You are on page 1of 4

BACTERIOLOGIE - LP1 - 28.02.

2013

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE PRODUSE DE BACILLI GRAM + Bacilli gram+ se impart in 2 mari categorii: 1.bacilli gram+ nesporulati. ex: Colinebacterium Diphtheria, Listeria Monocytogenes. 2.bacilli gram+ sporulati. la randul lor se impart in 2 subdiviziuni: a.bacilli gram+ sporulati aerobi. ex: bacillus antracis. b.a.bacilli gram+ sporulati anaerobi. ex: Clostridia. DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE PRODUSE DE COLINEBACTERIUM DIPHTERIA - este agentul patogen al difterie. recoltare: se vor recolta 3 tampoane faringiene si un tampon nazal. cu primul tampon faringian se vor efectua: a.un frotiu colorat gram care va evidentia prezenta unor bacili gram+, maciucati, lungi, usor incurbati, asezati in forma de litere chinezesti. acesti germeni sunt imobili, necapsulati si nesporulati. b.coloratia Del Vechio care va pune in evidenta bacilli colorati in galben ce prezinta niste granulatii brun-verzui (granulatiile se numesc corpusculi Babes-Ernst). din al doilea tampon se insamanteaza pe urmatoarele medii: a.mediul geloza-sange pe care se vor observa colonii alb-gri perlate nehemolitice. b.mediul Tinsdale (contine ser de bou, cistina, geloza si telurit de potasiu). pe acest mediu se vor observa niste colonii de culoare neagra ce prezinta un halou brun, marimea coloniilor diferind in functie de tip astfel: exista 3 tipuri de Colinebacterium Diphteria. I.tipul Gravis produce niste colonii mari, ca niste margarete, de culoare neagra. II.tipul Mitis produce niste colonii negre, mici. III.tipul Intermedius produce niste colonii mijlocii medii. c.mediul Lefer (contine ser coagulat de bou) pe care se observa colonii semicremoase granulare. din al treilea tampon faringian se va insamanta pe un mediu de imbogatire numit OST (ouser-telurit). Tamponul nazal va si el insamantat pe un mediu OST. Toate aceste proceduri se realizeaza in prima zi, imediat dupa recoltare. A doua zi se citesc placile insamantate cu tampoanele respective. Din coloniile suspecte de pe aceste medii se fac repicaje (cand iei cu ansa o colonie bacteriana de pe un mediu si o treci pe un alt mediu solid) pe medii geloza-sange si Lefer. Tampoanele insamantate in OST se trec si ele pe medii solide si anume geloza-sange si Tinsdale. A treia zi, se citesc din nou placile insamantate cu tampoanele din OST, cat si cele din care s-au facut repicaje.
1

BACTERIOLOGIE - LP1 - 28.02.2013

Modalitati de identicare: a.dupa caractere morfologice b.dupa caractere de cultura c.dupa caractere biochimice: in functie de fermentarea glucozei si zaharozei, se realizeaza diagnosticul de specie (exista 3 specii importante: C-Dift, C-Ovis, C-Ulcerans). In functie de fermentarea polizaharurilor (glicogen si dextrina) se realizeaza diagnosticul de tip: Gravis, Mitis, Intermedius. Alte teste de identicare: 1.Testul PISU - se face pentru evidentierea hidrogenului sulfurat (H2S). - se foloseste un mediu turnat in eprubeta care contine acetat de plumb si cistina (mediu semi-solid). acest mediu se insamanteaza prin intepare. in cazul unui test pozitiv, pe locul insamantarii va aparea o dunga neagra datorita producerii de H2S care in contact cu acetatul de plumb produce sulfura de plumb de culoare neagra. 2.Reactia de aglutinare pe lama cu ser antidifteric. 3.Testul de toxigeneza in vitro (testul Elek) - se face pentru evidentierea capacitatii toxigenice a tulpinei bacteriene. 4.Testul de toxigeneza in vivo - se realizeaza prin inoculare intradermica la iepurasi sau subcutan la cobai. 5.Sensibilitatea la antibiotice - aceste bacterii sunt sensibile in special la Penicilina si Eritromicina.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE PRODUSE DE LISTERIA MONOCITOGENAS - acesti germeni sunt larg raspanditi in natura, ind patogeni atat pentru oameni, cat si pentru animalute. - se transmit pe cale aerogena, sau conjunctivala, apoi difuzeaza pe cale hematogena sau limfatica, ajungand in tesuturi unde se multiplica. - prezinta tropism sau anitate pentru tesuturile neuromeningeale si pentru aparatul genital feminin. - fatul se poate contamina de la mama transplacentar sau in momentul expulziei. recoltare: LCR, sange, secretii vaginale, secretii oculare, placenta, lichid amniotic. Pot produce meningite, infectii genitale, infectii oculare, septicemii, endocardite etc. Caractere morfologice: - listeriile sunt bacilli gram+ de dimensiuni mici (mai mici decat celelalte specii de bacilli gram+), forma lor variind in functie de vechimea culturilor. astfel: in culturi tinere si in prelevate proaspete se vor observa la microscop forme cocobacilare de dimensiuni mici, usor incurbate. in culturi vechi se vor observa forme lamentoase, bacilare. - listeriile sunt mobile, necapsulate si nesporulate. sunt asezate izolat, in diplo, in lanturi scurte, sau sub forma unor litere (V,Y,X etc).
2

BACTERIOLOGIE - LP1 - 28.02.2013

Caractere de cultura: - pe medii solide formeaza colonii transparente, rotunde, cu margini regulate, care pe mediul geloza-sange produc un fenomen de hemoliza de tip beta (adica hemoliza totala). - pe medii solide transparente cum este geloza simpla, vor aparea colonii translucide, rotunde, cu margini regulate, care in lumina oblica prezinta irizatie verzuie. Caractere biochimice: - aceste bacterii sunt: a.catalazo-pozitive b.mobilitatea se testeaza prin insamantarea pe un mediu geloza-semisolida pe care se va observa aparitia unei zone ca o umbrela la suprafata mediului cu dimensiunea 2-5mm. c.fermentarea glucozei. nu produce hidrogen sulfurat. d.creste la 4grade Celsius. Examinarea LCR-ului are o mare importanta pentru bacteriolog, deoarece listeria monocitogenes reprezinta a5a cauza de producere a meningitelor de tip bacterian, dupa Hemophilusul inuenze, neisseria meningitidis, Streptococul pneumoniae, Streptococul de grup B. Alte teste de identicare: 1.Testul de patogenitate numit Anton. - se realizeaza prin inocularea in sacul conjunctival la cobai, la un ochi, de cultura bacteriana, celalalt ochi ind considerat martor. dupa 24-48h, va aparea o conjunctivita purulenta severa, din secretia respectiva realizandu-se frotiuri si observandu-se la microscop listeria. 2.Testele serologice care se realizeaza folosind reactiile de aglutinare pe lama, hemaglutinare, reactia de xare de complement (RFC) si reactia de imunoprecipitare (RIP) - toate acestea se realizeaza de preferinta in dinamica, adica folosindu-se 2-3 probe de ser de la bolnavi, probe recoltate la interval de 15zile.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE PRODUSE DE BACILLUS - germenii din acest gen sunt larg raspanditi in natura -in sol, apa, pe plante si chiar in alimente. - dpdv morfologic sunt bacilli gram+, mobili sau imobili, capsulati sau necapsulati, sporulati, aerobi, facultativ anaerobi. - acesti germeni secreta si o serie de antibiotice dintre care unele active in special pe germeni gram+ precum Bacitracina, iar altele active in special pe germeni gram- precum Polimixina si Colistinul. - doua specii sunt mai importante in patologia umana: 1.Bacillus antracis - este bacilul patogen al antraxului. 2.Bacillus cereus -este agentul patogen al unor toxinfectii alimentare

BACTERIOLOGIE - LP1 - 28.02.2013

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE PRODUSE DE BACILLUS ANTRACIS - este agentul patogen al unor zoonoze (boli care se transmit de la animal) intalnite in special la ierbivore. - aceste bacterii se intalnesc in tesuturile si umorile animalelor de la care ajung pe sol prin dejectiile acestora, pe sol intalnind conditii prielnice pentru a sporula. Caractere morfologice: - sunt bacilli gram+ de dimensiuni mari, cu capete taiate drept sau usor concave si care prezinta spor, de obicei situat central, avand diametrul mai mic sau egal cu diametrul bacteriei. sporul este de forma ovoida. Sporul se formeaza numai in prezenta oxigenului. Caractere de cultura: - pe medii solide se dezvolta colonii alb-cenusii de dimensiuni mari, de tip R (sunt plate, cu margini neregulate si zbarcite). - pe medii geloza-sange nu produc hemoliza! - pe medii lichide, acesti germeni formeaza ocoane la fundul eprubetei, mediul ramanand limpede. Caractere biochimice - sunt catalazo-pozitive. - fermenteaza glucoza, lactoza si zaharoza. - nu produc ureeaza. - nu produc hemoliza pe medii geloza-sange. Alte teste de identicare 1.Testul de demonstrare a prezentei capsulei - se face prin insamantare pe medii selective cu adaos de bicarbonat de sodiu. 2.Testul de determinare a mobilitatii - se identica folosind un mediu cu continut de acetat de taliu pe care bacillus antracis apare imobil, iar bacillus cereus prezinta mobilitate. 3.Testul de patogenitate la animale (in vivo) - se realizeaza prin inoculare intraperitoneala la cobai. 4.Reactia Ascoli - se face punand in contact extract de tesut infectat cu ser imun. 5.Testele serologice - vor evidentia anticorpii in serul oamenilor infectati sau a celor vaccinati. 6.Testul de detectare a producerii de toxina care se realizeaza prin teste imunologice
4