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FEBRERO 2011 JUNIO 2012

Apicultura sin Fronteras
PERIODICO APICOLA DE DISTRIBUCION MUNDIAL

70
JUNIO 2012

¿Conviene proteger núcleos durante el invierno?
Manejo de las colmenas ante los bajos rindes Los panales NO son todos iguales POLEN, función en La Colmena Paquetes de Abejas Alemania no no Alemania cede a a los los cede transgénicos y y transgénicos la UE UE dice dice que que la si... ¿quien ¿quien si... ganara? ganara?

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APICULTURA SIN FRONTERAS - República Argentina - Edicion Año VI - N° 70 - JUNIO 2012

APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO DE 2012 - Hoja 2

¿Conviene proteger núcleos durante el invierno?
Ante la llegada del invierno los apicultores deben plantearse las características de la alimentación, la temperatura y la ubicación que deben recibir los núcleos de fin de temporada
Los núcleos de fin de temporada se realizan después de la cosecha y su objetivo es aprovechar el gran volumen de abejas de las colmenas, muchas de las cuales se perderían durante el invierno. Estos núcleos, llamados también tardíos, deben ser más fuertes y grandes que los núcleos de principios de temporada. Las pequeñas colonias podrán pasar el invierno en cajones nucleros de buena construcción o en cámaras de cría; en este último caso se colocarán guardapiqueras y "poncho" o partidor con el fin de aislar el espacio ocioso del cajón (igualmente nosotros muchas veces recomendamos el no uso del poncho ya que muchas veces genera demasiada humedad dentro de la colmena y asi pueden proliferar enfermedades como la nosemosis). Algunos reconocidos apicultores de la zona de Bahia Blanca invernan sus colmenas de uno a tres núcleos encima de una colonia fuerte. Además, colocan el techo. Los más experimentados destacan cómo "importantísimo" al hecho de hurgar lo menos posible durante el invierno. Este método, llamado por algunos apicultores como "nucleos superpuestos". Metodo de colmenas superpuestas: Toman una colmena bien fuerte de dos cuerpos (2 alzas) y, al hacer la división,en el alza superior colocan la mitad de los cuadros de cría, tanto abierta como cerrada, más cuadros de miel y polen y una buen número de abejas (a sabiendas que la pecoreadoras van a volver a su lugar de origen o sea al alza inferior en término de uno o dos días). Hay quienes incluso colocan en el alza superior también la reina, para que este núcleo prospere con más rapidez. Acto seguido, dividen las dos alzas con una rejilla excluidora y sobre su marco le incrustan un tejido mosquitero. Una opción aquí es hacer un marco con doble tejido, otra es usar una entretapa con un agujero en el centro y luego colocar un trozo de tejido de cada lado de la entretapa. Esto a fin de que cuando se encuentren las dos reinas no se peleen entre sí. La piquera del núcleo superior, en este caso, es un

aconsejan evitar invernar núcleos cuya población en el mes de mayo sea menor a 4 ó 5 cuadros bien cubiertos con abejas. Alimentación y ubicación de los núcleos La reserva de miel de un núcleo al comienzo de la invernada será de, al menos, dos panales completos. Como los núcleos "tardíos" son colonias que carecen de un número de pecoreadoras suficiente como para recolectar en la próxima primavera una cantidad significativa de néctar, el secreto del crecimiento de los núcleos de fin de temporada en la próxima mielada está en la adecuada alimentación por parte del apicultor durante la primavera. Interrogantes del cómo invernar núcleos Una de las preguntas que suele aparecer es cómo invernar los núcleos sobre las colmenas para aprovechar su calor. Algunos apicultores explican que sacan el techo de la colmena y allí colocan una entretapa de tela mosquitera. Y a continuación, un alza estándar con sólo un agujero, realizado con una mecha de 9 mm (esto sólo de piquera para el núcleo superior). En el alza estándar arman el núcleo y luego
Redaccion: Jose Madonni - Luisa Noy Brisa Gonzalez Apiculturasinfronteras@yahoo.com.ar Colaboracion: Ulises Gonzalez Publicidad: Vanina Gonzalez (ARG) Rodrigo Gonzalez (Todo los paises)

Apicultura sin Fronteras Edicion N- 70 JUNIO 2012

Administracion: Dra. Claudia Fernandez Diseño: RJG Comunicaciones Propiedad intelectual: Registrada Prohibida la reproducción parcial o total de esta publicación sin previa autorización escrita por el responsable de este medio enviada por correo con firma certificada. Ley de propiedad intelectual vigente.
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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO DE 2012 - Hoja 3

pequeño corte del marco de la entretapa (2cm de largo x 5 mm de profundidad) y va ubicado en contra de la piquera original o sea hacia atrás. Nucleros de telgopor Entre los métodos más originales, se encuentran los de aquellos apicultores que invernan sus núcleos de fin de temporada en cajas de telgopor. Utilizan las conservadoras, como en las que vi

enen los medicamentos de las droguerías, y le colocan los cuadros (4, 5 ó 6 según el tamaño) adentro. Otros, le colocan la caja "de sombrero" a los núcleos. Usando la caja de sombrero, según explicaron los apicultores, no se produce humedad y el viento o la helada del invierno no chocan directamente con las paredes del nuclero.

Manejo de las colmenas ante los bajos rindes
El manejo incorrecto de la cámara de cría y la poca atención a los problemas sanitarios, son dos de las causas que repercuten en la merma de producción. Este problema es muy comun cuando el apicultor tuvo campañas pobres o por falta de dinero ya sea para acercarse a las colmenas, alimentarlas o curarlas. El manejo incorrecto de la cámara de cría y la poca atención a los problemas sanitarios, son dos de las causas que repercuten en la merma de producción. Uno de los problemas es el mal manejo en la cámara de cría, nos cuesta mucho reconocer los problemas que tenemos. Después baja la producción y empezamos a buscar culpables, pero la culpa fue nuestra. El problema más grande que tenemos tiene que ver con la sanidad: “Es fundamental tener un manejo integrado de la cámara de cría y establecer programas sanitarios regionales. Como las colonias conviven con todos los patógenos debemos darle vigor para que puedan defenderse naturalmente. Colmenas sanas son las que tienen altas defensas naturales, los patógenos están pero no producen enfermedad. Para tener las colonias vigorosas es fundamental contar con los recursos adecuados de alimentos, tener las reservas suficientes de miel y polen, para evitar que la colonia se debilite y permita el accionar de los patógenos. Además, hay que aplicar correctamente los antibioticos si son necesarios, no aplicarlos de forma brusca porque se pueden dar intoxicaciones en la colmena Otro punto a tener en cuenta tiene que ver con evitar la saturación del apiario por colocar demasiadas colmenas, lo ideal sería 50 ó 60 colmenas por cada apiario, depende la region y pais. No es lo mismo la producción en Argentina que la producción en Colombia o Peru. Cuando hay saturación pueden aparecer focos infecciosos muy graves y difíciles de controlar y además se da la competencia de las abejas por el alimento. Hay muchos factores que podrían ser controlados por el apicultor y que muchas veces por desconocimiento no se tienen en cuenta. Por ejemplo, uno de los grandes problemas es traer reinas de otras provincias o países, corriendo el riesgo de que estas lleguen con enfermedades. Importante no siempre las reinas de un pais son buenas productoras en otro pais. Tambien no siempre las reinas de una region sirven en otra region. Por ejemplo no siempre funcionan reinas que trabajan en regiones de praderas de un pais llevarlas a las montañas de otros paises. Otro inconveniente tiene que ver con los problemas a la hora de elegir una alimentación natural o artificial. Si elegimos esta última debemos tener en cuenta que la dieta este correctamente balanceada, que contenga las propiedades que la abeja necesita y que estos alimentos estén autorizados legalmente. Los manejos de la colmena son los mismos en cualquier parte del año, lo que varían son las estrategias a utilizar. Hay que olvidarse o erradicar los conceptos que en invierno no hay que ir al apiario. En este momento y con la gran cantidad de enfermedades y problemas que tienen las abejas hay que estar alerta todo el año. Debemos tener en cuenta las estrategias a seguir según la época del año, la región y las condiciones climáticas. El productor debe trabajar para lograr que en el pico máximo de producción estén disponibles todas las pecoreadoras. Debemos conocer la curva de floración de nuestro sector y trabajar de acuerdo a ello. Es fundamental, llevar un libro con el registro de todas las acciones que el productor va realizando, para poder controlar todo lo que fue sucediendo a lo largo del circuito productivo. No hace falta ningun sistema de trazabilidad o programa pago. En este momento, y si el apicultor es pequeño o mediano, con un simple cuaderno de anotaciones puede llevar bien las tareas de campo

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Alemania no cede a los transgénicos y la UE dice que si... ¿quien ganara?
Alemania se opondrá a cualquier medida de la Unión Europea (UE) que permita la presencia de rastros de organismos genéticamente modificados (GM) no aprobados en los alimentos para consumo humano, dijo ayer un portavoz del Ministerio de Agricultura y Protección del Consumidor alemán. La ministra de Agricultura y Protección del Consumidor de Alemania, Ilse Aigner, se opondría a cualquier medida que ponga fin a la norma de tolerancia cero para los contenidos GM no aprobados en las importaciones de alimentos para consumo humano, señaló un portavoz de la cartera. La Unión Europea permitirá transgénicos en alimentos Funcionarios de la Unión Europea (UE) dijeron que se permitirá la presencia de pequeñas cantidades de Organismos Genéticamente Modificados (OGM) en los alimentos importados por la región, bajo nuevas normas que serán propuestas pronto por el brazo ejecutivo del bloque. Los exportadores y productores europeos señalan que las normas son necesarias para evitar interrupciones en las importaciones alimentarias, dado que las cadenas de suministro globales hacen cada vez más difícil garantizar que las cargas con destino a Europa estén totalmente libres de OGM aún no aprobados por el bloque. «La comisión europea ha dicho que quiere resolver este problema antes de fin de año, y presentaremos una propuesta en el futuro muy cercano», indicó el portavoz de la Comisión de Salud y Consumidores, Frederic Vincent

Avispa asiatica: ya en Cataluña y Portugal
La Avispa Asiática sigue su marcha por España desde que entrara procedente de Francia, y continúa causando estragos en las colmenas. El 19 de abril, una reina del avispón fue capturada en la zona norte de Girona, cerca de la frontera con Francia, habiéndose encontrado también a finales del año 2011 en Portugal, en la región de Minho, fronteriza con Galicia Uno de los aspectos más importantes para combatirlo es identificarlo primero, claro, y no confundirlo especialmente con otros avispones o avispas europeas de gran tamaño. En la foto que encabeza el post podéis ver algunos ejemplares en la mano. Una de las claves para diferencialo son las bandas amarillas del abdomen. El de la parte superior no corresponde a la Avispa Asiática (Vespa velutina nigrithorax), ya que este sólo cuenta en su abdomen con un anillo de color amarillo en la parate inferior, concretamente el 4º anillo abdominal, mientras que el ejemplar de más arriba posee varios anillos, que además cuentan con unos puntos amarillos Colaboradores de Apicultura sin Fronteras (www.agemchile.cl )

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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO DE 2012 - Hoja 5

Los panales NO son todos iguales
Por Orlando Valega de “Apícola Don Guillermo” Los panales conforman el esqueleto o estructura rígida del organismo “Colmena”. Un panal es una estructura rígida formada por celdillas (cavidades) hexagonales opuestas que comparten caras entre si y el fondo. Ubicación de los panales en la colmena Los panales conforman el esqueleto o estructura rígida del organismo “Colmena”. Un panal es una estructura rígida formada por celdillas (cavidades) hexagonales opuestas que comparten caras entre si y el fondo. Estas celdillas que unidas entre si, forman los panales, son utilizadas para cuidar la cría, acopiar alimento, dar rigidez al panal y cuando están llenos de miel; formar panales para reserva de energía y aislamiento térmico del organismo. Las colmenas tienen varios panales yuxtapuestos que dejan entre si como galerías por donde transitan las abejas calentando el nido, alimentando la cría o depositando el alimento. Estos pasillos tienen dimensiones estables según la raza de abejas. Conviven en la colmena tres tipos de individuos: La Reina, hembra madre de todos los demás individuos; Las obreras, hembras estériles dedicadas a realizar toda la logística de la colmena y los Zánganos o machos responsables de la fecundación de las futuras reinas

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la miel, principal reserva de alimento y de aislamiento térmico es depositada en un cuarto tipo de celdilla. Resumiendo, tenemos las características Celdillas Reales o Realeras destinadas a criar la Reina. Las celdillas donde se criaran las obreras, las destinadas a la cría de los zánganos y por último una cuarta categoría de celdillas destinadas a contener la miel. Cada tipo de celdilla ocupa un lugar característico en la estructura formada por los panales. Por lo general la miel es depositada en la parte superior de los panales y llenando la totalidad de las celdillas de los panales periféricos del nido a fin de aislarlo térmicamente. Estas celdillas tienen un tamaño intermedio a las de cría de obrera y a las de cría de zánganos. Las celdillas para cría de obrera son las mas pequeñas y se ubican por debajo de la miel en los panales centrales del nido. Las celdillas para criar zánganos son de mayores dimensiones y son labradas por las obreras en las esquinas inferiores de los panales que bordean el nido. Por lo general las obreras inducen a la reina a poner óvulos para criar zánganos después de haber criado gran cantidad de obreras. La reina se cría en una celda muy especial, mucho mas grande que las demás, que tiene la forma de una

Celdillas: Cada tipo de individuo se cría en su etapa larval en distinto tipo de celdillas y

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bellota, o un maní y sobresale del panal con la punta para abajo. Se la denomina “Celda Real” o “Realera”. Estas celdillas ocupan distinto lugar según cual fuere el impulso que indujo a su formación. Ante la falta abrupta de la reina las obreras crían varias Celdas Reales en cualquier parte del área de cría de obrera, pero si deciden reemplazar la reina actual por otra mas eficiente, labran una o dos Celdas Reales (Realeras) muy grandes en el centro del panal de cría de obrera y por último, en oportunidad de enjambrar, labran Realeras como rosarios en el borde inferior del panal Opérculos: Las celdillas son cubiertas con una tapa u opérculo que es distinto para cada tipo de celdilla: Las celdas de cría se operculan con un material poroso para que las crías puedan respirar, es de color ocre mate y su aspecto es inconfundible porque tiene marcado los bordes de las celdas. Si es de zángano parece un

estampado de balines, y si es de obrera, el trazado de las celdas le da un aspecto de un mosaico hexagonal. En cambio el sellado de la miel es hermético y está hecho de cera pura, aunque hay excepciones- es liso y las celdas pueden estar marcadas por pequeñas depresiones, pero sin el dibujo grabado de las de cría. Por último tenemos la excepción, un quinto tipo de celdilla; hay una celda que si bien tiene el tamaño de la celda de larva de obrera, su opérculo tiene la forma de la celda de zángano. Son las celdas de la postura de la “Obrera ponedora”. Son larvas de pequeños zanganitos. Como norma: La cría de obrera ocupa la parte inferior y media de los panales centrales del nido, digamos los seis centrales; la cría de zángano se ubica en los panales periféricos del nido en las esquinas inferiores de los mismos, el segundo y noveno, puede contener también algo de polen. Por último la miel en el nido de cría se acumula en la parte superior de todos los panales y en los panales de los bordes formando una capa aislante, este puede también contener polen Cuando deseamos agregar panales o intercambiar panales en una colmena debemos recordar este orden estricto que ocupan los panales. No se debe colocar panales con celdillas de zángano en los lugares centrales, estos siempre van a ambos lados en los bordes del nido. Tampoco conviene

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Utilizar los panales de miel para la cría ya que son de diámetro superior que los de cría. Por razones inexplicables a veces las obreras labran en el centro del panal celdillas para zángano, estos panales pueden ser reutilizados siempre que la superficie de las celdillas para zángano no fuere excesiva y como norma, en el borde del nido o en los dos extremos de la cámara de cría para que lo llenen de miel. Nunca en el centro del nido ya que las abejas no utilizarán las celdillas ni para zángano, -ya que prefieren los bordes del nido- ni para obrera por ser muy grandes. Las llenaran con miel dispersando la cría de obrera, lo que hace que la tarea de incubación resulte mas costosa e ineficiente. El nido deberá extenderse a otros lugares como ser las alzas superiores y se perderá energía para calentar el nido y el espacio destinado a la miel estará ocupado por cría. Se tiene la creencia que si se colocan tiras de cera estampada en vez de colocar toda la plancha; las obreras estirarán celdillas de zángano y esto no es tan así. Si el cuadro con una tirita de cera estampada se coloca dentro del área de cría de obrera, labrarán celdas para obrera y si la colocamos cercas de los bordes del nido es probable que Terminen labrando celdas de zánganos. De todas maneras, por mas que coloquemos láminas completas de cera estampada en las periferias del nido, las obreras labraran celdillas para zánganos en los bordes inferiores de los mismos.

Reportan baja en venta de miel por autorización para siembra de soya
Los ingresos por la venta de miel se ha reducido en unos ocho millones de dólares en la presente cosecha “por el simple hecho de que salió a la luz pública la autorización para la siembra de 253 mil hectáreas de soya transgénica en México”, afirmó Miguel Ángel Munguía, gerente de la cooperativa Educe y parte de una red de apicultores en la península de Yucatán. Durante el foro informativo sobre la apicultura y los cultivos transgénicos, efectuado en esta ciudad, dijo que la siembra de soya transgénica podría ocasionar que los países de Europa que importan miel de México cierren el mercado”, por lo que el producto tendría que ser vendido en los Estados Unidos, donde las restricciones por los organismos genéticamente modificados “no son tan fuertes porque allá los producen”. Señaló que de concretarse esta posibilidad el impacto en el precio de la miel para el año próximo sería de entre 225 y 250 millones de pesos menos que en 2011, sólo por cambiar de mercado de Europa a Estados Unidos, ya que este país compra más barato el producto. “Estados Unidos se está saboreando las manos por la posibilidad de que Europa nos cierre el mercado y ellos compren esa miel”, comentó en entrevista después de la inauguración del foro que se lleva a cabo en El Colegio de la Frontera Sur (Ecosur), con la asistencia funcionarios federales y apicultores, entre otros. Recordó que la Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales (Semarnat) emitió el 11 de mayo pasado un dictamen favorable al cultivo de soya transgénica en México, “pese a que no existen condiciones para asegurar la coexistencia entre este cultivo y la producción de miel”.

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Señaló que de concretarse esta posibilidad el impacto en el precio de la miel para el año próximo sería de entre 225 y 250 millones de pesos menos que en 2011, sólo por cambiar de mercado de Europa a Estados Unidos, ya que este país compra más barato el producto. “Estados Unidos se está saboreando las manos por la posibilidad de que Europa nos cierre el mercado y ellos compren esa miel”, comentó en entrevista después de la inauguración del foro que se lleva a cabo en El Colegio de la Frontera Sur (Ecosur), con la asistencia funcionarios federales y apicultores, entre otros. Recordó que la Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales (Semarnat) emitió el 11 de mayo pasado un dictamen favorable al cultivo de soya transgénica en México, “pese a que no existen condiciones para asegurar la coexistencia entre este cultivo y la producción de miel”. Añadió que el solo anuncio de tiempo atrás de la solicitud para sembrar 253 mil 500 hectáreas de soya transgénica en cinco regiones de la Península de Yucatán, en Chiapas, y la Planicie Huasteca “causó nerviosismo en Europa y ya está afectando” a los productores de miel. “Es claro que los europeos no quieren miel con organismos genéticamente modificados y por el simple hecho de que salió a la luz pública que hay autorización para la siembra de soya transgénica en México en sus etapas

experimental, piloto y comercial en la cosecha de 2012 el precio de la tonelada de miel ha disminuido de entre 300 y 400 dólares”, aseveró Munguía. Agregó que “si los multiplicamos por el volumen de miel que exportamos a nivel nacional eso representa una disminución de ingresos de alrededor de ocho millones de dólares, es decir, más de cien millones de pesos”.

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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO DE 2012- Hoja 9

Generando la flora apícola
El conocimiento de las fuentes de materia prima es de fundamental importancia. El desconocimiento de cultivos alternativos que económicamente sean rentables sembrar exclusivamente para las abejas, hacen de la apicultura una producción que se debe adaptar a las condiciones de flora del medio. en función de esta cantidad y calidad de néctar y de polen, que se determinará la ubicación y el tamaño de la explotación apícola. El desconocimiento de cultivos alternativos que económicamente sean rentables sembrar exclusivamente para las abejas, hacen de la apicultura una producción que se debe adaptar a las condiciones de flora del medio. En la mayoría de las regiones, los ambientes naturales apropiados para el desarrollo de la apicultura están constituidos fundamentalmente por especies del monte nativo, la flora de praderas naturales, más los cultivos para semilla y floraciones espontáneas (malezas). Los cultivos agrícolas industriales con especies como colza, Vicia villosa, trigo sarraceno (alforfón) y cártamo, no sólo complementarían, sino que en muchos casos, por sí solos, brindarían excelentes cosechas de miel además de otros rubros productivos como semillas y diferentes usos como por ejemplo la producción de biodiesel Características de los cultivos Colza (Brassica napus): A principios de primavera (septiembre y hasta fines de octubre), por un espacio de 20 a 25 días, las abejas se incentivan al máximo aumentando potencialmente el área de cría; y el crecimiento de la población, etapa aprovechable para la multiplicación o el fortalecimiento de núcleos hechos

Para la explotación apícola, el conocimiento de las fuentes de materia prima es de fundamental importancia. Todo apicultor que desee instalar un apiario, o ampliar los que ya posee, deberá saber cual es el aporte nectarífero y polinífero de la zona. Tan importante como esto, será el saber en que momentos se da esa floración. Es

temprano. Apicultores experimentados indican que es buena productora de miel y con una calidad de polen excelente, con un porcentaje de proteína que va desde el 20 al 27% y la isoleucina en el orden del 4,1 %. (El contenido proteico del polen de especies vegetales melíferas debe ser superior al 20 % y el porcentaje de isoleusina mayor al 4 % para cubrir los requerimientos de las abejas). La bibliografía indica que las abejas pueden acumular de 6 a 10 kg/día, dependiendo de la fortaleza de la colonia, número de flores y condiciones del tiempo.

La receptividad del cultivo, con una altura de hasta 1,60 m y con una densidad de 60 a 100 plantas por metro cuadrado es de hasta 10 colmenas por

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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO 2012- Hoja 10

hectárea. La colza se presenta para el apicultor como una opción válida, puede ser además una buena alternativa para polinización y multiplicación de colmenas, además del valor de la especie para la obtención de aceite y biodiesel. La fecha de siembra es en abril, mayo o julio, según ciclo y variedades, y los rindes de la colza pueden alcanzar los 2500 kg/ha de semilla Vicia (Vicia villosa) Los requerimientos de polinización por abejas dependen del cultivar. Vicia villosa es altamente beneficiada por los insectos. Tiene gran atractividad para las abejas (melíferas y Bombus) por el alto contenido de néctar. Se recomiendan 2 a 3 colmenas por ha. Consideramos a la floración muy buena para cubrir el bache que se produce luego de la colza y para mantener la provisión de néctar, sobre todo en secano. Datos aportados por apicultores de la zona de secano confirman la buena producción de néctar ya que colmenas, luego de haber sido nucleadas en

época más temprana, produjeron alrededor de 10 kg de miel por colonia en meses como noviembre y diciembre. Se infiere que colmenas con mayor población y un cultivo con adecuada reserva de humedad y temperatura ambiente acorde a la época podrían superar estos rendimientos, sobre todo en esos meses críticos. En Vicia villosa son comunes rendimientos de semilla de 1500 kg/ha. Fecha de siembra: mayo.

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Cártamo (Carthamus tinctorius) Se observa una gran actividad de abejas en el cultivo. El néctar y polen son altamente atractivos. La acción de las abejas es considerada indispensable para la polinización del cultivo (entre un 5 y 40% de polinización cruzada), dependiendo del cultivar. Los rendimientos de semilla logrados pueden alcanzar 2400 kg/ha. No hay antecedentes concretos sobre producción de miel en nuestro país, dada la reciente difusión como cultivo industrial, pero productores de EE.UU colocan 6 colmenas por hectárea muy cerca del cultivo en zonas del suroeste (Arizona y Nuevo México) donde los

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rendimientos por colmenas alcanzan a 29 y 30 kg/ colmena. Es una oleaginosa de rusticidad extrema con posibilidades de uso para biodiesel y aceite comestible. Fecha de siembra: agosto

y de sabor fuerte característica por la cual algunos mercados importadores no la prefieren. Sin embargo es de excelente calidad. Este cultivo necesita de las abejas para la transferencia del polen y fecundarse para aumentar la producción de semilla. Con seis (6) colmenas por ha se han producido más de 1400 kg/ha de semilla. Contiene proteínas de alto valor biológico y se utiliza para extraer harinas sin gluten para la alimentación de personas celíacas.

Fecha de siembra: noviembre. También puede sembrarse de segunda (sobre trigo, avena, cebada, etc.) lográndose ampliar el período de floración. Estas floraciones alternativas, permitirán a los productores apícolas, temprano en primavera, fortalecer sus colmenas, y posteriormente aprovechar la cadena de estas especies vegetales para la producción de miel, y además, un acopio interesante para afrontar la próxima estación invernal.

Alforfón o trigo sarraceno (Fagopyrum esculentum) Especie melífera de calidad, con una floración muy atractiva. Sembrado en el mes de noviembre comienza a florecer a los 45 días y prácticamente finaliza a fines de febrero. Se extraen hasta 150 kg de miel por hectárea, las flores secretan néctar en cantidad abundante en horas de la mañana y las abejas pueden acumular 4 kg de miel por día. Constituye, entre otras especies, una fuente muy importante de miel en el oeste de EE.UU, donde el clima es seco (entre 50 y 300 mm según zonas) y muy caluroso. La miel es más oscura

BeeRecord: Lanzan aplicación chilena para la industria apícola mundial
BeeRecord es la única aplicación telefónica a nivel mundial, que en pocos minutos permite registrar datos de apiarios y colmenas a través de grabación de voz y posteriormente los entrega en forma de reportes. A partir del 2 de mayo estará disponible desde Google Play, en inglés y español, para equipos smartphones con sistema operativo Android de la versión 2.2 en adelante. Cabe destacar que la aplicación ha sido creada por el Consorcio de Desarrollo Tecnológico Apícola y está siendo incubada por Gesta Mayor (Incubadora de Negocios de la Universidad Mayor). Para la gerente general del Consorcio, Paulina Cáceres, BeeRecord será un gran aporte para el desarrollo del rubro, “para mejorar la competitividad de la industria es fundamental que los apicultores cuenten con registros de sus apiarios, es por esto que aprovechando la tecnología disponible hoy en día y tomando en consideración la explosiva adopción de smartphones en el mundo, creamos BeeRecord, aplicación que permitirá generar un completo reporte del apiario o colmena en menos de 10 minutos”. BeeRecord fue diseñado para ser utilizado de manera transversal y a nivel mundial, es por ello que la aplicación costará US $49 y además contará con una versión demo gratuita, que igualmente estará disponible desde Google Play a partir del 2 mayo. “Beerecord es un aporte a la profesionalización de la apicultura, ya que permite tener registros de las explotaciones destinando muy poco tiempo a esta tarea fundamental para cualquier negocio agrícola. Es una herramienta que será útil no sólo para los apicultores, sino también para asesores e investigadores. Asimismo, en las pruebas del prototipo recibimos valiosos comentarios de los apicultores, los que han sido acogidos y ya estamos trabajando en las actualizaciones para introducir mejoras en la aplicación. Por ejemplo, la posibilidad de hacer una configuración personal de acuerdo a cada sistema productivo, la introducción de mecanismos de pago alternativos y, por último y muy importante, diseñando un modelo de negocios que permita que BeeRecord sea accesible para todos los apicultores”, señala Paulina Cáceres

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POLEN, función en La Colmena
Los granos de polen son una multitud de cuerpos microscópicos, contenidos en los sacos polínicos de la antera de la flor. Ellos constituyen los gametos fecundantes masculinos en las plantas superiores que colectan las abejas por ser la única... luego se desprende de la envoltura que lo protege para iniciar su fermentación láctica. Este polen almacenado sufre cambios bioquímicos que hace que se incremente la acidez y es conocido entonces bajo estas condiciones por "pan de abejas" natural.

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Los granos de polen son una multitud de cuerpos microscópicos, contenidos en los sacos polínicos de la antera de la flor. Ellos constituyen los gametos fecundantes masculinos en las plantas superiores que colectan las abejas por ser la única fuente de proteínas, aminoácidos, lípidos, vitaminas y minerales de la colmena. En las condiciones normales las abejas no utilizan la pelota de polen en estado fresco sino elaborado en pan de abejas. Las abejas obreras transportan el polen agregándole néctar y secreciones salivares (que son muy ricas en enzimas), una vez llegado a la colmena el polen es empacado dentro de las celdas del panal de cría, las celdas son operculadas con una capa delgada de miel, en un ambiente anaeróbico, a 38° C. En tales circunstancias, en presencia de calor y humedad, el polen germina y

La conversión del polen en pan de abejas natural y los cambios bioquímicos asociados a este, generalmente han sido postulados como un resultado de la acción microbiana, en donde ocurre fundamentalmente una fermentación ácido láctica causada por bacterias y levaduras. Para las abejas adultas el pan de abejas le es necesario para poder fabricar las diferentes secreciones que ellas producen: jalea real, los fermentos salivares, y la cera, además de ser imprescindible en el desarrollo de las glándulas hipofaringeas y para la formación de los cuerpos adiposos que permite a la abeja pasar el invierno. Ello ocurre al inicio de su vida adulta, antes de que salgan de la colmena a pecorear. Las larvas en el cuarto día de su desarrollo comienzan a alimentarse con el pan de abejas, si se alimentan con pelotas de polen su desarrollo se retrasa (Astaruskene, 1990). La fracción proteica del polen contiene también una espectacular cantidad de enzimas (están presentes todas las clases de enzimas) y especialmente la amilasa, la invertasa, ciertas fosfatasas, transferasas, así como una multitud de cofactores enzimáticos, como la biotina, el glutatión, el NAD o ciertos nucleótidos

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Hay que añadir que la concentración en proteína depende de la especie de vegetal y la variabilidad de la especie. En el polen hay un 5% de grasas (en miel no hay grasas). Las abejas necesitan un 5% de grasas en la alimentación para mantener el equilibrio. El metabolismo de las grasas está asociado al de los hidratos de carbono. Los azúcares de la miel se transforman en grasas internas gracias a cofactores presentes en el polen. El papel del polen es vital. Aporta toda la fase nitrogenada, toda la grasa, vitaminas, proteínas y cofactores. Se producen compuestos de defensa individual (péptidos) Flora intestinal: En el interior de este canal alimentario

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medio, en su pared, viven una serie de bacterias beneficiosas, lo que se llama la flora intestinal. Estas bacterias consumen los restos de nutrientes que quedan por allí, y a cambio fabrican vitaminas y compuestos biológicos que el epitelio intestinal absorbe y la abeja aprovecha.Este consumo de los restos de nutrientes evita que sean aprovechados por esporas de bacterias u hongos para desarrollarse.A propósito de flora intestinal, cuando la abeja nace no la tiene, la adquiere con el consumo del polen almacenado en la colmena. Este polen lleva una serie de microorganismos que, unidos a los existentes en la colmena, y gracias al apisonado y humectación con néctar que le hacen las abejas, se trasforma en un polen ensilado, con una fermentación beneficiosa, como la del yogurt o el forraje, que lo hace más rico en nutrientes y vitaminas. Si no hay una buena recolección de polen hay problemas por falta de estos microorganismos en el intestino de las abejas (como nosotros cuando tomamos antibióticos y matamos la flora intestinal). Las grasas en la colmena están representadas en la jalea real y en la cera. Si no hay polen no hay producción de Jalea Real y cera. Las abejas encuentran hidratos de carbono en el néctar (80%) y en el polen (40%), y forman dos tipos de grasas a partir de estos azúcares: la cera (que es una grasa sólida a temperatura ambiente) y sus grasas internas, que acumulan en unas células vacías, llamadas trofocitos o adipocitos (del tejido adiposo), sobre todo en otoño. Para que se produzcan

esas transformaciones es imprescindible la presencia de ciertos componentes que están en el polen y que son otras grasas, enzimas... que actúan como iniciadores y catalizadores de esas reacciones químicas. Algunas de estas grasas no pueden ser "fabricadas" por las abejas, las han de tomar ya "formadas" en la dieta (polen), a este tipo de sustancias, no "fabricables", se les lama vitaminas. Cuando hay abundante polen de calidad además de criar larvas de obreras las reinas ponen óvulos para criar zánganos y las colonias renuevan sus reinas, se reproducen y multiplican, pero si se corta el ingreso de polen o este es de mala calidad lo primero que se corta es la cría de zánganos. Esto indica que la multiplicación de las colonias de abejas está ligada directamente a la adecuada provisión de polen de calidad a la colmena. RESUMIENDO: Las abejas fermentan al polen y lo transforman antes de consumirlo en pan de abejas, que es el alimento principal de las larvas y de las abejas adultas jóvenes. El pan de abejas es imprescindible porque: -Aporta toda la fase nitrogenada, toda la grasa (5%) vitaminas, cofactores etc. -Las proteínas contribuyen en la producción de la cría y en la acumulación de proteína corporal -Los cofactores, enzimas y vitaminas son imprescindibles para poder producir diversas secreciones como: Jalea Real, fermentos salivares, la cera (contiene cofactores que catalizan la transformación de los carbohidratos del néctar en cera) -Contiene bacterias propias de la flora intestinal de la abeja -Contribuye en la fabricación de los péptidos propios de la defensa del organismo de la abeja. - Estimula la postura de óvulos para la cría de zánganos, sin polen no hay nacimientos de zánganos se paraliza la reproducción.

INTERROGANTES ¿Los sustitutos de polen podrán ser ensilados como el polen? Aportan la fase nitrogenada, tal vez el 5% de grasa pero. ¿Aportarán las vitaminas, cofactores, enzimas necesarios para producir las secreciones salivares, jalea real, cera, y otros? ¿Contendrán la flora bacteriana necesaria para el intestino de la abeja? ¿Se producirán las reacciones químicas necesarias para producir los compuestos propios a la defensa del organismo de la abeja (Péptidos) ?

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Paquetes de Abejas
La multiplicación de colonias por medio de paquetes de abejas es una técnica que es muy difundida en países como Canadá y Estados Unidos. Quien adopte esta técnica tendrá que realizarlo un mes y medio o dos antes del flujo principal de néctar en su zona. El paquete de abejas es realmente un enjambre artificial, compuesto por una Reina que viaja en su correspondiente jaulita y 1.000 o 1.200 Gr. de abejas nodrizas en sú mayoría, dentro de un envase adecuado, el cual lleva incluido un alimentador con candy. permiten dejar libres los extremos de los cabezales, para que la abeja pueda desplazarse con facilidad y así poder salir de la zona de cría en busca del alimento, que se ubica en la parte exterior de la lámina, dentro de un alimentador tipo Doolittle y mantener una buena ventilación y prevención de la Los distintos elementos y equipos con humedad. El objetivo es que comprima la los que debemos contar para la población de esta manera la temperatura producción de paquetes de abejas, son se mantendrá lo más estable posible. los siguientes: d. Alimentador para la jaula porta paquete: a. Caja porta paquete: Este es un elemento que se ubica en la Es un elemento cuadrangular, donde se parte superior del paquete y se introduce introducirán las abejas nodrizas además en el agujero. La dimensión de la de la Reina fecundada. Las paredes circunferencia de esta abertura, debe superiores, inferiores y los laterales permitir la introducción justa, fácil y un menores son construidas con madera calce perfecto de un pote de plástico de ½ o ¾ pulgada, recomendamos no cónico, de los que se usan para ½ Kg. cepillar la jaula en su cara interna, para De miel. Este envase posee una tapa que las abejas puedan prenderse de la plástica con cierre telescópico superior madera rústica. Los laterales mayores que permite obtener un buen cierre. En el llevan alambre tejido metálico, tipo alimentador de plástico se deberían fiambrera, que permita una buena realizar de 3 a 4 orificios en su región ventilación, ya que si se usan mallas lateral, de aproximadamente 20 mm. de muy cerradas, existe el peligro de que diámetro, que permita el paso de las las abejas se asfixien durante el viaje. abejas, para tener acceso al candy. En la pared superior debe contar con un agujero para el alimentador, con un e. Alimentador doolittle: diámetro de 8 cm. y una ranura para el Dentro de la cámara de cría se deberá clavo que va colocado en la jaula con la usar un alimentador del tipo Doolittle, reina y de donde queda suspendida. El nosotros usamos uno de 2 Litros de tamaño del paquete es de 36 cm. de capacidad. Este alimentador está largo, 25 cm. de alto y 14 cm. de ancho, formado por un marco de 35 mm. de de esta manera pueden contener un kilo cualquier madera, con dos secciones de de abejas, que equivale a 10 mil chapadur clavados en los bordes e individuos. impermeabilizados con parafina y cera de abejas, dejando en la parte superior b. Embudo de carga: entrada para las abejas. El embudo, con una boca superior de 60 cm. Por 30 cm. Y una altura de 80 cm. f. Aspersor para agua melada: Conforma un paralelogramo. También Es un implemento indispensable y muy puede tener una sección rectangular en útil para la introducción de los paquete a la base que apoya en la caja porta la cámara de cría, con la aspersión de paquete. Es imprescindible uno especial agua melada sobre las abejas formamos para esta tarea, dado que el tubo inferior una bola con las mismas, evitando así el se introduce en la boca de la jaula porta vuelo. Se puede utilizar cualquier tipo de paquete y debe ser construido para que aspersor. el calce sea exacto en la boca de la caja porta paquete. Como hacemos los paquetes: Este, puede ser construido en fibra de vidrio, con las paredes internas HACIENDO PAQUETES perfectamente lisas, evitando así daños Se deben utilizar únicamente abejas en las nodrizas, al sacudir los cuadros. nodrizas, de esta forma logramos un rápido labrado de la cera, y la adecuada c. Poncho plástico: alimentación de las larvas. Debemos La lámina de plástico de 200 micrones recordar que de la cantidad de nodrizas nos da buenos resultados. Esta, se depende la cantidad de huevos que ubicará en el interior de la cámara de pondrá la reina. cría, y debe poseer 80 cm. de largo por El material tiene que ser nuevo o estar 40 cm. de ancho. Estas medidas perfectamente desinfectado ya que se una cámara de cría completa y con marcos recién labrados.(45 a 60 días). • Reduce el riesgo de transmitir enfermedades de la cría. • Fácil control de varroa y nosemosis. • Su transporte es fácil y requiere de poco espacio.

Es importante hacer resaltar que el tipo de abejas que lo conforman, y de esto depende el éxito de la multiplicación por medio de paquetes, deberá hallarse constituido íntegramente por nodrizas, de lo contrario si se usaran pecoreadoras, se llegaría a un verdadero fracaso en el desarrollo del mismo. Se debe partir solamente de marcos con cera estampada, alimentación artificial, y de ninguna manera se deberán colocar marcos con panales labrados y menos con miel, ya que todo se centra en la alimentación artificial a base de azúcar y agua. Esta alimentación se suministrará por medio de alimentadores especiales. VENTAJAS DEL USO DEL PAQUETE DE ABEJAS: • Permite el desarrollo rápido y de fácil control. • Puede rendir una cosecha en forma inmediata. • Podrá contar en poco tiempo , con

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pretende lograr un producto sin posibilidades de contagio de enfermedades. De ninguna manera se debe utilizar cera obrada o marcos con miel. Las colmenas proveedoras de nodrizas deben ser fuertes, sanas y estar en plena etapa de desarrollo. Tales condiciones aseguran una buena provisión de abejas nodrizas. Estas podrán prepararse con 24 hs. de anticipación a la realización del paquete. Lo ideal es una colmena con cámara de cría y un alza estándar. De la cámara de cría se suben 3 cuadros con cría abierta y se colocan en el alza superior, se debe tratar de ubicarlos en la zona central y tenerlos identificados para distinguirlos rápidamente. Las abejas nodrizas subirán y cubrirán estos cuadros instintivamente para proteger, dar calor y alimentar a las larvas jóvenes. Se coloca una rejilla excluidora entre ambos cuerpo, de manera que la reina permanecerá en la cámara inferior. Damos jarabe a la colmena para que al día siguiente no sea necesario el asperjado de la abeja durante la formación del paquete. Al día siguiente comenzamos con la operación de formación propiamente dicha. Para armar el paquete de abejas, tomamos los marcos de cría cubiertos con nodrizas y se colocan sobre el embudo, insertado previamente en el orificio de la caja porta paquete se sacuden enérgicamente. Mediante la utilización de este manejo la mortandad de abejas es mínima. Es necesario controlar el peso de las abejas que se incorporan. Se utilizará como referencia que tres cuadros bien cubiertos de nodrizas equivale a un Kg. de abejas aproximadamente. Podemos sacudir cuadros de distintas colmenas hasta completar el peso pretendido. Se rocía el interior de la caja con jarabe de azúcar diluido al 50%, evitando que las abejas vuelen, si hemos alimentado el día anterior o hay algo de entrada de néctar, con lo que chorrea del cuadro cuando sacudimos, no es necesario el asperjado. La jaula con la reina fecundada se colgara de la ranura superior, quedando suspendida en el interior, mediante un alambre fino el cual esta sujeto de un clavo. Podemos colocar algún medicamento para combatir la varroa e inmediatamente después se coloca el alimentador, en su interior contiene candy de azúcar impalpable y jarabe. Colocamos fumagilina al candy y así evitamos el

surgimiento de brotes de nosemosis Los paquetes ya confeccionados se ubicaran a la sombra, facilitando que la abeja ascienda y forme un racimo semejante a un enjambre. Las abejas rodearan a la reina y rápidamente se arma el enjambre. Luego de transcurridas como mínimo 24 hs desde su confección el paquete puede trasegarse a la cámara de cría. CUIDADO DEL PAQUETE Desde la confección y hasta la instalación, permanecerán en un sitio sombreado, protegidos de los rayos solares, con buena ventilación y los frentes de alambre tejido se deben encontrar separados 15 centímetros entre sí. El objetivo es que los paquetes se tranquilicen y bajen su temperatura. En caso de altas temperaturas, es conveniente rociarlos con agua. TRANSPORTE DEL PAQUETE Los paquetes se pueden unir con Listones de madera, conformando así unidades de tantos paquetes como el vehículo de transporte permita, con 10 cm. de separación entre ellos y se forman filas. De esta manera se permiten realizar varias hileras las cuales están superpuestas, así como también acomodar los paquetes fácilmente y brinda seguridad en el traslado. Cuando las distancias son largas, es mejor, si el transporte de los paquetes de abejas se realizara mediante horas nocturnas, se deberá refrescar con agua, sobre todo cuando la temperatura aumente. INSTALACION DE PAQUETES Para su instalación, las cámaras deben haber sido acondicionadas para impedir la fuga de abejas. Estas se ubicaran en un lugar con media sombra, esto es muy importante ya que el sobrecalentamiento es el responsable de la mayoría de los fracasos en la instalación de los paquetes, que permanecerán cerrados durante 24 horas. El cierre tiene como objetivos, retener las abejas dentro de la cámara en condiciones satisfactorias, evitando el despoblado y sobrecalentamiento, además de favorecer el labrado de la cera estampada, Finalmente la piquera se cerrará con un tejido mosquitero de metal un poco mayor a la medida de la piquera, de manera que se asegure la circulación de aire. Ya dispuestos a la instalación se colocan los 4 marcos con cera estampada y el poncho de polietileno quedará cubriéndolos,

Quedando de esta Manera el alimentador por fuera. Llenamos el alimentador con jarabe al 50%. Ahora asperjamos las abejas con un jarabe liviano, para evitar que vuelen, se quita el alimentador de la caja porta paquete y retiramos la jaula con la reina, no se saca el tapón del candy y se coloca suspendida entre los cuadros de cera estampada. La jaula porta paquete, con las abejas, se colocará entre el alimentador y la pared interna del alza, con la boca destapada y hacia arriba. Como último paso se colocará el techo. Una vez transcurridas 24 horas se podrán abrir las piqueras si es a la noche mejor y al día siguiente retiramos el tapón del candy de la jaulita de la reina y agregamos nuevamente jarabe. Luego de transcurridos 4 -5 días de instalados, se revisan las cámaras, se retira la jaula de la reina, la caja donde se transportó el paquete y se controla que el comportamiento de la reina sea normal, el labrado de los panales y el acopio de polen y néctar. Se procederá a colocar 1 Litro de jarabe, hecho que se repetirá dos veces por semana hasta que la colonia haya completado la cámara de cría. CONSIDERACIONES Disponer de reinas fecundadas y de un buen origen genético. La utilización de abejas con buena mansedumbre. Usar abejas nodrizas ya que labran rápidamente la cera, mantienen la relación cría-nodrizas y aseguran un desarrollo constante. La alimentación durante el traslado debe realice con candy con el agregado de fumagilina. Para el desarrollo utilizar jarabe de azúcar al 50 % dos veces por semana. Refrescar el enjambre durante el transporte. Evitar el encierro prolongado ya que puede ser causa de nosemosis. La piquera debe permanecer cerrada durante las primeras 24 horas posteriores al trasiego. El trasiego se debe realizar al última hora, luego que las abejas se hayan tranquilizado. Destapar las piqueras en la noche siguiente.

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Abstract The microsporidian Nosema apis and Nosema ceranae have been associated with colony disorders of Apis mellifera and Apis cerana, respectively. N. apis is endemic in South America. Recently, N. ceranae has been detected in Brazil, Uruguay and Argentina. No report of its presence, distribution and prevalence in Chile is available. Here, we present a realtime PCR-based method that was able to discriminate between N. apis and N. ceranae. The dynamic range of this assay was 100 to 100,000 spores per honeybee. False-negative results were avoided due to the use of ACTIN gene as internal standard. False-positive results were obtained neither in experimentally nor in naturally contaminated samples. Using this method, we screened 240 beehives from the Chilean region where 42% of the total country honey production take places (Región del Biobío). Nosema spp. were detected in the four provinces and in 20 of the 26 communes of the region. Among the samples analysed, 49% were positive for N. ceranae. Their infection level ranged from 200 to more than 100,000 spores per honeybee. N. apis was not detected in this region. Hence, our data show that in Chile N. ceranae is an emergent pathogen that is been replacing N. apis. Also, they support that N. ceranae maybe the actual responsible for nosemosis in A. mellifera in South America. Introduction Microsporidia genus Nosema (Nosematidae) causes honeybee nosemosis (Giersch et al. 2009; Klee et al. 2007). Nosema spp. are parasitic fungi which colonise the epithelial of the ventriculus and the midgut of adult workers (de Graaf et al. 1994; Fries 1988). This results in digestive diseases leading to undernourishment and shortening of the honeybee life span (Calderón et al. 2008; Ritter 2001). Affected colonies diminish their honey production and experience a significant decrease in their population (Chauzat et al. 2007; Higes et al. 2008; Oldroyd 2007). Thus, nosemosis causes considerable economical losses to apicultures (Anderson Anderson and Giacon 1992; Fries et al. 1996; Fries 2010; Hornitzky 2008). Nosema apis infects Apis mellifera, the Western honeybees (Zander 1909). Nosema ceranae infects Apis cerana, the Asian honeybees (Fries et al. 1996). Recently, it has been shown that this exclusivity is no longer true. For instance, A. mellifera can be infected by N. apis and N. ceranae separately or as mixed infection (Higes et al. 2006; Huang et al. 2008). Currently, there are conclusive evidences showing neither higher virulence (Forsgren and Fries 2010; Higes et al. 2007; Paxton et al. 2007) nor the factors that determine it (Martín-Hernández et al. 2011a) in any of these species. However, it has been proposed that worldwide N. ceranae is displacing N. apis (Klee et al. 2007; Martín-Hernández et al. 2011b; Paxton et al. 2007; Stevanovic et al. 2010; Tapaszti et al. 2009). Thus, N. ceranae was been detected in Europe (Chauzat et al. 2007; Higes et al. 2006; Klee et al. 2007; Stevanovic et al. 2010; Whitaker et al. 2010), North Africa (Higes et al. 2009), Asia (Chaimanee et al. 2011; Yoshiyama and Kimura 2011), Oceania (Giersch et al. 2009), North America (Chen et al. 2008; Traver and Fell 2011; Williams et al. 2008a) and Central America (Calderón et al. 2008; Guzman-Novoa et al. 2011). In Chile, nosemosis has been declared an endemic disease. Up to now, N. apis is recognised as its unique causal agent (Hinojosa and González 2004; Huaiquil et al. 2009). Since N. ceranae have been progressively identified in South American countries, e.g. Brazil, Uruguay and Argentina (Invernizzi et al. 2009; Klee et al. 2007; Medici et al. 2011), our aim was to determine the presence, distribution and prevalence of Nosema spp. in Chile. First, we look

JUNE 2012

Nosema ceranae an emergent pathogen of Apis mellifera in Chile
Jessica Martínez & Germán Leal & Paulette Conget J. Martínez : G. Leal : P. Conget Instituto de Ciencias, Facultad de Medicina Clínica Alemana Universidad del Desarrollo, Santiago, Chile

for N. apis and N. ceranae in honeybees clinically diagnosed with nosemosis. As we found A. mellifera infected with N. ceranae, we decided to perform a screening of Nosema spp. in Región del Biobío, which concentrates 42% of the national production of honey. For this, we settled a real-time PCR-based method that was able to discriminate between N. apis and N. ceranae. Using this method, we analysed 240 beehives sampled, in the spring of 2010 and the summer of 2011, in 26 communes of the four provinces of Region del Biobío, Chile. Materials and methods Extraction and quantification of Nosema spp. Spores A. mellifera individuals were collected and stored in 70% ethanol at 4°C. At least 1 week later, the abdomens of 10 worker honeybees were chirurgical removed and crushed in 3 ml of sterile water. Homogenate was filtered through two layers of gauze and centrifuged at 800×g, for 6 min. Two millilitres of the supernatant was removed and the pellet was resuspended with the remaining supernatant. Spores present in the sample were analysed under light microscope and counted using an hemocytometer (Cantwell 1970). To generate spore stocks, honeybees clinically diagnosed with nosemosis were used as start material. Extracted spores were diluted up to 1×107 spores/ml and stored at 4°C. Isolation of DNA from Nosema spp. Spores The

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isolation of the DNA of Nosema spp. spores was performed with the UltraClean Soil DNA isolation kit (Mo Bio Laboratories Inc, California, USA). Genomic DNA was eluted with 40 ìl of elution buffer, quantified spectrophotometrically and stored at 20°C. Characterization of 16S rRNA gene of field samples Fifty nanograms of DNA isolated from spores extracted from A. mellifera clinically diagnosed with nosemosis was amplified in a final volume of 50 ìl containing 0.2 ìM of primers targeted to Nosema spp. 16S rRNA gene (INTER-F/ INTER-R, Higes et al. 2007), 3 mM MgCl2, 0.2 mM dNTP, 0.2 mg/ml BSA, PCR buffer (200 mM TrisHCl, pH 8, 500 mM KCl) and 1 U Taq polymerase. Amplification protocol was: one cycle at 94°C for 5 min; 25 cycles at 94°C for 45 s, at 56°C for 45 s and at 72°C for 2 min; one cycle at 72°C for 7 min. After been electrophoresed, amplicons (649 bp for N. apis and 659 bp for N. ceranae) were purified using the extraction kit Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System (Promega, Madison, WI, USA). Restriction analysis of amplicons was performed with endonucleases TaqI or AluI. Sequencing of the amplicons was done in the automated DNA sequencer ABIPRISM 3100 (Applied Biosystems, California, USA). Similarity search was performed using the Basic Local Alignment Search Tool (Altschul et al. 1990).

Generation of DNA positive controls Reference DNAs from N. apis and N. ceranae were amplify using primers APIS-F/APIS-R and MITOC-F/MITOCR, respectively (Martín-Hernández et al. 2007). Amplicons (321 and 218 bp, respectively) were cloned using the pGEM-T cloning kit (Promega, Madison, WI, USA). Recombinant plasmids thus generated, named pJNA-2 and pNCH-1, respectively, were propagated in Escherichia coli cultured in LuriaBertani Broth medium supplemented with 100 ìg/ml ampicillin, under aerobic atmosphere at 37°C (Sambrook and Russel 2001), purified using the Wizard Plus Minipreps DNA Purification System (Promega, Madison, WI, USA), and quantified spectrophotometrically. Restriction analysis of recombinant plasmids was performed with endonucleases EcoRI and SalI. Plasmid stocks were stored at -20°C. Detection of N. apis and N. ceranae by real-time PCR Real-time PCR was performed in a final volume of 10 ìl containing 1 ìl of Negative control corresponds to reaction settled without template DNA. Positive control corresponds to reaction settled with pJNA-2 for N. apis and pNCH-1 for N. Ceranae

Participated and that all beekeepers in the world can read all the research, work and management Beekeeping Without Borders calls on scientists, students and researchers interested in spreading their jobs they can do in the most read newspaper in the world
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Fig. 1 Identification of N. apis and N. ceranae in Chilean A. mellifera. Amplicons obtained from DNA of spores extracted from honeybees clinically diagnosed with nosemosis using primers INTER-F/INTERR were sequence and compared with the available sequence of N. apis gb. DQ235446.1 (a) and N. ceranae gb. DQ673615.1 (b). In both cases, identities were 99% (430/432 and 328/330, respectively)

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Screening of N. apis and N. ceranae in field samples A. mellifera individuals were collected from 240 beehives located in 26 communes of the four provinces of Región del Biobío, Chile, during the spring (October to November) of 2010 and the summer (January to April) of 2011. Each beekeeper that agreed to participate in the study randomly collected 30 honeybees from the three central frames of the brood chamber, irrespective of its clinical state. All samples were analysed using the realtime PCR-based method reported in this article. Results r

Identification of N. ceranae in Chilean honeybees The amplicons of 16S rRNA gene generated from spores extracted from A. mellifera clinically diagnosed with nosemosis showed two different estriction patterns. Samples cut with TaqI resulted in fragments of 238, 209 and 201 bp, as expected for N. apis. Samples cut with AluI resulted in fragments of 379, 216, 38 and 25 bp, as expected for N. Ceranae.

Consistently, when amplicons were sequenced and compared with available sequence for N. apis (gb. DQ235446.1) and N. ceranae (gb. DQ673615.1), identities were 99% in both cases (Fig. 1). The detection of N. apis was expected. However, for the first time, we observed that N. ceranae is present in Chilean samples of A. mellifera with nosemosis.

Fig. 2 Detection of N. Apis and N. ceranae by real-time PCR. Amplicons obtained with N. apis DNA using primers APIS-F/APIS-R, N. ceranae DNA using primers MITOCF/MITOC-R and A. mellifera DNA using primers ACT-F/ACT-R were characterised according to their Tm (melting curves) (a) and size (agarose gel electrophoresis) (b). Theoretical Tm and size were 83.5°C/321 bp for 16S rRNA gene of N. apis; 80.4°C/218 bp for 16S rRNA gene of N. ceranae and 84.8°C/ 156 bp for ACTIN gene of A. mellifera

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Fig. 3 Detection limit and dynamic range of real-time PCR settled for N. ceranae. Serial dilutions of extracted spores (insert) and experimentally contaminated honeybee were amplified using primers MITOC-F/ MITOC-R (a). The relationship between spore number and cycle of amplification start was linear in the range 100 to 100,000 spores/ honeybee (b)

Reliable and sensible detection of N. apis and N. ceranae by real-time PCR Under optimum reaction and cycling conditions, the amplification of N. apis DNA (pJNA-2) using primers APISF/APIS-R resulted in a product with a Tm082.5± 0.3°C and over 300 bp (Fig. 2a, b). By another hand, the amplification of N. ceranae DNA (pNCH1) using primers MITOC-F/MITOC-R resulted in a product with a Tm080.6±0.6°C and over 200 bp. Finally, the amplification of honeybee DNA using primers ACT-F/ACT-R resulted in a product with a Tm083.5±0.3°C and over 100 bp. Expected Tm and size were 83.5°C/321 bp for 16S rRNA gene of N. apis, 80.4°C/218 bp for 16S rRNA gene of N. ceranae and 84.8°C/156 bp for ACTIN gene of A. mellifera. The similarity between empirical and theoretical data for the three genes analysed was also observed in extracted spores, experimentally contaminated honeybees and field honeybees (Fig. 3a). Regarding to the selectivity of our method, we observed no amplification when N. apis DNA were subjected to PCR using primers MITOC-F/MITOC-R or when N. ceranae DNA were subjected to PCR using primers APISF/APISR (data not shown). About falsepositive and false-negative results, we detected no amplification when uncontaminated honeybees were assessed and amplification of ACTIN gene was mandatory for the analysis of field samples. Compared to light microscopy analysis, our real-time PCRbased method has 100% sensitivity and 100% specificity (Table 1). The detection limit of our method, when we used the following as template: (1) plasmid DNA

was one copy of 16S rRNA gene per reaction (data not shown), (2) spore DNA was 2.5 spores per reaction, equivalent to 100 spores per ml of spore extract (Fig. 3a), (3) DNA from honeybee artificially contaminated with spores was 25 spores per reaction, equivalent to 100 spores per honeybee (Fig. 3a). The dynamic range of our real-time PCRbased method was 100 to 100,000 spores per honeybee (Fig. 3b). High prevalence of N. ceranae in honeybees from apiaries located in the South of Chile Nosema spp. 16S rRNA gene was detected in the four provinces and in 20 of the 26 communes of the Region del Biobío (Fig. 4a). N. apis was not detected (0/240) and N. ceranae was detected in 49% (117/240) of samples analysed (Fig. 4b). The infection level (spore load) of these samples ranged from 200 to more than 100,000 spores per honeybee

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Fig. 4 Screening of Nosema spp. in honeybees from apiaries located in Región del Biobío, Chile, South America. 2,400 honeybees collected from 240 beehives located in the four provinces (different grey tones) of Región del Biobío were screened. Samples from communes labelled with a white dot were negative for both N. apis and N. ceranae. Samples from communes labelled with a black dot were negative for N. apis and positive for N. ceranae (a). Data also was analysed from each provinces (b). All samples scored amplified for ACTIN gene

Discussion We show for the first time that N. ceranae is present in Chilean apiaries. Furthermore, its genomic DNA is highly conserved compared with N. ceranae found in the rest of the world (Chen et al. 2009; Williams et al. 2008a). In order to perform epizoological studies, we simplify the extraction of spore DNA using a commercial kit and adapted the conventional PCR described by MartínHernández et al. (2007) to real-time PCR. This improved method discriminates between N. apis and N. cerenae, has a detection limit of 100 spores per honeybee and lets us know the infection level (spore load) of samples. Similarly to other available molecular techniques, our real-time PCR-based method is as good as light microscopy analysis (Bourgeois et al. 2010; Chaimanee et al. 2011; Chen et al. 2008; Hamiduzzaman et al. 2010; Klee et al. 2007; Martín-Hernández et al. 2007; Ravikumar et al. 2011; Stevanovic et al. 2010; Traver and Fell 2011; Yoshiyama and Kimura 2011). Nevertheless, it does not rely on the

expertise of the observer (Weiss et al. 1999) and allows the complete (16S rRNA of N. apis, 16S rRNA of N. ceranae and ACTIN of A. mellifera) analysis of 10 samples in 3 h. Using the method here reported, we analysed 2,400 honeybees collected from 240 beehives from the region where half of the Chilean apiary are located and in two different season of the year (Botías et al. 2011). Six of the 26 communes assessed were free of Nosema spp. Among the others communes, all samples infected with Nosema spp. Were negative for N. apis and positive for N. ceranae. Results from samples collected between 2004 and 2006, analysed by light microscopy and published in 2007, show that Nosema spp. were present in Región del Biobío (www. agrarias.uach.cl/apicola/pdf/enfermedad es_jul06_web.pdf). Their prevalence was 1116% of adult honeybees and in all cases the microsporidia found was N. apis. In the absence of other reports, we cannot estimate when and how N. ceranae arrived to Chile. By another

hand, as N. apis was detectable in 20042006 but not now (2010 and 2011), we hypothesise that N. ceranae displaced N. apis in Región del Biobío, as been proposed for other places in the world (Klee et al. 2007; MartínHernández et al. 2011a, b; Paxton et al. 2007; Tapaszti et al. 2009). Due to the fact that, compared with light microscopy, real-time PCR-based method has 100% sensitivity and 100% sensibility, we might conclude that the prevalence of Nosema spp. increases in Chile in the last 5 years (1116% in 20042006 versus 49% in 2010 2011). This is not unexpected since Nosema spp. spores are massively expelled by diseased individuals and remain viable in field for more than a year (Fries 1993); there is no safety treatment available (Williams et al. 2008b) and alternative control strategy are under development (Porrini et al. 2010). We envision that the method and the data presented in this article maybe useful for the screening and the followup of Nosema spp. infection. Also, will

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Contribute to the understanding of the ecological behaviour of Nosematidae, in order to improve the control of nosemosis and related colony disorders worldwide Acknowledgments We thank Dr. Raquel Martín-Hernández (Centro Apícola Regional, Junta de Castilla-La Mancha, Spain) for facilitating reference DNA from N. apis and N. ceranae, and the Asociación Gremial de Apicultores Región del Biobío and Apiquality Ltda. For performing sampling, Ms. Noemí Crosby for designing the map of Región del Biobío and Dr. Martha Ligia Arango (Facultad de Medicina Clínica AlemanaUniversidad del Desarrollo) for English editing of the manuscript. This study was supported by grant no. 2340028, Dirección de Investigación, Universidad del Desarrollo. Ethical standards Experiments comply with current law of Chile. Conflicts of interest Authors declare no conflict of interest.
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and wide-spread microsporidian infection of the European honey bee (Apis mellifera) in the United States. J Invertebr Pathol 97:186188 Chen YP, Evans JD, Murphy C, Guttel R, Zuker M, Gundensel-Rindal D, Pettis JS (2009) Morphological, molecular, and phylogenetic charaterization of Nosema ceranae a microsporidian parasite isolated from the European honeybee, Apis mellifera. J Eukar Microbiol 56:142147 de Graaf DC, Raes H, Sabbe G, De Rycke PH, Jacobs FJ (1994) Early development of Nosema apis (Microspora: Nosematidae) in the midgut epithelium of the honeybee (Apis mellifera). J Invertebr Pathol 63:7481 Forsgren E, Fries I (2010) Comparative virulence of Nosema ceranae and Nosema apis in individual European honey bees. Vet Parasitol 170:212217 Fries I (1988) Infectivity and multiplication of Nosema apis Z in the ventriculus of the honey bee. Apidologie 19:319328 Fries I (1993) Nosema apisa parasite in the honey bee colony. Bee World 74:519 Fries I (2010) Nosema ceranae in European honey bees (Apis mellifera). J Invertebr Pathol 103(Suppl 1):S73S79 Fries I, Feng F, da Silva A, Slemenda SB, Pieniazek NJ (1996) Nosema ceranae n.sp. (Microspora, Nosematidae), morphological and molecular characterization of a microsporidian parasite of the Asian honey bee (Apis cerana) (Himenoptera, Apidae). Eur J Protistol 32:356365 Giersch T, Berg T, Galea F, Hornitzky M (2009) Nosema ceranae infects honey bees (Apis melifera) and contaminates honey in Australia. Apidologie 40:117123 Guzman-Novoa E, Hamiduzzaman MM, Arechavaleta-Velasco ME, Koleoglu G, Valizadeh P, Correa-Benitez A (2011) Nosema ceranae has parazited Africanized honey bees in Mexico since at least 2004. J Apic Res 50:167169 Hamiduzzaman MM, Guzman-Novoa E, Goodwin PH (2010) A multiplex PCR assay to diagnose and quantify Nosema infections in honey bees (Apis mellifera). J Invertebr Pathol 105:151155 Higes M, Martín-

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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO DE 2012- Hoja 22
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