARNt U C UA C A U G U A U G G A A GC C U A C U G U A U G A G A A GC C U U A C UC U U AC U CU G AAGC C A AUGA U Ribosoma met ser arg met arg met arg U CG leu trp
A U G U A U G G A AG CC
AC C AU U A U U GU G G U A U A G
terminacin
ARNm
La sntesis de protenas, ms comnmente conocida como traduccin, es un proceso en el cual la informacin contenida en los genes (genotipo) es expresada en protenas (fenotipo). Tiene lugar en los ribosomas de manera similar en eucariotas y procariotes. Las reglas especficas para la traduccin dependen del cdigo gentico, el lenguaje en el que se conserva la informacin que viene de los genes y es de carcter universal. Maquinaria empleada en la sntesis de protena
Caractersticas de cdigo gentico: Tres nucletidos sucesivos (del ARNm), constituyen un codn que codifica para un aminocido especfico. Algunos aminocidos pueden estar definidos por ms de un codn. (Ver cdigo gentico). 61 de las 64 posibles combinaciones de las tres bases nitrogenadas codifican aminocidos especficos. Existen 3 combinaciones que no codifican para aminocidos UAA, UAG, UGA sino que constituyen seales de terminacin que indican que la cadena de protena ha terminado. El codn AUG codifica para el aminocido metionina y adicionalmente funciona como secuencia de iniciacin.
ADN
3 A C C A A A C C G A G T
Correspondencia lineal G G C U C A 3
Traduccin
El proceso de traduccin tiene las siguientes etapas: 1. Iniciacin: proceso de unin del ARNm a la unidad ms pequea del ribosoma, la cual se encuentra libre en el citoplasma y se une en un
Protena
Trp
Phe
Gly
Ser
Aminocido
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Mdulo 1
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G
AGA Arg R AGG Arg R AGU Ser S AGC Ser S GGA Gly G GGG Gly G GGU Gly G GGC Gly G UGA Stp UGG Trp W UGU Cys W UGC Cys W CGA Arg R CGG Arg R CGU Arg R CGC Arg R
U
AUA Ile I AUG Met M AUU Ile I AUC Ile I GUA Val V GUG Val V GUU Val V GUC Val V UUA Leu L UUG Leu L UUU Phe F UUC Phe F CUA Leu L CUG Leu L CUU Leu L CUC Leu L
C
ACA Thr T ACG Thr T ACU Thr T ACC Thr T GCA Ala A GCG Ala A GCU Ala A GCC Ala A UCA Ser S UCG Ser S UCU Ser S UCC Ser S CCA Pro P CCG Pro P CCU Pro P CCC Pro P A G U C A G U C A G U C A G U C
A
extremo del ARNm exponiendo el codn iniciador, AUG (Adenina, Uracilo y Guanina) a la secuencia complementaria en el ARNt (anticodn UAC). De este modo, las protenas sintetizadas tendrn siempre al inicio el aminocido metionina. A continuacin se une la subunidad grande del ribosoma formndose as el ribosoma completo y funcional que tiene dos sitios claves:
AAA Lys K AAG Lys K AAU Asn N AAC Asn N GAA Glu E GAG Glu E GAU Asp D GAC Asp D UAA Stp UAG Stp UAU Tyr Y UAC Tyr Y CAA Gln Q CAG Gln Q CAU His H CAC His H
G U C
Fuente http://www.lab314.com/genmol/code-standard.htm
i. Sitio P (peptidil), ocupado por el ARNt-metionina ii. Sitio A (aminoacil), libre para recibir un segundo ARNt cargado con un nuevo aminocido. 2. Enlongacin: consiste en la unin de los aminocidos para la elaboracin de la protena. Cada vez que ARNt trae un aminocido ocurre un proceso cclico de enlongacin. 3. Terminacin: fin de la sntesis de protenas. La informacin de terminacin est dada por los siguiente codones: UAA, UAG, UGA. Estos codones bloquean la unin del ARNt al ribosoma y hacen que se suelten las dos unidades del ribosoma y se libere la protena. La expresin o no de las secuencias codificantes depender esencialmente de la disponibilidad de las protenas codificadas en el entorno. La expresin de las protenas esta regulada por la unin de una protena (promotor o represor) al promotor o control. En Eucariotas se han definido los siguientes elementos bsicos de regulacin: 1. Los promotores: Son regiones en el ADN que sealan el inicio de la secuencia codificadora y a las que se unen los factores de transcripcin y la polimerasa. El promotor ms importante es la caja TATA, una corta secuencia de pares de bases T-A y A-T. 2. Enhacers: regiones fomentadores de la transcripcin. 3. Silenciadores: bloquean la sntesis de protenas cuando existe sobreexpresin, es decir cuando los niveles de sntesis para una protena exceden el nivel normal. La regulacin gentica consiste en encender y apagar los genes.
Regulacin de la expresin de los genes Para que toda secuencia que codifica en el ADN (exones) se exprese en protenas, es necesario que exista un proceso de control conocido como regulacin gentica. En procariotas la regulacin gentica ocurre a travs de operones. Un opern es una asociacin de genes cada una de las cuales codifica una protena. El opern consta de un promotor, una regin de control y una secuencia de genes codificantes.
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Mdulo 1
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola
Represente, empleando los materiales suministrados el proceso de expresin de las protenas responsables del fenotipo correspondiente. 1. Seleccione una caracterstica fenotpica 2. Identifique la secuencia de aminocidos correspondiente a la caracterstica fenotpica y construya la estructura proteica, empleando los aminocidos proporcionados 3. Construya con los nucletidos suministrados, la molcula de ARN a la que corresponde la secuencia de aminocidos de la caracterstica que le correspondi (fenotipo). Recuerde que debe usar el cdigo gentico 4. Construya a partir de la molcula de ARN, la molcula de ADN correspondiente usando los nucletidos suministrados 5. Organice secuencialmente el orden en el que ocurre el proceso genotipo-fenotipo 6. Ubique los intrones y exones en la cadena que corresponda y en el lugar adecuado Metas de comprensin El genotipo es la informacin contenida en los genes El fenotipo es la expresin de la protena Existe una proceso secuencial para garantizar el paso de genotipo al fenotipo
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clula procariota
ribosomas grnulo de alimento citoplasma nucleoide (ADN)
flagelo (procaritico)
plsmido (ADN)
Introduzcmonos al interior de la clula y familiaricmonos con las estructuras y procesos importantes para su funcionamiento. Centremos nuestra atencin en las molculas responsables de la informacin hereditaria involucradas en la expresin de las caractersticas de los seres vivos.
membrana plasmtica pared celular cpsula o capa mucilaginosa pilus o fimbria
clula vegetal
cloroplastos mitocondria aparato de Golgi pared celular ncleo nucleolo
microtbulos
clula animal
cromatina (ADN) envoltura nuclear nucleolo ncleo
membrana plasmtica
ribosomas
microtbulos
Virus
Cabeza Vaina Fibras de la cola Cuello Cola
Ribosomas
5 A G G A U U A G C G
ARNm C G
Placa basal
Espiculas
cianobacteria mitocondrias
P Met
lisosoma
centrolo
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
El ADN es el material gentico responsable de la herencia y de las caractersticas fsicas y metablicas de un organismo. Sus unidades bsicas de informacin son los genes.
D C
T
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
D
P
D D
P
ADN Nucleosomas
P P
D
P
Fosfato
D
D A C G
D A A
Azcar desoxirribosa
G
D
P
D D
P
P
D
P
Cromatina
Replicacin
ADN polimerasa
Hebra retardada
ADN ligasa
ADN polimerasa
Burbuja de transcripcin
Transcripcin
ARN polimerasa
Sitio de terminacin
3 Hebra molde
3 Ncleo Sitio de iniciacin Ribosoma (subunidad grande) ARN-ADN ARNm 5 Direccin de transcripcin
Traduccin
his Aminocido met ARNt
U C A C U A C G A G A A G CC U G U A U U U A C U C U AC U C U A A G C C A A U G A G U U
glu
leu trp
gly
G A G A A G CC U G U A U
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
G A G A AG U G U A U CC
A C C A U U U G U G G U A A U A G
terminacin
ARNm
Citoplasma
Mdulo 2
Contenido
biotecnologa y su 24 La evolucin aplicacin de la 29 La biotecnologa en la agricultura
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
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Mdulo 2
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola
La biotecnologa y su evolucin
OBJETIVO
1. Entender la biotecnologa como una herramienta tecnolgica que permite la optimizacin de procesos biolgicos. 2. Conocer cmo y cules han sido los avances de la biotecnologa en el transcurso del tiempo 3. Identificar las diferentes reas de aplicacin de la biotecnologa. 4. Introducir el tema del cultivo in vitro de tejidos vegetales como herramienta biotecnolgica. 5. Reconocer el aporte del conocimiento y el avance cientfico en el desarrollo de la biotecnologa
rganos
Clula vegetal Sistema vascular Bio: Biologa o estudio de los organismos vivos. Pensemos un poco en lo que significa bio Un organismo completo - sistemas - rganos tejidos - clulas Tecnologa: Herramienta Realicemos el mismo ejercicio con tecnologa Fermentaciones - cultivo de tejidos in vitro tecnologa de genes.
SECUENCIA
Biotecnologa: Tradicional - Clsica - Moderna
CONTENIDO
1. Definicin de la biotecnologa 2. Historia y evolucin de la biotecnologa 3. Aplicaciones de la biotecnologa
DEFINICIN:
La biotecnologa es una aplicacin tecnolgica que usa a los organismos vivos o sus partes para generar productos o servicios. No es una ciencia, es una herramienta que integra diferentes disciplinas para generar beneficios en diversos sectores.
DINMICA
Exploracin de preconceptos
Contexto Qu entiendes por biotecnologa? Mostrar imgenes o nombrar productos desarrollados por procesos biotecnolgicos y no biotecnolgicos. Usar ejemplos de aplicacin en industria, salud, agropecuaria, ambiental, alimentaria y animal. Reconocer cules de ellos son producto de la biotecnologa.
Fermentaciones
Reflexin La biotecnologa es una herramienta que ha sido usada ampliamente por el hombre desde pocas milenarias. Los resultados de su aplicacin van desde la preparacin del yogurt, quesos y vinos hasta la obtencin de organismos genticamente modificados.
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La biotecnologa y su evolucin
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1.940, Produccin de antibiticos 1.960, Produccin de variedades de arroz y trigo con alta productividad
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La biotecnologa y su evolucin
Mdulo 2
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Pan: uso de levaduras para levantar la masa de trigo, como resultado de la produccin de gas.
Detergentes: producidos con enzimas obtenidas de organismos vivos y utilizadas para eliminar las manchas de los textiles.
Blue jeans: el colorante para teir los jeans se obtiene de bacterias genticamente modificadas.
Medicamentos: la insulina para el control de la diabetes se obtiene a partir de bacterias genticamente modificadas con el gen humano de la insulina.
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La biotecnologa y su evolucin
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INDUSTRIA:
Aditivos: ctricos Saborizantes Colorantes: azul indigo Alcohol carburante: etanol Productos lcticos (yogurt y quesos) uso de partes o del organismo completo (enzimas o microorganismos) Detergentes: obtencin de enzimas que degradan cidos grasos, lipolasa ( Aspergillus ), cutinasa (Saccharomyces ), de protenas ( Bacillus licheniformis ) para eliminar manchas de sangre, comida, etc.
AMBIENTE:
Biorremediacin: Tratamiento de residuos lquidos contaminados. Un ejemplo de esta aplicacin es la limpieza de derrames de petrleo empleando bacterias. Manejo de residuos slidos: Uso de bacterias, hongos para la degradacin de residuos orgnicos. Biolixiviacin: Recuperacin de metales mediante su solubilizacin. Aplicacin de gran inters para la industria minera. Diagnstico y deteccin de sustancias: Uso de organismos, bacterias, plantas etc., que detecten e informen acerca de la presencia de sustancias especficas actuando como biosensores.
AGRCOLA:
Repaso de conceptos claves La biotecnologa: Aplicacin tecnolgica que emplea los organismos vivos o sus parte para generar bienes o servicios Tiene diferentes reas de aplicacin: agropecuario, salud, ambiente, industria No es una aplicacin nueva El conocimiento cientfico ha permitido ampliar y mejorar los aportes de la biotecnologa a la sociedad
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Sistemas de diagnstico de enfermedades. Agrobiolgicos, uso de organismos vivos o las sustancias producidas por ellos para mejorar la productividad de los cultivos o para el control de plagas y malezas. Cultivo de clulas y tejidos in vitro, para produccin de plantas a gran escala, obtencin de metabolitos secundarios y mejoramiento gentico. Cultivos genticamente modificados mediante tecnologa de genes. Conservacin de germoplasma. Estudios de diversidad, evolucin, gentica de poblaciones y programas de mejoramiento.
La biotecnologa y su evolucin
Mdulo 2
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola
Preguntas: Cul es el papel del yogurt comercial en la produccin de yogurt que usted fabric? Por qu es necesario mantener la temperatura para la elaboracin del yogurt? Qu es la fermentacin lctica? Claves para el docente: Los yogures comerciales contienen bacterias cido lcticas que actan como iniciadores del proceso de produccin del yogurt. Las bacterias, seres vivos, tienen actividad encimtica a partir de la leche. Actividades complementarias Visite una panadera, conozca el proceso de elaboracin del pan y comprelo con el de la elaboracin del yogurt. Elabore un cuadro comparativo (similitudes y diferencias) entre los dos procesos y analice por qu son consideradas biotecnologas. Plantee las siguientes preguntas al panadero y tome nota de sus respuestas: Utiliza usted organismos vivos para la produccin del pan? Sabe usted qu es biotecnologa? Qu hace que la masa del pan crezca? Si se le ocurren ms preguntas no dude en realizarlas. Recuerde la curiosidad es el alimento de la investigacin. Analice sus resultados en clase.
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La biotecnologa y su evolucin
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Exploracin de Preconceptos
DINMICA
proliferacin de clulas
planta joven
zanahoria
OBJETIVO
1. Comprender el principio de las tcnicas utilizadas en la propagacin de plantas in vitro. 2. Identificar los criterios para la seleccin de cada una de las tcnicas. 3. Identificar los principales requerimientos de una planta en condiciones de campo para un mejor establecimiento in vitro.
endurecimiento
embrin joven
SECUENCIA
Explante - Introduccin in vitro - Regeneracin - Endurecimiento rgano Tejido Clula
Planta Respuesta:
CONTENIDO
1. Definicin cultivo de tejidos vegetales 2. Historia del cultivo de tejidos 3. Tcnicas de propagacin in vitro
9-1-4-3 8-2-7
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DINMICA
Con sus palabras describa cules procesos cree usted ocurren en cada paso de la secuencia
Exploracin de preconceptos
Podras definir revigorizacin? autotrofa? y heterotrofa? Contexto Una clula vegetal en multiplicacin Reflexin La reproduccin asexual de plantas por cultivo in vitro de tejidos es posible gracias a que cada una de las clulas de un individuo vegetal, posee la capacidad necesaria para permitir el crecimiento y desarrollo de un nuevo individuo, sin que medie ningn tipo de fusin de clulas sexuales o gametos. Esta capacidad se denomina totipotencialidad celular. Bsicamente, la reproduccin asexual ocurre por divisin mittica, mediante el cual, se cumplen sucesivas etapas de crecimiento y desarrollo. La mitosis implica una replicacin de los cromosomas de las clulas hijas, por lo que las mismas poseen un genotipo idntico al de la clula madre. As, las clulas vegetales crecidas en condiciones aspticas sobre medios de cultivo con suplementos de reguladores del crecimiento (tambin llamados hormonas vegetales), pueden dividirse dando dos tipos de respuesta: 1. Una dediferenciacin celular acompaada de crecimiento celular desorganizado, que da lugar a una masa de clulas denominada callo, el cual bajo condiciones controladas y uso de reguladores de crecimiento es capaz de generar rganos o embriones somticos, 2. Una respuesta morfogentica por la cual o se forman directamente rganos o embriones. El cultivo in vitro consiste en tomar un explante, una porcin de una planta (pice, hoja, segmento de tallo, meristemo, embrin, nudo, semilla, antera, etc.) y colocarlo en un medio nutritivo estril (usualmente gelificado, semislido) donde se regenerarn plantas completas.
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Mdulo 2
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El cultivo de tejidos vegetales forma parte de la biotecnologa clsica y se define como el conjunto de tecnologas empleadas en la propagacin y mejoramiento de una especie. Estas tecnologas se fundamentan en los procesos naturales de propagacin va vegetativa y sexual y en la capacidad que tiene la clula vegetal para regenerar una planta completa, a partir de un explante, esa potencialidad se define como totipotencia. Explante: fragmento de tejido diferenciado u rgano (semilla, meristemo, hoja, raz, tallo, ptalos, anteras, polen, entre otros).
hoja
HISTORIA
Como ya comentamos durante los aos 1800 la teora celular defini que la clula era la unidad estructural bsica de los seres vivos. En la segunda parte de esta teora se afirm, que esas unidades estructurales son distintas y tienen una capacidad particular en las plantas: la Totipotencia. La historia del cultivo de tejidos vegetales se remonta a los aos 1800, cuando Schwann y Schleiden introdujeron el concepto fundamental de la Totipotencia en el laboratorio. Los primeros intentos de cultivar in vitro clulas de tejidos vegetales llevados a cabo por Haberland en 1902 no tuvieron xito, pues pensaba que solamente el medio de cultivo nutritivo era suficiente. Entre 1898 y 1922 Haberland y sus colaboradores decidieron cultivar clulas de polen parenquima empalizada, mdula de parenquima y epidermis de hoja. Sin embargo, estas crecieron pero no se dividieron. Desde 1934 hasta 1939, Gautheret, Nobecourt y White, desarrollaron trabajos de investigacin paralelos cultivando puntas de raz de tomate y zanahoria utilizando medios de cultivo enriquecidos con vitaminas, azcares y extracto de levadura. En los aos 50s tienen lugar grandes descubrimientos: Millar & Skoog obtiene brotes a partir de mdula de tabaco. A partir de este trabajo descubren que la sustancia responsable de este fenmeno era la Kinetina, un regulador de crecimiento. Steward, cultiva tejido de zanahoria en medio de cultivo con leche de coco y descubre el proceso de embriognesis. Muir, report que fragmentos de tejidos desorganizados (callos) de tabaco cultivados en medio lquido dan origen a clulas en suspensin. En los aos 60s se generan importantes avances: Se confirma la regeneracin de una planta completa a partir de un tejido. Morel & Martin obtienen plantas de dalia libres de virus y formulan la composicin de vitaminas ms utilizadas hasta el presente, las vitaminas de Morel. Cocking logr remover la pared de la clula vegetal empleando enzimas para dar origen a los protoplastos. En 1962 Murashige & Skoog desarrollan la composicin del medio de cultivo universalmente ms utilizado que contiene adems de sales minerales, azcar, carbono como fuente de energa, vitaminas y los reguladores de crecimiento (hormonas vegetales).
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Para un mejor entendimiento de los procesos implicados en el proceso de cultivo de tejidos vegetales es necesario manejar los siguientes conceptos: 1. Diferenciacin: Desarrollo de clulas o tejidos con funciones especficas y/o regeneracin de rganos o estructuras: races, brotes pro-embriones. 2. Dediferenciacin: Reversin del estado diferenciado al no diferenciado. 3. Revigoracin: Rejuvenecimiento, reversin del estado adulto al juvenil.
cuenta que el xito del proceso esta determinado por factores como: 1. 2. 3. 4. Genotipo de la especie Edad de la planta Edad y tipo de explante Condiciones de crecimiento de la planta madre 5. poca del ao El crecimiento de las clulas a partir de los diferentes explantes para la regeneracin de la planta puede ser: (Fossard, 1977)
4. Variacion somaclonal: Incremento 1. Organizados: corresde la variabilidad gentica en FUENTES DE EXPLANTES ponde al cultivo de plantas superiores. Se presenta estructuras organizadas cuando el estado indiferensemilla de la planta o de ciado, callo, ocupa un Embrin rganos, a partir de largo perodo y ocurre Meristemo los cuales se pueuna prdida de la mede formar directamoria gentica. Las mente una nueva clulas comprometidas estructura organien un programa Clula Protoplasto CTV za. Ejemplo: a gentico especfico, partir de discos de sufren reorientaciones hoja se regeneran y pueden formar nueraces de manera vos grupos con caractedirecta. res genticos diferentes Callos al inicial. rganos 2. No-organizados: hace referencia al creci5. Callos: Formacin desorganiYemas miento desorganizado de zada (dediferenciado) de un las clulas, cuando stas o los grupo de clulas, resultado de una tejidos, son aislados de partes orgaalta actividad mittica de clulas nizadas, luego dediferenciados y postediferenciadas en respuesta a un estmulo riormente cultivados. Pueden resultar agreej.: heridas, alta produccin de auxinas en seal de cicatrigados de clulas (callos) o se pueden induzacin. cir suspensiones celulares. El crecimiento no organizado es el resultado, principalmente, 6. Endurecimiento: Aclimatizacin de la planta in vitro a las del uso de altas concentraciones de auxina condiciones in vivo. Se presenta un gradual decrecimiento en o citoquininas (hormonas vegetales) en el la humedad relativa donde crecieron las plantas. medio. La estabilidad gentica de estos cultivos es bastante baja. 7. Suspensiones celulares: conjunto de clulas provenientes de callos, que al ser sometidos a digestiones enzimticas o 3. No-organizados/organizados: Es intermerupturas mecnicas son separadas en medio de cultivo dio entre los dos anteriores. Un rgano o lquido. Pueden crecer como agregados o permanecer tejido aislado se diferencia, formando tejidos dispersas en el medio de cultivo lquido. o una capa de tejido calloso, por divisin de los cuales se pueden regenerar rganos 8. Protoplastos: clula vegetal desprovista de pared celular y (races o brotes) o an individuos completos cultivadas inicialmente en medio lquido. (pro-embriones y embriones). En estos casos la progenie no es completamente idntica a Para el cultivo de tejidos vegetales pueden ser empleados la planta original. diferentes partes de la planta. Sin embargo hay que tener en
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El cultivo de tejidos vegetales in vitro ofrece diferentes tcnicas: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Micropropagacin Organognesis Embriognesis Suspensiones celulares Cultivo de anteras y polen Cultivo de protoplastos
MICROPROPAGACIN
Etapa 1
Desinfestacin e introduccin del explante a condiciones in vitro
Etapa 3
Enraizamiento
Etapa 4
Etapa 2
Endurecimiento Multiplicacin de brotes
La micropropagacin se conoce tambin con el trmino de propagacin clonal y fue descrita por primera vez por Weber para plantas cultivadas y producidas vegetativamente. Este trmino significa que la planta es multiplicada a travs de brotes, yemas, injertos o estacas. La propagacin clonal deriva del trmino clon y se refiere a plantas producidas por reproduccin asexual donde las descendientes son idnticas a la planta de origen. La micropropagacin se emplea para la produccin de plantas a gran escala y es utilizada principalmente en aquellos materiales vegetales que presentan problemas con la germinacin de la semilla o cuando tienen periodos vegetativos muy largos como ocurre en frutales y forestales. Las ventajas que ofrece este sistema de multiplicacin comparado con los mtodos convencionales en el campo son: Menor tiempo y espacio para obtener un mayor nmero de plantas en sistema asptico in vitro. Se pueden obtener plantas libres de virus utilizando meristemos, por lo cual se asegura que son plantas limpias pero no resistentes a virus. La propagacin in vitro utilizando meristemo como explantes y tratamientos a altas temperaturas como termoterapia, garantizan la eliminacin de virus.
Ideas para discutir: Qu aspectos deben tenerse en cuenta para la seleccin del explante? Un organismo que se desarrolla bajo condiciones in vitro es hetertrofo o auttrofo? De acuerdo con la respuesta anterior, cules considera debe ser los componentes de un medio de cultivo adecuado para la multiplicacin in vitro de clulas vegetales? Claves para el docente: Para la seleccin de explante debe tenerse en cuenta el genotipo, la edad fisiolgica, la posicin del explante en la planta, la procedencia del material (zonas geogrficas) y las condiciones de cultivo (invernadero o campo). Los componentes de un medio de cultivo para la propagacin de plantas incluyen: Fuente de carbono Reguladores de crecimiento Vitaminas y aminocidos Agentes gelificantes , cuando se trata de un medio slido Sales minerales (Macro y micronutrientes) Agua
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Etapa 3: Enraizamiento
Para inducir el enraizamiento es necesario transferir el material vegetal a un medio de cultivo que contenga reguladores de crecimiento en especial auxinas.
Etapa 4. Endurecimiento
Consiste en la adaptacin gradual de las plantas producidas in vitro a las condiciones externas donde la humedad relativa es menor y no requieren de fuentes de carbono exgenas.
ORGANOGNESIS
Directa:
Formacin de rganos como races y brotes sin formacin de callo
Indirecta:
Formacin de callos
Diferenciacin de rganos
Es el proceso de diferenciacin en el cual rganos, races y brotes adventicios y tallos se forman directa o indirectamente a partir de otros tejidos. La formacin de estas estructuras se logran a partir del desarrollo de cultivo de estos rganos. Tejidos que usualmente no los forman. La produccin de plantas por esta va puede llevarse a cabo bajo dos modalidades:
1. Organognesis indirecta: Implica la formacin de un callo sobre el explante inicial como resultado de la herida producida al remover el explante de la planta y por la accin de los reguladores de crecimiento ya sean exgenos o endgenos. 2. Organognesis directa: Los brotes adventicios se forman directamente de los explantes sin formacin de callos. Este fenmeno pone de manifiesto el concepto de totipotencia, propio de los vegetales.
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EMBRIOGNESIS
Etapa 1
Etapa 2
Etapa 3
Etapa 4
Etapa 5
Etapa 6
Transplante
Germinacin
Aclimatacin
Es el proceso mediante el cual se induce la formacin del embrin. Esta puede ocurrir a partir de embriones zigticos o sexuales inmaduros (embriognesis zigtica) o a partir de tejidos somticos de la planta (embriognesis somtica). Durante la embriognesis se puede encontrar embriones adventicios, aquellos que se forman de rganos o de embriones y embriones partenognicos los cuales se forman a partir de huevos no fertilizados. La embriognesis somtica difiere de la organognesis en que los embriones tienen estructura bipolar (dos polos para la diferenciacin), un polo que da origen al sistema radicular y el otro a la parte area de la planta. En 1980 Sharp y su grupo de investigacin describieron dos rutas para la embriognesis: a. La embriognesis directa, a travs de la cual el embrin inicia la formacin de tejido sin formacin de callo. Las clulas de este tejido tienen definido un programa morfogentico, el cual las compromete en la formacin de embriones y necesitan nicamente ser liberadas. Tales clulas se encuentran en
tejidos embrionarios como el escutelo, en tejidos jvenes como hipocotilos o en plantas maduras a partir de vulos. b. Embriognesis indirecta ocurre por proliferacin de clulas para formar callos, los cuales a su vez originan los embriones. Estos aparecen comnmente de clulas del floema secundario. La embriognesis somtica in vitro a diferencia de la propagacin clonal no garantiza la estabilidad gentica de la progenie debido a la alta probabilidad de que aparezcan cambios genticos, en especial si el estado de callo permanece mucho tiempo. Adicionalmente presenta las siguientes dificultades: a. La obtencin de plantas completas en algunas especies no siempre resulta en un proceso exitoso. b. En algunas plantas la induccin de la embriognesis somtica ha resultado imposible. c. El estado de dormancia de la semilla aparece con alguna frecuencia y por lo general es extremadamente difcil de romper.
LIMITANTES
La contaminacin, en particular de origen endgeno interfiere con el proceso, deteriorando el explante, caso especial en forestales.
Es un buen sistema para el intercambio de material gentico, pues es fcil de transladar Es posible producir plantas limpias, libres de virus cuando se utilizan meristemos como fuente de explante. Es el caso de papa y de ornamentales donde la tcnica es muy empleada
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SUSPENSIONES CELULARES
callo embriognico
embriones somticos Cultivo de clulas a partir de callos en medio lquido en continua agitacin
Corresponde al cultivo de clulas en medio lquido. Estas clulas pueden estar dispersas o agregadas en el medio. Normalmente se inicia el cultivo a partir de callos que se disgregan fcilmente (callos friables) y que crecen continuamente en agitacin. En la suspensin hay clulas activas, clulas muertas y restos de los rganos (debris), que deben ser con removidos por centrifugacin y filtracin para favorecer el crecimiento celular. Este sistema de cultivo es similar al empleado para cultivos bacterianos y para procesos de fermentacin (fermentadores y birreactores). Esta tcnica es aplicada en la produccin de metabolitos secundarios que se encuentran con frecuencia en las plantas medicinales. Debido a que natural existen factores ambientales que afectan la produccin de estos metabolitos, el clima, presencia de patgenos y cambios de estacin son algunos de ellos. Al inducir la formacin de suspensiones celulares , la cantidad y concentracin del metabolito pueden verse favorecidas, pues el nmero de clulas es mayor y las
condiciones controladas del sistema ayudan a superar las barreras climticas. Un aspecto importante a considerar en esta tcnica es la asincrona que tienen las clulas. Su tamao y forma variable, el volumen nuclear, el contenido de ADN y los tiempos en la divisin celular, varan por lo cual es necesario sincronizar las clulas, es decir, todas las clulas en la suspensin deben estar en un mismo momento del ciclo celular. Cmo se sincronizan las clulas en cultivo? a. Sometindolas a choques a bajas temperaturas 4 C por unos das b. Privando el cultivo de elementos esenciales, tales como el nitrgeno, fsforo y carbohidratos que favorecen su actividad mittica c. Adicionando inhibidores como la hidroxiurea, la timidita y la colchicina que detienen la divisin celular
Se desarrollaron para apoyar y complementar los programas de mejoramiento gentico convencional, ya que permiten la obtencin de haploides.
polen
Obtencin de haploides
El cultivo de anteras y polen es empleado para la obtencin de haploides y para la de deteccin mutaciones en especies. Ambos tcnicas se desa-
rrollaron para apoyar y complementar los avances de los programas de mejoramiento gentico convencionales.
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Los haploides, organismos donde todos los tejidos tienen una carga gentica igual a la de una clula sexual, fueron de gran importancia en el campo de la gentica y del mejoramiento vegetal, sin embargo su aprovechamiento se ha limitado dada la baja frecuencia con la que ocurren en la naturaleza. En condiciones naturales, un haploide es el resultado del procesos de apomixis o partenognesis (reproduccin sexual sin fertilizacin del vulo). En condiciones artificiales se logra por mtodos de germinacin del polen, tratamientos hormonales y bajas temperaturas. En 1967 Nitsch obtuvo la primera planta haploide de tabaco a partir de clulas de polen. La planta originada por este mtodo tiene una carga gentica reducida a la mitad y mediante tratamiento con colchicina se obtiene durante la segunda generacin una carga gentica diploide. Importancia del uso de los haploides a. Desarrollo de lneas homocigotas puras para obtener nuevas variedades en menor tiempo,
b.
c. d.
e.
unos meses un ao, mientras que empleando sistemas convencionales puede tardarse entre 68 aos Desarrollo de hbridos como resultado de la diploidizacin de un haploide que fija ms fcilmente las caractersticas Deteccin de mutaciones Induccin de la variabilidad gentica, a travs del cultivo de anteras, no solo fue posible obtener plantas haploides, sino plantas con diferentes niveles de ploidia que son aprovechadas e incorporadas en los programas de mejoramiento Obtencin exclusiva de plantas masculinas. La induccin de haploides seguida de la duplicacin de los cromosomas permite obtener nicamente plantas masculinas
Recientemente se han obtenido plantas haploides a partir de cultivo de vulos y ovarios lo que se conoce con el nombre de haploides ginognicos. Estas plantas son comparables con las obtenidas a partir de anteras y polen (haploides andrognicos).
Esta tcnica se desarroll con el objeto de producir nuevas variedades pues era posible unir protoplastos provenientes de fuentes de tejido diferentes (ex: de raz con hoja) o de especies taxonmicamente muy distantes. Los protoplastos aislados son sembrados en un medio lquido enriquecido con reguladores de crecimiento, vitaminas y estabilizadores osmticos que reemplazan la funcin de la pared para que la clula no se desintegre. A las 24-48 horas el protoplasto debe regenerar su pared y el desarrollo del cultivo se asemeja al de las clulas en suspensin. De aqu en adelante todos los procesos revisados anteriormente tienen lugar para conducir a la formacin de una planta completa.
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Mtodos de fusin: 1. Espontnea: Ocurre durante las primeras etapas del cultivo, donde los protoplastos tienden a fusionarse de manera no controlada conduciendo a la obtencin de diferentes tipos de fusin, aquellos que fusionan solo los citoplasmas y los que fusionan los dos ncleos. 2. Inducida con qumicos: Se usa comnmente el polietilen glycol (PEG), el calcio, y el nitrato de sodio. 3. Electrofusin: Los cultivos de protoplastos son sometidos a descargas elctricas a travs de electrodos de manera que llegan a alinearse y fusionarse. Este mtodo result fcil, rpido y eficiente y no era necesario agregar sustancias qumicas que pudieran ser txicas. Sin embargo, no fue muy aceptado por la especiali-
dad de los equipos y la destreza en los tiempos de aplicaciones de la corriente. 4. Electroporacin: con base en el principio del mtodo de electrofusin se generan poros en la membrana para permitir el ingreso del material gentico forneo. 5. Microinyeccin: con ayuda de una aguja fina, se perfora la membrana y se inyecta el material gentico externo Finalmente, muchas de estas tecnologas utilizadas para la transferencia de material gentico proveniente de otro organismo han quedado en desuso, principalmente debido al difcil control que se puede ejercer durante el proceso y donde no se garantiza de manera precisa la produccin de organismos genticamente modificados.
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Taller de comprensin de la seccin para realizar con los estudiantes Cultivo de tejidos vegetales in vitro
Concepto El cultivo de tejidos se refiere al cultivo individual de clulas, tejidos o de rganos (explantes), sobre un medio artificial. A partir de ellos es posible regenerar un organismo completo. Objetivo Propagar in vitro plantas de repollo a partir de semillas Materiales Semillas de repollo 4 Frascos de compota limpios Un vaso desechable Mezclador o cuchara Agua destilada Gelatina sin sabor Algodn Papel aluminio Vinipel Tijeras Hipoclorito de sodio (Clorox) Pinzas Vaso con medida o probeta Colador de tela Balanza Procedimiento 1. Preparacin de la solucin de hipoclorito de sodio Teniendo en cuenta que el blanqueador comercial viene a una concentracin de 5.6%, tome 200 ml de agua destilada y coloque 200 ml de hipoclorito de sodio, para as obtener 400 ml de una solucin desinfectante al 2.8%. Emplee para medir una probeta de 500 ml Frmula: Volumen 1 x concentracin 1 = Volumen 2 x concentracin 2 2. Desinfestacin de la semillas - Lave las semillas con hipoclorito durante 10 a 15 minutos
vaso desechable
semillas
- Retire el lquido. Para evitar la prdida de semillas aydese con el colador. Enjuague con agua destilada la semillas, repite este procedimiento tres veces.
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- Tome uno de los frascos de compota, previamente desinfectado con hipoclorito y enjuagado con agua destilada. Adicione dos centmetros de agua destilada estril y coloque el algodn en la superficie del agua. 4. Germinacin de las semillas: - Usando unas pinzas estriles tome algunas de las semillas desinfectadas y colquelas encima del algodn. - Tape el recipiente con papel vinipel
- Coloque en lugar clido 20 - 25o C y con mucha luz (12 horas) durante cuatro das Al trmino de los cuatro das la germinacin de las semillas ha tenido lugar, prepare el medio de cultivo para iniciar el proceso de siembra. 5. Preparacin del medio de cultivo: - Pese 2.5 gramos de gelatina adicione 250 ml de agua estril. Caliente y agite con el mezclador o cuchara, hasta que el polvo se disuelva.
- Antes que la solucin se enfre, vierta la solucin en tres frascos de compota (aproximadamente 5 cm). Deje que la solucin se enfre y solidifique.
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6. Introduccin in vitro del material vegetal - Corte de la parte superior los brotes germinados. Tenga cuidado de cortar justamente debajo de la yema apical.
cotiledones yema apical
algodn
- Coloque un explante en cada frasco. Introdzcalo un poco dentro del medio de cultivo. Tenga cuidado que los cotiledones no queden tocando la superficie. - Tape los frascos con papel de aluminio y colquelos en un lugar iluminado (borde de una ventana). - Observe diariamente y tome informacin cuantitativa y cualitativa del proceso.
Ideas para discutir: Qu le proporciona la solucin de gelatina al explante? Por qu es importante tapar los frascos? Sugiera por que lo explantes utilizados pueden continuar creciendo, cuando ellos han sido aislados del resto del brote, con pocos nutrientes? Qu factores fsicos o qumicos introducira al experimento? Explique. Claves para el docente: El agar o gelatina proporciona agua y soporte al explante. Mantener la humedad, prevenir la contaminacin, permitir la luz, etc. Los cotiledones son rganos fotosintticos que contienen su propia reserva de nutrientes . Cambios de temperatura, adicin de azcar al medio de cultivo, tipo de luz etc.
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Mayores informes:
Calle 90 No. 11A - 34 Oficina 409 Telfono: 610 1029 Fax: 610 1247 E-mail: agrobio@agrobio.org Web: www.agrobio.org
LA BIOTECNOLOGA Y SU EVOLUCIN
Exploremos como los avances en el conocimiento han sido aplicados para darle valor agregado a los sistemas biolgicos y recursos vivos.
BIOTECNOLOGA TRADICIONAL Procesos Procesos y y actividades actividades desarrolladas desarrolladas a a travs travs de de recetas recetas y y tradiciones: tradiciones: Queso, Queso, yogurt yogurt y y vino vino
El origen de la biotecnologa se remonta a los tiempos de la prehistoria. Desde el ao 10.000 AC, la biotecnologa cobra valor con las prcticas de domesticacin de cultivos, llevados a cabo por el hombre cuando sus costumbres cambiaron y pas de ser nmada a sedentario. Su nueva organizacin le exigi iniciar un proceso de seleccin de sus alimentos que muestran caractersticas de inters: plantas ms resistentes, frutos ms grandes y dulces, entre otros. Con base en simples observaciones, le fue posible distinguir cultivos ms productivos, resistentes a plagas y enfermedades lo que result en ventajas adaptativas para el organismo. Sin conocer ni disponer de tcnicas de mejoramiento de cultivos y con el objeto de mejorar su alimentacin, el hombre empieza a intervenir en la naturaleza para tener a su alcance mejores materiales vegetales.
- 6.000 AC, La levadura es utilizada por sumerios y babilnicos para elaborar cerveza.
- 4.000 AC, Los egipcios descubrieron cmo hacer pan usando levaduras. - 2.500-200 AC, Egipto. Empleo de bacterias y levaduras, fermentacin de uvas y cebada, produccin de vino y vinagre - 500-100 AC, China. Primer insecticida producido a partir de un hongo de crisantemo. 500 AC, Primer antibitico de moho de soya. - 300 AC, Grecia. Desarrollo de injertos para mejoramiento en plantas.
Mayor conocimiento conocimiento de de los los organismos organismos involucrados involucrados y y la la forma forma de de controlarlos: controlarlos: Cultivo Cultivo de de tejidos tejidos vegetales vegetales in in vitro vitro BIOTECNOLOGA CLSICA Mayor - 1663, Robert Hook descubre la existencia de la clula.
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
As, en la medida en que aument el conocimiento y comprensin sobre el funcionamiento de los organismos vivos y sus procesos, el hombre tuvo a su alcance nuevas herramientas que le permitieron desarrollar y mejorar productos.
- 1675, Anthony van Leewenhoeek, descubre la clula bacteriana. - 1700, Identificacin de primeros hbridos. - 1865, Descubrimiento de las leyes de la herencia - 1898, Haberland realiz el primer cultivo de clulas de parnquima. - 1880, Produccin de vacunas. - 1910, Primer hbrido de maz.
El auge de la biotecnologa solo se alcanza en la dcada de los 70s con el descubrimiento de las enzimas de restriccin, las cuales permitieron el desarrollo de la tecnologa de genes, lo que se consider revolucionario en este siglo.
- 1922, Descubrimiento de la insulina para tratamiento. - 1928, Descubrimiento de la penicilina. - 1940, Produccin de antibiticos. - 1944, T. Avery asla ADN puro. se demuestra que el ADN est en el ncleo y es el material gentico. - 1960, Produccin de variedades de arroz y trigo con alta productividad.
BIOTECNOLOGA MODERNA Se conocen los organismos involucrados, los mecanismos de control y adicionalmente la forma de modificarlos para beneficio del hombre. Entran en aplicacin las tecnologas del ADN recombinante.
- 1990, Lanzado el proyecto de genoma humano.
Actualmente, la diferencia fundamental que aportan las tcnicas actuales es que el hombre no slo sabe cmo usar las clulas u organismos de la naturaleza, sino que ha aprendido a modificarlos y manipularlos en funcin de sus necesidades.
- 1995, Primera planta de papa transgnica resistente al escarabajo colorado. - 1996, Primera produccin comercial de canola, maz y soja transgnicas en Canad. - 1997, Clonacin de la oveja Dolly. - 1998, Ubicacin de 30 genes en el genoma humano. - 2003, Colombia es el pas 58 signatario del Protocolo.
13/01/2005, 03:28 pm
Conozcamos como se aplica la biotecnologa en diferentes reas: SALUD HUMANA Y ANIMAL: Sistema de diagnstico de enfermedades. Productos farmacuticos: Antibiticos, vitaminas, insulina. Vacunas: la vacuna de la hepatitis B obtenida a travs de la modificacin de la levadura. Terapia gnica: Tratamiento contra enfermedades de origen gentico mediante el reemplazo y/o modificacin de los genes que presentan un funcionamiento anmalo. Identidad molecular: tcnica que permite la identificacin de los personas a travs de patrones de secuencias genticas para prueba de paternidad y gentica forense. En animales se aplica para estudios de diversidad, evolucin, gentica de poblaciones y programas de mejoramiento.
El rea agrcola es el mundo de exploracin de Bio-Aventura. Veamos en detalle como la biotecnologa se ha aplicado en este sector. Iniciemos con el cultivo in vitro de tejidos vegetales. El cultivo de tejidos vegetales forma parte de la biotecnologa clsica y se define como el conjunto de tecnologas empleadas en la propagacin y mejoramiento de una especie. Estas tecnologas se fundamentan en los procesos naturales de propagacin va vegetativa y sexual y en la capacidad que tiene la clula vegetal para regenerar una planta completa, a partir de un explante, esa potencialidad se define como totipotencia. El cultivo in vitro de cultivos vegetales es importante para: preparacin masiva de plantas, obtencin de plantas libres de virus, produccin de semilla sinttica, observacin de germoplasma, obtencin de metabolitos secundarios, produccin de nuevos hbridos, mejora gentica de plantas y germinacin de semillas.
INDUSTRIA: Aditivos: ctricos Saborizantes Colorantes: azul indigo Alcohol carburante: etanol Productos lcticos (yogurt y quesos) uso de partes o del organismo completo (enzimas o microorganismos) Detergentes: obtencin de enzimas que degradan cidos grasos, lipolasa (Aspergillus), cutinasa (Saccharomyces), de protenas (Bacillus licheniformis) para eliminar manchas de sangre, comida, etc. AMBIENTE: Biorremediacin: Tratamiento de residuos lquidos contaminados. Un ejemplo de esta aplicacin es la limpieza de derrames de petrleo empleando bacterias. Manejo de residuos slidos: Uso de bacterias, hongos para la degradacin de residuos orgnicos. Biolixiviacin: Recuperacin de metales mediante su solubilizacin. Aplicacin de gran inters para la industria minera. Diagnstico y deteccin de sustancias: uso de organismos, bacterias, plantas, etc., que detecten e informen acerca de la presencia de sustancias especficas actuando como biosensores.
MICROPROPAGACIN
Etapa 1 1 Etapa
Seleccin, desinfestacin e introduccin del explante a condiciones in vitro
Etapa 2 2 Etapa
Multiplicacin de brotes
Etapa Etapa 3 3
Enraizamiento
Etapa 4
Endurecimiento
Meristemo
ORGANOGNESIS
Diferenciacin de rganos Seleccin del explante Formacin de callos Brote apical
AGRCOLA: Sistemas de diagnstico de enfermedades. Agrobiolgicos, uso de organismos vivos o las sustancias producidas por ellos para mejorar la productividad de los cultivos o para el control de plagas y malezas. Cultivo de clulas y tejidos in vitro, para produccin de plantas a gran escala, obtencin de metabolitos secundarios y mejoramiento gentico. Cultivos genticamente mejorados mediante tecnologa de genes. Conservacin de germoplasma. Estudios de diversidad, evolucin, gentica de poblaciones y programas de mejoramiento.
Directa: Formacin de
Introduccin in vitro
Brotes adventicios
Formacin de bulbos
Desarrollo ovario
Embriognesis
Tuberizacin
Callos
Plntula
Florecimiento
13/01/2005, 03:29 pm
EMBRIOGNESIS
Esta capacidad se denomina totipotencialidad celular. Bsicamente la reproduccin asexual ocurre por divisin mittica, mediante el cual, se cumplen sucesivas etapas de crecimiento y desarrollo. La mitosis implica una replicacin de los cromosomas de las clulas hijas, por lo que las mismas poseen un genotipo idntico al de la clula madre. As, las clulas vegetales crecidas en condiciones aspticas sobre medios de cultivo con suplementos de reguladores del crecimiento (tambin llamados hormonas vegetales), pueden dividirse dando dos tipos de respuesta: 1. Una dediferenciacin celular acompaada de crecimiento celular desorganizado, que da lugar a una masa de clulas denominada callo, el cual bajo condiciones controladas y uso de reguladores de crecimiento es capaz de generar rganos o embriones somticos, 2. Una respuesta morfogentica por la cual o se forman directamente rganos o embriones. El cultivo in vitro consiste en tomar un explante, una porcin de una planta (pice, hoja, segmento de tallo, meristemo, embrin, nudo, semilla, antera, etc.) y colocarlo en un medio nutritivo estril (usualmente gelificado, semislido) donde se regenerarn plantas completas.
polen Tipos de polen callo embriognico embriones somticos Tcnica aplicada a la produccin de metabolitos secundarios
Etapa 1 1 Etapa
Iniciacin
Etapa 2 2 Etapa
Proliferacin de tejidos embrionarios
Etapa 3 3 Etapa
Maduracin de embriones somticos
Etapa 4 4 Etapa
Germinacin
Etapa 5 5 Etapa
Aclimatacin
Etapa 6 6 Etapa
Transplante
Esta tcnica se desarroll con el objeto de producir nuevas variedades de plantas, a travs, de la unin de protoplastos.
Se desarrollaron para apoyar y complementar los programas de mejoramiento gentico convencional, ya que permiten la obtencin de haploides.
Obtencin de haploides
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
La reproduccin asexual de plantas por cultivo in vitro de tejidos es posible gracias a que cada una de las clulas de un individuo vegetal, posee la capacidad necesaria como para permitir el crecimiento y desarrollo de un nuevo individuo, sin que medie ningn tipo de fusin de clulas sexuales o gametos.
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Mdulo 3
Contenido
genticamente modificados
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OBJETIVOS
1. Comprender los procesos y prcticas tecnolgicas que permiten la obtencin de plantas y organismos genticamente modificados 2. Integrar los avances y conocimientos generados en los ltimos aos en el desarrollo y aplicacin de las herramientas de la biotecnologa agrcola moderna 3. Entender los principios bajo los cuales es posible mejorar algunas caractersticas de los organismos mediante tcnicas de ADN recombinante
DINMICA
SECUENCIA
Biotecnologa moderna - ADN recombinante - Organismos genticamente modificados
Exploracin de Preconceptos
En una hoja de papel elabore un mapa conceptual alrededor de las plantas genticamente modificadas. Utilice su imaginacin, los elementos proporcionados a lo largo de las diferentes Bio-Aventuras y el conocimiento que ya tiene sobre los organismos vivos y su funcionamiento.
CONTENIDOS
1. ADN recombinante y Organismos genticamente modificados 2. Procesos implicados en la modificacin gentica 3. Mtodos de transformacin 4. Principios de transformacin de algunos eventos biotecnolgicos
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Biotecnologa
Agricultura
Salud
Produccin de alimentos
herramientas que les permiten cortar la molcula de ADN en lugares especficos y pegarlas nuevamente en diferentes combinaciones para conformar una nueva molcula. Esta habilidad o herramienta se denomin tecnologa del ADN recombinante.
Es una herramienta productiva que ha impactado prcticamente en todas las actividades industriales
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Los organismos vivos a los cuales se les transfieren genes mediante el uso de la ingeniera gentica, se conocen como biotecnolgicos, recombinantes, transgnicos o genticamente modificados.
Todo proceso de modificacin gentica a travs de la biotecnologa moderna implica las siguientes etapas: 1. Identificacin y aislamiento de las secuencias de ADN (genes) que controlan caractersticas o procesos de inters 2. Construccin del transgen 3. Clonacin 4. Transformacin 5. Seleccin 6. Regeneracin
Recordemos que El mejoramiento gentico, data desde hace ms de 10.000 aos. Los procesos de seleccin en el campo realizados por agricultores basados en el comportamiento y caractersticas de los organismos cultivados y cosechados fue y sigue siendo una estrategia de mejoramiento. Los mtodos de mejoramiento convencional han demostrado ser importante y tiles, sin embargo, dependen en ltima instancia del azar y la seleccin y no implican la identificacin especfica de los determinantes genticos (genes). Los desarrollos cientficos han dotado a los mejoradores de capacidades para intervenir en las caractersticas de un organismo de una manera ms precisa, ofrecindole herramientas que le permiten trabajar a nivel del genoma vegetal. El valor de la ingeniera gentica y su aporte a la biotecnologa moderna y a los procesos de mejoramiento reside en suministrarnos una nueva herramienta que no reemplaza las existentes, que permite ampliar las posibilidades de mejoramiento mediante el uso de otros procedimientos. La tecnologa del ADN recombinante ha facilitado la introduccin de genes entre especies no relacionadas filogenticamente, es decir, ha permitido superar las barreras biolgicas de la reproduccin sexual, las cuales en condiciones naturales impiden el intercambio de genes de inters agrcola. Estos aspectos que no haban sido superados a travs de los procesos tradicionales o de la biotecnologa tradicional y clsica. Algunos aportes que han permitido el establecimiento de programas de mejoramiento orientados, sin la intervencin del azar y por lo tanto el desarrollo y la aplicacin de las tcnicas de ADN recombinante han sido: El establecimiento de las leyes de la herencia por Gregorio Mendel en el siglo XVII. El conocimiento que todos los organismos estn constituidos por ADN, con una misma composicin qumica y que comparten los mismos procesos de replicacin, transcripcin y traduccin. La comprensin de los mecanismos para la sntesis de protenas y de divisin celular para la transferencia de la informacin. El desarrollo de las tcnicas de cultivo de tejidos in vitro, biotecnologa clsica para la regeneracin de plantas transformadas.
Media Pgina
Genes Insertados
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Protena
Trp Phe
Gly Ser
5 3
G C
A A T T T T A A
C G
3 5
5 3
C G
C C G G
G G C C
G C
3 5
U G G U UU G G C U C A
Eco RI 3
SmaI
ARNm ADNc
Transcriptasa reversa
3 A C U C G G U U U G GU 5
5 3
G C
AA T T C C C T T AA G
3 5
5 3
C G
C C G G
G G C C
G C
3 5
Gen 1
Para aislar las secuencias de ADN es importante tener presente que la molcula de ADN ya sea lineal o circular, es continua, debido a la unin de las bases nitrogenadas mediante enlaces fosfodiester. Para romper una cadena sencilla de ADN se requiere la accin de unas enzimas llamadas enzimas de restriccin que reconocen de manera especfica secuencias en el ADN y las cortan, de ah su nombre de restriccin. Las enzimas de restriccin son endonucleasas, es decir, cortan dentro de la cadena del ADN y han sido aisladas de bacterias de las cuales derivan su nombre.
Cuando la enzima de restriccin corta la molcula de ADN, mediante la accin de las enzimas de restriccin, se pueden producir dos tipos de extremos: los romos y los pegajosos. A estos extremos del ADN es posible unir nuevos fragmentos (genes de inters) que se unen con los extremos terminales en el ADN que ha sido cortado. Por esta razn es posible combinar genes de plantas con plantas, de plantas con microrganismos y animales o de animales entre s.
Enzima de restriccin
BamHI
Organismo de origen
Bacillus amyloliquefaciens
EcoRi
Escherichia coli
Extremos pegajosos
HindIII
Haemophilus influenzae
Extremos pegajosos
kpnl
Klebsiella pneumonia
Extremos pegajosos
pstI
Providencia stuartii
Extremos pegajosos
SacI
Streptomyces achromogenes
Extremos pegajosos
SalI
Streptomyces albue
Extremos pegajosos
SmaI
Serratia marcescens
Extremos romos
SphI
Streptomyces phaeochromogenes
Extremos pegajosos
XbaI
Xanthomonas badrii
Extremos pegajosos
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Taller para realizar con los estudiantes Cmo trabajan las enzimas?
Propsito El objetivo de esta actividad es mostrar el funcionamiento de las enzimas. Contexto Las enzimas de una pia fresca, al igual que los detergentes, son capaces de romper las protenas de la gelatina. Las protenas estn hechas de aminocidos las cuales al unirse forman cadenas. Cuando estas cadenas son cortadas por la accin de las enzimas de la pia ( bromelina), la gelatina pierde su consistencia. Materiales Rodajas de pia fresca Detergente lquido (puedes usar varios si lo deseas) Gelatina Recipientes no tan profundos Procedimiento Antes de iniciar el experimento prepare la gelatina en varios recipientes de acuerdo con las instrucciones del empaque. Deje cuajar. En la superficie de uno de los recipientes con gelatina coloque una rodaja de pia y en otro varias gotas de detergente. Ahora espere dos horas, observe que sucede, analize y compare ambos resultados. Preguntas Por qu cree que la gelatina se lica? Por qu los detergentes tienen enzimas? Con qu aspectos de los vistos en la Bio-Aventura 3 puede relacionar lo visto durante este experimento? Preparara Ud. una gelatina con trozos de pia? S o no? Y Por qu?
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Origen Polylinker
Origen de replicacin Promotor Secuencia Codificante o Gen de inters ATG Este transgen se introduce en el sitio de clonado Sitio de clonado Gen de seleccin en bacterias Terminador
HindIII Sph I Pst I Sal I Xba I BamH I Sma I Kpn I Sac I Eco RI
Regin dentro de la cual el ADN puede ser insertado Gen de seleccin en bacterias Gen marcador de la regin
Los genes tienen secuencias especficas que regulan su expresin. Estas secuencias o sistemas de regulacin que indican cuando, donde y en proporciones se expresa un gen son diferentes en procariotas y eucariotas (ver Bio-Aventura I: del gen a la protena). Por lo tanto, es necesario realizar ciertas modificaciones cuando los genes proceden de una bacteria, de un animal o de otra planta. Por ejemplo, un gen de una bacteria introducido directamente en una planta sin haberle realizado ninguna modificacin, no ser activo en este nuevo organismo y viceversa. Esto significa que la regin codificadora de un gen que vaya a ser introducida en el genoma de una planta requiere secuencias regulatorias que sean conocidas y funcionen en plantas. Este tipo de construcciones (genes ms secuencias regulatorias), son denominado genes quimricos. Recordemos que los genes deben contener una secuencia promotora, una de expresin y una de terminacin.
G
CT
El promotor de eucariotas ms usado es el 35SCaMV, subunidad 35S del virus del mosaico del coliflor. Adicionalmente y dado que los procesos de transformacin no son ciento por ciento efectivos es necesario introducir una secuencia adicional que nos permita identificar cules clulas o tejidos han sido efectivamente transformados y cuales no. Las secuencias o genes marcadores de seleccin ms empleados son: El gen LacZ que sintetiza una enzima llamada B-galactosidasa y el gen gus de la B-glucoronidasa cuyas reacciones se visualizan por la aparicin de un color azul que toman los tejidos El gen luciferasa y el gen GFP provenientes de una medusa que produce una protena verde fluorescente
secuencia de interes
TC
plsmido
G A ATT T CT A
G
CT
AA
TA
TT
El gen nptII que codifica para la resistencia al antibitico kanamicina El gen ManA que codifica para la enzima fosfomanosa-isomerasa, que permite que los tejidos que han incorporado el constructo crezcan en presencia de carbohidratos no metabolizables Genes de resistencia a herbicidas
CT
Promotor
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A G
C G A
plsmido recombinante
G A ATT
TA
G ATTC
C T TA
Secuencia codificadora
Terminador
Gen Marcador
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3. CLONACIN
Clulas que no toman el Plsmido Plsmido recombinante Vector Plsmido Multiplicacin de la clula Replicacin del plsmido
E. coli
Gen de inters
Plsmido Recombinante
Clulas que contienen el Plsmido
SELECCIN DE CLULAS QUE HAN INSERTADO EL TRANSGEN Medio de cultivo para el crecimiento de las bacterias Transferencia de las clulas al filtro de nitrocelulosa
Una vez se tiene organizado el transgen con la secuencia promotora y de terminacin que le permitirn su expresin en un organismo eucariota (planta) es necesario introducirlo dentro de un vector de clonacin.
Qu es un vector?
Es un transportador biolgico que permite introducir y expresar el ADN en una nueva clula. Existen dos tipos de vectores: Vectores de clonacin Vectores transformacin Inicialmente nos referiremos al vector de clonacin, pues es un paso previo a la transformacin.
Gen marcador de seleccin Origen de replicacin
Clulas con Hibridacin con sonda radioactiva para identifica r el gen de inters presente visualizndolos mediante rayos X plsmidos no recombinantes y recombinantes
Vector de clonacin: Un vector de clonacin consta de un origen de replicacin, un polilinker o lugar en el cual se unen las enzimas de restriccin, un gen marcador y uno de seleccin. Se utiliza para obtener mltiples copias del transgen.
Plsmido Vector de clonacin
Etapas de la clonacin: 1. Seleccionar el gen de inters. 2. Introducir el gen dentro de las bacterias. 3. Multiplicacin de bacterias en medios de cultivo especficos. 4. Seleccionar de acuerdo con las caractersticas del gen marcador insertado las colonias que contengan el fragmento deseado.
Polilinker
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4. TRANSFORMACIN
MTODO 1: BIOLSTICA
Tubo de aceleracin de gas Macrocarrier Disco de ruptura
MTODO 2: AGROBACTERIUM
Agrobacterium
Este proceso natural es ADN-T utilizado para transformar in vitro las clulas Plsmido de las plantas Ti reemplazando los genes no deseados por el de interes (transgen). Cromosoma bacteriano Para ello se emplean enzimas de Herida en la planta restriccin y ligasas.
T-ADN integrado
Esta secuencia es reemplazada por el transgen
Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium rhizogenes
Tipos de Agrobacterium
Para realizar el proceso de transformacin es necesario emplear elementos que ayuden a transferir las secuencias al organismos de inters, para ellos se emplean vectores de transformacin. Qu es un vector de transformacin? Es un transportador fsico o biolgico que permite la transferencia de genes o secuencias de ADN a un organismo. Uno de los vectores de transformacin son micropartculas de oro o tungsteno, las cuales en su superficie llevan adheridas las secuencias o genes de inters. En cuanto a los biolgicos se emplean plsmidos, los cules dadas sus caractersticas biolgicas son capaces de transferir secuencias de ADN de bacterias a clulas vegetales. La seleccin del vector de transformacin depender de las caractersticas de la planta y del mtodo de transformacin seleccionado.
2. Agrobacterium
Mtodo de transformacin indirecto que emplea como vector biolgico, un plsmido contenido en la bacteria Agrobacterium, el cual por su naturaleza es capaz de transferir secuencias de ADN de bacterias a plantas. Los miembros del gnero Agrobacterium son bacterias gram (-) del suelo pertenecientes a la familia Rhizobium. De estas las ms conocidas son: A. tumefaciens capaz de inducir tumores llamados agallas de corona (crown gall); A. rhizogenes causante de la formacin de races en cabellera (hairy roots); A. rubi productora de pequeas agallas y A. radiobacter especie no virulenta. El conocimiento de la capacidad de Agrobacterium para transferir genes se remonta a 1977 cuando Nester Gordon y Dell Chilton demostraron que los genes de un plsmido de Agrobacterium tumefaciens, fueron insertados en forma eficiente en el ADN de clulas de una planta y causaron el crecimiento incontrolado de clulas. El plsmido con estas caractersticas fue denominado Plsmido Ti o inductor de tumores.
Un poco de historia
El primer aparato para la transformacin por biolstica empleado consista en una pistola con carga explosiva y micropartculas de tungsteno, de all su nombre, pistola de genes. Posteriormente se reemplazo la carga explosiva por gas helio presurizado y se empez a usar micropartculas de oro.
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C A T G G C A A C T A A 1
G T A C C G T T G A T T
C T C G T C T A G A C C 2
G A G C A G A T C T G G
G C A A T G C C A G T A 3
C G T T A C G G T C A T
C T G G T C T A G A G C 4
G A C C A G A T C T C G
G C T A A G C C G T A A 5
C G A T T C G G C A T T
A T C G T A T T C A C G 6
T A G C A T A A G T G C
C T G G T C T A G A G C 7
G A C C A G A T C T C G
G C T A A G C C G T A A 8
C G A T T C G G C A T T
A T C G T A T T C A C G 9
T A G C A T A A G T G C
Genoma vegetal
A T A A G C G A T T C G C C 1
T A T T C G C T A A G C G G
C T A C G C G A T C C A G C 2
G A T G C G C T A G G T C G
A G G G T C T A G A T A A A 3
T C C C A G A T C T A T T T
G A A T C C A T G G T A T A 4
C T T A G G T A C C A T A T
C T A C G C G A T C C T G C 5
G A T G C G C T A G G A C G
C T A C G C G A T C C A G C 6
G A T G C G C T A G G T C G
C C T G G T C T A G A C T C G A G
G G A C C A G A T C T G A G C T C
T T C G A A G G C C
A A G C T T C C G G
C C T A G G C T T A A G A A C G
G G A T C C G A A T T C T T G C
Enzima 1
Enzima 2
Enzima 3
Enzima 4
Enzima 5
Enzima 6
G G G C C C
C C C G G G
Enzima 7
Enzima 8
Enzima 9
Plsmido
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Veamos como trabaja en forma natural Agrobacterium tumefaciens el cual ha sido el ms empleado en los procesos de transformacin y es considerado como el ingeniero gentico por naturaleza. Transformacin de clulas vegetales en condiciones naturales Durante el proceso de infeccin de Agrobacterium las clulas de la plantas liberan compuestos fenlicos que interactan con algunas protenas codificadas en los genes de virulencia, VIR, que se encuentran incluidos en el plsmido Ti y que inducen a la bacteria a unirse a la pared de la clula vegetal. Una vez ocurre esto se activan otros genes VIR que hacen que una cadena sencilla de ADN del plsmido Ti sea liberada. Este ADN se conoce como ADN de transferencia, T-ADN, nica secuencia que es transferida a la clula vegetal adyacente donde es integrada en el genoma de la planta. El T-ADN durante su transferencia est protegido por protenas especializadas. Una vez integrados dentro del ADN de la planta, los genes presentes en el T-ADN se vuelven activos. Estos genes naturalmente codifican protenas que perturban el balance hormonal normal de la clula, las cuales comienzan a crecer y a dividirse en forma no controlada formando la agalla de la corona. Todas las clulas presenten en esta agalla o callo contienen los genes del T-ADN y estos son heredados establemente durante los procesos de divisin.
Agrobacterium
Plsmido Ti
Cromosoma bacteriano
Recuerde que Las enzimas de restriccin son usadas para cortar segmentos de ADN y las ligasas para unir segmentos. Este plsmido desarmado es luego transferido a Agrobacterium tumefaciens. Luego se toma el explante, por lo general segmentos de hoja, donde se produce una herida. Inmediatamente despus el tejido vegetal se pone en contacto con la bacteria que tiene la nueva construccin gentica (Agrobacterium tumefaciens) y estas se unen a las clulas vegetales y transfieren T-ADN de acuerdo al proceso natural ya descrito. As, se logra transferir genes de inters al genoma de la clula vegetal, provocando as la transformacin.
Uso de Agrobacterium tumefaciens en procesos de transformacin gentica de plantas El mecanismo natural de modificacin gentica de Agrobacterium tumefaciens puede ser usado para introducir cualquier gen dentro de una clula vegetal. Esto es posible debido que nicamente una pequea parte del T-DNA es requerido para el proceso de transferencia. Esta parte es un corta regin de aproximadamente 25 pares de bases de los extremos del T-DNA. Cualquier secuencia entre estos extremos ser transferida dentro del ADN de la clula vegetal husped.
Estas caractersticas permitieron el desarrollo de plsmidos que contienen los extremos derecho e izquierdo del T-DNA, pero ninguno de los genes entre estos extremos. En reemplazo de estos genes se inserta el transgen con las caractersticas de inters. AdicionalIdeas para discutir: mente los genes VIR Por qu cree que es importante para Agrobacterium tumefaciens transferir genes a una planta? son removidos para evitar la aparicin de Ideas para el docente: sntomas indeseables, Para alimentarse Agrobacterium tumefaciens necesita ciertos azcares y aminocidos derivados es decir, que el denominados opinas. Los genes que codifican estas sustancias se encuentran en el T-ADN del plsmido es desarmado. plsmido Ti. De este modo al transferir estos genes la bacteria logra que las clulas de la agalla
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La reaccin se visualiza por la aparicin del color azul que toman los tejidos.
1. Denaturacin
3. Extensin de la cadena
Ciclo 1
Ciclo 2
Ciclo 3
Independiente del mtodo de transformacin empleado es necesario realizar un proceso de seleccin de las clulas que han sido eficientemente transformadas. Esto permite ahorrar tiempo ya que no es necesario regenerar la planta completa para determinar si hubo o no transformacin. El proceso de seleccin se realiza de acuerdo con el gen marcador de seleccin empleado. Para ello se cultivan las clulas o tejidos transformados en medios de cultivos que presente el agente marcador, por ejemplo: el herbicida, el azcar no metabolizable o el antibitico. Las clulas capaces de crecer en estos medio son las transformadas y sern las seleccionadas para seguir el proceso de regeneracin. Adicionalmente es posible emplear tcnicas moleculares para la deteccin de la transformacin. Entre ellas: Southern blot: Es una tcnica que permite detectar el gen que ha sido insertado. El Southern blot requiere que el ADN sea extrado, cortado con enzimas de restriccin y sometido a electroforesis. Los productos de la electroforesis son transferidos a una membrana de nitrocelulosa e hibridizados con la sonda radioactiva con una secuencia de ADN conocida y marcada con un istopo radioactivo como 32P. Las sondas radioactivas que se hibridizan por complementariedad con la nueva secuencia insertada, confirman que la secuencia est presente en el tejido transformado. La PCR: Reaccin en Cadena de la Polimerasa. Es una tcnica que emplea los principios de la replicacin del ADN en un sistema in vitro. A partir de una cadena de ADN molde se pueden producir muchas molculas idnticas, lo que se conoce como amplificacin. La PCR acta como un proceso de fotocopiado. Para que esto se lleve a cabo, la reaccin exige que estn presentes en la solucin los siguientes elementos:
Molde de ADN o fragmentos. Mg2 el cual es indispensable para la actividad de la enzima. Nucletidos A, T, C y G (dNTP). Primer o iniciador que reconoce su secuencia complementaria para que se lleve a cabo el proceso. Taq polimerasa. Es la enzima responsable de copiar la cadena, extenderla y trabaja a altas temperaturas. Agua El proceso ocurre de la siguiente manera: a. Denaturacin del ADN: Para que las cadenas sencillas de la doble hlice sean copiadas es necesario separarlas. A temperaturas de 90 C la doble hlice se separa y cada hebra libre puede ser copiada. b. Anillamiento: Es la temperatura a la cual el primer se une a la cadena molde. Se emplean temperaturas entre 35-60 C condicin que permite que el primer quede unido de manera estable a la cadena de ADN c. Extensin: Una vez el primer se ha unido al molde, la Taq polimerasa empieza a unir los dNTP a la cadena de manera continua. As ocurre el crecimiento de la cadena para que quede sintetizada de manera completa.
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La reaccin se lleva a cabo durante varios ciclos (entre 35-45 C) en un equipo llamado termociclador. Los productos de amplificacin se corren en una electroforesis y por diferencia en peso molecular con los otros fragmentos se pueden identificar aquellos que contienen el gen. Inmunodeteccin: En este sistema se detecta la protena que es codificada por el gen de inters. Es una reaccin antgeno-anticuerpo donde el tejido es macerado y puesto en contacto con una solucin salina. Se introduce en la solucin una cinta indicadora que contiene el antgeno y si la reaccin es positiva muestra la aparicin de dos bandas. Los tejidos no transformados muestran slo una banda
6. REGENERACIN
Por ltimo, los explantes que han sido transformados, son llevados a un programa de regeneracin, utilizando las tcnicas de cultivo de tejidos in vitro que garanticen la expresin contina del gen forneo y de los dems genes constitutivos de la planta. El proceso de regeneracin mediante las tcnicas de cultivo de tejidos in vitro sigue el mismo procedimiento presentado en la Bio-Aventura 2.
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De la aplicacin de las herramientas biotecnolgicas han resultado productos con diferentes caractersticas, analicemos en que consisten algunos de sus principios de transformacin: Resistencia a insectos: El gen que confiere la resistencia a insectos empleado actualmente proviene de una bacteria natural del suelo, llamada Bacillus thuringiensis, que sintetiza una protena denominada Cry y de las cuales se conocen cerca de 20 tipos diferentes. Cuando el gen de la bacteria ha sido transferido a la planta, sta adquiere la caracterstica de resistencia al ataque del insecto. Esto se manifiesta as: El insecto que ataca la planta consume sus hojas y por la accin de la protena Cry, el intestino del insecto de destruye causndole la muerte. Este efecto es especfico, solo ataca ciertas familias de insectos. En el hombre no causa este tipo de daos debido a que en su intestino no existen los receptores de membrana para esta protena. Adicionalmente, la protena Cry solo acta en medios alcalinos como el del intestino del insecto y no en cidos como en el caso del hombre. Las plantas transformaads con genes Cry de Bacillus thuringiensis se conocen como plantas Bt.
cido aminociclopropano-1-carboxilico. Esta enzima participa en una de las etapas de la sntesis de etileno. Otra alternativa empleada es la introduccin de un gen que codifica para la enzima ACC deaminasa, la cual interfiere con la produccin de etileno. Este gen se deriva de una bacteria del suelo Pseudomona chlororaphis .
Tolerancia a herbicidas: Los herbicidas son sustancias qumicas que tienen la capacidad de inhibir procesos esenciales en las plantas como la fotosntesis o la biosntesis de aminocidos de cadenas ramificadas. Con el empleo de estas tecnologas es posible desactivar o reemplazar la secuencia de susceptibilidad por otra que confiera resistencia para que permita la planta o cultivo resista la aplicacin del herbicida.
Resistencia a condiciones ambientales extremas La resistencia a condiciones extremas permite obtener cultivos capaces de desarrollarse en ambientes desrticos, con alta concentraciones de sal, a bajas o altas temperaturas, entre otros. Veamos cmo ejemplo el desarrollo de cultivos resistentes a altas concentraciones de sal. Las plantas contienen compartimentos denominados vacuolas en las cuales el exceso de sal es depositado para que no afecte el funcionamiento del resto de la clula. Para lograr que las clulas depositen la sal en las vacuolas se han insertado genes que codifican para la protena vacuolar Na+/H+ antiport la cual tiene la capacidad de bombear la sal de las principales partes de la clula a la vacuola.
Maduracin retardada: La maduracin de la frutas es un proceso fisiolgico y molecular complejo que resulta en el ablandamiento de las paredes celulares y que afecta el color, sabor y el aroma. Este proceso es inducido por la produccin de una hormona vegetal, el etileno. La biotecnologa ha ofrecido una alternativa para retrazar la maduracin. La modificacin consiste en interferir en la produccin de etileno, de este modo las frutas podrn permanecer ms tiempo en la planta hasta lograr el sabor caracterstico y no tendrn que ser cosechadas antes de tiempo. El bloqueo de la produccin de etileno se ha logrado mediante la tecnologa antisentido que disminuye la produccin de la enzima sintetasa
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Resistencia a virus: Para muchas especies no se han encontrado germoplasmas disponibles para obtener por cruzamiento plantas resistentes a virus. Puesto que algunos virus no han sido caracterizados a nivel molecular, se han desarrollado otras alternativas como la proteccin cruzada en la cual la infeccin de una planta con una cepa suave provoca que la planta se vuelva resistente a una posterior infeccin con una cepa severa. Ejemplos de esta aplicacin se han reportado para el virus de la tristeza de los ctricos, mosaico del pepino, mancha anular de la papaya y del mosaico del tabaco. Para otros virus, se ha encontrado que existen genes que codifican para la protena de la cpside, los cuales son insertados mediante mtodos de ingeniera gentica en las plantas donde expresan altos niveles de la protena y confieren la resistencia. Mejoramiento nutricional Una de las caractersticas en la cuales se ha venido trabajando es en el aumento del contenido de vitamina A en ciertos cultivos, como es arroz que en condiciones naturales no la produce. La deficiencia en Vitamina A causa graves problema de ceguera en nios, por lo que se busca aumentar su contenido en el arroz mediante la insercin de unos genes involucrados en la sntesis de un precursor de dicha vitamina, el caroteno. El precursor se expresa en la semilla de la planta que es finalmente la parte que se consume. Para lograr este desarrollo se modific la ruta de la sntesis del caroteno, insertando dos genes procedente del Narcissus pseudonarcissus y uno de una bacteria, Erwinia uredovora.
Repaso de conceptos clave: Las Plantas genticamente modificadas, se obtienen mediante el uso de tecnologa de ADN recombinante. La ingeniera gentica permite modificar, introducir o eliminar genes. El proceso de transferencia de genes se puede realizar a travs de la biobalstica o de Agrobacterium tumefaciens Los procesos de transformacin gentica renen una serie de avances cientficos logrados a lo largo de la historia del hombre.
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Preguntas: Qu tipos de elementos se pueden encontrar en la solucin una vez se rompe la clula vegetal? Cul es la funcin del detergente y el ablanda carne en el proceso de extraccin del ADN? Por qu el ADN se disuelve en soluciones con iones de sales? Cree usted que el producto filamentoso obtenido se encuentra puro? Es decir, es solo ADN?
BIBLIOGRAFA Sambrook, J. & Rusell, D.W. 2001. Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Volume 1. Cold, Spring Harbor, New York. PAGINAS WEB CONSULTADAS Proyecto de divulgacin cientfica infantil. Disponible en: http://www.ciencia-activa.org/experimento2.htm Actividades de laboratorio del Cuaderno 18 de Por qu Biotecnologa? Disponible en: http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacin/cuaderno/ ec_18_act.asp
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OBJETIVOS
1. Dar conocer los aspectos relacionados con la seguridad y evaluacin de riesgo de los organismos genticamente modificados 2. Reconocer las medidas regulatorias implementadas a nivel nacional para garantizar el uso seguro de organismos genticamente modificados 3. Identificar los potenciales riesgos y beneficios del uso de organismos genticamente modificados
DINMICA
SECUENCIA
Investigacin - Regulacin - Evaluacin de riesgo - Liberacin Comercial
Exploracin de Preconceptos
Elabore un mapa conceptual alrededor de las plantas genticamente modificadas con relacin a lo que usted considera que se debe evaluar y regular. Seale igualmente cuales beneficios aportara el uso de la tecnologa. Realice una presentacin de su mapa conceptual al grupo.
Materiales:
CONTENIDOS
1. 2. 3. 4. 5. 6. Bioseguridad Evaluacin de riesgo para la salud Evaluacin de riesgo para ambiente y la biodiversidad Marco regulatorio Potenciales riesgos y beneficios de los OGM Futuro cercano
Los sistemas de introduccin de la variabilidad gentica tanto convencionales (hibridizacin o mutagnesis), como los de ingeniera gentica pueden ocasionar cambios en el genoma
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Un poco de historia
La bioseguridad naci con la ingeniera gentica. Los cientficos que trabajaban en el desarrollo de productos de la biotecnologa moderna a principio de la dcada de los 70's comprendieron que, si bien las nuevas tcnicas ofrecan enormes potencialidades, tambin exista el temor sobre los eventuales riesgo de su aplicacin. Debido a estos, los cientficos decidieron convocar a una reunin que tuvo lugar en Asilomar, California, en 1975. El propsito fue discutir sobre los mecanismos necesarios para mantener bajo control el potencial de la ingeniera gentica. Dado que no se tena suficiente conocimiento, la comunidad cientfica, en un acto de responsabilidad frente a la sociedad, propuso unilateralmente una moratoria al uso de la ingeniera gentica, mientras se generaba el conocimiento suficiente para su aplicacin segura. Pocos aos ms tarde, en la segunda convencin realizada tambin en Asilomar, los cientficos, despus de generar ms conocimiento sobre la ingeniera gentica acordaron levantar la moratoria y, establecer reglas claras para continuar la investigacin en este campo. Ya no era necesario prohibir la investigacin, pues se tena informacin suficiente para controlar el riesgo. La bioseguridad haba nacido. De esta manera a principio de la dcada de los 80's se elaboraron las primeras normas para llevar a cabo investigacin con OGM. Las regulaciones de entonces se enfocaron principalmente en dos aspectos: Proteger a los investigadores que trabajaban con este tipo de materiales. Asegurar que los OGM permanecieran confinados dentro de los laboratorios en tanto no se tuviera evidencia suficiente para su liberacin segura. As, las primeras reglas establecen los niveles de seguridad que deben tener los laboratorios para evitar accidentales durante el uso de organismos y material vivo. Actualmente, la necesidad de conocimientos se centra bsicamente en los aspectos de evaluacin de riesgo de los cultivos OGM, para la salud, el ambiente y la biodiversidad, en los casos de aplicacin de la ingeniera gentica a la agricultura. De acuerdo con los avances en el conocimiento y aplicacin de la ingeniera gentica el concepto de bioseguridad se ha ampliado. Hoy se entiende por bioseguridad el conjunto de conocimientos que facilitan la evaluacin de riesgo, as como la legislacin y regulacin necesarias para autorizar el uso seguro de procesos biotecnolgicos y productos GM.
vegetal que den como resultado alteraciones no intencionales en las caractersticas de los individuos. Se considera que los procesos de transgnesis no presentan nuevas categoras de riesgos comparados con los procesos convencionales de mejoramiento de los cultivos, sin embargo, los caracteres especficos introducidos son evaluados cuidadosamente. La principal herramienta para esta evaluacin es la evidencia cientfica tanto en el laboratorio como en el campo que permite evaluar los riesgos potenciales y los beneficios, resultado del uso de los OGM en mbitos como el de la salud y el medio ambiente. Como consecuencia de esta necesidad surge La Bioseguridad, entendida como el conjunto de medidas y acciones requeridas para minimizar los potenciales riesgos que puedan ocurrir, cuando se utilizan Organismos Vivos Modificados (OVM), derivados y productos que los contengan. La bioseguridad busca resguardar los intereses pblicos y privados, permitiendo solamente la aplicacin responsable de la biotecnologa, cuidando mantener un balance entre la proteccin de la salud, el ambiente y la biodiversidad, facilitando el comercio y la transferencia de tecnologas, mediante el establecimiento de normas. Durante la evaluacin de riesgo a la que se someten los OGM se tienen en cuenta los riesgos para el ambiente y la salud humana y animal.
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Estudios de Bioseguridad
Para establecer la bioseguridad de cualquier producto GM se llevan a cabo evaluaciones de riesgo para la salud, para el ambiente y la biodiversidad. Estas evaluaciones de riesgo se llevan a cabo teniendo en cuenta dos criterios esenciales: Evaluacin CASO por CASO y PASO por PASO: Teniendo siempre en cuenta las particularidades de cada regin donde se vaya a utilizar el OGM. Fundamentos cientficos slidos: Todo producto genticamente modificado, mediante ingeniera gentica, es sometido a numerosos anlisis que permiten determinar su seguridad para el ambiente y para la salud humana y animal.
La liberacin de un producto genticamente modificado solo es permitida cuando se demuestra que el producto alimenticio y las protenas nuevas que contiene no presentan riesgo para la salud (no son txicas, ni alergnicas) humano o animal.
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ICA
SAC
ANUC
La regulacin para la introduccin, transporte, uso, manejo, produccin, liberacin y comercializacin de organismos genticamente modificados de uso agrcola en Colombia esta a cargo del Instituto Colombiano Agropecuario, ICA. Esta regulacin se basa en la Resolucin ICA N 03492 cuyo texto fue consultado con los distintos actores de la sociedad involucrados en el tema, gremios, universidades, ONGs, grupos ambientales, consumidores y otros. Para la toma de decisiones el ICA recibe asesoramiento y apoyo del Consejo Tcnico Nacional - CTN, creado mediante acuerdo 0013 de 1998, cuya expedicin fue subrogada por el acuerdo 00002 de 2002.
En nuestro pas, el cultivo de una nueva variedad obtenida por transgnesis es analizado independiente de la modificacin gentica que se ha realizado y de la variedad que incorpora la nueva caracterstica. La evaluacin de riesgo en materia de impacto al ambiente y la biodiversidad ha sido objeto de una negociacin internacional, debido a que se reconoci que, tanto por el comercio internacional como por su migracin, existe un flujo transfronterizo de OGM que requera reglas de bioseguridad especficas. Para ello se estableci El Protocolo de Cartagena sobre Bioseguridad, instrumento internacional jurdicamente vinculante, que regula los organismos vivos modificados, OVM, producto de la biotecnologa moderna. Este acuerdo promueve la seguridad, estableciendo normas y procedimientos que permitan la transferencia segura, manipulacin y uso de OVM, enfocado especficamente al movimiento transfronterizo. Su nombre completo es Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la BiotecSOLICITUD OGM: PROCEDIMIENTO nologa del Convenio ICA autoriza o niega mediante resolucin motivada de Diversidad Biolgica. CTN recomienda Ensayos de campo Estudios de Bioseguridad Consejo Tcnico Nacional de Bioseguridad - CTN Elaboracin Informe Evaluacin de riesgos S Cumple con los requisitos Solicitud Registro CONCEPTO MINISTERIO DE PROTECCIN SOCIAL Caso por caso Productos GM cultivados en Colombia: Clavel Azul Algodn Bt Algodn resistente a herbicidas.
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Para el medio ambiente El incremento de la productividad que se puede alcanzar con la introduccin de OGM, podra ahorrar a los agricultores el uso de tierras marginales y de aquellas que no tienen vocacin agrcola. Reduccin de la aplicacin de sustancias qumicas para proteger los cultivos del ataque de plagas. Rehabilitacin de tierras con limitantes para la produccin agrcola. Extensas superficies del mundo se han salinizado debido a la utilizacin de prcticas no sostenibles. A travs de la modificacin gentica ser posible producir variedades tolerantes a suelos salinos, al estrs hdrico y las heladas. Reduccin en la contaminacin de aguas y suelos. Disminucin de la presin sobre ecosistemas naturales. Reduccin de residuos de fsforo y nitrgeno en lagos y corrientes de agua.
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Para la salud humana Disponibilidad de alimentos con mejor calidad nutricional o industrial. Prevencin de enfermedades, es el caso del arroz con mayores contenidos de vitamina A cuya deficiencia produce ceguera. Disminucin del contenido de grasas e incremento de los contenidos de slidos del producto de tal manera que durante el proceso de fritura, se absorben menos grasas. Eliminacin de protenas alergnicas en alimentos. Alimentos con menores niveles de cidos insaturados. As, la biotecnologa agrcola y los productos que desarrolle no deben ser juzgados exclusivamente por los riesgos o beneficios de la tecnologa. Todos los eventos deben ser estudiados caso por caso y paso por paso. El balance entre los riesgos y beneficios que aporte la tecnologa y sus productos deben ser tenidos en cuenta y ante todo valorar el costo del no uso y aprovechamiento de las nuevas tecnologas de una manera tica y ante todo objetiva.
Futuro cercano
La biotecnologa no se detiene aqu, en el futuro inmediato la ciencia aprovechar los desarrollos de la genmica estructural (identificacin y localizacin de genes en el ADN), para entrar en la era de la genmica funcional y llenar la brecha entre el conocimiento de las secuencias de un gen y su funcin. De este modo se expandir el alcance de la investigacin sobre el estudio de genes individuales al estudio de todos los genes de una clula, al mismo tiempo y en un momento determinado. Paralelamente se estn aprovechando los avances en la protemica es decir el estudio de las protenas, su funcin y regulacin dentro de un sistema, as como de la metabolmica donde los niveles de complejidad son mayores, y cuyo objeto es intervenir a nivel de rutas metablicas que conduzcan al desarrollo de procesos ms eficientes para la clula.
La biotecnologa es una herramienta tecnolgica dinmica, guiada por el avance en el conocimiento cientfico.
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Glosario
ADN: Abreviacin de cido desoxiribonuclico. Cadena constituida por bases nitrogenas, grupos fosfatos y un azcar desoxirribosa y algunos organismos forma una hlice de doble cadena. Agrobacterium: Gnero de bacterias del suelo que incluye especies patognicas responsables de la aparicin de sntomas tumorales o crecimiento excesivo de races. Alelo: Diferentes formas de un gen. En una clula diploide hay dos formas para cada gen. Dentro de una poblacin puede haber muchos alelos para un gen. Los alelos pueden ser dominantes o recesivos. En los heterocigotos con alelos co-dominantes, ambos se expresan. CDB: Abreviatura para Convenio de Diversidad Biolgica. Antera: Parte superior del estambre que contiene los sacos polnicos con el polen. Son usadas para obtencin de haploidesa partir de micrsporas via andrognesis. Anticodon: Tripleta de nucletidos ARNt que corresponden a codones complementarios en una molcula de ARNm durante la traduccin. Apomixis: Produccin de un embrin en ausencia de meiosis. Las plantas apomcticas producen semillas asexuales derivadas solamente de tejido materno. Codn: uno de los grupos de tres nucletidos conseARN: Abreviacin de cido ribonuclico. Es un polmero de cidos orgnicos formado por fosfato, un azcar la ribosa y nucletidos Adenina, Guanina, Citosina y Uracilo. Existen 3 tipos: ARNm, portador de la informacin gentica; ARNt, transporta los aminocidos y ARNr, constituye los ribosomas que participan en la traduccin. Auttrofo: Organismo capaz de alimentarse a si mismo utilizando CO2 o carbonatos como fuentes de carbono y obteniendo energa de fuentes exgenas o por oxidacin de elementos inorgnicos o compuestos como hierro, sulfuros, hidrgeno, amonio o nitritos. Auxina: Tipo de regulador de crecimiento en plantas, estimulador de la divisin celular, elongacin, dominancia apical, formacin de races, y floracin. Biolstica: Tcnica empleada para introducir ADN forneo mediante el uso de microproyectiles. Ha sido usada para transformar animales, plantas, hongos y hasta mitocondrias. Bioremediacin: Proceso que usa organismos vivos para remover contaminantes o sustancias indeseadas presentes en el agua o en el suelo. cutivos en el ARNm el cual representa la unidad de codificacin gentica y especifica un aminocido en particular. Cada codn es reconocido por un ARNt portador de un aminocido especfico, el cual es incorporado en una cadena polipeptdica durante la sntesis de protenas. Codn de iniciacin: Es aquel que especifica el primer aminocido de la cadena polipeptdica y en el cual el ribosoma inicia el proceso de traduccin. En bacterias es comn el codn AUG que corresponde a la n-formilmetionina o GUG que corresponde al aminocido valina. En eucariotes la sntesis de protenas siempre se inicia con el codn AUG traducido como metionina. Codn de terminacin: Es un set de tres nucletidos para los cuales no hay un ARNt que corresponda. En este punto se detiene la sntesis de protenas y la cadena de poliptidos es liberada. Los codones de terminacin conocidos son: UAA, UAG y UGA. Codex Alimentarius: Organismo regulatorio miembro de la FAO responsable de la definicin de standares internacionales de alimentos. Citoesqueleto: compuesto por estructuras filamentosas llamadas microtbulos, son polmeros de protena de forma cilndrica que dan soporte a la clula y participan en la divisin celular cuando las clulas hijas se separan. Citoquininas: Regulador de crecimiento vegetal, responsable de la induccin de la divisin celular y la diferenciacin celular. En cultivo de tejidos estn asociadas a la formacin de brotes. Son derivados de adenina. Biotecnologa: Toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgicos, organismos vivos o sus derivados para producir o modificar productos o procesos de uso especfico. Bioseguridad: Se refiere a las normas y procedimientos necesarios con el fin de evitar o manejar el riesgo que pudieran ocasionar los OGM a la salud humana y al medio ambiente. Cariotipo: representacin de los cromosomas de un individuo en metafase. En este aparecen organizados por tamao y posicin del centrmero.
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Clon: Grupo de clulas o individuos genticamente idnticos como resultado de la reproduccin asexual o vegetativa. La clonacin tambin puede referirse a la insercin de un fragmento de ADN en un vector o cromosoma husped. Crioconservacin: Conservacin de germoplasma en estado dormante por almacenamiento a bajas temperaturas, a menudo en nitrgeno lquido. Cromosoma: cuerpo ncleo proteico observable al microscopio durante la divisin celular. Son los portadores de los genes. Cromatina: Sustancia que compone los cromosomas de las clulas eucariotas. Es un complejo de ADN, histonas y pequeas cantidades de ARN. Crown gall: Conocida tambin como agalla de corona, es un crecimiento tumoral que aparece en el cuello de la planta, producto de la infeccin de Agrobacterium tumefaciens. La agalla es producida por la introduccin del Plsmido Ti a la clula vegetal. Cry: Clase de protena cristalina producida por Bacillus thuringensis , ingenierizada e introducida a clulas vegetales para conferir resistencia al ataque de insectos. Estas protenas son txicas a ciertas clases de insectos, pero han sido reportadas como inocuas para mamferos e insectos no blancos. Sinnimo: delta endotoxinas. Cultivo de tejidos: Cultivo in vitro de clulas, tejidos u rganos que se desarrollan en un medio nutritivo bajo condiciones estriles. De-diferenciacin: Regreso al estado no diferenciado. Este proceso ocurre cuando se produce una herida en la planta o en cultivo de tejidos, donde clulas de tejidos que cumplen una funcin especfica, se convierten en no especializados comprometindose en un nuevo programa morfogentico. Desinfectacin: Eliminacin de agentes contaminantes, no patgenos de la superficie de los tejidos que van a ser introducidos a in vitro. Desinfeccin: Eliminacin de agentes infecciosos de la superficie de los tejidos que van a ser introducidos a in vitro. Diferenciacin: Proceso en el cual clulas no especializadas dan origen a estructuras y funciones especficas. Esto ocurre durante la etapa de desarrollo y es irreversible en condiciones in vivo en organismos superiores.
Diploide: clula u organismo que contiene dos juegos completos de cromosoma, que en la mayora de los casos uno proviene del padre y otro de la madre. Los tejidos somticos de plantas y animales son comnmente diploides, mientras que los gametos son haploides. Dormancia: Perodo de vida de un organismo en el cual los procesos metablicos disminuyen o cesan completamente. Es usual encontrar altos perodos de latencia en semillas de cereales y forestales. Electroporacin: Induccin de poros transitorios a nivel de la membrana plasmtica en bacterias o protoplastos, al aplicar descargas de electricidad. A travs de estos poros es posible introducir ADN exgeno a la clula. Es un mtodo empelado en la transformacin de bacterias. Embriognesis: Desarrollo de un embrin. Puede ser de origen sexual o a partir de tejido y se denomina embriognesis somtica. Endonucleasa: Enzima capaz de romper enlaces fosfodiester dentro de la cadena de ADN. Enhancer: Sustancia o secuencia que incrementa la actividad qumica o fisiolgica en un proceso. Las secuencias encontradas en eucariotes o en algunos virus incrementan la transcripcin de un gen. Se encuentran ubicadas a varios pares de bases del gen que se expresa. En algunos casos pueden activar la transcripcin de un gen que carece de promotor. Enzimas: Protenas que catalizan procesos metablicos y actan a muy bajas concentraciones. Se clasifican de acuerdo con el tipo de reaccin que catalizan: oxidoreeductasas, transferasas, hidrolasas, isomerasas, liasas y ligasas. Enzima de restriccin: Son endonucleasas que cortan el ADN en sitios especficos. Existen tres clases I: que tiene funcin de restriccin y mutilacin; II: corta dentro o cerca de una secuencia palindrmica, es la ms usada en biologa molecular y III: que tiene funciones de restriccin y mutilacin y requiere ATP. Eucatiote: Clula cuyo material gentico se encuentra rodeado por una membrana y constituye un verdadero ncleo. Exon: Segmento de un gen de eucariotes que es transcrito a ARNm. Finalmente expresa una protena. Explante: Porcin de una planta o tejido vegetal que ha sido removido bajo condiciones aspticas para ser cultivado en medios nutritivos
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Fenotipo: Apariencia visible de un individuo con respecto a una o ms caractersticas Fitoreguladores: Conocidos tambin como hormonas vegetales o reguladores de crecimiento, son sustancias qumicas que actan en bajas concentraciones, encargadas de promover, inhibir o modificar procesos biolgicos. En plantas las ms conocidas son las auxinas, cito quininas, giberalinas, etileno y cido abscico. Flujo de genes: Dispersin de genes provenientes de una especie cultivada a otra, usualmente relacionada, que en consecuencia puede provocar cambios en la frecuencia allica. Fragmentos de Okasaki: Fragmentos que aparecen en la replicacin del ADN en la hebra retardada. Los fragmentos son finalmente unidos por la accin del la ADN ligasa. Friable: Trmino empleado para definir un callo blando, que pueden ser cortados fcilmente y dispersados como aglomerados celulares o clulas en suspensin. Gen: unidad de la herencia transmitida de generacin en generacin durante la reproduccin sexual y asexual. Es una secuencia de nucletidos que codifica para un ARN o para una protena. Gen GUS: Gen de E. coli que codifica para la sntesis de la beta-glucoronidasa. Se utiliza como gen reportero, por el color azul que aparece en los tejidos transformados. Genoma: Juego completo de cromosomas heredados como unidad de cada uno de los parentales. Este juego comprende genes y secuencias no codificadoras. Genotipo: Constitucin gentica de un organismo. Es la constitucin allica a un locus particular ej: Aa o aa. Es la suma del efecto de todos los loci que contribuyen a la expresin de una caracterstica. Germoplasma: Individuo o grupo de individuos o clon que representan un genotipo, variedad, especie o cultivo y que es mantenido como una coleccin in vitro o in situ. Giberelina: Regulador de crecimiento que participa en la elongacin, floracin, forma y tamao de los frutos, germinacin, vernalizacin y otros procesos fisiolgicos. Haploide: Clula u organismo que contiene uno de cada par de cromosoma homlogo encontrados en una clula diploide. Las clulas sexuales o gametos son haploides. Hetertrofo: Organismo incapaz de alimentarse a si mismo, utilizando CO2 o carbonatos como fuentes de carbono y
obteniendo energa de fuentes exgenas o por oxidacin de elementos inorgnicos o compuestos como hierro, sulfuros, hidrgeno, amonio o nitritos. Histonas: Grupo de protenas solubles ricas en aminocidos de carcter bsico, asociadas al ADN de clulas animales y vegetales. Ingeniera gentica: modificacin del genoma y del fenotipo mediante transgnesis. Intrn: Segmento de un gen de eucariotes que no codifica para una protena. Los intrones son removidos cuando el ADN se transcribe a ARNm, en un proceso llamado splicing . In vitro: Proceso que se lleva a cabo fuera del organismo o en un medio artificial. Se aplica al cultivo de diferentes explantes en recipientes de vidrio o plstico. In situ: Proceso que se lleva a cabo en un medio natural o en el lugar donde originalmente se encuentra el individuo. Locus: Sitio que ocupa un gen en un cromosoma. Medio de cultivo: Cualquier sistema nutritivo para el cultivo de clulas vegetales, tejidos u rganos que contiene sales minerales, fuentes de carbono, vitaminas y en algunos casos reguladores de crecimiento. Meristemo: Tejido vegetal indiferenciado pero determinado, cuyas clulas son capaces de dividirse y diferenciarse en tejidos especializados como races o brotes. Microinyeccin: Introduccin de pequeas cantidades de ADN a clulas o tejidos con la ayuda de una aguja microscpica. Micropropagacin: Multiplicacin in vitro y/o regeneracin de plantas completas en condiciones de asepsia. Se conoce tambin como propagacin clonal. Nucleosoma: Sub-unidades de cromatina compuestas por un octmero de histonas y sobre los cuales se enrolla el ADN. Nucletido: nucleosido con uno o ms grupos fosfato unidos entre si por enlaces 3-5hidroxilo a un azcar pentosa. Los nucletidos se unen entre si por enlaces fosfodiester. Son: Adenina, Guanina, Citosina y T imina. Opern: Unidad gentica integrada funcionalmente para el control de la expresin gnica en bacterias. El control de la expresin est dado en la regulacin de la transcripcin de los genes estructurales.
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Opinas: Sustancias secretadas por las clulas de la planta como resultado de la infeccin con Agrobacterium y usadas exclusivamente por la bacteria como fuente de carbono para su crecimiento y reproduccin en la planta. Organismo Genticamente Modificado: Conocido tambin como Transgnico, se refiere a un individuo al cual se le ha insertado un transgen en su genoma. Organognesis: Formacin de rganos de novo a partir de callos, meristemos o suspensiones celulares. Cuando no aparece la etapa de callo la organognesis es considerada tambin como micropropagacin. Palindrmico: Segmento de ADN de cadena doble, en el cual el orden de las bases en sentido 5-3 en una cadena, es la misma en la cadena complementaria antiparalela, tambin leda en sentido 5-3. Partenognesis: Produccin de un embrin a partir de un vulo no fertilizado. Plsmido: molcula de ADN extracromosmico, circular y autoreplicable presente en las bacterias. Puede de ser transferido de una clula a otra de la misma especie o a especies diferentes. Los plsmidos son particularmente importantes como vectores en ingeniera gentica. Procariote: Dcese de una clula cuyo material gentico (cromosoma) no se encuentra rodeado por una membrana, sino ubicado en una regin del citoplasma llamado nucleoide. Los procariotes no sufren meiosis y no tienen organelos funcionales como mitocondrias o cloroplastos. Promotor: Corta secuencia de ADN, ubicado corriente arriba de la secuencia codificadora, a la cual se une la ARN polimerasa para iniciar la transcripcin. Propagacin vegetativa: reproduccin que no implica unin de gametos. Se conoce tambin como propagacin asexual o somtica. Es comn en plantas a partir de yemas, segmentos nodales o tubrculos. Protocolo de Cartagena: Conjunto de reglas internacionales con el fin de proteger la diversidad biolgica de los riesgos potenciales que podran aparecer por la liberacin de OGM. Este establece un procedimiento para asegurar que los pases disponen de la informacin necesaria para la toma de decisiones antes de aceptar el ingreso de OGM en sus territorios. Protoplastos: Clulas vegetales desprovistas de pared celular, la cual puede ser removida por mtodos mecnicos (maceracin) o qumicos (enzimas).
Replicacin: Consiste en la duplicacin de la molcula de ADN en presencia de la ADN polimerasa, durante la fase de sntesis (S) del ciclo celular. De As cuando la clula se divida, las dos hijas contendrn la misma cantidad de ADN que la clula madre. Ribosomas: estructura subcelular que consta de 2 subunidades una grande y una pequea. Contiene el sitio para la traduccin de ARN a protena. Silenciamiento: Prdida de la expresin de un gen ya sea debido a una alteracin en la secuencia del ADN o de su regin regulatoria, o por interacciones entre sus transcriptos y otros ARNm presentes en la clula (ARN antisentido). Simbiosis: Asociacin estrecha entre dos organismos donde hay ventajas para ambos o donde ambos reciben un beneficio como resultado de la asociacin. Sincronizacin celular: Cultivo en el cual todas las clulas son detenidas en una fase dentro del ciclo celular al mismo tiempo, para luego entrar en la fase de divisin. Esto se logra mediante la adicin de drogas al medio de cultivo. Suspensin celular: Tipo de cultivo en el cual clulas o agregados de clulas crecen y se multiplican en medio lquido. Tejido: Grupo de clulas de estructura similar que cumplen una funcin especfica. Terapia gnica: Tratamiento utilizado para tratar enfermedades hereditarias por transformacin de un individuo afectado con una copia del tipo silvestre del gen que provoca la enfermedad. Termoterapia: Exposicin de un rgano o tejido a altas temperaturas. Es una tcnica muy empleada para eliminar virus o micoplasmas. Ti : Plsmido inductor de tumor presente en Agrobacterium tumefaciens y responsable de la aparicin de la agalla de corona. En el plsmido se encuentran unas secuencias llamadas oncogenes que codifican para la sntesis de hormonas vegetales. Estos oncogenes son removidos cuando el plsmido es usado en procesos de transgnesis. Totipotencia: Capacidad de una clula o un tejido para regenerar un organismo completo. Traduccin: sntesis de polipptidos en el cual una secuencia de aminocidos es determinada por el ARNm, mediada por el ARNt y transportada por el ARNr.
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Glosario
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Transcipcin: sntesis de ARN a partir de ADN en presencia de ARN polimerasa. Transfeccin: Infeccin de una clula con ADN o ARN viral aislado, que resulta en la produccin de partculas virales intactas. Transformacin: Toma e integracin de un fragmento de ADN en una clula, en la cual el nuevo ADN es el responsable de la adquisicin de una nueva caracterstica. Transgen: Secuencia gentica aislada usada para transformar un organismo. Los transgenes se transmiten de una generacin a otra por procesos de meiosis. Usualmente los transgenes provienen de especies diferentes a la que la receptora.
Transgnesis: introduccin de uno o ms genes proveniente de una clula a otra de la misma especie o de especies diferentes. Transposn: es un elemento de ADN que puede moverse dentro del mismo cromosoma o a otro cromosoma. Variacin somaclonal: Cambios epigenticos o genticos inducidos durante la fase de callo o de clulas vegetales cultivadas in vitro . En algunas ocasiones estos cambios se reflejan en el fenotipo. Vector: llamado tambin transportador, es una pequea molcula de ADN (plsmido, virus, bacteriofago) que se emplea para transferir ADN dentro de una clula. Los vectores poseen sitios de clonacin donde se introduce un ADN forneo.
PGINAS ELECTRNICAS
http://www.agrobio.org http://www.porquebiotecnologa.com.ar http://www.colostate.edu/programs/lifesciences/cultivosTransgenicos/index.html http://www.biotech.wisc.edu/outreach/teachingtools.html http://www.biotech.iastate.edu/educational_resources.html http://www.geo-pie.cornell.edu/ http://ucbiotech.org/indez.html http://vector.cshl.org http://www.eibe.info/ http://www.ncbe.reading.ac.uk/NCBE/PROTOCOLS/PRACBK/menu.html http://aes.ucdavis.edu/outreach/univout/programs/biokit.html http://www.accessexcellence.org http://www.biotechinstitute.org http://biotech.wisc.edu/Education/ http://www.agclassroom.org
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Glosario
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Bibliografa
Mdulo 3
Programa de Educacin en Biotecnologa Agrcola
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Mayores informes: Calle 90 No. 11A - 34 Oficina 409 Telfono: 610 1029 Fax: 610 1247 E-mail: agrobio@agrobio.org Web: www.agrobio.org
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Bibliografa
Se realizaron selecciones por muchas generaciones y as se modific el contenido gentico de las plantas, de forma emprica.
Los cultivares elite Los cultivares elite modernos se desarrollaron modernos se desarrollaron por fitomejoradores para por fitomejoradores para responder a la agricultura responder a la agricultura moderna y al continuo moderna y al continuo crecimiento demogrfico. crecimiento demogrfico.
Media Pgina
Genes Insertados
13/01/2005, 03:33 pm
IDENTIFICACIN DE DE LA LA SECUENCIA SECUENCIA DEL DEL GEN GEN DE DE INTERS INTERS IDENTIFICACIN Identificacin del gen de inters Corte con Enzimas de Restriccin
EcoRI
5 G C A A T T T T A A C G 3 5 5 3 C G
Protena
Trp
Phe
Gly
Ser
ARNm
U G GU U U GG C U C A
EcoRI
3
Extremos pegajosos
5 3 G A A T T C G
ADNc
A C U C G GU U U G G U
C T T A A
Gen 1
Origen
Polylinker
Promotores: inician la
transcripcin. Determinan cuando, dnde, y en qu medida, se obtiene el producto del gen.
ATG
Polilinker
CLONACIN CLONACIN
am p
r
am
Gen de inters
Plsmido Recombinante
cromosoma
Hibridacin con sonda radioactiva para identificar el gen de inters presente visualizndolos mediante rayos X
TRANSFORMACIN TRANSFORMACIN
Tubo de aceleracin de gas
Mtodo 1: Biolstica
Mtodo 2: Agrobacterium
Agrobacterium Este proceso natural es utilizado para transformar in vitro las clulas de las plantas reemplazando los genes no deseados por el de inters (transgen). Para ello se emplean enzimas de restriccin y ligasas. ADN-T Esta secuencia es reemplazada por el transgen
Disco de ruptura
Macrocarrier
Plsmido Ti
Cromosoma bacteriano
T-ADN integrado
Clulas blanco
Agrobacterium rhizogenes
Tipos de Agrobacterium
La reaccin se visualiza por la aparicin del color azul que toman los tejidos.
1. Denaturacin 2. Anillamiento del cebador 3. Extensin de la cadena
Ciclo 1
Ciclo 2
Ciclo 3
REGENERACIN REGENERACIN
13/01/2005, 03:33 pm
am
pr
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
De la aplicacin de la Biotecnologa moderna, como herramienta tecnolgica, han resultado productos con diferentes caractersticas, veamos en que consisten .
PRINCIPIOS DE TRANSFORMACIN:
RESISTENCIA A INSECTOS: El gen ms empleado para conferir esta caracterstica proviene de una bacteria natural del suelo, llamada Bacillus thuringensis, que sintetiza una protena denominada Cry. Cuando el gen de la bacteria ha sido transferido a la planta, sta adquiere la resistencia al ataque de insectos especficos. PARA LOGRAR UNA MADURACIN RETARDADA: La modificacin consiste en interferir (tecnologa antisentido) la produccin de etileno, de este modo las frutas podrn permanecer ms tiempo en la planta hasta lograr el sabor deseado y no tendrn que ser cosecha antes de tiempo.
RESISTENCIA A HERBICIDAS: El empleo de estas tecnologas hace posible desactivar o reemplazar la secuencia de susceptibilidad por otra que confiera resistencia y que permita a la planta o cultivo resistir la aplicacin del herbicida.
RESISTENCIA A CONDICIONES AMBIENTALES EXTREMAS: Permite desarrollar cultivos capaces de progresar en ambientes desrticos, con altas concentraciones de sal, de bajas o altas temperaturas, entre otros. Veamos como ejemplo el desarrollo de cultivos resistentes a altas concentraciones de sal.
RESISTENCIA A VIRUS: El proceso consiste en introducir los genes de la protena de la cpside del virus. Estos genes expresan en la planta altos niveles de la protena y confieren de este modo la resistencia.
MEJORA NUTRICIONAL: Se busca aumentar su contenido de vitamina A en el arroz mediante la insercin de los genes involucrados en la sntesis de un precursor de dicha vitamina, el B caroteno. Este precursor se expresa en la semilla de la planta, parte que es la que se consume.
La Bioseguridad, es entendida como el conjunto de medidas y acciones requeridas para minimizar los potenciales riesgos que puedan ocurrir, cuando se utilizan Organismos Vivos Modificados (OVM), derivados y productos que los contengan. La bioseguridad busca resguardar los intereses pblicos y privados, permitiendo solamente la aplicacin responsable de la biotecnologa, cuidando mantener un balance entre la proteccin de la salud, el ambiente y la biodiversidad, sin entorpecer el comercio y la transferencia de tecnologas, mediante el establecimiento de normas. Durante la evaluacin de riesgo a la que se someten los OGM se tienen en cuenta los riesgos para el ambiente y la salud humana y animal.
CTN
MINISTERIO DE AGRICULTURA ANDI ACOSEMILLAS
Diseo y Produccin: S.C.; Ilustracin: JCN. Publicacin de Agrobio - Bogot, Octubre 2004, Colombia
ICA autoriza o niega mediante resolucin motivada CTN recomienda Ensayos de campo Estudios de Bioseguridad Consejo Tcnico Nacional de Bioseguridad - CTN Elaboracin Informe Evaluacin de riesgo ambiental S Cumple con los requisitos Solicitud Registro CONCEPTO MINISTERIO DE PROTECCIN SOCIAL Caso por caso
ANUC
13/01/2005, 03:33 pm