Aislamientoeidentificacinde

microorganismosdeinters
Introduccin
En la naturaleza, se puede encontrar que
existen diversos microorganismos ocupando
un mismo nicho.
En 1 g de suelo se encuentran 1x 10
9
bacterias
Para estudiar un microorganismo en el
laboratorio se requiere tener un cultivo puro
(axnico). Es decir, una poblacin de
microorganismos iguales.
Aislamiento
Objetivo: obtener un cultivo puro de un
microorganismo a partir de un cultivo mixto
Aislamiento
Tcnica asptica: tcnica usada para evitar la contaminacin
durante la manipulacin de cultivos y de medios de cultivos
a. El ansa se calienta hasta la incandescencia
y se enfra al aire, cerca del mechero
b. El tubo se destapa cerca del mechero
c. Se flamea el extremo del tubo por la llama
d. Se extrae la muestra con el ansa esterilizada
e. Tras tomar la muestra, se vuelve a flamear el
extremo del tubo y la muestra se deposita en
un medio estril
f. Se vuelve a tapar el tubo. El ansa se
recalienta de nuevo antes de finalizar su
utilizacin
Mtodosdeaislamiento
Directos siembraporestras,inclusino
extensin
Indirectos porenriquecimientoprevio
Mtodosdeaislamiento
Siembra
Eslaincorporacinaunmediodecultivodeuna
muestra(inculo),conpropsitoscuantitativoso
cualitativos
Siembraenplaca:
Porestra
Porinclusin
Porextensin
Siembraentubos:
Conagar inclinado
Conmedioslidohorizontal
Conmediosemislido
Conmediolquido
Siembraporestra:
Se inocula la muestra sobre un extremo de la placa con
un ansa y se extiende formando estras sobre la superficie
en varios sentidos, cada clula aislada se multiplicar
formando una colonia independiente, cada colonia
representa un cultivo puro.
Mtodosdeaislamiento
SiembraporInclusin
Mtodosdeaislamiento
Porextensin
Se extiende el inculo uniformemente con una
varilla acodada estril por la superficie del medio de
cultivo. Las clulas diseminadas sobre la superficie
formarn colonias aisladas.
Mtodosdeaislamiento
Siembraentubos
Mtodosdeaislamiento
Mtodosdeaislamiento
Enriquecimiento
Permiteaislarmicroorganismosqueseencuentranenbajo
nmeroenunamuestracompleja(ejemplo:suelooagua)
Losmtodosdesiembrapuedencombinarseconelusode
mediosselectivosodiferencialesparaenriqueceryaislar
microorganismospocofrecuentes.
Porejemplo:bacteriasoxidantesdelamonio,nitrito.Bactrias
verdesoprpurasdel S
Repiques
Objetivo:hacercrecerelmicroorganismoenunmediodecultivo
dadoparaconocersumetabolismo,suproduccindepigmentoso
simplementeconservarlo
Transferenciadecultivosmicrobianosdemedioslidoaslido,de
medioslidoamediolquido,demediolquidoalquidoydemedio
lquidoamedioslido
Mtodosdeaislamiento
Coloniasaisladas
Pueden ser de forma y tamao variable
dependiendo del organismo, las condiciones
de cultivo, suministro de nutrientes y otros
parmetros fisiolgicos.
Sepuedeaislaracualquier
microorganismo?
Identificacin
Las caractersticas que determinan la morfologa
microbiana son: tamao, forma, estructura y forma de
agrupacin. Sin embargo, la mayora de las clulas
microbianas son difciles de observar, an con el auxilio
de la microscopia, principalmente por su falta de
contraste con el medio que las rodea. La tincin de las
clulas es la manera ms sencilla para contrastar.
Usodecolorantes
El uso de colorantes es una prctica comn para
determinar la morfologa, algunos orgnelos, o bien para
distinguir diferentes tipos de clulas
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos
que tienen alguna afinidad especifica por los
componentes celulares, es decir los colorantes cidos se
combinan con los materiales bsicos y viceversa
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
Tincindegram:
Seutilizaparaidentificar
bacteriasylevaduras
DivideenGram +y
Levadurassetiencomo
Gram+porlas
caractersticasdesu
paredcelular.
Gram+=azulomorado
Gram=rosaorojo
TincindeZiehlNeelsen
Microorganismos
designadoscomo
ac.alcohol resistentes.Esta
resistenciaesta
determinadaporla
composicindelapared
celular.
Bacteriasacalcohol
resistentes=rojo
Bacteriasnoresistentes=
azul
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
Tincion deSchaeffer y
Fulton
Esporabacteriana.Es
unaestructura
altamentedeshidratada
yrgidaqueesformada
poralgunosgneros
bacterianos
Celulas vegetativasse
tienderojo
Laesporapermanece
verde
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
Tincion negativa de tinta
china
Permite identificar
capsulas bacterianas y
micticas.
Las partculas de carbn
suspendidas en la tinta
china en rpido
movimiento rebotan con
la estructura capsular sin
llegar a tocar la clula lo
que permite apreciar un
efecto de halo alrededor
del organismos.
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
TincinNegativade
Maneval Modificado
Permiteobservarlas
capsulascomohalos
incoloros,elespacio
intercelulardeuncolor
oscuroylasclulasde
colorrojo
Bacteriaconcapsula:
Klebsiella,Pasteurella,
Bacillus,Escherichia y
Haemophilus
Levadura:Cryptococcus
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
Tincion delactofenol azuldealgodn
Mtodoutilizadoparalarealizacin
depreparacionesdehongos
filamentosos.
Fenolsirvedefungicida
Glicerinapermiteteneruna
preparacinsemipermanente
Elazuldealgodntieelexteriordela
pareddeloshongos
Elac alcohollcticoactacomoagente
aclararte
Hongosfilamentosos:Aspergillux,
Microsporum,Mucor,Penicilium,
Alternaria
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
Morfologabacteriana