You are on page 1of 28

Markerii moleculari i

Biotehnologia medical
Doru PAMFIL

UNIVERSITATEA DE STIINTE AGRICOLE SI MEDICINA
VETERINARA, CLUJ-NAPOCA, ROMANIA
Markerii moleculari i biotehnologia medical

Definirea unor termeni

Culorile biotehnologiei

Aplicaii ale biotehnologiei medicale

Rolul markerilor moleculari

Platforma de Biotehnologie

Proiecte de colaborare
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Definirea unor termeni

Biotehnologia:

Orice tehologie care utilizeaza sistemele biologice,
incluznd organisme vii ori derivate ale acestora,
n scopul producerii sau modificarii produselor
sau proceselor Dictionarul de biotehnologie 2007

Manipularea organismelor vii pentru a produce
substane sau procese utile
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Definirea unor termeni
Istoric
6000 BC in Babilon se utiliza drojdia pentru bere, vin si paine
4000 BC in China bacteriile lactice pentru iaurt si branzeturi
1500 prima colectie de germoplasa la plante > ameliorare plante
1800 ameliorare animale (Vavilov)
1880 descoperirea microorganismelor (Leuweenhoek)
1856 recombinarea genetica la plante (Mendel)
1919 aparitia cuvintului biotehnologie (Karl Ereky)
1953 determinaarea structurii AND (James Watson& Francis Crick)
1980 biotehnologia moderna si tehnologia ADNului recombinant
1992 aprobarea primului OMG
2000 finalizarea proiectului HGP (Human Genome Project)
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Definirea unor termeni

Marker molecular:

Fragmente specifice de ADN care pot fi identificate in
cadrul genomului i care sunt utilizate pentru a marca
poziia unei gene sau transmiterea unui caracter
Dictionarul de biotehnologie 2007

A characteristic that is objectively measured and evaluated as
an indicator of normal biologic processes, pathogenic
processes, or pharmacologic responses to a therapeutic
intervention MED Jurnal 2008
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Definirea unor termeni

Clasificarea markerilor moleculari

Markerii moleculari i biotehnologia medical
Culorile biotehnologiei
Conferina EU 26-27 Iunie 2007, Brussels
Despre viitorul cercetarilor europene in stiintele vietii

"Towards Future Challenges of Life Sciences Research in Europe"

Bio-economia europeana bazat pe cunoatere
European Knowledge-Based Bio-Economy

Noile tehnologii ... biotehnologia ... vor deveni
tot mai importante ... i vor da o nou culoare
percepiei tradiionale asupra tiinelor vieii

New technologies (ICT, nanotechnologies, biotechnology, remote
sensing, etc.) will become increasingly important giving new colour
to the traditional understanding of the life sciences
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Culorile biotehnologiei

the colors biotechnology in literature
1997 Green Biotechnology > Clean Biotec versus GMO
2002 Red Biotechnology > US EPSO Medical report
2003 White Biotechnology > EU Science and technology
2003 Blue Biotechnology > Europa Bio Convention
2004 The Flags of Biotechnology > US-EU Bio meeting
2004 The Rainbow of Biotechnology > Al Gore US Senate speech
2005 - Synergy of Green, Red & White Biotech > EU Report
2005 The color of Biotechnology >12th Congress of
Biotechnology
Al 12- lea Congres European de Biotehnologie 2005

Biotehnologia Verde Plante si alimente
Biotehnologia Rosie Farmaceutica
Biotehnologia Alb Mediu
Biotehnologia Gri Industriala

Ministrul economiei din Germania Clasament firme:

Firme de biotehologie 258 > 43.000 angajati

63% rosu + 27% verde + 10% alba (+ albastra)
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Culorile biotehnologiei
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Culorile biotehnologiei

Color Type Area of Biotech Activities
Red Health, Medical, Diagnostics
Yellow Food Biotechnology, Nutrition Science
Blue Aquaculture, Coastal and Marine Biotech
Green
Agricultural, Environmental Biotechnology Biofuels, Biofertilizers,
Bioremediation, Geomicrobiology
Brown Arid Zone and Desert Biotechnology
Dark Bioterrorism, Biowarfare, Biocrimes, Anticrop warfare
Purple Patents, Publications, Inventions, IPRs
White Gene-based Bioindustries
Gold Bioinformatics, Nanobiotechnology
Grey Classical Fermentation and Bioprocess Technology
Electronic Journal of Biotechnology 3.02.2006

Markerii moleculari i biotehnologia medical
Culorile biotehnologiei
Culorile activitilor Biotech

1. Rosu - Medicina, sanatate si diagnostic
2. Verde - Agricultura, biotehnologia mediului etc.
2. Galben Biotehnologii alimentare si Stiintele nutritiei
3. Albastru Acuacultura si biotehnologia marina
4. Maro - Biotehnologia zonelor aride si desertice
5. Alb - Biotehnologii industriale
6. Gri - Biotehnologii fermentative si bioprocesare
7. Auriu - Nanotehnologii si bioinformatica
8. Mov - Patente, publicatii, inventii
9. Negru - Bioterorism, biocrime, razboi biologic

UNESCO Division of Life Sciences, Paris, France
Electronic J ournal of Biotechnology 3.02.2006
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Aplicatii ale biotehnologiei
Aplicatii ale Biotehnologiei rosii

Biotehnologia + ingineria genetica + genomica

Testare genetic

Diagnostic

Terapia genica

Terapeutic

Nutraceutice

Etc.
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Aplicatii ale biotehnologiei

Medicina tradiional (farmaceutic) trateaza efectele

Medicina modern biotehnologic - trateaza cauza

Cauza: genetic
biochimic

Aplicatii in tratamentul:
- bolilor cardiovasculare
- cancer
- scleroz multipl
- HIV/AIDS, TB, malarie
- boli rare
- medicina regenerativa etc.
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Aplicatii ale biotehnologiei

Biotehnologia roie
- 12% din piaa medicamentelor 2007
- 3,2 miliarde euro

Programul german BIOChance 2007-2011

Investiii de 900 mil euro
Stimularea intreprinderilor mici si mijlocii


Estimare 2011
- 20% din piaa medicamentelor
- peste 5 miliarede euro

- 50% din vaccinuri peste 8 miliarde

Markerii moleculari i biotehnologia medical


Tipuri de vaccinuri dup coninutul biologic:

Vaccinuri care conin microorganisme vii atenuate
Vaccinuri care conin microorganisme inactivate
Vaccinuri care conin componente microbiene
purificate, proteice sau polizaharidice conjugate
proteic
Vaccinuri care conin proteine recombinate
Vaccinuri care conin anatoxine
De la
Organisme vii atenuate

La
Subunit vaccines
Vaccinuri genetice
Vaccinuri
Vaccinuri recombinante
tuberculoz







malarie



HIV
rBCG30 - primul vaccin recombinant testat clinic;
combinat cu chimioterapia
MVA85A - bazat pe modificarea genetic a
virusului Vaccinia
Hybrid-1, HyVac4 or M72 - subunit vaccine -
molecule obinute prin fuziunea a dou proteine
recombinante injectate mpreun cu adjuvani
Ad35 - adenovirui recombinai
Unele pot fi administrate fr injectare
RTS,S/AS02A - molecul obinute prin fuziunea
a dou proteine recombinante, injectat
mpreun cu adjuvantul AS02A
Utilizarea recombinazei Cre sau Tre, enzime capabile s
ndeprteze informaia genetic pe care HIV o transfer
n celulele infectate; tratamentul presupune utilizarea
celuleor stem, care sunt extrase, tratate i apoi
reinjectate n corp pentru a rspndi enzimele.

Markerii moleculari i biotehnologia medical
http://washingtonindependent.co
m/wp-
content/uploads/2008/09/vaccine
1.jpg

Markerii moleculari i biotehnologia medical



Terapie genica
Inserarea de gene n celulele i esuturile unui individ pentru a trata diferite afeciuni
Vectori utilizai n terapia genic:
1. Virusuri (retro-, adenovirusuri etc.)
2. Vectori nevirali:
ADN-ul denudat (gol)
oligonucleotide
complex ADN-lipozom
3. Vectori hibrizi
4. Dendrimeri
Poate fi aplicat att celulelor somatice, ct i celor sexuate
Tratamentul se poate face n dou feluri:

Ex vivo - celule din sngele sau mduva pacientului sunt recoltate i cultivate n laborator, iar
apoi sunt infectate cu virusul care transport gena de interes; celulele transformate sunt apoi
injectate intravenos pacientului.

In vivo - vectorul este utilizat pentru introducerea informaiei genetice dorite direct n celule aflate
n corpul pacientului

Markerii moleculari i biotehnologia medical



Nutraceutice
Extracte din alimente cu efecte medicinale asupra sntii umane (efecte
fiziologice benefice demonstrate)
http://blog.bioethics.net/nutraceuticals.jpg
Exemple:

resveratrolul din strugurii roii (antioxidant)
fibrele solubile
sulforaphanul din broccoli (previne cancerul)
isoflavonoide pentru mbuntirea sntii
arteriale
flavonoide
antociani
acid alfa-linolenic
Acest domeniu se refer la tratamente prin care se pot nlocui pri
ale corpului adult.
Trei strategii prezint potenial n acest domeniu:
utilizarea celulelor stem (injectare)
inducerea regenerrii cu ajutorul unor substane specifice
transplantarea organelor/esuturilor obinute in vitro
Medicina regenerativ


Markerii moleculari i biotehnologia medical

Celule stem
Celulele stem reprezint un tip aparte de
celule, care se regsesc n orice organism
multicelular, fiind caracterizate prin
abilitatea de a se nmuli continuu (mitoz)
i de a diferneia apoi ntr-o gam larg de
celule specializate.
La mamifere exist dou mari categori de
celule stem:
embrionare, izolate din blastociti
adulte, izolate din esuturi somatice
Tratamente poteniale:
cancer
leziuni ale sistemului nervos
afeciuni cardiace
hematopoiez
calviie
afecini ale ochilior
ortopedie etc.
http://www.csa.com/discoveryguides/stemcell/images/pluri.jpg

Markerii moleculari i biotehnologia medical
Rolul markerilor genetici



Testarea genetic
Implic analizarea direct a moleculei de ADN n vederea depistrii mutaiilor.

Dou metode:
1. Utilizarea sondelor care prezint mutaii i hibridizarea lor cu ADN-ul de interes
2. Compararea secvenei ADN de interes cu secvene specifice indivizilor sntoi

Aplicaii:
1. Screeningul purttorilor de alele recesive
2. Confirmarea diagnosticului pentru indivizii simptomatici
3. Determinarea sexului
4. Testarea identitii
5. Screeningul nou-nscuilor
6. Testarea presimptomatic pentru estimarea riscului dezvoltrii diferitelor afeciuni,
inclusiv a neoplaziei maligne, la aduli

Teste genetice existente:
Pentru depistarea fibrozei chistice
anemiei cu celule n secer
bolii lui Huntington
depistarea mutaiilor asociate cu cancerul
- mamar
- ovarian
- de colon
http://www.ohsu.edu/health/images/gs/es_0886.gif
Gena Tipul de cancer
Disponibilitatea
testului
BRCA1,
BRCA2
Mamar, ovarian,
pancreatic
comercializat
MLH1,
MSH2,
MSH6,
PMS1,
PMS2
De colon, uterin, al
intestinului subire,
gastric, al tractului
urinar
comercializat

Markerii moleculari i biotehnologia medical



Markeri moleculari
Proiectul genomului uman
The Human Genome Project (HGP http://www.ornl.gov/sci/techresources/Human_Genome/home.shtml) a avut ca
scop identificarea secvenei ADN-ului uman, precum i identificarea i cartarea din punct de vedere fizic i funcional
a celor aproximativ 20.000-25.000 de gene.
Centrul Naional al Statelor Unite pentru Informaii Biotehnologice (NCBI-
National Center for Biotechnology Information) i organozaiile surori in
Europa i Japonia gyduiesc secvena genomului uman n baza de date
GenBank, mpreun cu secvenele genelor cunoscute, ct i ipotetice, i a
unor proteine.
Organizaii precum ENSEMBL prezint date adiionale i unelte pentru
vizualizarea i cercetarea lor.
Cel mai mare efort n identificarea diferenelor dintre indivizi include
detectarea SNP-urilor i HapMap.
Proiectul internaional HapMap reprezint o organizaie al crui scop este
crearea unei hri a haplotipului genomului uman, care va descrie tiparele
comune ale variaei genetice umane.
- National Institute of Health (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)
- EMBL nucleotide database (http://www.ebi.ac.uk/)
- DNA Database of Japan (http://www.ddbj.nig.ac.jp/)
- UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu/)
- HGP in the Web (http://cmbi.bjmu.edu.cn/cmbidata/hgp/Resource/index.htm#01)
Secvena ADN-ului uman este stocat n baze de date disponibile gratuit pe Internet



Markerii moleculari i biotehnologia medical



Obinerea produselor farmaceutice
Produsele biofarmaceutice biopharmaceuticals
Ci de obinere a produselor farmaceutice utiliznd biotehnologiile moderne:
Transformarea genetic aplicat la:

Bacterii (ex. E. coli)
Drojdii
Plante
biopharmaceuticals
pharming
Culturi de celule
http://www.ecoliblog.com/E_coli_lge.jpg Mouse Embryonic Fibroblast (3t3) Cell Culture
http://www.olympusmicro.com/galleries/abramowitz/pages/3t3cells1small.html

Markerii moleculari i biotehnologia medical




Factori de coagulare sanguini (Factorul VIII i Factorul IX)
Ageni trombolitici (activator tisular de plasminogen )
Hormoni (insulin, glucagon, hormon de cretere, gonadotropine)
Factori de cretere hematopoietici (eritropoietin, factori de stimulare ai coloniilor)
Interferoni (Interferoni-, -, -)
Produse bazate pe interleukin (Interleukina-2)
Vaccinuri (antigen de suprafa al virusului hepatitei B )
Anticorpi monoclonali (diveri)
Alte produse (factor de necroz tumoral, enzime terapeutice)
Clasificarea produselor farmaceutice obinute cu ajutorul biotehnologiilor
Proteine recombinante umane

Hormonul uman de cretere (rhGH) - Humatrope (compania Lilly), Serostim (Serono) au nlocuit hGH obinut
de la cadavre
Insulina uman (rhI) Humulin (Lilly), Novolin (Novo Nordisk) - au nlocuit insulina pentru terapia uman obinut
de la bovine i porcine
Factorul VIII de coagulare Kogenate (Bayer) - l-a nlocuit pe cel izolat din snge
Eritropietin Epogen (Amgen)
Factorul uman recombinant de stimulare a coloniilor de granulocite (G-CSF) filgrastim, comercializat sub
denumirea Neupogen (Amgen), pegfilgrastim comercializat sub denumirea Neulasta
Alfa-galactozidaz A Fabrazime (Genzime)
Interferon (IF) - Interferon-beta-1a comercializat sub denumirea Avonex (Biogen Idec), Rebif (Serono), Interferon
beta-1b comercializat sub denumirea Betaseron (Schering)
Factor de cretere asemntor insulinei 1 (IGF-1)
http://www.biotech.mobi/
Eritropoietin
Interferon-
Interferon-
Anticorpi monoclonali
Factori de stimulare ai coloniilor
Glucocerebrozidaz
tratamentul
Anemiei
Leucemiei
Sclerozei multiple
Artritei reumatoide
Neutropeniei
Bolii lui Gaucher
Utilizri ale proteinelor recombinante umane
http://guavatechnologies.com/Library
/images/LSR-PH-CellCulture.jpg
Vector Backbone: pAcGP67B
Markerii moleculari i biotehnologia medical
Farmacogenomica
Farmacogenomica studiul modului
n care genotipul influeneaz reacia
la tratament.
face legtura ntre farmacologie i
genetic
n viitor se preconizeaz crearea de
medicamente personalizate, specifice
genotipului
Aplicaii:
Crearea medicamentelor de comand (tailor-made), bazate pe informaia genetic obinut de
genomica funcional. Aceste medicamente vor avea un efect terapeutic superior i efecte
negative sczute asupra celulelor sntoase adiacente.
Metode mai exacte de dozare a medicamentelor bazate pe genotipul pacientului, mrind astfel
valoarea terapiei, concomitent cu scderea posibilitii unei supradozri.
mbuntirea crerii medicamentelor i a procesului aprobrii lor. n urma asocierii a numeroase
gene cu diferite afeciuni, acestea pot reprezenta inta pentru noile terapii, scurtnd astfel
procesul crerii medicamentelor.
Vaccinuri mbuntite pot fi produse prin intermediul ingineriei genetice, eliminnd riscul
infectrii cu patogenul, de asemenea vor fi mai ieftin de produs, mai stabile i vor putea
conine mai multe tulpini concomitent.
Markerii moleculari i biotehnologia medical
http://porpax.bio.miami.edu/~cmallery/150/gene/
pharmacogenomics.gif
http://www.freewebs.com/pharmacogenomics/Ho
peForTheFuture.jpg

Markerii moleculari i biotehnologia medical
Platforma de biotehnologii bazate pe cunoastere



Platforma de biotehnologii


Proiect MEC CNCSIS cod 29/2006-2009

Proiect de investitii de 5 milioane lei

Director prof. Doru C. Pamfil

53 persoane


Centrul de Biotehnologii actual

1.025 mp
Institutul pentru tiinele vieii

4.500 mp din care 2.500 mp Platforma
UNIVERSITATEA DE STIINTE AGRICOLE SI
MEDICINA VETERINARA
CLUJ-NAPOCA, ROMANIA
Platforma de biotehnologii bazata pe
cunoastere
http://www.usamvcluj.ro/htlm/cercetare/platforma
Pamfil Doru
GSM 0744779416
Va multumesc !