FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO
DE
CIENCIAS BÁSICAS
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA
GUÍA DE PRÁCTICA
SEGUNDO AÑO
II Semestre
Lima Per!
2013
1
PRACTICAS DE LABORATORIO Nº1:
INSTRUMENTACI"N# CENTRIFUGACION $
ESPECTROFOTOMETRIA
%& CENTRIFUGACI"N
rocedimiento por el cual se aplica la FUERZA CENTRÍFUGA para
separar partículas ue se encuentran en suspensi!n en un
medio líuido" El incremento de la #uer$a centri#u%a
condicionar& ue las partículas mi%ren ale'&ndose del e'e de
rotaci!n de la centri#u%a" El proceso mi%ratorio de las partículas se
denomina sedimentaci!n ( la )elocidad con ue sedimentan es
proporcional a la #uer$a centri#u%a e*presada como incrementos de
la %ra)edad +,-"
.a constante %ra)itatoria es proporcional a la )elocidad de %iro del
rotor / soporte del medio ue se centri#u%a / ( del radio del mismo"
El radio del rotor de la centri#u%a depende si 0sta es del tipo &n%ulo
#i'o o #lotante" En el primer caso es un promedio entre el radio
mínimo ( el m&*imo1 ( en el se%undo es la distancia entre #ondo del
tu2o ( el e'e"

.a )elocidad de la sedimentaci!n se altera por la #uer$a centrí#u%a1
pero adem&s por la #orma de las partículas1 ( por la )iscosidad del
medio líuido ue las suspende" Tam2i0n depende de la
temperatura en cuanto 0sta altere la )iscosidad del medio o de las
car%as el0ctricas de las partículas"
.os euipos ue permiten la centri#u%aci!n se llaman centrí#u%as (
constan de un motor con controles1 ue mue)en un rotor ue
P
2
sostiene los tu2os de centri#u%aci!n" .os rotores son de dos clases1
de &n%ulo #i'o ( #lotante1 tal como se )e m&s arri2a"
.a ma(oría de la centrí#u%as de la2oratorio alcan$an las 3444 rpm1
aunue al%unas alcan$an los 56 444 rpm" Al%unas centrí#u%as
tienen re#ri%eraci!n lo ue permite separar partículas
2iol!%icamente acti)as tales como #actores de coa%ulaci!n1
en$imas1 etc"
.as ultracentrí#u%as son centrí#u%as con )acío1 re#ri%eraci!n (
)elocidades de m&s de 344 444 * %" Permiten la separaci!n de los
componentes tisulares1 tal como se aprecia en el cuadro ad'unto (
poder estudiar cada uno de ellos a partir del 7omo%eni$ado de un
te'ido cualuiera"
Para e)aluar con certe$a la capacidad de una centrí#u%a para
separar los componentes celulares de2emos mane'ar %ra)edades
en lu%ar de re)oluciones por minuto1 por lo ue #recuentemente
usamos el nomo%rama de Dole ( Cot$iar ue presentamos a
continuaci!n"
3
Suspender el tejido al 10%
Homogenizar en Potter E.
Centrifugar a 600g x 10
Sedimento! n"#leos$ restos
#elulares
Centrifugar el so%renadante
a &000g x 1'
Sedimento!
mito#ondrias
Centrifugar el so%renadante
a 16 '00g x 1'
Sedimento!
lisosomas
Centrifugar el so%renadante
a 100 000g x &0
Sedimento!
mi#rosomas
So%renadante! #itosol

TIPOS DE CENTRIFUGACI"N
5" Di'ere()ia*: separa de acuerdo a las di#erentes )elocidades
de sedimentaci!n de distintas partículas" .a usamos en la
clínica para separar sedimentos de orina1 o componentes del
plasma.
8" +,(a*9 usando una %radiente de densidad lo%rada con un
soluto denso1 la m&s usada la sacarosa1 las mol0culas
sedimentan de acuerdo a su coe#iciente de sedimentaci!n" .a
sacarosa densa e)ita ue las 2andas se me$clen"
.a %radientes pueden ser discontinuas / preparadas mediante la
colocaci!n de soluciones de di)ersa densidad una so2re otra: (
continuas / preparada mediante un euipo de me$cla de
soluciones1 ue )a incrementando la densidad pro%resi)amente"
&
TUBOS DE CENTRIFUGACI"N9
E*isten tu2os de centrí#u%a de di)ersa composici!n9
5" P,*i)ar-,(at,: )idrio transparente1 autocla)a2le ( resistente
a los &cidos ( 2ases de 2a'a diluci!n"
8" B,r,si*i)at,: )idrio mu( resistente a uímicos de alta
concentraci!n "
;" P,*ieti*e(,9 pl&stico mu( resistente a los uímicos1 pero
sensi2le a la temperatura"
<" Pr,.i*e(,9 pl&stico 2astante resistente a la temperatura /
autocla)a2le: ( resistente a casi todos los uímicos"
PORTATUBOS
Son de pl&stico o de metal ( poco resistente a &cidos ( 2ases
#uertes" De2en ser conser)ados mu( limpios"
/& COLORIMETRÍA
Es el an&lisis de la concentraci!n de una muestra por el color ue
presenta" Todos 7emos tenido la e*periencia de )alorar la
concentraci!n de sustancias coloreadas en soluci!n1 por
o2ser)aci!n directa1 una ta$a de ca#0 o t01 un )aso de re#resco1 son
apreciados de esa manera" El e*amen se #unda en la ma(or o
menor a2sorci!n de lu$ de acuerdo al ma(or n=mero de mol0culas
( tonalidad depender& de la capacidad de a2sor2er una u otra
lon%itud de onda de lu$1 especí#icamente" .a #otocolorimetría
manipula las )aria2les de este #en!meno controlando la lu$
incidente pro)eniente de un #oco luminoso ( su pure$a1 de modo tal
ue s!lo incida auella lu$ ue es especí#icamente a2sor2ida por la
partícula ue medimos"
'
()*)+,-*- .E C-/C0/) 1E/)C2.-. 3 ,-.2) .E C-4E5-/ .E CE(6,780+-
&'0nm
'&0nm
6&0nm
0ltra9ioleta!
&00nm a 1nm
,a:os ;
1nm a 1pm
,a:os <
= 1pm
2nfrarrojo!
>'0nm a 2' um
*i#roondas!
2'um a 1mm
)ndas de radio
? 1mm
.os cuerpos luminosos como el sol o las l&mparas el0ctricas emiten
un %ran espectro electroma%n0tico ue comprende amplias
lon%itudes de onda1 de las cuales mu( pocas corresponden al
espectro )isi2le" En el cuadro anterior se aprecian todas las
radiaciones electroma%n0ticas conocidas"
.os cuerpos coloreados1 a2sor2en lu$ de determinada lon%itud de
onda ( re#le'an el resto del espectro luminoso )isi2le e in)isi2le
+colores complementarios- Esta lu$ re#le'ada es la ue o2ser)amos
como color propio del cuerpo coloreado" No interesa
particularmente los colores ue a2sor2e la soluci!n ue ueremos
medir" .a selecti)idad de a2sorci!n ue ueremos medir" .a
selecti)idad de a2sorci!n de una partícula por una lon%itud de onda
se 2asa en el 7ec7o de ue cada lon%itud de onda de lu$
corresponde a un distinto ni)el de ener%ía1 ( para e*citar los
electrones de cada partícula necesitamos un particular ni)el de
ener%ía"
Si consideramos ue cada mol0cula a2sor2e lu$ de acuerdo a la
concentraci!n en ue se encuentre dentro de la soluci!n1 a ma(or
a2sorci!n de lu$ ( menor lu$ trasmitida" Estos #actores est&n
considerados en la le( de .am2ert ( Beer"
L,(0it12 2e ,(2a C,*,r C,*,res ),m.*eme(tari,s
<44:<;3 )ioleta amarillo:)erde
<;3:<>4 a$ul amarillo:)erde
<>4:<?4 )erde:a$ul anaran'ado
<?4:344 a$ul:)erde ro'o
344:364 )erde purpura
364:3>4 amarillo:)erde )ioleta
3>4:3?3 amarillo:)erde a$ul
3?3:654 anaran'ado )erde:a$ul
654:@34 ro'o a$ul:)erde
.os cuerpos coloreados1 a2sor2en lu$ de determinada lon%itud de
onda ( re#le'an el resto del espectro luminoso )isi2le e in)isi2le
+colores complementarios-" Esta lu$ re#le'ada es la ue o2ser)amos
como color propio del cuerpo coloreado" Interesa particularmente
6
los colores ue a2sor2en la soluci!n ue ueremos medir" .a
selecti)idad de a2sorci!n de una partícula por una lon%itud de onda
se 2asa en ue cada lon%itud de onda de lu$ corresponde a un
distinto ni)el de ener%ía ( para e*citar los electrones de cada
partícula se necesita un particular ni)el de ener%ía"
Sí consideramos ue cada mol0cula a2sor2e lu$ de acuerdo a la
concentraci!n en ue se encuentre dentro de la soluci!n1 a ma(or
concentraci!n de sustancia1 ma(or a2sorci!n de lu$ ( menor lu$
trasmitida" Estos #actores est&n considerados en la .e( de .am2ert
( Beer1 ue es la si%uiente9
Log I
o
/I
t
= e.l.c
Donde9 I
o
A .u$ incidente1 I
t
A .u$ transmitida1 C A concentraci!n1
. A lon%itud de paso1 e A constante"
3& FOTOCOLORIMETRIA 4 ESPECTROFOTOMETRIA
.a #otocolorimetría es la medida de la lu$ a2sor2ida por una
soluci!n mediante un aparato ue es un #otocolorímetro" El euipo
consta de una #uente de lu$ arti#icial1 un monocromador ue separa
e*clusi)amente lu$ de una sola lon%itud de onda +la ue sea
pre#erente para la medida-1 un recipiente o tu2o de )idrio +ue
al2er%a la soluci!n a medir-1 una c0lula #otoel0ctrica ue trans#orma
la lu$ trasmitida en corriente el0ctrica ( una unidad de medida de la
corriente el0ctrica o %al)an!metro"
.a cali#icaci!n de colorímetro o espectro#ot!metro depende del
monocromador1 sí 0ste es un #iltro tendremos un #otocolorímetro1
pero si es un prisma1 o cualuier aditamento ue proporcione lu$ de
di)ersas lon%itudes de onda tendremos un espectro#ot!metro"
>
.u$ Incidente I
o
.u$ trasmitida I
t
.os #otocolorímetros ( los espectro#ot!metros reportan sus
resultados 2a'o dos #ormas9 a2sor2ancia o lu$ a2sor2ida por las
partícula de la soluci!n ( transmitancia a o lu$ transmitida lue%o de
atra)esar el tu2o con la soluci!n" .a transmitancia se e*presa en
)alores num0ricos entre 4 ( 544B1 es decir ue una soluci!n ue no
tiene particular trasmitir& el 544B ( una per#ectamente opaca el 4B"
.a a2sor2ancia1 tam2i0n llamada densidad !ptica DO1 se e*presa
en )alores semilo%arítmicos entre 4 ( 8 correspondiendo el 4 a
auella soluci!n ue no tiene partículas ( por lo tanto no a2sor2e la
lu$"
Para encontrar la concentraci!n de una soluci!n .r,-*ema#
de2emos comparar su lectura #rente a un 2lanco / a%ua destilada o
reacti)os sin modi#icarse / con la lectura de un patr!n o soluci!n
est&ndar 2a'o las mismas condiciones" Cna soluci!n est&ndar es
%eneralmente una ue contiene el pro2lema con una concentraci!n
per#ectamente medida en el la2oratorio"

CÁLCULO DE LA CONCENTRACI"N DE UN PROBLEMA
Para 7allar la concentraci!n de una muestra pro2lema tenemos dos
procedimientos9
5" Dactor de Cali2raci!n
8" Cur)as de cali2raci!n
Fa)t,r 2e )a*i-ra)i5(9 es la concentraci!n de sustancia ue
corresponde a una unidad de medida1 %eneralmente 41445 de
a2sor2ancia"
@
Fuente de luz
blanca
ue!t"a: Ab!#"c$%n
Celda
&al'an%(et"#
#n#c"#(ad#"
Se o2tiene Dactor de cali2raci!n9
concentraci!n del patr!n
.ectura del patr!n +en a2sor2ancia-
Esta #!rmula deri)a de la densidad !ptica o a2sor2ancia del
pro2lema9
DO
P
A e
P
l
P
c
P
Si el coe#iciente de e*tinci!n +e- es el mismo en am2os casos ( el
di&metro del tu2o de lectura+l- es el mismo1 la =nica di#erencia est&
en la concentraci!n" .ue%o9
DO
st CS
A
DO
p CP
Despe'ando la concentraci!n del pro2lema cp1 o2tenemos la
si%uiente #ormula9

cs
cpADp * ::::::::
Dost
Concentraci!n del pro2lema A Densidad Eptica del Pro2lema F
Dactor de cali2raci!n
.a cur)a de cali2raci!n consiste en la o2tenci!n de las lecturas de
a2sorci!n 4 de B de trasmitancia ue corresponde a una secuencia
creciente de concentraciones1 estas son %ra#icadas en un papel
milim0trico si se trata de a2sor2ancia o densidad !ptica ( de papel
semilo%arítmico si se trata de B de transmitancia"
6& POTENCIOMETRÍA
.a potenciometría es el procedimiento de elecci!n para la medida
del pG" El pG en una e*presi!n num0rica ue corresponde al
lo%aritmo de la in)ersa de la concentraci!n de iones GH" .a
potenciometría se 2asa en la di#erencia de potencial +)olta'e- entre
dos electrodos1 el de medida ( el de re#erencia1 am2os sumer%idos
en la soluci!n ( 2a'o condiciones de euili2rio"
El instrumento consta de un ELECTRODO DE REFERENCIA ue
se mantiene constante durante la medida1 un ELECTRODO DE
MEDIDA ue )aria de acuerdo a la concentraci!n de 7idr!%eno de
la soluci!n ( un 2is.,siti7, , .,te()i5metr, ue mide la
di#erencia de potencial" El electrodo de re#erencia puede ser de dos
A
Batería
89 %9
AA0&Aa
H)*0C*&HC*&9i2ri,
:C*&H0/C*/&H0
S,*1)i5(
Pr,-*em
a&
clase9 de calomel1 mercurio metálico ( cloruro mercurioso ( de plata
plata y cloruro de plata. El potencial de ese electrodo depende de la
soluci!n de cloruro de potasio en ue est& sumer%ido internamente"
El electrodo de medida1 es tam2i0n llamado electrodo de )idrio1 est&
constituido por un tu2o de )idrio cu(o e*tremo es particularmente
selecti)o al paso de iones 7idr!%eno" En su interior 7a( &cido
clor7ídrico GCl 415 M ( un alam2re de plata1 cloruro de plata1
En el potenci!metro1 un )olta'e )aria2le se opone al de la celda de
medida" Cn %al)an!metro act=a como detector del punto nulo para
indicar ue es i%ual al )olta'e opuesto de la celda de medida"
Conectando la celda desconocida al circuito se produce un desni)el
de )olta'e ue de2e corre%irse 7asta alcan$ar el punto nulo" .a
ma%nitud de la correcci!n puede leerse como #uer$a electromotri$ o
como pG directamente"
En la pr&ctica se 7a usado los electrodos de pG para medir la
concentraci!n de otros iones" .os electrodos tienen una mem2rana
adicional ue s!lo es selecti)a al paso de determinado electrolito1
sodio1 potasio1 calcio son medidos 2a'o esta manera con #acilidad"
Tam2i0n e*iste el electrodo de CO8 ue de'a pasar mol0culas se
este %as las ue modi#ican el pG ( por lo tanto son medidas con el
electrodo de )idrio de pG"
;& ESPECTROFOTOMETRIA
10
E<PERIMENTO& Pre.ara)i5( 2e 1(a )1r7a 2e )a*i-ra)i5(: el
e*perimento consiste en preparar tu2os de concentraci!n creciente
de un colorante ( leerlos al #otocolorímetro o al espectro#ot!metro1
lle)ando a cero +4- el aparato con a%ua destilada" Construir una
%r&#ica usando papel milimetrado para las lecturas 7ec7as en DO
+densidad !ptica- o papel semilo%arítmicos para las lecturas
7ec7as en B transmitancia"
Para el e#ecto1 preparar cinco tu2os de acuerdo al esuema ( leer
las soluciones al espectro#ot!metro a 3<4 nm de lon%itud de onda"
Practicar esta lectura tanto en DO como en B de transmitancia"
Construir dos cur)as de cali2raci!n1 una en papel milimetrado ( otra
en papel semilo%arítmico"
C,(te(i2,
T1-, N=
5 8 ; < 3
mL A>1* meti*e(, a* ?; m0@M*A 8 < 6 > 54
mL A01a 2esti*a2a > 6 < 8 4
C,()e(tra)i5( ?m0@mLA B T A ?AC/*,0TBA
Des),(,)i2, %
Des),(,)i2, /

COMENTARIO
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
11
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII"""
Csando los )alores o2tenidos en % de trasmitancia, %ra#iue
usando el papel semilo%arítmico de esta p&%ina"
COMENTARIO
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII"
Dirma del alumno Dirma del pro#esor
NOTA
Dec7a Gora
PRACTICAS DE LABORATORIO N=/: POTENCIOMETRIA
E<PERIMENTO: Tit1*a)i5( 2e 1( D)i2, 2E-i* ),( 1(a -ase
'1erte&
12
Se trata de determinar el pG de un %rupo de tu2os con )arios
ni)eles de titulaci!n de &cido ac0tico con 7idr!*ido de sodio"
Cuando se titula un &cido d02il con una 2ase #uerte se produce un
aumento de pG inicialmente r&pido para lue%o 7acerse lento1 dentro
de ciertos m&r%enes ( al #inal se alcalini$a r&pidamente" .a
identi#icaci!n del cam2io de pG en cierto período de la titulaci!n1 se
de2e a la #ormaci!n transitoria de una com2inaci!n de &cido d02il (
la sal correspondiente" En el caso del e*perimento ser& la
com2inaci!n de &cido ac0tico ( acetato de sodio ( son los
componentes ordinarios de una soluci!n amorti%uadora o soluci!n
2u##er"Para la e*periencia preparar 55 tu2os de acuerdo al si%uiente
esuema9
T1-, N, mL a)Eti), 8#% N mL NaOH 8#% N mL a01a
2esti*a2a
5 314 414 314
8 '$0 413 <13
; '$0 514 <14
< '$0 513 ;13
3 '$0 814 ;14
6 '$0 813 813
@ '$0 ;14 814
> '$0 ;13 513
? '$0 <14 514
54 '$0 <13 413
55 '$0 314 414
.eer los tu2os en el potenci!metro ( %ra#icar los resultados
NOTA
Dec7a Gora
PRACTICAS DE LABORATORIO N=3
CINFTICA EN+IMÁTICA: EFECTO DEL PG H LA TEMPERATURA
13
.as en$imas son proteínas ue aceleran las reacciones uímicas
7asta su punto de euili2rio"
.a ecuaci!n %eneral de las en$imas es9
E H S ES E H P
CJ C››
.a acti)idad en$im&tica se mani#iesta ( mide por9
Desaparici!n de sustrato
Dormaci!n de producto
Modi#icaci!n de co#actor
Muc7os #actores modi#ican la acti)idad en$im&tica9
pG
Temperatura
Concentraci!n de sustrato
Concentraci!n de en$ima
Tiempo de incu2aci!n
En nuestra pr&ctica o2ser)amos el e#ecto de la pepsina so2re la
al2=mina del 7ue)o" .a acti)idad en$im&tica se apreciar& por la
p0rdida de la tur2ide$ proteica"
E<PERIMENTO& E'e)t, 2e* .H
El pG act=a so2re los %rupos ioni$ados ue pertenecen a los
centros acti)os de las en$imas" .os %rupos ue pierden la
ioni$aci!n pierden la capacidad de interaccionar con el sustrato"
Cada en$ima tiene un pG !ptimo de tra2a'o"
Preparar cinco tu2os con9
TUBO N= % / 3 6 ;
P7 %#8 %#; I#8 J#; %%
m. al2=mina ;#8 ;#8 ;#8 ;#8 ;#8
m. GC. 5N /#8 8#; 8#8 8#8 8#8
m. CO
;
Na
8
8#8 8#8 8#8 8#; /#8
m. a%ua destilada 8#8 %#; /#8 %#; 8#8
Preincu2ar los cinco tu2os m&s un tu2o conteniendo 84 m. de
pepsina al 5B a ;@KC por 3 minutos" .ue%o aLadir r&pidamente ;
1&
m. de la pepsina preincu2ada a cada uno de los tu2os 5/3" Me$clar
e incu2ar a ;@KC por 54 min" O2ser)ar la di#erencia o leerla en
#otocolorímetro con #iltro a$ul +<84 nm-"
E<PERIMENTO: E'e)t, 2e *a tem.erat1ra&
Todo aumento de temperatura incrementa la acti)idad en$im&tica
por aumento de la ener%ía de acti)aci!n" Pero paralelamente se )a
produciendo una desnaturali$aci!n parcial de la en$ima ue la
inacti)a"
Preparar cinco tu2os con9
TUBO N= % / 3 6 ;
m. al2=mina ;#8 ;#8 ;#8 ;#8 ;#8
m. GC. 5N 8#; 8#; 8#; 8#; 8#;
m. a%ua destilada 3#; 3#; 3#; 3#; 3#;
Preparar otros cinco tu2os con9
TUBO N= I K L J %8
m. pepsina 5B %#8 %#8 %#8 %#8 %#8
Incu2ar por 3 minutos de acuerdo al si%uiente esuema de temperatura9
TUBO N= % H I / H K 3 H L 6 H J ; %8
Temperatura O =C Am-& 3K =C K8 =C 3K

=C %88 =C
A%re%ar los respecti)os tu2o NK 6 al NK 54 a los ue 7a( ue incu2ar a las
temperaturas a ue se pre:incu2an los tu2os 5 / 3"
1'
C,me(tari,:
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
Dirma del alumno
NOTA
Dec7a Gora
C,me(tari,:
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
Dirma del pro#esor
PRACTICAS DE LABORATORIO N=6
CINETICA EN+IMATICA: EFECTO CONCENTRACION# EN+IMA $
SUSTRATO

E<PERIMENTO& E'e)t, 2e *a ),()e(tra)i5( 2e *a e(>ima
Aunue las en$imas no se destru(en ni con las reacciones1 el
aumento de ellas en la cu2eta de reacci!n incrementa la )elocidad"
Preparar 3 tu2os con9
TUBO N= % / 3 6 ;
m. al2=mina ;#8 ;#8 ;&8 ;#8 ;#8
m. GC. 5N 8#; 8#; 8&; 8#; 8#;
m. a%ua destilada %#; /#; 3&; 6#8 6#;
m. pepsina 8#8 8#8 8&8 8#8 8#8
Incu2ar los 3 tu2os a ;@KC por 3 minutos ( ense%uida aLadir9
TUBO N= % / 3 6 ;
m. pepsina incu2ada 3#8 /#8 %#8 8&; 8#%
Incu2ar por cinco minutos a ;@KC" O2ser)ar al #otocolorímetro a <84 nm
+#iltro a$ul-1 contra una lectura de a%ua"
16
E<PERIMENTO&E'e)t, 2e *a ),()e(tra)i5( 2e* s1strat,
Si es una reacci!n en$im&tica incrementamos pro%resi)amente la
concentraci!n del sustrato1 aumentar& la )elocidad en$im&tica
+)elocidad inicial- 7asta un punto en ue la )elocidad lle%a a una
meseta plana ue no modi#ica aunue si%amos aumentando el
sustrato1 7a2remos saturado la en$ima"
Preparar 6 tu2os con9
TUBO N= % / 3 6 ; I
m. al2=mina /#8 3#8 6#8 ;#8 I#8 K#8
m. GC. 5N 8#; 8#; 8#; 8#; 8#; 8#;
m. a%ua destilada K#8 I#8 ;#8 6#8 3#8 /#8
m. pepsina 5B 8#8 8#8 8#8 8#8 8#8 8#8
.eer a <84 nm +#iltro a$ul-" Anotar los resultados9 incu2ar a ;@KC"
Colocar 413 m. ue pepsina pre:diri%ida" Incu2ar por otros 3
minutos a ;@KC" .eer al #otocolorímetro a <84 nm +#iltro a$ul-" Restar
la se%unda lectura de la primera" ,ra#icar ( comentar los
resultados"
1>
C,me(tari,:
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
C,me(tari,:
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIII
Dirma del alumno
NOTA
Dec7a Gora
Dirma del pro#esor









PRACTICAS DE LABORATORIO N=;
DIGESTI"N DE CARBOHIDRATOS
El car2o7idratos m&s importante en la alimentaci!n es la %lucosa1 la
cual in%erimos 2a'o la #orma de disac&ridos +maltosa1 sacarosa (
lactosa- o de almid!n1 polisac&ridos #ormado por muc7as mol0culas
de %lucosa" El almid!n es el constitu(ente esencial de cereales1
le%uminosa1 tu20rculos ( raíces" .a di%esti!n del almid!n se
produce en el intestino del%ado %racias a la presencia de en$imas
di%esti)as producidas por las %l&ndulas sali)ares1 el p&ncreas ( la
pared intestinal" Estas en$imas son9
.a al#a amilasa sali)ar
.a al#a amilasa pancre&tica
.a amilo 516 %lucosidasa de la pared intestinal
.as al#a amilasas son en$imas ue act=an a pG neutro ( en
presencia de iones cloro" Rompen los enlaces amilo 51< dando
como resultado oli%osac&ridos ( %lucosa"
E*iste dos #ormas de e)aluar la acti)idad en$im&tica de la amilasa9
Por desaparici!n de sustrato9 #orma como desaparece el
almid!n el ue se aprecia por la reacci!n del lu%ol"
1@
Por #ormaci!n de producto9 #orma como aparecen
car2o7idratos reductores +%lucosa- en el medio1 los ue se
aprecian por reducci!n del co2re"
En nuestra pr&ctica e)aluaremos la acti)idad en$im&tica de la
amilasa so2re el almid!n mediante la reacci!n del remanente de
almid!n #rente al (odo a ma(or decoloraci!n1 ma(or acti)idad
en$im&tica"
E<PERIMENTO": Di0esti5( 2e* a*mi25( .,r *a ami*asa sa*i7ar"
Para la e*periencia preparar cuatro tu2os de ensa(o de acuerdo al
si%uiente esuema"
TUBO
% / 3 6
ml almid!n 5B / / / /
ml Bu##er #os#ato pG 616 % % % 8
ml GC. 41;N 8 8 8 3#6
ml Suero #isiol!%ico 3 /#6 8 8
ml A%ua destilada 8 8 /#6 8
Colocar en 2aLo de María a ;@KC por 3 minutos" A%re%ar9
ml soluci!n de sali)a 8 8#I 8#I 8#I
Colocar en 2aLo de maría a ;@KC por 84 minutos
Pasado este tiempo tomar 0,5ml de cada tubo y preparar cuatro tubos
más de acuerdo al esquema
TUBO
% / 3 6
ml di%esti!n tu2o 5
8# ; 8 8 8
ml di%esti!n tu2o 8
8 8#; 8 8
ml di%esti!n tu2o ;
8 8 8#; 8
ml di%esti!n tu2o <
8 8 8 8#;
ml GC. 4143N
; ; ; ;
ml Soluci!n (odada
8#; 8#; 8#; 8#;
Dejar en reposo por 15 minutos. Leer al fotocolorímetro con fltro rojo
!!0nm"
INFORME DE LA PRÁCTICA
1A
Nom2re9
,rupo 9 Dec7a9
EM.erime(t,& Di0esti5( 2e* a*mi25( .,r *a ami*asa sa*i7ar
COMENTARIO:
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII"
Dirma del alumno Dirma del pro#esor
NOTA
Dec7a Gora
PRACTICAS DE LABORATORIO N=I:
ABSORCI"N DE CARBOHIDRATOS
20
Despu0s de la di%esti!n de los car2o7idratos por e#ecto de amilasas
sali)ar ( pancre&tica1 amilo 1,6 glucosidasa, y disacarasas tenemos
como resultado monosac&ridos9 %lucosa1 #ructosa1 %alactosa1 ue
de2er&n ser a2sor2idos por la mucosa intestinal para su in%reso a la
circulaci!n san%uínea" .os car2o7idratos se a2sor2en en el (e(uno
mediante dos mecanismos1 la simple di#usi!n #a)orecida por la
%radiente de concentraci!n ( el transporte acti)o1 a=n contra la
%radiente" El orden de #acilidad en la a2sorci!n es de %alactosa
%lucosa9 ri2osa"
El 2orde en cepillo de las c0lulas intestinales tiene )arios sistemas
trasportadores" Cn transportador de %lucosa dependiente del sodio
+S.,T5- se enla$a tanto a la %lucosa como al sodio en sitios
separados aumentando el tenor de sodio intracelular" .a ener%ía
necesaria para este transporte se o2tiene de la 7idr!lisis del ATP
)inculado a una 2om2a de sodio ue intercam2ia sodio con potasio

Tam2i0n participa un transportador #acilitador independiente del
sodio llamado GLUT ;& .a 7idr!lisis de los polisac&ridos1
oli%osac&ridos ( disac&ridos es mu( r&pida por lo ue usualmente
los procedimientos de a2sorci!n se saturan con rapide$"
E<PERIMENTO&A-s,r)i5( 2e *a 0*1),sa .,r e* i(testi(, 2e *a
rata
21
5" Se usan ratas con 8< a ;6 7oras de a(uno" Se les anestesia
con eter 2a'o una campana de )idrio" A2rirles el a2domen ( se
retira una porci!n de 3 cm de intestino1 de modo ue no
puede mesenterio ad7erido"
8" Se la)a la lu$ intestinal )arias )eces mediante una 'erin%a con
soluci!n Rin%er Dos#ato pG @1< Mediante el uso de una
2aueta de )idrio se empu'a un e*tremo del intestino dentro
del mismo 2uscando e)ertir la porci!n mucosa 7acia #uera"
Mantener el intestino en soluci!n Rin%er Dos#ato pG @1< a
temperatura am2iente"
;" Cerrar un e*tremo del intestino con 7ilo ( de'ar otra li%adura
suelta en el otro e*tremo del intestino"
<" Introducir en el saco intestinal #ormato 8 ml de soluci!n Rin%er
Dos#ato pG @1< con 418B de %lucosa" Cerrar la li%adura suelta
( re)isar ue no 7a(a p0rdida de líuido"
3" Introducir el saco lleno en un tu2o con 8 ml soluci!n Rin%er
Dos#ato pG @1< con %lucosa 418B Incu2ar a ;@KC por ;4
minutos" Pasado del tiempo sacar el sauito1 secarlo por #uera
con papel de #iltro" Cortarlo con ti'era ( )aciar el contenido en
u tu2o de ensa(o"
6" Diluir 5954 con a%ua destilada1 tanto el contenido del sauito1
como el del tu2o ue lo reci2i! durante la incu2aci!n" .ue%o
proceder a preparar < tu2os de acuerdo al si%uiente esuema"
TUBO
% / 3 6
ml reacti)o para %lucosa
/ / / /
μl a%ua destilada
;8 8 8 8
μl patr!n 84 m%Md.
8 ;8 8 8
μl soluci!n diluida intra saco
8 8 ;8 8
μl soluci!n diluida e*tra saco
8 8 8 ;8
#ncubar a $%&' por 10 minutos. (nfriar y leer en el fotocolorímetro a
5)0nm. *sando el tubo 1 como blanco
COMENTARIO: IIIIIIIIIIIIIIIIIIII"
Dirma del alumno Dirma del pro#esor
NOTA Dec7a Gora
PRACTICAS DE LABORATORIO N=K:
GLIC"LISIS
22
.a )ía meta2!lica m&s importante para la %lucosa es la )ía
%licolítica o de Em2den Me(e7o#" Esta presente1 naturalmente1 en
todos los te'idos ( es responsa2le del apro)ec7amiento ener%0tico
de la %lucosa ( a=n de otros car2o7idratos" Tiene dos #ormas de
mani#estarse9 *a ',rma a(aer5-i)a cuando la concentraci!n de
o*í%eno es 2a'a1 produce &cido pir=)ico ( &cido l&ctico1 ( %enera
escasamente 2,s m,*E)1*as 2e ATP1 tal como se aprecia en la
si%uiente #!rmula %lo2al"
,.CCOSA H 8ADP H Pi 8 lactato H 8ATP H 8G8O
Cuando la %lic!lisis transcurre e( .rese()ia a-1(2a(te 2e
,MN0e(,1 tiene como producto #inal el &cido pir=)ico1 el cual se
trans#orma en ac0til CoA mediante el proceso de decar2o*ilaci!n
o*idati)a1 en in%resa al Ciclo de Nre2s donde produce 3L
m,*E)1*as 2e ATP&
E<PERIMENTO& G*i)5*isis&
23
.a %lic!lisis anaer!2ica +parcialmente- se demuestra por el aumento
de compuestos &cidos +pir=)ico ( l&ctico- en el tu2o de reacci!n"
Para el e#ecto preparar cuatro tu2os de acuerdo al esuema"
TUBO
% / 3 6
ml soluci!n de Potter pG @1<
/#; /#; /#; /#;
ml ,lucosa 415 m
8#; 8#; 8#; 8#;
ml NAD 54m %Mml
8#/ 8#8 8#/ 8#/
ml ATP 3m %Mml
8#/ 8#/ 8 8#/
ml Nicotinamida 41<m
8#% 8#% 8#% 8#%
ml Oodoacetato 415m
8 8 8 8#%
ml A%ua destilada
8#% 8#3 8#3 8
Colocar en 2aLo de maría ;@KC por 3 minutos
,otas de ro'o de #enol
Ii Ii ii Ii
ml 7omo%eni$ado de 7í%ado
8#; 8#; 8#; 8#;
+apar e incubar 1 ,ora a $%&'
+itular cada tubo con -a./ 0,01- ,asta el color ori0inal
COMENTARIO:
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII"
Dirma del alumno Dirma del pro#esor
NOTA
Dec7a Gora
PRACTICAS DE LABORATORIO N=L:
RESPIRACI"N TISULAR
2&
.a
respiraci!n tisular
es el proceso por
el cual se
apro)ec7a la
ener%ía
almacenada en los
nutrientes
+%lucosa1 &cidos
%rasos1
amino&cidos- a
tra)0s del Ac0til
CoA1 mediante
procesos de
o*idaci!n"
Durante el proceso de o*idaci!n del
Acil Coa se #orman eui)alentes
reductores en #orma de 7idr!%eno o
electrones ue in%resan a la cadena
respiratoria1 locali$ada en las
mitocondrias ( %enera muc7as mol0culas de ATP" Como puede
apreciarse en el esuema ad'unto 7a( tres #uentes de %eneraci!n
de electrones ue producen ; mol0culas de ATP1 el isocitrato1 el
ceto%lutarato ( el malato ( una ue s!lo proporciona dos ATP
ue es el succinato1 de2ido a ue in%resa al ciclo de Nre2s a
ni)el de la Coen$ima P ( no del NAD como las otras"
El punto #inal del transporte de los electrones por la cadena
respiratoria es el o*í%eno" Dos &tomos de 7idr!%eno se unen a Q
mol0cula de o*í%eno para #orma una mol0cula de a%ua" El
proceso o*idati)o de los nutrientes se puede se%uir por el
consumo de o*í%eno"
E<PERIMENTO: Res.ira)i5( Tis1*ar
El e*perimento estudia la respiraci!n tisular mediante la
manometría" Cn man!metro es un instrumento ue mide los
cam2ios en la presi!n de los %ases" Esta 2asado en el principio
de )asos comunicantes1 si colocamos un líuido en dos
recipientes ue se comunican entre sí1 am2as ramas ser&n
i%uales siempre ue so2re ellas e*ista la misma presi!n so2re
una de ellas disminu(e los ni)eles de líuido se desi%ualan" .os
2'
euipos ue usaremos ser&n i%uales o seme'antes a los ue se
o2ser)an en el %r&#ico1 es decir constan de un am2iente cerrado
para la reacci!n1 un medio de a2sorci!n de CO
8
ue puede
com2inar
Preparar dos #rascos de acuerdo al si%uiente esuema9
FRASCO N= %
ml Soluci!n de Potter pG @1<
3
ml Succinato de potasio 413m
8#3
ml A%ua destilada
8#K
ml Gomo%eni$ado
8#;
Cerrar 2ien los #rascos" Incu2ar a temperatura am2iente" Medir cada 8 minutos
la modi#icaci!n del ni)el del man!metro" Prepara un %r&#ico de consumo de
o*í%eno )s tiempo"
Comentario9
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
Dirma del alumno Dirma del pro#esor
NOTA
26
Dec7a Gora
PRACTICAS DE LABORATORIO N=J:
COLESTEROL DE LAS FRACCIONES LIPOPROTEÍCAS
.as proteínas son lípidos comple'os resultado de unir la %rasa con
proteínas" .os lípidos san%uíneos se encuentran 2a'o esta #orma (
di)ididos en cuatro tipos de lipoproteína9
Al#a lipoproteína +GD.- ricas en proteínas ( #os#olípidos
Pre /2eta lipoproteínas +R.D.-9 ricas en tri%lic0rido
Beta lipoproteínas +.D.-9 ricas en colesterol
Puilomicrones +P-9 ricos en tri%lic0ridos diet0ticos
Toda las lipoproteínas tienen colesterol1 tri%lic0ridos1 #os#olípidos (
proteínas1 pero en distinta concentraci!n relati)a"
El colesterol es la %rasa ue %enera la arterioescleroris al
depositarse en las paredes de los )asos san%uíneos" El colesterol
de las 2etalipoproteínas est& en actitud de depositarse en los )asos
constitu(e la ma(or parte del colesterol san%uíneo" El colesterol de
las al#a lipoproteínas +GD.- es auel ue est& siendo retirado de los
)asos1 por lo ue su presencia es 2ene#iciosa"
Para in)esti%ar el colesterol de las al#a lipoproteínas usamos un
reacti)o precipitante +#os#ot=n%stico:cloruro de calcio- ue precipita
2>
a las 2etas ( pre2etalipoproteínas de'ando en soluci!n a las al#a1
so2re las ue se reali$a la reacci!n de color típica del colesterol"
E<PERIMENTO: Dosa'e colesterol total ( colesterol GD. en san%re"
Se toma una muestra de san%re del paciente en a(uno de por lo
menos 8< 7oras" .a san%re se coloca en tu2o limpio sin
anticoa%ulante"
Preparar un tu2o al ue se le coloca9
5ml de suero límpido
4"5 ml de reacti)o precipitante GD. o II %otas
A%itar ( de'ar en reposo por minutos al am2iente Centri#u%ar a ;
444 por 54 minutos separar el so2renadante"
Preparar cuatro tu2os límpidos ( colocar9
TUBO N= % / 3 6
ml Suero límpido
8#8/ 8 8 8
ml So2renadente anterior
8 8#8/ 8 8
ml Patr!n de colesterol
8 8 8#8/ 8
ml A%ua destilada
8 8 8 8#8/
ml Reacti)o de color
/ / / /
A%itar9 Incu2ar por 53 minutos a ;@KC"
.eer al #otocolorímetro a 384 mu los tu2os 518 ( ;1 lle)ando a cero
con el 2lanco +tu2o<-
C&lculos
844
Colesterol m%MdlA :::::::: F D"O"+5 ! 8-
2@
D"O +;-
E<PERIMENTO : Dosa'e de tri%lic0ridos
Preparar tres tu2os con9
TUBO N= % / 3
ml Suero
8 8#8/ 8
ml Patr!n de tri%lic0ridos
8 8 8#8/
ml Reacti)o de color
/ / /
A%itar1 incu2ar a ;@KC por 53 minutos
.eer al #otocolorímetro a 384 nm los tu2os 8 ( ; lle)ando a SOT con el tu2o 5
Conc" Patr!n
Tri%lic0ridos m%Mdl A ::::::: * D"O"+8-
D"O +;-
INFORME DE LA PRÁCTICA : RIESGO CORONARIO
N,m-re:
"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
E*perimento9 Dosa'e de colesterol total ( colesterol GD. en san%re
Patr!n9
.ectura9
Concentraci!n9
Dactor de Cali2raci!n9
2A
Colesterol total9
PRACTICAS DE LABORATORIO N=%8:
LIPIDOS: ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
.a electro#oresis es una t0cnica para la separaci!n de mol0culas
+proteínas o &cidos nucleicos- so2re la 2ase de su tamaLo
molecular ( car%a el0ctrica" .os &cidos nucleicos (a disponen de
una car%a el0ctrica ne%ati)a1 ue los diri%ir& al polo positi)o1
mientras ue las proteínas son mol0culas cu(a car%a neta depende
del contenido de una serie de amino&cidos +#undamentalmente
&cido %lut&mico1 &cido asp&rtico1 lisina1 ar%inina e 7istidina-" Para la
separaci!n se usa un %el de a%arosa1 poliacrilamida o acetato de
celulosa" Al poner la me$cla de mol0culas ( aplicar un campo
el0ctrico1 0stas se mo)er&n ( de2er&n ir pasando por el papel1 por
la ue las peueLas se mo)er&n me'or ( r&pidamente" Así1 las m&s
peueLas a)an$ar&n m&s ( las m&s %randes uedar&n cerca del
lu%ar de partida"
En resumen1 puede decirse ue cuando una mol0cula car%ada se
coloca en un campo el0ctrico se mo)er& 7acia uno u otro electrodo
dependiendo de9
5- su car%a el0ctrica
8- su tamaLo
;- la intensidad del campo el0ctrico (
<- la temperatura del medio"
.as proteínas est&n compuestas de amino&cidos ue poseen
%rupos ioni$a2les +principalmente :COO
:
( :NG;
H
-1 pueden
encontrarse car%adas positi)a o ne%ati)amente1 o 2ien permanecer
el0ctricamente neutras se%=n la proporci!n de los di)ersos %rupos
ioni$ados a un determinado pG"
En suero 7umano la composici!n normal es9
• Proteína total9 61< a >1; %Md.
• Al2=mina9 ;13 a 314 %Md.
• Al#a:5 %lo2ulina9 415 a 41; %Md.
• Al#a:8 %lo2ulina9 416 a 514 %Md.
• Beta %lo2ulina9 41@ a 518 %Md.
• ,amma%lo2ulina9 41@ a 516 %Md.
30
ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA
Se usa para la separaci!n ( caracteri$aci!n de proteínas ( otras
mol0culas" El soporte consiste en tiras del%adas de acetato de
celulosa1 con propiedades de adsorci!n mínimas1 por lo ue se
e)ita la #ormaci!n de colas ( los solutos pueden ser separados en
2andas 2ien de#inidas" Otras )enta'as son9
5- .a separaci!n es mu( r&pida
8- Se pueden anali$ar cantidades de muestra peueLas
;- .as tiras pueden 7acerse transparentes
<- .a tira se puede disol)er1 recuperando los componentes
separados
3- Presentan un #ondo 2a'o cuando se separan compuestos
radiacti)os
MATERIAL $ REACTI9OS
Material
: Tiras de acetato de celulosa +SCello%elT-
: Papel de #iltro para secar las tiras de acetato
: Cu2eta de electro#oresis
: Aplicador
: Duente de electro#oresis
Rea)ti7,s
:Tamp!n Tris:GCl 54 mM ( EDTA 5 mM pGA>16
:Soluci!n de tinci!n9 4"5B +pM)- ponceau S stain en &cido ac0tico
5B
:Soluci!n de la)ado9 &cido ac0tico 5B
:Suero
PROCEDIMIENTO E<PERIMENTAL
Electro#oresis9
B Gumedecer en tamp!n las tiras de acetato de celulosa 54 minutos
antes de su uso1 para su euili2rado"
B E*tender las tiras so2re el puente de la cu2eta de modo ue la
super#icie
B penetra2le uede 7acia la parte superior" El lado penetra2le es el
ue se )e cuando la tira se coloca en )ertical delante de nosotros
con el corte en la esuina in#erior derec7a
B Depositar la muestra de suero en la tira de acetato de celulosa1 en
el e*tremo pr!*imo al c&todo"
B Conectar la corriente1 aplicando una di#erencia de potencial de 544
)oltios durante 64 minutos"
Re)elado9
31
B Dinali$ada la separaci!n1 depositar las tiras en una cu2eta con
soluci!n de tinci!n1 de modo ue ueden cu2iertas por el líuido1
durante 54 minutos"
B .a)ar las tiras en soluci!n de distinci!n 7asta ue se o2ser)en
2ien las 2andas de proteína +ro'o- so2re un #ondo 2lanco"
TRATAMIENTO $ DISCUSION DE LOS RESULTADOS
Di2u'ar el patr!n de 2andas ue se 7a o2tenido tras la electro#oresis
de proteínas s0ricas1 indicando la posici!n de &nodo ( c&todo así
como el punto de aplicaci!n de la muestra" Identi#icar las proteínas
ue corresponden a cada 2anda ( 'usti#icar el orden"
Comentario9
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
Dirma del alumno Dirma del
pro#esor
NOTA
Dec7a Gora
32
PRACTICAS DE LABORATORIO N=%%:
TRANSAMINACI"N
Cna de las reacciones %enerales de los amino&cidos es la
transaminaci!n o trasporte de un %rupo amino de un amino&cido a
un ceto&cido1 tras#ormado al primero en ceto&cido ( al se%undo en
amino&cido"
Esta trans#ormaci!n posi2ilita la #ormaci!n de car2o7idratos a partir
de amino&cidos1 esto es el #en!meno de la neo%luco%0nesis"
.A ecuaci!n %eneral de estas reacciones es9
RACG:COOG H R:C:COO, R:C:COOGHR:CG:COOG

N78 O O NG8
En el caso de nuestro e*perimento la transaminasa ue
estudiaremos es la transaminasa glutámico pirúvica ue trans#orma
el al#a ceto%lut&rico +ceto&cido- en %lut&mico +amino&cido- ( a la
alanina +animo&cido- en per=)ico +ceto&cido-"
Esa en$ima ue es particularmente rica en el te'ido 7ep&tico es un
e*celente 7erramienta de estudio clínico de ese !r%ano1 en
pro2lemas como la 7epatitis o la cirrosis 7ep&tica"
El procedimiento de an&lisis se lle)ar& a ca2o mediante la
cromato%ra#ía en capa #ina"
PROCEDIMIENTO CROMATOGRÁFICOS
33
.a cromato%ra#ía es un procedimiento de an&lisis por el cual una
me$cla de mol0culas es separada en sus componentes mediante el
uso de una #ase estacionaria ( una m!)il"
.a #ase estacionaria o soporte da nom2re al tipo de cromato%ra#ía9
papel1 columna1 capa #ina ( la #ase m!)il es líuida o %aseosa"
.a separaci!n de componentes se produce por el #en!meno de
partici!n por sol)entes1 esto es ante una me$cla de líuidos no
misci2le entre sí1 al%unos componentes tendr&n ma(or posi2ilidad
de locali$arse en uno u otro componente1 auellos ue se localicen
en el componente m&s le'ano del soporte mi%raran m&s ( auellos
cercanos ser&n adsor2idos por el soporte"
E*isten una #orma identi#icatoria de medir la mi%raci!n de las
mol0culas anali$adas ( es el R#" Este )alor corresponde a la
relaci!n entre los cm mi%rados por la mol0cula ( auellos mi%rados
por el medio m!)il"
E<PERIMENTO: Dem,stra)i5( 2e tra(sami(a)i5( .,r
)r,mat,0ra'Na
Preparar < tu2os de acuerdo la esuema9
TUBO N= % / 3 6
ml ceto%lutarato 418 M
8#3 8#3 8 8
ml alanina 418M
8#3 8#3 8 8
ml piru)ato 418M
8 8 8#3 8#3
ml %lutamato 418M
8 8 8&#3 8#3
ml arsenito 415M
8#6 8#6 8#6 8#6
ml En$ima acti)a
8 % 8 %
ml En$ima inacti)a
% 8 % 8
3&
,8 CBBBBBBBBBBBBBBBBB
a
%
a
%
a
Incu2ar todos los tu2os por <3 minutos a ;@KC" Retirar los tu2os del
2aLo de María ( a%re%ar 6ml de alco7ol etílico a cada tu2o" A%itar (
esperar por dos minutos" Centri#u%ar ( usar los so2renadantes para
la cromato%ra#ía"
Cr,mat,0ra'Na
Marcar a ; cm del 2orde una línea sua)e con un l&pi$1 tratando de
no daLar la sílica %el" Marcar en esa línea seis puntos separados
por 8 cm cada uno" Colocar en cada punto cinco %otas del
respecti)o so2renadante ( en las dos =ltimas 3 %otas de alanina (
cinco de %lutamato respecti)amente" De'ar secar Colocar la
cromatoplaca en una c&mara de cromato%ra#ía con una me$cla de
propanol9 a%ua en la proporci!n de >9 De'ar correr 7asta ue el ni)el
líuido le #alte 5 cm para lle%ar al e*tremo de la placa" Marcar el
ni)el al ue alcan$! el líuido con un l&pi$ ( de'ar secar"
Aplicar con un spra( una soluci!n de nin7idrina al 415B e 2utanol"
Colocar a la estu#a por 54 minutos" Marcar las manc7as o2tenidas"
O2tener el R# de cada manc7a mediante la #!rmula9
Distancia de ori%en al punto medio de la manc7a
R#9
Distancia de ori%en al ni)el m&*imo del sol)ente
Comentario9
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII"
Dirma del alumno Dirma del pro#esor
NOTA
Dec7a Gora
3'
PRACTICAS DE LABORATORIO N=%/:
E9ALUACI"N NUTRICIONAL
EM.erime(t, & Ma(eO, 2e Ta-*as 2e C,m.,si)i5( 2e A*ime(t,s
.a #orma m&s e*acta de e)aluar la in%esta de nutrientes por un
su'eto es a tra)0s del c&lculo de la in%esta alimentaria1 2ien
documentada ( e*acta ( mediante las Ta2las de Composici!n de
Alimentos" En la presente pr&ctica anali$aremos9
5" .as necesidades cal!ricas de un su'eto9 tomando en cuenta1
peso ( tra2a'o" Así conocemos ue una persona %asta como
Meta2olismo Basal 5 Ucaloría MU%" PesoM7ora" A ello aLadimos
apro*imadamente un 34B por tra2a'o de mediana intensidad"
8" .as necesidades proteícas de un su'eto9 tomado su peso1
aceptamos una necesidad de 5%MU% de pesoMdía+ en
condiciones mínimas 413MU% pesoMdía-"
;" .as necesidades de nutrientes +proteína1 car2o7idratos (
%rasa- de un día al a$ar" Con ello podemos esta2lecer su
in%esta cal!rica ( proteíca ( por lo tanto su d0#icit o
adecuaci!n"
Para el e#ecto usaremos la si%uiente Ta2la de Composici!n de
Alimentos resumida"
TABLA DE COMPOSICI"N DE ALIMENTOS
0@%880 2e a*ime(t,
A*ime(t, Pr,teN(a LN.i2, Car-,Gi2rat,s
At!( ?),(ser7aA /J#8 6#L 8#8
Ba)a*a, ?se),A L%#L /#L 8#8
Ca*amar %I#6 8#J 8#8
Camar5( %K#3 8#/ /#;
Car(e ?)er2,A %;#8 %;#% 8#8
36
Car(e ?Pa7,A /8#% /8#/ 8#8
Car(e ?.,**,A %L#/ %8#/ 8#8
Car(e ?.1*.aA /%#3 %#I 8#8
Car(e Se)a 6L#% J#6 8#8
CGi)Garr,(es %%#3 I%#6 8#8
C,Oi(,7a /8#/ 8#K 8#8
C,r7i(a %J#J 8#J 8#8
HN0a2, %J#; I#I 3#I
H1e7, ?t,ta*A %/#L %%#L %#8
Pam5( 2e* PaNs %;#J /I#I 8#8
Pam5( I(0*Es /;#L /8#; 8#8
Le)Ge 'res)a /#J 3#3 K#8
Le(01a2, %J&8 8#; 8#8
Mer*1>a %J#3 8#L 8#8
PeOerreH %L#K %#/ 8#8
Q1es, Fres), %I#8 %8#3 3#K
Q1es, ma(te),s, /;#L /8#/ K#6
T,)i(, J#% I;#8 %#I
Tr1)Ga %L#/ %#8 8#8

A*ime(t, Pr,teN(a LN.i2, Car-,Gi2rat,s
Arr,> ?se),A I#; 8#K KL#%
Ar7eOa ?7er2eA L#3 8#K /6#/
A7e(a %8#I 8#J IL#;
Bi>),)G, L#L I#J I6#6
Cam,te %#/ 8#/ /K#%
Fi2e,s L#K 8#3 KL#3
FreO,* (e0r, /%#/ %#K ;3#3
FreO,* s,Ha 33#6 %I#6 3;#;
FreO,* tarG1i 68#J %3#6 /K#3
Ga**etas ?s,2aA J#6 %6#K IK#J
Ga**etas ?9ai(i**aA I#8 %/#K K;#8
Gar-a(>, %J#% ;#% I%#6
A*ime(t, Pr,teN(a LN.i2, Car-,Gi2rat,s
Le(teOas //#L %#/ ;J#6
MaN> ?)a()GaA I#K /#K KJ#L
3>
MaN> ?)G,)*,A 3#3 8#L /K#L
Ma(N /L&L 6I#J %L#%
N1e> %3#K IK#/ %3#/
O**1), 8#L 8#% %6#/
Pa**ares %J#J %#% I%#L
Pa( ?'ra()esA J#/ 8#3 IL#/
Pa.a -*a()a /#% 8#3 //#6
Pa.a Se)a L#3 8#; K3#/
Q1i(1a %%#J 6#K IK#I
$1)a 8#L 8#/ 3J&3
A)eit1(as %#/ 33#/ I#L
B*a(Q1i**, 8#I 8#% %K#%
Ce-,**a 8#J 8#% K#6
C,), 3#L %L#J %J#K
C,* %#6 8#8 ;&/
C,*i'*,r /#8 8#I ;#L
Le)G10a %#6 8#/ 3#3
Na-, 8#L 8#/ ;#/
Pe.i(a 8#; 8#% /#K
Ra-a(it,s 8#L 8#8 3#%
T,mate 8#L 8#/ 6#8
+a(aG,ria 8#I 8#6 J#;
+a.a**, 8#K 8#/ I#6
A*ime(t, Pr,teN(a LN.i2, Car-,Gi2rat,s
A)eite 8#8 %88 8#8
A>1)ar 8#8 8#8 JJ#;
CG,),*ate /&8 38#8 I8#8
C,),a J#8 %J#8 3%#8
Ge*ati(a?se)aAR L;#I 8#% 8#8
Lim5( 8&; 8#8 %%#/
Mai>e(a L#8 3#8 K6#8
Mar0ari(a 8#I L% 8#6
Nara(Oa %&/ 8#8 %%#/
Pa*ta %#K %/#I I#;
Pa.aHa 8#6 8#% L#3
P*ata(, is*a 8#L 8#/ /3#L
U7a (e0ra 8#3 8#% %K#J
V Se usan al ;:<%B
3@
GASTOS DE ENERGIA DE ACUERDO A ACTI9IDAD $ SE<O
ACTI9IDAD MUPER :
:)a* @S0@G,ra
HOMBRE :
:)a* @S :0@G,ra
D1rmie(2, 515 514 / 518 1?:
M1H Li0era9 mane'o de auto1
la2oratorio1 mecano%ra#ía1 coser (
planc7ar
814 518 / 8"3 515:
Li0era: )aminar1 carpintería1
mecanica1 la)ado de ropa
;1? 813:<1? 814:
M,2era2a: #re%ar pisos1 ciclismo1
tenis1 2aile
31? 314:@1< <14:
Pesa2a: al2aLil1 nataci!n1 #=t2ol1
2&suet2ol"
5414 @13:5814 614:
Dirma del alumno Dirma del pro#esor
NOTA
Dec7a Gora
PRACTICAS DE LABORATORIO N=%3:
LABORATORIO DE LIQUIDOS CORPORALES& EMame( 2e ,ri(a&
EMame( Fisi),Q1imi),
EXAMEN FISICO- QUÍMICO
El anDlisis de orina de rutina in#lu:e prue%as EuFmi#as para pH$ proteFnas$ glu#osa$ #etonas : sangre
o#ulta. -lgunos la%oratorios tam%iGn in#lu:en prue%as de %ilirru%ina$ uro%ilinHgeno : nitrito$ seg"n el
tipo de tira rea#ti9a Eue utili#e.
.esde la introdu##iHn de tiras rea#ti9as simples : m"ltiples$ #intas de prue%a : ta%letas$ el examen
EuFmi#o de la orina se Ia #on9ertido en un pro#edimiento sensi%le : rDpido. -#tualmente es posi%le
analizar Iasta nue9e prue%as diferentes en menos de 60 segundos. Existen dos mar#as %Dsi#as de tiras
rea#ti9as : #ada una posee tiras rea#ti9as #on posi%ilidad de medir desde una Iasta nue9e rea##iones
diferentes.
3A
/a compañía Bayer fa%ri#a el produ#to *ultistix : la Boehringer Mannheim Corporation (BMC) fa%ri#a
el Com%urB10. am%as tiras miden pH$ proteFnas$ glu#osa$ #etonas$ sangre o#ulta$ %ilirru%ina$
uro%ilinHgeno$ nitritos$ leu#o#itos : gra9edad espe#Ffi#a.
Pero JEuG es una tira rea#ti9aK Esen#ialmente$ es una %anda angosta de plDsti#o #on peEueLos ta#os
adIeridos. Cada ta#o #ontiene rea#ti9os para una rea##iHn diferente$ lo Eue permite la determina#iHn
simultDnea de 9arias prue%as. 0n reEuerimiento #rFti#o es Eue las rea##iones de las tiras sean leFdas en el
momento pres#rito despuGs de Ia%er sido sumergidas en la muestra$ luego de%en ser #omparadas
#uidadosamente #on la #arta de #olores propor#ionada por el fa%ri#ante. Con el o%jeto de o%tener
resultados exa#tos : #onfia%les #on las tiras rea#ti9as$ de%en tomarse #iertas pre#au#iones para a:udar a
mantener la rea#ti9idad de los rea#ti9os. /as tiras no de%en estar expuestas en medios I"medos$ a la luz
dire#ta del sol$ al #alor ni a sustan#ias 9olDtiles$ de%iendo ser alma#enadas en su en9ase original. .i#Io
en9ase no de%e ser guardado en el refrigerador no ser expuestos a temperaturas superiores a 30MC. Estos
en9ases #ontienen un dese#ante$ pero aun asF las tiras no de%en Euedar expuestas a la Iumedad. Sa#ar sHlo
la #antidad de tiras ne#esarias por 9ez : luego #errar IermGti#amente el en9ase. Si los %loEues de #olor de
la tira no se pare#en a los %loEues Nnegati9osN de la #arta de #olores$ si Ia pasado la fe#Ia de 9en#imiento
impresa en el en9ase$ las tiras de%en ser des#artadas. Si la muestra de orina fue refrigerada de%e dejarse
Eue al#an#e la temperatura am%iente antes de efe#tuar las prue%as.
El pro#edimiento para usar las tiras rea#ti9as es el siguiente!
• Sumergir #ompletamente las Dreas de prue%a de la tira en orina fres#a$ %ien mez#lada : sin
#entrifugar : retirar la tira en forma inmediata. .e%e tenerse #uidado de no to#ar las Dreas
rea#ti9as.
• Eliminar el ex#eso de orina de la tira to#ando #on el %orde de Gste el fras#o Eue #ontiene la
muestra. /as tiras de%en sostenerse en posi#iHn Iorizontal.
• En el tiempo determinado #omparar las Dreas rea#ti9as #on la #orrespondiente #arta de #olores
del en9ase$ la le#tura de%en Ia#erse #on %uena ilumina#iHn para lograr una #ompara#iHn exa#ta
del #olor.
-l mismo tiempo Eue se introdu#en mejoras en las #ara#terFsti#as de las tiras rea#ti9as pueden
modifi#arse las indi#a#iones para su uso. Esto puede signifi#ar una diferen#ia en los tiempos o en los
rea#ti9os utilizadosO por eso es importante seguir siempre las "ltimas indi#a#iones del fa%ri#ante.
-"n #on el amplio uso de estos rDpidos : #on9enientes pro#edimientos de anDlisis$ sigue siendo ne#esario
#omprender los prin#ipios %Dsi#os de las prue%as$ asF #omo la tG#ni#a #orre#ta en Eue de%en de usarse. -
#ontinua#iHn se men#ionarDn %re9emente los prin#ipios en Eue se %asan di#Ios estudios$ #on las tiras
rea#ti9as.
pH
En las tiras rea#ti9as utilizan dos indi#adores$ el rojo de metilo : el azul de %romotimol$ Eue #u%ren la
es#ala de pH entre ' : @$' o A. /os #olores 9an del anaranjado al amarillo : del 9erde al azul. /os
resultados pueden informarse en unidades enteras o %ien 9alores intermedios Pmedia unidadQ. Si se
ne#esita una le#tura mDs pre#isa$ pueden Ia#erse las medi#iones utilizando un poten#iHmetro #on
ele#trodo de 9idrio. El momento de le#tura del pH no es un elemento #rFti#oO sin em%argo$ es
re#omenda%le Eue el pH sea leFdo en forma inmediata :a Eue de este modo se e9itarDn le#turas errHneas
por re%osamiento PrunBo9erQ.
P,)6E7(-S
Este mGtodo #olorimGtri#o se %asa en el #on#epto #ono#ido #omo Nerror protei#o de los indi#adoresN$ un
fenHmeno Eue se #ara#teriza por Eue el punto de #am%io de #olor de algunos indi#adores de pH es
diferente en presen#ia de proteFnas. Por lo general el indi#ador #am%ia del amarillo al azul Po 9erdeQ entre
pH 3 : pH &$ pero en presen#ia de proteFna el #am%io de #olor se produ#e entre el pH 2 : el pH 3. en
#onse#uen#ia$ en presen#ia de proteFna se produ#e un NerrorN en el #omportamiento del indi#ador. El
indi#ador Eue se utiliza en el *ultistix es el azul de tetra%romofenol 3R$ 3RR$ 'R$ 'RRB
tetra%romofenolsulfonftaleFna$ : el indi#ador del Com%urB10 es el 3R$ 3RR$ 'R 'RRBtetra#lorofenolB3$ &$ '$ 6B
tetra%romofenolsulfonftaleFna.
En el Drea rea#ti9a se agrega un amortiguador D#ido para mantener un pH #onstante de 3$ Eue en ausen#ia
de proteinuria de un #olor amarillo. /a apari#iHn de #olor 9erde o azul indi#a la presen#ia de proteFna #on
el *ultistixO en el Com%urB10$ el #olor #am%ia al 9erde$ la intensidad del #olor es propor#ional a la
#antidad de proteFna presente. El tiempo de le#tura en el *ultistix no es un fa#tor #rFti#o$ : puede leerse
en forma inmediata. Para o%tener una le#tura semi#uantitati9a en el Com%urB10$ efe#tuar la le#tura a los
60 segundos Pseguir las "ltimas indi#a#iones del fa%ri#anteQ el #olor del Drea rea#ti9a de%e #ompararse
#uidadosamente #on la #arta de #olores propor#ionada. /os resultados por lo general pueden informarse
#omo negati9os o Iasta 3S o &S.
/as dos mar#as de tiras rea#ti9as poseen diferentes Dreas %lan#o$ de modo Eue no son #lFni#amente
inter#am%ia%les. /os 9alores de las diferentes le#turas se muestran en la ta%la 2.
&0
6a%la 2. 1alores de proteFnas en diferentes tiras rea#ti9as
*ultistix Com%urB10
6razas 'B20 mgTd/ 6B20 mgTd/
1S 30 mgTd/ 30 mgTd/
2S 100 mgTd/ 100 mgTd/
3S 300 mgTd/ '00 mgTd/
&S *as de 2$000 mgTd/
+/0C)S-
Con tiras rea#ti9as impregnadas #on la enzima glu#osa oxidasa puede dete#tarse sHlo glu#osa. Estas tiras
utilizan las dos rea##iones enzimDti#as se#uen#iales siguientes!
+lu#osa S )2 +/0C)S- );2.-S- D#ido glu#Hni#o
H2)2 S #romHgeno PE,);).-S- #romHgeno oxidado S H2)
El #romHgeno Eue se utiliza 9arFa #on las diferentes tiras rea#ti9as.
CETONAS
El *ultistix #ontiene rea#ti9os el nitroprusiato de sodio : un amortiguador al#alino. /a rea##iHn #on el
D#ido dia#Gti#o de la orina forma un #olor #astaLo. Esta tira no rea##iona #on a#etona ni #on el %
BIidroxi%utFri#o. El *ultistix se lee a los 1' segundos : permite dete#tar ni9eles de D#ido dia#Gti#o Iasta
de 'B10 mgTd/. El #am%io de #olor es de rosado ante a #astaLo$ : la rea##iHn se informa #omo! negati9a$
trazas$ #antidad moderada$ gran #antidad$ o #omo '$ 1'$ &0$ @0 o 160 mgTd/.
Con el *ultistix pueden o#urrir resultados positi9os falsos Ptrazas o menosQ en los #asos en Eue la
muestra de orina sea mu: pigmentada o #uando posee grandes #antidades de meta%olitos de la le9odopa.
-lgunas muestras #on ele9ada densidad : pH pueden dar rea##iones positi9as falsas Ptrazas$ ' mgTd/Q.
.e%ido a la espe#ifi#idad del nue9o *ultistix para determina#iHn del D#ido dia#Gti#o$ el rea#ti9o para
#etonas no da resultados positi9os #on #ontroles Eue tienen a#etona.
El Cum%urB10 #ontiene los siguientes rea#ti9os! nitroferro#ianuro sHdi#o$ gli#ina : un amortiguador
al#alino. El nitroferro#ianuro de sodio : gli#ina rea##ionan #on el D#ido dia#Gti#o : #on la a#etona en
medio al#alino formando un #omplejo #olor 9ioleta. Esta tira rea#ti9a es mDs sensi%le al D#ido a#Gti#o Eue
la a#etonaO no permite dete#tar D#ido % BIidroxi%utFri#o. El Com%urB10 se lee a los 60 segundos : permite
dete#tar ni9eles de D#ido dia#Gti#o de 'B10 mgTd/ : de a#etona de &0B>0 mgTd/. El #olor #am%ia desde el
%eige al 9ioleta$ : la rea##iHn se grad"a de la siguiente forma! negati9a$ 1S P'B&0 mgTd/Q$ 2S P&0B100
mgTd/Q$ o 3S P?100 mgTd/Q.
SAN&RE OC)LTA
El pro#edimiento de dete##iHn de sangre o#ulta #on tiras se %asa en la a#ti9idad tipo peroxidasa de la
Iemoglo%ina : de la mioglo%ina$ Eue #atalizan la oxida#iHn de un indi#ador por la a##iHn de un perHxido
orgDni#o. En el *ultistix el indi#ador es el 3$ 3R$ '$ 'RBtetrametil%en#idina : el perHxido orgDni#o. En el
*ultistix el indi#ador es el 3$ 3R$ '$ 'RBtetrametil%en#idina : el perHxido de IidroperHxido de #umeno. El
Com%urB10 utiliza el indi#ador tetrametil%en#idina : el perHxido es el 2$'BdimetilB2$ 'BdiIidroB
peroxiIexano.
-m%as mar#as de tiras rea#ti9as permiten la dete##iHn de eritro#itos inta#tos$ asF #omo la Iemoglo%ina
li%re : mioglo%ina. /os IematFes inta#tos de la orina se Iemolizan al #onta#tar #on el ta#o rea#ti9o. /a
Iemoglo%ina li%erada rea##iona #on el rea#ti9o dando puntos 9erdes so%re un fondo amarillo o
anaranjado. Enton#es$ la presen#ia de IematFes inta#tos da una rea##iHn de #olor 9erde punteado$ mientras
Eue la de Iemoglo%ina li%re : la mioglo%ina dan una #olora#iHn uniforma de #olor 9erde o del 9erde al
azul os#uro.
El *ultistix se lee a los 2' segundos$ : el #olor #am%ia del anaranjado al azul os#uro pasando por el
9erde. Por lo general permite dete#tar ' a 1' IematFes inta#tos por mi#rolitro o %ien 0$001' a 0$0060
mgTd/ de Iemoglo%ina li%re. /os resultados se informan en una es#ala Eue 9a desde trazas Iasta 3S o
gran #antidad.
El Com%urB10 se lee a los 60 segundos : el #olor #am%ia del amarillo al 9erde. /a #on#entra#iHn mDs %aja
Eue puede dete#tarse es de unos ' IematFes inta#tosTm /$ o la #antidad de Iemoglo%ina li%re eEui9alente a
20 IematFesTm /.
42/2,,042(- 3 0,)42/2(U+E()
/as tiras rea#ti9as se %asan en la rea##iHn de a#oplamiento de una sal de diazonio #on la %ilirru%ina en un
medio D#ido. .ifieren$ sin em%argo$ en la sal de diazonio utilizada : en el #olor Eue apare#e.
&1
El *ultistix #ontiene la sal 2$ &Bdi#loroBanilina diazonio$ se lee a los 20 segundos : el #olor 9arFa del o#re
a diferentes tonos de #anela PtostadoQ o p"rpura. Se miden asF 0$2B 0$' mgTd/ de %ilirru%ina.
El Com%urB10 #ontiene 2$6Bdi#loroB%en#enoBdiazonioBtetrafluor%orato$ se lee a los 30B60 segundos$ : el
#olor #am%ia del rosado al rojoB9ioleta seg"n la #on#entra#iHn de %ilirru%ina. /a prue%a permite dete#tar
#on#entra#iones de 0$' mgTd/ de %ilirru%ina.
/os resultados #on am%os tipos de tiras pueden informarse #omo 1S$ 2S$ 3S o #antidad peEueLa PdG%ilQ$
moderada o grande PfuerteQ. Para o%tener resultados exa#tos el #olor de la tira de%e ser #omparado
#uidadosamente #on el de la #arta de #olores.
NITRITO
En el *ultistix$ en el medio D#ido del Drea rea#ti9a el nitrito rea##iona #on el D#ido pBarsanFli#o formando
un #ompuesto de diazonio. Este #ompuesto se une luego #on la 1$ 2$ 3$ &BtetraIidroB%enzo PIQ EuinolinaB3B
ol produ#iendo un #olor rosado. /a tira se lee a los &0 segundos. CualEuier grado de #olor rosa uniforme
de%e interpretarse #omo prue%a de nitrito positi9a : sugiere la presen#ia de 10
'
o mas organismos por m/.
.e orina. El desarrollo de #olor rosa no de%e #onsiderarse #omo prue%a positi9a. Si el #olor rosado
uniforme es dG%il es mejor 9erlo #olo#ando la tira so%re el fondo %lan#o.
En el Com%urB10$ una amina aromDti#a$ la sulfanilamida$ rea##iona #on nitrito en presen#ia de un
amortiguador D#ido produ#iendo una sal de diazonio. Esta sal de diazonio se une luego #on la 3BIidroxiB1$
2$ 3$ &BtetraIidroxi%enzoBPIQBEuinolina$ formando un #olorante azHi#o. /a intensidad del #olor rojo refleja
la #on#entra#iHn del nitrito presente$ pero no #onstitu:e un Fndi#e de la gra9edad de la infe##iHn. /a
prue%a se lee a los 30 segundos$ : el #olor #am%ia del %lan#o al rojo pasando por el rosa pDlido.
&2
Practica NW 5;
Crianalisis
O2'eti)o
• Reali$ar los procedimientos %enerales del urianalisis
Materiales
• Muestras de orina
• Tiras reacti)as para an&lisis de orina
• Tu2os de ensa(o
• Centri#u%a
• .aminas portao2'eto
• .aminas cu2re o2'eto
• Microscopio 2inocular
• ,uantes descarta2les
• Tips descarta2les
• Pipeta autom&tica
Procedimientos
5" Col!uese los %uantes
8" O2ser)e los aspectos #ísicos de las muestras seleccionadas por el
pro#esor9 Color1 AspectoX anote los resultados en la ta2la ad'unta
;" Tome una tira reacti)a ( sumer'a la $ona de an&lisis dentro de cada
muestra por un lapso de 54 a 53 se%undos
<" Retire la tira reacti)a con cuidado1 elimine el e*ceso ( compare el color
de cada uno de los par&metros contra el cuadro de )alores
correspondiente" Anote los resultados en la ta2la ad'unta
3" Elimine la tira en la 2olsa de 2iose%uridad correspondiente
CRIANA.ISIS
Aspecto #ísico
Color
Aspecto
Densidad
E)aluaci!n Puímica
&3
PRACTICAS DE LABORATORIO N=%6:
.ABORATORIO DE INRESTI,ACION
Exposi#iHn de EEuipamiento del /a%oratorio de 2n9estiga#iHn$ metodos empleados.
&&

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