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“FUNDAMENTOS DE

ESPECTROFOTOMETRÍA Y
CURVA PATRÓN”
Profesor: M. en C. Gerardo Omar Hernández Segura
Departamento de Fisicoquímica
Laboratorio de Equilibrio y Cinética
Universidad Nacional
Autónoma de México
Facultad de Química
OBJETIVO GENERAL

Conocer y aplicar los fundamentos
de la ESPECTROFOTOMETRÍA
para la determinación de
concentraciones en soluciones.
a. Conocer los fundamentos de la
espectrofotometría y las variables
involucradas en la ley de
Lambert-Beer.

b. Seleccionar la longitud de onda
apropiada para la determinación
de la absorbancia.

c. Construir una curva patrón de la
solución de yodo-yodurada o
solución de lugol (I
2
-KI) (serie
tipo) a diferentes concentraciones.
OBJETIVOS PARTICULARES:
PROBLEMA:
A partir del ESPECTRO DE ABSORCIÓN de una solución
acuosa de yodo-yoduro de potasio (I
2
-KI), seleccionar la
longitud de onda apropiada para determinar el coeficiente
de absortividad molar de soluciones acuosas de yodo por
medio de una curva patrón.
Reacción de formación del ion I
3

:
- -
2 3
I ( ) I ( ) I ( ) + ac ac ac
| |
2
I 0.002 = M
-
I 0.2 ( =
¸ ¸
M
- 3
3
I 2 10
÷
(
=
¸ ¸
x M
ESPECTROFOTOMETRÍA:
La espectrofotometría son todos
los métodos cuantitativos de análisis
químico que utilizan la luz para medir
la concentración de las sustancias.

Este método de análisis óptico es el
más usado en las investigaciones
químicas y biológicas.

Consiste en la medición de la
cantidad de energía radiante que
absorbe un sistema químico en
función de la longitud de onda de la
radiación.
ESPECTROFOTOMETRÍA:
Este análisis espectral, permite detectar la absorción o
emisión de radiación electromagnética a ciertas
LONGITUDES DE ONDA, y relacionar éstas con los niveles
de energía implicados en una transición electrónica.
Onda electromagnética: Transiciones electrónicas:
TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA:
1.- Absorción de IR
2.- Absorción de UV-vis
3.- Absorción atómica
4.- Resonancia Magnética Nuclear
5.- Flourescencia
6.- Emisión atómica
7.- Rayos X
8.- Espectrometría de masas
ESPECTROFOTÓMETRO:

 Dispositivo experimental que
mide la absorción o emisión
de una especie química al
interactuar la luz con la
materia.

 Los métodos
espectroscópicos se basan
en la capacidad de las
sustancias de ABSORBER o
EMITIR radiación
electromagnética, y se
relacionan para determinar la
concentración de un reactivo
o producto durante una
reacción.



ESPECTROSCOPÍA UV-VISIBLE:
La absorción de la radiación UV o visible por
moléculas, generalmente se produce por la
excitación de los electrones de enlace.
La longitud de onda de los máximos de
absorción se puede relacionar con los enlaces
de las especies absorbentes.
Región UV-vis del espectro electromagnético en
estudio para la práctica: (320 ≤ λ ≤ 500) nm
UV medio: UV cercano: Visible:
200 – 300 nm 300 – 380 nm 380 – 780 nm
El aparato DETECTA la cantidad de “luz” transmitida y/o
absorbida a través de la solución en la celda y la COMPARA con
la que se transmite o absorbe a través de una solución de
referencia o “blanco”.
P
0

P
0
=
P
T
P
0
log
P
A
P
=
P
P
T A
0
log log = ÷ =
FUNDAMENTO DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA:
TRANSMITANCIA: ABSORBANCIA:
LEY DE LAMBERT BEER:
c = A bc
c
b
I- -I
LEY DE LAMBERT-BEER:
c = A bc
A: Absorbancia (adimensional)
ε: coeficiente de absortividad molar o de extinsión
molar (M
-1
cm
-1
)
b: longitud de paso óptico (usualmente b = 1 cm)
c: concentración molar (M)
El fundamento de la espectrofotometría se cumple para una
radiación monocromática que atraviesa una disolución
diluida (C ≤ 0.01M), cuando la especie absorbente no
participa en un equilibrio que dependa de su concentración.
Curva Patrón de soln de yodo ( Abs/ nm)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025
I2 (mol/L)
A
b
s
bc A c =
b mx y + =
CURVA PATRÓN:
[I
2
] / (mol/L)
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
CONSTRUCCIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN:
• Prepara 10 mL de una solución de I
2
-KI 2x10
-4
M, virtiéndola
en la celda a un 75% de su capacidad, e inicia la lectura de
la absorbancia con previa calibración del
espectrofotómetro (blanco), utilizando la otra celda con
agua destilada.
• Realización del barrido. Mide la absorbancia (A) como
función de la longitud de onda (λ) cada 10 nm en el intervalo
de 320-500 nm, registrando los datos en la siguiente tabla .


Evento: λ (nm) Absorbancia:
1 320
2 330
….. ……
n 500
Encender el
espectrofotómetro y
esperar 15 min.
Seleccionar la
longitud de onda
girando la perilla.
Introducir la celda con el blanco
(con un volumen por arriba de la
mitad; nunca llena) en el porta-
celda, esperar a que se ponga en
ceros la absorbancia.
Tomar la lectura de absorbancia de
la solución propuesta a una
longitud de onda baja (λ nm).
Utilizar como blanco agua
destilada.
Repetir el procedimiento desde el punto
4 dando incrementos regulares de 10 nm
a la longitud de onda. Registrar los
datos en una tabla.
CALIBRACIÓN DEL EQUIPO Y BARRIDO DEL ESPECTRO
Espectro Yodo 0.0002M
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520
l (nm)
A
b
s
Seleccionar una λ de esta zona
ESPECTRO DE ABSORCIÓN:
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

λ (nm)
Preparar soluciones de distinta
concentración a partir de la
solución de referencia I
2
–KI
(0.002M-0.2M) (Serie tipo).
Seleccionar una longitud de
onda adecuada para hacer las
lecturas de Absorbancia para las
soluciones de la serie tipo.
Introducir la celda con el blanco (agua
destilada), con un volumen por arriba
de la mitad; nunca llena, en la porta-
celda, oprimir la tecla y esperar a que
se ponga en ceros la absorbancia.
Tomar la lectura de
absorbancia de las soluciones
propuestas para la serie tipo, a
la longitud de onda
seleccionada (λ nm).
Registrar las lecturas de
absorbancia y concentración de la
serie tipo en la tabla. Que se
muestra en la siguiente diapositiva.
CURVA PATRÓN
ABSORBANCIA A DIFERENTES CONCENTRACIONES
MOLARES DE I
2
-KI

Mezcla:
Volumen de I
2

2X10
-4
M
(mL)
Volumen de
H
2
O
(mL)
Concentración
de [I
2
]
(mol/L)

Absorbancia:
1 5 0
2 4 1
3 3 2
4 2 3
5 1 4
FACTOR DE DILUCIÓN:
1 1 2 2
CV C V =
1 1
2
2
CV
C
V
=
Calcular la
concentración de I
2

en cada mezcla
empleando el
factor de dilución.
c = A bc
APLICACIÓN DE LA LEY DE LAMBERT-BEER A LOS
DATOS EXPERIMENTALES





A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

C / (mol/L)
y
=
m x +
B
Elaborar la gráfica
Absorbancia vs concentración
molar (mol/L) y realizar la
regresión lineal.
0 B =
PENDIENTE:
m b c =
1cm b =
DETERMINAR ε EN
(M
-1
cm
-1
)

e-mail: omar.termo@hotmail.com
Profesor: M. en C. Gerardo Omar Hernández Segura