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CUANTIFICACIN DE SAPONINAS EN AJO GENETICAMENTE

SELECCIONADO
L. Daz-Jimnez
*a
, E. Ibarra-Arellano
b
, K. Jimnez-Lpez
b
a
Tecnologa Qumca, I!"E#TA"-#al$illo, %m. &'.( carre$era #al$illo-)on$erre*, +amo,
Arizpe, -(.//, oa0., )1ico lour2e,.2iaz3cin4e,$a4.e2u.m1
b
Depar$amen$o 2e Qumica, 5EI-5ni4er,i2a2 2e 6ua2ala7ara, )arcelino 8arrag9n,
6ua2ala7ara, :::-/, Jal., )1ico e2uar2oibarraarellano3*a0oo.com.m1,
$ri,$ania...30o$mail.com
RESUMEN:
El $raba7o con,i,$i en la 2e$erminacin cuan$i$a$i4a 2e ,aponina, en una mue,$ra 2e a7o gen$icamen$e
,elecciona2o a ;in 2e 4eri;icar <ue la ,eleccin aumen$ la pro2uccin 2e ,aponina, en el 4ege$al. La
cuan$i;icacin ,e realiz u,an2o 2o, m$o2o,= el primero in2irec$o, a par$ir 2e la 2e$erminacin 2e lo,
az>care, liga2o, a la aglicona en la, ,aponina,? * el ,egun2o 2irec$o emplean2o la $cnica 2e croma$ogra;a 2e
l<ui2o, 2e al$a re,olucin. @ara el m$o2o 2irec$o ;ue nece,aria la puri;icacin pre4ia 2e la, ,aponina,
pre,en$e, en lo, e1$rac$o, 2e a7o * la 4ali2acin 2el m$o2o 2e cuan$i;icacin. La puri;icacin ,e realiz por
croma$ogra;a 2e l<ui2o, 2e al$a re,olucin ALA+B ,emiprepara$i4o.

1. INTRODUCCIN:
La, ,aponina, ,on 2eri4a2o, $erpnico, * e,$eroi2ale, 2e origen na$ural <ue e,$9n pre,en$e, en lo, $ubrculo,
2e 4aria, e,pecie, 2e Dio,crea. La, ,aponina, e,$erio2ale, ,on ampliamen$e u,a2a, en la ,n$e,i, 2e
0ormona, Aproge,$erona * cor$i,onaB * o$ro, pro2uc$o, e,$eroi2ale, C&,-D. La e,$ruc$ura 2e la, ,aponina, e,$9
con,$i$ui2a por una aglicona * una o 4aria, ca2ena, 2e az>care,.
La cuan$i;icacin 2e ,aponina, ,e 0a 2e$ermina2o me2ian$e m$o2o, in2irec$o, $ale, como la prueba 2e la
e,puma C'D, ,u capaci2a2 0emol$ica C:D o la $cnica conoci2a como n2ice 2e pe,ca2o C-D, ,in embargo e,$o,
m$o2o, no ,on mu* con;iable, pue,$o <ue pue2en 2ar un ;al,o po,i$i4o C(, ED. El m$o2o 2irec$o 2e
cuan$i;icacin ,e pue2e realizar por LA+ o por e,pec$rome$ra, ,in embargo, ,e $iene el problema 2e no
con$ar ,iempre con el e,$9n2ar re<ueri2o para ,u cuan$i;icacin, 2e manera <ue ,e 2ebe proce2er a la laborio,a
ac$i4i2a2 2e ,u puri;icacin.
El a7o e, una plan$a 2e amplio cul$i4o en el mun2o <ue en$re ,u, componen$e, con$iene ,aponina,. #i bien la,
,aponina, no ,on el principal con,$i$u*en$e 2e lo, a7o,, por ,eleccin genrica ,e pue2e con,eguir un aumen$o
en ,u bio,n$e,i, CFD.
La me7ora 4ege$al por la ,eleccin na$ural e, un proce,o gen$ico <ue la na$uraleza realiza a lo largo 2e
numero,a, generacione,, en la <ue lo, ,ere, 4i4o, luc0an por ,u propia e1i,$encia lo <ue 2a lugar a la
,uper4i4encia 2e lo, m9, ap$o,, e,$a, carac$er,$ica, ,on $ran,mi$i2a, a lo, 2e,cen2ien$e,, <ue ob$ienen
me7ore, cuali2a2e, gen$ica, para en;ren$ar,e a la 4i2a en con2icione, ma, ;a4orable, CFD. El 0ombre 0a
con,egui2o acelerar el proce,o 2e me7ora * ,eleccin na$ural me2ian$e ,eleccin ar$i;icial en e,$a ,e eligen
a<uello, in2i4i2uo, progeni$ore, cu*o ;eno$ipo e, m9, ;a4orable.
En el pre,en$e $raba7o ,e 2e$ermin la in;luencia 2e la ,eleccin gen$ica en la bio,n$e,i, 2e ,aponina, en
mue,$ra, 2e a7o.
2. METODOLOGA:
La, mue,$ra, ;ueron proporciona2a, por la empre,a !u$rili$e #. 2e +.L. 2e .". AJali,co, )1icoB. E,$a, ,e
con,er4aron en ul$racongelacin a GH/ I. on ;ine, compara$i4o,, una porcin 2e la mue,$ra ,e ,ec a (( I
* o$ra ,e lio;iliz 0a,$a ,e<ue2a2.
EJT+AIK!= #e ,igui una ,erie 2e 2i,eLo, e1perimen$ale, mul$i;ac$oriale, u,an2o mezcla, 2e
AguaME$anol * AguaM)e$anol en ,ei, proporcione, A&//M/, .(M(, F(M-(, (/M(/, '(ME(, -(MF(B. @ara la
e1$raccin una can$i2a2 2e$ermina2a 2e mue,$ra ,e coloc en un ma$raz Erlenme*er, a2icionan2o el ,ol4en$e
o mezcla 2e ,ol4en$e,. La mezcla ,e 0omogeneiz 2uran$e :/ ,eg. @o,$eriormen$e ,e 2e7 en repo,o a
$empera$ura ambien$e.
&
E!#ANO DE LA E#@5)A= #e $om una alcuo$a 2e ca2a e1$rac$o * ,e coloc en un $ubo 2e en,a*o
gra2ua2o. El $ubo ,e agi$ 4igoro,amen$e * ,e 2e7 en repo,o 2uran$e & 0r. @o,$eriormen$e ,e mi2i el ni4el
2e la e,puma ;orma2a.
@+5E8A DE PE)KLI#I#= De ca2a e1$rac$o ,e inocul una alcuo$a en ca7a pe$ri con agar-,angre como
me2io 2e cul$i4o. La ca7a inocula2a ,e 2e7 en incubacin a 'F I por -: 0ora,. La prueba 2a como re,ul$a2o
un 0alo 2e 0emli,i, en el me2io.
)ETODO I!DI+ETO= El m$o2o con,i,$e 0i2rolizar la ,aponina para ,epara la, molcula, 2e az>car 2e la
,apogenina, cuan$i;ican2o po,$eriormen$e lo, carbo0i2ra$o, pre,en$e, en el e1$rac$o por e,pec$ro;o$ome$ra.
@5+IQIAIK!= #e realiz una puri;icacin pre4ia 2el e1$rac$o me2ian$e croma$ogra;a en columna abier$a
u,an2o #ep0a2e1 LP--/, la ;raccin a, pre-puri;ica2a, ,e pa, por LA+ ,emiprepara$i4o para ,u
puri;icacin ;inal. La puri;icacin ,e realiz en un e<uipo Agilen$ Tec0nologie, &&// ,emiprepara$i4o,
olumna ,emiprepara$i4a +O) &H A-(/:/ mm, &- mB, Qlu7o H mLMmin, Qa,e m4il Rci2o ;o,;rico
/.//-(!MAce$roni$rilo AH/M-/ 4M4B.
5A!TIQIAIK!= 5na 4ez puri;ica2a la ,aponina ma*ori$aria 2e e1$rac$o, ,e u,a ,$a como pa$rn para
realizar la cuan$i;icacin por LA+. on2icione,= Qa,e m4il Rci2o ;o,;rico /.//-(!MAce$roni$rilo AH/M-/
4M4B, olumna 8D# P*per,il H A-(/:.E mm, ( mB, Qlu7o /.- mLMmin.
3. RESULTADOS:
@+5E8A# @+ELI)I!A+E#= La primera par$e 2e la e1perimen$acin ;ue 2e gran impor$ancia pue,$o <ue
a*u2 a 2e$erminar el ,ol4en$e m9, a2ecua2o para la e1$raccin 2e ,aponina, a par$ir 2e a7o. De igual manera,
permi$i 2e$erminar la in;luencia 2el $iempo 2e e1$raccin * 2el e,$a2o 2e la mue,$ra en la e1$raccin 2e
,aponina,.
En e,$a primera par$e ,e ,iguieron 2o, 2i,eLo, e1perimen$ale, mul$i;ac$oriale, 2on2e la 4ariable 2e re,pue,$a
;ue la concen$racin 2e ,aponina, me2i2a en ba,e a la e,puma ;orma2a por lo, e1$rac$o,.
omo ,e pue2e ob,er4ar en la Qigura &, cuan2o ,e u, una mezcla AguaM)e$anol en la proporcin .(M(, la
e,puma <ue ,e ;orm inme2ia$amen$e 2e,pu, 2e la agi$acin alcanz una al$ura 2e E mm al $iempo cero,
man$enin2o,e con,$an$e 0a,$a 2e,pu, 2e una 0ora. on;orme aumen$a la concen$racin 2e me$anol en la
compo,icin 2e la mezcla 2e ,ol4en$e,, la e1$raccin 2e ,aponina, ,e 0ace meno, e;icien$e.

0
15
30
45
60
0
2
4
6
8
10
Altura
(mm)
Tiempo (min)
25/75
35/65
50/50
75/25
95/5
100/0
Figura 1.- Influencia de la relacin Agua/Metanol en la extraccin de saponinas en ajo fresco.
De lo, 2a$o, ob$eni2o, 2e e,$a primera prueba ,e pue2e apreciar <ue la ;ormacin 2e e,puma e, ma*or cuan2o
la proporcin 2e la mezcla con$iene ma, agua <ue ,ol4en$e org9nico. E,$o e,$9 en concor2ancia con 6a;ner
CHD el cu9l 0izo un e,$u2io 2e e4aluacin 2e $re, ,ol4en$e, 2e e1$raccin 2e ,aponina, en race, 2e Panax
quinquefolius, 2on2e ,e encon$r <ue la ma*or can$i2a2 2e ,aponina, e1$ra2a, ,e ob$u4o con el ,ol4en$e m9,
polar.
A ;in 2e 2e$erminar ,i el ren2imien$o 2e ,aponina, e1$ra2a, ,e 4e in;luencia2o por el e,$a2o 2e la ma$eria
prima, ,e realizaron en,a*o, en lo, <ue pre4iamen$e a la e1$raccin, ,e ,ome$i a la mue,$ra a 2e,0i2ra$acin
por calor * por lio;ilizacin. Lo, re,ul$a2o, mo,$raron, <ue 2e alguna manera, el proce,o 2e lio;ilizacin
a;ec$a en cier$a me2i2a la e1$raccin 2e ,aponina,, pue,$o <ue lo, e1$rac$o, no pre,en$aron ;ormacin 2e
e,puma. En el ca,o 2e lo, e1$rac$o, realiza2o, con a7o 2e,0i2ra$a2o, , ,e pu2o ob,er4ar ;ormacin 2e e,puma
2uran$e la e1$raccin, ,in embargo e,$a e,puma ;ue 2e con,i,$encia mu* ;r9gil <ue 2e,apareci r9pi2amen$e.
Lo, re,ul$a2o, ;ueron ,ome$i2o, a an9li,i, 2e 4arianza, ob,er49n2o,e <ue e,$a2,$icamen$e, el ;ac$or Tiempo
2e repo,o, e, no-,igni;ica$i4o en la can$i2a2 2e ,aponina, e1$ra2a,, mien$a, <ue el E,$a2o 2e A7o * la
compo,icin 2el ,ol4en$e 2e e1$raccin e, ,igni;ica$i4o.
-
#e realizaron en,a*o, ,imilare, u,an2o una mezcla AguaME$anol en la, mi,ma, proporcione,. Lo, re,ul$a2o,
;ueron ,imilare,.
#in embargo, el en,a*o 2e la e,puma, e, una prueba pre,un$i4a * no 2e;ini$i4a 2e la pre,encia 2e ,aponina, en
un e1$rac$o 4ege$al. De manera <ue lo, re,ul$a2o, 0a,$a pre,en$a2o, no 2eben $omar,e como conclu*en$e,.
@or $an$o ,e con,i2er nece,ario realizar a la par o$ra prueba para con;irmar lo, 2a$o, ob$eni2o, 0a,$a e,$e
pun$o.
E!#ANO DE LA PE)KLI#I#= El en,a*o ,e 2e,arroll aplican2o $ambin un 2i,eLo mul$i;ac$orial 2on2e la
4ariable 2e re,pue,$a ;ue el $amaLo 2e 0alo 2e 0emli,i, pro4oca2o por ca2a e1$rac$o. La prueba ,e realiz
por <uin$uplica2o * paralelamen$e a ca2a en,a*o 2e la e,puma ob$enien2o lo, ,iguien$e, re,ul$a2o,.
uan2o el $iempo 2e e1$raccin ;ue 2e ( minu$o,, u,an2o agua A&// por cien$oB como ,ol4en$e, ,e ob,er4 la
;ormacin un 0alo 2e 0emli,i, 2e &.E cm, en prome2io, 2e 2i9me$ro * al u$ilizar la mezcla 2e AguaME$anol
A(/M(/B ,e ob$u4o un 0alo 2e &.' cm.
uan2o el $iempo 2e e1$raccin ;ue 2e E/ minu$o,, al u,ar Agua como ,ol4en$e, el $amaLo prome2io 2el 0alo
2e 0emli,i, alcanz &.E cm, mien$ra, <ue al u,ar la mezcla AguaME$anol A(/M(/B el $amaLo 2el 0alo ;ue 2e
&.H cm.
E,$o, re,ul$a2o,, con;irmaron, por un la2o, <ue el $iempo 2e e1$raccin no in;lu*e en la can$i2a2 2e ,aponina,
e1$ra2a,, * a2em9,, <ue no 0a* 2i;erencia, impor$an$e, al u,ar Agua o la mezcla AguaME$anol como ,ol4en$e,
a pe,ar 2e <ue el en,a*o 2e la e,puma no 0aba po2i2o 2ar e4i2encia 2e la pre,encia 2e ,aponina, 2ebi2o a la
ine,$abili2a2 2e la e,puma ;orma2a en el e1$rac$o cuan2o ,e u, la mezcla e$anlica.
5A!TIQIAIK! I!DI+ETA DE #A@O!I!A#= 5na 4ez con;irma2a la pre,encia 2e ,aponina, en lo,
e1$rac$o, acuo,o * e$anlico, ,e plan$e la cuan$i;icacin 2e $ale, compue,$o, a ;in 2e 2e$erminar ,i la
,eleccin gen$ica in;lu* en la concen$racin 2e $ale, me$aboli$o, en la plan$a. A2em9, 2e 2e$erminar la
e;iciencia 2e e1$raccin en$re el Agua como ,ol4en$e * la mezcla e$anlica.
La cuan$i;icacin ,e lle4 a cabo me2ian$e 2o, m$o2o,. @rimero ,e emple un m$o2o in2irec$o el cual
con,i,$e en 0acer una 0i2rli,i, 9ci2a 2e la mue,$ra, liberan2o lo, az>care, 2e la molcula 2e la ,aponina *
cuan$i;ican2o ,$o, por el m$o2o 2e )iller C.D.
@ara realizar la cuan$i;icacin por el m$o2o in2irec$o, como primer pa,o, ;ue nece,ario preparar una ,erie 2e
,olucione, 2e concen$racin conoci2a 2e gluco,a, a e,$a, ,olucione, ,e le, 2io el $ra$amien$o 2el m$o2o 2e
)iller * ;inalmen$e ,e le, mi2i la ab,orbancia a una longi$u2 2e on2a 2e ((/ nm. on lo, 4alore, 2e
ab,orbancia ob$eni2o, * la, concen$racione, conoci2a, ,e con,$ru* una cur4a 2e calibracin con un
coe;icien$e 2e correlacin lineal 2e /.... @or o$ra par$e, ,e prepar una cur4a 2e calibracin 2e lo, az>care,
libera2o, 2e <uilla7a a par$ir 2e la 0i2rli,i, 9ci2a.
on la, 2o, cur4a, an$eriore, ,e con,$ru* un nue4o con7un$o 2e 2a$o,, <ue relaciona la concen$racin 2e
,aponina, en una mue,$ra 2e <uilla7a con la concen$racin 2e gluco,a. @ara la ob$encin 2e e,$a relacin ,e
u,aron lo, ,iguien$e, 2a$o, 2e la cur4a 2e calibracin 2e gluco,a C&/D.
@or $an$o, a par$ir 2e lo, 2a$o, 2e la cur4a an$erior, ,e calcul la concen$racin 2e ,aponina, $o$ale, en lo,
e1$rac$o, acuo,o * e$anlico 2e a7o ;re,co * 2e,0i2ra$a2o.
De e,a manera, ;ue po,ible calcular la concen$racin 2e ,aponina, $o$ale, Aen ba,e a la ,aponina $ri$erpenoi2e
<uilla7aB en la ,erie 2e e1$rac$o, en,a*a2o, pre4iamen$e por la prueba 2e 0emli,i, ATabla &B.
Taba 1. oncentracin obtenida de saponinas a partir del mtodo indirecto.
Mu!"#ra E$#ra%#& C&'%. #&#a "a(&'i'a"
ba"! )uia*a +,-
A7o ;re,co
Agua ( min /.'
Agua E/ min /.'
AguaME$anol ( min /.:
AguaME$anol E/ min /.(
A7o
2e,0i2ra$a2o
Agua ( min &.(
Agua E/ min &.E
AguaME$anol ( min &.-
AguaME$anol E/ min &.-
'
omo pue2e ob,er4ar,e en lo, 2a$o, 2e la Tabla &, la concen$racin 2e ,aponina, $o$ale, en a7o ;re,co $an$o en
lo, e1$rac$o, con Agua como con lo, e1$rac$o, ob$eni2o, con la mezcla AguaME$anol o,cila en$re /.' * /.( S,
mien$ra, <ue para a7o 2e,0i2ra$a2o, la concen$racin $o$al 2e ,aponina, ;ue $re, 4ece, ma*or, lo cual era 2e
e,perar *a <ue en el a7o ;re,co e1i,$e un al$o porcen$a7e 2e agua.
@5+IQIAIK! DE #A@O!I!A#= 5na 4ez 2e$ermina2a la concen$racin 2e ,aponina, por el m$o2o
in2irec$o, ,e plan$e ,u cuan$i;icacin por un m$o2o 2irec$o para lo cual ;ue nece,ario puri;icar la ,aponina
ma*ori$aria para u,arla como pa$rn. La Qigura -, repre,en$a el croma$ograma ob$eni2o para la ,aponina
puri;ica2a. omo pue2e 4er,e, la puri;icacin ,e lle4 a cabo con pue,$o <ue ,lo ,e ob,er4 una ,eLal
corre,pon2ien$e a la ;raccin pura a 2i;erencia 2el croma$ograma <ue ,e ob,er4 para el e1$rac$o bru$o.
Figura 2. Cromatograma de la fraccin purificada del extracto de ajo.
5A!TIQIAIK! DE #A@O!I!A# @O+ LA+= on la ,aponina puri;ica2a ,e prepar una cur4a 2e
calibracin para la cuan$i;icacin 2e ,aponina, en lo, e1$rac$o, ob$eni2o, a par$ir 2e a7o ;re,co con agua * la
mezcla AguaME$anol A(/M(/B. La comparacin en$re la concen$racin 2e ,aponina, encon$ra2a por el m$o2o
2irec$o * la ob$eni2a por el m$o2o in2irec$o pre,en$a una ligera 2i4ergencia ATabla -B, ob$enin2o,e una
ma*or concen$racin 2e ,aponina, con el m$o2o 2irec$o <ue con el m$o2o in2irec$o. E,$e e;ec$o pue2e
e1plicar,e en ba,e a <ue en la cuan$i;icacin por el m$o2o in2irec$o ,e u$iliz como re;erencia una ,aponina
2e 2i;eren$e na$uraleza A$ri$erpenoi2eB, mien$ra, <ue en la cuan$i;icacin 2irec$a, la ,aponina 2e re;erencia ;ue
puri;ica2a a par$ir 2el e1$rac$o. En e,$e ,en$i2o, $ambin 0a* e4i2encia, 2e <ue el proce,o 2e 0i2rli,i, para la
liberacin 2e la, molcula, 2e az>car a par$ir 2e la ,aponina no ,e lle4a a cabo 2e manera comple$a C&&D, lo
<ue ,e $ra2uce en una menor concen$racin 2e az>care, * por en2e en una menor concen$racin 2e ,aponina,.
Taba 2. Comparacin de la concentracin de saponinas totales por los mtodos directo e indirecto.
E1$rac$o )$o2o De,4iacin
e,$9n2ar Direc$o In2irec$o
Acuo,o 2e a7o ;re,co AAgua &//SB /.(- S /.' S /.&(S
E$anlico 2e a7o ;re,co AAguaME$anol, (/M(/B /.E. S /.: S /.-/S
@or o$ra par$e, ,e 0a encon$ra2o repor$a2o en bibliogra;a <ue la concen$racin $o$al 2e ,aponina, en a7o
4aran 2el /./: al /.&& S C&-D. omo ,e pue2e ob,er4ar en la Tabla -, lo, 2a$o, ob$eni2o, en la cuan$i;icacin
2e ,aponina, en la mue,$ra 2e a7o, ob7e$o 2e e,$u2io 2e e,$e $raba7o 2e $e,i,, la concen$racin 2e ,aponina,
4ara 2el /.( al /.FS. E,$e re,ul$a2o con2uce a la conclu,in 2e <ue en e,$e ca,o, el proce,o 2e ,eleccin
gen$ica a <ue ;ue ,ome$i2o el a7o analiza2o, re,ul$ en un aumen$o 2e la can$i2a2 2e ,aponina, pre,en$e, en
la plan$a.
.. CONCLUSIONES:
El ,ol4en$e e, un ;ac$or 2e$erminan$e en la e1$raccin 2e ,aponina,, ,ien2o para el ca,o 2e a7o, el
me7or ,ol4en$e el agua.
E, in2i;eren$e $raba7ar con a7o ;re,co o 2e,0i2ra$a2o *a <ue la 2i;erencia 2e la concen$racin 2e
,aponina, en lo, e1$rac$o, ob$eni2o, no e, e,$a2,$icamen$e ,igni;ica$i4a.
Toman2o como ba,e lo, 2a$o, repor$a2o, en bibliogra;a, 2on2e ,e 0an encon$ra2o concen$racione,
,aponina, en a7o en$re /./: * /.&& S, ,e conclu*e <ue la ,eleccin gen$ica 2e la, mue,$ra, u,a2a, en
:
el pre,en$e $raba7o, in;lu* po,i$i4amen$e en la bio,n$e,i, 2e e,$o, me$aboli$o,, *a <ue ,e
encon$raron concen$racione, <ue 4an 2el /.(/ al /.F/ S.
/I/LIOGRAFA
&. )uLoz-+i4era, ). TDe$erminacin 2e ,aponina, * $anino, * accin an$ibi$ica en alguna, plan$a,
,il4e,$re, me1icana,U, Te,i, pro;e,ional, &.F., Qacul$a2 2e Qumica, 5!A).
-. Ku%lin,%*, . Qarmacogno,ia, @rimera E2icin, 8arcelona, E,paLa, -///, pp. &:E-&('
'. 6alin2o, Q.V.? +o,ale,, ).? )urguei$io, E.? Larra0on2o, J.? T#u,$ancia, an$inu$ricionale, en la,
0o7a, 2e guamo, nace2ero * ma$arrra$nU Li4e,$oc% re,earc0 o; rural 2e4elopmen$, "ol. &,&, &.H.,
pp. &-&(
:. Pern9n2ez-+o*ero, +. TOb$encin 2e cru2o, 2e ,aponina, 0ipocole,$eromizan$e, 2el Chenopodium
illdU. +e4 ubana )e2 )ili$, "ol, -E,&, &..F, pp. ((-E-.
(. 5ribe, L.A. T)$o2o, u,a2o, para la 2e$erminacin 2e ,aponina,U. Te,i, 2e Licencia$ura, &.HF,
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