1

In folio isotopic tracing demonstrates that nitrogen

assimilation into glutamate is mostly independent
from
current CO2 assimilation in illuminated leaves of
Brassica
napus
Dalamfolioisotoptracingmenunjukkan bahwanitrogen
asimilasimenjadi glutamatsebagian besarindependendari
asimilasiCO2saat ini didaunditerangidariBrassica
napus
Ringkasan
Nitrogen asimilasi daun membutuhkan primer NH2 akseptor
yang, pada gilirannya,
berasal dari metabolisme karbon primer. Metabolisme
pernapasan diyakini
memberikan akseptor tersebut (seperti 2-oksoglutarat),
sehingga hari respirasi umumnya
dilihat sebagai landasan untuk asimilasi nitrogen menjadi
glutamat dalam diterangi
daun. Namun, baik glikolisis dan hari evolusi CO2 pernapasan
diketahui
dihambat oleh cahaya, sehingga mengorbankan masukan
karbon fotosintesis baru-baru ini
untuk produksi glutamat.
Dalam studi ini, kami melakukan percobaan pelabelan isotop
dengan 13CO2 dan 15Nammonium
nitrat pada daun terpisah dari rapeseed (Brassica napus), dan
dilakukan
Analisis 13C-dan resonansi magnetik 15N-nuklir.
Hasil penelitian kami menunjukkan bahwa produksi 13C-13C-
glutamat dan glutamin
dalam atmosfir 13CO2 sangat lemah, sedangkan 13C-13C-
glutamat dan glutamin
muncul di kedua periode gelap berikutnya dan periode
berikutnya cahaya di bawah
suasana 12CO2. Secara konsisten, analisis heteronuklir (13C-
15N) interaksi
dalam molekul menunjukkan bahwa sebagian besar molekul
15N-15N-glutamat dan glutamin
tidak berlabel 13C setelah 13C / 15N pelabelan ganda. Artinya,
karbon baru-baru ini
atom (yaitu 13C) hampir tidak dimasukkan ke dalam glutamat,
tetapi molekul glutamat baru
disintesis, sebagaimana dibuktikan oleh 15N penggabungan.
Kami menyimpulkan bahwa remobilization molekul-malam
disimpan memainkan signifikan
peran dalam menyediakan 2-oksoglutarat untuk sintesis
glutamat dalam diterangi rapeseed
daun, dan oleh karena itu hari alami: siklus malam tampaknya
penting untuk nitrogen
asimilasi.
pengantar
Sekarangdiakuibahwapertumbuhan dan perkembangan
tanaman
tergantung padainteraksi antarakarbondannitrogen
jalur metabolik. Memang, tingkatoptimaltanaman
produksi biomassadanfotosintesis(CO2 fiksasi)
membutuhkan pasokannitrogenyang memadai, yang, pada
gilirannya, berhubungan
dengan kerugianCO2melalui respirasiuntuk penyerapannitrat,
pengurangan danasimilasiuntuk senyawaorganik(untuk
review,lihatLawlor, 2002). Interaksikarbon-nitrogen
Oleh karena itulandasan untukproduktivitas tanaman, danlebih
baik
pemahamandasarmetabolismeinteraksi tersebut
sangat pentinguntuk perbaikan masa depan(Lawlor, 2002).
Dalamdaunditerangi, pengurangannitrogendan asimilasi
melibatkanoperasinitrat dannitritreduktase(EC
1.6.6.1danEC1.7.7.1) danglutaminsintetase/glutamin-
2-oksoglutarat aminotransferase(GS /GOGAT, EC
6.3.1.2EC1.4.1.13) jalur, yang menghasilkanglutamat
(Glu) untuk biosintesis asam amino lain (untuk review baru-
baru ini,
lihat Forde & Lea, 2007). Peraturan GS dan nitrat
aktivitas reduktase (misalnya ketersediaan pereduksi) adalah
seperti
bahwa daun asimilasi nitrogen terutama dicapai dalam terang
relatif terhadap gelap sebagai akibat dari kebutuhan untuk ATP
dan reduktan dari beberapa enzim nitrogen-assimilatory
(Delhon et al, 1995;. Stitt et al, 2002.). Akar tetap saja
bertanggung jawab untuk sebuah variabel, proporsi spesies-
spesifik
reduksi nitrat baik dalam gelap atau terang (Radin,
1977, 1978). Pelabelan 15N-isotop telah lebih jauh
menunjukkan bahwa
molekul nitrat yang tidak dikonsumsi oleh akar dalam
gelap yang diekspor ke daun (pucuk), di mana mereka
menumpuk
dan menjadi tersedia untuk pengurangan selama berikutnya
periode cahaya (Gojon et al., 1986). Meskipun konten daun
nitrat
yang biasanya besar (Gojon et al., 1986), sehingga
memungkinkan
pengenceran isotop dan pelabelan 15N agak penghambat,
beberapa daur ulang nitrogen (misalnya hidrolisis protein)
diperkirakan
terjadi pada sel-sel daun (Bauer et al, 1977;. dan melihat
Tcherkez
& Hodges, 2008 untuk review).
Sebaliknya, asal atom karbon (dalam bentuk 2 -
oksoglutarat) untuk Glu dan glutamin (Gln) produksi
saat ini jauh lebih baik ditandai. Hari respirasi mungkin
memainkan peran kunci dalam menyediakan kerangka karbon
melalui
operasi dari asam trikarboksilat (TCA) siklus dan, sesuai,
telah menunjukkan bahwa tingkat hari respirasi Rd
(Evolusi CO2 pernafasan pada cahaya) sensitif terhadap
nitrogen
asimilasi (Guo et al., 2005). Selain itu, perhitungan
berdasarkan daun sitrat konten yang tersedia di awal
periode cahaya menunjukkan bahwa itu tidak cukup untuk
memberi makan 2 -
sintesis oksoglutarat untuk produksi Glu (Stitt et al.,
2002). Oleh karena itu, hari respirasi mungkin penting untuk
melengkapi
Sintesis 2-oksoglutarat, mungkin disertai
oleh aktivitas anaplerotic dari karboksilase fosfoenolpiruvat
(PEPc, EC 4.1.1.31; Huppe & Turpin, 1994). Namun,
itu diterima dengan baik bahwa daun respirasi dihambat oleh
cahaya (untuk review, lihat Atkin et al., 2000) dan berhubungan
dengan fluks dibatasi melalui enzim siklus TCA (Hanning
2

& Heldt, 1993; Tcherkez et al, 2005).. Selain itu,
mutan yang terkena dampak baik akonitase (EC 4.2.1.3) atau
isocitrate
dehidrogenase (EC 1.1.1.41 dan 1.1.1.42 EC) aktivitas
tidak menunjukkan penurunan yang signifikan dalam biomassa
tanaman atau
kandungan nitrogen (Kruse et al, 1998;. Carrari et al, 2003.;
Lemaitre et al., 2007). Hasil yang bertentangan tersebut
menunjukkan bahwa
mungkin sumber karbon yang feed produksi Glu
dapat terdiri dari kedua baru disintesis (TCA diturunkan) dan
remobilized (misalnya berasal dari malam sitrat) 2-oksoglutarat
molekul. Dengan demikian, 14C-label dan radiometrik studi
hari-berevolusi CO2 menunjukkan bahwa hingga 40% dari
CO2 berasal dari dekarboksilasi disimpan, rendah berubah-over
karbon molekul (Parnik et al., 2002). Namun demikian, untuk
kami
pengetahuan, tidak ada studi metabolik yang baik ditunjukkan
dan
dihitung kontribusi asimilasi CO2 saat ini
dan remobilization penyimpanan sebagai sumber karbon untuk
sintesis Glu.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kontribusi
tetap dan disimpan karbon saat ini untuk Glu sintesis. Untuk
alamat tujuan ini, kami menyelidiki sintesis utama
metabolit (Glu dan intermediet pernafasan) dalam terang
menggunakan 13C ganda dan pelabelan 15N. Pelabelan ganda
isotop
telah digunakan di tingkat pabrik untuk memperkirakan
partisi nitrogen dari komposisi isotop alaminya
dari total bahan organik (lihat, misalnya, Maillard et al.,
1994), namun, untuk pengetahuan kita, jalur metabolisme
setelah
pelabelan ganda tidak pernah diperiksa. Dalam studi ini,
daun diterangi dari rapeseed (Brassica napus) diberi label
dengan 13CO2 dan 15N-amonium nitrat, dan kemudian
dianalisis dengan 13C-dan resonansi magnetik nuklir 15N-
(NMR), untuk melacak 13C dan 15N atom dalam metabolit dan
untuk mendeteksi molekul double-berlabel (yaitu simultan 13C
dan 15N dalam molekul tunggal) ditandai dengan spin-berputar
interaksi. Hasil penelitian kami menunjukkan bahwa mayoritas
15NGlu
dan molekul 15N-Gln tidak berlabel 13C, sedangkan
sampai satu-setengah dari 13C-13C atau Glu-Gln kolam renang
juga 15N
berlabel. Perbedaan ini menunjukkan bahwa bagian penting
dari
rangka karbon yang berasal dari asimilasi saat ini
melalui hari respirasi digunakan untuk asimilasi nitrogen,
sedangkan seperti masukan karbon secara kuantitatif
sederhana dengan
sehubungan dengan asimilasi total nitrogen.
Bahan dan Metode
Bahan tanaman
Biji tanaman perkosaan (Brassica napus L. var. Oleifera cv.
Darmor)
berkecambah dalam cawan Petri pada kertas filter. Setelah
72 h, bibit dipindahkan ke 500 ml pot yang diisi dengan
campuran pot. Tanaman yang ditanam di rumah kaca di bawah
22 C: 18 C, 60%:? 55% kelembaban relatif, 16 h: 8 jam
penyinaran (hari: malam) seperti yang dijelaskan oleh Vartanian
et al.
(1987). Tanaman secara otomatis disiram tiga kali sehari
dengan larutan nutrisi (Hydrokani C2, Yara, Chambourcy,
Prancis) di mana amonium nitrat diperiksa untuk
pada kelimpahan 15N alami (d15N = 2,69 0,61 &, di mana
d15N adalah komposisi isotop nitrogen sehubungan dengan
atmosfer N2), yaitu 0,37%. Karbon dioksida di udara adalah
pada kelimpahan 13C alami (d13C =) 8.92 0.55 &, di mana
d13C adalah komposisi isotop karbon sehubungan dengan
VPDB),
yaitu 1,1%.
Bahan kimia
Pelabelan percobaan dilakukan dengan 13CO2 99%
(Air Liquide, Grigny, Prancis). CO2 biasa (di dekat-alam
kelimpahan, yaitu, 1,1%) memiliki nilai d13C dari
) 50,05 0,49 & (Air Liquide). Solusi Feeding disediakan
daun terpisah semua pada 15 mmol l) 1 amonium
nitrat, baik 99% diperkaya 15N (ISOTEC-Sigma-Aldrich,
Saint Quentin Fallavier, Prancis) atau kelimpahan alami
(D15N =) 0,18 0,06 &) (Prolabo, Fontenay-sous-Bois
France). Dalam semua kasus, pH diatur sampai pH 7 dengan
HCl.
Metode Pemberian label dan pertukaran gas
Dalam semua percobaan, daun kelima peringkat (dari puncak)
pada 6 -
tanaman wk berusia digunakan (luas permukaan rata-rata 90
cm2).
Setelah 7 jam cahaya dalam rumah kaca, daun dipotong di
bawah air
dan ditransfer ke kegelapan selama 30 menit. Hal itu kemudian
ditempatkan
dalam asimilasi ruang tujuan-dibangun terhubung ke
tabung sampel dari Li-6400 sistem terbuka (Licor, Lincoln,
Nebraska, USA), sebagaimana telah dijelaskan oleh Tcherkez et
al.
(2005). Setiap daun diterangi selama 1 jam [400 lmol m) 2
s) 1 photosynthetically radiasi aktif (PAR), 21? C, 21%
O2] dengan CO2 pada kelimpahan 13C alam (1,1% 13C) untuk
mencapai steady state fotosintesis. Setiap daun kemudian
bersamaan dengan makan 15N-amonium nitrat pada saat yang
sama
waktu CO2 yang berubah menjadi 99% 13CO2. Durasi
pelabelan adalah 1, 6 atau 12 jam, setelah daun itu segera
dibekukan dalam nitrogen cair. Dalam satu set percobaan,
6 jam cahaya dalam 13CO2 diikuti oleh salah satu 4 jam
kegelapan, atau 4 jam kegelapan diikuti oleh 6 jam dalam CO2
di alam
13C kelimpahan.
Selama percobaan, fraksi mol CO2 di udara
(Ca) dipertahankan pada kedua 400 lmol mol) 1 (biasa
kondisi) atau 100 lmol mol) 1 (sangat photorespiratory
kondisi). Percobaan Identik dilakukan dengan menggunakan
hanya CO2 dan amonium nitrat pada kelimpahan isotop alami,
kontrol sebagai NMR (untuk 13C-15N dan pengayaan
perhitungan, lihat di bawah). Semua sampel disimpan pada)
80? C
sebelum ekstraksi untuk NMR analisis.
NMR
Asam perklorat ekstrak dibuat dari 2,5 g beku
material daun, seperti yang dijelaskan oleh Aubert et al. (1996)
untuk
3

sel floem dan diterapkan di Tcherkez et al. (2005) untuk
daun. Kedua 15N-dan spektrum 13C-NMR direkam
menggunakan spektrometer Bruker NMR (AMX 400, bore lebar,
Bruker, Wissenbourg, Prancis) dilengkapi dengan 10 mm
Probe multinuclear disetel pada 40.55 MHz.
Akuisisi 13C-NMR dilakukan dengan 19 ls pulsa
(90?) Pada 6 s interval dan lebar sapuan 20 kHz. Broadband
decoupling pada 2,5 W pada saat akuisisi dan 0,5 W
selama penundaan itu diterapkan dengan menggunakan urutan
Waltz; sinyal
telah didigitalkan menggunakan 32 000 titik data zero-diisi
sampai
64 000 dan diproses dengan 0 Hz garis perluasan. 13CNMR
Spektrum direferensikan ke Hexamethyldisiloxane di
2.7 ppm Mn2 + ion yang chelated dengan penambahan
1 mmol l) 1 asam 1,2-cyclohexylenedinitrilotetraacetic. Itu
penugasan resonansi 13C puncak dilakukan
menurut Gout et al. (1993).
Akuisisi 15N-NMR dilakukan dengan 8 ls pulsa
(70?) Pada 2 s interval dan lebar spektrum 16 kHz.
Broad-band decoupling pada 10 W pada saat akuisisi dan
0,5 W selama penundaan diterapkan menggunakan urutan
Waltz, yang
sinyal yang didigitalkan menggunakan 64 000 titik data zero-
diisi sampai
128 000 dan diproses dengan baik 0,5 atau 0,2 Hz eksponensial
garis pelebaran. Spektrum 15N-NMR direferensikan
15N-amonium klorida (pH 7,5 di H2O/D2O 20%) di
0 ppm. Senyawa yang teridentifikasi tersebut dihitung dari
daerah puncak resonansi.
Dalam kasus interaksi spin-berputar antara 15N dan 13C
atom atau antara 13C atom, sinyal isotop dianggap
sebagai jumlah dari multiplet. Dalam kedua 13C dan teknik
15N,
intensitas puncak yang dinormalisasi untuk diketahui
jumlah senyawa referensi internal (500 lmol
maleat untuk 13C-NMR dan 5 lmol b-alanine untuk 15NNMR),
yang ditambahkan ke sampel selama ekstraksi.
Pengkayaan isotop dihitung dengan menggunakan isotop relatif
sinyal (13C atau 15N sinyal dinormalisasi dengan referensi
senyawa) diperoleh setelah pelabelan dibagi dengan yang
diperoleh setelah percobaan kontrol (kelimpahan alami)
dan kemudian dikalikan dengan kelimpahan alam (1,1% untuk
13C dan 0,37% untuk 15N). Untuk perhitungan 15N-pengayaan,
setiap perubahan dalam tingkat transpirasi (penyerapan daun
amonium nitrat melalui aliran transpirasi) adalah
diperhitungkan dengan mengalikan dengan rasio transpirasi
antara percobaan 15N dan yang dilakukan di alam
kelimpahan. 13C-15N interaksi spin spin yang dihitung
(Dalam%) dengan membagi sinyal sesuai dengan interaksi
puncak (s) dengan total sinyal isotop.
Analisis Clustering
Data 13C-NMR diwakili sebagai isotopomic
array, seperti yang dijelaskan dalam Tcherkez et al. (2007).
Posisional The
kelimpahan isotop (di 13C%) relatif terhadap 13C alam
kelimpahan (1,1%) ditandai dengan warna, sehingga hitam
sel menunjukkan kelimpahan dekat-alam, dan hijau dan merah
sel menunjukkan lebih rendah dan lebih tinggi dari kelimpahan
13C alam,
masing-masing. Analisis pengelompokan dilakukan dengan
MeV 4.1 software (Saeed et al., 2003) dan didasarkan pada
metode korelasi cosinus.
Hasil
13C asimilasi dan penelusuran di metabolit
CO2 Fiksasi dipantau dengan sistem pertukaran gas,
dan fotosintesis asimilasi, transpirasi dan intern
Konsentrasi CO2 diukur secara bersamaan (nilai-nilai
ditunjukkan pada Gambar. 1). Ada penurunan sekitar
empat kali lipat dalam tingkat asimilasi CO2 di bawah sangat
photorespiratory
kondisi (Gambar 1a). Ini setuju dengan
penurunan diamati dalam fraksi mol CO2 intern (300 sampai
75 lmol mol) 1) antara normal dan tinggi photorespiratory
kondisi masing-masing (Gambar 1c). Stomata conduc-
dikan diamati untuk menjadi sedikit lebih tinggi pada 100 lmol
mol) 1
CO2, dan oleh karena itu penyerapan amonium nitrat
melalui aliran transpirasi juga lebih tinggi. Perbedaan ini
diperhitungkan ketika menghitung relatif
Isi 15N dari Glu (lihat di bawah, Gambar. 2).
13C pengayaan metabolit ditunjukkan pada Gambar. 3, di
mana sel-sel merah mewakili 13C kelimpahan di atas alam
kelimpahan. Empat kelompok utama yang berbeda diperoleh
dengan
analisis hirarki pengelompokan (Gambar 3, kiri). Tanpa
memperhatikan
dari kelompok-kelompok tersebut, metabolit yang paling
berlabel (13C utama
tenggelam di bawah kondisi percobaan kami) adalah glisin
(Gly), serin (Ser), malate (Mal), aspartat (Asp), alanin
(Ala), valin, Glu dan Gln. Pola seperti itu tidak terlalu
sensitif terhadap fotorespirasi, kecuali untuk nilai dari
kelompok pertama.
The C-3 dan C-4 posisi atom di Glu dan C-1 dan
C-5 posisi di Gln semua dalam kelompok pertama
(I), yang juga termasuk C-2 dan C-3 posisi atom
Asp dan Mal, dengan demikian menunjukkan bahwa PEPc-
katalis
carboxylation dari 13C-diperkaya fosfoenolpiruvat
terjadi, dan ini, pada gilirannya, berlabel molekul hilir,
seperti Glu, melalui siklus TCA (lihat juga metabolisme
skema pada Gambar. S3, Informasi Pendukung).
Dengan demikian, pola 13C-label di C-2 atom
posisi di Glu dan Gln covaried dengan yang di C-1 atau C-
4 di Mal (kelompok IV). Selain itu, label yang sangat mirip
di C-1 dan C-4 di Mal menunjukkan bahwa Mal / fumarat
keseimbangan mundur berlangsung dan didistribusikan
label 13C PEPc diturunkan di C-4 ke dalam C-1 posisi.
Sitrat C-3 muncul label dan bergerombol dengan yang terakhir
Posisi Mal, sedangkan posisi C-1 dan C-5 atom
hampir tidak berlabel. Pengamatan ini dapat
dipertanggungjawabkan
oleh pengenceran isotop pengayaan 13C melalui
glikolisis dan pengalihan posisi C-2 atom
piruvat ke Ala, yang memang sangat 13C
diperkaya. Akibatnya, sebagian besar label 13C ditemukan di
sitrat
adalah bahwa berasal dari fosfoenolpiruvat
melalui PEPc dan sintase sitrat. Perlu dicatat bahwa
suksinat selalu buruk berlabel dan hanya dipamerkan
pelabelan lemah di C-2 / C-3 ketika periode 13CO2 pelabelan
dalam terang diikuti oleh 4 jam kegelapan dan 6 jam dalam
4

cahaya dengan 12CO2 (paling kanan mentah). Hal ini
menunjukkan bahwa
molekul suksinat tidak diberi label oleh 13CO2 dalam
cahaya di bawah kondisi kami dan bahwa sintesis 13Csuccinate
diperlukan terjadinya respirasi gelap. Sebagai Glu
dan Gln tampaknya diberi label oleh 13CO2, mungkin
sintesis mereka dari molekul 2-oksoglutarat dibentuk oleh
siklus TCA (oleh dehidrogenase isocitrate) adalah
disukai dengan mengorbankan sintesis suksinat.
Namun demikian, dalam semua kondisi eksperimental (kolom),
Glu posisi C-atom tampaknya kurang 13C
diperkaya (hingga 30% 13C) dibandingkan di Mal (hingga 66%
13C), menunjukkan bahwa molekul Mal dibentuk melalui
aktivitas PEPc
tidak sepenuhnya berkomitmen untuk produksi Glu, dan / atau
13C-habis, molekul berlabel berkontribusi terhadap produksi
Glu.
13C pengayaan metabolit kunci selama cahaya: gelap
sepeda
Gambar 4 merupakan pengayaan 13C relatif dalam kunci
metabolit (C-3 sitrat dan rata-rata 13C pengayaan di Ala,
Asp, Glu, Gln dan Mal) pada tiga kali pengambilan sampel: (1)
setelah
6 jam cahaya dengan 13CO2, (2) setelah 6 jam cahaya dengan
13CO2 dan
30 menit gelap, dan (3) setelah 6 jam cahaya dengan 13CO2
diikuti
oleh 4 jam kegelapan dan 6 jam cahaya dengan CO2 di 13C
alami
kelimpahan. Percobaan ini dilakukan di bawah yang normal
(Bar putih, Gambar. 4) dan tinggi (bar hitam, Gambar. 4)
photorespiratory
kondisi, namun, kecenderungan yang sama untuk masing-
masing
metabolit diamati pada kedua tingkat CO2. 13C The
pengayaan adalah relatif terhadap C-5 posisi atom glukosa
(GLC) untuk menormalkan data dengan fotosintesis yang
masukan isotop. The C-5 pengayaan atom di GLC adalah
dipilih di sini sebagai puncak GLC dapat diandalkan untuk
pengukuran 13C sebagai
itu cukup dipisahkan dari sinyal lain di NMR spektra
(karbohidrat
wilayah pergeseran kimia) dan, dengan demikian,
meminimalkan
tumpang tindih sebagai akibat dari interaksi 13C-13C dalam
karbohidrat.
Ala dan Asp menunjukkan pengayaan 13C relatif cukup rendah
setelah 6 jam dari 13CO2 pelabelan (waktu sampling 1), dan
kemudian
meningkat tajam dalam gelap (waktu sampling 2), yang
mengindikasikan
meningkatnya komitmen dari 13C substrat untuk Asp
dan Ala sintesis dalam gelap. 13C-Ala sebagian besar hilang
pada saat pengambilan sampel 3, menunjukkan baik
pengenceran isotop oleh
12CO2 atau konsumsi 13C-Ala dalam terang. Dalam
percobaan ini, pengenceran isotop mungkin tidak cukup untuk
menjelaskan isi 13C lebih rendah di Ala karena
isi 13C rendah diperoleh setelah 6 jam pelabelan dengan
13CO2 (waktu sampling 1). Pola yang sama terjadi untuk
Asp. Oleh karena itu kami menyimpulkan bahwa, terlepas dari
photorespiratory yang
kondisi, dan Asp Ala disintesis baik dalam
kontribusi terang dan gelap, dan simultan
asimilasi saat ini dan karbon yang tersimpan menghambat
isotop mereka
variasi dalam terang.
Sitrat, Gln, Glu dan Mal menunjukkan pola yang sangat mirip,
dengan peningkatan 13C pengayaan dari sampel
waktu 1 sampai 3 (Gambar 4). Perilaku serupa ini menunjukkan
masuk akal jalur sintetis umum. Sangat besar
peningkatan pengayaan 13C pada 12CO2 pelabelan (c. 10 kali
lipat
relatif terhadap waktu sampling 1) sangat kontras dengan yang
diamati setelah 30 menit dalam gelap (kurang dari dua kali
lipat),
sehingga sangat menunjukkan bahwa sintesis Glu yang
terjadi dalam cahaya sebagian berasal dari 13C-diperkaya
karbon dari periode cahaya sebelumnya. Namun, hal itu
mungkin
dikatakan bahwa peningkatan jumlah 13C relatif
sitrat, Gln, Glu dan Mal di bawah 12CO2 pelabelan (Gambar 4)
bisa jadi akibat dari penurunan jumlah 13C di
GLC C-5 (isotop pengenceran oleh 12C). Namun demikian,
jumlah 13C di GLC C-5 tidak berubah dari 6 jam
cahaya + 30 menit sampai 6 jam kegelapan cahaya + 4 jam
kegelapan + 6 jam
ringan, tetap dekat dengan 1,1% (Gambar 3). Dengan kata lain,
ada peningkatan yang jelas dalam jumlah rata-rata 13C
sitrat, Gln, Glu dan Mal di bawah cahaya 12CO2.
Dengan demikian, konsumsi karbon terbaru yang memiliki
baru saja diperbaiki untuk menghasilkan Glu kecil dalam cahaya
itu:
persentase karbon baru-baru ini di Glu adalah 0% dan 56%
hanya setelah 1 jam dan 12 jam pelabelan, masing-masing
(dihitung
dari Gambar. 3). Dengan kata lain, tingkat perputaran karbon
atom di Glu dalam terang adalah serendah 0.046 mol mol) 1
h) 1. Seperti pola 13C variasi pada label adalah
tidak peka terhadap kondisi photorespiratory, sebagaimana
dibuktikan
oleh variasi pengayaan 13C sangat mirip di bawah 100
lmol mol) 1 CO2 (plot yang lebih rendah, Gambar. 4).
13C-15N interaksi spin spin
13C-15N spin-berputar interaksi diamati oleh NMR
antara 13C dan 15N inti ditunjukkan pada Gambar. 5. Interaksi
dihitung baik menggunakan 13C-NMR (JCN, a) atau
15N-NMR (JNC, b). Penafsiran yang sesuai
13C daerah pergeseran kimia yang terkait dengan Glu
ditampilkan
pada Gambar. 6. Jumlah rata-rata 13C molekul yang
juga 15N berlabel hampir selalu <60%. Cukup mengejutkan,
jumlah molekul 15N yang juga 13C
berlabel berbeda dengan jelas, kecuali Gly dan Ser, itu
dari 13C molekul yang juga berlabel 15N. Di lain
kata-kata, populasi 15N dan 13C molekul yang berbeda,
dengan beberapa individu umum.
Kecuali untuk Gly dan Ser, semua 15N-Asp, 15N-Ala, 15N-Glu
dan 15N-Gln tidak diberi label dengan 13C, jelas menunjukkan
bahwa sebagian besar kelompok-15N amino baru-baru ini tidak
tetap
ke baru-baru ini, kerangka karbon 13C-diperkaya. Namun,
5

hingga
60% dari 13C-oksoglutarat, 13C-13C piruvat dan oksaloasetat-
molekul yang terbentuk dalam terang yang tetap ke baru-baru
ini
Kelompok 15N-amino. Perbedaan ini menunjukkan bahwa 13C
asimilasi menjadi asam amino tidak erat digabungkan ke 15N
asimilasi, mungkin karena keterlibatan disimpan
Kerangka 12C karbon. Pola kontras di Gly dan
Ser itu tentu terkait dengan omset yang sangat besar mereka
terkait dengan fotorespirasi, sehingga sampai 50% dari 15NGly
dan molekul-15N Ser juga 13C berlabel. Ini
turnover tinggi (Canvin, 1979) menjelaskan adanya
perbedaan yang diamati antara alam dan tinggi
photorespiratory
kondisi dalam penelitian ini.
Komitmen keseluruhan dari 13C dan label 15N ke Glu
13C dan 15N jumlah relatif di Glu (yaitu, 13C yang
dan 15N sinyal isotop dibagi dengan total 13C berasimilasi
dan jumlah 15N diserap, masing-masing) diplotkan terhadap
satu sama lain dalam Gambar. 2, di mana data sesuai dengan
label
dengan 13CO2 untuk 1, 6, dan 12 jam. Meskipun relatif
Jumlah 13C meningkat dengan jumlah CO2 tetap,
Jumlah 15N relatif semakin menurun sebagai akibat dari
akumulasi 15N-amonium nitrat dalam daun dengan
penyerapan berkelanjutan melalui transpirasi yang
aliran. Pada 400 lmol mol) 1 CO2, jumlah 13C relatif
tetap meningkat kurang antara 6 dan 12 jam dibandingkan
antara
1 dan 6 jam, yaitu mulai jenuh. Presaturation ini
juga terlihat pada Gambar. 3, sebagai pengayaan 13C spesifik di
Glu
C-2 adalah sedikit lebih rendah setelah 12 jam dari setelah 6
jam pada
400 lmol mol) 1 CO2. Dalam kondisi photorespiratory tinggi
(100 lmol mol) 1 CO2), efek presaturation seperti
hampir menghilang, dengan peningkatan yang jelas dalam
relatif
Jumlah 13C antara 6 dan 12 jam (Gambar 2) dan spesifik yang
lebih besar
13C pengayaan di Glu C-2 pada 12 jam dibandingkan dengan 6
jam
(Gambar 2). Dengan kata lain, tampaknya ada omset yang lebih
besar
dari Glu bawah suku fotorespirasi tinggi.
Diskusi
Meskipun menjadi landasan untuk asimilasi nitrogen
oleh tanaman, masih ada banyak ketidakpastian tentang asal
kerangka karbon yang diperlukan untuk sintesis Glu di diterangi
daun. Agaknya, sumber karbon untuk produksi Glu
dalam cahaya datang dari kedua baru disintesis
(Via fotosintat melalui siklus TCA) dan remobilized
(Berasal dari metabolit yang dihasilkan pada malam hari)
Molekul 2-oksoglutarat. Namun, saat ini belum ada
penilaian yang berkaitan dengan kepentingan relatif dari
sumber karbon tersebut. Dalam studi ini, kami mengambil
keuntungan
teknik isotop dan pelabelan dengan 13CO2 dan
15N-amonium nitrat, dan dilakukan analisis dengan
13C-NMR dan 15N-.
Siklus TCA dalam terang
Pola pengayaan isotop intermediet pernapasan
setelah 13CO2 makan menunjukkan bahwa siklus TCA adalah
mungkin terlibat dalam produksi Glu dalam terang,
sebagaimana dibuktikan
oleh pengayaan 13C di Glu dan Gln (Gambar 3).
Pola pengayaan 13C di sitrat, Glu dan Gln
tampaknya sangat mirip (Gambar 4), menunjukkan bahwa Glu
dan Gln adalah penyerap karbon utama untuk yang baru
berasimilasi 13C
atom berkomitmen untuk siklus TCA. Yang penting, suksinat
selalu buruk, jika sama sekali, diberi label, sangat menunjukkan
bahwa
label 13C ([13C]-2-oksoglutarat) diarahkan untuk Glu / Gln
sintesis dengan mengorbankan suksinat. Kesimpulan semacam
ini
konsisten dengan data biokimia diterbitkan. Yakni, 2-
oksoglutarat
dehidrogenasi untuk suksinil-CoA diyakini
(1) terhambat oleh persaingan untuk Koenzim A dan E3
subunit enzimatik antara piruvat dehidrogenase dan 2 -
dehidrogenase oksoglutarat (Kering & Wiskich, 1987; Budde
et al, 1991;. Millar & Kunst, 1999), dan (2) dihambat oleh
besar rasio NADH / NAD dalam matriks mitokondria
(Igamberdiev & Ga rdestrom, 2003). Artinya, produksi
dari suksinat cukup rendah dalam terang.

Dalam kerangka tersebut, keterlibatan PEPc adalah
penting untuk regenerasi oksaloasetat dan melengkapi sitrat
sintesis (peran anaplerotic). Bahkan, Mal tampaknya
berlabel di semua posisi C-atom, dan pengayaan 13C di
C-4 covaried dengan posisi C-atom dari Glu (jalan
diikuti oleh atom diberikan pada Gambar. S3, lihat Informasi
Pendukung).
Meskipun konten daun fumarat rendah (tidak
dideteksi dengan 13C-NMR), keseimbangan antara Mal dan
fumarat mungkin terjadi, sehingga menjelaskan sangat
Pola pengayaan 13C serupa di C-1 dan C-4 posisi atom
di Mal (Gambar 3). In vivo keterlibatan dari PEPc,
yang diaktifkan dalam terang oleh fosforilasi (Duff &
Chollet, 1995), telah lebih diakui oleh lainnya
studi metabolik yang digunakan isotop pada kelimpahan alam
(Terakhir di Tcherkez & Hodges, 2008).
Hasil penelitian kami menunjukkan bahwa dengan demikian
molekul oksaloasetat diproduksi
oleh PEPc berkomitmen untuk kedua Mal dan produksi sitrat,
dan bahwa siklus TCA tidak muncul untuk beroperasi
seperti siklus yang tepat, melainkan melibatkan dua
berlawanan
cabang makan oleh PEPc. Skenario seperti itu adalah sesuai
dengan
hasil sebelumnya diperoleh pada cocklebur (Xanthium
strumarium)
daun, di mana Glu dan Mal lebih 13C berlabel
dengan 13C-2-piruvat daripada yang suksinat (Tcherkez et al.,
2008). Selanjutnya, 13CO2 pelabelan diikuti oleh fluxomics
perhitungan (koefisien fluks) dalam daun strumarium X.
memiliki
bukti yang diberikan bahwa oksaloasetat molekul memiliki dua
nasib kompetitif dalam terang, yaitu, fumarat / Mal sintesis
(Terbalik cabang kiri siklus) dan Glu sintesis
(Cabang kanan dari siklus) (Tcherkez et al., 2009).
6

Meskipun pengamatan di atas, fluks 13C ke
siklus TCA ke Glu (sisi kanan dari siklus) agak
kecil, di urutan 25 mmol 13C-Glu per mol berasimilasi
13CO2 (Gambar 2), yaitu 2,5% 14 = 0,35 lmol
m) 2 s) 1. Nilai ini mirip (urutan yang sama besarnya) untuk
bahwa respirasi hari diukur dengan pertukaran gas pada
beberapa
Tanaman C3 (Atkin et al., 2000). Nilai tersebut juga sesuai
dengan
aktivitas sintase sitrat vitro diukur pada ekstrak daun
(Diterangi daun) c. 0,3 lmol m) 2 s) 1, sedangkan untuk
PEPc sebagai besar sebagai c. 5 lmol m) 2 s) 1 Nicotiana
tabacum di
(Scheible et al., 2000) Wetherefore menyimpulkan. Bahwa
pembatasan
hari respirasi dan dari siklus TCA oleh cahaya (lihat
referensi yang telah dijelaskan dalam Pendahuluan) sudah
cukup
untuk memberikan yang diperlukan untuk memberi makan
13Cflux Glu sintesis.
Kontribusi karbon yang tersimpan sebagai sumber untuk Glu
perpaduan
Produksi Glu selanjutnya diberi makan oleh remobilization yang
molekul disimpan disintesis dari berasimilasi sebelumnya
karbon (C atom 'tua'). Bahkan, sintesis 13CGlu
dalam cahaya itu rendah dibandingkan dengan yang diamati
pada
periode gelap berikutnya dan pada periode berikutnya cahaya
bawah CO2 biasa (13C alam kelimpahan) (Gambar 4). Ini
juga diamati untuk sitrat, Gln dan Mal (Gambar 4). Demikian
kontribusi lemah baru-baru ini 13C atom untuk Glu, Gln dan
sintesis sitrat dalam terang pasti tidak disebabkan oleh
pengenceran isotop label 13CO2 oleh 12CO2 dari
photorespiratory
dan hari decarboxylations pernapasan. Pertama,
photorespiratory yang
intermediet Ser dan Gly cepat berlabel
(Canvin, 1979), dan ini menyebabkan CO2 photorespired
menjadi benar-benar berlabel. Kedua, tingkat dekarboksilasi
terkait dengan hari respirasi biasanya dekat dengan 0,5 lmol
m) 2 s) 1 (Atkin et al., 2006), dan oleh karena itu menyumbang
hanya 3% dan 12% dari net pertukaran fotosintesis CO2
fluks di bawah 400 dan 100 lmol mol) 1 CO2, masing-masing. Di
Selain itu, proporsi refixed CO2 sehubungan dengan
Total CO2 dekarboksilasi diperkirakan mendekati 20%
(Gerbaud & Andre, 1987;. Tcherkez et al, 2005), sehingga
menyebabkan pengenceran isotop agak kecil dari 13CO2 tetap
antara 0,6 dan 2%.
Studi isotop lain juga menunjukkan bahwa produksi
CO2 pernafasan pada cahaya di daun (Parnik
et al., 2002) atau mesocosm (Schnyder et al., 2003) tingkat
bergantung pada disimpan karbon hingga kontribusi dari c.
50%.
Dengan demikian, Huege et al. (2007) telah menunjukkan
bahwa pergeseran
dari suasana 13CO2 ke 12CO2 suasana di
cahaya selama 2 jam dikaitkan dengan hampir tidak ada
penurunan
13C konten di Glu dan suksinat, sehingga menunjukkan bahwa
peran karbon yang tersimpan sangat penting. Selain itu, Mal
dan
fumarat dipamerkan 13C setengah kali lebih dari 15 dan
24 jam, masing-masing, menunjukkan kolam buffer besar
asam organik.
Studi kami menunjukkan bahwa Asp dan Ala adalah 13C habis
setelah
6 jam paparan CO2 biasa (setelah 6 jam dan 13CO2
30 menit dalam gelap), berbeda jelas dengan Mal dan Glu
(Gambar 3). Selain itu, kami memperoleh pengayaan 13C agak
rendah
di Asp setelah 6 jam dengan 13CO2 dalam terang (Gambar 4,
pertama
bar), sehingga menunjukkan bahwa produksi Asp tetap
rendah cahaya. Oleh karena itu masuk akal bahwa, selain
omset metabolisme alami (produksi dari saat ini
karbon photosynthetically tetap), dan Asp Ala dikonsumsi
dan berkontribusi untuk makan oksaloasetat (Mal), piruvat dan
Produksi Glu dalam terang, masing-masing. Hal ini sudah
mencatat bahwa tingkat Asp lebih tinggi di Arabidopsis daun
selama
malam (Lam et al., 1995), sehingga, selama periode cahaya,
itu diyakini baik diekspor ke tenggelam jaringan atau
digunakan untuk produksi Glu dari 2-oksoglutarat melalui Asp
untuk
Glu transaminasi keseimbangan. Pandangan ini juga akan
setuju dengan kelimpahan isotop alam di 15N: sebagai
Asp ke Glu fractionates transaminasi terhadap 15N oleh
1,7 & (Macko et al., 1986), secara alami 15N-diperkaya Asp
pool daun yang diharapkan, dan ini memang terjadi (Tcherkez
& Hodges, 2008). Dengan demikian, bagian dari Glu dalam
cahaya masuk akal
berasal dari Asp transaminasi, dengan Asp juga disintesis
dalam terang tetapi pada tingkat yang lebih rendah dari
konsumsi
rate ('kesetimbangan dinamis'). Kontribusi disimpan
karbon dapat menjelaskan mengapa 15N dan pelabelan 13C
yang berbeda
(Gambar 5). Memang, meskipun hampir tidak ada 15N-Glu atau
15N-Gln
molekul juga 13C berlabel, hingga 40% dari 13C-Gln
molekul yang juga berlabel 15N. Demikian pula, ketika relatif
isotop 13C dan 15N komitmen di Glu diplotkan
terhadap satu sama lain, ada pengayaan 15N terlihat di
nol pengayaan 13C (Gambar 2). Dengan kata lain, dalam
jam pertama pelabelan, dan Gln Glu hampir tidak 13C
berlabel, tapi tampaknya 15N diberi label oleh hampir 5%,
dan. oleh karena itu, sinyal-15N NMR dengan cepat terdeteksi
di bawah kedua kondisi photorespiratory biasa dan tinggi
(Gambar S1 dan S2, lihat Informasi Pendukung). Ini
sangat menunjukkan bahwa Glu Gln dan sintesis terutama
melibatkan remobilization karbon, tetapi baru-baru ini
menangkap berasimilasi
nitrogen. Di sisi lain, sejumlah besar
baru disintesis, 13C-diperkaya 2-oksoglutarat berkomitmen
nitrogen asimilasi ke Glu dan Gln. Secara konsisten,
ketika daun dipindahkan dari 13CO2 untuk 12CO2 a
(13C alam kelimpahan) atmosfer, pengayaan 13C
dalam sitrat, Glu dan Gln meningkat, tidak diragukan lagi
menunjukkan
kontribusi 13C intermediet disimpan pada malam hari
(Gambar 4).
Skenario kami juga setuju dengan metabolisme
hasil yang diperoleh sejauh ini dengan mutan. Pertama, garis
7

tomat
(Lycopersicon esculentum) dengan gangguan aktivitas fumarase
menunjukkan tidak ada perubahan dalam daun Glu, pyro-Glu,
suksinat dan
glutarat isi di dalam terang, sedangkan Mal dan isocitrate
cenderung lebih besar (Nunes-Nesi et al., 2007). Hal ini
menunjukkan
fumarase yang tidak penting untuk regenerasi 2-oksoglutarat
melalui siklus TCA, dan sumber karbon lainnya
pakan produksi Glu, seperti asam organik disimpan dan / atau
aktivitas PEPc anaplerotic, atau fumarase tersisa
Kegiatan cukup untuk tidak mengubah aliran karbon ke
nitrogen
asimilasi. Kedua, garis tomat dengan akonitase berkurang
Kegiatan dipamerkan berubah Glu Gln dan tingkat bila
dibandingkan
dengan tanaman liar-jenis dalam terang (tapi jauh
lebih rendah dalam kegelapan), sedangkan aspartat, suksinat
dan fumarat
isi secara signifikan lebih rendah dan (iso) sitrat akumulasi
(Carrari et al., 2003). Jelas kemudian, produksi
dari 2-oksoglutarat dan Glu independen dari variasi
dalam intermediet TCA lain, menunjukkan bahwa daur ulang
disimpan kerangka karbon untuk Glu terjadi. Baris ketiga,
kentang
(Solanum tuberosum) dengan peningkatan aktivitas PEPc (2.7-
to
4,7 kali lipat) menunjukkan lebih besar Glu rasio Gln, serta
piruvat
dan isinya 2-oksoglutarat (Rademacher et al., 2002),
menunjukkan bahwa input anaplerotic oleh PEPc sangat
penting
untuk menyediakan 2-oksoglutarat dan Glu. Selain itu, dalam
baris tembakau (Nicotiana sylvestris) di mana nitrat
aktivitas reduktase meningkat, Gln ke Glu rasio telah
ditemukan diperburuk, sedangkan tingkat Glu tidak
terpengaruh,
sehingga besar kemungkinan produksi 2-oksoglutarat
tidak membatasi (Gojon et al., 1998).
Secara keseluruhan, seperti kurangnya korelasi antara
TCA intermediet dan Glu tingkat menunjuk ke sebuah signifikan
peran untuk malam-disimpan karbon (seperti asam organik)
dalam nitrogen
asimilasi dan Glu sintesis dalam terang. Pandangan ini
sepenuhnya konsisten dengan fluxomics perhitungan yang
dibuat di X. strumarium
daun, di mana aktivitas sintase sitrat tampaknya
membatasi, sehingga Glu sintesis dalam terang terkait
dengan remobilization sitrat (Tcherkez et al., 2009). Bahkan,
jumlah asam organik, seperti sitrat, mungkin akan
cukup untuk mempertahankan Glu sintesis dalam terang.
Menurut
fluks ditemukan oleh Tcherkez et al. (2005), tingkat terkait
dengan hari evolusi CO2 pernapasan adalah c. 0,5 lmol m) 2
s) 1, sedangkan yang terkait dengan aktivitas TCA adalah c.
0,05 lmol m) 2 s) 1. Oleh karena itu, produksi Glu berada dalam
yang 0,05-0,5 lmol m) 2 s) 1 range (nilai 0,35 lmol
m) 2 s) 1 diperkirakan di sini, lihat di atas). Ini akan mewakili
persyaratan kerangka karbon c. 0.35
6 3600 = 7,5 mmol m) 2 selama periode iluminasi 6 jam.
Dalam kondisi eksperimental kami, isi Mal
dekat dengan 7 mmol m) 2 setelah 6 iluminasi h (data tidak
ditunjukkan), yang cukup untuk menyelesaikan periode cahaya
12 h. Meskipun kita mengakui bahwa konten Mal dapat
bervariasi
selama malam (Gerhardt & Heldt, 1984), dengan demikian
tampaknya
bahwa jumlah Mal dan isi sitrat tersedia di
awal periode cahaya yang cukup untuk memberikan
hampir semua molekul 2-oksoglutarat diperlukan untuk Glu
produksi.
Komitmen keseluruhan dari label 13C ke Glu adalah c.
25-30 mmol per mol CO2 berasimilasi bersih, terlepas dari
kondisi photorespiratory (Gambar 2), yaitu, pada
urutan 3%. Sebelumnya 14C-label percobaan memberi serupa
hasil dalam Arabidopsis thaliana dan bayam (Spinacia oleracea),
dengan nilai-nilai c. 6 dan 3%, masing-masing (Pengacara
et al, 1981;. Carrari et al, 2003).. Fotorespirasi memiliki
efek pada suatu komitmen 13C merangsang, yaitu, pada
13C-Glu neosynthesis (Gambar 2,3). Oleh karena itu, pelabelan
percobaan dengan 14CO2 dan 13C-piruvat telah menunjukkan
bahwa
Glu sintesis dipromosikan dalam kondisi photorespiratory
(Pengacara et al, 1981; Tcherkez et al, 2008.).: Glu
dan / atau Gln mewakili jumlah yang lebih besar dari label
isotop
dan aktivitas spesifik isotop lebih tinggi setelah label di
kondisi biasa relatif terhadap kondisi nonphotorespiratory.
Namun, kontribusi karbon yang tersimpan ke Glu sintesis
jelas (yaitu lemah sensitif terhadap fotorespirasi),
dengan produksi yang jernih dari 13C-Glu ketika eksperimental
kondisi berbalik untuk 12CO2 kondisi, terlepas dari
Fraksi mol CO2 (Gambar 4).
Dasar Pemikiran dan perspektif
Interaksi antara asimilasi karbon saat ini, hari respirasi
dan fotorespirasi yang cukup kompleks karena fotorespirasi,
Aktivitas PEPc dan siklus TCA adalah
terkait dengan metabolisme asam amino (Gly, Ser, Asp, Glu,
Gln). Meskipun Glu dan 2-oksoglutarat terlibat dalam
siklus (yang photorespiratory Glu recovery cycle), dan dapat
demikian dapat diasumsikan memiliki tingkat stasioner,
pergeseran dari
mantap biasa (380 lmol mol) 1 CO2, 21% O2) sampai besar
nilai-nilai dari kedua oksigenasi untuk rasio carboxylation (vo /
vc)
dan asimilasi nitrogen ke Glu memerlukan net 2-oksoglutarat
sintesis. Hasil penelitian kami menunjukkan bahwa
remobilization tersebut
molekul-malam disimpan, seperti asam organik (misalnya sitrat,
lihat Scheible et al., 2000 dan Niedziela et al., 1993) atau
asam amino (misalnya Asp dan Ala), memainkan peran utama
dalam makan
Sintesis 2-oksoglutarat untuk asimilasi nitrogen. Memang,
hasil penelitian kami menunjukkan bahwa hari alami: siklus
malam sangat penting
untuk asimilasi nitrogen, sebagai perantara diproduksi di
gelap yang diperlukan selama periode cahaya berikutnya untuk
pengurangan nitrogen dan asimilasi daun (Canvin & Atkins,
1974; Pilgrim et al, 1993;.. Scheible et al, 2000; Lillo
et al., 2001).
Dalam kerangka tersebut, hubungan yang diakui
antara asimilasi nitrogen dan pemeliharaan respirasi
dalam kegelapan (untuk review, lihat Thornley & Cannell,
8

2000) datang tidak mengejutkan. Demikian pula, meskipun
nitrogen
konten dalam daun dapat sangat bervariasi antara spesies (up
dua kali lipat), daun malam respirasi per unit kandungan
nitrogen
tetap konstan (pada c. 10 nmol CO2 nmol) 1 N s) 1), lagi
menunjukkan bahwa asimilasi nitrogen berkorelasi dengan
malam
metabolisme pernapasan (Poorter et al., 1990).
Kami tetap mengakui bahwa seperti kompromi metabolik
sepanjang hari: siklus malam mungkin tergantung pada
lingkungan
kondisi, seperti suhu atau cahaya, yang
pengaruh respirasi, yang mungkin, pada gilirannya, mengubah
nitrat
pengurangan dan asimilasi tarif. Sebagai contoh, selama
Pertumbuhan dalam atmosfir CO2-diperkaya dan
nitrogenlimited
kondisi, ada penurunan tajam dalam nitrat
konsentrasi asam amino dan aktivitas reduktase (Geiger
et al., 1999), serta konsentrasi tanaman nitrogen (persentase
nitrogen), dengan kedua pemeliharaan dan basal
gelap diadaptasi respirasi menurun sesuai (Gifford &
Bayer, 1995). Yang mengatakan, biaya pernapasan
keseluruhan-tanaman
R: P adalah lemah, jika sama sekali, dipengaruhi oleh kondisi
CO2 (Gifford
& Bayer, 1995; Albrizio & Steduto, 2003), menunjukkan
bahwa kontrol pada komitmen asimilasi respirasi
sangat penting untuk asimilasi nitrogen. Selain itu,
beberapa bukti telah disediakan bahwa serapan nitrogen dan
asimilasi dalam akar tergantung pada masukan dari karbon
asimilasi yang, pada gilirannya, digunakan sebagai substrat
pernapasan
(Gojon et al., 1991). Oleh karena itu, kontrol nitrogen
asimilasi oleh respirasi pada skala keseluruhan-tanaman adalah
lebih lanjut
rumit oleh pola alokasi dan menembak: rasio akar,
dan, akibatnya, masih ada banyak ketidakpastian
apakah hasil kami masih berlaku dalam jangka panjang ketika
kondisi lingkungan bervariasi, hal ini akan dibahas dalam
studi berikutnya.
Ucapan Terima Kasih
Penulis sangat berterima kasih kepada Dr Nathalie Nesi untuk
menyediakan
benih perkosaan. Penulis mengucapkan terima kasih kepada
Agence
Nationale de la Recherche dan IFR87 untuk keuangan
dukungan melalui proyek Jeunes Chercheur (di bawah kontrak
08-330055) dan Transversal proyek, masing-masing.
P.G. dibiayai oleh Hibah PhD dari Perancis
Ministe `kembali de l'E'ducation Nationale. G.T. dan M.H. ingin
untuk berterima kasih kepada Profesor Gabriel Cornic untuk
dukungan yang kuat
untuk pekerjaan ini.