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VIROLOGIA

VETERINRIA
Eduardo Furtado Flores
(ORG.)
VIROLOGIA
VETERINRIA
Santa Maria, 2007
Clovis Silva Lima
Felipe Martins Mller
Honrio Rosa Nascimento
Ademar Michels
Daniela Lopes dos Santos
Eduardo Furtado Flores
Eliane Maria Foleto
Maristela Brger Rodrigues
Honrio Rosa Nascimento
Jorge Luiz da Cunha
Marcos Martins Neto
Ronai Pires da Rocha
Silvia Carneiro Lobato Paraense
Maristela Brger Rodrigues
Luzia de Lima Santanna
Marcio Oliveira Soriano sobre fotograa
de microscopia eletrnica de clulas de cultivo
infectadas com herpesvrus bovino.
Carolina Isabel Gehlen
Lase Miolo Morais, Marcio Oliveira Soriano,
Eduardo Furtado Flores
Reitor
Vice-reitor
Diretor da Editora
Conselho Editorial
Reviso lingstica
Normalizao referncias bibliogrcas
Capa
Projeto grco e diagramao
Ilustraes
Direitos reservados :
Editora da Universidade Federal de Santa Maria
Prdio da Reitoria - Campus Universitrio
Camobi - 97119-900 - Santa Maria - RS
Fone/Fax: (55) 3220.8610
e-mail: editora@ctlab.ufsm.br
www.ufsm.br/editora
Ficha catalogrca elaborada por Maristela Eckhardt CRB-10/737
Biclioteca Central da UFSM
V819 Virologia veterinria / Eduardo Furtado Flores
(organizador). Santa Maria : Ed. da UFSM,
2007.
888 p. ; 30 cm.
1. Medicina veterinria 2. Virologia I. Flores,
Eduardo Furtado
CDU 619:578
Alice Aleri, MV, MSc. Doutor
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Estadual de Londrina (UEL)
Londrina, PR, Brasil. 86051-970.
aleri@uel.br
Amauri A. Aleri, MV, MSc.Doutor
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Estadual de Londrina (UEL)
Londrina, PR, Brasil. 86051-970.
aleri@uel.br
Ana Cludia Franco, MV, MSc.,PhD
Departamento de Microbiologia
Instituto de Cincias Bsicas da Sade
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Porto Alegre, RS, Brasil. 90050-170
anafranco@ufrgs.br
Ana Paula Ravazzolo, MV, D.Sc.
Faculdade de Veterinria
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Porto Alegre, RS, Brasil. 91540-000
ana.ravazzolo@ufrgs.br
Clarice Weis Arns, MV, DSc.
Departamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biologia
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Campinas, SP, Brasil. 13081-970
arns@unicamp.br
Clarissa Silveira Luiz Vaz, MV, MSc., Embrapa Sunos
e Aves (CNPSA)
Concrdia, SC, Brasil. 89.700-000,
clarissa.vaz@ufrgs. br
Cludio Wageck Canal, MV, MSc. Doutor
Departamento de Patologia Clnica Veterinria
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Porto Alegre, RS, Brasil. 91540-000
claudio.canal@ufrgs. br
Diego Gustavo Diel, MV, MSc.
Laboratrio de Virologia
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
diegodiel@pop.com.br
Elisabete Takiuchi, MV., MSc. Doutor
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Estadual de Londrina (UEL)
Londrina, PR, Brasil. 86051-970
elisabete.takiuchi.@gmail.br
Elizabeth Rieder, PhD.
Plum Island Animal Disease Center ARS, USDA
PO Box 848 Greenport
NY 11944 USA
elizrieder@yahoo.com
Fernanda Silveira Flores Vogel, MV, MSc. Doutor
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
fervogel@smail.ufsm.br
Fernando A. Osorio, MV, MSc. PhD
Department of Veterinary and Biomedical Sciences
University of Nebraska/Lincoln
Lincoln, Nebraska, USA. 68583-0905
fosorio@unlnotes.unl.edu
COLABORADORES
Fernando Rosado Spilki, MV, MSc., Doutor
Departamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biologia
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Campinas, SP, Brasil. 13083-970
fernandospilki@yahoo.com.br
Gael Kurath, PhD
Microbiologist Western Fisheries Research Center
6505 NE 65th St.
Seattle, Washington, 98115. USA
gael_kurath@usgs.gov
Gustavo Delhon, MV, MSc.PhD
Department of Pathobiology
College of Veterinary Medicine
University of Illinois at Urbana-Champaign
Urbana, Illinois, USA.
gadelhon@uiuc.edu
Helena Beatriz de Carvalho R. Batista, MV, MSc.
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Porto Alegre, RS, Brasil. 91540-000
hruthner@yahoo.com.br
Hernando Duque Jaramillo, MV, MSc. PhD
Plum Island Animal Disease Center
USDA-APHIS-VS-NVSL-FADDL
Greenport, New York USA.
11944-0848
Janice Reis Ciacci-Zanella, MV, MSc.PhD
Embrapa Sunos e Aves (CNPSA)
Concrdia, SC, Brasil. 89.700-000,
janice@cnpsa.embrapa.br
John D. Neill, DVM, PhD
National Animal Disease Center, USDA, ARS
2300 Dayton Avenue. P.O. Box 70
Ames, Iowa.USA. 50010
jneill@nadc.ars.usda.gov
Julia Ridpath. PhD
National Animal Disease Center ARS - USDA
2300 Dayton Avenue. P.O. Box 70
Ames, IA, USA. 50010
jridpath@nadc.ars.usda.gov
Letcia Frizzo da Silva, MV, MSc.
Laboratrio de Virologia
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
diegodiel@pop.com.br
Luciane Teresinha Lovato, MV, MSc., PhD
Departamento de Microbiologia e Parasitologia
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
llovato@smail.ufsm.br
Luiz Carlos Kreutz, MV, MSc., PhD
Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria
Universidade de Passo Fundo (UPF)
Passo Fundo, RS, Brasil. 99001-970
lckreutz@upf.tche.br
Luis L. Rodriguez, MV. PhD
Foreign Animal Disease Research Unit
Plum Island Animal Disease Center ARS, USDA
PO Box 848 Greenport NY 11944. USA.
lrodriguez@piadc.ars.usda.gov
Marcelo de Lima, MV, MSc.
Department of Veterinary and Biomedical Sciences
University of Nebraska/Lincoln
Lincoln, Nebraska, USA. 68683-0905
mdelima2@unlnotes.unl.edu
Maria Elisa Piccone, PhD
Plum Island Animal Disease Center ARS, USDA
PO Box 848 Greenport, NY. 11944. USA
maria.piccone@ars.usda.gov
Mariana S e Silva, MV, MSc.
Setor de Virologia
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
msaesilva@yahoo.com.br
Mrio Celso Speroto Brum, MV, MSc.
Setor de Virologia
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
mcsbrum@yahoo.com.br
Mauro Pires Moraes, MV, MSc., Doutor
Departamento de Veterinria
Universidade Federal de Viosa
Viosa, MG, Brasil. 36570-000
mpmoraes@ars.usda.gov
Paulo Michel Roehe, MV, MSc.PhD
Instituto de Pesquisas Veterinrias Desidrio Finamor
FEPAGRO Sade Animal
Eldorado do Sul, RS, Brasil. 92 990-000 &
Instituto de Cincias Bsicas da Sade
Departamento de Microbiologia
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Porto Alegre, RS, Brasil 90 050 -170
proehe@gmail.com

Paulo Renato dos Santos Costa, MV, MSc., Doutor
Departamento de Veterinria
Universidade Federal de Viosa
Viosa, MG, Brasil. 36570-000
prenato@ufv. br

Renata Dezengrini, MV, MSc.
Setor de Virologia
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
renatadezengrini@yahoo.com.br
Renata Servan de Almeida, MV, MSc.Doutor
CIRAD - Dpartement Systmes Biologiques
UPR 15 Controle ds Maladies Animales
Exotiques et Emergentes
34398 Montpellier cedex 5 France
renservan@yahoo.com.br
Rudi Weiblen, MV, MSc., PhD
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
rudi@ccr.ufsm.br
Sheila Wosiacki, MV., MSc. Doutor
Centro de Cincias Agrrias,
Universidade Estadual de Maring (UEM)
Campus Umuarama
Maring, PR, Brasil. 87020-900
wosiacki@yahoo.com.br
Ubirajara M. da Costa, MV, MSc.Doutor
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva e Tecnologia
Centro de Cincias Agroveterinrias
Universidade Estadual de Santa Catarina (UDESC)
Lages, SC, Brasil. 88520-000
biravetvirus@yahoo.com.br
Zlia Ins Portela Lobato. MV, PhD.
Escola de Veterinria Departamento de Medicina
Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
Belo Horizonte, MG, Brasil. 34992-101
ziplobat@vet.ufmg.br
A presente obra foi concebida para preencher uma lacuna existente na bibliograa dedicada
Virologia Veterinria na lngua portuguesa. O crescimento notvel do ensino e pesquisa em Virologia
Animal no Brasil, nas ltimas dcadas, infelizmente no foi acompanhado por um aumento equiva-
lente na literatura disponvel. Neste perodo, o acmulo fantstico de conhecimentos acerca da gen-
tica e biologia dos agentes virais, proporcionado pelo desenvolvimento e popularizao das tcnicas
moleculares, tem tornado algumas obras clssicas gradativamente desatualizadas e obsoletas. Exis-
tem bons livros de Virologia Animal e excelentes tratados de Virologia Geral e Molecular na lngua
inglesa. No entanto, esses textos so temporariamente inacessveis a uma parcela considervel dos
estudantes de graduao que se interessam e ingressam no mundo fascinante da Virologia. Esta obra,
pois, tem por objetivo fornecer aos iniciantes em Virologia, que, porventura, sejam tambm iniciantes
na lngua inglesa, um contedo atualizado e abrangente da Virologia Animal, com nfase aos animais
de interesse veterinrio.
O presente texto direcionado aos iniciantes em Virologia, sejam eles estudantes de graduao,
ps-graduao ou mdicos veterinrios; e tem como objetivo fornecer informaes bsicas sobre a
estrutura, biologia, patogenia, diagnstico e controle dos principais vrus de interesse veterinrio. Os
principais aspectos da biologia molecular e replicao viral so abordados de maneira simples e de
fcil compreenso, para embasar o entendimento da patogenia, resposta imunolgica e diagnstico
dessas infeces. A omisso de informaes mais detalhadas sobre a biologia molecular dos vrus foi
intencional. Tal detalhamento est um pouco alm da informao usualmente buscada por iniciantes
em livros-texto. Por outro lado, os estudantes em nveis mais avanados podem recorrer a excelentes
livros existentes na lngua inglesa.
Um grande desao enfrentado durante a elaborao deste texto foi acompanhar a dinmica das
descobertas e constataes na rea da Virologia Molecular. A dinmica do conhecimento gerado nesta
rea exigir atividades de reviso e atualizao constantes do contedo, sob a pena de deix-lo obsole-
to em poucos anos. Os avanos nas reas de vacinologia e teraputica antiviral tambm se intensica-
ram neste perodo, permitindo aos autores relatar as mais recentes conquistas cientco-tecnolgicas
nessas reas.
A dinmica das interaes dos vrus com os seus hospedeiros no ambiente natural tambm re-
presenta um desao para a elaborao de textos descritivos. No perodo de elaborao desta obra
aproximadamente trs anos surgiram novos vrus e novas doenas; e vrus j conhecidos cruzaram
a barreira de espcies e infectaram hospedeiros inusitados. Ou seja, a evoluo natural das infeces
vricas no ambiente natural to dinmica que exige uma reviso contnua de conceitos.
Este livro encontra-se dividido em duas partes. A parte inicial aborda os aspectos gerais da Viro-
logia Animal, discorrendo sobre a estrutura, classicao e nomenclatura, gentica e evoluo, mto-
dos de deteco e identicao de vrus, aspectos gerais da replicao viral, replicao de vrus DNA
e RNA, patogenia das infeces, epidemiologia, imunidade a vrus, diagnstico laboratorial e vacinas.
Embora o enfoque desta parte seja direcionado para a Virologia Animal, os conceitos e aspectos nela
tratados so tambm aplicveis a vrus que infectam humanos. Assim, este texto pode til tambm
para os demais estudantes das reas biomdicas.
INTRODUO
A segunda parte trata individualmente das famlias virais de importncia em medicina veterin-
ria. Os captulos foram elaborados seguindo algumas orientaes com relao organizao e conte-
do. Dessa forma, cada captulo especco dividido em duas partes: a seo inicial aborda os aspectos
gerais da respectiva famlia, a estrutura dos vrions, a estrutura e organizao genmica, expresso
gnica, replicao do genoma e o ciclo replicativo. Um dos maiores desaos enfrentados na elabo-
rao deste texto foi obter um equilbrio entre o nvel de aprofundamento nos aspectos biolgicos e
moleculares com a nfase necessria nos aspectos epidemiolgicos, clnico-patolgicos e diagnsticos.
Os aspectos moleculares da biologia dos vrus foram abordados de maneira simplicada para facilitar
o entendimento por iniciantes da rea. Um maior detalhamento nos aspectos biolgicos e moleculares
da estrutura e replicao dos vrus pode ser encontrado nos livros especializados.
A segunda parte de cada captulo especco dedicada s doenas de importncia veterin-
ria causadas por membros das respectivas famlias. Esta seo discorre acerca das caractersticas do
agente, epidemiologia, patogenia, sinais clnicos e patologia, diagnstico, controle e prolaxia das
doenas por ele causadas. Algumas famlias possuem vrios vrus associados com doenas animais
de importncia sanitria e econmica; enquanto outras possuem poucos patgenos animais. Por isso,
a disparidade de contedo e extenso dos diferentes captulos. O ltimo captulo apresenta algumas
famlias virais que possuem importncia limitada em medicina veterinria. Algumas dessas famlias
abrigam patgenos exclusivamente humanos; outras abrigam vrus que infectam somente animais
sem interesse econmico ou afetivo; enquanto outras congregam vrus cujo interesse maior reside nos
seus aspectos biolgicos e moleculares.
Os autores
Uma obra deste porte somente poderia ser elaborada com a colaborao de vrias pessoas. E
nada mais justo do que agradecer a todos aqueles que tornaram possvel concretiz-la. Aos colegas
colaboradores, pela disposio em dedicar uma parte importante do seu tempo na elaborao dos
captulos. desnecessrio list-los aqui, pois os seus nomes se encontram nos respectivos captulos
ou sees.
Aos colegas e amigos de longa data, com quem a elaborao de um livro de Virologia Veterinria
foi tema de inumerveis conversas e planos em congressos e reunies cientcas nestes ltimos 15
anos. Janice Ciacci-Zanella, Clarice Arns, Ana Paula Ravazollo, Amauri Aleri, Luciane Lovato,
Mauro Moraes, Paulo Roehe, Luiz Carlos Kreutz e Rudi Weiblen, entre outros, o meu agradecimento
e a certeza de que este livro representa a concretizao de um sonho de todos ns.
O agradecimento aos colegas estrangeiros, que entenderam a importncia de um livro-texto
como este e dedicaram parte de seu tempo para auxiliar a elabor-lo: Drs. Julie Ridpath, John Neill,
Luis Rodriguez, Gael Kurath, Fernando Osorio, Maria Elisa Piccone, Gustavo Delhon, Elisabeth Rie-
der e Hernando Duque.
Devo um agradecimento especial a trs colegas que contriburam muito alm da elaborao dos
respectivos captulos, participando de vrios outros, enviando sugestes, traduzindo, revisando e re-
formulando os textos submetidos: Dr Luiz Carlos Kreutz, Dra. Fernanda Silveira Flores Vogel e Md.
Vet. doutoranda Renata Dezengrini.
Gostaria de externar o meu reconhecimento e gratido equipe do Setor de Virologia da UFSM,
composta por mestrandos e doutorandos, que participaram ativamente de todo o processo de elabo-
rao, edio e reviso desta obra. Grande parte da qualidade e propriedade deste texto se deve s
interminveis discusses e revises de captulos, patrocinadas por um grupo cheio de entusiasmo
e motivao. Ao Mrio Celso S. Brum, Diego G. Diel, Evandro Winkelmann, Sabrina R. Almeida,
Sandra Arenhart, Andria Henzel, Renata Dezengrini, Mariana S e Silva, Helton dos Santos, Letcia
Frizzo da Silva e Marcelo Weiss, com certeza de que vocs possuem parte importante nessa obra.
Agradeo tambm aos colegas professores Slvia Hbner (UFPEL) e Valria Lara Carregaro
(UFSM) pelas revises e colaborao em captulos especcos. profa. Maristela Brger Rodrigues,
pela reviso gramatical; Carolina Gehlen, pela diagramao; Zlide Bayer Zucheto e prof. Honrio
Rosa Nascimento, da Editora da UFSM, pelo apoio para que a edio deste livro fosse possvel.
Alm do apoio da Editora da UFSM, parte do trabalho grco (elaborao de guras, diagrama-
o, reviso gramatical) e pagamento de direitos autorais foram custeados com recursos da taxa de
bancada de Produtividade em Pesquisa do CNPq do Organizador. A arte nal e capa somente foram
possveis com o auxlio do Centro de Cincias Rurais, na pessoa do seu Diretor, prof. Dalvan Jos
Reinert, e da vice-reitoria, pelo Prof. Felipe Mller, a quem agradecemos.
Quero tambm manifestar o meu agradecimento e admirao pelo trabalho grco magnco
realizado pelos acadmicos do Curso de Desenho Industrial da UFSM, Lase Miolo Moraes e Mrcio
Oliveira Soriano. Eles foram os responsveis diretos por grande parte das ilustraes desta obra; e
responsveis indiretos pela parte restante, cuja confeco lhes foi subtrada pelo seu entusiasmado
aprendiz. Ao nal do trabalho, tivemos como resultados: um conjunto formidvel de ilustraes; dois
AGRADECIMENTOS
Eduardo Furtado Flores, MV. MSc. PhD
Professor Associado
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva (DMVP)
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Santa Maria, RS, Brasil.
97105-900 ores@ccr.ufsm.br
Eduardo Furtado Flores natural de Santa Maria, RS (25/10/61); com graduao (1983) e mestrado
(1989) em Medicina Veterinria pela Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Possui PhD em
Virologia Molecular pela Universidade de Nebraska/Lincoln, Estados Unidos (1995). professor do
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva da UFSM desde 1991, responsvel pelas discipli-
nas de Epidemiologia Geral Veterinria e Sade Pblica Veterinria na graduao; e pelas disciplinas
Epidemiologia Veterinria, Virologia Molecular e Introduo Biologia Molecular na ps-graduao.
Faz parte do Conselho Editorial da Editora da UFSM; pesquisador de produtividade em pesqui-
sa (1C) do CNPq desde 1997; e editor adjunto de Virologia da revista Pesquisa Veterinria Brasileira.
Divide as suas atividades didticas e editoriais com a rotina de diagnstico virolgico no Setor de
Virologia (SV/UFSM) e com a orientao de bolsistas de iniciao cientca, mestrado e doutorado.
Coordena pesquisas nas reas de epidemiologia molecular e patogenia das infeces pelos vrus da
diarria viral bovina e herpesvrus bovino tipos 1 e 5.
acadmicos de Desenho Industrial com certo conhecimento de Virologia e um virologista accionado
pela arte de ilustrar gracamente a biologia dos vrus. E isso s o incio...
Parte I - Virologia Geral
1 Estrutura e composio dos vrus
Eduardo Furtado Flores
2 Classicao e nomenclatura dos vrus
Luciane Teresinha Lovato
3 Deteco, identicao e quanticao de vrus
Mrio Celso S. Brum & Rudi Weiblen
4 Gentica e evoluo viral
Mauro Pires Moraes & Hernando Duque Jaramillo
5 Replicao viral
Eduardo Furtado Flores & Luiz Carlos Kreutz
6 Replicao dos vrus DNA
Gustavo Delhon
7 Replicao dos vrus RNA
Maria Elisa Piccone & Eduardo Furtado Flores
8 Patogenia das infeces vricas
Eduardo Furtado Flores
9 Resposta imunolgica contra vrus
Luiz Carlos Kreutz
10 Epidemiologia das infeces vricas
Eduardo Furtado Flores
11 Diagnstico laboratorial de infeces vricas
Eduardo Furtado Flores
12 Vacinas vricas
Cludio Wageck Canal & Clarissa Silveira Luiz Vaz
19
37
59
87
107
137
165
189
237
261
295
327
SUMRIO
Parte II - Virologia Especial
13 Circoviridae
Janice R. Ciacci-Zanella
14 Parvoviridae
Mauro Pires Moraes e Paulo Renato da Costa
15 Papillomaviridae
Amauri Aleri, Alice Aleri & Sheila Wosiacki
16 Adenoviridae
Mauro Pires Moraes & Paulo Renato da Costa
17 Herpesviridae
Ana Cludia Franco & Paulo Michel Roehe
18 Poxviridae
Cludio Wageck Canal
19 Asfarviridae
Gustavo Delhon
20 Caliciviridae
John Neill
21 Picornaviridae
Elisabeth Rieder & Mrio Celso S. Brum
22 Flaviviridae
Julia Ridpath & Eduardo Furtado Flores
23 Togaviridae
Eduardo Furtado Flores
24 Coronaviridae
Luciane Teresinha Lovato & Renata Dezengrini
25 Arteriviridae
Marcelo de Lima & Fernando A. Osorio
26 Paramyxoviridae
Clarice Weis Arns, Fernando R. Spilki & Renata Servan de Almeida
27 Rhabdoviridae
Luis Rodriguez, Helena R. Batista, Paulo Michel Roehe & Gael Kurath
361
375
397
413
333
489
513
525
537
563
593
613
639
657
689
28 Orthomyxoviridae
Eduardo Furtado Flores, Luciane T. Lovato, Mariana S e Silva, Renata Dezengrini & Diego G. Diel
29 Bunyaviridae
Fernanda Silveira Flores Vogel
30 Reoviridae
Amauri Aleri, Alice Aleri, Elisabete Takiuchi & Zlia I. P. Lobato

31 Retroviridae
Ana Paula Ravazzollo & Ubirajara da Costa
32 Outras famlias virais
Fernanda Silveira Flores Vogel & Eduardo Furtado Flores
Abreviaturas e siglas
Glossrio
721
755
773
809
839
861
871
PARTE I
VIROLOGIA GERAL
1 Introduo
2 Estrutura das partculas vricas
2.1 O genoma
2.2 O capsdeo
2.3 O envelope
2.4 A matriz
3 Protenas virais
4 Outros componentes dos vrions
4.1 Enzimas
4.2 Outras protenas virais
4.3 Lipdios
4.4 Carboidratos
4.5 cidos nuclicos celulares
4.6 Protenas celulares
5 Partculas vricas anmalas
6 Propriedades fsico-qumicas
7 Bibliograa consultada
21
21
30
31
32
33
33
ESTRUTURA E COMPOSIO DOS VRUS
Eduardo Furtado Flores
1
23
25
28
29
31
31
31
31
31
32
1 Introduo
Os vrus so os microorganismos menores e
mais simples que existem. So muito menores do
que clulas eucariotas e procariotas e, ao contr-
rio destas, possuem uma estrutura simples e est-
tica. Esses agentes no possuem a maquinaria ne-
cessria para a produo de energia metablica e
para a sntese de protenas e, por isso, necessitam
das funes e do metabolismo celular para se
multiplicar. Fora de uma clula viva os vrus so
estruturas qumicas. A sua atividade biolgica s
adquirida no interior de clulas vivas, por isso
so parasitas intracelulares obrigatrios.
O genoma viral cido ribonuclico (RNA)
ou desoxirribonuclico (DNA) codica apenas
as informaes necessrias para assegurar a sua
multiplicao, empacotamento do genoma e para
subverso de funes celulares em benefcio da
sua multiplicao. Ao contrrio de clulas euca-
riotas e procariotas, os vrus no crescem ou se
dividem; e sim so produzidos pela associao
dos seus componentes pr-formados no interior
da clula infectada.
A palavra vrus utilizada para designar o
agente biolgico, o microorganismo. A estrutura
fsica denominada partcula viral, partcula v-
rica ou simplesmente vrion. A nomenclatura uti-
lizada para designar as diversas hierarquias da
classicao taxonmica dos vrus (ordem, fam-
lia, subfamlia, gnero, espcie) ser apresentada
no Captulo 2. No presente captulo, a terminolo-
gia vernacular ser utilizada. Por exemplo: o ter-
mo picornavrus ser utilizado para referir-se aos
membros da famlia Picornaviridae; os membros
da famlia Orthomyxoviridae sero chamados de
ortomixovrus.
2 Estrutura das partculas vricas
A unidade fundamental o indivduo dos
vrus denominada partcula vrica, partcula viral
ou simplesmente vrion. As dimenses, morfolo-
gia e complexidade das partculas vricas variam
amplamente entre os vrus das diferentes fam-
lias. A grande maioria dos vrions possui dimen-
ses ultramicroscpicas, com dimetro que varia
entre 15 e 22 nanmetros (nm) nos circovrus; e
entre 200 e 450 nm nos poxvrus; e s pode ser
visualizada sob microscopia eletrnica (ME). As
excees so alguns poxvrus que so maiores
e podem ser visualizados sob microscopia tica
(Figura 1.1).
Figura 1.1. Escala logartmica mtrica, ilustrando as dimenses dos vrus comparativamente com clulas animais,
bactrias e macromolculas. Opoder deresoluodas microscopias tica e eletrnica indicadopor barras.
10
(1mm)
-3
10
(0,1mm)
-4
10
(10 m)
-5

10
(1 m)
-6

10
(0,1m)
-7
10
(10nm)
-8
10
(1nm)
-9
10
(1A)
-10
Poxvrus
Clulas
animais
Vrus e
ribossomos Protenas
Bactrias
Microscopia tica
Microscopia eletrnica
10
(1cm)
-2
Fonte: adaptado de Flint et al. 2000 . ( )
22 Captulo 1
condies ambientais que rapidamente inativa-
riam o cido nuclico. Por isso, o capsdeo e o
envelope so crticos para a manuteno da in-
tegridade e viabilidade do genoma, que contm
as informaes essenciais para a multiplicao
do vrus. Outras funes importantes dos com-
ponentes superciais das partculas vricas so
o reconhecimento e interao com estruturas da
membrana da clula hospedeira. Essas interaes
so essenciais para a penetrao do agente na c-
lula e incio da sua replicao.
A arquitetura e modo com que as partculas
vricas so construdas devem permitir o desem-
penho de duas funes fundamentais: a) prote-
o do genoma durante o transporte entre clulas
e entre hospedeiros, e b) liberao do genoma n-
tegro e vivel aps a penetrao na clula hospe-
deira. A evoluo fez com que a arquitetura das
partculas vricas tenha sido adequada para cum-
prir essas tarefas. Ou seja, os vrions so resisten-
tes o suciente para proteger o genoma no exte-
rior das clulas e so facilmente desintegrados ao
penetrarem na clula hospedeira, para permitir a
pronta liberao do genoma no seu interior. Essas
duas propriedades, aparentemente opostas, que
so particularmente bem evidentes em alguns v-
rus sem envelope, caracterizam o que se conven-
cionou denominar de estrutura metaestvel.
De acordo com a estrutura bsica das part-
culas, dois grupos principais de vrus podem ser
reconhecidos: os vrus sem envelope e os vrus
com envelope (Figura 1.2). Os vrions mais sim-
ples so compostos pelo genoma recoberto por
uma camada simples de protena, denominada
capsdeo. Os vrus mais complexos possuem ge-
nomas longos associados com vrias protenas,
recobertos por capsdeos complexos, revestidos
externamente por uma membrana lipoprotica
de origem celular, denominada envelope. As ca-
madas proticas que envolvem o genoma (caps-
deo, envelope) so freqentemente denominadas
de envoltrios virais. Os conceitos principais re-
lacionados estrutura e componentes dos vrions
esto apresentados no Quadro 1.1.
Figura 1.2. Estrutura fundamental das partculas vricas
e seus componentes. Representao esquemtica de um
vrionsemenvelope (A) e comenvelope (B).
Genoma
Capsdeo
A
B
Genoma
Capsdeo
Envelope
A funo primordial dos envoltrios virais
(capsdeo e envelope) proteger o genoma de
danos fsicos, qumicos ou enzimticos durante
a transmisso entre clulas e entre hospedeiros.
Nessa etapa, os vrions podem ser expostos a
- O constitudo por RNA ou DNA.
- O a camada protica que
recobre o genoma.
- Os so as unidades proticas
que compe o capsdeo.
- Os so as unidades
morfolgicas do capsdeo.
- O a estrutura formada
pelo genoma + capsdeo.
- O a membrana lipoprotica
que recobre o nucleocapsdeo
- O a partcula vrica completa, infecciosa.
genoma
capsdeo
protmeros
capsmeros
nucleocapsdeo
envelope
vrion
VRUS - DEFINIES
E CONCEITOS
Quadro 1.1. Conceitos e definies fundamentais.
Estrutura e composio dos vrus 23
2.1 O genoma
O genoma dos vrus constitudo por mo-
lculas de cido ribonuclico (RNA) ou desoxir-
ribonuclico (DNA), nunca pelos dois. Por isso,
esses agentes so comumente denominados de
vrus RNA ou vrus DNA. Em geral, os vrus das
diversas famlias contm apenas uma cpia do
genoma por vrion (so haplides). Uma exce-
o so os retrovrus, que possuem duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). A extenso,
estrutura, organizao genmica e o nmero de
genes contidos no genoma variam amplamen-
te entre os diferentes vrus. Os menores vrus
animais (circovrus) possuem uma molcula de
DNA com aproximadamente 1.700 nucleotdeos
(1,7 quilobases, kb) como genoma; os vrus maio-
res possuem um genoma DNA com mais de 350
kb (poxvrus). O nmero de genes e conse-
qentemente o nmero de protenas codicadas
tambm varia entre os diferentes vrus. Alguns
vrus de plantas codicam apenas uma protena,
enquanto o genoma dos poxvrus codica mais
de 100.
Em geral, o genoma dos vrus muito com-
pacto e codica apenas as protenas essenciais
para assegurar a sua replicao e transmisso.
Resumidamente, essas funes compreendem: a)
assegurar a replicao do genoma (enzimas poli-
merases de RNA e DNA e protenas acessrias);
b) subverter funes celulares em seu benefcio
(protease leader no vrus da febre aftosa [foot and
mouth disease virus, FMDV]) e c) empacotar o ge-
noma (protenas do capsdeo e envelope). Essas
funes so codicadas pelo genoma de, virtual-
mente, todos os vrus. Alguns vrus mais comple-
xos codicam funes adicionais que, de alguma
forma, favorecem a sua multiplicao e dissemi-
nao.
O tipo e estrutura do genoma de muitos
vrus diferem do padro clssico observado nos
cidos nuclicos de eucariotas e procariotas. Nes-
ses organismos, o genoma constitudo por mo-
lculas de DNA de cadeia dupla (ds, double-stran-
ded); enquanto os RNAs possuem ta simples (ss,
single-stranded). Os genomas dos vrus apresen-
tam variaes de tipo e estrutura, que incluem
desde genomas de DNA de ta simples (ssDNA)
at RNA de ta dupla (dsRNA) (Tabelas 1.1 e 1.2,
em anexo).
A maioria dos vrus DNA possui o cido
nuclico genmico como uma molcula de ta
dupla. As excees so os parvovrus (cadeia
simples linear), os circovrus (cadeia simples cir-
cular) e os hepadnavrus (cadeia parcialmente
dupla). O termo circular refere-se continuidade
da cadeia de DNA e no forma geomtrica ado-
tada pela molcula. Ao contrrio dos genomas
lineares, que apresentam as extremidades livres,
os genomas circulares apresentam a cadeia cont-
nua, sem extremidades.
Os poliomavrus e papilomavrus possuem
uma molcula de DNA de cadeia dupla circular.
Essa molcula apresenta-se enrolada/tensionada
sobre o seu eixo longitudinal (do ingls: supercoi-
led) e est associada com protenas celulares de-
nominadas histonas, tanto nas clulas infectadas
como nos vrions. Os parvovrus possuem uma
molcula de DNA de cadeia simples, cujas extre-
midades possuem seqncias complementares
invertidas (palindromes). Essa caracterstica per-
mite que as extremidades do genoma se dobrem
sobre si mesmas, pareando com a sua regio
complementar e formando estruturas semelhan-
tes a grampos de cabelo (hairpins). Os genomas
dos adenovrus e herpesvrus so molculas de
DNA de cadeia dupla linear. Nos herpesvrus, o
genoma linear apenas nos vrions, pois assume
a topologia circular (devido ao pareamento com-
plementar nas extremidades) logo aps a entrada
no ncleo da clula. O genoma dos hepadnavrus
uma molcula de DNA de cadeia parcialmente
dupla (aproximadamente 3/4), o restante pos-
sui cadeia simples. As extremidades da cadeia
completa fazem um pareamento de bases entre
si, conferindo molcula a topologia circular
(a cadeia de DNA no contnua). Os poxvrus
possuem uma molcula de DNA de cadeia dupla
linear; porm as duas cadeias so contnuas, ou
seja, no h extremidades livres. Uma ilustrao
simplicada da morfologia das partculas e da
topologia do genoma dos vrus DNA est apre-
sentada na Figura 1.3.
24 Captulo 1
O cido nuclico genmico de todos os vrus
RNA composto por molculas lineares. Em al-
gumas famlias (Orthomyxoviridae e Bunyaviridae),
essas molculas circularizam pelo pareamento de
seqncias complementares, localizadas nas ex-
tremidades, formando estruturas que lembram
cabos de panela (panhandles). A maioria dos vrus
RNA possui o seu cido nuclico genmico como
uma molcula de cadeia simples. As excees
so os reovrus e os birnavrus, cujos genomas
so formados por segmentos de RNA de cadeia
dupla (10 a 12 segmentos nos reovrus, dois nos
birnavrus). Os genomas dos vrus RNA de ca-
deia simples podem ser constitudos por uma
nica molcula (no-segmentados) ou por mais
de uma molcula (genomas segmentados: sete a
oito molculas de RNA nos ortomixovrus, trs
nos buniavrus e duas nos arenavrus).
O genoma de alguns vrus RNA de cadeia
simples possui o mesmo sentido do RNA men-
sageiro (mRNA) e pode ser diretamente traduzi-
do pelos ribossomos da clula hospedeira. Isso
possvel porque a seqncia de nucleotdeos, que
codica os aminocidos constituintes da prote-
na, est alinhada no mesmo sentido da seqncia
genmica. Esses mRNA (e os respectivos vrus)
so denominados RNA de sentido ou polarida-
de positiva; ou simplesmente RNA+. A primeira
etapa intracelular do ciclo replicativo desses vrus
a traduo parcial ou total do RNA genmico,
resultando na produo de protenas virais, entre
as quais a enzima polimerase de RNA (replicase),
que ir replicar o genoma.
Outros vrus RNA de cadeia simples pos-
suem genomas que no podem ser diretamente
traduzidos, pois possuem o sentido contrrio (an-
tissense) ao mRNA. Esses genomas (e os respec-
tivos vrus) so denominados de RNAs de sen-
tido ou polaridade negativa (RNA-). Esses vrus
trazem a enzima polimerase de RNA nos vrions
para permitir o incio da replicao do genoma.
A etapa inicial da replicao a sntese de uma
cpia de RNA de polaridade positiva (mRNA) a
partir do RNA genmico. Ou seja, nesses vrus, a
sntese protica ocorre pela traduo do mRNA,
que possui sentido antigenmico.
Os genomas RNA dos buniavrus e arena-
vrus no so diretamente traduzidos pelos ri-
bossomos, sendo considerados RNA de sentido
negativo. Esses RNAs servem de molde para a
transcrio e produo de cpias de RNA de sen-
tido positivo (RNA+ ou mRNA) de extenso par-
cial ou total do genoma. No entanto, em alguns
desses vrus, um dos segmentos de RNA codica
protenas tanto no sentido do genoma como na
molcula de sentido oposto (antigenmico). Essa
estratgia de expresso gnica denominada am-
bissense e uma caracterstica nica dessas fam-
lias.
Nos reovrus e birnavrus (genomas RNA
segmentados de ta dupla), a cadeia negativa
serve de molde para a transcrio e produo de
mRNA (RNA- RNA+). A cadeia complemen-
tar de RNA genmico (sentido positivo) no
traduzida. Essa molcula serve apenas de molde
e para parear com a cadeia negativa. A Figura 1.4
apresenta uma ilustrao simplicada da morfo-
logia dos vrions e topologia do genoma dos v-
rus RNA.
Circoviridae Parvoviridae
Hepadnaviridae
Polyoma
Papilloma
viridae
viridae
Adenoviridae Herpesviridae Poxviridae
Asfarviridae
Figura 1.3. Ilustrao simplificada da morfologia dos
vrions edatopologia dogenomados vrus DNA.
Fonte: adaptado de Gelderson, H. R. www.gsbs.utmb.edu
Estrutura e composio dos vrus 25
2.2 O capsdeo
O capsdeo (tambm chamado de cpsula)
a camada protica que recobre externamente o
genoma. Nos vrus que no possuem envelope,
o capsdeo representa o nico envoltrio do ci-
do nuclico viral. Alm dessa cobertura protica,
o genoma de alguns vrus encontra-se associado
com uma ou mais protenas de origem viral (p.
ex.: adenovrus e reovrus) ou da clula hospedei-
ra (poliomavrus e papilomavrus). As protenas
que esto associadas ao genoma geralmente pos-
suem carter bsico, sendo formadas predomi-
nantemente por aminocidos com carga positiva.
Essa estrutura, geralmente compacta (genoma +
protenas associadas), denominada core ou n-
cleo. O conjunto formado pelo core + capsdeo
comumente denominado nucleocapsdeo. Nos v-
rus envelopados, o nucleocapsdeo recoberto
externamente pela membrana lipoprotica que
constitui o envelope (Figura 1.2).
A funo do capsdeo proteger o material
gentico e proporcionar a transferncia do v-
rus entre clulas e entre hospedeiros. Nos vrus
sem envelope, a superfcie externa do capsdeo
responsvel pelas interaes iniciais dos vrions
com a clula hospedeira no processo de penetra-
o do vrus. Nesses vrus, as protenas localiza-
das na superfcie do capsdeo tambm interagem
com componentes do sistema imunolgico e so
alvos importantes para anticorpos com atividade
neutralizante.
Os capsdeos so formados pela associao
de subunidades proticas denominadas protme-
ros, que se constituem nas suas unidades estrutu-
rais. A associao dessas protenas pode formar
estruturas tridimensionais bem denidas, geral-
mente na forma de pequenas salincias visveis
na superfcie dos vrions. Essas estruturas consti-
Picornaviridae Astroviridae Caliciviridae Flaviviridae Arteriviridae Togaviridae
Coronaviridae Retroviridae Reoviridae Bunyaviridae
Orthomyxoviridae Arenaviridae Filoviridae Rhabdoviridae Paramyxoviridae
Birnaviridae
Figura 1.4. Ilustrao simplificada da morfologia dos vrions e da topologia do genoma dos vrus RNA.
Fonte: adaptado de www.gsbs.utmb.edu Gelderson, H. R.
26 Captulo 1
tuem-se nas unidades morfolgicas do capsdeo,
tambm denominadas capsmeros. Cada caps-
mero pode ser formado por uma nica protena,
pela associao de molculas de uma mesma pro-
tena ou por diferentes protenas (Figura 1.5).
O icosaedro se constitui em uma estrutura
quase esfrica com uma cavidade interna. Os
capsdeos icosadricos (tambm denominados
cbicos) so formados pela associao de 20 uni-
dades triangulares planas idnticas, unidas entre
si em 12 vrtices e arranjadas ao redor de uma
esfera imaginria (Figura 1.6). Eixos imaginrios
traados atravs do icosaedro do origem a trs
possveis planos de simetria: bilateral (two-fold),
trilateral (three-fold) e pentalateral (ve-fold). O
nmero de unidades que compem cada unida-
de triangular varivel e d origem a variaes
estruturais entre os capsdeos de diferentes vrus.
O icosaedro representa a otimizao estrutural
para a construo de um envoltrio resistente,
compacto e com mxima capacidade de armaze-
namento, podendo ser composto por mltiplas
cpias de uma mesma protena.
Assim, o capsdeo pode ser formado por c-
pias de uma mesma protena (vrus do mosaico,
rabdovrus) ou por diferentes tipos de protenas
(mais de dez tipos diferentes nos reovrus), e to-
das se encontram em mltiplas cpias e so codi-
cadas pelo genoma viral. Os capsdeos compos-
tos por cpias mltiplas de uma mesma protena
representam um exemplo de ecincia estrutural
de armazenamento e economia de espao no ge-
noma, pois um nico gene codica a protena ne-
cessria para formar todo o envoltrio viral. Inde-
pendente do nmero de protenas que compem
o capsdeo, a associao entre essas protenas
pode resultar em capsdeos com duas simetrias
principais: icosadrica e helicoidal (Figura 1.5).
Estrutura e composio dos vrus 27
Os capsdeos helicoidais so formados por
mltiplas cpias de uma mesma protena. Essas
protenas se associam entre si e com o cido nu-
clico, revestindo externamente o genoma. Essa
associao resulta em uma estrutura espiralada
alongada, exvel ou relativamente rgida (Figu-
ra 1.7). As dimenses dos nucleocapsdeos heli-
coidais variam muito, dependendo da extenso
do genoma, podendo atingir at 1.800 nm nos
lovrus.
A maioria dos vrus animais possui capsde-
os icosadricos ou helicoidais, mas alguns (poxv-
rus, iridovrus e bacterifagos) possuem capsde-
os com arquitetura mais complexa, denominados
genericamente capsdeos complexos.
Com base na arquitetura, simetria e comple-
xidade de arquitetura, os vrions de diferentes
famlias podem ser agrupados em cinco grupos
estruturais (Figura 1.8):
Os capsdeos helicoidais de alguns vrus de
plantas apresentam-se como cilindros exveis
ou rgidos, no interior do qual est localizado o
genoma. So todos vrus sem envelope. Os vrus
animais que possuem nucleocapsdeos helicoi-
dais possuem genoma RNA de sentido negativo
e so todos envelopados. O nucleocapsdeo heli-
coidal desses vrus formado pela associao de
cpias mltiplas da protena do capsdeo com o
genoma, que adota uma forma espiralada. Nos
rabdovrus, o nucleocapsdeo adota uma forma
bem denida, semelhante a um projtil de arma
de fogo, no interior do qual se aloja o genoma
espiralado (Figura 1.7A). Na maioria dos vrus,
o nucleocapsdeo helicoidal exvel e enovela-
se sobre si mesmo e sobre o genoma sem adotar
uma forma denida (Figura 1.7 B).
A B
Figura 1.7. Ilustrao esquemtica de nucleocapsdeos
helicoidais. A. Nucleocapsdeo helicoidal com
morfologia definida; B. Nucleocapsdeo helicoidal
flexvel.
3
1A 1B
2A 2B
1. Capsdeo icosadrico
2. Capsdeo helicoidal
Figura 1.8. Os cinco principais tipos estruturais dos
vrus. 1. Vrions com capsdeos icosadricos: 1A. Sem
envelope; 1B. Com envelope. 2. Vrions com capsdeos
helicoidais: 2A. Sem envelope; 2B. Com envelope. 3.
Vrioncomsimetria complexa.
Fonte: adaptada de Carter et al. (2005).
28 Captulo 1
sem envelope, capsdeo icosadrico: ex:
adenovrus, picornavrus;
sem envelope, capsdeo helicoidal: ex: v-
rus do mosaico do tabaco;
com envelope, capsdeo isosadrico: ex: to-
gavrus, herpesvrus;
com envelope, capsdeo helicoidal: ex: pa-
ramixovrus, rabdovrus;
complexos: ex: bacterifagos, poxvrus.

2.3 O envelope
Os vrions de vrias famlias possuem os nu-
cleocapsdeos recobertos externamente por uma
membrana lipoprotica denominada envelope.
O envelope formado por uma camada lipdica
dupla, derivada de membranas celulares. Nessas
membranas esto inseridas um nmero varivel
de protenas codicadas pelo genoma viral. Na
maioria dos vrus, o envelope est justaposto
externamente ao capsdeo. Nos herpesvrus, en-
tretanto, existe um espao de espessura varivel
entre o capsdeo e o envelope, que preenchido
por uma substncia protica amorfa, denomina-
da tegumento. A quantidade e a forma adotada
pelo tegumento so variveis e, conseqente-
mente, determinam a variao da morfologia e
dimenses da partcula dos herpesvrus. Como o
envelope derivado de membranas celulares, e
estas so uidas e exveis, a superfcie externa
e a morfologia dos vrus envelopados so mais
exveis e menos denidas do que nos vrus sem
envelope. A estrutura de um vrion com envelo-
pe est ilustrada na Figura 1.9.
Os vrions adquirem a membrana lipdica
que compe o envelope pela insero/protuso
do nucleocapsdeo atravs de membranas celu-
lares, mecanismo denominado brotamento. Os
lipdios que constituem o envelope so deriva-
dos das membranas da clula hospedeira, e as
protenas so codicadas pelo genoma viral. A
estrutura lipdica dupla dos envelopes bem se-
melhante entre os diferentes vrus. No entanto, a
espessura e composio dessa camada variam de
acordo com a membrana celular que os originou.
O envelope, adquirido na membrana plasmtica,
contm fosfolipdios e colesterol em determinada
proporo, enquanto o envelope originado das
membranas celulares internas mais delgado e
contm pouco ou nenhum colesterol. Os envelo-
pes virais praticamente no contm protenas ce-
lulares. As protenas celulares da membrana so
excludas da regio do brotamento por interaes
entre as protenas virais que se inserem na cama-
da lipdica.
Os envelopes dos vrus podem conter um ou
mais tipos de protenas codicadas pelo genoma
viral (os herpesvrus possuem entre 10 e 12; os
poxvrus possuem um nmero ainda maior). A
maioria das protenas do envelope contm oligos-
sacardeos (acares) associados, constituindo-se,
portanto, em glicoprotenas. Essas glicoprotenas
so produzidas e modicadas no retculo endo-
plasmtico rugoso (RER) e no aparelho de Golgi,
cando inseridas na prpria membrana do RER
ou sendo enviadas para a membrana nuclear do
Golgi ou para a membrana plasmtica, locais do
brotamento.
As glicoprotenas do envelope viral pos-
suem dimenses e estruturas variveis e a maio-
ria formada por protenas integrais de membrana
(Figura 1.10A). Essas glicoprotenas podem estar
presentes na forma de monmeros, homo ou he-
terodmeros, trmeros e at tetrmeros. Em geral,
as glicoprotenas do envelope apresentam trs
regies principais em comum: a) uma regio ci-
toplasmtica ou interna (cauda); b) uma regio
transmembrana (tm) e c) uma regio externa. A
cauda geralmente pequena e interage com a su-
perfcie externa do nucleocapsdeo no processo
de morfognese e brotamento. A regio tm est
inserida na camada lipdica e serve de sustenta-
o e xao da protena. A extenso dessa re-
nucleocapsdeo
genoma
membrana
lipdica
glicoprotenas
envelope
Figura 1.9. Ilustrao esquemtica da estrutura de um
vrion com envelope. As aberturas no envelope e no
capsdeo so meramente ilustrativas, com o fim de
permitir avisualizaodas estruturas internas.
Adaptado de Reschke, M.; www.biographix.de
Estrutura e composio dos vrus 29
gio varia de acordo com a espessura e origem
da camada lipdica: entre 18 (vrus da febre ama-
rela, que brota no retculo endoplasmtico) e 26
aminocidos (vrus da inuenza, que adquire o
envelope na membrana plasmtica). A regio tm
composta principalmente por aminocidos hi-
drofbicos. Algumas glicoprotenas do envelope
possuem vrias regies tm e, assim, atravessam
a membrana duas ou trs vezes. Outras no pos-
suem regio tm e, portanto, no se encontram
inseridas na membrana lipdica. Essas glicopro-
tenas encontram-se associadas ao envelope por
interaes covalentes ou no-covalentes com ou-
tras glicoprotenas integrais de membrana e, por
isso, so ditas protenas perifricas de membrana
(Figura 1.10B). Exemplos desse tipo de protena
so as glicoprotenas E0 dos pestivrus e a SU dos
retrovrus. A regio externa geralmente maior;
hidroflica e contm um nmero varivel de oli-
gossacardeos associados. As glicoprotenas do
envelope de alguns vrus formam projees na
superfcie dos vrions, denominadas peplmeros,
que podem ser visualizadas sob ME.
d) transmisso do vrus entre clulas. Nas etapas
nais do ciclo replicativo, algumas glicoprotenas
do envelope auxiliam no egresso das partculas
recm-formadas, permitindo a sua liberao a
partir da membrana celular (neuraminidase nos
ortomixovrus). As glicoprotenas do envelope
tambm desempenham um importante papel na
interao do vrus com o sistema imunolgico e
se constituem em alvos importantes para anticor-
pos neutralizantes.
Como as glicoprotenas do envelope me-
diam as interaes iniciais dos vrions com as
clulas, a sua integridade e conformao natu-
ral so essenciais para a infectividade do vrus.
Algumas substncias qumicas (formalina e de-
tergentes) ou agentes fsicos (calor e radiaes)
alteram a conformao dessas protenas e, con-
seqentemente, reduzem ou eliminam a infecti-
vidade do vrus. Solventes lipdicos, como ter e
clorofrmio, tambm afetam negativamente a in-
fectividade de vrus envelopados, pois destroem
a integridade da camada lipdica que compe o
envelope.
Os vrions adquirem o envelope por meio de
um mecanismo denominado genericamente de
brotamento. Nesse processo, o nucleocapsdeo ini-
cialmente interage com as caudas das glicopro-
tenas previamente inseridas na membrana. Essa
interao inicial seguida da protuso/insero
do nucleocapsdeo atravs da membrana, resul-
tando na formao de vrions com uma camada
lipoprotica que envolve externamente o nucle-
ocapsdeo (Figura 1.11). O local do brotamento
varia entre os diferentes vrus e pode ocorrer na
membrana nuclear, do RER, do aparelho de Gol-
gi ou na membrana plasmtica.
2.4 A matriz
Alguns vrus envelopados possuem prote-
nas que recobrem externamente o nucleocaps-
deo, mediando a sua associao com a superfcie
interna do envelope. Essas protenas, denomi-
nadas de matriz, so geralmente glicosiladas e
abundantes, podendo corresponder a at 30% da
massa total dos vrions (como nos retrovrus).
As protenas da matriz so encontradas em v-
rios vrus envelopados, principalmente nos vrus
RNA de polaridade negativa (exemplos: parami-
As glicoprotenas, principalmente por meio
de sua regio extracelular, desempenham vrias
funes na biologia do vrus, incluindo: a) liga-
o aos receptores celulares; b) fuso do envelope
com a membrana celular; c) penetrao celular e
E
M
TM
I
A B
Figura 1.10. Representao simplificada da estrutura das
glicoprotenas do envelope viral. A. Protena integral de
membrana com as regies interna (I), transmembrana
(TM) e externa (E); M. membrana lipdica; B. Duas
protenas associadas: uma integral de membrana (cinza)
associadacomuma protena perifrica (preto).
30 Captulo 1
xovrus e ortomixovrus). As protenas da matriz
desempenham importante funo estrutural e na
morfognese das partculas vricas, pois intera-
gem simultaneamente com a superfcie externa
do nucleocapsdeo e com as caudas das glicopro-
tenas, funcionando como adaptadores entre o
nucleocapsdeo e o envelope.
3 Protenas virais
O genoma dos vrus codica duas classes
principais de protenas: estruturais e no-estrutu-
rais. As protenas estruturais so aquelas que par-
ticipam da construo e arquitetura da partcula
vrica (Figura 1.12), ou seja, esto presentes como
componentes estruturais dos vrions. Enqua-
dram-se nessa classe as protenas do nucleocap-
sdeo e do envelope. As protenas do tegumento
(herpesvrus) e as protenas da matriz tambm se
constituem em protenas estruturais.
As protenas no-estruturais so aquelas co-
dicadas pelo genoma viral e produzidas no
interior da clula hospedeira durante o ciclo re-
plicativo, mas que no participam da estrutura
das partculas vricas. So geralmente protenas
com atividades enzimticas e/ou regulatrias
que participam das diversas etapas do ciclo re-
plicativo do vrus e de sua interao com as or-
ganelas e macromolculas da clula hospedeira.
So exemplos de protenas no-estruturais as en-
zimas polimerases de DNA (DNA polimerase) e
RNA (RNA polimerase), enzimas envolvidas no
metabolismo de nucleotdeos (timidina quinase,
ribonucleotdeo redutase etc.), fatores de trans-
crio e regulao da expresso gnica (ICP0
nos herpesvrus, protena E1A dos adenovrus,
2
3
4
Meio extracelular
Citoplasma
1
Membrana
plasmtica
Figura 1.11. Etapas dobrotamentoe aquisiodoenvelope por vrus envelopados. 1. Interaodonucleocapsdeocom
as caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope; 2-3. Insero/protuso do nucleocapsdeo atravs da
membrana; 4. Egressodapartculacompleta.
PA+PB1+PB2
M
NP
HA
NA
M2
Figura 1.12. Ilustrao esquemtica da estrutura de um
ortomixovrus (vrus da influenza), indicando a
localizao das protenas na partcula vrica.
Glicoprotenas do envelope: HA: hemaglutinina; NA:
neuraminidase; M2: canal de ons; M: protena da matriz.
Componentes do complexo ribonucleoprotena: RNA:
recoberto pela NP; NP: nucleoprotena; PA: polimerase
cida; PB1: polimerase bsica1; PB2: polimerase bsica2.
Estrutura e composio dos vrus 31
antgeno T dos poliomavrus), entre outras. O
nmero de protenas no-estruturais (e tambm
estruturais) codicadas pelo genoma varia com
a complexidade dos vrus. Os vrus mais sim-
ples codicam uma ou poucas protenas no-
estruturais, enquanto os poxvrus e herpesvrus
codicam dezenas de protenas com atividades
enzimticas e regulatrias, que desempenham
funes diversas no seu ciclo replicativo. Embora
estejam presentes nas partculas vricas de vrias
famlias, protenas com atividade enzimtica so
consideradas protenas no-estruturais.
4 Outros componentes dos vrions
4.1 Enzimas
Protenas com atividade enzimtica esto
presentes nas partculas vricas de membros de
vrias famlias de vrus DNA e RNA. Essas en-
zimas so necessrias para a sntese do cido nu-
clico viral e/ou para a biossntese de nucleot-
deos e, geralmente, catalisam reaes nicas dos
vrus, que no encontram fatores com funes
similares nas clulas hospedeiras. Os vrus RNA
de sentido negativo, por exemplo, trazem a enzi-
ma RNA polimerase (polimerase de RNA depen-
dente de RNA) nos vrions. Os retrovrus trazem,
nos vrions, a enzima transcriptase reversa (poli-
merase de DNA dependente de RNA; tambm
polimerase de DNA dependente de DNA). Os
hepadnavrus tambm trazem a enzima polime-
rase (polimerase de DNA dependente de DNA e
tambm de RNA) nos vrions. Os poxvrus tra-
zem, em seus vrions, enzimas RNA polimerases
(com atividade equivalente s do hospedeiro),
alm de enzimas que modicam o mRNA. Essas
enzimas so necessrias para a realizao dessas
funes no citoplasma, onde ocorre a replicao
viral. Endonucleases (ortomixovrus), proteases
(vrios vrus), quinases (hepadnavrus), integrase
e ribonuclease (retrovrus) so exemplos de ativi-
dades enzimticas presentes em partculas virais.
Os retrovrus complexos (exemplo: vrus da imu-
nodecincia humana HIV) possuem protenas
adicionais nos vrions, VPR e VIF, que so impor-
tantes para a replicao eciente em alguns tipos
de clulas.
4.2 Outras protenas

Protenas sem atividade enzimtica, mas
que possuem participao no ciclo replicativo,
tambm esto presentes nos vrions de algumas
famlias. Os herpesvrus possuem, como parte do
tegumento, a VP-16 (ou -TIF), que um transa-
tivador dos genes iniciais, e a VHS, uma protena
que degrada os mRNA da clula hospedeira.
4.3 Lipdios
Os lipdios presentes nos envelopes virais
so tipicamente os mesmos das membranas celu-
lares, onde os vrions adquirem o seu envoltrio
externo. Os envelopes originados da membrana
plasmtica contm principalmente fosfolipdios
(50-70%) e colesterol, enquanto os envelopes ad-
quiridos em membranas celulares internas (nu-
clear, Golgi, RER) possuem pouco ou nenhum
colesterol. Os lipdios constituem entre 20 e 35%
da massa dos vrus envelopados.
4.4 Carboidratos
Os carboidratos podem estar presentes em
vrions como componentes de glicoprotenas, gli-
colipdios e mucopolissacardeos. Esses carboi-
dratos esto presentes principalmente no envelo-
pe, mas os vrus complexos (poxvrus) tambm
possuem carboidratos associados com protenas
internas e/ou do capsdeo.
4.5 cidos nuclicos celulares
Alguns vrus podem ocasionalmente encap-
sidar em seus vrions, fragmentos de DNA cro-
mossmico da clula hospedeira (poliomavrus).
Os vrions dos retrovrus contm molculas de
RNA transportador (tRNA) adquiridos da clu-
la infectada. Esse tRNA desempenha um papel
importante no incio do ciclo replicativo do vrus,
pois serve de iniciador (primer) para a sntese da
cadeia de DNA a partir do RNA genmico viral.
Os vrions da famlia Arenaviridae contm ribos-
somos da clula hospedeira, o que lhes confere
uma aparncia granular quando examinados sob
32 Captulo 1
ME (da a denominao da famlia, arena = areia).
Os vrions dos ortomixovrus podem conter RNA
ribossmico derivado das clulas hospedeiras.
4.6 Protenas celulares
No ncleo da clula hospedeira, o genoma
DNA recm-replicado dos poliomavrus e papi-
lomavrus associa-se com protenas celulares de-
nominadas histonas (H), formando estruturas se-
melhantes cromatina celular. Essas estruturas,
chamadas de minicromossomas, que contm o
DNA viral, conjugado com as histonas H2A, H2B,
H3 e H4, so encapsidadas durante a morfogne-
se das partculas virais. Cabe ressaltar que cada
vrion dos papilomavrus e poliomavrus contm
uma cpia do genoma, ou seja, um minicromos-
soma. Os vrions dessas famlias, portanto, con-
tm certa quantidade de protenas celulares.
5 Partculas vricas anmalas
Alm de partculas vricas completas e infec-
tivas, a replicao de alguns vrus pode resultar
na produo de uma quantidade varivel de par-
tculas vricas anmalas, geralmente no-infec-
ciosas. A freqncia e abundncia dessas partcu-
las em relao aos vrions completos e infecciosos
variam amplamente de acordo com o vrus. So
muitas as causas da ausncia de infectividade
nessas partculas, incluindo:
ausncia do genoma viral. Clulas infecta-
das por poliomavrus podem produzir capsdeos
vazios, sem o DNA genmico; outros capsdeos
podem conter fragmentos de DNA celular. Essas
partculas so denominadas pseudovrions;
clulas infectadas por vrus de genoma
RNA segmentado (ortomixovrus, por exemplo)
podem produzir vrions com o conjunto incom-
pleto dos segmentos genmicos;
vrios vrus podem encapsidar genomas
com delees em um ou mais genes. Os vrions
que contm esses genomas defectivos so deno-
minados partculas defectivas. Esses vrions no
replicam autonomamente e somente so capazes
de replicar quando ocorre uma co-infeco com
um vrus homlogo infeccioso (denominado de
vrus helper);
os picornavrus podem ocasionalmente
apresentar capsdeos vazios em razo da degra-
dao do genoma;
clulas infectadas com os hepadnavrus
(vrus da hepatite B) produzem vrions comple-
tos (Dane particles) e tambm duas formas de
partculas incompletas (partculas esfricas de 20
nm e partculas lamentosas) (Figura 1.13). As
partculas incompletas so formadas por molcu-
las da glicoprotena de superfcie (HbsAg), asso-
ciadas com segmentos de membranas celulares.
Para cada vrion completo, so produzidas entre
10.000 e 1.000.000 partculas esfricas. A abun-
dncia dessas partculas no sangue de pessoas
infectadas cronicamente tem sido utilizada como
ferramenta para o diagnstico e, durante muitos
anos, foi utilizada para a produo de vacinas.
A
B
Figura 1.13. Partculas produzidas por clulas infectadas
pelo vrus da hepatite B (hepadnavrus). A. Ilustrao
esquemtica e B. fotografia de microscopia eletrnica. As
partculas esfricas maiores com parede dupla so as
partculas infecciosas (dane particles); as esfricas
menores e as filamentosas so partculas defectivas,
compostas por protenas de superfcie e pores de
membranas celulares.
A. Fonte: adaptada de Flint et al. 2000 .
B. Fonte: Dr. Linda Stannard, www.uct.ac.za.
( )
Estrutura e composio dos vrus 33
6 Propriedades fsico-qumicas

Vrios agentes fsicos e qumicos podem
afetar a integridade funcional e infectividade dos
vrions, incluindo a temperatura e o pH. A ao
deletria da temperatura sobre a viabilidade dos
vrus possui importncia durante a manipulao
e remessa de material clnico para o diagnstico,
como tambm para a preservao de estoques vi-
rais na rotina laboratorial. Alm disso, pode ser
um fator limitante para a sua disseminao entre
hospedeiros. Temperaturas de 55 a 60C desna-
turam as protenas de superfcie, sobretudo as do
envelope, em poucos minutos, tornando os v-
rions incapazes de interagir produtivamente com
receptores celulares e iniciar a infeco. Tempe-
raturas ambientais altas tambm afetam negati-
vamente a infectividade dos vrus.
Os vrus envelopados so geralmente muito
mais sensveis ao deletria de altas tempera-
turas sobre a infectividade. Alguns vrus, como
os paramixovrus, so particularmente suscep-
tveis a temperaturas ambientais e tambm per-
dem a infectividade quando submetidos a con-
gelamento e descongelamento. A conservao de
vrus em suspenso lquida por longos perodos
deve ser realizada a temperaturas de -70C ou em
nitrognio lquido (-196C). Outra forma segura e
eciente de armazenar vrus por longos perodos
sem perder infectividade por meio de lioliza-
o (dessecao a temperaturas de congelamen-
to) e conservao do material liolizado (p) a
4C ou -20C.
Para vrus em suspenso, temperaturas de 4
a 6C so compatveis com a preservao da in-
fectividade apenas por horas ou poucos dias; tem-
peraturas de 4 ou -20C no so indicadas para
conservao por longos perodos. A resistncia
a diferentes condies de pH varia amplamente;
alguns vrus sem envelope (rotavrus, alguns pi-
cornavrus) mantm a infectividade mesmo em
condies de pH cido e so chamados de cido-
resistentes; outros, sobretudo os envelopados, so
inativados j em pH um pouco abaixo do neutro
(5 a 6) e so chamados de cido-lbeis. Agentes
qumicos que possuem ao desnaturante sobre
protenas e/ou solventes e detergentes lipdicos
possuem ao deletria sobre a infectividade dos
vrus e muitos so utilizados como desinfetantes
de materiais, equipamentos e ambientes. Em ge-
ral, os vrus sem envelope so muito mais resis-
tentes a agentes qumicos e condies ambientais
do que os vrus com envelope.
7 Bibliograa consultada
BAKER, T.S.; JOHNSON, J.E. Principles of virus structure
determination. In: CHIU, W.; BURNETT, R.M.; GARCEA, R.L.
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P.M. (Eds). Fields virology. 4.ed. Philadelphia, PA: Lippincott
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MURRAY, P.R. et al. Medical microbiology. 2. ed. St. Louis:
Mosby Year Book, 1994, p.573.
QUINN, P.J. et al. Clinical microbiology. London: Wolfe, 1994.
648p.
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in virology, v.4, p.135-144, 1993.
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p.145-153, 1985.
34 Captulo 1
RYAN, K.J. Sherris medical microbiology: an introduction to
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890 p.
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Seminars in virology, v.1, p.477-487, 1990.
WHITE, D.O.; FENNER, F. Medical virology. 4. ed. San Diego,
CA: Academic Press, 1994. 603 p.
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Disponvel em: <http://www.ivis.org>. Acesso em: 20 set.
2006.
Anexos

Circoviridae Icosadrico No
15-22 nm,
esfrico-icosadricos
DNA de cadeia simples,
circular, 1.7-2,2kb
Famlia Capsdeo Envelope
Dimenses e morfologia
do vrions
Caractersticas do
genoma
F
I
T
A
S
I
M
P
L
E
S
Parvoviridae Icosadrico No 25nm, icosadricos
DNA de cadeia simples, linear,
seqncias complementares
nas extremidades, flexionadas
sobre si (hairpins), 5 kb
F
I
T
A
D
U
P
L
A
Polyomaviridae Icosadrico No 45nm, esfrico-icosadricos
DNA de cadeia dupla,
circular, superenrolada,
5 kb
Papillomaviridae Icosadrico No 55nm, esfrico-icosadricos
DNA de cadeia dupla,
circular, superenrolada,
8 kb
Adenoviridae Icosadrico No 80-110nm, icosadricos
DNA de cadeia dupla, linear,
com uma protena nas
extremidades, 30-44 kb
Herpesviridae Icosadrico Sim
120-200 nm, pleomrficos
ou aproximadamente
esfricos
DNA de cadeia dupla,
linear, 120-235 kb
Poxviridae Complexo Sim
170- 200 x 300-450nm,
ovides/retangulares
DNA de cadeia dupla,
linear e contnua,
130-375 kb
Iridoviridae/
Asfaviridae
Complexo Sim
175-215nm, quase esfricos
ou com aspecto de prismas
hexagonais
DNA de cadeia dupla,
linear e contnua,
170-190kb
Hepadnaviridae Icosadrico Sim
40-48nm, esfricos,
ocasionalmente pleomrficos,
partculas subvirais em excesso
DNA de cadeia parcialmente
dupla (3/4), com as
extremidades pareando entre
si (pseudo-circular), 3.2 kb
Tabela 1.1. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus DNA
Estrutura e composio dos vrus 35
Birnaviridae Icosadrica No 60nm, icosadricos
2 segmentos de RNA de cadeia
dupla, lineares, 5.7-5.9kb
Reoviridae Icosadrica No
60-80nm, aproximadamente
esfricos
10, 11 ou 12 segmentos de RNA de
cadeia dupla, lineares, 16-27kb
Retroviridae Icosadrico Sim 80-100nm, esfricos
duas cpias idnticas de RNA,
cadeia simples (+), linear, 7-11kb
Famlia Capsdeo Envelope
Dimenses e morfologia
do vrions
Caractersticas do
genoma
Picornaviridae Icosadrico No
28-30nm,
esfrico-icosadricos
RNA de cadeia simples (+),
linear, 5'IRES, 3'polyA, 7.2 -
8.5kb
Caliciviridae Icosadrico No
30-38nm,
esfrico-icosadricos
RNA de cadeia simples (+),
linear, protena na ext. 5,
3'polyA, 7.4 -7.7kb
Astroviridae Icosadrico No 28-30nm, esfricos
RNA de cadeia simples (+),
linear, 3'polyA, 7.2-7.9kb
Coronaviridae Helicoidal Sim
RNA de cadeia simples (+), linear,
5'cap, 3'polyA, 20-32kb
Arteriviridae Icosadrico Sim
50-70nm, aproximadamente
esfricos
RNA de cadeia simples (+),
linear ,5'cap, 3' polyA, 15kb
Togaviridae Icosadrico Sim 70nm, esfricos
RNA de cadeia simples (+),
linear, 5'cap, 3'polyA, 9.7-
11.8kb
Flaviviridae Icosadrico Sim 45-60nm, esfrico
RNA de cadeia simples (+),
linear, 5'cap/IRES,
3'polyA/poliC, 9.5-12.5kb
P
O
L
A
R
I
D
A
D
E
P
O
S
I
T
I
V
A
80-220nm, pleomrficos ou
aproximadamente esfricos
F
I
T
A
S
I
M
P
L
E
S
Paramyxoviridae Helicoidal Sim
150-300nm, pleomrficos,
aproximadamente esfricos,
filamentosos
RNA de cadeia simples (-),
linear, 15-16kb
Rhabdoviridae Helicoidal Sim
70-85 x 130-380 nm, forma
de projtil
RNA de cadeia simples (-),
linear, 13-16kb
Filoviridae Helicoidal Sim
80 x 780-970nm (at 14.000),
pleomrficos (filamentosos,
forma de U ou 6
RNA de cadeia simples (-),
linear, 19.1kb
Bornaviridae ? Sim 90nm, esfricos (?)
RNA de cadeia simples (-),
linear, 8.9kb
?
Orthomyxoviridae Helicoidal Sim
80-120nm, ovides,
filamentosos,
aproximadamente
esfricos, pleomrficos
6 a 8 segmentos de RNA de cadeia
simples, (-), lineares, extremidades
complementares permitem
circularizao, 10-13.6kb
Bunyaviridae Helicoidal Sim
80-120nm, pleomrficos
ou esfricos.
3 segmentos de RNA de cadeia
simples (-), lineares, extremidades
complementares permitem
circularizao, 11-21kb
Arenaviridae Helicoidal Sim
50 x 300nm , esfricos ou
pleomrficos
2 segmentos de RNA de cadeia
simples (-), lineares, 10-14kb
P
O
L
A
R
I
D
A
D
E
N
E
G
A
T
I
V
A
Tabela 1.2. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus RNA
F
I
T
A
D
U
P
L
A
1 Introduo
2 Taxonomia dos vrus
3 Nomenclatura dos vrus
4 Critrios utilizados para a classicao dos vrus
5 Famlias de vrus
5.1 Vrus com genoma DNA
5.1.1 Poxviridae
5.1.2 Asfarviridae
5.1.3 Herpesviridae
5.1.4 Adenoviridae
5.1.5 Papillomaviridae
5.1.6 Polyomaviridae
5.1.7 Parvoviridae
5.1.8 Circoviridae
5.1.9 Hepadnaviridae
5.2 Vrus com genoma RNA de sentido positivo
5.2.1 Picornaviridae
5.2.2 Caliciviridae
5.2.3 Astroviridae
5.2.4 Togaviridae
5.2.5 Flaviviridae
5.2.6 Coronaviridae
5.2.7 Arteriviridae
5.3 Vrus com genoma RNA de sentido negativo no-segmentado
5.3.1 Paramyxoviridae
5.3.2 Rhabdoviridae
5.3.3 Filoviridae
5.3.4 Bornaviridae
CLASSIFICAO E NOMENCLATURA DOS VRUS
Luciane Teresinha Lovato
2

39
39
41
41
42
42
42
43
44
44
45
46
46
47
47
48
48
49
49
50
50
51
51
52
52
52
53
54
5.4 Vrus com genoma RNA de sentido negativo segmentado
5.4.1 Orthomyxoviridae
5.4.2 Bunyaviridae
5.4.3 Arenaviridae
5.5 Vrus com genoma RNA de ta dupla
5.5.1 Reoviridae
5.5.2 Birnaviridae
5.6 Vrus com genoma RNA que realizam transcrio reversa
5.6.1 Retroviridae
6 Bibliograa consultada
57
54
54
54
55
56
56
56
57
57
1 Introduo
Existe um nmero muito grande de vrus
circulando nas diferentes espcies de seres vivos,
desde vrus que infectam bactrias at aqueles
que infectam organismos superiores, como os
mamferos e plantas. Dentre estes, existem vrus
altamente patognicos e outros que no causam
doena nos seus hospedeiros, passando desper-
cebidos. Atualmente, so reconhecidas mais de
1.500 espcies de vrus, que abrangem mais de
30.000 cepas, isoladas ou variantes.
A classicao e nomenclatura dos vrus no
seguem as regras determinadas para os demais
microorganismos. medida que foram sendo
identicados, os vrus foram sendo agrupados de
forma aleatria, de acordo com os aspectos con-
siderados mais importantes pelos grupos que os
identicavam. Nas dcadas de 1950 e 1960, hou-
ve um grande avano na Virologia, resultando
na identicao de um grande nmero de novos
vrus. Com o intuito de determinar regras bsicas
para classicar esses vrus, vrios comits foram
formados, o que acabou gerando uma grande
confuso taxonmica.
Durante o Congresso Internacional de Mi-
crobiologia, realizado em Moscou, em 1966, foi
criado o Comit Internacional para Nomenclatura
de Vrus (ICTV). Esse comit teve a incumbncia
de desenvolver um sistema nico de classicao
e nomenclatura para todos os vrus. At hoje, o
ICTV o rgo que determina as regras a serem
seguidas para a classicao dos vrus at o nvel
de espcie. Esse comit se rene periodicamente,
com o m de revisar e atualizar os critrios de
classicao, de modo que as novas descobertas
biolgicas e moleculares possam ser incorporadas
aos critrios taxonmicos j existentes. Com isso,
a classicao dos vrus nas diversas hierarquias
tornou-se dinmica e pode ser alterada medida
que novas informaes biolgicas ou moleculares
assim o justiquem. A classicao apresentada
neste texto est de acordo com a ltima reviso
do ICTV, datada de 07 de julho de 2007.
2 Taxonomia dos vrus
De acordo com os vrios critrios adotados,
os vrus so classicados hierarquicamente em
ordens, famlias, subfamlias, gneros e espcies.
O suxo virales utilizado para designar a ordem.
Para a denominao de famlia, utiliza-se o suxo
viridae; para subfamlia, utiliza-se virinae; e para
gnero, o suxo virus. Por exemplo, o vrus da
cinomose canina est classicado na ordem Mo-
nonegavirales, famlia Paramyxoviridae, subfamlia
Paramyxovirinae, gnero Morbillivirus e, nalmen-
te, espcie, como vrus da cinomose canina (cani-
ne distemper virus, CDV). As famlias so os agru-
pamentos fundamentais dos vrus, agrupando
agentes que possuem caractersticas estruturais,
morfolgicas, genticas e biolgicas em comum.
Algumas famlias a minoria so agrupadas
em nveis hierrquicos superiores: as ordens. Da
mesma forma, nem todas as famlias so dividi-
das em subfamlias; algumas delas apresentam
o gnero como nvel hierrquico imediatamente
inferior, ou seja, nem todos os vrus so classi-
cados em todos os nveis hierrquicos possveis,
possuindo complexidades de classicao dife-
rentes entre si.
Os vrus que apresentam algumas caracte-
rsticas biolgicas, estruturais e moleculares em
comum so agrupados em uma mesma famlia.
Por exemplo, todos os membros da famlia Her-
pesviridae possuem vrions grandes, com enve-
lope contendo vrias glicoprotenas, capsdeo
icosadrico, uma camada protica denominada
tegumento entre o capsdeo e o envelope. O
genoma composto por uma molcula de DNA
de ta dupla linear. Esses vrus so capazes de
estabelecer infeces latentes em seus hospedei-
ros. Os vrus que apresentam essas caractersticas
(e que por isso compem a famlia Herpesviridae)
podem ser subdivididos em subfamlias, de acor-
do com algumas caractersticas que possuem em
comum e que so diferentes dos outros vrus da
famlia. Os membros da subfamlia Alphaherpes-
virinae possuem um amplo espectro de hospedei-
ros, apresentam um ciclo rpido e ltico em clu-
40 Captulo 2
las de cultivo e estabelecem infeces latentes em
neurnios sensoriais e autonmicos. Essas carac-
tersticas diferem dos membros das outras subfa-
mlias: Betaherpesvirinae e Gammaherpesvirinae.
Os vrus de uma famlia ou de uma subfa-
mlia podem ser divididos em gneros, de acordo
com propriedades biolgicas, e, principalmente,
moleculares, como a estrutura e organizao ge-
nmica: a subfamlia Alphaherpesvirinae possui
dois gneros, o Simplexvirus e o Varicellovirus.
Dentro de cada gnero se encontram as espcies,
que so grupos de vrus muito semelhantes entre
si (a exemplo de espcies de animais), mas que
apresentam algumas diferenas que justicam a
sua classicao como vrus diferentes (e tam-
bm diferentes dos vrus do outro gnero). Por
exemplo, no gnero Varicellovirus, encontram-se
classicados os herpesvrus bovinos tipos 1 e 5
(BoHV-1 e BoHV-5), o herpesvrus suno (SuHV-
1) ou vrus da doena de Aujeszky (PRV), entre
outros.
A classicao dos vrus em espcies no
consensual entre os virologistas. A denio de
espcie aceita pelo ICTV foi estabelecida em 1991
e diz o seguinte: espcie de vrus uma classe
polythetic
1
de vrus que constitui uma linha-
gem replicativa e ocupa um nicho ecolgico par-
ticular. Uma classe polythetic denida em ter-
mos de um amplo grupo de critrios sendo que
nenhum dos critrios isoladamente necessrio
ou suciente. Dessa forma, cada membro da clas-
se deve possuir um nmero mnimo de caracte-
rsticas, mas nenhum dos aspectos necessita ser
encontrado em todos os membros de uma classe.
Assim, diferentes caractersticas podem ser usa-
das em diferentes grupos de vrus.
A classicao em subespcies, cepas, va-
riantes e isolados no existe de forma ocial, em-
bora seja reconhecida a sua importncia para o
diagnstico, para estudos biolgicos e molecula-
res e tambm para a produo de vacinas. A se-
guir so apresentadas algumas denies desses
termos.
O termo isolado (ou amostra) refere-se a um
vrus que foi obtido por isolamento de uma de-
terminada fonte de infeco (animal infectado),
1
A traduo para o termo polythetic no consta em di-
cionrios ociais; por esta razo o termo foi escrito na sua
forma original e a denio colocada logo em seguida no
texto.
por exemplo: o SV-299/04 um BoHV-5 isolado
do crebro de um bovino que desenvolveu me-
ningoencefalite no estado do Rio Grande do Sul.
A denominao SV-299/04 foi dada pelo labora-
trio que realizou o isolamento do vrus e refere-
se ao nmero do protocolo. Qualquer vrus que
tenha sido isolado de material clnico e sobre o
qual se conhea pouco, alm de sua identidade,
constitui-se em um isolado ou amostra.
O termo cepa utilizado para designar amos-
tras de vrus que j foram bem caracterizadas e
sobre as quais j se possui certo conhecimento.
A denominao cepa tambm pode ser utilizada
para se referir a isolados de um vrus que podem
apresentar pequenas variaes sem deixar de
pertencer s mesmas categorias taxonmicas. Por
exemplo, o vrus da doena de Newcastle (NDV)
pode apresentar diferentes nveis de virulncia,
dependendo da cepa do vrus que est causan-
do a doena. Existem trs cepas desse vrus em
ordem crescente de virulncia: as lentognicas,
as mesognicas e as velognicas. Assim, aqueles
isolados do vrus que apresentam alta virulncia
pertencem cepa velognica, os que apresentam
virulncia moderada so mesognicos, e os de
baixa virulncia so os lentognicos.
Cepas de referncia so cepas amplamente ca-
racterizadas e reconhecidas nacional ou interna-
cionalmente, que so utilizadas como referncia
para determinado vrus em testes de diagnstico,
pesquisa e para a produo de vacinas. Por exem-
plo, a cepa Cooper do BoHV-1 serve de referncia
para comparaes de isolados desse vrus e am-
plamente utilizada em diagnstico e na produo
de vacinas.
A terminologia wild-type refere-se cepa ori-
ginal do vrus que circula na natureza. No caso
da existncia de mutantes, o wild-type a cepa
que deu origem aos mutantes. Em portugus,
utilizam-se os termos cepa de campo (ou vrus de
campo), no caso dos vrus circulantes na popu-
lao; e cepa original ou parental no caso da pro-
duo e/ou comparao com mutantes. Variantes
ou mutantes so vrus que diferem do wild-type
em alguma caracterstica fenotpica, como, por
exemplo, o vrus da vacina contra a doena de
Aujeszky um mutante de deleo que foi pro-
duzido a partir da cepa Bartha do herpesvrus
suno tipo 1 (SuHV-1).
Classicao e nomenclatura dos vrus 41
3 Nomenclatura dos vrus
No uso formal, as palavras que designam
as famlias, subfamlias e gneros devem iniciar
com letra maiscula e devem ser escritas em it-
lico ou sublinhadas. O nome da espcie do vrus
no deve iniciar com letra maiscula (a no ser
que este nome corresponda a um nome prprio
de regio, cidade etc.) e deve ser escrito com fon-
te normal, sem itlico. No uso formal, a hierar-
quia (txon) deve preceder a unidade taxonmi-
ca. Exemplo: a famlia Parvoviridae; o gnero
Parvovirus.
No uso informal (ou vernacular) os termos
referentes famlia, subfamlia, gnero e espcie
devem ser escritos com letras minsculas, sem
itlico ou sublinhado. Neste caso, o suxo formal
no includo e o nome do txon segue o termo
usado para denir a unidade taxonmica. Escre-
ve-se ento: a famlia dos poxvrus, o gnero
parapoxvirus. O uso informal em portugus
deve suprimir letras que no existam no alfabeto
da lngua portuguesa. Exemplo: para se referir de
forma vernacular aos membros da subfamlia Al-
phaherpesvirinae, deve-se escrever: os alfaherpes-
virus. Os membros da famlia Orthomyxoviridae
devem ser tratados como os ortomixovrus.
No uso informal, o nome do txon , muitas
vezes, suprimido, o que pode resultar em con-
fuses. Isto se deve raiz comum das palavras
utilizadas para denir as unidades taxonmicas
nos diferentes nveis. Dessa forma, dependendo
do contexto, a palavra avivrus pode estar sen-
do usada para referir-se tanto famlia Flavivi-
ridae como ao gnero Flavivirus. Para evitar essa
ambigidade, aconselha-se o uso do txon prece-
dendo o termo usado. Exemplo: vrus do gnero
Flavivirus.
A nomenclatura ocial dos vrus utiliza
abreviaturas, que so constitudas pelas iniciais
do nome da espcie viral. No presente texto, sero
utilizadas as abreviaturas derivadas da nomen-
clatura na lngua inglesa, por exemplo, herpesv-
rus bovino tipo 1 (do ingls bovine herpesvirus type
1, BoHV-1).
No uso informal, muitos vrus podem ser
denominados de duas ou trs formas diferentes,
de acordo com a sua denominao original e com
a nomenclatura ocial preconizada pelo ICTV.
As recomendaes do ICTV so de que a sua
nomenclatura substitua as anteriores, embora
alguns deles continuem a ser denominados pela
nomenclatura tradicional. Citam-se como exem-
plos o SuHV-1, que tambm conhecido como
vrus da doena de Aujeszky (ADV) ou vrus da
pseudoraiva (PRV), e o BoHV-1, que tambm
conhecido como vrus da rinotraquete infecciosa
bovina (IBRV).
Exemplos de nomenclatura de vrus:
a) Formal: famlia: Picornaviridae; gnero:
Aphtovirus; espcie: vrus da febre aftosa (foot and
mouth disease vrus, FMDV);
Vernacular: Os aftovrus so sensveis ao
pH baixo [...].
b) Formal: famlia: Herpesviridae, subfamlia:
Alphaherpesvirinae, gnero: Alphaherpesvirus, es-
pcie: herpesvrus suno tipo 1 (vrus da doena
de Aujezsky);
Vernacular: O vrus da doena de Aujeszky
um alfaherpesvrus [...].
c) Formal: ordem: Mononegavirales; famlia:
Paramyxoviridae; subfamlia: Pneumovirinae; gne-
ro: Pneumovirus, espcie: vrus sincicial respirat-
rio bovino (BRSV);
Vernacular: Os pneumovrus causam do-
ena respiratria [...].
d) Formal: famlia: Flaviviridae; gnero: Fla-
vivirus; espcie: vrus da febre amarela (YFV);
Vernacular: O vrus da febre amarela um
avivrus transmitido por mosquitos.
4 Critrios utilizados para a
classicao dos vrus
A evoluo nos mtodos de deteco e ca-
racterizao dos vrus determinou uma evoluo
nos critrios utilizados para a sua classicao.
A diferenciao entre vrus e os demais micro-
organismos foi o primeiro passo na classicao
dos agentes virais e essa diferena foi determi-
nada, inicialmente, pela ltrabilidade dos vrus.
Enquanto as bactrias eram retidas no ltro, os
vrus passavam por ele, surgindo a denominao
de agentes ltrveis.
42 Captulo 2
No incio, as caractersticas ecolgicas e de
transmisso, sinais clnicos da doena e tropis-
mo por determinado rgo ou tecido foram os
critrios utilizados na classicao dos vrus. O
desenvolvimento da microscopia eletrnica pos-
sibilitou a classicao de acordo com a morfo-
logia das partculas virais. Ao longo dessa evo-
luo, outras caractersticas foram sendo mais
conhecidas e consideradas para descrever os
vrus. Aspectos como a composio qumica, o
tipo de genoma, distribuio geogrca, vetores,
estabilidade e antigenicidade dos vrus foram
adquirindo importncia. Atualmente as tcnicas
de biologia molecular tm sido utilizadas para
renar e detalhar a classicao dos vrus, espe-
cialmente o seqenciamento e comparao entre
seqncias do genoma. Estratgias de expresso
gnica, homologia de nucleotdeos entre seqn-
cias correspondentes, estrutura e funes de pro-
tenas virais tambm foram incorporadas aos cri-
trios de classicao dos vrus.
De acordo com o ICTV, as seguintes carac-
tersticas so atualmente levadas em considera-
o para classicar os vrus em ordem, famlias,
subfamlias e gneros: tipo de cido nuclico e
organizao do genoma, estratgia de replicao
e estrutura do vrion.
A classicao em espcies, embora no re-
gulamentada pelo ICTV, segue os seguintes cri-
trios:
a) homologia da seqncia do genoma;
b) hospedeiros naturais;
c) tropismo de tecido e clulas;
d) patogenicidade e citopatologia;
e) forma de transmisso;
f) propriedades fsico-qumicas;
g) propriedades antignicas.
Uma outra classicao prtica, no ocial,
regularmente usada entre os virologistas. Nes-
se caso, so levados em considerao os critrios
epidemiolgicos e/ou clnico-patolgicos para
agrupar os vrus. De acordo com esse critrio, os
vrus so classicados em:
a) respiratrios: vrus que penetram no
hospedeiro por inalao e produzem infeco e
doena primariamente no trato respiratrio. Ex:
rinovrus, calicivrus;
b) entricos: vrus que penetram pela via
oral e replicam no trato intestinal. Ex: coronav-
rus, rotavrus;
c) arbovrus: vrus que replicam e so trans-
mitidos por vetores artrpodos. Ex: vrus da en-
cefalites eqinas leste e oeste;
d) vrus oncognicos: vrus com potencial
para induzir transformao celular e tumores nos
hospedeiros. Ex: retrovrus, papilomavrus.
5 Famlias de vrus
A seguir sero apresentadas as famlias de
vrus que contm patgenos de animais (Figuras
2.1 a 2.25). Em cada gnero, sero mencionados
os principais vrus que causam doenas em ani-
mais de interesse para a medicina veterinria, ou
seja, animais de produo e animais de compa-
nhia. Tambm sero citados os principais patge-
nos humanos. Cabe ressaltar, por essa razo, que
esta lista no se constitui na relao completa dos
vrus de cada famlia.

5.1 Vrus com genoma DNA
5.1.1 Famlia: Poxviridae
Subfamlia: Chordopoxvirinae (infectam ver-
tebrados)
Gneros:
Orthopoxvirus: vrus da vaccinia (VACV),
poxvrus bovino (varola bovina), vrus da ectro-
melia (camundongos);
Parapoxvirus: vrus do ectima contagioso
dos ovinos (ORFV), vrus da estomatite papular
bovina (BPSV);
Avipoxvirus: vrus da bouba aviria
(FWPV), poxvrus do canrio (CNPV);
Capripoxvirus: poxvrus dos caprinos
(GTPV), poxvrus dos ovinos (SPPV), vrus da
doena Lumpy Skin (LSDV);
Leporipoxvirus: vrus do mixoma de coelhos
(MYXV), vrus do broma de coelhos (RFV);
Suipoxvirus: poxvrus suno (SWPV);
Molluscipoxvirus: vrus do molusco conta-
gioso (MOCV);
Yatapoxvirus: vrus Tanapox (TANV) e Ya-
tapox dos macacos (YMTV).
Classicao e nomenclatura dos vrus 43
Subfamlia: Entomopoxvirinae (infectam inse-
tos)
Gneros:
Alphaentomopoxvirus;
Betaentomopoxvirus;
Gammaentomopoxvirus.
Os poxvrus so os maiores vrus de ani-
mais. Os vrions possuem uma forma retangular
ou ovide, com simetria complexa e, geralmente,
possuem envelope lipdico (algumas partculas
podem no possuir). As dimenses das partcu-
las virais podem variar de 220 a 450 nm de ex-
tenso x 140 a 260 nm de largura x 140 a 260 nm
de espessura. O genoma consiste de uma nica
molcula de DNA, linear, cadeia dupla, com 130
a 375 kbp. Esses vrus trazem, nos vrions, um
nmero considervel de enzimas e fatores auxi-
liares; e realizam o ciclo replicativo inteiramente
no citoplasma das clulas hospedeiras. A maio-
ria das doenas produzidas por esses vrus ca-
racteriza-se pela formao de leses vesiculares
e crostosas na pele e/ou mucosas dos animais.
O vrus da varola humana (smallpox) o mais
importante vrus dessa famlia. Dentre os pat-
genos de animais domsticos, o mais comum em
nosso meio o ORFV, uma doena caracterizada
por leses vesiculares e pustulares na regio dos
lbios, narinas e cascos.
5.1.2 Famlia: Asfarviridae
Gnero: Asvirus
Espcie: vrus da peste suna africana
(AFSV).
O ASFV o nico vrus classicado nessa
famlia. Os vrions do ASFV possuem envelope
lipoprotico e um capsdeo icosadrico formado
por 1.892 a 2.172 unidades estruturais. O dime-
tro das partculas virais varia entre 175 e 215 nm.
O genoma consiste de uma molcula de DNA
de cadeia dupla linear, com 170 a 190 kb. O v-
rus replica no citoplasma da clula hospedeira.
O ASFV transmitido por carrapatos do gnero
Ornithodoros, constituindo-se no nico arbovrus
entre os vrus DNA. Esse vrus mantido na na-
tureza em sudeos selvagens e, ocasionalmente,
transmitido aos sunos domsticos. O vrus en-
contrado na frica, mas j foi esporadicamente
introduzido na Europa, onde causou doena em
sunos de alguns pases. A peste suna africana
caracterizada pela produo de hemorragias,
principalmente nos rgos linfides. O nico re-
lato da doena no Brasil ocorreu em 1978, no Rio
de Janeiro. Atualmente o ASFV considerado
extico no Pas.
Figura 2.1. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Poxviridae.
Fonte: Dr Stewart McNulty (web.qub.ac.uk).
Figura 2.2. Fotografia de microscopia eletrnica de um
vrionda famlia Asfarviridae(ASFV).
Fonte: Dra Sharon Brookes, Pirbright, UK (ICTVdB).
44 Captulo 2
5.1.3 Famlia: Herpesviridae
Subfamlia: Alphaherpesvirinae
Gneros:
Simplexvirus: herpesvrus bovino tipo 2
(BoHV-2) ou vrus da mamilite herptica (BMH),
herpesvrus B (macacos), vrus do herpes simplex
humano (HSV-1, HSV-2);
Varicellovirus: BoHV-1 ou vrus da rinotra-
quete (IBRV), BoHV-5, SHV-1 ou PRV, herpesv-
rus eqino tipos 1, 3 e 4 (EHV-1, EHV-3, EHV-4),
herpesvrus canino 1 (CaHV-1), herpesvrus feli-
no tipo 1 (vrus da rinotraquete felina, FeHV-1),
herpesvrus caprino tipo 1 (CpHV-1);
Mardivirus: vrus da doena de Marek;
Iltovirus: vrus da laringotraquete infec-
ciosa das galinhas (ILTV);
Subfamlia: Betaherpesvirinae
Gneros:
Cytomegalovirus: citomegalovrus suno;
Muromegalovirus: citomegalovrus do ca-
mundongo 1;
Roseolovirus: herpesvrus humano 6 (HHV-
6).
Vrios betaherpesvrus animais ainda no
foram classicados em gneros.
Subfamlia: Gammaherpesvirinae
Gneros:
Linphocriptovirus: vrus Epstein-Barr (EBV)
humano;
Rhadinovirus: vrus da febre catarral malig-
na (MCFV);
Ictalurivirus: herpesvrus do catsh de ca-
nal.
A famlia Herpesviridae abriga um grupo
grande e diverso de vrus encontrados em vir-
tualmente todas as espcies de vertebrados. Os
vrions contm envelope, capsdeo icosadrico e
o dimetro pode variar entre 120 e 300 nm. Entre
o capsdeo e o envelope, existe uma camada pro-
tica denominada tegumento. O genoma consiste
de uma molcula de DNA de cadeia dupla linear,
com 120 a 250 kb. Os vrus dessa famlia possuem
uma importante propriedade biolgica em co-
mum, que a capacidade de estabelecer infeces
latentes nos seus hospedeiros. Embora todos os
herpesvrus apresentem algumas caractersticas
em comum, os vrus das trs subfamlias apresen-
tam diferenas biolgicas e moleculares. Os vrus
da subfamlia Alphaherpesvirinae apresentam um
ciclo replicativo rpido e ltico em cultivo celu-
lar, estabelecem infeces latentes em neurnios
e produzem leses vesiculares em membranas
mucosas. Vrios vrus animais so classicados
nessa subfamlia, cujo prottipo o HSV-1. Os
vrus da subfamlia Betaherpesvirinae apresentam
uma replicao lenta em cultivo celular e estabe-
lecem infeces latentes em glndulas secretrias
e no tecido linforeticular. O herpesvrus huma-
no tipo 5 (HHV-5) ou citomegalovrus humano
(CMV) o prottipo dessa subfamlia. Os vrus
da subfamlia Gammaherpesvirinae infectam lin-
fcitos de forma ltica ou latente e alguns deles
possuem potencial oncognico. Nesta subfamlia,
est classicado apenas um patgeno de animais,
o MCFV, uma doena sistmica de bovinos. O
EBV, agente de mononucleose e tumores em hu-
manos, o prottipo dessa subfamlia.
5.1.4 Famlia: Adenoviridae
Gneros:
Mastadenovirus: vrus da hepatite infeccio-
sa canina (CAdV-1), vrus da traqueobronquite
infecciosa canina (CAdV-2), adenovrus sunos
(SAV-1-9), adenovrus bovinos (BAV-1-9), ade-
novrus eqino (EAV-1 e 2);
Aviadenovirus: vrus da sndrome da queda
de postura;
Atadenovirus: adenovrus ovino D;
Siadenovirus: adenovrus dos perus B.
Figura 2.3. Fotografia de microscopia eletrnica de um
vrionda famliaHerpesviridae (HSV-1).
Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).
Classicao e nomenclatura dos vrus 45
Deltapapillomavirus: papilomavrus do alce
europeu (EEPV), papilomavrus de cervdeos
(DPV), papilomavrus bovino (BPV-1 e BPV-2) e
papilomavrus ovino (OvPV-1 e OvPV-2);
Epsilonpapillomavirus: papilomavrus bovi-
no tipo 5 (BPV-5);
Zetapapillomavirus: papilomavrus eqino
1 (EcPV-1);
Etapapillomavirus: papilomavrus de aves
(FcPV);
Thetapapillomavirus: papilomavrus dos
psitacdeos (PePV);
Iotapapillomavirus: papilomavrus dos Mas-
tomys natalensis (MNPV);
Kappapapillomavirus: papilomavrus dos
coelhos (CRPV e ROPV);
Lambdapapillomavirus: papilomavrus oral
canino (COPV), papilomavrus felino (FDPV);
Mupapillomavirus: papilomavrus humano
(HPV-1 e HPV-63);
Nupapillomavirus: papilomavrus humano
41 (HPV-41);
Pipapillomavirus: papilomavrus oral do
hamster (HaOPV);
Xipapillomavirus: papilomavrus bovinos
(BPV-3, BPV-4 e BPV-6);
Omikronpapillomavirus: papilomavirus dos
cetceos (PsPV).
Os adenovrus possuem vrions icosadricos
grandes (dimetro de 80 a 100 nm), sem envelope
e apresentam bras de 9 a 35 nm nos vrtices. O
capsdeo envolve uma nica molcula de DNA
de cadeia dupla linear, com 36 a 44 kb. Os adeno-
vrus replicam no ncleo das clulas hospedeiras
e, como alguns outros vrus DNA, a transcrio
dos genes realizada pela maquinaria clula e
ocorre de forma ordenada. Alguns produtos dos
genes virais interferem com o controle do ciclo ce-
lular, e alguns adenovrus possuem potencial on-
cognico. O vrus tambm codica produtos que
antagonizam os mecanismos inatos da resposta
imunolgica. Os adenovrus so encontrados em
humanos, diversas espcies de mamferos e aves
e, em geral, so pouco patognicos. Quando as-
sociados com manifestaes clnicas, geralmente
esto envolvidos em sinais respiratrios leves em
animais e humanos. A doena de maior reper-
cusso causada por esses vrus em animais pro-
vavelmente seja a hepatite infecciosa canina. Os
adenovrus tm sido intensivamente estudados
como vetores para terapia gentica e vacinas.
5.1.5 Famlia: Papillomaviridae
Gneros:
Alphapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-32);
Betapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-5);
Gammapapillomavirus: vrios papilomav-
rus humanos (prottipo: HPV-4);
Os papilomavrus so vrus pequenos, sem
envelope, com 52 a 55 nm de dimetro e simetria
icosadrica. O capsdeo formado por 72 cap-
Figura 2.4. Fotografia de microscopia eletrnica de vrions
dafamlia Adenoviridae.
Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).
Figura 2.5. Fotografia de microscopia eletrnica de um
vrion da famlia (Papilomavrus
humano).
Papillomaviridae
Fonte: www.oralcancerfoundation.org
46 Captulo 2
smeros, envolvendo o DNA circular de cadeia
dupla de aproximadamente 8 kbp. Os vrus re-
plicam no ncleo de clulas epiteliais do tecido
descamativo, e as sucessivas etapas da replica-
o ocorrem em clulas com estgios diferentes
de diferenciao. As etapas nais da replicao
ocorrem apenas nas clulas maduras das cama-
das granulosa e crnea da pele. Os papilomav-
rus so agentes etiolgicos dos papilomas, tam-
bm denominados verrugas, que consistem em
leses nodulares na pele e mucosas de animais
e humanos. Alguns desses vrus podem induzir
a produo de tumores malignos. Esse problema
particularmente importante no caso das verru-
gas genitais humanas, tambm conhecidas como
condilomas. Existem mais de 60 sorotipos dife-
rentes de papilomavrus causando doenas em
humanos, e alguns deles so considerados de alto
risco para a produo de tumores, como o caso
dos HPV 16 e HPV 18, que esto envolvidos no
desenvolvimento de cncer de colo de tero em
mulheres. As espcies bovina, eqina e canina
so as mais freqentemente afetadas por papilo-
mas, no entanto, o desenvolvimento de tumores
malignos nessas espcies no comum. A parti-
cipao de papilomavrus na induo de tumores
em animais parece ser limitada ao carcinoma de
esfago, induzido pela ingesto de samambaia
em bovinos.
5.1.6 Famlia: Polyomaviridae
Gnero:
Polyomavirus: vrus smio 40 (SV-40), polio-
mavrus de camundongos (PoV), vrus BK (hu-
manos), vrus JC (humanos), vrios poliomavrus
de mamferos e aves.
Os poliomavrus esto entre os menores
vrus DNA. Possuem vrions icosadrico-esf-
ricos com 45 nm, sem envelope, e uma molcu-
la de DNA de ta dupla circular como genoma
(5 kb). Os vrions so compostos por 72 caps-
meros, formados por trs protenas: VP1, VP2 e
VP3. O genoma est associado com histonas ce-
lulares, formando uma estrutura semelhante
cromatina celular. A famlia Polyomaviridae era
classicada anteriormente como uma subfamlia
da Papovaviridae, cuja denominao derivava dos
vrus prottipos: Pa (papilomavrus de coelhos);
po (poliomavrus de camundongos) e va (agente
vacuolizante, SV-40). Atualmente, os poliomav-
rus e o prottipo SV-40 so classicados separa-
damente, na famlia Polyomaviridae. O interesse
maior nesses vrus iniciou-se com a descoberta
de que o SV-40 e outros poliomavrus eram ca-
pazes de produzir tumores em hamsters (por
isso foram denominados pequenos vrus DNA
tumorais). Embora estudos extensivos realizados
durante dcadas no tenham sido capazes de de-
monstrar associao entre o SV-40 e tumores hu-
manos, estudos recentes demonstraram a presen-
a de seqncias de DNA e antgenos do SV-40
em certos tumores raros em humanos, renovando
o interesse por esse vrus. Os poliomavrus foram
muito estudados como modelos para Virologia
e biologia molecular. O prottipo da famlia o
SV-40, um vrus encontrado como contaminante
de vacinas contra a poliomielite nos anos 1950.
5.1.7 Famlia: Parvoviridae
Subfamlia: Parvovirinae
Gneros:
Parvovirus;
Patgenos animais: parvovrus canino ti-
pos 1 e 2 (CPV-1; CPV-2), parvovrus felino (vrus
da panleucopenia felina, FPLV), parvovrus su-
no (PPV), parvovrus bovino (BPV);
Erythrovirus: vrus B19 humano;
Figura 2.6. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Polyomaviridae.
Fonte: PHIL Library, CDC.
Classicao e nomenclatura dos vrus 47
Dependovirus: vrus adeno-associado 2
(AAV);
Amdovirus: Aleutian mink disease virus;
Bocavirus: parvovrus bovino, vrus minu-
to dos ces.
tivas na suinocultura. O parvovrus humano B-16
tem sido associado com abortos em mulheres.
5.1.8 Famlia: Circoviridae
Gneros:
Circovirus: circovrus suno tipos 1 e 2
(PCV-1; PCV-2), vrus da doena das penas e bi-
cos dos psitacdeos (BFDV), circovrus dos pom-
bos (PiCV), circovrus dos gansos (GoCV), circo-
vrus do canrio (CaCV);
Gyrovirus: vrus da anemia das galinhas
(CAV).
Os vrus dessa famlia so os menores vrus
conhecidos que infectam animais. O dimetro
dos vrions, que no possuem envelope, pode va-
riar entre 17 e 22 nm. Esses vrions apresentam
uma aparncia esfrica microscopia eletrnica.
O ncleo do vrion formado por uma molcula
de DNA circular de cadeia simples. A replicao
viral ocorre no ncleo da clula hospedeira, na
fase S do ciclo celular. Essa famlia possui um
nmero pequeno de patgenos animais, entre os
quais o agente da CAV e o vrus da doena debi-
litante dos leites (PCV-2). Circovrus tambm j
foram identicados em humanos.
Subfamlia: Densovirinae
Gneros:
Densovirus: densovrus da Junonia coenia;
Iteravirus: densovrus da Bombyx mori;
Brevidensovirus: densovrus do mosquito
Aedes aegypti;
Pefudensovirus: densovrus da Periplaneta
fuliginosa.
Os parvovrus so vrus muito pequenos e,
at h pouco tempo, eram considerados os meno-
res vrus de animais e/ou humanos. Os vrions
possuem um dimetro de 25 nm, no possuem
envelope e apresentam uma aparncia esfrica
microscopia eletrnica. Os vrus dessa famlia
apresentam um DNA de cadeia simples linear
de, aproximadamente, 5.2 kb. Alguns membros
dessa famlia necessitam de uma co-infeco vi-
ral para realizar a sua replicao (Dependovirus),
o que no o caso do gnero Parvovirus, no qual
esto classicados importantes patgenos de ani-
mais e humanos. A replicao ocorre no ncleo
de clulas que esto em processo de mitose, mais
especicamente na fase S do ciclo celular. Os
principais agentes de doena dessa famlia so os
parvovrus que causam doenas gastroentricas
em caninos e felinos. O parvovrus suno um
importante agente etiolgico de perdas reprodu-
5.1.9 Famlia: Hepadnaviridae
Gneros:
Orthohepadnavirus: vrus da hepatite B hu-
mana (HBV), vrus do esquilo do solo (GSHV),
Figura 2.7. Fotografia de microscopia eletrnica de vrions
da famliaParvoviridae.
Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).
Figura 2.8. Fotografia de microscopia eletrnica de vrions
dafamlia Circoviridae.
Fonte: Dr Stewart McNulty (web.qub.ac.uk).
48 Captulo 2
vrus das marmotas (WHV) e outros recentemen-
te identicados em vrias espcies;
Avihepadnavirus: vrus da hepatite B dos
marrecos (DHBV).
5.2 Vrus com genoma RNA
de sentido positivo
5.2.1 Famlia: Picornaviridae
Gneros:
Enterovirus: enterovrus bovinos 1 e 2
(BEV-1, BEV-2), enterovrus suno 1-13 (PEV-1-
13), poliovrus (PV);
Rhinovirus: rinovrus bovino 1-3, rhinov-
rus humanos (HRV-2-100);
Hepatovirus: vrus da hepatite A humano
(HAV);
Cardiovirus: vrus da encefalomiocardite
murina Theiler (EMCV);
Aphtovirus: vrus da febre aftosa (FMDV);
Parechovirus: parechovrus humano;
Erbovirus: vrus da rinite eqina B (ERBV);
Kobuvirus: Aichi vrus (AiV);
Teschovirus: teschovirus suno 1 (PTV).
Os vrus da famlia Hepadnaviridae causam
hepatite em humanos e em algumas espcies de
animais. Esses vrus freqentemente estabele-
cem infeco persistente, e a persistncia viral no
hospedeiro est associada com cirrose heptica
e hepatocarcinoma. As clulas infectadas pelos
hepadnavrus produzem trs tipos de partculas
vricas: os vrions completos possuem um dime-
tro de 42-47 nm e so compostos por um nucle-
ocapsdeo icosadrico envolto por um envelope
lipoprotico. Partculas esfricas e lamentosas,
compostas apenas pelas protenas do envelope e
pores da membrana plasmtica, tambm so
produzidas pelas clulas infectadas. O genoma
viral composto por uma molcula de DNA cir-
cular de cadeia parcialmente dupla. O ciclo repli-
cativo dos hepadnavrus ocorre parte no ncleo e
parte no citoplasma da clula hospedeira e envol-
ve uma etapa de transcrio reversa. Os hepad-
navrus possuem tropismo marcante por clulas
hepticas e, freqentemente, produzem infeces
hepticas persistentes/crnicas. O HBV o ni-
co patgeno humano classicado nessa famlia.
O vrus animal mais conhecido dessa famlia
o DHBV, que causa uma doena muito similar
hepatite B humana.
Os picornavrus possuem vrions esfricos
pequenos, no-envelopados, com 28 a 30 nm de
dimetro. O capsdeo icosadrico formado por
60 cpias de cada uma das quatro protenas VP1,
VP2, VP3 e VP4. Alm das protenas do capsdeo,
cada vrion possui tambm uma protena deno-
minada VPg, associada ao cido nuclico na ex-
tremidade 5. O genoma composto de uma ca-
deia simples de RNA, de sentido positivo de 7.2 a
8.4 kb. A replicao do vrus ocorre inteiramente
Figura 2.9. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Hepadnaviridae(vrus da hepatite B).
Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).
Figura 2.10. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Picornaviridae (poliovrus).
Fonte: www.vetsciences.free.fr
Classicao e nomenclatura dos vrus 49
no citoplasma, e o RNA traduzido diretamente
pelos ribossomas. A infeco geralmente aguda
e citoltica, ocorrendo a liberao dos vrions pela
lise celular. Essa famlia contm vrios patge-
nos muito importantes para humanos e animais,
como o vrus da poliomielite, o vrus da hepatite
A, os rinovrus, os enterovrus, o FMDV, entre
outros.
5.2.2 Famlia: Caliciviridae
Gneros:
Vesivirus: calicivrus felino (FCV), vrus do
exantema vesicular dos sunos (SVEV), vrus dos
lees marinhos de San Miguel (SMSV);
Lagovirus: vrus da doena hemorrgica
dos coelhos (RHDV), vrus da doena hemorr-
gica das lebres pardas (EBHSV);
Norovirus: vrus de Norwalk (humano);
Sapovirus: vrus de Sapporo (humano).
ta uma protena (VPg) covalentemente ligada na
extremidade 5. Em clulas infectadas, tambm
detectado um RNA subgenmico de 2.2 a 2.4 kb.
A replicao do vrus ocorre no citoplasma, e os
vrus so liberados por lise celular. O patgeno
animal mais conhecido dessa famlia o caliciv-
rus felino, associado com doena respiratria em
gatos. Um calicivrus (norovrus) tem sido consi-
derado um dos principais agentes de diarria em
pessoas de todas as idades.
5.2.3 Famlia: Astroviridae
Gneros:
Mamastrovirus: astrovrus humanos e de
vrias espcies de animais domsticos;
Avastrovirus: astrovrus dos perus.
Os astrovrus so pequenos, com 28 a30 nm
de dimetro, sem envelope e com capsdeo ico-
sadrico. A superfcie de algumas partculas v-
ricas apresenta estruturas que lembram estrelas
de cinco ou seis pontas, o que originou o nome
da famlia. A replicao ocorre no citoplasma, e
os vrus so liberados por lise celular. Os astro-
vrus tm sido isolados de casos de gastrenterite
de bovinos, sunos, ces, gatos, perus, patos e hu-
manos. Na grande maioria das espcies, a doena
se manifesta como uma diarria passageira e ra-
ramente h complicaes. Entretanto, em patos,
uma hepatite com altos ndices de mortalidade
tem sido descrita.
Os calicivrus so vrus pequenos (dimetro
entre 30 a 40 nm) sem envelope. O capsdeo for-
mado por 60 cpias de uma nica e grande pro-
tena. microscopia eletrnica, o vrus apresenta
depresses caractersticas na superfcie, que lem-
bram copos ou clices, o que originou a denomi-
nao da famlia. O genoma consiste de um cido
nuclico RNA linear de cadeia simples e sentido
positivo, com extenso de 7.4 a 7.7 kb. Semelhante
aos picornavrus, o RNA dos calicivrus apresen-
Figura 2.11. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions dafamliaCaliciviridae.
Fonte: www.fli.bund.de
Figura 2.12. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions dafamlia Astroviridae.
Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).
50 Captulo 2
5.2.4 Famlia: Togaviridae
Gneros:
Alfavirus: vrus das encefalites eqinas
do leste (EEEV), oeste (WEEV) e venezuelana
(VEEV), alm de outros arbovrus zoonticos (Se-
mliki Forest virus, SFV; Ross River virus, RRV;
Sindbis, SIN);
Rubivirus: vrus da rubola (humano).
Os togavrus possuem vrions esfricos, com
dimetro aproximado de 70 nm. O capsdeo
envolto por um envelope lipdico que apresenta
peplmeros formados por duas glicoprotenas.
O genoma consiste de uma molcula de RNA li-
near, de sentido positivo, com extenso de 9,7 a
11.8 kb. As protenas no-estruturais so sinteti-
zadas a partir de uma poliprotena traduzida di-
retamente do RNA genmico. As protenas no-
estruturais so produzidas pela traduo de um
mRNA subgenmico, sintetizado a partir de uma
cpia de RNA de sentido anti-genmico. A repli-
cao ocorre inteiramente no citoplasma e a libe-
rao da prognie viral ocorre por brotamento na
membrana plasmtica. Os Alfavirus so transmi-
tidos por insetos e a maioria deles zoontica.
Os EEEV, WEEV e VEEV de maior importncia
para a Veterinria esto classicados no gnero
Alfavirus. O vrus da rubola, tambm classica-
do nessa famlia, um agente que infecta exclusi-
vamente humanos.
5.2.5 Famlia: Flaviviridae
Gneros:
Flavivirus: vrus da febre amarela (YFV, hu-
mano e de primatas), vrus da dengue (humano),
vrus da encefalite japonesa (JEV), vrus Murray
Valley (MVEV), vrus do Nilo Ocidental (WNV),
vrus Wesselsbron (WBV), vrus do Louping Ill.
Com possvel exceo do vrus da dengue, os de-
mais vrus so zoonticos;
Pestivirus: vrus da diarria viral bovina
tipos 1 e 2 (BVDV-1; BVDV-2), vrus da peste su-
na clssica (CSFV), vrus da doena da fronteira
(BDV);
Hepacivirus: vrus da hepatite C (humano).
Os membros da famlia Flaviviridae possuem
vrions envelopados, com capsdeo possivel-
mente icosadrico e com 45-60 nm de dimetro.
Apresentam um genoma RNA linear de sentido
positivo (9.5 a 12.5 kb), que traduzido em uma
poliprotena, posteriormente clivada nas prote-
nas individuais por enzimas virais e celulares. O
genoma organizado de forma semelhante em
todos os membros da famlia, com as protenas
estruturais codicadas no primeiro tero (extre-
midade 5) e as no-estruturais nos teros nais
(extremidade 3). No gnero Flavivrus, esto
classicados vrios agentes de doenas hemor-
rgicas e encefalites transmitidas por mosquitos,
entre elas o YFV, o vrus da dengue e o WNV. Im-
Figura 2.14. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Flaviviridae (vrus do Nilo Ocidental).
Fonte: PHIL Library, CDC.
Fonte: Dra Tuli Mukhopadnyay (ICTVdB).
Figura 2.13. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions dafamlia Togaviridae.
Classicao e nomenclatura dos vrus 51
portantes patgenos para a medicina veterinria
so classicados no gnero Pestivrus, entre eles o
BVDV e o CSFV. O vrus da hepatite C de huma-
nos o nico membro do gnero Hepacivirus.
5.2.6 Famlia: Coronaviridae
capsdeo helicoidal, que possui uma molcula de
RNA linear de cadeia simples e sentido positivo.
Dentre os vrus RNA, os coronavrus possuem o
maior genoma, podendo variar de 27 a 32 kb. A
sntese de um grupo de RNAs subgenmicos du-
rante a replicao viral na clula infectada um
aspecto comum aos vrus dessa famlia, assim
como aos demais vrus da ordem Nidovirales. A
replicao ocorre inteiramente no citoplasma. Es-
ses vrus causam importantes doenas entricas
em animais, incluindo a gastrenterite transmis-
svel dos sunos (TGE) e a peritonite infecciosa
dos felinos (FIP). Os coronavrus humanos esto
associados principalmente com os resfriados co-
muns. O vrus da SARS, agente de doena respi-
ratria severa na sia entre 2003 e 2004, tambm
classicado nessa famlia.
5.2.7 Famlia: Arteriviridae
Ordem: Nidovirales
Gnero:
Arterivirus: vrus da arterite eqina (EVAV),
vrus elevador da lactato desidrogenase (LDEV),
vrus da sndrome respiratria e reprodutiva dos
sunos (PRRSV).
Ordem Nidovirales
Gnero:
Coronavirus: vrus da bronquite infecciosa
das aves (IBV), coronavrus dos perus (TCoV),
vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos
(TGEV), coronavrus felino (FeCoV), vrus da pe-
ritonite infecciosa felina (FIPV), coronavrus ca-
nino (CCoV), coronavrus bovino (BCoV), coro-
navrus humano (HuCoV), vrus da pneumonia
asitica (SarsCoV humano);
Torovirus: torovrus eqino (EToV), torov-
rus bovino (BToV), torovrus suno (SToV), toro-
vrus humano (HToV), vrus Berne (BeV), vrus
Breda (BrV).
A morfologia dos vrions, quando obser-
vada ao microscpio eletrnico, deu origem ao
nome da famlia. Os vrions do gnero Corona-
vrus possuem dimetro de 80 a 220 nm e forma
esfrica; os do gnero Torovrus, de 120 a 140 nm
e aparncia bacilar ou na forma de rim. Vrus de
ambos os gneros apresentam envelope lipdico
com peplmeros que se projetam externamente
por at 20 nm, e que do ao vrion o aspecto de
coroa. Os coronavrus apresentam um nucleo-
O nome dessa famlia originou-se da patolo-
gia induzida por esses vrus em eqinos, a arteri-
te. Os arterivrus apresentam dimetro de 50 a 70
nm e possuem envelope. O genoma consiste de
uma molcula de RNA linear de sentido positivo,
Figura 2.15. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Coronaviridae (SARS CoV).
Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).
Figura 2.16. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Arteriviridae (PRRSV).
Fonte: Dr D. Robinson, South Dakota State University.
52 Captulo 2
com extenso entre 13 e 15 kb. De forma similar
ao que ocorre com os coronavrus, RNAs sub-
genmicos so produzidos durante a replicao
desses vrus no citoplasma das clulas infectadas.
A liberao dos vrus se d por exocitose aps
brotamento dentro de vesculas no citoplasma.
Alm do vrus da arterite eqina, est tambm
classicado nessa famlia o PRRSV. Ambas as do-
enas so consideradas ocialmente exticas no
Brasil. Entretanto, estudos sorolgicos demons-
traram a presena de anticorpos contra o EVAV
em eqinos de alguns estados brasileiros.
5.3 Vrus com genoma RNA de sentido
negativo no-segmentado
5.3.1 Famlia: Paramyxoviridae
Ordem: Mononegavirales
Subfamlia: Paramyxovirinae
Gneros:
Respirovirus: vrus da parainuenza bovi-
na tipo 3 (bPI-3V), vrus Sendai (camundongos);
Morbillivirus: vrus da cinomose canina
(CDV), vrus da peste bovina (Rinderpest), vrus
da peste dos pequenos ruminantes, morbilivrus
dos golnhos, morbilivrus de focas (PhDV), v-
rus do sarampo (humanos);
Rubulavirus: vrus da parainuenza canina
tipo 2 (cPIV-2), vrus da caxumba (humanos);
Henipavirus: vrus Hendra (HeV), vrus Ni-
pah (NiV);
Avulavirus: vrus da doena de Newcastle
(NDV), paramixovrus das aves 2 a 9 (APMV-2-
9).
Subfamlia: Pneumovirinae
Gneros:
Pneumovirus: vrus sincicial respiratrio
bovino (BRSV) e humano (hRSV);
Metapneumovirus: metapneumovrus das
aves AMPV (vrus da rinotraquete dos perus).
Os vrus dessa famlia so grandes, pleo-
mrcos, envelopados, com dimetro variando
de 150 a 350 nm. Possuem um genoma RNA li-
near de sentido negativo, cadeia simples, com
16 a 20 kb. No envelope, so encontradas as gli-
coprotenas hemaglutinina (HN) e de fuso (F).
Em alguns vrus, as glicoprotenas de superfcie
apresentam tambm uma atividade de neura-
minidase. A hemaglutinina a protena viral
responsvel pela ligao ao receptor celular, e a
protena F realiza a fuso do envelope viral com
a membrana da clula. A replicao e reunio dos
componentes virais ocorrem no citoplasma, e a
liberao feita por brotamento da membrana
plasmtica. Na partcula viral, tambm so en-
contradas algumas cpias da enzima polimerase,
que necessria para iniciar a replicao do v-
rus. Esses vrus esto associados principalmente
com doenas respiratrias e foram identicados
apenas em mamferos e aves. Alguns morbiliv-
rus podem causar infeco persistente. Entre os
vrus classicados nessa famlia e que causam
doena em animais incluem-se o CDV e o NDV
em aves, entre outros. O hRSV, o vrus do saram-
po e da caxumba so patgenos importantes de
humanos.
5.3.2 Famlia: Rhabdoviridae
Ordem: Monegavirales
Gneros:
Vesiculovirus: vrus da estomatite vesicular
(VSV), vrios outros vrus isolados de insetos, al-
guns que infectam mamferos;
Lyssavirus: vrus da raiva (RV), lissavrus
de morcegos Lagos;
Efemerovirus: vrus da febre efmera dos
bovinos (BEFV);
Figura 2.17. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Paramyxoviridae (vrus Sendai).
Fonte: Dr Samuel Baron (ICTVdB).
Classicao e nomenclatura dos vrus 53
Novirhabdovirus: vrus da necrose hemato-
poitica infecciosa (HNV);
Cytorhabdovirus: vrus da necrose amarela
da alface (LNYV);
Nucleorhabdovirus: vrus do tomate peque-
no amarelo (PYDV).
5.3.3 Famlia: Filoviridae
Ordem: Mononegavirales
Gneros:
Marburgvirus: vrus de Marburg;
Ebolavirus: vrus ebola.
Os vrus dessa famlia apresentam formas
lamentosas, pleomrcas, com dimetro de 80
nm e extenso que pode atingir at 14.000 nm.
Podem ser vistas formas de U, de 6 ou, ainda, for-
mas circulares. O genoma consiste de uma ni-
ca molcula de RNA linear, de cadeia simples e
sentido negativo, compondo um nucleocapsdeo
helicoidal. A replicao ocorre no citoplasma e o
vrus liberado por brotamento na membrana
plasmtica. Os vrus dessa famlia causam doen-
as hemorrgicas em humanos. Infeco natural
com vrus de Marburg e a cepa Reston do vrus
ebola tambm causa doena hemorrgica em ma-
cacos. Doena experimental pode ser induzida
atravs de inoculao em macacos, cobaias, ha-
msters e camundongos. A manipulao desses
vrus s permitida em laboratrios de nvel 4 de
biosegurana. O vrus ebola um dos vrus mais
letais j identicados para humanos. A histria
natural desses vrus ainda no bem conhecida.
Os vrions dessa famlia possuem uma mor-
fologia caracterstica, lembrando um projtil de
arma de fogo, com uma das extremidades arre-
dondadas e a outra romba. O dimetro dos v-
rions varia de 70 a 85 nm, e o comprimento pode
variar de 130 a 380 nm. O vrus envelopado e
apresenta peplmeros de 8 a 10 nm na superfcie;
o nucleocapsdeo helicoidal. O genoma consiste
de uma cadeia simples de RNA linear de sentido
negativo e extenso de 10 a 13 kb. A replicao
ocorre no citoplasma. O RNA genmico de sen-
tido negativo inicialmente transcrito em RNAs
subgenmicos, que so traduzidos nas protenas
necessrias formao de novas partculas virais.
A replicao do genoma ocorre a partir de um in-
termedirio positivo. O RV, que um dos vrus
zoonticos mais importantes, o principal vrus
dessa famlia. O VSV outro importante patge-
no animal, capaz de infectar vrias espcies. V-
rios rabdovrus de peixes e de plantas tambm
so agrupados nessa famlia.
Figura 2.19. Fotografia de microscopia eletrnica de um
vrionda famliaFiloviridae (vrus Ebola).
Fonte: Dr F. Murphy (ICTVdB).
Figura 2.18. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Rhabdoviridae.
Fonte: Dr. F. Murphy (ICTVdB).
54 Captulo 2
5.3.4 Famlia: Bornaviridae
Ordem: Mononegavirales
Gnero:
Bornavirus: vrus da doena de Borna
(BDV).
Os bornavrus so esfricos e envelopados,
com dimetro de 90 nm. Possuem um genoma
RNA de cadeia simples, sentido negativo e 8.9
kb. Apesar do genoma RNA, os vrus replicam no
ncleo, onde produzem corpsculos de incluso.
Esses vrus so agentes etiolgicos reconhecidos
de doena neurolgica em ovinos e eqinos, mas
j foram isolados tambm de gatos e bovinos.
Alm disso, dados sorolgicos e moleculares re-
centes tm associado os bornavrus com doenas
neuropsiquitricas humanas.
5.4 Vrus com genoma RNA de sentido
negativo segmentado
5.4.1 Famlia: Orthomyxoviridae
Gneros:
Inuenzavirus A (FluAV): vrus da inuen-
za A (humanos, aves, eqinos, sunos, recente-
mente ces e feldeos);
Inuenzavirus B (FluBV): vrus da inuen-
za B (humanos);
Inuenzavirus C (FluCV): vrus da inuen-
za C (humanos, sunos);
Thogotovirus: vrus Thogoto de carrapatos
(THOV), vrus Dhori (DHOV). Tem sido detecta-
da sorologia positiva em bovinos e camelos;
Isavirus: vrus da anemia infecciosa do sal-
mo (ISAV).
Os ortomixovrus possuem vrions envelo-
pados pleomrcos, com 80 a 120 nm de dime-
tro. No envelope, esto inseridas as glicoprote-
nas hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NE)
que se extendem externamente por 10 a 14 nm.
O genoma consiste de oito (vrus inuenza A),
sete (vrus inuenza B) ou seis (vrus inuenza
C) segmentos de RNA linear, sentido negativo de
cadeia simples, com extenso total de 10 a 13.6
kb. Cada segmento genmico empacotado em
um nucleocapsdeo helicoidal. A replicao do
genoma ocorre no ncleo das clulas hospedei-
ras. Posteriormente, o vrus liberado da clula
por brotamento na membrana plasmtica. Os v-
rus do gnero inuenza so os agentes etiolgi-
cos da gripe. O vrus inuenza A causa gripe em
humanos, aves, sunos, cavalos, martas, focas e
baleias. O vrus inuenza B patgeno somente
de humanos, e os de inuenza C, de humanos e
sunos. A natureza segmentada do genoma des-
ses vrus facilita a troca dos segmentos genmi-
cos entre vrus das diferentes espcies quando in-
fectam a mesma clula. Esse mecanismo permite,
eventualmente, o surgimento de vrus bastante
virulentos.
5.4.2 Famlia: Bunyaviridae
Gneros:
Orthobunyavirus: vrus Bunyamwera
(BOTV), vrus La Crosse (LACV), vrus Akabane
(AKAV);
Hantavirus: vrus Hantaan (hantavrus
HTNV) de roedores e humanos;
Nairovirus: vrus de Dugbe (DUGV), vrus
da febre hemorrgica Crimean Congo (CCHFV),
vrus da doena das ovelhas de Nairobi (NSDV);
Phlebovirus: vrus da febre do vale Rift
(RVFV);
Tospovirus: vrios vrus de plantas.
Figura 2.20. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Orthomyxoviridae (influenza A).
Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).
Classicao e nomenclatura dos vrus 55
rus de roedores e humanos (LASV), vrus Junin
(JUNV),vrus Machupo (MACV), vrus sabi
(SABV), vrios outros vrus identicados em roe-
dores e/ou causando doena em humanos.
So vrus envelopados e pleomrcos, cujo
dimetro varia de 100 a 300 nm. Possuem um ge-
noma RNA de cadeia simples, sentido negativo e
ambissense, com dois segmentos de extenso de 14
a 16 kb. Os vrus replicam no citoplasma e saem
da clula por brotao da membrana plasmtica.
Os arenavrus infectam diferentes espcies de ro-
edores nas Amricas, frica e Europa de forma
crnica e, na maioria das vezes, assintomtica.
Alguns desses vrus causam doenas severas em
humanos, algumas delas com aspectos hemorr-
gicos. Por isso esto entre os agentes mais impor-
tantes das febres hemorrgicas. A transmisso
ocorre geralmente atravs de aerossis prove-
nientes da urina contaminada desses animais.
Entre os arenavrus causadores de doena em
humanos est o vrus Lassa, agente etiolgico de
febre hemorrgica em algumas regies da fri-
ca. No continente americano, j foram descritos
o MACV na Bolvia, JUNV na Argentina, Guana-
rito na Venezuela e SABV no Brasil. Todos esses
vrus so agentes de doenas hemorrgicas.
Os buniavrus possuem vrions esfricos ou
pleomrcos, envelopados, com dimetro entre
80 e 120 nm. O genoma consiste de trs segmentos
de RNA de cadeia simples e sentido negativo, or-
ganizados em nucleocapsdeos helicoidais. Esses
vrus replicam no citoplasma. O ressortimento
possvel entre vrus do mesmo gnero devido
segmentao do genoma. Existe um grande n-
mero de vrus classicados nessa famlia, muitos
deles no infectam animais domsticos ou seres
humanos, apenas insetos. Os vrus patognicos
dessa famlia so agentes de doenas respira-
trias severas, hepatite, nefrite e encefalite em
animais e humanos. Esses vrus so geralmente
citopticos quando inoculados em clulas de ver-
tebrados, mas so no-citopticos em clulas dos
vetores invertebrados. A grande maioria dos v-
rus dessa famlia composta de arbovrus isola-
dos ou transmitidos por mosquitos, carrapatos e
outros artrpodos. Os vrus do gnero hantavrus
so excees, uma vez que so mantidos e trans-
mitidos por roedores. Alguns desses vrus (como
o RVFV e o CCMFV) s podem ser manipulados
em laboratrio de segurana nvel 4.
5.4.3 Famlia: Arenaviridae
Gnero:
Arenavirus: vrus da coriomeningite lin-
foctica dos camundongos (LCMV), Lassav-
Figura 2.21. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Bunyaviridae.
Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).
Figura 2.22. Fotografia de microscopia eletrnica de um
vrion da famlia Arenaviridae.
Fonte: Scientific American (ICTVdB).
56 Captulo 2
5.5 Vrus com genoma RNA de cadeia
dupla
5.5.1 Famlia: Reoviridae
vrus, e 12 segmentos e 27 kb para o Coltivrus. A
replicao e montagem dos vrions ocorrem no
citoplasma, de onde os vrions so liberados. O
ressortimento de segmentos de RNA pode ocor-
rer quando mais de um vrus do mesmo gnero
infectam a mesma clula. O BTV e os rotavrus
de vrias espcies de mamferos so exemplos
de patgenos importantes em veterinria. Os ro-
tavrus so importantes causadores de diarria,
sobretudo em crianas, em pases subdesenvol-
vidos.
5.5.2 Famlia: Birnaviridae
Gneros:
Aquabirnavrus: vrus da necrose pancreti-
ca infecciosa (IPNV);
Avibirnavrus: vrus da doena de Gumbo-
ro (IBDV);
Entomobirnavrus: vrus X da drosla.
Gneros:
Orthoreovirus: orthoreovrus de mamferos
(MRV), orthoreovrus de aves (ARV), orthoreov-
rus de babunos (BRV);
Orbivirus: vrus da lngua azul (BTV-1 a
24), vrus da encefalose eqina (EEV-1 a 7), vrus
da peste eqina (AHSV-1 a 9);
Rotavirus: rotavrus de todas as espcies (A
a G);
Coltivirus: vrus da febre do carrapato do
Colorado (CTFV);
Aquareovirus: aquareovrus A (ARV-A a
F);
Seadornavirus: virus kadipiro (KDV).
Existem ainda os gneros de vrus que in-
fectam plantas e insetos: Cypovirus, Idnoreovirus,
Fijivirus, Oryzavirus e Phytoreovirus.
Os reovrus possuem vrions complexos,
sem envelope, compostos por duas ou trs cama-
das de protenas arranjadas de forma concntri-
ca. O dimetro desses capsdeos pode variar de
60 a 85 nm e possui simetria icosadrica. O ge-
noma consiste de molculas de RNA de cadeia
dupla. O nmero e a extenso desses segmentos
variam entre os gneros; sendo de 10 segmentos
e 23 kb para o Reovrus, 10 segmentos e 18 kb para
o Orbivrus, 11 segmentos e 16-21 kb para o Rota-
Esses vrus possuem um genoma RNA line-
ar de cadeia dupla com dois segmentos, denomi-
nados A e B. A extenso total do genoma varia
entre 5.7 e 7 kb. Os vrions so formados por um
capsdeo icosadrico, sem envelope, e dimetro
de 60 nm. Os RNAs mensageiros so sintetizados
a partir dos dois segmentos do genoma RNA e
uma poliprotena produzida e, posteriormente,
clivada. Maiores detalhes da replicao no so
conhecidos. O patgeno mais conhecido dessa fa-
mlia o IBDV, que afeta galinhas.
Figura 2.23. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Reoviridae (rotavrus).
Fonte: Dra. Bchen-Osmond (ICTVdB)
Figura 2.24. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Birnaviridae.
Fonte: Dr. Stewart McNulty, (www.qub.ac.uk).
Classicao e nomenclatura dos vrus 57
5.6 Vrus com genoma RNA que
realizam transcrio reversa
5.6.1 Famlia: Retroviridae
Subfamlia: Orthoretrovirinae
Gneros:
Alpharetrovirus: vrus da leucose aviria
(ALV), vrus do sarcoma Rous (RSV);
Betaretrovirus: vrus do tumor mamrio do
camundongo (MMTV), retrovrus Jaagsiekte dos
ovinos (JSRV);
Gammaretrovirus: vrus da leucemia felina
(FeLV), vrus da leucemia murina (MuLV);
Deltaretrovirus: vrus da leucose bovina
(VLB), vrus da leucemia de clulas T humano
(HTLV-1 e 2);
Epsilonretrovirus: vrus do sarcoma dermal
de Walleye (WDSV);
Lentivirus: vrus da anemia infecciosa eqi-
na (EIAV), vrus da imunodecincia felina (FIV),
vrus da artrite-encefalite caprina (CAEV), vrus
Maedi-Visna (MMV), vrus da imunodecincia
dos smios (SIV), vrus da imunodecincia hu-
mana (HIV-1 e 2);
Subfamlia: Spumaretrovirinae
Spumavirus: vrus foamy do chimpanz.
ral complexa, incluindo uma etapa de transcrio
reversa. Os retrovrus so envelopados e pos-
suem um capsdeo icosadrico. O dimetro dos
vrions pode variar entre 80 e 100 nm. O genoma
diplide, consistindo de duas cpias de RNA
cadeia simples e sentido positivo. A replicao
dos retrovrus ocorre em parte no citoplasma e
em parte no ncleo. A replicao viral envolve
a sntese de uma cpia DNA do RNA genmico
(provrus), que integrada no cromossomo celu-
lar. A sntese de mRNAs, para a sntese protica
e do RNA genmico, ocorre pela transcrio do
provrus pela maquinaria celular de transcrio.
Pelo fato de integrar o seu provrus ao DNA da
clula, os retrovrus infectam o hospedeiro para
o resto da vida. Os vrus dessa famlia esto as-
sociados principalmente a doenas tumorais e
imunossupressivas. O ALV e o EIAV esto entre
os vrus de importncia veterinria classicados
nessa famlia. O vrus da AIDS (HIV) o retrov-
rus de maior repercusso em sade humana.
6 Bibliograa consultada
CONDIT, R.C. Principles of Virology. In: KNIPE, D.M.;
HOWLEY, P.M. (eds). Fields virology. 4.ed. Philadelphia, PA:
Lippincott Williams & Wilkins, 2001. Cap.2, p.19-51.
DE VILLIERS, E.M. et al. Classication of papillomaviruses.
Virology, v.324, p.17-27, 2004.
FAUQUET, C.M.; FARGETTE, D. International Committee on
Taxonomy of Viruses and the 3,142 unassigned species. Virology
Journal, v.2, p.64, 2005.
ICTVdB - The Universal Virus Database, version 4. BNCHEN-
OSMOND, C. (Ed). New York, USA: Columbia University.
KOCI, M.D.; SCHULTZ-CHERRY, S. Avian astroviruses. Avian
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MAYO, M.A. Names of viruses and virus species - an editorial
note. Archives of Virology, v.147, p.1463-1464, 2002.
MURPHY, F. A. Virus Taxonomy. In: FIELDS, B.N.; KNIPE,
D.M.; HOWLEY, P.M. (eds). Fields virology. 3.ed. Philadelphia,
PA: Lippincott Williams & Wilkins, 1996. Cap.2, p.15-57.
MURPHY, F.A. et al. Veterinary virology. 3.ed. San Diego, CA:
Academic Press, 1999. 629p.
PRINGLE, C.R. Virus nomenclature. Archives of Virology,
v.144, p.1463-1466, 1999.
PRINGLE, C.R. Virus taxonomy--1999. The universal system of
virus taxonomy, updated to include the new proposals ratied
Nessa famlia, esto classicados vrios
patgenos de interesse na Medicina Veterinria
em diversas espcies. Esses vrus apresentam,
como principal caracterstica, uma replicao vi-
Figura 2.25. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Retroviridae (HIV).
Fonte: University of Otaga, NZ (ICTVdB).
58 Captulo 2
by the International Committee on Taxonomy of Viruses during
1998. Archives of Virology, v.144, p.421-429, 1999.
PRINGLE, C.R. Virus taxonomy--San Diego. Archives of
Virology, v.143, p.1449-1459, 1998.
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VAN REGENMORTEL, M.H. Virologists, taxonomy and the
demands of logic. Archives of Virology, v.151, p.1251-1255,
2006.
VAN REGENMORTEL, M.H.; MAHY, B.M. Emerging issues
in virus taxonomy. Emerging Infectious Diseases, v.10, p.8-13,
2004.
1 Introduo
2 Mtodos de deteco e identicao de vrus
2.1 Deteco direta por microscopia eletrnica
2.2 Deteco de propriedades biolgicas dos vrus
2.2.1 Hemaglutinao
2.2.2 Hemadsoro
2.3 Deteco de antgenos
2.3.1 Imunouorescncia
2.3.2 Imunoperoxidase
2.3.3 Ensaio imunoenzimtico
2.3.4 Radioimunoensaio
2.3.5 Imunocromatograa
2.3.6 Aglutinao em ltex
2.3.7 Imunodifuso em gar
2.3.8 Imunoblots
2.4 Deteco/identicao de cidos nuclicos
2.4.1 Tcnicas de hibridizao (Southern, Northern blot)
2.4.2 Hibridizao in situ
2.4.3 Reao de polimerase em cadeia
2.4.4 Anlise de restrio
2.4.5 Eletroforese em gel de poliacrilamida
3 Multiplicao de vrus
3.1 Inoculao em animais susceptveis
3.2 Inoculao em ovos embrionados
3.3 Inoculao em cultivo celular
DETECO, IDENTIFICAO E QUANTIFICAO
DE VRUS
Mrio Celso S. Brum & Rudi Weiblen
3

61
61
61
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63
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68
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69
70
70
73
73
73
74
74
75
4 Quanticao de vrus
4.1 Diluio limitante
4.2 Ensaio de placa
4.3 Outros mtodos de quanticao
5 Identicao e caracterizao de um isolado
5.1 Sensibilidade a solventes orgnicos
5.2 Concentrao e puricao por ultracentrifugao
6 Biossegurana laboratorial
7 Bibliograa consultada
81
81
81
83
84
84
84
85
86
1 Introduo
Os grandes avanos no entendimento dos
meca nismos de replicao, transmisso e pato ge-
nia de vrios agentes virais somente foram poss-
veis aps o desenvolvimento de mtodos de pro-
pagao e deteco de vrus in vitro. No princpio
da Virologia, antes mesmo da classicao dos
vrus como agentes ltrveis, as alteraes pro-
duzidas nos animais durante as infeces virais
j eram observadas e descritas. No entanto, a fal-
ta de conhecimentos sobre o agente e de equipa-
mentos adequados fez com que a diferenciao
entre as infeces fosse realizada apenas entre
as enfermidades com sinais clnicos caractersti-
cos. Inicialmente, o nico mtodo de propagao
viral era a inoculao em animais susceptveis.
Embora essa forma de amplicao viral tenha
sido muito til nos primrdios da Virologia, esse
mtodo de amplicao restringiu o estudo dos
vrus devido diculdade de manuteno de
animais e tambm pela baixa reprodutibilidade
da maioria das enfermidades vricas.
A maior revoluo na Virologia ocorreu
aps o advento dos antibiticos, o que possibili-
tou o estabelecimento de cultivos celulares livres
de contaminantes bacterianos. O uso dos cultivos
celulares contribuiu de maneira decisiva para a
deteco e multiplicao dos vrus com diversas
nalidades, viabilizando o diagnstico, estudos
bioqumicos e moleculares e produo de vaci-
nas. Nesse sentido, a citopatologia, produzida
por alguns vrus em clulas de cultivo durante a
sua replicao, uma caracterstica amplamente
utilizada para demonstrar a presena do agente
em material clnico, permitindo a realizao do
diagnstico.
As tcnicas de deteco viral foram desenvol-
vidas inicialmente com ns diagnstico, ou seja,
para pesquisar vrus em amostras clnicas; porm
passaram a ser utilizadas para uma ampla gama
de nalidades em laboratrios de virologia.
A conrmao da presena do vrus em te-
cidos, secrees ou excrees pode ser realizada
pelo uso de tcnicas que demonstrem o agente, o
efeito da replicao em cultivo celular, produtos
intermedirios do processo replicativo (protenas,
corpsculos de incluso) ou o material gentico
(DNA ou RNA viral). Muitas vezes recorre-se
realizao de duas ou mais tcnicas para a conr-
mao denitiva da presena do agente. A esco-
lha de uma determinada tcnica de deteco est
diretamente relacionada com a forma de infeco
e com o tropismo do vrus por determinados te-
cidos e rgos. Por outro lado, a disponibilidade
de equipamentos, qualidade dos reagentes e de
pessoal capacitado para a execuo das tcnicas
tambm podem determinar a escolha da tcnica a
ser empregada. A simples deteco do agente vi-
ral em uma amostra clnica deve ser considerada
com cautela, pois a sua presena pode no ser um
indicativo seguro da etiologia da doena.
Os mtodos de deteco dos agentes virais
podem ser divididos em mtodos diretos e in-
diretos. Os mtodos diretos compreendem as
tcnicas em que o agente viral diretamente de-
tectado, ou seja, a partcula viral observada e
identicada de maneira precisa. A nica tcnica
que se enquadra nesse princpio a microscopia
eletrnica. Os mtodos de deteco indireta iden-
ticam as propriedades biolgicas ou produtos
resultantes da replicao viral, como protenas
ou cidos nuclicos. Neste captulo, sero apre-
sentadas e discutidas as tcnicas utilizadas para
a deteco de partculas vricas, protenas ou ma-
terial gentico viral. A aplicao dessas tcnicas,
com nalidades diagnsticas, ser abordada no
Captulo 11. Alm disso, sero abordadas as ma-
neiras de multiplicao, quanticao e caracteri-
zao viral, bem como alguns aspectos de segu-
rana laboratorial.
2 Mtodos de deteco e
identicao de vrus
2.1 Deteco direta por microscopia
eletrnica
A maioria dos agentes virais possui part-
culas vricas com caractersticas morfolgicas e
estruturais peculiares s famlias as quais perten-
cem. Com base nesse aspecto, o mtodo mais sim-
ples de deteco e identicao de vrus a visu-
alizao direta das partculas na amostra (Figura
3.1). Exemplos clssicos do uso da microscopia
eletrnica (ME) com ns diagnsticos incluem a
deteco de partculas vricas em crostas de le-
ses causadas pelo ectima contagioso dos ovinos
62 Captulo 3
e pseudo-varola bovina (parapoxvrus) ou, ain-
da, a deteco do parvovrus em fezes caninas e
rotavrus ou coronavrus em fezes de bezerros
com diarria.

Figura 3.1. Microscopia eletrnica. (A) Partculas de parapoxvrus emmaterial coletado de leses de ovinos suspeitos
de ectima contagioso(50.000x); (B) Partculas tpicas de rotavrus emfezes bovinas diarricas (260.000x); (C) Partculas
caractersticas de calicivrus em clulas de cultivo, inoculadas com secreo nasal de um felino com doena
respiratria (40.000x); (D) Partculas tpicas de herpesvrus no ncleo de clulas de cultivo, inoculadas com material
coletado de um touro com balanopostite (48.000x); (E) Partculas do vrus da parainfluenza bovina 3 (bPI-3),
observadas emsobrenadante de cultivo celular (260.000x); (F) Arranjo cristalino de partculas tpicas de picornavrus
no citoplasma de clulas de cultivo, inoculadas com material coletado de um bovino com doena gastrentrica e
respiratria (315.000x).
A B
C D
E F
Deteco, identicao e quanticao de vrus 63
A ME possuiu grande aplicabilidade na pes-
quisa e identicao de vrus que no replicam
com ecincia em cultivo celular. Essa tcnica
permitiu a identicao de vrios agentes entri-
cos de difcil cultivo, tais como: poxvrus, rotav-
rus, calicivrus, astrovrus, entre outros. Quando
as partculas vricas esto presentes em grande
quantidade, so facilmente observadas nas fezes
de animais com diarria ou em lquidos vesicula-
res de infeces cutneas.
A maior restrio da ME a sua baixa sensi-
bilidade. Amostras clnicas que contenham quan-
tidade inferior a 10
6
-10
7
partculas vricas por mi-
lilitro no so detectadas como positivas por essa
tcnica, gerando resultados falso-negativos. Essa
quantidade de vrus geralmente encontrada em
uidos vesiculares e fezes, o que no ocorre com
tanta freqncia em secrees respiratrias. A
sensibilidade, no entanto, no o nico limitante
dessa tcnica. O custo elevado do equipamento
e a exigncia de tcnicos altamente capacitados
para a operao e interpretao dos resultados
tambm representam limitaes. O perodo ne-
cessrio para a obteno dos resultados varia en-
tre 15 minutos, nos casos em que o material ob-
servado diretamente no microscpio, at alguns
dias quando h necessidade do processamento
prvio da amostra para aumentar a possibilidade
de deteco. Pode-se tambm realizar a ME em
clulas de cultivo previamente inoculadas com o
material suspeito.
A sensibilidade da ME pode ser aumentada
pelo uso de tcnicas que permitam a concentrao
e facilitem a visualizao das partculas vricas. A
claricao de amostras por centrifugao de bai-
xa rotao empregada para remover partculas
e substncias que possam interferir na tcnica.
A ultracentrifugao utilizada com o objetivo
de concentrar as partculas virais. A aglutinao
com soro hiperimune rotineiramente utilizada
e denomina-se imunoeletromicroscopia. Nesta
metodologia, utiliza-se um soro hiperimune es-
pecco contra o agente suspeito, cujos anticor-
pos iro se ligar e promover a concentrao das
partculas, facilitando a visualizao. Anticorpos
marcados com micropartculas de ouro (tcnica
de imunogold) tambm so utilizados para au-
mentar a sensibilidade do teste. Aps o processo
de claricao e concentrao, a amostra cora-
da negativamente, geralmente com tungstnio, e
examinada sob ME.
Alm do seu uso em diagnstico, a ME tem
sido utilizada para o estudo da morfologia e ul-
tra-estrutura de partculas vricas e tambm em
estudos de patogenia. As caractersticas obser-
vadas para a identicao e caracterizao do
agente so: o dimetro dos vrions, morfologia
do nucleocapsdeo, presena ou no de envelope,
presena de projees na superfcie das partcu-
las, organizao dos agregados de partculas e a
localizao celular dos vrions.
2.2 Deteco de propriedades biolgicas
dos vrus
2.2.1 Hemaglutinao
Vrios vrus possuem protenas de superf-
cie que se ligam a eritrcitos, provocando a sua
agregao e aglutinao, fenmeno denominado
hemaglutinao (HA) (Tabela 3.1). A propriedade
de aglutinar eritrcitos restrita a algumas fam-
lias de vrus (exemplos: ortomixovrus e para-
mixovrus) e, para cada um desses vrus, a HA
ocorre apenas com eritrcitos de determinadas
espcies animais. Nos vrus da inuenza, por
exemplo, a ligao entre a protena do envelope
viral (hemaglutinina ou HA) com o cido N-ace-
tilneuramnico da membrana dos eritrcitos de
galinha a responsvel pela aglutinao. Basean-
do-se nesse princpio, a tcnica de HA pode ser
utilizada para a deteco dos vrus que possuem
essa propriedade biolgica. O teste realizado
pela incubao de uma suspenso de eritrcitos
com o material suspeito (puro ou em diluies)
em microplacas com fundo em V ou U. Aps
o perodo de incubao, a presena do agente
hemaglutinante ser indicada pela formao de
uma rede difusa de eritrcitos no poo. Em amos-
tras negativas (ausncia do agente hemaglutinan-
te), as hemcias no sero aglutinadas, iro rolar
e se acumular no fundo da cavidade, formando
um boto bem denido (Figura 3.2). Esse teste
de fcil execuo, porm falha em detectar quan-
64 Captulo 3
tidades pequenas de vrus. Outra restrio que
a atividade hemaglutinante uma propriedade
restrita a algumas famlias de vrus, ou seja, a tc-
nica no possui aplicao universal.
A atividade hemaglutinante pode ser inibida
pela presena de anticorpos anti-hemaglutininas
especcos. Os anticorpos especcos iro ligar-se
protena hemaglutinante do vrus, impedindo a
ligao desta com os eritrcitos. Dessa maneira,
um mtodo para se detectar e quanticar anticor-
pos antivirais no soro de animais foi desenvolvi-
do e denomina-se inibio da hemaglutinao (HI).
A tcnica de HI pode ser utilizada tanto para
a deteco de anticorpos antivirais como para a
identicao de vrus hemaglutinantes. Aps a
deteco da atividade HA, a tcnica de HI rea-
lizada, utilizando-se um anti-soro especco con-
tra o vrus suspeito para conrmar o diagnstico.
A aplicao desse mtodo em diagnstico ser
abordada com detalhes no Captulo 11.
B
O
V
I
N
O
S
Adenovrus bovino (BAdV) Sobrenadante de cultivo celular Rato, bovino ou macacos rhesus
Vrus Fonte de vrus Eritrcitos (espcie)
Coronavrus bovino (BoCV)
Amostras fecais e sobrenadante
de cultivo celular
Camundongo, hamster e rato
Parainfluenza 3 bovino (bPI-3) Sobrenadante de cultivo celular Bovino e cobaia
E
Q

I
N
O
S
Encefalomielite eqina
(EEEV, WEEV)
Macerado de crebro de
camundongo
Ganso ou pinto de 1 dia
Influenza eqina
Sobrenadante de cultivo celular
ou lquido amnitico
Galinha e cobaia
Adenovrus eqino (EAdV) Sobrenadante de cultivo celular Rato ou macaco rhesus
Encefalite japonesa (JEV)
Suspenso de crebro de
camundongo
Ganso ou pinto de 1 dia
S
U

N
O
S
Peste suna africana (ASFV) Sobrenadante de cultivo celular Suno
Sobrenadante de cultivo celular
Galinha, rato, camundongo e
hamster
Encefalomielite
hemaglutinante dos sunos
Influenza suna (SIV) Fluido alantide Galinha
Parvovrus suno (PPV)
Extratos de tecidos fetais ou
sobrenadante de cultivo celular
Humano, macaco, camundongo,
cobaia, gato, galinha e rato
C
A
N
I
N
O
S
e
F
E
L
I
N
O
S
Adenovrus canino (CAdV) Sobrenadante de cultivo celular Rato, macaco rhesus, humano e aves
Parvovrus canino (CPV)
Amostras fecais ou
sobrenadante de cultivo
Suno ou macaco rhesus
Panleucopenia felina (FPLV)
Amostras fecais ou
sobrenadante de cultivo
Suno ou macaco rhesus
A
V
E
S
Influenza aviria (AIV) Fluido alantide Mamferos e aves
Doena de Newcastle (NDV) Fluido alantide Galinha
Bronquite infecciosa
aviria (IBV)
Fludo corioalantide Galinha
L
E
P
O
R
I
N
O
Doena hemorrgica dos
coelhos (RHDV)
Suspenso de tecidos e
sobrenadante de cultivo
Humano do tipo O
Tabela 3.1. Vrus com atividade hemaglutinante sobre eritrcitos animais
Deteco, identicao e quanticao de vrus 65
2.2.2 Hemadsoro
Durante o ciclo replicativo de alguns vrus
em cultivo celular, determinadas protenas virais
so expostas na superfcie das clulas infectadas.
Algumas dessas protenas possuem a capacidade
de se ligar a eritrcitos quando esses so adiciona-
dos ao meio de cultivo. Esse processo denomi-
nado hemadsoro (HAD), e restrito interao
de alguns vrus com eritrcitos de certas espcies
de mamferos e aves. A HAD um indicativo da
presena desses vrus no material suspeito. Essa
tcnica de simples execuo, sendo empregada
para a deteco de ortomixovrus, paramixovrus
e asfarvrus.
2.3 Deteco de antgenos virais
2.3.1 Imunouorescncia
A imunouorescncia (IFA) uma tcnica
de deteco de antgenos e baseia-se na reao de
anticorpos especcos com o antgeno presente
no material suspeito. Os anticorpos so conjuga-
dos com uma substncia que emite luminosidade
uorescente (uorescena) quando exposta luz
ultravioleta (UV). A presena do antgeno no ma-
terial revelada pela emisso de luminosidade
uorescente. Essa metodologia pode ser aplicada
em monocamada de clulas, em esfregaos celu-
lares, em tecidos frescos, congelados ou includos
em parana. Geralmente, o material deve ser
previamente xado em etanol, metanol ou ace-
tona. Aps a xao, incuba-se o material com o
anticorpo especco marcado com o uorocromo
(FITC isotiocianato de uorescena ou Texas
Red). Posteriormente, sucessivas lavagens so re-
alizadas para a remoo do anticorpo no-ligado.
O material , ento, examinado ao microscpio
de luz UV. A colorao verde-ma ou vermelha
(para anticorpos marcados com FITC e Texas Red,
respectivamente), visualizada contra um fundo
escuro, indica a presena de antgenos virais na
amostra. A emisso de uorescncia resulta da
excitao do uorocromo conjugado ao anticor-
po quando exposto luz UV. O resultado nal
a observao de uma regio ou de toda a clula
corada, pois as protenas virais esto dispersas no
seu interior (Figura 3.3).
Existem basicamente duas variantes da tc-
nica: a imunouorescncia direta (IFD) e a indi-
reta (IFI). Na IFD, o anticorpo primrio (mono-
clonal ou policlonal) especco para o agente
marcado com o uorocromo e adicionado direta-
mente sobre a amostra. No caso da IFI, a tcnica
realizada em duas etapas. A primeira incuba-
o realizada com o anticorpo primrio espe-
cco para os antgenos virais e, aps a remoo
dos anticorpos que no se ligaram aos antgenos,
por sucessivas lavagens, adiciona-se o anticorpo
secundrio, marcado com o uorocromo. O anti-
Figura 3.2. Teste de hemaglutinao (HA) para a
pesquisa de vrus. Aamostra suspeita de conter o vrus
misturada com uma suspenso de eritrcitos e incubada
a 37 C por 1 hora. A presena do vrus indicada
pela aglutinao dos eritrcitos e formao de uma rede
fina difusa no fundo da cavidade; Na ausncia do
vrus, os eritrcitos rolam para o fundo da cavidade,
formandoumbotodecontornobemdefinido.
(A).
(B).
+
Incubao
1 hora
Amostra
suspeita
Eritrcitos
Amostra
negativa
Amostra
positiva
A B
66 Captulo 3
corpo secundrio (especco para a espcie ani-
mal na qual foi produzido o anticorpo primrio)
reconhece e se liga ao anticorpo primrio.
A IFA uma tcnica simples e se constitui
em uma das tcnicas mais utilizadas em Viro-
logia, possuindo diversas aplicaes, incluindo
o diagnstico de infeces vricas. A aplicao
dessa tcnica em diagnstico ser abordada no
Captulo 11. Como desvantagens, incluem-se a
necessidade de um microscpio de luz UV e a
possibilidade de alguns tecidos ou clulas emiti-
rem uorescncia natural, o que pode dicultar a
interpretao do resultado.
ou peroxidase) ou a fosfatase alcalina (AP). O
termo IPX tem sido utilizado quase como sin-
nimo, embora deva ser ressaltado que essa no
a nica enzima utilizada na tcnica. Essa tcnica
pode ser aplicada em monocamadas celulares,
esfregaos ou diretamente em tecidos, sendo de-
nominada de imunocitoqumica (ICQ) ou imu-
noistoqumica (IHC), respectivamente. A meto-
dologia semelhante IFA, existindo tambm a
IPX direta e indireta. Na IPX direta, o material
xado incubado com o anticorpo antiviral mar-
cado com a enzima, seguido da lavagem e adio
do substrato. A presena do antgeno no material
revelada pela ao da enzima no substrato. Uti-
lizam-se substratos cromognicos (aminoetilcar-
bazol AEC; diaminobenzidina DAB; ou 4-clo-
ronaftol) que produzem uma colorao marrom
ou marrom-carmim pela ao da enzima e for-
mam um precipitado na clula positiva (Figura
3.4). A IPX indireta utiliza o anticorpo primrio
especco para o antgeno, e o anticorpo secun-
drio marcado com a enzima. Essa variao da
Antgenos virais
Anticorpo
antivrus-FITC
Anticorpo
anti-IgG-FITC
Anticorpo antivrus Clula infectada
Imunofluorescncia
direta
Imunofluorescncia
indireta
A B
Figura 3.3. Ilustrao demonstrativa da tcnica de
imunofluorescncia para a deteco de antgenos virais
em clulas. (A) Imunofluorescncia direta (IFD); (B)
Imunofluorescncia indireta (IFI).
2.3.2 Imunoperoxidase
A tcnica de imunoperoxidase (IPX) baseia-
se no mesmo princpio da IFA, com a diferena
que os anticorpos so marcados com uma enzi-
ma, que pode ser a horseradish peroxidase (HRPO
Antgenos virais
Anticorpo
antivrus HRPO
Anticorpo
anti-IgG-HRPO
Anticorpo antivrus Clula infectada
Imunoperoxidase
direta
Imunoperoxidase
indireta
A B
Figura 3.4. Ilustrao demonstrativa da tcnica de
imunoperoxidase (IPX) para a deteco de antgenos
virais em clulas. (A). Imunoperoxidase direta; (B)
Imunoperoxidase indireta.
Substrato
Deteco, identicao e quanticao de vrus 67
tcnica apresenta maior sensibilidade devido
amplicao do sinal. A tcnica de IPX possui
as mesmas aplicaes da IFA, porm apresenta
a vantagem de no necessitar do microscpio de
luz UV, j que as reaes podem ser visualizadas
sob microscopia tica comum.
2.3.3 Ensaio imunoenzimtico
O teste imunoenzimtico (ELISA) pode ser
utilizado para a deteco de antgenos virais e
tambm de anticorpos. uma tcnica que apre-
senta vantagens, tais como: a boa sensibilidade,
especicidade, baixo custo, repetibilidade e ver-
satilidade. Em alguns casos, o uso da tcnica per-
mite a deteco de at 1 ng (nanograma) de ant-
geno por grama de tecido coletado diretamente
do animal. Os testes podem ser executados em
amostras individuais, como recurso diagnstico
em clnicas ou consultrios; ou em grande esca-
la, como realizado em laboratrios totalmente
automatizados. A tcnica permite uma variao
de formas e aplicaes, dependendo do objetivo e
da disponibilidade de reagentes. Basicamente, os
testes de ELISA podem ser classicados em dire-
tos, indiretos ou de competio.
A tcnica baseia-se na imobilizao da re-
ao antgeno-anticorpo em um suporte slido
(placas de poliestireno), seguida de uma reao
colorimtrica. Por se tratar de uma tcnica que
apresenta inmeras variaes, neste captulo ser
apresentado apenas o fundamento geral da tcni-
ca. Para um detalhamento maior, recomenda-se a
literatura especca.
Um exemplo simplicado para facilitar o
entendimento da tcnica ser brevemente descri-
to. No ELISA de captura direto (Figura 3.5) para
deteco de antgenos virais, placas de 96 cavi-
dades so recobertas com anticorpos especcos
para um determinado agente. A amostra suspei-
ta da presena viral (sangue, secrees ou leite)
adicionada e incubada por um determinado tem-
po. Nesse perodo, ocorre a captura do antgeno
(amostras positivas) pelo anticorpo xado na pla-
ca. Aps essa etapa, so realizadas lavagens para
a remoo de substncias inespeccas. A seguir
adiciona-se um segundo anticorpo, especco
para o vrus, conjugado com a enzima (HRPO ou
AP). Novamente os anticorpos que no se liga-
ram so removidos por lavagens. A conrmao
da presena do antgeno viral evidenciada pela
adio de substrato e desenvolvimento da colo-
rao especca nas amostras negativas. A leitura
realizada pela inspeo visual ou pelo uso de
fotocolormetro.
Incubao da
amostra suspeita
Lavagem
Anticorpos
antivirais
Antgenos na
amostra
suspeita
Anticorpo
antivrus
Lavagem
Anticorpos
marcados
Adio do
substrato
Positivo Negativo
Mudana
de cor
A B
Figura 3.5. Ilustrao demonstrativa do ensaio
imunoenzimtico (ELISA) para a deteco de antgenos.
(A) Amostra positiva; (B) Amostra negativa.
2.3.4 Radioimunoensaio
O mtodo de radioimunoensaio (RIA) de
deteco de antgenos foi muito utilizado antes
do surgimento dos testes de ELISA. A diferena
bsica entre os dois mtodos reside no tipo de
marcao utilizada. Na RIA, utiliza-se um is-
topo radioativo em vez de enzima. O mtodo
muito sensvel e pode ser automatizado, porm
os equipamentos requeridos so caros. A prin-
cipal restrio do teste refere-se ao uso de subs-
tncias radioativas e ao descarte dos reagentes.
Dessa forma, a tcnica encontra-se em desuso
progressivo.
68 Captulo 3
2.3.5 Imunocromatograa
A imunocromatograa uma tcnica de
visualizao simples, geralmente realizada em
dispositivos plsticos, podendo ser executada em
clnicas e ambulatrios. A prova baseada na rea-
o antgeno-anticorpo, em que a amostra suspei-
ta (vrus ou antgenos virais) passada atravs de
um ltro e, ento, impregnada em uma membra-
na, onde reagir com o anticorpo especco pre-
viamente imobilizado. A presena do antgeno
revelada pelo aparecimento de focos ou bandas
coloridas, pois os reagentes so conjugados com
substncias cromgenas. O resultado depende
essencialmente da qualidade dos reagentes. Um
dos problemas do teste o seu custo elevado. V-
rios testes diagnsticos so baseados nesse prin-
cpio (Captulo 11).
2.3.6 Aglutinao em ltex
O ensaio de aglutinao em ltex provavel-
mente seja o mtodo mais simples de deteco de
antgenos virais. O princpio da tcnica baseia-se
na mistura do material suspeito com anticorpos
previamente adsorvidos a partculas de ltex. A
presena do antgeno resultar na sua ligao
aos anticorpos e na aglutinao das partculas.
A leitura da reao visual e pode ser realizada
imediatamente aps a sua execuo. Esta tcnica
tem aceitao por pequenos laboratrios e entre
tcnicos de campo. As suas principais restries
referem-se baixa sensibilidade e especicidade.
Por isso, resultados falso-negativos so freqen-
tes, a no ser que grandes quantidades de ant-
genos estejam presentes no material suspeito. A
resoluo dos problemas de sensibilidade e espe-
cicidade pode aumentar a sua aplicabilidade.
2.3.7 Imunodifuso em gar

O teste de IDGA foi desenvolvido para a
deteco de antgenos, porm tem sido mais uti-
lizado para a deteco de anticorpos. A prova
baseada na precipitao de complexos antgeno-
anticorpos em gel de gar. O ensaio realizado
pela adio da amostra suspeita e do soro con-
trole em orifcios em posies opostas em uma
matriz de gar. As amostras difundem-se radial-
mente pelo gel e, ao se encontrarem, proporcio-
nam a reao antgeno-anticorpo, seguida da in-
solubilizao e precipitao. A precipitao deste
complexo forma linhas opacas no gel (linhas de
precipitao), que podem ser visualizadas a olho
nu, com o auxlio de uma fonte de luz (ver Figura
11.9, no Captulo 11). A IDGA uma tcnica bas-
tante difundida para a deteco de anticorpos,
porm sem muita aplicabilidade para a deteco
de antgenos ou partculas vricas.
2.3.8 Imunoblots
O princpio dos imunoblots semelhante ao
da IPX. Os antgenos virais so detectados pelo
uso de anticorpos marcados com enzimas, que
agem no substrato, provocando mudana de cor.
A diferena fundamental entre a IPX e os imuno-
blots que o material suspeito deve ser previa-
mente solubilizado e imobilizado em um suporte
slido, geralmente membranas de nitrocelulose
ou nylon. A membrana , ento, incubada com
o anticorpo antiviral no-marcado (anticorpo pri-
mrio), seguido de lavagem e incubao com um
anticorpo antiespcie do anticorpo primrio (an-
ticorpo secundrio) conjugado a uma enzima. A
presena do antgeno pesquisado revelada pela
adio do substrato, que muda de colorao pela
ao da enzima. Substratos que emitem lumino-
sidade capturvel em lmes de raios X tambm
tm sido utilizados e aumentam a sensibilidade
da tcnica (Figura 3.6).
Existem duas variaes principais dos imu-
noblots: os dot/slot blots e o Western blot (WB). No
dot/slot blot, o homogenado de protenas dire-
tamente imobilizado na membrana, em pontos
(dots) ou fendas (slots), seguida pela deteco com
os anticorpos. Essa variao da tcnica mais
simples e rpida, porm no fornece informa-
es acerca da massa da protena detectada. No
WB, as protenas solubilizadas so separadas por
eletroforese em um gel de poliacrilamida (SDS-
PAGE), transferidas para a membrana e, ento,
submetidas deteco com os anticorpos marca-
dos. Essa tcnica permite a deteco da protena e
tambm a determinao de sua massa molecular,
pelo padro de migrao no gel.
Deteco, identicao e quanticao de vrus 69
2.4 Deteco/identicao de cidos
nuclicos
As seqncias nicas de nucleotdeos do ge-
noma dos vrus, associadas com tcnicas de am-
plicao e hibridizao de cidos nuclicos, pro-
porcionaram o desenvolvimento de metodologias
para a deteco e identicao de agentes virais
em uma variedade de amostras. As tcnicas de
hibridizao e a reao em cadeia da polimerase
(PCR) tornaram-se muito teis para a deteco e
identicao de agentes virais e impulsionaram
os estudos da biologia molecular desses agentes.
A disponibilidade das seqncias genmicas dos
vrus em bancos de dados possibilitou a iden-
ticao de regies conservadas, viabilizando
a sntese de primers e de sondas, utilizadas nas
tcnicas de PCR e hibridizao, respectivamente.
A interpretao dos resultados dessas tcnicas,
principalmente quando utilizadas com ns diag-
nsticos, deve ser realizada com cautela. O resul-
tado positivo pode no signicar necessariamente
a associao do agente suspeito com a doena em
questo. O material gentico de agentes que pro-
duzem infeces latentes, como os herpesvrus,
pode ser detectado sem que os agentes estejam,
necessariamente, associados com a enfermidade
em questo.
A deteco de cidos nuclicos possui apli-
cao especial para os vrus de difcil adapta-
o ao cultivo celular; casos em que o material
suspeito contenha pequenas quantidades do
agente, que esteja com viabilidade comprometi-
da por problemas de conservao e em estudos
retrospectivos. Essas tcnicas tambm possuem
aplicaes importantes na deteco de infeces
latentes, quando o nico indicador da infeco
a presena do genoma do agente.
2.4.1 Tcnicas de hibridizao
(Southern/Northern blot)
A deteco de cidos nuclicos virais pelo
uso de sondas marcadas com istopos radioati-
vos ou com enzimas tem sido muito utilizada em
Virologia, tanto em diagnstico como em pesqui-
sa. A tcnica baseia-se na complementaridade
das molculas de DNA ou RNA. Inicialmente,
escolhe-se a regio-alvo do genoma a ser detecta-
do, que deve ser um segmento conservado entre
isolados de campo. A sonda deve ser sintetizada
com base na seqncia de nucleotdeos da re-
gio-alvo e deve ser exatamente complementar
a esta. Essa sonda pode ser um oligonucleotdeo
sinttico, um segmento de DNA inserido em um
plasmdeo ou um produto de PCR. A sonda ,
ento, conjugada com um istopo radioativo ou
com uma enzima, para possibilitar a sua detec-
o. O material suspeito imobilizado em uma
membrana, seguido pela incubao com a sonda
marcada e de lavagens para remover as sondas
no-ligadas. Na presena do cido nuclico do
vrus suspeito, a sonda ir hibridizar com a se-
qncia-alvo. A presena da sonda revela-se pela
exposio da membrana a um lme de raios X ou
pela adio de substrato (Figura 3.7).
Amostra positiva
Amostra negativa
Removidos
pelas lavagens
Membrana
Antgeno viral
Anticorpo anti-IgG-HRPO
Anticorpo antivrus (IgG)
Substrato
Membrana
Figura 3.6. Western blot para a deteco de protenas
virais. Os antgenos so separados por eletroforese em
gel de poliacrilamida, transferidos e imobilizados em
uma membrana de nitrocelulose. A membrana
incubada com o anticorpo primrio (anti-antgeno) e
subseqentemente com o anticorpo secundrio
conjugado com a enzima peroxidase. A presena do
antgeno revelada pela ao da enzima no substrato
que resulta na marcao do filme de raios X no local
correspondente migraodaprotena-alvo.
- + -
70 Captulo 3
A tcnica de hibridizao possuiu variaes
de acordo com o cido nuclico a ser detectado
e com a forma como o material imobilizado
na membrana. Quando o cido nuclico (DNA,
RNA) imobilizado diretamente na membrana, a
tcnica denominada dot ou slot blot. A presena
do cido nuclico ser demonstrada pelo apareci-
mento de uma marca ou borro no local onde foi
aplicado o material. Porm, se o material for pre-
viamente submetido eletroforese, para a sepa-
rao das molculas de cido nuclico de acordo
com o tamanho, e ento transferido para a mem-
brana, a tcnica denomina-se Southern blot (para
DNA) ou Northern blot (para RNA). A reao po-
sitiva aparece na forma de bandas marcadas na
membrana, correspondentes migrao do cido
nuclico durante a eletroforese. Em razo da ne-
cessidade da eletroforese e transferncia para a
membrana, as tcnicas de Southern e Northern blot
so mais trabalhosas e demoradas, porm os re-
sultados so mais informativos.
As tcnicas de hibridizao possuem boa
sensibilidade e especicidade, e, quando imple-
mentadas na rotina do laboratrio, permitem a
obteno dos resultados em poucos dias. Outra
vantagem que podem ser aplicadas a qualquer
agente infeccioso, necessitando-se apenas de uma
sonda especca. As restries dessas tcnicas re-
ferem-se necessidade de pessoal especializado
e disponibilidade de reagentes.
2.4.2 Hibridizao in situ
A hibridizao in situ (ISH) detecta a presen-
a do material gentico do agente (DNA ou RNA)
diretamente em cortes histolgicos de tecidos.
Essa metodologia tem sido amplamente utilizada
para a localizao espacial e temporal da presen-
a e expresso de determinados genes. Tambm
utilizada na identicao de agentes causadores
de tumores. O princpio da tcnica o mesmo da
anterior, porm o cido nuclico detectado di-
retamente nos cortes de tecido. A reao revela-
da pelo uso de sondas marcadas com substncias
radioativas ou com protenas que so, posterior-
mente, detectadas com o auxlio de anticorpos.
As reaes positivas podem ser visualizadas pela
exposio a lmes radiogrcos lquidos ou com
uso de substncias cromgenas, permitindo a lo-
calizao e identicao das clulas infectadas.
Devido ao fato de ser trabalhosa e demorada, a
ISH no utilizada na rotina laboratorial, sendo
empregada em casos especcos, principalmente
em estudos de patogenia.
2.4.3 Reao da polimerase em cadeia
A reao da polimerase em cadeia (PCR)
uma tcnica altamente especca e sensvel, que
consiste na sntese in vitro de uma grande quan-
tidade de cpias de um segmento de DNA exis-
tente na amostra. Ou seja, consiste em amplicar
o nmero de molculas a partir de uma molcu-
la-alvo original, denominada template ou molde.
Essa amplicao pode ser realizada a partir de
uma quantidade mnima do cido nuclico-alvo;
uma PCR bem padronizada, teoricamente, ca-
paz de detectar e amplicar at uma nica cpia
do molde existente na amostra.
A regio-alvo a ser amplicada delimitada
por primers, que so oligonucleotdeos sintticos
de aproximadamente 20 nucleotdeos. Esses pri-
DNA/RNA viral
Sonda marcada
Radioatividade
Membrana Membrana
Amostra positiva Amostra negativa
C
C
A
T
G
A
C
A
C
C
A
T
G
A
C
A
Removidas
pelas lavagens
AT C G G TAC T G T TAT T
C CAT GACA
' ' ' ' ' ' ' ' ' '
Filme de raios X
Figura 3.7. Tcnica de hibridizao de cidos nuclicos (dot blot). Omaterial gentico do vrus extrado de tecidos e
imobilizado em reas de uma membrana. Posteriormente a membrana incubada com uma sonda com seqncia de
nucleotdeos complementar ao DNA do vrus, marcada com uma substncia radioativa. A presena do DNA viral
revelada pelamarcaodofilme deraios Xpelaemissoradioativa dasonda.
Deteco, identicao e quanticao de vrus 71
mers hibridizam com suas regies complemen-
tares, que se localizam nas cadeias opostas do
DNA, nas regies anqueadoras da seqncia-
alvo. Os primers so sintetizados de acordo com a
seqncia a ser amplicada, e a sua especicidade
depende do seu grau de conservao e comple-
mentaridade com a seqncia-alvo. A reao de
PCR envolve a realizao de vrios ciclos (entre
30 e 40) de desnaturao (separao da ta du-
pla), hibridizao dos primers e polimerizao da
cadeia de DNA a partir dos primers, pela enzima
DNA polimerase. A cada ciclo o nmero de mo-
lculas correspondentes seqncia-alvo duplica
e, no nal da reao, acumulam-se milhes de c-
pias idnticas correspondentes seqncia-alvo
inicial. Essas molculas, denominadas generica-
mente de produtos de PCR (ou amplicons), po-
dem, ento, ser detectadas visualmente em gis
de agarose, corados com brometo de etdio, sob
luz UV (Figura 3.8). Os produtos de PCR podem
tambm ter a sua identidade conrmada por hi-
bridizao com sondas especcas. Essa tcnica
tem tido inmeros usos nos diversos campos da
Biologia e Medicina.
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Denaturao (95C)
Anelamento
dos primers
Polimerizao
Reduz a
temperatura
Eleva a
temperatura
Eleva a
temperatura
'''''''''
Primer 1
'''''''''
Primer 2
Molcula de DNA
Seqncia-alvo
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
1 ciclo
30 ciclos
50-60C 72C
270pb
250pb
O nmero de cpias
duplica a cada ciclo
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Gel de agarose
M 1 2 3 4 5
Figura 3.8. Ilustrao demonstrativa da tcnica de reao emcadeia da polimerase (PCR). Apartir da molcula molde
original (genoma viral), um segmento especfico amplificado por sucessivas etapas de sntese de DNA. O produto
da amplificao pode ser visualizado sob luz UVemumgel de agarose corado combrometo de etdio, aps migrao
por eletroforese. Otamanho dos produtos pode ser comparado comummarcador molecular de massa conhecida. (M)
marcador molecular, (1) controle negativo, (2) controle positivo, (3, 4 e 5) amostras teste.
72 Captulo 3
A grande difuso da PCR somente foi poss-
vel aps a identicao de uma enzima polimera-
se de DNA resistente ao calor (Taq Thermophilis
aquatics), o que levou simplicao da tcnica
associado com o desenvolvimento de equipa-
mentos cada vez mais acessveis. Essas novas tec-
nologias proporcionaram um domnio maior da
tcnica e o desenvolvimento de variaes, como
a nested-PCR, multiplex-PCR, RT-PCR e real-time
PCR.
A nested-PCR realizada em duas etapas. Na
primeira etapa, um determinado segmento am-
plicado pelo mtodo tradicional. Uma segunda
etapa , ento, realizada, utilizando-se o produto
da primeira reao como molde e um outro con-
junto de primers, complementares s seqncias
localizadas internamente no produto da primeira
reao. Com isso, uma seqncia interna do pri-
meiro produto reamplicada (Figura 3.9).
Em relao PCR tradicional, a nested-PCR
possui as vantagens de maior sensibilidade (duas
etapas de amplicao) e especicidade. Uma va-
riao dessa tcnica o semi-nested PCR, em que,
na segunda reao, utiliza-se um primer interno
e em conjunto com um dos primers da primeira
reao.
O mtodo da multiplex-PCR baseia-se na uti-
lizao de dois ou mais pares de primers na mes-
ma reao. Cada conjunto de primer especco
para uma regio do agente ou de diferentes agen-
tes. Devido a sua versatilidade, essa tcnica uti-
lizada para a busca de variantes do mesmo vrus
ou no diagnstico de enfermidades que podem
ser causadas por diferentes agentes. Um exemplo
o diagnstico de aborto em bovinos, quando
realizada uma reao com diferentes pares de pri-
mers, cada conjunto sendo especco para um dos
agentes suspeitos.
A tcnica de RT-PCR (reverse transcriptase
PCR) consiste na amplicao de segmentos de
RNA. Atravs da transcrio reversa, realizada
pela ao da enzima transcriptase reversa, uma
cpia de DNA complementar (cDNA) sinteti-
zada a partir da RNA viral (genoma ou produto
intermedirio do processo de replicao). Essa
nova molcula sintetizada ser usada como tem-
plate (molde) para a reao de PCR convencional.
O desenvolvimento desta tcnica proporcionou
um grande avano no estudo e diagnstico dos
vrus RNA.
O PCR em tempo real (real time PCR) uma
variao do PCR, com a capacidade de se detec-
tar e quanticar a amplicao do produto me-
dida que vai sendo sintetizado. Essa tcnica uti-
liza, alm dos primers, uma sonda marcada com
um uorocromo. A sonda complementar a uma
regio interna do produto e marcada com uma
substncia uorognica. A cada ciclo de sntese,
o uorocromo liberado da sonda e essa libera-
o captada e medida na forma de intensidade
luminosa. Esta tcnica tem grande aplicabilidade
quando a quanticao do cido nuclico pre-
sente na amostra necessria. Tambm possui
aplicabilidade em diagnstico de viroses de im-
portncia sanitria estratgica (exemplos: febre
aftosa e peste suna clssica), pois permite a ob-
teno dos resultados em poucas horas.
Figura 3.9. A reao de PCR-nested realizada em duas
etapas. Na primeira etapa, utilizado um par de primers
externos (1 e 2), que permitem a amplificao de um
segmentodogenoma viral (seqncia-alvo1). Asegunda
etapa utiliza o produto da primeira reao como molde.
Esta utiliza um par de primers internos (3 e 4), que
permitem a amplificao de um segmento interno
seqncia inicial (seqncia-alvo 2). O PCR- nested
utilizado para aumentar a sensibilidade e especificidade
daamplificao.
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Produtos da
primeira
reao
Produtos da
segunda
reao
Seqncia-alvo 2
Primer 1
Primer 2
Primer 3 Primer 4
Seqncia-alvo 1
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Primeira
reao
Segunda
reao
30 ciclos
30 ciclos
DNA molde
DNA molde
Deteco, identicao e quanticao de vrus 73
2.4.5 Anlise de restrio
Diferentes isolados de vrus podem ser
identicados e distinguidos entre si pela anlise
dos fragmentos gerados pela clivagem de seus
genomas por enzimas de restrio (endonucle-
ases, Figura 3.10). Essas enzimas clivam o DNA
em seqncias especcas, compostas por quatro
a oito bases; a alterao em uma dessas bases al-
tera o stio e resulta em falha de clivagem. Assim,
o genoma de um determinado vrus DNA cli-
vado com um conjunto de enzimas, produzindo
um conjunto de fragmentos de determinados ta-
manhos. Outros isolados do vrus que possuam
diferenas em quaisquer dos stios de clivagem
iro gerar padres de clivagem distintos, poden-
do-se, assim, fazer a diferenciao entre isola-
dos. A anlise por restrio enzimtica (REA) foi
muito utilizada na classicao e caracterizao
de isolados de campo. Atualmente, o advento e
difuso do seqenciamento de DNA substituiu,
com algumas vantagens, essa tcnica, que se en-
contra restrita a alguns vrus ou em desuso.
2.4.4 Eletroforese em gel de
poliacrilamida
A tcnica de eletroforese em gel de poliacri-
lamida (SDS-PAGE), alm de ser usada para se-
parao de protenas nos passos iniciais do WB,
tambm utilizada para a deteco do genoma
e em estudos epidemiolgicos de rotavrus, cujo
genoma composto por vrios segmentos de
RNA. Uma caracterstica dos rotavrus a pre-
sena de sorogrupos (ver Captulo 30), que so
correlacionados com diferenas na extenso des-
ses segmentos. Essas diferenas iro produzir um
padro de migrao na eletroforese, e isso ser
utilizado para a identicao do agente e classi-
cao em sorogrupos. A metodologia consiste
na extrao do RNA a partir de fezes, separa-
o dos fragmentos por SDS-PAGE e colorao
do gel com nitrato de prata. Aps a realizao
desse procedimento, as bandas correspondentes
aos segmentos genmicos so analisadas, e os
padres de migrao dos segmentos so com-
parados. O SDS-PAGE possui boa sensibilidade
e especicidade quando comparado com outras
tcnicas de deteco dos rotavrus.
3 Multiplicao de vrus
A obteno de vrus em grandes quantida-
des essencial para diversos procedimentos viro-
lgicos. Aps o seu isolamento, o vrus deve ser
identicado e caracterizado. Para isso, deve ser
amplicado a partir da amostra original. Quan-
tidades considerveis de vrus so necessrias
Genoma BoHV - 1 135.301bp Genoma BoHV - 5 138.390bp
Stios de clivagem da enzima BamHI
9 locais de clivagem 16 locais de clivagem
Enzima de restrio BamHI =
Digesto do genoma em fragmentos
Eletroforese em agarose
B
o
H
V
-
1
B
o
H
V
-
5
DNA viral genmico
Figura 3.10. Ilustrao demonstrativa da anlise de
restrio do genoma do herpesvrus bovino. A enzima
BamHI reconhece e cliva o genoma do herpesvrus
bovino tipo 1 (BoHV-1) em nove stios (A) e o genoma
do BoHV-5 em16 locais (B). Os produtos da digesto so
separados por eletroforese em agarose e visualizados
sob luz UV. Os diferentes padres de clivagemresultam
em fragmentos de tamanho diferentes, cuja anlise
comparativa permite a identificao dos respectivos
genomas. No exemplo acima, os locais de clivagem e o
tamanhodos fragmentos someramente ilustrativos.
74 Captulo 3
para a realizao de testes sorolgicos (soro-neu-
tralizao SN, HI), produo de antgenos para
a imunizao de animais (obteno de anti-soros
ou anticorpos monoclonais) ou para uso como
imungenos em vacinas. A reproduo da mani-
festao clnica de uma enfermidade, sob condi-
es experimentais, tambm requer altos ttulos
do vrus. Em resumo, a rotina de um laborat-
rio de virologia envolve necessariamente etapas
repetidas e contnuas de multiplicao de vrus
com nalidades diversas. Como os vrus neces-
sitam clulas vivas para se multiplicar, sistemas
biolgicos so utilizados com esse propsito.
Trs sistemas biolgicos tm sido classicamente
utilizados para a multiplicao de vrus: animais
susceptveis, ovos embrionados de galinha (OE)
e cultivos celulares.
3.1 Inoculao em animais susceptveis
Durante muitos anos, a reproduo da do-
ena em animais se constituiu na forma mais ob-
jetiva de deteco de vrus em material suspeito.
A inoculao de animais tambm serviu para a
amplicao do agente para diversos ns, entre
eles a produo de vacinas. Os fatores limitantes
para esse procedimento incluem o custo elevado
de manuteno, a imunidade prvia dos animais
ao agente e a baixa reprodutibilidade da enfermi-
dade. Nos ltimos anos, questes ticas referen-
tes ao uso experimental de animais somaram-se a
essas restries.
No princpio do sculo, os bovinos eram
inoculados com o vrus da febre aftosa (FMDV)
no epitlio lingual. Aps o desenvolvimento de
vesculas, o uido era coletado, inativado e uti-
lizado para a produo de vacinas. A utilizao
de extratos de crebro de camundongos infecta-
dos com o vrus da raiva (RabV), para a produo
de vacinas, outro exemplo da inoculao em
animais. Com o desenvolvimento dos cultivos
celulares, essa metodologia deixou de ser utili-
zada. Atualmente, a multiplicao de vrus pela
inoculao de animais possui uso muito restrito,
dentre os quais se destacam a prova biolgica
para o diagnstico da raiva em camundongos
lactentes (Captulo 11). A inoculao de camun-
dongos lactentes ocasionalmente utilizada para
o diagnstico do FMDV. Para alguns vrus que
no replicam ecientemente em cultivo celular,
como o vrus da peste suna africana (ASFV), a
inoculao de animais, para se obter altos ttulos
do vrus, empregada.
3.2 Inoculao em ovos embrionados
Vrios vrus de aves e alguns de mamferos
replicam com ecincia em tecidos de embrio de
galinha. A habilidade desses vrus em se multi-
plicar nesse sistema biolgico tem sido utilizada
para a multiplicao de vrus em laboratrio, seja
para a deteco de vrus em material clnico, seja
para a amplicao de vrus. Essa metodologia
teve grande difuso antes do desenvolvimento
e estabelecimento dos cultivos celulares, porm,
nos dias atuais, est limitada a poucos vrus,
principalmente queles que no replicam em cul-
tivos.
O material pode ser inoculado por vrias
vias, dependendo do agente suspeito (Figura
3.11). A presena do agente pode ser evidencia-
da pelo desenvolvimento de leses macro e mi-
croscpicas caractersticas no embrio e/ou nas
membranas vitelnicas (Tabela 3.2). Tambm se
pode observar retardo no desenvolvimento e
morte do embrio. A presena do agente e a sua
quanticao tambm pode ser detectada pela
pesquisa da atividade biolgica do agente (HA),
de antgenos (IFI) ou de cidos nuclicos virais
(hibridizao, PCR).
Cavidade
amnitica
Cavidade
alantide
Membrana
crio-alantide
Saco da gema
Casca
Embrio
Albumina
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | ||
|
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|
Figura 3.11. Vias de inoculao de vrus em ovos
embrionados.
Deteco, identicao e quanticao de vrus 75
3.3 Inoculao em cultivo celular
A deteco e identicao de vrus em amos-
tras clnicas, aps a sua multiplicao em cultivo
celular, constituram-se em uma das primeiras
formas de deteco viral. O advento dos antibi-
ticos contribuiu de forma decisiva para o desen-
volvimento da Virologia, pois somente a partir
da foi possvel estabelecer cultivos celulares em
grande escala. A propagao do agente em cul-
tivo celular permite que quantidades mnimas
de partculas vricas viveis sejam detectadas,
amplicadas e, posteriormente, caracterizadas.
Para os vrus que replicam bem em clulas de
cultivo, esse sistema biolgico possui aplicaes
virtualmente ilimitadas, incluindo: a) isolamento
e identicao com ns diagnsticos; b) obteno
de estoques virais para caracterizao biolgica
e molecular; c) uso em testes sorolgicos; d) pro-
duo de estoques virais para estudos de patoge-
nia; e) produo de antgeno para a imunizao
de animais (produo de anti-soro ou anticorpos
monoclonais); f) produo de vacinas, entre ou-
tros.
O isolamento em cultivo celular considera-
do a prova ouro (golden standard) em diagnstico
virolgico, sendo utilizada como padro de com-
parao com qualquer outro mtodo. Esse mto-
do tambm capaz de detectar amostras ocasio-
nais de vrus em material clnico. Vrios agentes
virais conhecidos resultaram de achados aciden-
tais em cultivo de clulas, entre estes o circov-
rus suno (PCV-1) e o vrus smio 40 (SV-40). Os
cultivos celulares ainda se constituem na forma
mais simples e econmica de obteno de gran-
des quantidades de vrus vivel para a pesquisa
e produo de vacinas.
Devido ao fato de nenhuma linhagem celu-
lar ser susceptvel a todos os vrus, muitos labo-
ratrios mantm cultivos celulares susceptveis
a diferentes agentes. A escolha de um tipo celu-
lar para o isolamento ou multiplicao do vrus
est, muitas vezes, associada com a espcie de
origem do material e com o histrico clnico da
enfermidade. Geralmente, so utilizadas clulas
originrias da espcie animal de origem do vrus.
No entanto, isso no regra, pois existem vrios
vrus que replicam em clulas de cultivos de ou-
B
O
V
I
N
O
-
Vrus Idade do embrio Via de inoculao Leso/conseqncia
E
Q

I
N
O
O
V
I
N
O
S
C
A
N
I
N
O
S
e
F
E
L
I
N
O
S
A
V
E
S
Varola bovina 10-11 dias Membrana corioalantide
Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
7 dias
Membrana corioalantide ou
cavidade alantide
Morte do embrio
Focos esbranquiados (pocks)
na membrana, morte do embrio
Lumpy skin vrus (LSDV) 7 dias Membrana corioalantide Pocks na membrana crio -alantide.
Influenza eqina 10-11 dias Cavidade alantide
Cavidade alantide
Encefalomielite eqina
(EEE, WEE e VEE)
10-11 dias Qualquer via Morte do embrio
S
U

N
O
Vrus da doena de
Aujeszky (PRV)
10 dias Membrana corioalantide
Leses na membrana
corioalantide, invaso do sistema
nervoso central, e protuso cerebral
do embrio, morte do embrio.
Raiva (RabV) 7 dias Gema
Retardo do crescimento, distrofia
muscular, encefalomalcia
Morte do embrio
Morte do embrio
Newcastle (NDV) 9-11 dias
Morte do embrio
Vrus da lngua azul
(BTV)
Intravenosa 9-11 dias
9-11 dias
Membrana corioalantide ou
cavidade alantide
Influenza aviria (AIV)
Tabela 3.2. Vrus animais que replicam em embries de pinto e efeitos da replicao
76 Captulo 3
tras espcies. Por exemplo, o FMDV cultivado
em clulas de rim de hamster (BHK-21); o vrus
da sndrome reprodutiva e respiratria dos su-
nos (PRRSV) cultivado em clulas de rim de
macacos (MA-104); e o herpesvrus eqino (EHV)
cultivado em clulas de rim de coelhos (RK-13)
ou em clulas de rim de macaco-verde africano
(Vero).
Basicamente existem dois tipos principais
de cultivos celulares: cultivos primrios e as li-
nhagens contnuas. Cada um desses tipos apre-
senta vantagens e restries. Os cultivos primrios
originam-se da remoo de um rgo fresco de
um embrio ou feto recm-sacricado. O rgo
removido submetido a um processo mecnico e
enzimtico para fracionamento do tecido e indi-
vidualizao das clulas. As clulas individuali-
zadas so cultivadas em frascos ou garrafas, onde
iro aderir e formar uma monocamada. O cultivo
realizado com meio nutritivo e promotores de
crescimento, a temperatura de incubao de
37C. Nesse processo, a diviso celular bastan-
te restrita, com uma propagao lenta e limitada,
podendo-se dizer que ocorre uma diviso celular
a cada 24 horas. Assim, necessria a realizao
de subcultivos peridicos, e isso realizado atra-
vs da individualizao da monocamada pela
ao enzimtica, ressuspenso e semeadura em
novos frascos de cultivo. Nesses novos cultivos,
o nmero celular ir duplicar ou quadruplicar
em poucos dias. Aps um nmero varivel de
subcultivos (10 a 30 passagens, dependendo do
tipo celular), as clulas comeam a apresentar ta-
xas reduzidas de multiplicao e, eventualmen-
te, cessam a multiplicao. Os cultivos primrios
so os preferidos para a realizao da multiplica-
o viral, pois possuem caractersticas morfol-
gicas e siolgicas bastante semelhante s clu-
las dos rgos originais. Sendo assim, possuem
uma maior sensibilidade para a infeco viral. A
restrio que esse tipo de cultivo apresenta o
nmero limitado de subcultivos, gerando neces-
sidade de preparao contnua nos laboratrios
com alta demanda celular.
As linhagens celulares ou linhagens contnuas
so derivadas de clulas tumorais ou de tecidos
normais que sofreram transformao in vitro. Es-
ses tipos de cultivos celulares so cultivados de
maneira semelhante aos cultivos primrios e pos-
suem capacidade de multiplicao quase inde-
nida. Por estarem bem adaptadas s condies do
cultivo, so de fcil manipulao e propagao.
A maioria dos laboratrios d preferncia a esse
tipo de cultivo celular devido sua uniformidade,
estabilidade e facilidade de manuseio. Por causa
dessa alta taxa de propagao em laboratrio, as
linhas celulares podem sofrer alteraes morfol-
gicas e siolgicas que alteram a sensibilidade
infeco viral. No entanto, a sensibilidade infec-
o com alguns vrus pode ser inferior nas linha-
gens celulares em comparao com os cultivos
primrios, mas as vantagens citadas acima com-
pensam este aspecto. Linhagens celulares podem
ser obtidas pela transferncia entre laboratrios
ou pela aquisio junto a bancos depositrios.
Diversas linhagens celulares so utilizadas
rotineiramente em laboratrios de virologia em
atividades de diagnstico e pesquisa. O nome
dessas linhagens geralmente est relacionado
com o rgo de origem e freqentemente contm
as letras iniciais do nome do descobridor ou ou-
tra caracterstica marcante. Alguns exemplos de
linhagens celulares comumente utilizadas em Vi-
rologia Veterinria so: MDBK (Madin-Darby bo-
vine kidney), MDCK (Madin-Darby canine kidney),
CRFK (Crandell feline kidney), CRIB (cell resistant
to infection with bovine viral diarrhea vrus), RK13
(rabbit kidney), PK15 (porcine kidney 15), SK6 (swi-
ne kidney), BHK-21 (baby hamster kidney clone 21),
IBRS2 (Instituto Biolgico rim de suno clone 2), c-
lulas Vero, entre outras.
Existem ainda cultivos de clulas que se
multiplicam em suspenso, ou seja, no necessi-
tam de uma superfcie de contato para adeso e
multiplicao. Uma grande vantagem desse tipo
de cultivo a concentrao do nmero de clulas,
reduzindo a relao do nmero de clulas, tama-
nho do frasco e volume de meio utilizado. Essa
uma caracterstica desejvel e amplamente utili-
zada para a produo de vacinas. Clulas BHK-21
que se multiplicam em suspenso so utilizadas
para a multiplicao e produo de estoques do
RabV e o FMDV para uso em vacinas.
Alguns vrus no replicam ecientemente
em clulas de cultivo, assim, a sua amplicao
requer o uso de outro sistema biolgico, como
animais susceptveis (animais de laboratrio ou
os hospedeiros naturais) ou ovos embrionados.
Deteco, identicao e quanticao de vrus 77
Outros vrus no replicam em quaisquer dos sis-
temas biolgicos utilizados atualmente, como os
papilomavrus, vrus da hepatite C de humanos
e os vrus causador da hepatite B (famlia Hepad-
naviridae).
O processamento de amostras que poten-
cialmente contenham vrus deve ser realizado
rapidamente e seguir algumas regras para au-
mentar a probabilidade de deteco e multipli-
cao do agente. Para o diagnstico, as amostras
devem ser inoculadas em cultivos celulares o
mais brevemente possvel. A inoculao consiste
na deposio do material suspeito sobre as mo-
nocamadas, seguido de incubao por 1 a 2 horas
(perodo de adsoro). Posteriormente, o incu-
lo desprezado, e a monocamada lavada para
remover ou reduzir a presena de substncias
txicas e/ou contaminao bacteriana e fngica.
Aps, o meio de cultivo reposto, e as clulas so
incubadas a 37C, com uma atmosfera de 5% de
CO
2
. As monocamadas devem ser observadas
diariamente para a presena de alteraes mor-
folgicas celulares associadas com a replicao
viral (Figura 3.12). Essas alteraes, conseqn-
cias do processo replicativo dos vrus, so deno-
minadas genericamente de efeito citoptico (ECP
cytopathic effect). Uma grande parcela dos vrus
produz alteraes morfolgicas nos cultivos celu-
lares, que, muitas vezes, so caractersticas de um
determinado agente ou grupo de vrus. As altera-
Figura 3.12. Efeito citoptico produzido pela replicao viral em clulas de cultivo. Clulas de linhagem de rim
bovino no-infectadas (A) ou inoculadas com o BoHV-1 (B); BVDV (C); BoHV-2 (D); enterovrus bovino (E); e PI-3v
(F). Pode-seobservar diferentes tipos deefeitocitoptico. Para descriodetalhadaver tabela3.3.
A B
C D
E F
78 Captulo 3
es freqentemente produzidas pelos vrus so
vacuolizao citoplasmtica, formao de clulas
gigantes multinucleadas (sinccios) e arredonda-
mento celular entre outros. Na Tabela 3.3, esto
descritos os efeitos citopticos produzidos pelos
principais vrus de interesse veterinrio.
A visualizao dessas alteraes ao micros-
cpio ptico apenas um indicativo da presena
Vrus Tipo celular
Clulas de origem renal ou
primrias de testculos de bovinos.
Adenovrus bovino
(BAdV)
Efeito citoptico
Arredondamento e desprendimento celular, formao
de focos infecciosos como cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.
MDBK, SK-6, PK15, BT, cultivos
primrios de pulmo, corneto nasal,
rim e testculo de bovino.
Vrus da diarria viral
bovina (BVDV)
Vacuolizao citoplasmtica, degenerao celular,
enrugamento do tapete, desprendimento e lise celular
(somente as amostras citopatognicas).
MDBK, CRIB, HeLA, BT, EBTr e
cultivos primrios de pulmo, corneto
nasal, rim e testculo de bovino.
Herpevrus bovino tipos
1 e 5 (BoHV 1 e 5)
Desorganizao nuclear, arredondamento e
desprendimento celular; formao de focos
infecciosos com o aspecto de cachos de uva, lise.
Corpsculos intranucleares.
MDBK, BT, HELA e cultivos primrios
de corneto nasal e de rim de
bovino.
Parainfluenza bovina
tipo 3 (bPI-3)
Arredondamento, citomegalia e refringncia celular, formao
de grandes sinccios, desprendimento das clulas.
Corpsculos intracitoplasmticos.
MDBK, BT, cultivos primrios de
clulas do trato respiratrio de
bovinos.
Vrus respiratrio
sincicial bovino (BRSV)
Arredondamento e refringncia celular, formao de
pequenos sinccios e desprendimento das clulas.
Corpsculos acidoflicos intracitoplasmticos.
CV-1, VERO, MA-104, BSC-1,
Aubek, MDBK
Rotavrus bovino
(BRV)
Vacuolizao citoplasmtica, degenerao e
desprendimento celular. Corpsculos
intracitoplasmticos.
VERO, HRT-18, cultivos primrios de
rim de bovino.
Coronavrus bovino
(BCoV)
Formao de sinccios.
MDBK, EBTr, BT e cultivos primrios
de rim de feto bovino.
Parvovrus bovino
(BPV)
Citomegalia e refringncia celular, arredondamento e
desprendimento.
MDBK, CRIB e cultivos primrios de
origem bovina.
Virus da mamilite
herptica (BoHV-2)
Arredondamento celular, sinccios multinucleares.
Corpsculos eosinoflicos intranucleares.
Cultivo primrio de bao e pulmo
bovino e clulas embrionrias
diplides de humanos.
Vrus da leucose
bovina (BLV)
Formao de sinccios.
BHK-21, IB-RS-2 cultivos primrios de
tireide bovina, cultivos primrios de
rim de suno, bovino ou cordeiro.
Vrus da febre aftosa
(FMDV)
Condensao nuclear, arredondamento,
desprendimento e lise celular.
VERO, BHK-21 ou IB-RS2. Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
Arredondamento, retrao e desprendimento celular,
lise.
BT, cultivo de rim de fetos bovinos. Vrus da estomatite
papular (BPSV)
Arredondamento, agregao, lise celular.
Corspsculos intracitoplasmticos.
Cultivos primrios de clulas de
testculo bovino.
Vrus da varola e
pseudovarola bovina
Formao de sinccios. Corpsculos intracitoplasmticos.
VERO ou cultivos primrios de
rim de terneiros.
Rinderpest (RPV) Arredondamento e refringncia celular, seguido
de retrao com alongamentos citoplasmticos
pontes e formao de sncicios. Corpsculos
intracitoplasmticos.
LT ou cultivos primrios de origem
bovina, caprina ou ovina
(preferencialmente de raas
lanferas).
Vrus da doena Lumpy Skin
(LSDV)
Arredondamento e retrao da membrana celular
e marginalizao da cromatina nuclear.
Corpsculos intracitoplasmticos.
VERO, BHK-21, CER e cultivos
primrios de rim de terneiro e cordeiro.
Vrus da febre do vale
Rift (RVFV)
Arredondamento e rpida lise celular.
Cultivos primrios de clulas de
rim, bao, tireide, pulmo,
testculo e plexo coride de fetos
ovinos ou bovinos.
Vrus da febre catarral
maligna (MCFV)
Sinccios grandes,
contrao, arredondamento e desprendimento
celular da monocamada. Corpsculos
intranucleares.
Tabela3.3. Principais vrus animais, clulas susceptveis para replicaoinvitroe efeitocitoptico
B
o
v
i
n
o
s
Deteco, identicao e quanticao de vrus 79
VERO, ED, RK-13, MDBK, BHK-21
e cultivos primrios de rim eqino e
fibroblastos da derme eqina.
Herpesvrus eqino
(EHV 1, 2, 3 e 4)
Desorganizao nuclear, arredondamento e
desprendimento celular; formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.
ED, PBMC eqino, fibroblastos
de derme eqina.
Anemia infecciosa
eqina (EIAV)
Formao de sinccios somente em leuccitos.
VERO, RK-13, BHK-21 e cultivos de
fibroblastos de embrio de
galinhas e patos.
Encefalomielite eqina
(EEE, WEE e VEE)
RK-13, VERO, LLC-MK2 e cultivos
primrios de clulas de macaco,
coelho e eqino.
Arterite viral eqina
(EAV)
MDCK Influenza eqina (EIV) Arredondamento, desprendimento celular
Desprendimento celular do tapete, lise
Lise celular
BHK-21, VERO Lngua azul (BTV) Arredondamento celular, fuso.
HeLa, VERO, cultivos primrios
de rim e testculo ovino e bovino;
fibroblastos de galinhas e patos.
Ectima contagioso
(ORFV)
Arredondamento celular, aglomerao e desprendimento
celular. Corpsculos de incluso intracitoplasmticos
eosinoflicos.
Clulas da membrana sinovial de
fetos caprinos e cultivos primrios
de testculos de caprinos.
Artrite e encefalite
caprina (CAEV)
Formao de sinccios.
Cultivos de pulmo fetal, de clulas
do plexo coride de ovino ou de
leuccitos sangneos perifricos.
Pneumonia progressiva
dos ovinos Maedi-Visna
(OPPV)
Formao de sinccios e degenerao celular.
Cultivos primrios de testculo
de cordeiro.
Poxvrus ovino e
caprino
Vacuolizao nuclear. Corpsculos
intracitoplasmticos eosinoflicos.
VERO e cultivo primrio de rim
de cordeiro
Arredondamento, agregao celular e formao de
sncicio com o ncleo na forma circular. Vacuolizao
de algumas clulas. Corpsculo de incluso
intracitoplasmticos e intranucleares.
Peste dos
pequenos
ruminantes (PPRV)
PK-15, SK6, MDBK, cultivos
primrios de origem suna.
Doena de Aujeszky
(PRV ou SuHV-1)
Desorganizao nuclear, arredondamento e
desprendimento celular e formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.
Cultivos primrios de rim suno,
PK-15 e SK6.
Adenovrus suno Citomegalia e arredondamento celular,
desprendimento das clulas da monocamada.
Copsculos intranucleares.
SK6, PK-15. Peste suna clssica
(CSFV)
A maioria dos isolados no causa citopatologia
MARC-145, MA-104 e clulas de
origem de smios.
Sndrome respiratria
e reprodutiva suna
(PRRSV)
Aumento de tamanho, arredondamento e
agregao celular, lise.
PK-15, IB-RS-2, SST e cultivos
de clulas de rim e testculos
de sunos.
Enterovrus suno
(PEV)
Lise e desprendimento celular,
destruio da monocamada.
Cultivos primrios de rim suno,
ST, PK-15 e SK6.
Parvovrus suno
(PPV)
Arredondamento celular e picnose.
Corpsculos intranucleares.
.
Tabela3.3. Continuao.
Vrus Tipo celular Efeito citoptico
O
v
i
n
o
s
e
c
a
p
r
i
n
o
s
E
q

i
n
o
s
S
u

n
o
s
80 Captulo 3
de um agente viral na amostra suspeita. Alguns
vrus possuem a capacidade de infectar cultivos
celulares de diversas origens, como o vrus da
lngua azul (BTV), que infecta clulas de mam-
feros e insetos e variaes do efeito citoptico po-
dem ser observadas. No entanto, a ausncia de
alteraes no indica necessariamente a ausncia
de vrus. Alguns vrus infectam as clulas sem
causar ECP e so denominados de no-citopti-
cos, como o caso do circovrus suno (PCV-2).
CRFK, MDCK, A-72 e
cultivos primrios de clulas de rim
e pulmo de canino e felino.
Parvovrus
canino (CPV)
Aumento do ncleo, enrugamento da membrana
celular, arredondamento das clulas, lise.
CRFK, A-72 e cultivos de rim, timo
e sinvia de canino.
Coronavrus
canino (CCoV)
Formao de sinccios.
MA-104, A-72, CRFK e cultivos
primrios de rim de canino.
Rotavrus
canino
MDCK e cultivos primrios
de rim de canino.
Herpesvrus
canino (CaHV)
VERO, MDCK e PBMC de
caninos e furo.
Vrus da cinomose
(CDV)
Formao de sinccios, desprendimento celular
do tapete, incluses intracitoplasmticas.
MDCK, cultivos primrios de
testculo ou rim de canino e felino.
Adenovrus canino
(CAdV)
Arredondamento e desprendimento celular,
lise e destruio do tapete. Corpsculos intranucleares.
CV-1, BHK-21, VERO, HeLa e cultivos
de fibroblastos de embrio de galinhas.
Vrus da raiva (RabV) Arredondamento e desprendimento celular.
Corpsculos intracitoplasmticos.
CRFK, FCWF-4, Fe3TG, VERO
e fibroblastos felinos.
Calicivrus felino
(FCV)
Arredondamento e desprendimento celular,
lise e destruio do tapete.
CRFK e cultivos primrios de pulmo,
rim e testculo de felino.
Vrus da rinotraquete
felina (FeHV)
Desorganizao nuclear, arredondamento,
desprendimento celular e formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.
Vacuolizao citoplasmtica, degenerao e
desprendimento celular. Corpsculos
intracitoplasmticos.
Desorganizao nuclear, arredondamento e
desprendimento celular e formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.
CRFK, A-72, FeWF e cultivos primrios
de tecidos fetais de felinos.
Vrus da peritonite
infecciosa felina
(FeCoV)
Arredondamento e desprendimento celular.
CRFK e Fe3TG. Vrus da panleucopnia
felina (FPLV)
Arredondamento e aumento da refringncia
das clulas.
PBMC felino. Vrus da imuno-
deficincia felina
(FIV)
Formao de sinccios.
Cultivos primrios de rim de embrio
de galinhas, cultivos primrios de
fibroblastos de galinhas e BHK-21.
Doena
de Newcastle (NDV)
Formao de sinccios, morte celular.
Cultivos primrios de clulas da
bursa, rim e fibroblastos de
embrio de galinha.
Doena de
Gumboro (IBDV)
CEK e cultivos de rim, fgado e
pulmo de galinhas.
Vrus da laringo-
traquete aviria
(ILTV)
MDCC-MSB1. Vrus da anemia
aviria (CAV)
Citomegalia, formao de sinccios.
Efeito pouco discernvel
Citomegalia, lise celular.
CK e fibroblastos de embrio
de galinhas ou patos.
Vrus da doena
de Marek (MDV)
Desorganizao nuclear, arredondamento e
desprendimento celular. Corpsculos intranucleares.
QT-35, cultivos primrios de rim ou
derme de embrio de galinha.
Poxvrus avirio Arrendondamento, refringncia celular e
desprendimento.
.
Tabela3.3. Continuao.
Vrus Tipo celular Efeito citoptico
G
a
l
i
n
h
a
s
e
O
u
t
r
a
s
A
v
e
s
C
a
n
i
n
o
s
e
F
e
l
i
n
o
s
Deteco, identicao e quanticao de vrus 81
Outro exemplo o vrus da diarria viral bovina
(BVDV), que possui amostras citopatognicas e
no-citopatognicas (Captulo 22). A conrma-
o e identicao do agente so, geralmente,
realizadas por mtodos que detectam alguma ati-
vidade biolgica (HA ou HAD), antgenos (IFA
ou IPX) ou cidos nuclicos virais (PCR, hibridi-
zao). A neutralizao com anti-soro especco
tambm pode ser usada para a identicao do
agente causador do ECP nos cultivos. Colorao
direta, como Giemsa ou hematoxilina e eosina
(para corpsculos de incluso), tambm podem
ser utilizadas para a conrmao da presena de
alguns agentes.
4 Quanticao de vrus
A realizao de vrias tcnicas virolgicas
requer o conhecimento da quantidade aproxi-
mada de partculas vricas presente no material.
O procedimento de quanticao denominado
titulao, e o valor obtido dito ttulo viral. Exis-
tem tcnicas diretas e indiretas para a quanti-
cao das partculas vricas. As tcnicas diretas
baseiam-se na contagem das partculas presentes
em uma amostra e observadas ao microscpio
eletrnico. Esse mtodo capaz de informar o
nmero preciso de partculas, porm no dife-
rencia partculas infecciosas de no-infecciosas.
Devido a essas particularidades, o mtodo direto
de quanticao viral no utilizado na rotina
laboratorial. As tcnicas indiretas possuem como
base a infectividade do vrus, que medida por
meio de um indicador biolgico. A quanticao
da infectividade de uma determinada suspenso
viral requer necessariamente o uso de sistemas
biolgicos para a replicao do agente (cultivos
celulares, OE ou animais). Como j mencionado,
os cultivos celulares so muito utilizados com
esse propsito. Para os vrus que no replicam
em cultivo, pode-se recorrer aos OE ou animais.
4.1 Diluio limitante
Os testes que utilizam a diluio limitante
foram os primeiros desenvolvidos e so mui-
to utilizados pela sua simplicidade. O material
inicialmente submetido diluio seriada, e
cada diluio serve como inculo para um n-
mero determinado de cultivos celulares. Quanto
maior o nmero de rplicas, mais preciso ser o
resultado. Essa tcnica geralmente realizada em
placas de microtitulao de 96 cavidades, e cada
diluio do material inoculada em oito rpli-
cas. Aps um determinado perodo de incubao
(varia entre 48 h e vrios dias, dependendo do
vrus), os cultivos so monitorados em relao ao
aparecimento do ECP (ou submetidos IFA ou
IPX para deteco de antgenos virais), que so
os indicadores da presena de infectividade na
respectiva diluio.
O ttulo viral geralmente expresso como a
recproca da maior diluio capaz de provocar re-
ao especca (ECP ou antgenos virais) em 50%
dos cultivos e a unidade ser TCID
50
(tissue cultu-
re infection dose). Quando a titulao realizada
em animais ou em OE, e o indicador a morte,
a unidade usada dose letal 50% (LD
50
). Quando
o resultado da infectividade medido de outra
forma que no a morte (ex.: paralisia, presena
de leses de pele, prurido), a unidade emprega-
da dose infectiva 50% (ID
50
). Para os vrus com
capacidade hemaglutinante, aplica-se o teste de
HA, ento a unidade de expresso ser unidade
hemaglutinante (UH).
Os valores obtidos nos ensaios de titulao
so submetidos anlise matemtica, que conver-
te os dados de infectividade em valores numri-
cos com uma acurcia aceitvel. Alguns mtodos
de clculo so utilizados, no entanto, o mtodo
de Reed e Muench o mais difundido para o
clculo de ttulo viral (Quadro 3.1). Os mtodos
de Spearman e Krber; e Seligman e Mickey so
menos populares. Esses mtodos, apesar de di-
ferirem na metodologia aplicada, baseiam-se na
observao da infectividade, portanto, somente
consideram as partculas infecciosas.
4.2 Ensaio de placa

Outro mtodo muito utilizado para a quan-
ticao de vrus o ensaio de placa, descrito ini-
cialmente por Dulbecco, em 1952. Diluies seria-
das da suspenso viral so inoculadas em tapetes
celulares pr-formados, geralmente em placas
poliestireno de seis cavidades. Aps a adsoro
e a remoo do inculo, os tapetes so recobertos
82 Captulo 3
com uma camada de meio semi-slido base de
gar ou carboximetilcelulose, e incubados por 24
a 72 horas, variando conforme o agente. As part-
culas virais que penetraram nas clulas durante a
adsoro iro replicar e produzir prognie viral.
A cobertura semi-slida, no entanto, impede que
as partculas vricas produzidas se disseminem
distncia. A transmisso do vrus a partir das c-
lulas inicialmente infectadas ocorre apenas para
as clulas vizinhas, pela transmisso direta entre
clulas. Aps alguns dias, so observados focos
de destruio celular nos tapetes, denominados
placas. Cada placa representa um determinado
nmero de clulas infectadas e destrudas a par-
Testes de infectividade so rotineiramente utilizados para o
clculo do ttulo viral (nmero de unidades infecciosas por
unidade de volume), que comumente expresso por TCID /mL
ou PFU/mL. Uma unidade infecciosa definida como a menor
quantidade do vrus capaz de produzir um efeito biolgico
detectvel (efeito citoptico, ECP) emclulas de cultivo ,
ou doena clnica, ou morte em animais. No caso de cultivos
celulares, uma unidade infecciosa equivaleria a uma
50
in vitro
Diluio
Cultivos celulares ndices acumulados
Porcentagem (%) =
[Infectados/(infectados
+ no-infectados)] X
No-
infectados Infectados
No-
infectados
+
infectados
10
-1
0 41 41 41/41 =100%
10
-2
0 33 33 33/33 =100%
10
-3
0 25 25 25/25 =100%
10
-4
0 17 17 17/17 =100%
10
-5
2 9 11 9/11 =81%
10
-6
7 3 11 3/11 =27%
10
-7
15 0 15 0/15 =0%
10
-8
No-infectados Infectados
0 8
0 8
0 8
0 8
2 6
5 3
8 0
8 0 23 0 23 0/23 =0%
Para o clculo dos ndices acumulados dos cultivos no-
infectados (isto , onde no se observou ECP), soma-se os
valores dos cultivos no-infectados, iniciando-se a partir da
menor diluio (10 ). J o clculo do ndice dos cultivos
infectados, realizado pelo somatrio das culturas infectadas
(onde o ECP foi visualizado) a partir da maior diluio (10 ).
Assim, a diluio apresentada no Quadro 3.1 necessria para a
infeco de 50%dos cultivos celulares, obviamente estar entre
as diluies 10 (27% infectados) e (10 ) (81% infectados). A
distncia proporcional entre essas duas diluies calculada
da seguinte forma:
(%positivo acima de 50%) - 50
------------------------------------------------------------------------ =
(%positivo acima de 50%) - (%positivo abaixo de 50%)
Assim, tem-se: 81-50 =0,57
81-27
-8
-1
-6 -5
partcula viral vivel capaz de infectar e replicar em uma clula
susceptvel.
1.TCID definida como a diluio de um determinado vrus
necessria para infectar 50%dos cultivos celulares inoculados.
Esse tipo de teste consiste na produo e deteco de ECPnas
clulas infectadas. O clculo da TCID em uma suspenso
inicial de vrus pode ser feito pelos mtodos de Reed & Muench
ou Spearman-Krber.
50
50
Este ndice ou distncia proporcional utilizado para o clculo
do ttulo viral pelo uso da equao: (fator da diluio onde se
observou ECPemmais de 50%das culturas de clulas) + (ndice
ou distncia proporcional multiplicado pelo logaritmo do fator de
diluio). Assim, tem-se (-5) + (0,57 x 1) = -5,57. Desse modo, a
diluio limitante da suspenso inicial do vrus capaz de infectar
50% dos cultivos celulares ser de 10 . A recproca deste
nmero ser o ttulo viral por unidade de volume empregado para
a realizao da prova, ou seja, 10 TCID em 50 L.
Rotineiramente, o ttulo viral expresso em mililitros (mL). Para
isso, basta multiplicar o valor obtido por 20 (1 mLcontm20 vezes
o volume de 50 L utilizado para a realizao da prova).
Finalmente, tem-se 10 que equivalente a 2 x 10 ou 10
TCID /mL.
-5,57
-5,57
-5,57 6,57 6,87
50
50

Quadro 3.1. Quantificao de vrus por diluio limitante


Deteco, identicao e quanticao de vrus 83
tir de uma clula originalmente infectada. O n-
mero de placas produzidas no tapete, portanto,
corresponde ao nmero aproximado de unidades
infecciosas presentes na diluio inoculada. Para
uma melhor visualizao e contagem das placas,
os tapetes so corados com cristal violeta (Figura
3.13).
Nessa tcnica, a quanticao expressa
como unidade formadora de placas por mililitro
(PFU/mL). Para o clculo nal do ttulo, leva-se
em considerao o nmero de placas produzidas
em cada diluio e o volume utilizado para ino-
culao. Um exemplo de titulao, usando essa
tcnica, est descrito no Quadro 3.2. Os ensaios
em placa so utilizados principalmente para a
quanticao de vrios vrus citopatognicos (ou
citopticos), mas podem tambm ser utilizados
para vrus que no induzem citopatologia. Nes-
ses casos, os focos (e no placas) de replicao
viral podem ser detectados e contados aps a re-
alizao da tcnica de IPX.
Alm de quanticao viral, os ensaios de
placa so tambm utilizados com outras nalida-
des, incluindo: a) clonagem biolgica e purica-
o de vrus; b) anlise de fentipo de variantes
virais; c) ensaios de neutralizao viral por anti-
corpos monoclonais ou policlonais; d) testes de
Figura 3.13. Ensaio de placa. Tapetes de clulas BHK-21
foram infectados com diferentes diluies do vrus da
estomatite vesicular (VSV) e, 48 horas aps, foram
corados comcristal violeta. Linha superior: a ausncia de
placas indicativa da ausncia de vrus; Linha inferior:
observa-se inmeros focos infecciosos, indicando a
replicaoviral e lisecelular.
atividade antiviral de compostos qumicos; e) es-
tudos de cintica e replicao viral, entre outras.
4.3 Outros mtodos de quanticao
Mtodos mais modernos que utilizam a
biologia molecular tm sido empregados para a
quanticao de vrus, principalmente em medi-
Para a obteno do ttulo, utiliza-se o nmero mdio de
placas presentes na maior diluio em que foi possvel
observar a replicao do vrus. Dessa maneira, tem-se: 31
x 10 PFU/200 L, que o equivalente a 3,1x10
PFU/200 L.
5 6

Nmero de placas
Diluio
Rplicas
Mdia
10
-3
168
150
159
10
-4
96
89
92,5
10
-5
35
27
31
10
-6
0
0
0
10
-7
0
0
0
10
-8
0
0
0
Controle
0
0
0
10
-1
incontveis
incontveis
-
10
-2
incontveis
incontveis
-
Ottulo de uma suspenso viral do VSVfoi calculado
pelo mtodo de ensaio de placa. Para isso, trs placas
de seis cavidades, contendo uma monocamada pr-
formada de clulas BHK-21 foraminoculadas. Apartir da
suspenso original, realizou-se oito diluies seriadas
na base 10, que serviramcomo inculo. Cada diluio foi
inoculada emduplicada e, para isso, foram
utilizados 200 L/cavidade. Aps o perodo de adsoro,
o inculo foi removido e meio de cultivo contendo
carboximetilcelulose foi adicionado. Aps 24 horas de
incubao, os tapetes celulares foram corados por
cristal violeta. Os nmeros da contagem das placas
esto apresentados abaixo.

Normalmente o ttulo expresso em mililitro (mL), nesse


caso, o volume inoculado foi de 200 L e, para realizar a
transformao, deve-se multiplicar por 5. Tem-se, ento,
15,5 x 10 PFU/mLou 1,55 x 10 PFU/ml.

6 7
Quadro3.2. Quantificaodevrus por ensaiodeplaca
84 Captulo 3
cina humana. Essas tcnicas mensuram a carga
viral (ou quantidade de vrus) pela anlise quanti-
tativa do material gentico viral presente em uma
amostra clnica. A quantidade de vrus presente
nas secrees e excrees de animais infectados
com o FMDV pode ser estimada atravs da tc-
nica de real time PCR. Essa mesma metodologia
tambm pode ser aplicada para os vrus da peste
suna clssica (CSFV) e AFSV, entre outros. Imu-
noensaios quantitativos e outros procedimentos
imunolgicos que fornecem a titulao e que
avaliam a presena do vrus em cada diluio so
amplamente usados. Esses mtodos apresentam
a vantagem de permitir realizar diluies, adio
de reagentes e leituras colorimtricas automatiza-
das. Os dados da leitura crua so posteriormente
analisados por mtodos matemticos que permi-
tem a identicao correta e precisam das unida-
des infectantes presentes no material testado. No
entanto, esses mtodos possuem aplicabilidade
restrita em medicina veterinria e dicilmente
sero substitudos pelos mtodos tradicionais.
5 Identicao e caracterizao de
um isolado
Os termos isolado ou amostra de vrus refe-
rem-se a um vrus que foi detectado e identi-
cado, mas que ainda no foi completamente ca-
racterizado. O termo cepa designa um vrus cujas
principais caractersticas genotpicas e fenotpi-
cas j foram estudadas e so conhecidas. As ce-
pas so geralmente utilizadas como referncia
em testes de diagnstico, em pesquisas e para a
produo de reagentes.
A primeira etapa aps a deteco de um
agente viral a partir de amostras clnicas a sua
identicao. Isso pode ser realizado prelimi-
narmente pelas caractersticas do ECP produzi-
do nos cultivos ou pelas alteraes produzidas
no embrio de galinha. A ME pode ser utilizada
para a identicao inicial do agente, de acordo
com as suas caractersticas morfolgico-estrutu-
rais. A conrmao da identidade do agente, no
entanto, depende do uso de anticorpos espec-
cos (IFA, IPX), de anti-soro especco (SN ou HI)
ou de mtodos de deteco e identicao de ci-
dos nuclicos (hibridizao, PCR).
A caracterizao de uma amostra viral
uma etapa posterior sua deteco e identica-
o. Essa etapa geralmente envolve a caracteriza-
o antignica ou sorolgica, que pode ser de-
nida como o perl dos antgenos de um vrus. A
obteno deste perl realizada pelo uso de tes-
tes que detectam e identicam os determinantes
antignicos presentes nas protenas virais. Vrias
tcnicas so utilizadas com essa nalidade, in-
cluindo a IFA com anticorpos monoclonais, soro-
neutralizao, xao do complemento, ELISA,
alm de outras tcnicas sorolgicas. A forma de
caracterizao a ser utilizada depende das parti-
cularidades de cada famlia de vrus e da dispo-
nibilidade de tcnicas e reagentes do laboratrio.
A identicao de seqncias especcas pode
ser realizada pelo uso de tcnicas como o PCR,
anlise de restrio ou seqenciamento do geno-
ma viral.
5.1 Sensibilidade a solventes lipdicos
Existe uma correlao entre presena do en-
velope e susceptibilidade dos vrus aos solven-
tes lipdicos. Durante muito tempo, uma forma
de identicao e caracterizao da presena de
vrus envelopados foi o tratamento com solven-
tes lipdicos previamente inoculao em cultivo
celular ou ovo embrionado. No envelope viral,
encontram-se inseridas glicoprotenas, que so
responsveis pelas interaes iniciais vrus-clu-
la. A remoo do envelope dos vrus resulta em
perda de infectividade e inativao da partcula.
A maioria dos vrus envelopados sensvel ao
ter e/ou clorofrmio, que so os solventes nor-
malmente utilizados (paramixovrus, herpesv-
rus, mixovrus entre outros); no entanto, alguns
vrus, como os poxvrus, apresentam variaes
de sensibilidade ao ter.
5.2 Concentrao e puricao por
ultracentrifugao
Estudos estruturais e ultra-estruturais, pro-
duo de antgenos para imunizaes ou mtodos
de deteco, entre outros, requerem solues con-
tendo altas concentraes de vrus e com elevado
grau de pureza. A obteno de solues com es-
Deteco, identicao e quanticao de vrus 85
sas caractersticas pode ser feita de vrias manei-
ras, das quais se destacam a ultracentrifugao.
A ultracentrifugao um mtodo relativamente
fcil, rpido e prtico, em que o material de alta
qualidade obtido. Seu princpio baseia-se na
taxa de sedimentao do vrus, que, por sua vez,
dependente do tamanho, densidade, morfolo-
gia da partcula, bem como da natureza do meio
e da fora de centrifugao. A maior restrio o
custo do equipamento, que difere das centrfugas
por atingir velocidades que variam entre 20.000 e
100.000 rotaes por minuto (RPM).
6 Biossegurana laboratorial
A manipulao em laboratrios de agentes
infecciosos, como os vrus, pode representar risco
de infeces inadvertidas ou disseminao de en-
fermidades entre humanos e animais. Isso pode
ser observado em vrias descries do passado.
O FMDV, devido a sua alta infecciosidade, talvez
tenha produzido os exemplos mais conhecidos.
A infeco de pesquisadores pelo vrus Marburg,
em um laboratrio da Alemanha na dcada de
1970, outro exemplo. No princpio, uma alterna-
tiva para evitar acidentes, como a disseminao
do vrus febre aftosa ou introduo de agentes
exticos no rebanho de um pas, foi a construo
de laboratrios em ilhas, o caso mais conhecido
de Plum Island Animal Disease Center, nos Estados
Unidos. Posteriormente outros laboratrios de
segurana elevada e acesso restrito, para mani-
pulao de agentes virais e animais infectados,
foram estabelecidos, tais como: o Australian Ani-
P
r
o
c
e
d
i
m
e
n
t
o
s
E
q
u
i
p
a
m
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o
t
e

o
E
x
e
m
p
l
o
s
Vrus no-zoonticos.
Bancada laboratorial.
BoHV, BVDV, BLV, BTV,
PRV, CDV, outros.
Normas bsicas de prtica
laboratorial.
BSL-1 Nvel
Nenhum requerido.
BSL-2
Associados com
infeces em humanos,
risco de auto-inoculao,
ingesto ou exposio
da pele e mucosas.
BSL-1, com acesso limitado,
identificao das reas de
manipulao, primeiros
socorros e descontaminao
do lixo e resduos.
Aventais, luvas, culos,
conforme a necessidade.
Manipulao de material
que produz aerossol em
cabine de fluxo laminar do
tipo I ou II.
BSL-1 com autoclave.
Adenovrus humano,
citomegalovrus, influenza A,
B e C, rubola, poliovrus,
parainfluenza, vrus da raiva.
BSL-3
Agentes exticos ou
selvagens, com potencial de
transmisso por aerossol e de
produzir doena severa ou
letal.
Normas do BSL-2, com
acesso restrito e controlado,
coleta de soro do
trabalhadores,
descontaminao de todo o
lixo e resduos e esterilizao
das roupas antes da lavagem.
Requerimentos do BSL-1 e
toda manipulao em
cabine de fluxo laminar do
tipo I ou II. Uso de luvas,
aventais, respiradores,
conforme a necessidade.
BSL-2 acrescido de
separao fsica para
corredores e reas de
circulao, porta duplas,
presso negativa nos
laboratrios, sistema de
filtrao do ar.
Herpesvrus dos smios
(vrus B), vrus da encefalite
japonesa, hantavrus, febre
amarela, encefalite eqina
venezuelana, vrus do Nilo
Ocidental.
BSL-4
Agentes altamente perigosos
ou exticos, com risco de
vida para humanos,
transmitidos por aerossis,
ou agentes de periculosidade
desconhecida.
Normas do BSL-3, com
mudanas de roupas ao
ingressar na rea
contaminada. Requerimento
de banho para sada,
descontaminao de todo o
material antes da remoo
do laboratrio.
BSL-3, utilizao de cabine
de fluxo laminar tipo III ou
cabines tipo I e II em
ambiente com presso
positiva, macaces de
corpos inteiro com
respiradores para todos os
procedimentos.
BSL-3, rea ou prdio
isolado com suprimento de
ar e exausto, vcuo e
sistema de
descontaminao.
Vrus Ebola, Marburg, sabi,
febre do vale Rift, entre
outros.
Tabela 3.4. Nveis de biossegurana para manipulao de agentes virais
Adaptada de Murphy et al., 1999.
86 Captulo 3
mal Health Laboratory na Austrlia, o Onderstepoort
Veterinary Institute na frica do Sul, o Institute for
Animal Health na Inglaterra, o Center for Disease
Control (CDC) em Atlanta e, mais recentemente,
o Canadian Science Center for Human and Animal
Health, em Winnipeg, no Cnada.
A manipulao de amostras infectadas para
pesquisa ou diagnstico deve seguir as normas
da boa prtica laboratorial. Dessa maneira, con-
taminaes inadvertidas de amostras ou dissemi-
naes da infeco entre humanos ou animais so
evitadas. Conforme a infra-estrutura do laborat-
rio e o risco dos agentes manipulados, os labora-
trios de virologia so classicados em Nveis de
Segurana (BSL) 1, 2, 3 ou 4 (Tabela 3.4). O uso de
tcnicas asspticas, roupas adequadas (avental,
mscaras, luvas e culos) e desinfetantes apro-
priados so cuidados bsicos e necessrios em
todo trabalho laboratorial, independente do nvel
de segurana. O uso de equipamentos, tais como:
cabines de uxo laminar, sistema de ltrao do
ar, tratamento e esterilizao de dejetos, descarte
e incinerao dos dejetos so requisitos necess-
rios para laboratrios que manipulem agentes
com risco mdio a elevado, conforme o caso.
7 Bibliograa consultada
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PCR protocols. 2.ed. Totowa, NJ: Humana Press, 2003. 545p.
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Wolfe Medical Publications, 1985. 240p.
GENTICA E EVOLUO VIRAL
Mauro Pires Moraes & Hernando Duque Jaramillo
1
1
Responsvel pela seo de Evoluo Viral.
1 Gentica viral
1.1 Conceitos e denies
1.2 Mutao
1.3 Classicao genotpica
1.4 Classicao fenotpica
1.5 Taxa de mutao
1.6 Interaes genticas entre vrus
1.6.1 Recombinao
1.6.2 Ressortimento
1.7 Outras interaes virais
1.7.1 Complementao
1.7.2 Mistura fenotpica
1.7.3 Poliploidia
2 Evoluo viral
2.1 Origem dos vrus
2.2 Quando se originaram os vrus
2.3 Como os vrus ampliaram o seu repertrio protico
2.4 Capacidade de mutao viral
2.5 Estudos laboratoriais de evoluo
2.6 Exemplos de evoluo viral
2.6.1 Vrus da estomatite vesicular: tempo versus fatores ambientais
2.6.2 Mixomatose na Austrlia
2.6.3 Vrus da inuenza
2.6.4 Parvovrus canino
2.7 Concluses
3 Bibliograa consultada
4

89
90
92
93
93
94
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102
102
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104
105
105
106
1 Gentica viral
As populaes virais, principalmente aque-
las de vrus RNA, so excelentes modelos para
estudos de evoluo gentica. Devido ao ciclo
replicativo dos vrus ser extremamente rpido,
tanto em infeces naturais como em cultivo ce-
lular, os processos de seleo e evoluo podem
ser observados em um curto espao de tempo.
Assim, a gentica de populaes virais pode ser
considerada uma viso minimalista e simplista
da evoluo das espcies.
Ao longo de sua histria natural que pode
remeter h milhes de anos os vrus vm reali-
zando um nmero incontvel de ciclos replicati-
vos em seus hospedeiros, sendo constantemente
transmitidos entre hospedeiros. Alguns necessi-
tam utilizar diferentes espcies de hospedeiros
mesmo invertebrados para assegurar a sua
manuteno na natureza. As infeces naturais
resultam em presso de seleo constante, que
acaba moldando o perl gentico e fenotpico dos
vrus, pois favorece e permite a sobrevivncia das
variantes que melhor se adaptam ao hospedeiro e
que so mais ecientemente transmitidas. Dentre
as propriedades que favorecem a sobrevivncia
e evoluo dos vrus destacam-se: a) capacidade
de replicar e ser excretado em altos ttulos; b) ca-
pacidade de se adaptar a novos tecidos, rgos
e/ou hospedeiros; c) capacidade de ser excretado
por longo tempo; d) capacidade de se reproduzir
e ser excretado sem produzir doena severa na
maioria de seus hospedeiros; e) capacidade de
escapar dos mecanismos imunolgicos do hospe-
deiro; f) capacidade de resistir no meio ambien-
te, tanto fora de clulas vivas como em animais
vertebrados ou invertebrados, assegurando a sua
sobrevivncia at alcanar um novo hospedeiro;
g) habilidade de ser transmitido verticalmente
entre hospedeiros.
Dentre as caractersticas que apresentam
relevncia na gentica das populaes virais e
facilitam a compreenso da sua evoluo, des-
tacam-se a grande quantidade de prognie viral
produzida a partir da infeco de uma nica c-
lula e o curto perodo de tempo de gerao. Para
se ter uma idia desta dinmica, a infeco de
uma clula, com uma nica partcula infecciosa,
pode produzir uma prognie de mais de 100.000
novos vrions em pouco mais de 10 horas. Isso
corresponde a uma cpia do genoma produzida
a cada meio segundo. Considerando-se infec-
es de hospedeiros multicelulares ou mesmo
cultivos celulares as geraes se sucedem em
magnitude (nmero de indivduos produzidos)
e velocidade inimaginveis. Um ingrediente adi-
cional nesta complexidade a potencial variao
gentica da prognie. Nos vrus RNA, geralmen-
te ocorre uma mutao para cada 10.000 nucleo-
tdeos incorporados aos novos genomas, ou seja,
cada novo genoma potencialmente contm, pelo
menos, uma mutao e, em alguns casos, a gran-
de maioria da prognie pode ser distinta do vrus
parental. Esses eventos, em conjunto, proporcio-
nam uma grande capacidade de adaptao des-
sas populaes, resultando em novas geraes de
vrus com propriedades distintas das parentais,
de acordo com o ambiente em que replicam.
A gentica dos vrus possui implicaes
em todos os aspectos de sua biologia, incluindo
a evoluo e seleo de variantes adaptados ao
meio, distribuio espacial e temporal, espectro
de hospedeiros, patogenicidade e virulncia, in-
teraes com o sistema imunolgico do hospe-
deiro, entre outros. O estudo da gentica viral
tem como objetivos conhecer a composio gen-
tica do genoma e como as informaes genticas
nele contidas se reetem no fentipo do vrus.
Assim, o conhecimento da gentica viral pode ter
um amplo espectro de aplicaes, que vo desde
a sua utilizao para otimizar o manejo sanitrio
de um rebanho at a produo de recombinantes
atenuados para uso em vacinas.
A gentica viral clssica era baseada no iso-
lamento e anlise fenotpica de um grande n-
mero de mutantes naturais, estudos de comple-
mentao, recombinao natural, determinao
da ordem e posio dos genes no genoma e, nal-
mente, na anlise fenotpica dos mutantes para
determinar a funo dos genes. Notveis avanos
foram obtidos com o desenvolvimento dos culti-
vos celulares na dcada de 1950 e com o advento
das tcnicas moleculares a partir do nal dos anos
1970. Essas tcnicas permitiram a anlise detalha-
da da seqncia, estrutura e funo de cidos e
protenas virais e inauguraram uma nova etapa
90 Captulo 4
no estudo da gentica dos seres vivos. Embora
alguns procedimentos genticos clssicos conti-
nuem em uso, grande parte foi substituda por
mtodos modernos que permitem uma anlise
mais detalhada e aproximada das relaes entre
gentipo e fentipo.
A seqncia completa do genoma de vir-
tualmente todos os vrus de interesse humano e
animal j foi determinada e, atualmente, encon-
tra-se disponvel em bancos de dados de acesso
pblico. As funes de grande parte das prote-
nas virais tambm j foram estabelecidas, tanto
por mtodos diretos como por inferncia a par-
tir de seqncias de aminocidos e estrutura de
outras protenas semelhantes. De especial rele-
vncia para a Virologia o conjunto de procedi-
mentos denominados genericamente de genti-
ca reversa, que realizam a anlise fenotpica a
partir da composio gentica, ao contrrio da
gentica clssica. Assim, o conhecimento da ge-
ntica e a disponibilidade das tcnicas molecula-
res tm permitido a manipulao do genoma dos
vrus, a produo de recombinantes com muta-
es em genes especcos e o estudo do impacto
dessas mutaes no fentipo viral. Essas tcnicas
e conhecimentos adquiridos tm proporcionado
um progresso notvel na Virologia, permitindo
a identicao e manipulao de genes envolvi-
dos em virulncia e nas interaes com o sistema
imune, como, por exemplo, para a produo de
vacinas mais ecientes e seguras.
A seqncia completa de nucleotdeos do
genoma dos vrus pode ser determinada por tc-
nicas de seqenciamento de DNA. Em se tratando
de vrus RNA, a anlise e manipulao dos geno-
mas so facilitadas pela sua converso em mol-
culas de DNA complementar (cDNA) por meio
de transcrio reversa. Genomas recombinantes,
contendo delees de genes, inseres de genes
heterlogos ou mutaes pontuais em nucleot-
deos ou seqncias especcas podem ser obtidos
pelo uso de tcnicas moleculares de manipulao
enzimtica e clonagem de DNA. Vrus conten-
do genes de outros vrus de interesse podem ser
produzidos in vitro para estudos de patogenia,
usos em terapia gentica e em vacinas. Protenas
virais, para uso teraputico ou vacinal, podem
ser expressas em sistemas heterlogos. Essas so
apenas algumas aplicaes da tecnologia de DNA
recombinante e tcnicas moleculares em geral no
estudo da gentica e biologia dos vrus. Consi-
dera-se que os limites da manipulao gentica
dos vrus sero impostos apenas pelas restries
biolgicas, ou seja, ser possvel modicar tudo e
apenas o que a biologia permitir.
Este captulo abordar os principais meca-
nismos genticos e de evoluo das populaes
virais. Dentre esses, sero discutidos os meca-
nismos relacionados diretamente com as carac-
tersticas de replicao do genoma, como as mu-
taes; aqueles resultantes de interaes entre
diferentes vrus, como a recombinao, rearranjo,
complementao; algumas interaes entre vrus
e hospedeiros, como a integrao; e as interaes
no-genticas entre vrus. A seo de evoluo
abordar alguns aspectos e hipteses sobre a ori-
gem e evoluo dos vrus, e de como esses micro-
organismos conseguem se perpetuar e evoluir,
apesar das constantes restries impostas pelo
meio e pelas defesas dos hospedeiros. Ao nal,
sero apresentados alguns exemplos de evoluo
de vrus humanos e animais e as conseqncias
biolgicas nas interaes desses agentes com os
seus hospedeiros.
1.1 Conceitos e denies
Os princpios bsicos, conceitos e termino-
logia utilizados em gentica de vrus so basi-
camente os mesmos empregados no estudo da
gentica de outros organismos. Assim, eventos
como mutao, recombinao e seleo possuem
signicado semelhante quando aplicados aos v-
rus. A gentica viral, no entanto, possui algumas
particularidades que so derivadas das peculiari-
dades da biologia desses agentes. A replicao e
a conseqente expanso viral, por exemplo, um
processo muito mais rpido do que em outros or-
ganismos uni- ou multicelulares. Para se ter uma
idia dessa dinmica, a infeco de uma clula
por uma nica partcula vrica pode resultar na
produo de uma prognie de mais de 100.000
vrions em poucas horas. Considerando-se as in-
feces naturais em hospededeiros multicelula-
res vertebrados, por exemplo ou mesmo em
cultivos celulares, a populao derivada de um
Gentica e evoluo viral 91
nico progenitor se expande exponencialmente
em uma velocidade impressionante. Como resul-
tado, as geraes de vrus se sucedem a uma ve-
locidade incomparvel com aquela observada em
organismos multicelulares. Essa caracterstica faz
com que os vrus sejam muito utilizados como
modelo para estudos genticos e evolutivos.
Assim, quando se estuda os diversos aspec-
tos da biologia e gentica dos vrus, na verdade
est se estudando uma populao numerosa de
indivduos (vrions), e no um indivduo isolado
ou um grupo pequeno (como em estudos gen-
ticos em bovinos, por exemplo). Ento, quando
se refere a uma cepa ou um mutante viral, a refe-
rncia feita ao conjunto de unidades vricas que
compe aquela populao de vrus.
Quando se refere a um determinado vrus
vrus da cinomose (CDV), por exemplo est se
referindo a uma espcie viral. Uma espcie viral
denida como uma populao de vrus geneti-
ca e biologicamente muito semelhantes entre si,
derivada de ancestrais comuns. Assim como os
demais organismos uni- ou multicelulares, as di-
ferentes espcies virais ou os diferentes vrus
so compostos por inumerveis indivduos, que
podem ser mais ou menos semelhantes entre si.
Ou seja, a similaridade gentica e fenotpica entre
os vrus que compem uma espcie variam entre
as espcies. Os componentes de uma populao
de vrus RNA (vrus da inuenza, por exemplo)
so mais variveis entre si do que os vrus DNA.
Em outras palavras, as populaes de vrus va-
riam em sua homogeneidade/heterogeneidade,
sendo que os vrus RNA so mais variveis. Cabe
recordar que uma clula infectada com um ni-
co vrion pode produzir centenas de milhares
de novas partculas, no necessariamente idnti-
cas em suas seqncias de nucleotdeos. Assim,
uma amostra do vrus da diarria viral bovina
(BVDV), isolada no Brasil, provavelmente di-
ferente gentica e antigenicamente de amostras
isoladas em outras partes do mundo. Por outro
lado, os vrus DNA tendem a ser mais estveis
geneticamente e pouca variao encontrada en-
tre os vrus de uma mesma espcie. As diferenas
nos nveis de homogeneidade/heterogeneidade
entre os vrus DNA e RNA devem-se principal-
mente s propriedades das enzimas replicativas
desses vrus, que apresentam diferentes taxas de
erro ao replicarem os genomas.
Em razo da heterogeneidade gentica e fe-
notpica que pode existir em uma populao de
vrus de uma mesma espcie sobretudo em v-
rus RNA os estudos genticos geralmente so
realizados com vrus puricados. Atravs de clo-
nagem biolgica e posterior expanso dos clones
obtidos, possvel se obter populaes homog-
neas de vrus derivados de um nico ancestral.
Os vrus puricados (ou clonados) a partir de
populaes mistas so geralmente aqueles mais
abundantes e predominantes na populao, sen-
do, por isso, os seus verdadeiros representantes.
medida que esses clones so expandidos, no
entanto, a tendncia que a prognie viral se
torne gradualmente divergente geneticamente
devido gerao contnua de indivduos com
mutaes. Por isso, quando se deseja trabalhar
continuamente com populaes homogneas de
vrus, essas populaes devem ser periodicamen-
te clonadas.
Alm dos conceitos acima, algumas deni-
es so tambm necessrias para o entendimen-
to dos princpios de gentica viral, embora a sua
aceitao e terminologia nem sempre sejam uni-
versais. Cabe ressaltar que as denies a seguir
como j denido , referem-se aos vrus como
populaes, colhidas diretamente dos hospedei-
ros ou de cultivos celulares onde so multiplica-
dos:
Vrus de campo (wild-type): o vrus original
ou parental, a partir do qual se realiza estudos
biolgicos, genticos ou moleculares. Esta po-
pulao de vrus serve de base para as compa-
raes genotpicas e fenotpicas feitas com popu-
laes derivadas dela ou com outras populaes
da mesma espcie viral, porm de outra origem.
Embora a denominao remeta ao vrus original
que foi obtido de animais infectados, os vrus de
campo, utilizados em estudos biolgicos e genti-
cos, nem sempre so exatamente iguais queles
originalmente isolados. Isto porque a obteno de
ttulos virais compatveis com vrios estudos re-
quer a sua multiplicao, s vezes, por passagens
sucessivas em cultivos celulares ou em ovos em-
brionados. Esses ciclos sucessivos de replicao
podem resultar em alteraes genticas e fenot-
92 Captulo 4
picas no vrus. De forma ideal, os vrus de campo
utilizados em quaisquer experimentos devem ter
sido cultivados o menor nmero de vezes poss-
vel. O termo selvagem tambm tem sido utilizado
para designar os vrus de campo;
Mutante: o vrus que difere do vrus pa-
rental na seqncia de nucleotdeos de seu geno-
ma, ou seja, apresenta alteraes de bases e/ou
de segmentos genmicos em comparao com
o vrus de campo. Algumas mutaes no se re-
etem em alteraes fenotpicas e, por isso, so
chamadas de mutaes silenciosas (silent muta-
tions). Nesses casos, o fentipo do vrus mutante
indistinguvel do parental e a sua identicao
depende de anlise da seqncia do genoma. Por
outro lado, as mutaes que resultam em altera-
es fenotpicas podem ser detectadas pela ob-
servao e anlise das caractersticas fenotpicas
alteradas. Vrus temperatura-sensveis (TS), por
exemplo, so mutantes que no replicam bem
temperatura corporal (37-38C), ao contrrio do
vrus parental. Os vrus TS geralmente necessi-
tam uma temperatura mais baixa (30-34C) para
replicarem com ecincia. Mutantes de placa
pequena (small plaque mutants) so vrus que se
disseminam decientemente em cultivo celular,
produzindo focos menores de destruio celular
do que os produzidos pelo vrus parental. Esse
fentipo est geralmente associado com uma ca-
pacidade reduzida de transmisso direta entre
clulas. Mutantes de gama de hospedeiros (host
range mutants) so vrus que diferem dos vrus
parentais em relao ao espectro de hospedei-
ros que infectam in vivo, ou em relao aos tipos
celulares que podem infectar in vitro. O termo
variante usado para designar um determinado
vrus (uma populao de vrus) que apresenta al-
guma diferena fenotpica em relao ao vrus de
campo, ou seja, uma denio essencialmente
fenotpica. As diferenas fenotpicas entre os v-
rus parentais e os seus variantes certamente so
reexos de mutaes no genoma;
Cepa (ou estirpe): um vrus cujas carac-
tersticas biolgicas e/ou moleculares so razo-
avelmente conhecidas. Em contraste, uma amos-
tra (ou isolado) um vrus isolado de animais
sobre o qual no se tem um maior conhecimento.
Amostras (ou isolados) podem se tornar cepas
a partir da sua caracterizao laboratorial. Em
outras palavras, as cepas so alguns isolados ou
amostras de um determinado vrus que sofreram
caracterizao aps o seu isolamento. No entan-
to, essas denies no possuem utilizao uni-
versal, e o termo cepa , muitas vezes, utilizado
para designar isolados no-caracterizados e vrus
de campo.
O termo cepa de referncia utilizado para de-
signar cepas virais conhecidas que so utilizadas
por diferentes laboratrios com ns diagnsticos
e/ou produo de reagentes, vacinas e mesmo
para estudos de patogenia.

1.2 Mutao
O termo mutao utilizado para designar
alteraes na seqncia de nucleotdeos no cido
nuclico genmico de um determinado organis-
mo comparando-o com o seu parental. As mu-
taes surgem naturalmente como resultado da
indelidade das polimerases principalmente as
polimerases de RNA que incorporam nucleo-
tdeos incorretos durante a replicao do geno-
ma. Mutaes tambm podem ser induzidas por
mtodos qumicos (hipoxantina, bromodeoxiu-
ridina) ou fsicos (raios X, ultravioleta e gama).
Acredita-se que muitas mutaes que ocorrem
naturalmente resultam na produo de vrus in-
viveis, ou seja, constituem-se em mutaes le-
tais. Esses tipos de mutaes no so percebidas
e no possuem impacto na adaptao e evoluo
viral, pois os genomas mutantes so incapazes de
replicar. Logo, quando se faz referncia a mutan-
tes, cepas, tipos ou variantes virais, sempre so
consideradas as mutaes no-letais, que permi-
tem diferenciar o indivduo e a sua prognie do
vrus parental.
Como foi mencionado, as mutaes podem
ser espontneas (resultados de erros durante a
replicao) ou induzidas (resultados de danos
ao cido nuclico por agentes qumicos ou fsi-
cos). As mutaes naturais so mais freqentes
nos vrus RNA (um nucleotdeo incorreto entre
10
3
a 10
4
nucleotdeos inseridos) do que nos vrus
DNA (um erro a cada 10
8
a 10
11
nucleotdeos in-
corporados). A maior taxa de mutao observa-
da nos vrus RNA deve-se menor delidade da
Gentica e evoluo viral 93
polimerase de RNA, que incorpora nucleotdeos
incorretos com maior freqncia, alm da inca-
pacidade de corrigir os erros cometidos. As po-
limerases de DNA, por sua vez, cometem menos
erros e, ainda assim, so capazes de corrigi-los,
substituindo os nucleotdeos incorretos incorpo-
rados s cadeias nascentes.
Os mutantes gerados durante a replicao
viral, quando apresentam uma vantagem seletiva
em comparao com os parentais, sero ampli-
cados com maior ecincia e rapidamente tor-
nam-se predominantes na populao viral. Por
outro lado, mutantes que no apresentam van-
tagem seletiva tendem a permanecer em propor-
o pequena e ocasionalmente desaparecem da
populao, caso repliquem com menor ecincia
do que os demais indivduos. Ou seja, a evoluo
de uma determinada populao viral depende da
taxa de mutao e da seleo a qual os vrus gera-
dos so submetidos.

1.3 Classicao genotpica
Um dos critrios usados para a classicao
de mutantes baseia-se nas caractersticas genot-
picas da mutao. Mutaes causadas por simples
substituies de nucleotdeos so chamadas de
mutaes pontuais. As mutaes pontuais podem
ser do tipo transio, quando h substituio de
uma purina por outra purina (A ou G) ou pirimi-
dina por outra pirimidina (C ou T); ou transverso,
quando ocorre a substituio de uma pirimidina
por uma purina ou vice-versa. Outras mutaes
envolvem delees ou inseres de segmentos de
tamanhos variveis de cido nuclico.
Outra forma de classicao das mutaes
pontuais considera as suas conseqncias na
codicao de aminocidos, quando a mutao
ocorre em seqncias codicantes do genoma.
Assim, as mutaes podem ser silenciosas (silent
mutations) quando a troca do nucleotdeo no
resulta na codicao de outro aminocido. A
protena sintetizada permanece a mesma e no
ocorre mudana no fentipo do vrus. Mutaes
de sentido trocado (missense) so aquelas em que
a troca de nucleotdeos resulta na codicao
de outro aminocido. As conseqncias dessas
mutaes so variveis, dependendo do novo
aminocido incorporado protena e da possvel
alterao da conformao e/ou funo proti-
ca. Mutaes missense podem ser absolutamente
incuas (se o aminocido incorporado no alte-
rar a funo da protena) ou mesmo letais (se o
novo aminocido alterar drasticamente a funo
da protena codicada). Mutaes sem sentido
(nonsense) resultam na produo de um cdon de
terminao da traduo (stop codon) em uma se-
qncia aberta de leitura (ORF). Com isso, ocorre
a produo de uma protena truncada, cuja fun-
cionalidade pode variar amplamente, dependen-
do do local onde a mutao introduzida. Essas
mutaes so classicadas como mbar (amber =
UAG), ocre (ochre = UAA) ou opala (opal = UGA).
As conseqncias de mutaes nonsense tambm
variam amplamente, e muitas delas so prova-
velmente letais ou, pelo menos, deletrias para a
viabilidade do vrus.
Embora as mutaes e suas conseqncias
sejam mais estudadas em seqncias codicantes
de protenas, certamente tambm so importantes
em regies regulatrias de transcrio e replica-
o (promotores, enhancers, origens de replicao
etc.), e em seqncias nucleotdicas envolvidas
na encapsidao dos genomas recm-formados.
1.4 Classicao fenotpica
Os mutantes virais tambm podem ser clas-
sicados quanto s conseqncias fenotpicas de
suas mutaes. Vrias caractersticas fenotpicas
podem ser consideradas nesta classicao, e os
mutantes podem ser selecionados pela sua ha-
bilidade em produzir placas de lise celular; por
exemplo. Alguns mutantes de adenovrus podem
egressar precocemente da clula infectada, em
comparao com os seus parentais, e, conseqen-
temente, produzem maiores placas de destruio
celular in vitro. Essa caracterstica pode estar rela-
cionada com alteraes da virulncia do vrus, ou
seja, mutantes virais que produzem placas maio-
res in vitro podem possuir maior virulncia em
hospedeiros susceptveis in vivo. Este fenmeno
j foi observado em diversos vrus, incluindo o
vrus da peste suna clssica (CSFV). Em outros
casos, pode no existir uma correlao entre ta-
manho de placa in vitro e virulncia in vivo. Nes-
94 Captulo 4
ses casos, o fentipo serve apenas como um par-
metro para a seleo de mutantes com diferentes
habilidades replicativas in vitro.
Outro fentipo observado para a seleo
de mutantes a capacidade de replicao a di-
ferentes temperaturas. Como j mencionado, os
mutantes TS replicam bem a temperaturas de
30-34C (denominada temperatura permissiva) e
no replicam com ecincia a 37C (temperatu-
ra no-permissiva). Mutantes adaptados ao frio
(cold adapted) replicam melhor sob temperaturas
baixas, mas retm alguma capacidade de repli-
car a 37C. Freqentemente, essa caracterstica
atribuda a alteraes conformacionais de deter-
minadas protenas, especialmente as polimera-
ses virais, dependendo da temperatura. Ou seja,
pela mudana na sua seqncia de aminocidos
em determinada temperatura, essa protena no
manteria sua conformao secundria ou terci-
ria e perderia a sua funo. Esses mutantes po-
dem ser utilizados em vacinas atenuadas, pois
replicam apenas em reas superciais do corpo,
sem se disseminar sistemicamente no organis-
mo.
A alterao da gama de hospedeiros outra
caracterstica fenotpica utilizada na classicao
de mutantes. Alguns mutantes podem no repli-
car com a mesma ecincia nos mesmos hospe-
deiros que os vrus de campo, reduzindo, assim,
a sua abrangncia. Um exemplo tpico um mu-
tante do vrus da febre aftosa (FMDV) que surgiu,
em 1997, na Tailndia. Esse mutante natural no
possua a habilidade de infectar bovinos prin-
cipal espcie hospedeira do vrus infectando
apenas sunos.
Uma forma importante de seleo de mu-
tantes a resistncia a determinadas drogas. A
presso de seleo exercida pelas drogas antivi-
rais permite o seu uso para a seleo e pesqui-
sa desses mutantes. Anticorpos neutralizantes
tambm podem ser utilizados para a seleo de
vrus resistentes neutralizao. Para isso, os
vrus so cultivados in vitro na presena de an-
ticorpos neutralizantes. Os mutantes originados
que eventualmente no forem reconhecidos pe-
los anticorpos por alteraes nas protenas de
superfcie so rapidamente amplicados e se
tornam predominantes na populao. Esses vrus
so chamados de mutantes de escape antignico. A
gerao natural de mutantes de escape uma es-
tratgia utilizada por vrus que produzem infec-
es persistentes, sobretudo os retrovrus, pois
podem seguir replicando no hospedeiro mesmo
na presena de anticorpos.
Mutantes decientes em atividade enzim-
tica so aqueles que apresentam mutaes nos
genes que codicam determinadas enzimas,
como a timidina quinase dos herpesvrus. Esses
mutantes apresentam capacidade de replicao
semelhante a dos vrus parentais in vitro, mas a
sua virulncia atenuada quando so inoculados
em animais susceptveis. A exemplo dos mutan-
tes TS, esses vrus tambm podem ser utilizados
para a produo de vacinas. Os mutantes que
apresentam atenuao da virulncia, sem que ne-
cessariamente se conhea a causa, so conhecidos
como mutantes atenuados.
1.5 Taxa de mutao
As taxas de mutao natural dependem ba-
sicamente da delidade da enzima polimerase
e da sua capacidade de corrigir eventuais erros
cometidos durante a polimerizao das novas ca-
deias de cido nuclico. As polimerases de DNA,
que utilizam molculas de DNA como molde
para a sntese de novas molculas, geralmente
apresentam um sistema de correo (proofreading)
para aqueles nucleotdeos incorporados erro-
neamente. Esse processo envolve seqncias
funcionais especcas (motivos) com atividade
exonuclease, que so capazes de remover os nu-
cleotdeos incorretos e substitu-los pelos corre-
tos. Em contraste, as enzimas que polimerizam
RNA a partir de RNA no possuem a capacidade
de proofreading. Como conseqncia, as polime-
rases de DNA apresentam uma taxa de um erro
para cada 10
10
a 10
11
nucleotdeos incorporados,
enquanto as polimerases de RNA apresentam um
erro a cada 10
3
a 10
4
nucleotdeos. Isso signica
que a taxa de erros cometida durante a replicao
dos vrus RNA pode ser at um milho de vezes
maior do que aquela resultante da replicao dos
vrus DNA. A diferena nas taxas de mutao se
constitui na principal causa da grande variabi-
Gentica e evoluo viral 95
lidade gentica e antignica dos vrus RNA em
comparao com os vrus DNA.
Os erros de incorporao so essencialmen-
te randmicos, mas a sua deteco em mutantes
naturais indica que podem existir regies onde
h uma maior concentrao de erros, conhecidos
como pontos quentes (hot spots). Essas diferenas
esto relacionadas com a habilidade dos mutan-
tes sobreviverem com essas mudanas. Regies
mais conservadas so aquelas em que as muta-
es eventualmente introduzidas no se perpetu-
am na populao por provocarem efeitos delet-
rios aos novos gentipos.
1.6 Interaes genticas entre vrus

1.6.1 Recombinao
Classicamente, o termo recombinao uti-
lizado para designar um intercmbio de seqn-
cias genticas entre dois genomas. Esse processo
muito estudado em molculas de DNA e ocor-
re, com grande freqncia, na maioria das clu-
las eucariotas e procariotas. Alguns mecanismos
de reparo do DNA, por exemplo, baseiam-se em
eventos de recombinao gentica entre os cro-
mossomos homlogos. Mecanismos semelhantes
so observados em vrus DNA e parecem fazer
parte do seu processo evolutivo. Esse processo
envolve o alinhamento de duas molculas com
seqncias semelhantes, a clivagem da cadeia
contnua do DNA, o intercmbio de uma regio
do genoma e a religao da cadeia de DNA, ori-
ginando molculas hbridas ou recombinantes
(Figura 4.1). Por causa da necessidade do alinha-
mento de seqncias entre molculas semelhan-
tes, este processo denominado recombinao
homloga. Na biologia dos vrus, recombinaes
podem ocorrer entre dois vrus de uma mesma
espcie viral ou, ocasionalmente, entre o genoma
viral e o DNA da clula hospedeira.
A recombinao homloga parece ser co-
mum entre os vrus DNA e aqueles que apresen-
tam molculas de DNA intermedirias de sua
replicao, como os retrovrus. Em clulas infec-
tadas, esse processo realizado com o auxlio de
enzimas e fatores auxiliares do hospedeiro. Em
tese, a recombinao homloga pode ocorrer en-
tre o genoma do vrus e da clula e entre dois ge-
nomas virais. As conseqncias da recombinao
entre dois genomas virais variam de acordo com a
similaridade das seqncias recombinadas e com
o seu impacto no fentipo viral. Cabe ressaltar
que a recombinao entre dois vrus geralmente
ocorre entre vrus da mesma espcie e depende
de uma infeco concomitante por esses vrus.
Figura 4.1. Ilustrao simplificada da recombinao
homloga entre duas molculas deDNA.
Genoma A
Genoma B
Genomas recombinantes A/B
Pareamento e troca
de um segmento
Nos vrus RNA clssicos, esse evento mais
raro e, provavelmente, no utiliza enzimas celu-
lares. Os picornavrus e provavelmente outros
vrus RNA de genoma no-segmentado apre-
sentam uma forma de recombinao pouco e-
ciente e diferente da recombinao homloga. A
recombinao genmica desses vrus envolve o
mecanismo de escolha do molde (copy-choice). Nes-
ses casos, a polimerase de RNA inicia a sntese
da cadeia lha utilizando uma molcula de RNA
como molde, mas troca de molde durante a poli-
merizao, resultando em molculas hbridas de
RNA, com seqncias mistas derivadas de mais
de uma molcula molde (Figura 4.2).
96 Captulo 4
Alguns exemplos de recombinao de vrus
RNA na natureza servem para ilustrar as suas
possveis conseqncias. Um exemplo clssico
a recombinao entre RNA viral e seqncias
celulares (provavelmente de RNAs mensagei-
ros), alm de recombinaes intramoleculares,
que ocorrem durante infeces persistentes com
o vrus da diarria viral bovina (BVDV). Nesses
casos, o vrus que produz a infeco persistente
no-citoptico e replica continuamente no ani-
mal, muitas vezes sem conseqncias clnico-pa-
tolgicas. No entanto, eventos de recombinao
e/ou rearranjos genmicos, envolvendo o geno-
ma viral e seqncias celulares, ocasionalmente
resultam na gerao de mutantes citopticos. A
gerao desses mutantes no animal persistente-
mente infectado seguida do desenvolvimento
de doena fatal, denominada doena das muco-
sas. Os mutantes citopticos podem conter uma
variedade de mutaes, inseres e rearranjos
genmicos (Figura 4.3.). Casos de recombinao
pro
N
pro
N
C
Rns
E E1 E2 NS2-3
NS2-3
NS2-3
NS4-A
NS4-A
NS4-B
NS4-B
NS5A
NS5A
NS5B
NS5B
3
3
5
5
pro
N
pro
N
pro
N
pro
N
C
C
C
C
Rns
E
Rns
E
Rns
E
Rns
E
E1
E1
E1
E1
E2
E2
E2
E2
Ns2
Ns2
Ns3
Ns3
Ns3
NS4-A
NS4-A
NS4-A
NS4-B
NS4-B
NS4-B
NS5A
NS5A
NS5A
NS5B
NS5B
NS5B
3
3
3
5
5
5
A
D
E
B
C
Insero
Insero Duplicao
Duplicaes
Deleo
Figura 4.3. Ilustraode genomas dovrus da diarria viral bovina (BVDV) contendoalteraes genticas. A) Genoma
do vrus de campo no-citoptico; B-E) Genomas de mutantes citopticos gerados por recombinao gentica; B)
Genoma contendo uma insero de seqncia celular; C) Genoma contendo uma insero de gene celular e
duplicao do gene na protena NS3; D) Genoma contendo duplicaes dos genes N e NS3; E) Genoma defectivo
contendouma deleoqueabrange os genes das protenas estruturais e a NS2.
pro
Ns3
Genoma recombinante A/B
A polimerase
troca de molde
Genoma A
Genoma B
Figura 4.2. Ilustrao simplificada do modelo de
recombinaodeRNApelomecanismode . copychoice
Gentica e evoluo viral 97
de amostras de campo e cepas vacinais do BVDV,
com conseqncias diversas, tambm j foram re-
latadas.
Eventos de recombinao tambm tm sido
descritos nos togavrus e coronavrus, com con-
seqncias que incluem o surgimento de novos
vrus, apresentando espectro de hospedeiros e
virulncia alterados. No entanto, esses processos
ainda no esto totalmente elucidados. Provavel-
mente, h uma correlao direta com a estrat-
gia de replicao utilizada por esses vrus. At o
momento, no h evidncia desse tipo de recom-
binao em vrus com genoma RNA de sentido
negativo.
O mecanismo natural de recombinao tem
sido explorado em laboratrio, para a produo
de vrus recombinantes, com caractersticas de-
terminadas para usos diversos, incluindo estudos
genticos de virulncia e produo de vacinas.
1.6.2 Ressortimento
Esse mecanismo exclusivo dos vrus que
possuem o genoma RNA segmentado (ortomi-
xovrus, buniavrus, arenavrus, reovrus e bir-
navrus) e pode ocorrer quando h uma infeco
concomitante por duas cepas do mesmo vrus.
Nesses casos, os segmentos genmicos recm-
replicados so redistribudos de maneira irre-
gular na prognie viral, resultando em vrions
que contm uma mistura de segmentos dos dois
vrus parentais. Esse mecanismo tem sido bem
documentado nos vrus da inuenza e tem sido
responsabilizado pelo surgimento de cepas alta-
mente patognicas resultantes do ressortimento
entre vrus avirios e de mamferos (Figura 4.4).
Esses eventos ocorrem com maior freqncia em
sunos, que podem ser infectados tanto por vrus
avirios como por vrus de mamferos. De fato,
vrias cepas do vrus da inuenza que causaram
surtos em humanos e sunos podem ter resultado
de ressortimento entre vrus previamente exis-
tentes. Do ponto de vista evolutivo, o ressorti-
mento representa um importante evento para o
vrus, pois resulta em uma alterao gentica e
fenotpica muito rpida.
1.7 Outras interaes virais
1.7.1 Complementao
Esta interao puramente fenotpica e
funcional e no resulta de modicao do ge-
noma viral. Por exemplo, se dois mutantes TS,
determinados por mutaes em genes distintos,
infectarem concomitantemente uma clula, a ca-
racterstica fenotpica pode ser revertida e ambos
os vrus podem replicar a 37C, porm as carac-
tersticas genotpicas permanecem as mesmas.
Esse tipo de complementao do tipo intergni-
ca ou no-allica (nonallelic). Quando as mutaes
determinantes dos TS ocorrem no mesmo gene,
mesmo que com modicaes diferentes, pouco
provvel que ocorra complementao.
Com menor freqncia, a complementao
pode ser intragnica ou allica (allelic). Essa com-
plementao pode ocorrer quando o produto do
gene mutante origina uma protena com mlti-
plas subunidades, e as subunidades que so fun-
cionais podem complementar a decincia do
complexo nal.
Vrus parental A Vrus parental B
Prognie A Prognie B Prognie A/B
Figura 4.4. Ilustrao do mecanismo de ressortimento
entre dois vrus da influenza resultante de uma co-
infeco emsunos.
98 Captulo 4
O processo de complementao tambm
ocorre em determinadas populaes de vrus que
so submetidas a vrias passagens in vitro. Du-
rante esse processo, so gerados genomas defec-
tivos contendo delees em um ou mais genes.
Esses genomas defectivos no so capazes de
replicar autonomamente, pois no contm genes
que codicam protenas essenciais para a repli-
cao. A presena concomitante de um genoma
ntegro nas clulas infectadas, no entanto, permi-
te a complementao das funes ausentes nos
genomas defectivos e, assim, esses genomas so
continuamente replicados. Embora esse evento
seja bem caracterizado na biologia de vrios v-
rus in vitro, a sua ocorrncia e signicado biolgi-
co in vivo permanecem incertos.
1.7.2 Mistura fenotpica
Essa alterao caracterizada pela interao
entre dois vrus com a produo de prognie dis-
tinta dos vrus parentais. Os vrus resultantes so
caracterizados pela presena de diferentes deter-
minantes antignicos e as partculas virais pos-
suem componentes de ambos os vrus parentais
(Figura 4.5). Como a complementao, a mistura
fenotpica no envolve mudanas genticas na
prognie. Ou seja, os vrions resultantes possuem
componentes estruturais oriundos dos dois vrus
parentais, porm os seus genomas so idnticos
aos dos vrus parentais. A mistura fenotpica
pode ocorrer entre vrus da mesma famlia ou de
famlias diferentes.
Um exemplo de mistura fenotpica entre
famlias distintas ocorre entre membros da Rhab-
doviridae e Paramyxoviridae. Os vrus dessas duas
famlias possuem protenas distintas no envelo-
pe, porm com funes semelhantes e, quando
co-infectam uma determinada clula, podem re-
alizar a mistura fenotpica. H tambm a possibi-
lidade de produo de pseudovrions, quando o
nucleocapsdeo pertence a um vrus e o envelope
a outro (exemplo: nucleocapsdeo de retrovrus
e envelope de um rabdovrus). Nesse caso, o tro-
pismo dos vrus resultantes ser o mesmo dos ra-
bdovrus, enquanto a prognie formada ser de
retrovrus.
1.7.3 Poliploidia
A grande maioria dos vrus animais ha-
plide, ou seja, possui apenas uma cpia do ge-
noma nos vrions. Os retrovrus se constituem
em excees, pois os vrions contm duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). Porm, os
paramixovrus podem, ocasionalmente, apresen-
tar mltiplas cpias de seu genoma encapsi-
dados em mltiplos nucleocapsdeos em uma
nica partcula vrica, fenmeno denominado
poliploidia.
Existem descries de isolados do vrus do
sarampo que, ecientemente, produzem vrions
com, pelo menos, duas cpias do genoma. Essas
duas molculas de RNA so complementares e
possuem mutaes diferentes, existindo a neces-
sidade da presena das duas tas para ocorrer a
replicao.
Vrus parental A Vrus parental B
Co-infeco de
um hospedeiro
Prognie
Fentipo misto
Sem alteraes no genoma
Possvel: alterado
Resistentes neutralizao
Host range
Figura 4.5. Ilustrao da mistura fenotpica resultante da
co-infeco de uma clula por dois vrus diferentes. A
prognie viral pode conter vrus com fentipos mistos,
pormcomogenoma deumdos dois vrus parentais.
Gentica e evoluo viral 99
2 Evoluo viral
Quando se fala em evoluo, geralmente
se relaciona esse termo com um processo longo,
que ocorre durante milhes de anos. No entanto,
mesmo para os vrus muito antigos (alguns com
indcios de existncia por mais de 220 milhes de
anos), o processo de evoluo ocorre rapidamen-
te e permanente, em razo do grande nmero
de geraes produzidas em um curto espao de
tempo. As mudanas evolutivas dos vrus se pro-
duzem em questes de dias, e possvel avaliar
as suas conseqncias no fentipo viral em nvel
laboratorial. Essa capacidade de mudana possui
implicaes importantes na emergncia de novos
patgenos, como tem sido testemunhado duran-
te as ltimas dcadas, com a emergncia de vrus
como o da imunodecincia humana (HIV), o
parvovrus canino (CPV) e as mudanas peridi-
cas que capacitam os vrus da inuenza a iniciar
novas pandemias.
A evoluo viral tem sido tema de estudos
intensos nos ltimos anos e, conseqentemente,
tem permitido a compreenso dos seus mecanis-
mos e efeitos. Esta seo no pretende ser um tra-
tado exaustivo de um tema to complexo, apenas
se trata de um resumo geral, que inclui algumas
das teorias recentes sobre a origem dos vrus, sua
rpida capacidade de mudana, a maneira como
se estuda a evoluo em laboratrio e no campo,
as implicaes da evoluo viral na patognese e
aparecimento ou emergncia de novas enfermi-
dades. O conhecimento acerca dos mecanismos
utilizados pelos vrus para alterar as suas pro-
priedades genticas e fenotpicas pode permitir a
utilizao de manejos mais adequados dos surtos
e o planejamento mais efetivo de programas sani-
trios para o controle de infeces virais.
Todos os seres vivos evoluem com o decorrer
do tempo, mas a rapidez de evoluo dos vrus
RNA situa-se vrias ordens de magnitude acima
da velocidade de evoluo dos organismos cujo
genoma formado por DNA. Essa caracterstica
pode ser explicada pela indelidade e incapaci-
dade de correo das polimerases de RNA, o que
resulta em um nmero maior de erros durante a
replicao do genoma.
2.1 Origem dos vrus
O estudo da origem e evoluo dos vrus
realizado principalmente por alinhamento e com-
parao de seqncias de cidos nuclicos e pro-
tenas, anlises logenticas e por estudos das es-
truturas tridimensionais das enzimas e protenas
estruturais. Ainda que no exista uma evidncia
inequvoca que permita determinar quando se
originaram e com que rapidez evoluram, pode-
se armar que os diferentes vrus no possuem
uma origem comum e que vrios grupos deles
surgiram independentemente. Atravs dos anos,
tm-se proposto vrias teorias sobre a origem
desses agentes. A teoria regressiva prope que os
vrus evoluram por simplicao ou regresso
de parasitos intracelulares que perderam os ge-
nes requeridos para a replicao independente.
A teoria de origem celular defende que os vrus sur-
giram de componentes celulares que adquiriram
a habilidade de replicar de forma autnoma den-
tro da clula hospedeira. A teoria da co-evoluo
com as clulas muito favorecida na atualidade,
mas de difcil comprovao prope que tanto
os vrus RNA como os vrus DNA se originaram
de plasmdeos (cromossomos acessrios que re-
plicam independentemente do DNA celular).
Estes plasmdeos poderiam ter adquirido, prova-
velmente por recombinao com o genoma das
clulas hospedeiras, genes que permitiam a sua
transformao em elementos genticos com as
trs caractersticas bsicas dos vrus. Essas carac-
tersticas so: a) codicar mecanismos que per-
mitam a replicao intracelular; b) capacidade de
empacotar o cido nuclico em partculas vricas,
que so biologicamente inativas e relativamente
resistentes no meio extracelular; e c) capacidade
de ser transmitido entre clulas. Pode-se dedu-
zir, portanto, que antes de se converter em vrus,
esses plasmdeos j continham as funes neces-
srias para a sua replicao independente e que
alguns deles comearam a desenvolver parte da
maquinaria protica (polimerases) que permite
a replicao do seu material gentico. Posterior-
mente, teriam adquirido os genes que codicam
as protenas necessrias para empacotar o seu
genoma e transport-lo entre clulas. Teriam ad-
100 Captulo 4
quirido tambm um variado repertrio de prote-
nas, para uma melhor manipulao das funes
celulares, do sistema imunolgico do hospedeiro
e para a produo de uma prognie mais abun-
dante.

2.2 Quando se originaram os vrus
A dependncia de uma clula hospedeira
para a ocorrncia da replicao poderia impli-
car que os vrus se originaram depois das clu-
las eucariotas. No entanto, alguns elementos que
compem os vrus podem ter se originado antes
da evoluo celular. O genoma dos vrus RNA,
por exemplo, pode ter surgido nos primrdios
da vida, em um mundo constitudo por RNA e
que consistiria de molculas de RNA catalticas e
auto-replicativas.
Aparentemente, todos os vrus RNA se origi-
naram de um nico ancestral ou desenvolveram
solues comuns para problemas similares. A
anlise comparativa das seqncias de aminoci-
dos das polimerases dos vrus RNA (enzimas que
sintetizam cpias do genoma RNA) favorece a hi-
ptese de que o seu gene seja codicado por vrus
de procariotas e de eucariotas. Essa observao
indica que a molcula ancestral das polimerases
de RNA provavelmente se originou antes da di-
vergncia evolutiva em procariotas e eucariotas.
Outras superfamlias de enzimas comuns a todos
os vrus RNA e que, como as polimerases, apre-
sentam um alto grau de similaridade, tambm
reforam a hiptese de uma origem muito antiga
e monologentica dos vrus RNA. Essas super-
famlias so as helicases e algumas proteases se-
melhantes a quimiotripsinas.
2.3 Como os vrus ampliaram o seu
repertrio protico
Aps a aquisio dos genes bsicos que per-
mitiam a replicao e construo do capsdeo
viral contendo o genoma, os vrus continuaram
evoluindo e ampliando o nmero de genes do
seu genoma, para codicar novas protenas, e,
conseqentemente, adquirir novas funes e pro-
priedades evolutivas.
Um dos mecanismos utilizados para a aqui-
sio de novas seqncias a recombinao do
genoma viral com o cido nuclico de outros v-
rus ou das clulas hospedeiras. A recombinao
do genoma pode ocorrer entre vrus diferentes,
inclusive entre vrus que pertenam a famlias
distintas. Os vrus so muito ativos na obteno
de seqncias genmicas por recombinao com
outros vrus durante a sua evoluo, e essa ca-
racterstica tem dicultado a construo de rvo-
res logenticas nicas, que facilitem uma clas-
sicao lgica e nica. Como resultado dessas
recombinaes, vrus de grupos muito distintos
podem possuir genes relacionados e seqncias
homlogas.
A recombinao pode ocorrer entre regies
do prprio genoma viral (recombinao intra-
molecular), resultando em duplicao de genes,
delees e inseres, com a transformao em
novos genes. Assim, uma determinada seqncia
de nucleotdeos pode duplicar-se vrias vezes e,
dessa maneira, originar famlias de genes, como
ocorre nos poxvrus e no vrus da peste suna
africana (ASFV).
Os vrus tambm podem obter novos genes
mediante a sntese de uma nova seqncia de
nucleotdeos ou pelo uso de seqncias abertas
de leitura (ORFs; open reading frame) alternativas.
Combinaes desses mecanismos j foram descri-
tas, como a duplicao de um gene acompanhada
de mudana de ORF.
Esses processos de recombinao seguem
ocorrendo e podem ter conseqncias diversas
na biologia dos vrus, incluindo alteraes na
especicidade de hospedeiro, tropismo tecidual,
patogenicidade e virulncia, como tambm po-
dem resultar na emergncia de novos vrus.
2.4 Capacidade de mutao viral
O estudo das enzimas que catalisam a repli-
cao dos cidos nuclicos as polimerases tem
demonstrado que as polimerases de DNA celula-
res possuem uma alta delidade. Isto se deve, em
parte, capacidade dessas enzimas de remover
nucleotdeos inseridos equivocadamente. A taxa
de erro dessas polimerases tem sido calculada em
10
-8
a 10
-11
nucleotdeos por replicao. Isso sig-
nica que, em uma molcula de DNA de um bi-
lho de nucleotdeos polimerizados, apenas um
nucleotdeo errado ser incorporado. A taxa de
Gentica e evoluo viral 101
erro das polimerases virais de DNA 20 a 100
vezes maior.
Em contraste, as polimerases dependentes
de RNA no possuem mecanismos de correo,
e, por isso, a sua taxa de erro muito alta: entre
10
-3
a 10
-4
nucleotdeos/replicao. Portanto, cada
novo genoma RNA viral com 10.000 nt contm
uma mdia de trs mutaes pontuais (trs nu-
cleotdeos diferentes do genoma parental). Algu-
mas dessas mutaes podem ser prejudiciais aos
vrus, enquanto outras so neutras e no possuem
nenhum efeito. provvel tambm que algumas
mutaes introduzidas durante a replicao re-
sultem em benefcios para a replicao viral, con-
ferindo vantagens evolutivas aos vrus mutantes.
Uma mesma mutao pode ter efeitos diferentes
para um vrus, dependendo do meio em que se
encontre. Por exemplo, uma determinada muta-
o pode conferir vantagens para a replicao do
vrus em sunos, porm pode ser adversa para a
sua replicao em bovinos. Essas mutaes, que
ocorrem ao acaso, so mantidas ou descartadas
por meio dos processos de seleo natural por
conferir maior aptido biolgica. O conhecimento
das conseqncias dessas mutaes pode ser til
para a manipulao viral, pois possibilita o de-
senvolvimento de vacinas baseadas em variantes
virais atenuadas ou adaptadas a outras espcies.
Como cada novo genoma de RNA viral
sintetizado possui pelo menos trs mutaes,
as seqncias genmicas e os vrus individuais
produzidos continuamente so diferentes entre
si. Essa distribuio de indivduos no idnti-
cos, porm muito semelhantes, foi denominada
por Manfred Eigen como quasispecies. Portan-
to, os indivduos que compem uma quasispecie
apresentam pequenas variaes nas seqncias
genmicas, porm aqueles indivduos que apre-
sentam uma maior aptido biolgica e ecincia
de replicao tornam-se predominantes sobre os
demais e so produzidos em maior abundncia.
Apesar do polimorsmo existir em virtualmen-
te todos os seres vivos, o termo quasispecie viral
utilizado para enfatizar a grande variao que
os vrus componentes de uma mesma populao
exibem. Esse termo utilizado para os vrus RNA
pela sua grande variabilidade gentica. Assim
mesmo, os diferentes vrus RNA apresentam n-
veis variveis de variabilidade gentica.
A caracterstica das polimerases de intro-
duzir mutaes muito favorvel para os vrus,
permitindo a produo de mutantes que, even-
tualmente, possam se adaptar ao hospedeiro ou
a diferentes condies do meio. Em alguns casos
especcos, os vrus que possuem polimerases
com maior delidade apresentam decincias
em sua aptido biolgica. Isso sugere que a evo-
luo tende a conservar esta capacidade de erro
das polimerases, mas mantendo-as abaixo de um
limite denominado nvel de erro limite (threshold
error). Acima desse nvel no seria possvel a so-
brevivncia dos vrus como espcie.
Os vrus constituem a combinao da gran-
de diversidade de indivduos, com seqncias
diferentes e que possuem a propriedade de pro-
duzir prognie abundante. Como exemplo, o
vrus da poliomielite (um picornavrus) produz
uma descendncia de 10.000 indivduos em uma
nica clula infectada. A populao viral sofrer,
ento, um processo de seleo natural cada vez
que as condies do meio se alterem. Assim, os
indivduos com maior aptido para sobreviver
a essas novas condies se tornaro tambm os
mais abundantes.
A alta taxa de alteraes produzidas no ge-
noma dos vrus RNA o motor que permite a ex-
plorao rpida de novos espaos evolutivos. Em
outras palavras, as mutaes no genoma podem
reetir em mudanas de aminocidos e essas no-
vas combinaes de aminocidos podem gerar
novas estruturas proticas com propriedades e
funes inditas. Essas propriedades e funes
podem ser importantes para a adaptao do v-
rus a novos hospedeiros ou para escapar da vigi-
lncia do sistema imune, por exemplo.
importante tambm observar que a sele-
o natural faz parte do processo evolutivo. O
processo de seleo faz com que os indivduos
que contenham mutaes que favoream a sua
replicao em determinado meio produzam
maior descendncia e predominem na popula-
o. Por exemplo, uma mutao nas protenas do
capsdeo pode fazer com que um vrus escape da
neutralizao por anticorpos. Esses vrus que es-
capam da neutralizao sofrem um processo de
seleo quando infectam animais vacinados e,
com o tempo, passam a predominar e substituir a
populao viral original.
102 Captulo 4
2.5 Estudos laboratoriais de evoluo
O estudo da dinmica de evoluo dos vrus
RNA in vitro tem sido realizado principalmente
em bacterifagos e no vrus da estomatite vesi-
cular (VSV). A freqncia de recombinao do
VSV muito baixa e no detectvel. Esse fen-
meno permite que se utilizem duas populaes
virais competindo em clulas, sem que haja in-
tercmbio gentico entre elas. Caso se consiga
uma caracterstica ou marcador que identique
e diferencie essas populaes, possvel saber as
propores de cada populao ao longo de pas-
sagens seriadas em cultivos de clulas e avaliar a
aptido biolgica relativa de cada populao. Uma
caracterstica fenotpica utilizada nesses estudos
a resistncia (ou escape) neutralizao por
anticorpos, presente em uma das populaes,
devido a mutaes introduzidas pela polimerase.
Dessa maneira, foram isolados mutantes cujas se-
qncias consenso diferiam da seqncia da cepa
progenitora somente em um aminocido, sendo
resistentes neutralizao por um anticorpo mo-
noclonal especco. Quando a cepa progenitora e
a cepa resistente neutralizao so misturadas,
possvel determinar a proporo de placas pro-
duzidas por cada uma das cepas cultivadas na
presena ou ausncia do anticorpo monoclonal.
No cultivo com a presena do anticorpo, somente
so amplicados os vrus da cepa resistente neu-
tralizao, enquanto no cultivo sem anticorpos
so produzidas placas produzidas por vrus das
duas cepas. Dessa forma, possvel quanticar a
proporo de placas formadas por componentes
de cada cepa e determinar qual cepa apresentou
maior aptido biolgica.
Esses experimentos podem ser relacionados
com muitas observaes epidemiolgicas realiza-
das em populaes animais. As altas densidades
animais nas criaes intensivas requerem progra-
mas sanitrios especiais, pois, aps a introduo
de um patgeno, a aglomerao de animais fa-
vorece os ciclos de infeco iniciados com gran-
des populaes de vrus, e a evoluo viral con-
tribuiria para uma maior aptido biolgica. Em
contraposio, as baixas densidades de animais
na populao produzem indiretamente um gar-
galo gentico e, como conseqncia, os vrus so
mais benignos, alguns animais no adoecem e
podem desenvolver imunidade natural por con-
tato com o vrus de baixa aptido biolgica.

2.6 Exemplos de evoluo viral
Mesmo que a capacidade terica de muta-
o e explorao do espao evolutivo por parte
dos vrus parea ilimitada, a estrutura e funes
das diferentes protenas e cidos nuclicos desses
agentes, assim como as interaes com os hospe-
deiros, j sofreram um processo intenso e pro-
longado de otimizao da aptido biolgica. Por-
tanto, provavelmente h restries que limitem
a capacidade real de mudana. Por essa razo,
possvel que vrus isolados de uma mesma regio
com um grande intervalo de tempo sejam virtu-
almente idnticos. Ou seja, j teriam atingido um
gentipo/fentipo equilibrado e sucientemente
evoludo ou, por outro lado, j teriam esgotado a
sua capacidade de evoluo.
Quando se analisa a evoluo viral, pode-
se observar como os diferentes vrus utilizam
distintas estratgias evolutivas. Em seguida, so
apresentados alguns exemplos que ilustram essas
mudanas evolutivas que conduzem aquisio
de uma maior aptido biolgica, isto , produ-
o de prognie viral mais bem adaptada e mais
numerosa.
Existem vrus cujas mutaes facilitam a
sua adaptao ao meio e outros cujas alteraes
genticas alteram a sua virulncia. Existem tam-
bm aqueles que alteram as suas propriedades
antignicas para garantir seus ciclos contnuos de
transmisso e alguns que usam estratgias que
ampliam seu tropismo para outras espcies e/ou
tecidos. Todas essas alteraes ocorrem com o
objetivo nico de garantir a sobrevivncia e ma-
nuteno desses agentes na natureza.
2.6.1 Vrus da estomatite vesicular: tem-
po versus fatores ambientais
O vrus da estomatite vesicular (VSV) um
vesiculovrus pertencente famlia Rhabdoviridae.
O VSV infecta uma grande variedade de rumi-
nantes e sudeos domsticos e silvestres, causan-
do uma doena clinicamente semelhante febre
Gentica e evoluo viral 103
aftosa, caracterizada por febre e leses vesicula-
res na boca, focinho, patas e em regies do corpo
com abrases ou leses mecnicas.
As anlises logenticas de isolados do VSV
de vrias regies da Amrica Central e do Norte
tm demonstrado que as seqncias de cepas de
uma mesma regio geogrca apresentam um
alto grau de conservao, mesmo quando isola-
das a grandes intervalos de tempo (at 30 anos).
Essa caracterstica no observada para os vrus
isolados na mesma poca em diferentes regies.
A distribuio logentica mostra um melhor
agrupamento dos vrus por regies geogrcas. A
evoluo desse vrus depende de presses de se-
leo relacionadas com fatores ecolgicos, como
os vetores que transmitem o vrus e os animais
reservatrios que o mantm. Para esse vrus, no
foi detectada a evoluo por presso imunolgi-
ca seletiva, que muito evidente para o vrus da
inuenza, por exemplo.
2.6.2 Mixomatose na Austrlia
Muitos estudos clssicos demonstram a evo-
luo dos vrus nas populaes humanas e ani-
mais. Em um deles, observou-se como o vrus da
mixomatose dos coelhos evoluiu aps a sua intro-
duo na Austrlia. A mixomatose uma doena
produzida por um poxvrus, cujos hospedeiros
naturais so os coelhos americanos do gnero
Sylvilagus. Essa enfermidade conhecida desde
1896, e a transmisso ocorre mecanicamente por
insetos. Nos hospedeiros naturais, a infeco pro-
duz bromas localizados e benignos. Porm, ao
contrrio da enfermidade branda produzida nos
coelhos americanos, o vrus do mixoma produz
uma infeco letal nos coelhos europeus do gne-
ro Oryctolagus.
Nas primeiras dcadas do sculo passado,
coelhos europeus foram introduzidos da Aus-
trlia propositalmente e, como no existiam pre-
dadores naturais, esses animais se reproduziram
rapidamente, tornando-se uma praga para a agri-
cultura e pecuria. Assim, em 1950, um progra-
ma de controle biolgico dos coelhos com o vrus
da mixomatose foi aplicado naquele pas com o
objetivo de solucionar o problema da superpopu-
lao.
A cepa viral utilizada era oriunda do Brasil,
isolada pelo Instituto Oswaldo Cruz em 1911. Ini-
cialmente, a disseminao do vrus no foi ampla
e permaneceu restrita aos habitats onde era in-
troduzido, sem disseminao para ecossistemas
vizinhos. Porm, observaram-se, posteriormente,
centenas de coelhos doentes em locais muito dis-
tantes dos locais originais de introduo do vrus.
A doena se distribuiu principalmente pelas mar-
gens dos grandes rios, onde os mosquitos eram
mais abundantes. O vero seguinte foi mido, e a
enfermidade se disseminou rapidamente, resul-
tando em mortalidade de at 99%. No entanto,
no ano seguinte, observou-se que uma variante
menos virulenta do vrus estava gradativamente
substituindo a cepa original de alta virulncia.
A virulncia da cepa original e das cepas de
campo isoladas na Austrlia foi determinada em
coelhos de laboratrio e a cada isolado se atri-
buiu um grau de virulncia entre I e V. A cepa
original foi 100% letal em 11 a 13 dias aps a ino-
culao (virulncia grau I). Algumas das cepas de
campo produziram uma letalidade entre 70-95%,
com mdia de sobrevivncia de 17 a 20 dias (vi-
rulncia grau III). Outras cepas matavam menos
de 50% dos coelhos infectados e produziam uma
doena mais benigna (virulncia grau IV). Aps
dois anos, todos os vrus de campo recuperados
na Austrlia possuam grau III.
A seleo de cepas menos letais ocorreu em
conseqncia da transmisso do vrus para os
mosquitos, que foi prolongada para os vrus com
virulncia de grau III pela maior sobrevivncia
dos coelhos. Como conseqncia, os animais in-
fectados produziam vrus por mais tempo, dan-
do maior oportunidade aos mosquitos de se con-
taminar e transmitir a doena. Por outro lado, os
coelhos infectados com a cepa original de grau I
morriam rapidamente, e o ciclo de transmisso
era interrompido.
A populao de coelhos na Austrlia tam-
bm sofreu uma seleo para a resistncia mi-
xomatose. A nova gerao de coelhos descendeu
dos 10% da populao original que sobreviveu
doena. Durante sete anos, antes de comearem
os surtos de mixomatose na primavera, coelhos
jovens eram capturados nas reas endmicas
e mantidos em cativeiro at atingirem a idade
104 Captulo 4
adulta e os nveis de anticorpos maternos desa-
parecerem. Esses coelhos foram desaados com
uma cepa de virulncia grau III. A mortalidade
foi superior a 90% no primeiro ano e somente
30% no stimo ano.
Embora a mixomatose tenha sido introduzi-
da deliberadamente na Austrlia, pode-se consi-
derar que esse foi um caso de enfermidade emer-
gente. Humanos infectaram coelhos europeus
com o vrus da mixomatose, uma espcie na qual
o vrus produz uma doena muito mais severa. A
emergncia de uma enfermidade pode estar rela-
cionada com uma mudana evolutiva no agente
causal, porm a enfermidade pode emergir mes-
mo na ausncia de mutaes virais.
No caso da mixomatose na Austrlia, o vrus
evoluiu, reduzindo a sua virulncia. No entanto,
no h um consenso de que todos os vrus evo-
luem no sentido da atenuao. muito comum
se considerar que os vrus evoluem para uma
forma inofensiva para o seu hospedeiro, o que,
provavelmente, poderia ser melhor para o futuro
da populao viral. Aos parasitas interessa no
produzir muitos danos na populao hospedeira,
para que esses sobrevivam e permitam a sua am-
plicao e transmisso. Contudo, o xito evolu-
tivo de uma espcie depende essencialmente da
gerao de uma descendncia numerosa, e isso
no est necessariamente associado com atenua-
o da doena nos hospedeiros.
2.6.3 Vrus da inuenza
Os vrus da inuenza tm utilizado uma
srie de estratgias e alteraes evolutivas que
permitem a sua contnua circulao mesmo em
populaes com certo grau de imunidade. Exis-
tem razes evidentes pelas quais se estuda muito
esses vrus: ocorreram quatro pandemias de in-
uenza em um sculo e, na pandemia de 1918,
morreram entre 20 e 50 milhes de pessoas.
O vrus da inuenza um ortomixovrus,
possui envelope e seu genoma composto por
oito segmentos de RNA de sentido negativo, a
maioria dos quais codica somente uma prote-
na. O envelope viral possui duas glicoprotenas:
a hemaglutinina (16 tipos) e a neuraminidase
(nove tipos), e as cepas so designadas conforme
a composio da superfcie viral por estas prote-
nas (H3N2, H5N1, H3N8).
A hemaglutinina (HA) a protena que se
liga a molculas da superfcie celular que pos-
suem cido silico, que servem como recepto-
res para o vrus. A HA tambm a protena que
induz a produo de anticorpos neutralizantes
e protetores pelo hospedeiro. A neuraminidase
(NA) atua durante o egresso do vrus, clivando
o cido silico dos glicoconjugados e permitindo,
dessa maneira, que a prognie viral seja liberada
da clula.
Os vrus da inuenza so mestres nas mu-
danas genticas e antignicas. Ao se estudar os
diferentes isolados, so observadas variaes an-
tignicas pontuais e progressivas na HA. Essas
pequenas variaes denominam-se drift antig-
nico (pode ser traduzido como substituio ge-
ntica, principalmente por mutaes em ponto)
e permitem ao vrus reinfectar uma populao
parcialmente imune, que ainda possui anticorpos
produzidos por uma infeco recente, mantendo
o vrus circulante na populao. Contrastando
com essas variaes pequenas, as alteraes ra-
dicais na HA e NA denominam-se shift (troca),
e ocorrem pelo intercmbio dos respectivos ge-
nes entre dois vrus da inuenza quando estes
co-infectam um mesmo hospedeiro. Esses shifts
antignicos foram responsveis pelas pandemias
de 1957 e 1968, e acredita-se que so produzidos
periodicamente pela criao conjunta de aves e
sunos. Ao contrrio, os segmentos genticos do
vrus que causou a pandemia de 1918 se origi-
naram completamente de um ancestral avirio.
Alm do drift e shift, so detectadas inseres de
seqncias e outros mecanismos que permitem o
processamento proteoltico da HA, alterando o
tropismo tecidual e a patogenicidade.
Assim, os vrus da inuenza evoluem por
meio de dois mecanismos principais: mutaes
em ponto, que conferem pequenas alteraes an-
tignicas; e ressortimento, que proporciona gran-
des alteraes antignicas e/ou de virulncia. A
espcie animal que geralmente abriga os eventos
de ressortimento a suna, que pode ser infecta-
da tanto por vrus avirios como por vrus huma-
nos ou sunos.
Em 2005, foi publicado um artigo que des-
creve como o vrus que ocasionou a pandemia de
Gentica e evoluo viral 105
1918 foi recriado em laboratrio. O mais marcan-
te deste fato que esta pandemia ocorreu muito
antes da identicao do vrus da inuenza, que
somente foi isolado no princpio dos anos 1930.
Os segmentos genmicos de RNA do vrus foram
recuperados de amostras de pulmo xadas em
formalina, que estavam guardadas, e tambm de
tecidos de uma vtima da pandemia de 1918 que
havia sido enterrada na permafrost (terra perma-
nentemente congelada, no Alasca). Por meio de
metodologia de gentica reversa, foi possvel re-
criar o vrus em laboratrio e estudar algumas de
suas caractersticas. As seqncias dos genes do
vrus de 1918 so relacionadas com o vrus H1N1
avirio, mais do que com qualquer outro isolado
H1N1 de mamfero. Esses achados aumentaram
a preocupao atual com os casos de inuenza
de origem aviria pelo vrus H5N1, que pode
infectar humanos. At o momento, no h evi-
dncias de que este vrus possua a habilidade de
ser transmitido entre humanos, pois a replicao
viral connada ao trato respiratrio inferior e
provoca a morte de pessoas em poucos dias. Po-
rm, medida que o nmero de pessoas infecta-
das aumente, a probabilidade de mutaes que
permitam a transmisso entre humanos tambm
aumentar.
Os trs tipos de alteraes evolutivas descri-
tas, drift e shift antignico e inseres na hemaglu-
tinina conferem ao vrus da inuenza uma maior
aptido biolgica, uma vez que podem reinfectar
uma populao parcialmente imune ou ampliar
o tropismo tecidual, produzindo uma prognie
mais abundante.
2.6.4 Parvovrus canino
O parvovrus canino (CPV) surgiu subita-
mente como causa de enfermidade de ces na
dcada de 1970 e, em 1978, foi diagnosticado si-
multaneamente em vrios pases, causando enfer-
midade grave na populao canina. Este vrus se
originou a partir de um parvovrus j conhecido
anteriormente, o vrus da panleucopenia felina
(FPLV), por mutaes em ponto na protena VP2
do capsdeo, stio de ligao do vrion aos recep-
tores celulares. Assim, o novo vrus foi capaz de
infectar e, posteriormente, se adaptar a uma nova
espcie hospedeira.
Estudos das mutaes responsveis pelo
cruzamento da barreira entre espcies indicam
que mudanas em apenas dois cdons (posies
93 e 323) da VP2 do FPLV possibilitaram ao v-
rus infectar ces e linhagens celulares de origem
canina. Posteriormente foi demonstrado que as
mesmas substituies desses cdons no CPV pe-
los correspondentes do FLPV eliminam a predi-
leo do vrus pela espcie canina.
Como a populao canina no possua an-
ticorpos contra o novo agente, os primeiros seis
meses aps o surgimento do CPV foram seguidos
de uma pandemia mundial, que produziu gas-
trenterite hemorrgica grave com altos ndices de
mortalidade em ces. Esse agente foi denomina-
do CPV-2 e, nos anos seguintes, sofreu algumas
alteraes que permitiram uma adaptao maior
aos hospedeiros caninos, originando os bitipos
CPV-2a e CPV-2b. Um terceiro bitipo, o CPV-2c,
tem sido descrito na populao canina nos lti-
mos anos. Acredita-se que o CPV no perdeu a
sua capacidade inicial de infectar felinos, pois a
infeco natural tem sido demonstrada em gatos
domsticos. Os CPVs que existem atualmente cir-
culando na populao canina so menos virulen-
tos do que os originais, provavelmente reetindo
uma evoluo do vrus no sentido de se adaptar
aos novos hospedeiros.

2.7 Concluses
Os vrus so os mestres das mudanas e
evoluo gentica. importante conhecer as es-
tratgias que esses agentes utilizam para melhor
reconhecer enfermidades produzidas por vrus
emergentes e por vrus conhecidos que produ-
zam doenas atpicas. medida que se intensica
a explorao pecuria e se aumenta a densidade
dos animais, torna-se necessria a implementao
de programas sanitrios especiais que reduzam a
possibilidade de introduo de novos patgenos
nas criaes. importante considerar tambm
que todos os vrus so importantes, mesmo os
que aparentemente no produzem enfermida-
des no homem ou em animais, pois esses agen-
tes podem alterar a sua gama de hospedeiros e
produzir enfermidades devastadoras. Exemplos
recentes incluem a infeco de humanos, ces e
106 Captulo 4
felinos com novos subtipos do vrus da inuen-
za, o surgimento do SARS-CoV, que matou cen-
tenas de pessoas na sia e a inusitada infeco
de mamferos marinhos com variantes do CDV,
causando alta mortalidade no mar Mediterrneo.
Assim, tendo em vista a sua plasticidade e capa-
cidade de adaptao e evoluo, nenhum vrus
pode ser considerado sem importncia.
3 Bibliograa consultada
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1 Introduo
2 Conceitos bsicos: infeco, susceptibilidade, permissividade
3 Etapas da replicao
3.1 Adsoro
3.2 Penetrao
3.2.1 Penetrao por fuso na superfcie celular
3.2.2 Penetrao aps endocitose
3.2.3 Outros mecanismos de penetrao
3.3 Etapas aps a penetrao
3.3.1 Desnudamento
3.3.2 Movimentao intracelular
3.3.3 Penetrao nuclear
3.4 Expresso gnica
3.5 Replicao do genoma
3.5.1 Replicao dos vrus DNA
3.5.2 Replicao dos vrus RNA
3.6 Morfognese, maturao e egresso
3.6.1 Maturao intracelular (citoplasmtica ou nuclear)
3.6.2 Maturao por brotamento em membranas celulares
4 Bibliograa consultada
REPLICAO VIRAL
Eduardo Furtado Flores & Luiz Carlos Kreutz
5
109
109
110
111
114
114
114
117
118
118
118
119
119
121
122
126
131
131
132
134
1 Introduo
A produo de prognie gentica e fenotipi-
camente semelhante ao vrus parental se constitui
no evento central da existncia e perpetuao dos
vrus na natureza. Por isso, por uma viso evolu-
tiva simplista, a multiplicao dos vrus possui
uma nalidade nica e objetiva: produzir prog-
nie vivel. As alteraes da siologia celular, as-
sociadas com as infeces virais que podem re-
sultar em doena e at em morte do hospedeiro ,
so meras conseqncias das interaes do vrus
com as clulas; interaes que so absolutamente
necessrias para o agente atingir esse objetivo.
Os vrus so os organismos mais simples
que existem: os mais simples so compostos por
uma molcula de cido nuclico envolta por uma
camada protica. Quando esto fora de clulas
vivas, os vrus so estruturas qumicas, despro-
vidas de qualquer atividade biolgica. No pos-
suem metabolismo prprio, no so capazes de
produzir autonomamente nem os componentes
mnimos para a sua multiplicao. Por isso, ne-
cessitam utilizar as organelas e o metabolismo
celular para replicar o seu genoma e produzir as
protenas necessrias para a construo de novas
partculas vricas. Esses agentes s adquirem ati-
vidade biolgica dentro de clulas vivas. Mesmo
os vrus mais complexos e evoludos so depen-
dentes de processos biolgicos celulares para a
sua multiplicao. Por isso, os vrus so, tradicio-
nalmente, classicados como parasitas intracelu-
lares obrigatrios.
O termo replicao que em sua origem sig-
nica a sntese de molculas de cidos nuclicos
a partir de um molde tem sido universalmente
utilizado para designar o processo de multiplica-
o dos vrus como um todo e assim ser utiliza-
do neste texto. Este captulo abordar os aspectos
gerais da replicao dos vrus; os aspectos pecu-
liares de cada famlia sero abordados nos cap-
tulos especcos.
2 Conceitos bsicos: infeco,
susceptibilidade e permissividade
A palavra infeco deriva do latim infere, que
signica inserir, penetrar, introduzir. No entanto,
embora a penetrao (ou infeco, no signicado
estrito da palavra) seja uma etapa indispensvel
replicao viral, por permitir a introduo do
material gentico na clula, o termo infeco pos-
sui um signicado mais amplo em Virologia. A
penetrao do vrus na clula, por si s, no as-
segura a produo de prognie viral, pois outras
etapas intracelulares so necessrias. Por isso, o
termo infeco tem sido utilizado para denir o
processo replicativo do agente como um todo, in-
cluindo a penetrao e as etapas subseqentes da
replicao. A srie de etapas que inicia com a pe-
netrao e culmina com a liberao de prognie
viral tambm denominada ciclo replicativo.
Se todas as etapas da infeco forem com-
pletadas e resultarem na produo de prognie
viral vivel, a infeco dita produtiva. Se, aps
a penetrao, o ciclo replicativo for interrompido
em alguma etapa, a infeco dita abortiva. Sus-
ceptibilidade e permissividade so propriedades
complementares que denem a capacidade das
clulas de suportar as etapas da replicao viral.
Susceptibilidade refere-se capacidade das clulas
de serem infectadas naturalmente pelo vrus, en-
quanto permissividade refere-se s condies intra-
celulares para a ocorrncia da multiplicao viral.
Assim, as clulas que suportam o ciclo replicativo
completo, aps a infeco natural, so simulta-
neamente susceptveis (permitem a penetrao) e
permissivas (permitem a ocorrncia das etapas in-
tracelulares). Essas duas propriedades, no entan-
to, nem sempre ocorrem concomitantemente em
uma clula. Em algumas situaes, clulas per-
missivas podem ser no susceptveis infeco,
devido falta de receptores para a adsoro e pe-
netrao do vrus. Essas clulas somente podero
ser alvo de uma replicao produtiva se o mate-
rial gentico viral for introduzido articialmen-
te (i.e., por transfeco). Por outro lado, clulas
susceptveis infeco natural podem apresentar
um bloqueio intracelular em alguma etapa da
replicao, sendo denominadas no-permissivas.
Se esse bloqueio ocorrer aps algumas etapas do
ciclo, essas clulas so ditas semipermissivas. Para
simplicar, neste texto, o termo susceptibilidade
ser utilizado para denir a capacidade das clu-
las de suportar todas as etapas da replicao viral
aps a infeco natural.
110 Captulo 5
A susceptibilidade determinada pela inte-
rao de mltiplos fatores virais e celulares. Em
razo da complexidade dessas interaes, as es-
pcies animais (e tambm as clulas de cultivo)
apresentam uma ampla variao de susceptibili-
dade a diferentes vrus. O termo espectro de hos-
pedeiros (host range) utilizado para denir o con-
junto de espcies animais (host range in vivo) ou de
diferentes clulas (host range in vitro) que podem
ser infectados naturalmente por um determinado
vrus. O termo tropismo refere-se predileo do
vrus por determinadas clulas, tecidos ou rgos
do hospedeiro para se multiplicar. O principal
fator celular mas no o nico determinante
da susceptibilidade e do tropismo a presena
de molculas especcas na superfcie celular,
denominadas genericamente de receptores virais.
Os receptores virais so molculas da membrana
plasmtica que desempenham funes diversas
na biologia das clulas, das quais os vrus se utili-
zam para se ligar e iniciar a infeco.
3 Etapas da replicao
A multiplicao dos diferentes vrus apre-
senta vrias etapas em comum, apesar da di-
versidade estrutural, do tipo e da organizao
genmica e das diferentes estratgias de replica-
o. Essas etapas ocorrem de forma ordenada e
seqencial e envolvem interaes complexas en-
tre as protenas e o genoma viral com organelas e
macromolculas celulares. O ciclo replicativo de
todos os vrus inclui necessariamente as etapas
de adsoro, penetrao, desnudamento, expres-
so gnica (transcrio e traduo), replicao do
genoma, morfognese/maturao e egresso. Es-
sas etapas esto ilustradas esquematicamente na
Figura 5.1.
A maior parte dos conhecimentos sobre os
mecanismos biolgicos e moleculares da mul-
tiplicao dos vrus somente foi obtida a partir
do estabelecimento dos cultivos celulares. Aps
a inoculao do vrus em clulas cultivadas in
vitro, os cultivos so deixados em repouso para
que as partculas vricas iniciem gradativamen-
te a entrar em contato com a superfcie celular.
Essa etapa denominada adsoro. Imediatamen-
te aps a adsoro, os vrions penetram nas clu-
las e iniciam a infeco. A coleta e quanticao
do vrus presente no sobrenadante dos cultivos a
diferentes intervalos, aps a inoculao, permite
a identicao de trs fases: eclipse, maturao e
inativao (Figura 5.2).
Figura 5.1. Representao esquemtica do ciclo
replicativode umvrus DNA. 1) Adsoro; 2) Penetrao;
3) Desnudamento; 4) Transcrio dos genes virais; 5)
Traduo dos RNA mensageiros (mRNA) e produo
das protenas virais; 6) Replicao do genoma; 7)
Morfognese; 8-9) Egresso.
Ncleo
Citoplasma
1
2
3
4
6
7
5
8
9
Aps a remoo do material que foi inocu-
lado e durante um perodo varivel, apenas uma
pequena quantidade de infectividade pode ser
detectada no sobrenadante. Esse perodo em que
o vrus virtualmente desaparece denominado
eclipse e coincide com as fases iniciais da infeco.
A durao da fase de eclipse depende do ciclo re-
plicativo de cada vrus, que varia entre quatro a
seis horas nos picornavrus e mais de 40 horas em
alguns herpesvrus. A fase de eclipse seguida
por um perodo em que a prognie viral vai sen-
do produzida e gradativamente liberada pelas
clulas, acumulando-se no sobrenadante (Figura
5.2). Essa fase denominada maturao. Nos vrus
que produzem lise celular, a quantidade de vrus
no sobrenadante aumenta at atingir um plat,
que coincide com a perda da integridade funcio-
nal e estrutural das clulas. A partir da, o ttulo
viral no sobrenadante tende a decrescer gradati-
vamente dependendo do vrus devido ina-
Replicao viral 111
tivao da infectividade das partculas vricas e
perda da viabilidade das clulas. Essa fase de-
nominada inativao. Em infeces por vrus no-
lticos, as clulas podem produzir prognie viral
indenidamente, mas o balano entre a produo
e a inativao no permite que o ttulo viral no
sobrenadante aumente indenidamente.
rus, vrus da febre aftosa [FMDV]) enquanto ou-
tros podem utilizar receptores alternativos para
iniciar a infeco (exemplo: herpesvrus, alguns
togavrus). A capacidade de utilizar mais de um
receptor para iniciar a infeco pode representar
uma vantagem evolutiva, pois oferece a esses v-
rus a possibilidade de infectar diferentes tipos de
clulas e/ou hospedeiros.
Os receptores celulares para vrus so mol-
culas de membrana que desempenham funes
diversas na biologia celular e que, ocasionalmen-
te, servem para os vrus se ligarem e iniciarem
a infeco. Os receptores celulares para vrios
vrus animais j foram identicados (Tabela 5.1).
Na maioria dos casos, a presena dos receptores
determina o espectro de hospedeiros e o tropismo
do vrus. Conseqentemente, a presena e distri-
buio dos receptores tambm so determinantes
fundamentais da patogenia da infeco. O nme-
ro de receptores na superfcie de uma clula pa-
rece ser extremamente varivel. Essas molculas
podem ser raras e especcas de algumas clulas
ou abundantes e amplamente distribudas em v-
rias clulas.
Em alguns casos, as interaes entre as VAPs
e os receptores no so sucientes para permitir
o incio da infeco. Nesses casos, a interao dos
vrions com protenas adicionais da membrana
celular, denominadas co-receptores, necessria
para que ocorra a penetrao. Por exemplo, a in-
terao inicial dos adenovrus com a clula hos-
pedeira envolve a ligao da protena ber com
um receptor celular. Essa interao no su-
ciente para assegurar a penetrao, mas neces-
sria para que a protena viral penton interaja com
uma segunda molcula da membrana celular a
vitronectina e resulte em penetrao. O vrus
da imunodecincia humana (HIV-1) liga-se ao
receptor CD4 e utiliza como co-receptor um re-
ceptor de citocina. A interao inicial do vrus do
herpes simplex humano (HSV-1) com as clulas
mediada pela interao da glicoprotena gC (ou
gB) com o sulfato de heparina na superfcie celu-
lar. A fuso e penetrao, no entanto, dependem
de interaes secundrias entre a gD (e tambm a
gH) com outras molculas da membrana.
Eclipse Maturao Inativao
Inoculao
Horas
T

t
u
l
o
v
i
r
a
l
n
o
s
o
b
r
e
n
a
d
a
n
t
e
Figura 5.2. Fases da infeco por vrus lticos em cultivo
celular: eclipse, maturaoe inativao.
3.1 Adsoro
A primeira etapa da replicao a ligao
especca das partculas vricas na superfcie das
clulas hospedeiras evento denominado adsor-
o . Essa ligao mediada por protenas da
superfcie dos vrions (viral attachment proteins,
VAPs) que interagem com os receptores na su-
perfcie das clulas. Nos vrus sem envelope, a
funo de ligao exercida pelas protenas do
capsdeo; nos vrus envelopados, pelas glicopro-
tenas do envelope. Os receptores celulares para
os vrus so geralmente protenas (glicoprotenas)
ou carboidratos (presentes em glicoprotenas ou
em glicolipdios da membrana). Em comparao
com os receptores proticos, os carboidratos so
menos especcos, pois podem estar presentes em
uma variedade de molculas de membrana. Al-
guns vrus so estritamente dependentes de um
receptor especco (exemplos: rinovrus, poliov-
112 Captulo 5
Herpes simplex Herpesviridae
V

r
u
s
D
N
A
Sulfato de heparina/receptor homlogo
ao fator de necrose tumoral (TNF) e
fator de crescimentonNeuronal (NGF)
Fuso na membrana plasmtica
Pseudoraiva
Sulfato de heparan (HS),
proteoglicanos (HSPG) e coreceptores
Fuso na membrana
plasmtica
Adenovrus 2 Adenoviridae
Endocitose dependente
de clatrina
Vaccinia Poxviridae Fator de crescimento epidermal (EGF)
Membrana plasmtica e/ou
macropinossomo
SV-40 Polyomaviridae
Molculas do complexo maior de
histocompatibilidade (MHC)
classe I
Endocitose caveolar e/ou
retculo endoplasmtico
Papilomavrus
bovino
Papillomaviridae
Integrina -6 e molculas
semelhantes ao heparan
a
Endocitose dependente
de clatrina
Parvovrus
canino
Parvoviridae Receptor da transferrina Endossomos
Peste suna
africana
Asfarviridae nd
b
Endossomos
Famlia Vrus Receptor Viral Forma/local de Penetrao
Tabela 5.1. Receptores celulares e mecanismos depenetraodos principais vrus animais
.
Vrus elevador da
desidrogenase lctica
Arteriviridae
Molculas do complexo maior de
histocompatibilidade (MHC) classe II
Endossomos
Vrus da Hepatite dos
Murinos
Coronaviridae
Glicoprotena biliar dos murinos/
antgeno carcinoembriognico
Endossomos
Coronavrus
humano 229E
CD13 (Aminopeptidase) Membrana plasmtica
Vrus da influenza Orthomyxoviridae cido silico Endocitose dependente de clatrina
Vrus do sarampo Paramyxoviridae CD46 Membrana plasmtica
Semliki Forest Togaviridae Molculas do MHC classe II Endocitose dependente de clatrina
Vrus da diarria viral
bovina
Flaviviridae CD46 bovino Endossomos
Vrus da raiva Rhabdoviridae Receptor da neurotropina (p75NTR) Endocitose dependente de clatrina
Vrus Ebola e Marburg Filoviridae Receptor folato (FR- ) a a Caveola
HIV-1 Retroviridae CD4 e receptor de citocinas Membrana plasmtica
Vrus Hantaan Bunyaviridae Integrinas ( ) b
3
Endocitose dependente de clatrina
Vrus da febre aftosa Picornaviridae Integrinas ( ) a
v
Endocitose
nd Caliciviridae Endossomos
Reovrus Reoviridae
cido silico e molcula 1 de adeso
jjuncional (JAM 1)
Endossomos
nd
Rotavrus
Integrinas V 3 e protenas cognatas
do choque trmico (hscp70)
a b
Membrana citoplasmtica ( ) lipid rafts
V

r
u
s
R
N
A
* Adaptado de Klasse et al. (1998); de Pelkmans e Helenius (2003) e referncias selecionadas. CAR: receptor de virus
coxsackie B e adenovirus. nodeterminado.
a
b
Receptor para adenovrus e
vrus Coxsackie B (CAR)
Replicao viral 113
Em cultivo celular e provavelmente tam-
bm in vivo o contato de um vrion com uma
clula um evento que ocorre ao acaso. Ou seja,
a clula hospedeira no atrai a partcula vrica a
distncia. Uma vez em contato com a superfcie
da clula, componentes externos dos vrions in-
teragem quimicamente (interaes eletrostticas,
pontes de hidrognio etc.) com molculas da
membrana plasmtica, podendo resultar ou no
em penetrao e incio da infeco.
O processo de adsoro independente de
energia e do metabolismo celular e ocorre com
a mesma ecincia temperatura corporal ou a
4C. Embora seja de alta especicidade, a intera-
o de uma molcula de VAP com o receptor de
fraca intensidade e, isoladamente, no seria su-
ciente para proporcionar a ocorrncia das etapas
seguintes da penetrao. Para isso, necessria
a ocorrncia simultnea de dezenas ou centenas
dessas interaes. Ou seja, a adsoro viral na
superfcie celular um processo cooperativo, re-
sultante de mltiplas interaes entre protenas
da superfcie dos vrions com os seus respectivos
receptores.
Embora a adsoro dos vrions superfcie
celular seja a etapa inicial e indispensvel para o
incio da replicao, esse evento nem sempre re-
sulta em infeco produtiva. provvel que um
nmero muito grande de interaes entre vrions
e clulas no resulte em penetrao, seja pela au-
sncia de receptores especcos para o vrus, seja
pela debilidade dessas interaes. Partculas v-
ricas podem se ligar superfcie da clula e no
serem internalizadas. Outro cenrio possvel a
ligao, porm com internalizao e liberao do
nucleocapsdeo em compartimentos inadequados
para a replicao (p. ex.: lisossomos). possvel
tambm que vrions sejam internalizados em c-
lulas que no possuam os componentes necess-
rios continuao do ciclo. Resumindo, a ligao
dos vrions a molculas da membrana celular
uma etapa absolutamente necessria, porm nem
sempre suciente para garantir a continuidade
do ciclo replicativo.
Alm de proporcionar o contato inicial com
a clula, as interaes dos vrions com os recep-
tores tambm podem desencadear alteraes es-
truturais nas protenas de superfcie dos vrions.
Para alguns vrus (p. ex.: poliovrus), essas alte-
raes so absolutamente necessrias para a pe-
netrao, desnudamento e continuao do ciclo.
Por isso, alm de servir para a ligao inicial, os
receptores, para alguns vrus, podem ser necess-
rios para a desestabilizao das partculas vricas
e conseqente liberao do genoma no interior
da clula. Nos vrus envelopados, a ligao ao re-
ceptor pode induzir alteraes conformacionais
nas VAPs, que promovem a fuso do envelope
com a membrana celular. No caso do HIV-1, a
ligao do vrion ao receptor CD4 necessria
para estimular a capacidade fusognica da glico-
protena TM.
Em alguns casos, a ligao dos vrions aos
receptores tambm pode induzir sinais qumicos
intracelulares, que podem estar envolvidos na
facilitao da endocitose, no transporte intrace-
lular dos nucleocapsdeos e at mesmo na sobre-
vivncia da clula. Por outro lado, a penetrao
e a posterior replicao viral ativam mecanismos
imunolgicos de defesa, como a produo de in-
terferon do tipo I (IFN-I).
A distribuio dos receptores na superfcie
apical das clulas parece ser aproximadamente
uniforme. A penetrao dos vrions, no entanto,
parece ocorrer preferencialmente em alguns lo-
cais. Isso ocorre porque a ligao das partculas
vricas aos receptores acompanhada de movi-
mentos laterais dessas molculas, resultando na
aglomerao dos receptores em determinados lo-
cais. Esses locais so facilmente observveis sob
microscopia eletrnica (ME) e aparecem como
espessamentos da membrana plasmtica. Esses
espessamentos so decorrentes do acmulo de
uma protena denominada clatrina, envolvida em
sistemas de transporte intracelular por vesculas.
A aglomerao dos vrus que penetram por en-
docitose mediada por receptores, em determina-
dos locais, precede e promove a invaginao da
membrana, com a conseqente formao da ves-
cula endoctica contendo os vrions em seu inte-
rior. A endocitose mediada por receptores um
processo siolgico utilizado pelas clulas para
internalizar diversas molculas, das quais os v-
rus tiram proveito para iniciar a infeco.

114 Captulo 5
3.2 Penetrao
A penetrao a etapa subseqente ad-
soro e envolve a transposio da membrana
plasmtica, permitindo a introduo do nucleo-
capsdeo (genoma viral + protenas) no interior
da clula, local onde ocorrero a expresso gni-
ca e a replicao do genoma. A transposio da
membrana pode ocorrer na superfcie celular ou
j no interior do citoplasma, a partir de vesculas
produzidas por endocitose, fagocitose ou macro-
pinocitose. Dependendo da biologia do vrus, a
penetrao pode ocorrer sem prvia internalizao
(se ocorrer na superfcie celular) ou aps inter-
nalizao (se ocorrer a partir de vesculas intra-
citoplasmticas). No entanto, a internalizao de
vrions em vesculas endocticas no assegura a
ocorrncia de penetrao. A internalizao em
vesculas ou a penetrao direta so processos
que ocorrem imediatamente aps a ligao dos
vrions aos receptores da membrana plasmtica.
Ao contrrio da adsoro, a internalizao e
penetrao so processos dependentes de energia
e no ocorrem ecientemente a 4C. Uma forma
de sincronizar o incio da infeco viral in vitro
realizar adsoro a 4C durante uma hora (ocorre
adsoro sem penetrao) e, a seguir, transferir o
cultivo para 37C, quando ocorrer a penetrao
simultnea das partculas vricas adsorvidas.
As etapas iniciais da infeco viral tm sido
estudadas com o recurso da ME e com a utiliza-
o de qumicos que inibam a internalizao e/
ou a acidicao de vesculas intracelulares (i.e.,
endossomos). Dessa forma, quando a infeco
por um vrus prevenida por substncias inibi-
doras da endocitose, deduz-se que a sua pene-
trao dependa de prvia internalizao; quando
a infeco inibida por agentes que previnam a
acidicao dos endossomos, conclui-se que o
pH cido dessas organelas seja necessrio para a
penetrao.
Em geral, os vrus penetram nas clulas uti-
lizando um (ou alternativamente mais de um)
dos seguintes mecanismos: a) penetrao por
fuso na superfcie celular; b) penetrao aps
endocitose (mediada por clatrina, caveolina ou
agrupamentos de lipdios); c) fagocitose. Esses
mecanismos esto ilustrados na Figura 5.3.
3.2.1 Penetrao por fuso na superfcie
celular
Alguns vrus com envelope (p. ex.: retrov-
rus, paramixovrus e herpesvrus) penetram na
clula aps fuso do envelope com a membrana
plasmtica, evento que ocorre na superfcie celu-
lar (Figura 5.3A). A fuso resulta em um canal
entre o interior da partcula e o compartimento
citoplasmtico, atravs do qual o nucleocapsdeo
penetra no citoplasma. A fuso entre as membra-
nas do envelope e a plasmtica requer a ao de
protenas de fuso presentes no envelope dos v-
rions (p. ex.: glicoprotena TM nos retrovrus e F
nos paramixovrus). Nesses vrus, o mecanismo
de fuso ocorre sob pH neutro, ou seja, indepen-
de de acidicao, e, por isso, esses vrus so de-
nominados pH-independentes.
A membrana plasmtica no a nica bar-
reira que o nucleocapsdeo viral deve ultrapassar
para ter acesso aos locais intracelulares apropria-
dos para a replicao. Algumas clulas possuem
um citoesqueleto cortical espesso logo abaixo da
membrana plasmtica, o que impede o acesso de
ribossomos e outras organelas rea imediata-
mente adjacente membrana. Essas estruturas
tambm dicultam a progresso dos nucleocap-
sdeos at as regies mais internas da clula. No
obstante, os vrus que penetram por fuso na su-
perfcie celular desenvolveram estratgias para
superar esses obstculos e conseguir liberar os
seus nucleocapsdeos nos locais adequados.
3.2.2 Penetrao aps endocitose
Esse mecanismo caracterstico da penetra-
o de vrios vrus envelopados (p. ex.: avivrus
e ortomixovrus) e de alguns vrus sem envelope
(p. ex.: adenovrus, picornavrus e reovrus). A via
endoctica parece ser o caminho mais adequado
para a internalizao dos vrus, pelos seguintes
aspectos: a) a endocitose um processo siolgi-
co comum maioria das clulas; b) somente ocor-
re em clulas com transporte de membrana ativo,
evitando a penetrao em eritrcitos e plaquetas,
onde a infeco seria improdutiva; c) os vrions
podem se ligar em qualquer local da superfcie
celular para serem internalizados; d) a endocito-
Replicao viral 115
Figura 5.3. Principais mecanismos de penetrao dos vrus nas clulas hospedeiras. A) Penetrao na superfcie
celular, por fuso com a membrana plasmtica; B) Penetrao por fuso aps endocitose mediada por clatrina; C)
Penetrao por fuso aps endocitose mediada por caveolina; D-E) Penetrao aps endocitose mediada por
agrupamentos delipdios.
H+
H+
H+
H+
H+
H+
?
?
A
B
C
D
E
Meio extracelular
Citoplasma
Ncleo
Microtbulos
R
e
t

c
u
l
o
e
n
d
o
p
l
a
s
m

t
i
c
o
se assegura a internalizao e o transporte dos v-
rions aos locais de expresso gnica e replicao;
e) a penetrao a partir dos endossomos reduz os
riscos de deteco pelo sistema imunolgico, pois
no deixa protenas virais expostas na superfcie
celular; e f) o ambiente endossomal se acidica
gradativamente, o que auxilia na ativao dos
mecanismos de fuso e penetrao.
3.2.2.1 Endocitose mediada por clatrina
Os endossomos recobertos por clatrina so
vesculas de aproximadamente 100 nm de dime-
tro e se formam pela invaginao de pequenas re-
gies da membrana plasmtica revestidas inter-
namente por molculas de clatrina (clatrin-coated
pits). Quando examinadas sob ME, essas regies
116 Captulo 5
aparecem como espessamentos da membrana,
adjacentes aos locais de ligao dos vrions. Aps
a invaginao, o revestimento de clatrina remo-
vido e as vesculas trafegam em direo ao inte-
rior da clula. Nesse trajeto, o ambiente endos-
somal gradativamente acidicado por meio de
ATPases associadas membrana, que bombeiam
prtons H
+
para o seu interior. Nos endossomos
tardios e lisossomos, o pH pode atingir 5,0 a 5,5.
Dessa forma, os vrions internalizados por essa
via so submetidos reduo gradativa do pH.
Essa forma de penetrao a mais estudada e,
provavelmente, a mais importante entre os vrus
animais, sendo tratada com mais detalhes a se-
guir (Figura 5.3B).
Ao contrrio da fuso e penetrao dos v-
rus pH independentes, a fuso do envelope de
muitos vrus com a membrana celular s ocorre
sob pH baixo (5,5-6,5). Esses vrus so denomi-
nados pH-dependentes e no conseguem fusionar
e penetrar na superfcie celular sob pH neutro. A
acidicao progressiva dos endossomos propor-
ciona condies para a fuso do envelope com a
membrana endossomal, resultando na liberao
do nucleocapsdeo no citoplasma. Embora v-
rios vrus penetrem dessa forma, esse um me-
canismo particularmente bem caracterizado nos
vrus da inuenza. A protena de fuso desses
vrus (hemaglutinina, HA) tambm a protena
responsvel pela ligao aos receptores (cido si-
lico). Aps a ligao nos receptores, os vrions
so internalizados por endocitose. A acidicao
dos endossomos induz alteraes conformacio-
nais na HA que resultam na fuso do envelope
com a membrana do endossomo. O pH baixo nos
endossomos tambm facilita a dissociao dos
nucleocapsdeos do restante do envelope, resul-
tando na sua liberao no citoplasma. Nos vrus
pH-dependentes, a penetrao deve ocorrer no
momento apropriado, pois a acidicao excessi-
va que ocorre aps a fuso dos endossomos com
os lisossomos pode inativar o vrus. Drogas que
inibem a endocitose (xido de fenilarsina) ou im-
pedem a acidicao dos endossomos (monensi-
na, cloroquina e cloreto de amnia) previnem a
penetrao de vrus pH-dependentes.
Os vrus sem envelope transpem a mem-
brana pela formao de canais proteinceos na
membrana endossomal (picornavrus) ou por
lise/perturbao da integridade dessa membra-
na (adenovrus e reovrus). A acidicao pro-
gressiva dos endossomos e as interaes com a
membrana provocam alteraes estruturais e
desorganizao do capsdeo, podendo ocorrer a
dissociao de algumas protenas. Nos picorna-
vrus, o rearranjamento das protenas do caps-
deo induzido pelo pH baixo, leva formao de
aberturas atravs das quais o genoma transloca-
do para o interior do citoplasma. As partculas v-
ricas do reovrus, internalizados por endocitose,
sofrem alteraes estruturais e algumas protenas
do capsdeo so ativadas, tornando-se capazes
de lisar ou permeabilizar a membrana do endos-
somo. Dessa forma, permitem a penetrao dos
capsdeos semidesintegrados. Nos adenovrus, o
capsdeo sofre alteraes estruturais pela expo-
sio ao pH progressivamente baixo, resultando
na desorganizao da partcula e na ativao das
protenas bra e penton. Essas protenas partici-
pam da lise ou da permeabilizao da membrana
endossomal, permitindo a penetrao do com-
plexo nucleoprotena no compartimento intrace-
lular.
3.2.2.2 Endocitose mediada por caveo-
lina
As caveolas so pequenas invaginaes em
forma de cantil, que so formadas na membrana
plasmtica de diversos tipos de clulas. As caveo-
las podem ser internalizadas com auxlio da actina
e, at o presente momento, no h evidncias de
que o seu contedo seja entregue via endoctica,
ou seja, constituem um mecanismo independente
de internalizao. As caveolas internalizadas so
transportadas at a regio perinuclear, prxima-
ao retculo endoplasmtico (RE). Recentemente,
evidenciou-se que o vrus smio 40 (SV-40) utiliza
essa via para a internalizao e penetrao (Figu-
ra 5.3C). Aps a ligao aos receptores, os vrions
se deslocam lateralmente na superfcie celular
at serem capturados por caveolas. As caveolas
so, ento, circundadas parcialmente por bras
de actina, conferindo vescula uma aparncia
de cantil. Posteriormente, a vescula caveolar,
contendo os vrions, entregue aos caveossomos,
Replicao viral 117
que so organelas de pH neutro preexistentes no
citoplasma, ricas em caveolina e colesterol. Aps
algumas horas da infeco, os caveossomos libe-
ram tbulos membranosos repletos de vrions,
que trafegam ao longo dos microtbulos at o RE.
Posteriormente, as partculas virais deixam essa
organela, entram no citosol e penetram no ncleo
atravs dos poros nucleares. Essa via de penetra-
o parece no ser exclusiva do SV-40. Estudos
recentes com o vrus ebola (lovrus), poliomav-
rus e echovrus (picornavrus) tm sugerido um
mecanismo semelhante de penetrao.
3.2.2.3 Endocitose mediada por
agrupamento de lipdeos
Esngolipdeos e/ou glicoesngolipdeos e
molculas de colesterol podem se associar late-
ralmente e formar microdomnios na membrana
celular, denominados de lipid rafts (o termo raft
denota as toras de madeira utilizadas na constru-
o de jangadas). Esses microdomnios contm
protenas especcas e participam de funes
celulares, como o transporte de membrana, mor-
fognese e sinalizao celular. A internalizao
dessas estruturas independente do revestimen-
to por clatrina e caveolina. Os vrions internali-
zados por essa via so direcionados aos endos-
somos, a partir dos quais ocorre penetrao no
compartimento citoplasmtico. Essa via de pene-
trao tem sido sugerida para o SV-40, em clulas
que no contm caveolina, e tambm para alguns
picornavrus, papilomavrus e retrovrus (Figu-
ras 5.3D e 5.3E).
3.2.3. Outros mecanismos de
penetrao
3.3.3.1 Fagocitose
O papel da fagocitose na penetrao dos
vrus nas clulas hospedeiras ainda no est es-
clarecido. No entanto, partculas do vrus da in-
uenza j foram observadas em vesculas fagoc-
ticas, e os poxvrus possivelmente utilizam essa
via para a internalizao e posterior penetrao
celular. Aps a sua formao, os fagossomos se
fusionam com os endossomos e lisossomos e so
acidicados, potencializando a capacidade de fu-
so e penetrao dos vrions pH-dependentes.
3.3.3.2 Macropinocitose
A macropinocitose um processo celular
no especco (pode ocorrer na ausncia de ligan-
tes aos receptores) de internalizao de volumes
grandes de uidos e de regies de membrana.
Substncias internalizadas por essa via tambm
so direcionadas aos endossomos e lisossomos.
O vrus da vaccinia (poxvrus) pode penetrar por
essa via, uma vez que os seus vrions so muito
grandes para serem internalizados por endocito-
se mediada por clatrina. O vrus HIV tambm pa-
rece utilizar essa via para infectar macrfagos.
3.2.3.3 Translocao atravs da mem-
brana plasmtica
Esse um mecanismo pouco conhecido, pro-
vavelmente raro entre os vrus animais e parece
ocorrer somente com os vrus sem envelope.
3.2.3.4 Transferncia direta entre
clulas
Alm dos mecanismos especcos de pe-
netrao, alguns vrus podem ser transmitidos
diretamente entre clulas, sem a necessidade de
egresso e infeco de uma nova clula. Essa trans-
misso possvel pela insero de protenas vi-
rais na membrana lateral da clula. As protenas
virais produzem fuso entre as clulas vizinhas e
transferncia do material gentico do vrus para
a nova clula. Esse mecanismo de transferncia
direta (observada nos paramixovrus e poxvrus,
entre outros) permite ao vrus infectar novas c-
lulas sem se expor ao sistema imunolgico.
Como j mencionado, a simples internaliza-
o da partcula vrica no assegura que a repli-
cao ir ocorrer. O desnudamento e a entrega do
material gentico aos locais apropriados so ne-
cessrios para o prosseguimento do ciclo. Alm
disso, a clula deve apresentar as condies in-
tracelulares necessrias para a expresso gnica
e replicao do genoma. Sob ME, freqente a
118 Captulo 5
visualizao de vrions internalizados em clulas,
porm localizados em stios inapropriados para
o prosseguimento da replicao. Alguns desses
vrions podem ser eventualmente reciclados e
liberados na superfcie celular, podendo infectar
produtivamente outras clulas. A maioria, po-
rm, parece estar destinada inativao por pro-
cessos catablicos celulares.
3.3 Etapas aps a penetrao
3.3.1 Desnudamento
O termo desnudamento (do ingls uncoating)
refere-se serie de eventos que ocorrem imedia-
tamente aps a penetrao, em que os componen-
tes do nucleocapsdeo so parcial ou totalmente
removidos, resultando na exposio parcial ou
completa do genoma viral. A remoo das prote-
nas do nucleocapsdeo necessria para a exposi-
o do genoma s enzimas e fatores responsveis
pela transcrio (vrus DNA e RNA de cadeia
negativa) ou traduo (vrus RNA de cadeia po-
sitiva). No ciclo replicativo de alguns vrus, a re-
plicao do genoma ocorre aps o desnudamen-
to completo do genoma (poliovrus e avivrus).
Em outros vrus, a remoo parcial das protenas
do nucleocapsdeo j suciente para a ocorrn-
cia das etapas seguintes do ciclo (paramixovrus,
rabdovrus, ortomixovrus e reovrus). Portanto,
o desnudamento parece ter uma denio mais
funcional do que estrutural. A estrutura e com-
plexidade de cada nucleocapsdeo que determi-
na os passos subseqentes na replicao.
O produto do desnudamento depende da
estrutura do nucleocapsdeo. Nos picornavrus,
o resultado a liberao do RNA genmico to-
talmente desnudo, com uma protena de 23 ami-
nocidos (VPg) ligada covalentemente sua ex-
tremidade 5. Em alguns vrus (paramixovrus,
rabdovrus, arenavrus e ortomixovrus), o geno-
ma nunca totalmente desnudo. Os processos de
transcrio e replicao ocorrem com o genoma
recoberto por protenas (ribonucleoprotena).
Nos reovrus e poxvrus, a transcrio e a replica-
o do genoma ocorrem no interior de capsdeos
parcialmente desintegrados.
Nos vrus que penetram por fuso com a
membrana plasmtica, a remoo do envelope,
que ocorre pela fuso faz parte do desnuda-
mento. Em alguns vrus RNA de cadeia positiva
(togavrus), a remoo das protenas do nucleo-
capsdeo ocorre logo aps a penetrao, pela sua
interao com o RNA dos ribossomos. Nos vrus
pH dependentes, a acidicao dos endossomos
desencadeia a fuso e tambm pode facilitar a
dissociao das protenas do genoma. Isso resul-
ta na liberao do nucleocapsdeo ou do genoma
desprovido de protenas diretamente no citoplas-
ma. Nos herpesvrus, adenovrus e papovavrus,
o capsdeo permanece parcialmente ntegro aps
a penetrao, sendo transportado at as proxi-
midades do ncleo associado aos tbulos do ci-
toesqueleto. O desnudamento e a penetrao do
nucleocapsdeo no ncleo ocorre prximo aos
poros nucleares. Nos picornavrus, a acidicao
dos endossomos provoca alteraes conforma-
cionais no capsdeo que proporcionam interaes
de suas protenas com a membrana, resultando
na formao de aberturas atravs das quais o ge-
noma liberado no citoplasma.
O desnudamento torna o genoma acessvel
s enzimas e a outros fatores celulares respon-
sveis pelas etapas subseqentes da replicao.
Dependendo do tipo de genoma, as etapas que
se seguem ao desnudamento diferem entre os v-
rus.
3.3.2 Movimentao intracelular
Aps a penetrao, o genoma viral precisa
ser transportado at o local onde ocorrero a ex-
presso gnica e a replicao. A movimentao
dos vrions no citoplasma ocorre inicialmente
de forma passiva, no interior de vesculas endo-
cticas. Aps a penetrao, os nucleocapsdeos
podem interagir com os componentes do cito-
esqueleto ou com protenas transportadoras. Os
paramixovrus (que penetram na clula por fu-
so direta do envelope com a membrana celular)
e os picornavrus (que penetram atravs de poros
na membrana endossomal) no necessitam de
transporte intracelular antes de iniciar a sntese
de protenas, pois os ribossomos podem estar
Replicao viral 119
prximos ao local de penetrao. Outros vrus
penetram na clula em vesculas endocticas, que
se movimentam entre a densa cadeia de micro-
lamentos e entregam a sua carga aos locais apro-
priados. Os herpesvrus e retrovrus penetram na
clula por fuso do envelope com a membrana
plasmtica, e o genoma viral deve ser transpor-
tado at o ncleo para a replicao. Para iniciar
a transcrio reversa de seu material gentico, os
retrovrus interagem com lamentos de actina,
necessitam funes relacionadas miosina e dos
microtbulos. O HSV ultrapassa o crtex celular
(composto basicamente de actina) por mecanis-
mos ainda desconhecidos, e os nucleocapsdeos
so transportados at o ncleo associados com os
microtbulos. Os adenovrus e parvovrus tam-
bm so transportados por microtbulos at o
ncleo da clula hospedeira.
3.3.3 Penetrao nuclear
O ncleo o local de replicao da maioria
dos vrus DNA e tambm dos ortomixovrus. No
entanto, a presena da membrana nuclear repre-
senta uma barreira adicional progresso dos v-
rions ou dos nucleocapsdeos, pois os poros nucle-
ares permitem a passagem somente de partculas
com at 39 nm de dimetro. Conseqentemente,
o transporte dos nucleocapsdeos ou do genoma
at o interior do ncleo depende de interaes
especcas com componentes celulares. Vrions
pequenos, como os parvovrus (18-24 nm) e os
capsdeos do vrus da hepatite B (36 nm), podem
ser transportados intactos (ou semi-ntegros), por
meio de mecanismos citoplasmticos especializa-
dos (microtbulos, microlamentos e protenas
motoras), e, posteriormente, translocados atravs
dos poros nucleares por protenas especializadas.
Os vrions ou capsdeos maiores necessitam ser
previamente desintegrados ou deformados para
permitirem a introduo do genoma viral pelos
poros nucleares. O nucleocapsdeo do HSV, por
exemplo, transportado do crtex celular at o
ncleo ao longo dos microtbulos e liga-se, na
face citoplasmtica da membrana nuclear, por
meio de uma molcula denominada de importi-
na. Posteriormente ocorre uma abertura parcial
de um dos vrtices do capsdeo e a liberao do
DNA viral atravs do poro nuclear. O adenov-
rus tipo 2 transportado ao longo dos microt-
bulos at as proximidades do ncleo e liga-se a
lamentos dos poros nucleares. Aps, com o au-
xlio das importinas, e pela ligao com histonas,
ocorre a desmontagem do vrion e o DNA viral
translocado para o interior do ncleo.

3.4 Expresso gnica
A sntese de protenas virais pela maqui-
naria celular o evento central da multiplicao
dos vrus. O genoma viral codica diferentes
protenas que devem desempenhar pelo menos
trs funes bsicas: a) assegurar a replicao
do genoma; b) subverter funes celulares em
seu benefcio e c) empacotar os genomas recm-
replicados em novas partculas vricas. Os vrus
no possuem metabolismo prprio e so inteira-
mente dependentes da maquinaria celular para a
produo de suas protenas. Ou seja, as informa-
es genticas contidas no genoma dos vrus so
decodicadas em protenas virais pelo aparato
de sntese protica da clula hospedeira. Para uti-
lizar esse aparato para a produo de suas pro-
tenas, os vrus tiveram que evoluir de forma a
satisfazer algumas restries impostas pelas clu-
las hospedeiras. O ponto-chave desse processo
a sntese (ou apresentao) de mRNAs que sejam
adequadamente reconhecidos e traduzidos pelos
ribossomos. Dependendo da estrutura e organi-
zao genmica, os vrus de diferentes famlias
convergem para a produo de mRNA por dife-
rentes vias (Figura 5.4).
O aparato celular de transcrio (RNA poli-
merase II e fatores de transcrio) e de processa-
mento dos transcritos se localiza no ncleo das
clulas hospedeiras. A maioria dos vrus DNA
replica no ncleo e, assim, pode utilizar esses
mecanismos. Os genes desses vrus contm re-
gies regulatrias (promotores, enhancers) que
so reconhecidas pela RNA polimerase II (RNA-
polII) e pelos fatores de transcrio celulares. Os
transcritos (mRNA) produzidos contm a estru-
tura cap, so poliadenilados e alguns so subme-
tidos a splicing antes de serem exportados para
o citoplasma. Embora sejam vrus DNA, os po-
xvrus e asfarvrus replicam no citoplasma e so
independentes da maquinaria nuclear de sntese
120 Captulo 5
e processamento de DNA e RNA. Isso s pos-
svel porque esses vrus trazem, nos vrions, as
enzimas e fatores auxiliares para a transcrio e
processamento dos seus mRNA.
Os vrus RNA, com exceo dos retrovrus,
no dependem da maquinaria celular de transcri-
o e convergem para a produo de mRNA por
vias diferentes. Os retrovrus utilizam a maqui-
naria celular para a transcrio dos seus genes,
aps a integrao de uma cpia DNA do genoma
(provrus) nos cromossomos celulares. A transcri-
o resulta na produo de mRNA para a sntese
Vrus DNA Vrus RNA
Poxviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Polyomaviridae
Papillomaviridae
(Classe I)
Circoviridae
Parvoviridae
(Classe II)
Vrus que realizam
transcrio reversa
Hepadnaviridae
(Classe VII)
Retroviridae
(Classe VI)
Reoviridae
Birnaviridae
(Classe III)
Picornaviridae
Flaviviridae
Caliciviridae
Astroviridae
Coronaviridae
Arteriviridae
Togaviridae
(Classe IV)
Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Bunyaviridae
Filoviridae
(Classe V)
ssRNA
(-)
ssRNA
(+)
dsDNA ssDNA pdsDNA ssRNA
(+)
dsRNA
(+ / -)
Traduo
.dsDNA .dsDNA
ssDNA
dsDNA
1
2 3
mRNA
4 5 6 7
Protena
Figura 5.4. Estratgias de produo de RNAmensageiros (mRNA) e expresso gnica das diferentes classes de vrus.
Nos vrus da classe I, os promotores virais so reconhecidos por fatores celulares, e os genes so transcritos pela
RNApolII celular, resultando emmRNAs traduzveis pelos ribossomos (1). Nos vrus da classe II, o genoma DNAde
fita simples linear (parvovrus) ou circular (circovrus) , inicialmente, convertido em fita dupla e transcrito pela
RNApolII (2). Apenas as cadeias negativas dos vrus da classe III (genoma RNA de fita dupla) so transcritas pela
polimerase viral, originando os mRNA (5). O genoma dos vrus da classe IV (RNA fita simples de polaridade
positiva) pode ser diretamente traduzido, em toda a sua extenso (flavivrus, picornavrus) ou parcialmente (outros)
(7). Nestes, o restante dos mRNA so produzidos pela transcrio do RNA intermedirio pela polimerase viral. Nos
vrus da classe V, o genoma RNA de polaridade negativa transcrito pela polimerase presente nos vrions (6). Nos
hepadnavrus (classe VII), os mRNAso produzidos pela transcrio do DNAviral pela RNApolII e fatores celulares
(3). Nos retrovrus (classe VI), os mRNA so produzidos pela transcrio do provrus DNA (uma cpia do RNA
genmico) pelaRNApolII e fatores celulares, aps a integraodoprovrus aogenomacelular (4).
Fonte: adaptado de altimore 1971). B (
Replicao viral 121
protica e tambm de cpias de RNA genmico
que sero encapsidadas.
Os vrus RNA convergem para a apresenta-
o de mRNA traduzveis de duas formas: a) o
prprio genoma dos vrus RNA de sentido posi-
tivo serve de mRNA e parcial ou integralmente
traduzido pelos ribossomos. Nos vrus cujo geno-
ma parcialmente traduzido, os mRNAs, para a
sntese das protenas estruturais, so produzidos
pela transcrio do RNA de sentido antigenmi-
co, que produzido pela replicao do genoma;
b) os vrus RNA de sentido negativo trazem a
sua prpria RNA polimerase nos vrions. Assim,
no incio da infeco, essa enzima se encarrega
de transcrever o genoma viral, produzindo os
mRNA para a sntese protica. Nos vrus RNA
de cadeia dupla, a RNA polimerase trazida nos
vrions transcreve as cadeias genmicas negati-
vas em mRNA.
A maquinaria de sntese protica das clu-
las eucariotas (ribossomos e fatores auxiliares) se
localiza no citoplasma; somente traduz mRNA
monocistrnicos e que possuam a estrutura cap
na extremidade 5. Os mRNA dos vrus DNA que
replicam no ncleo so produzidos, processados
e exportados para o citoplasma pela maquinaria
da clula e, como tal, assemelham-se aos mRNA
celulares. Os mRNA do vrus DNA que replicam
no citoplasma (poxvrus, asfarvrus) so produzi-
dos e modicados no prprio citoplasma por en-
zimas virais, tambm semelhana dos mRNA
celulares. Para serem traduzidos diretamente,
os genomas dos vrus RNA de sentido positivo
possuem cap 5 (alguns avivrus, coronavrus,
arterivrus e togavrus) ou uma estrutura secun-
dria que permite o reconhecimento pelos ribos-
somos e o incio da traduo. Essa estrutura
denominada IRES (internal ribosomal entry site) e
est presente prxima extremidade 5 do geno-
ma dos picornavrus e de alguns membros da fa-
mlia Flaviviridae (pestivrus). Nos vrus RNA de
sentido negativo e RNA de cadeia dupla, a RNA
polimerase viral produz mRNAs com cap e cauda
poliA.
A maquinaria de traduo das clulas eu-
cariotas no capaz de traduzir mRNAs policis-
trnicos, ou seja, mRNAs que contenham mais
de uma ORF. A traduo de ORFs internas no
mRNA exige o reconhecimento de seqncias
especcas localizadas prximas ao cdon de
iniciao, mecanismo ainda no identicado em
eucariotas. Por isso, os vrus desenvolveram di-
ferentes estratgias de codicao de suas pro-
tenas: produo de mRNA monocistrnicos
(contendo uma ORF = um gene) ou produo
de mRNA policistrnicos. Os mRNAs policistr-
nicos contm uma nica e longa ORF que codi-
ca uma longa poliprotena. medida que vai
sendo traduzida, essa poliprotena clivada por
proteases celulares e/ou virais, dando origem s
protenas virais individuais. Do ponto de vista da
traduo, os mRNA que contm uma nica ORF,
que traduzida em poliprotena, comportam-se
como mRNAs monocistrnicos, pois a traduo
se inicia no primeiro cdon de iniciao e termina
no cdon de terminao. As protenas individu-
ais so geradas aps este processo, pela clivagem
enzimtica.
Alm de superar essas restries, os vrus
tiveram que desenvolver estratgias que os per-
mitam utilizar a maquinaria celular de traduo
em seu benefcio. Isso porque os mRNA celula-
res esto presentes em muito maior quantidade e
competem com grande vantagem em relao aos
mRNA virais. Dentre as estratgias virais utiliza-
das pelos vrus para competir pelo aparato celular
de traduo destacam-se: a) inibio da transcri-
o celular (vrus da estomatite vesicular, VSV);
b) inibio do processamento e/ou maturao e
exportao de mRNA celulares do ncleo (ade-
novrus, HIV); c) degradao de mRNA celulares
no ncleo (ortomixovrus, HSV) ou no citoplasma
(buniavrus); d) inibio seletiva da traduo de
mRNA celulares (poliovrus, FMDV); e) facilita-
o do processamento, transporte e traduo de
mRNA virais (HIV); g) alterao da especicida-
de de reconhecimento de mRNA para a traduo:
a traduo de mRNA que possuem cap inibida
e as clulas infectadas passam a traduzir mRNA
virais, que so reconhecidos pelos ribossomos
atravs da estrutura IRES (picornavrus).
3.5 Replicao do genoma
Dependendo do tipo e organizao genmi-
ca, os vrus podem utilizar diferentes estratgias
122 Captulo 5
para cumprir as etapas de expresso gnica e re-
plicao do seu genoma. Baltimore (1971) props
a classicao dos vrus em seis grupos, de acor-
do com o tipo de genoma, local e estratgia de
replicao. Essa classicao foi posteriormente
ampliada para contemplar novos vrus e estra-
tgias identicadas, resultando em sete grupos
ou classes (Tabela 5.2). A seguir sero abordados
os principais aspectos da replicao de cada um
desses grupos. Os detalhes da replicao dos v-
rus de cada famlia sero abordados nos captu-
los especcos.
3.5.1 Replicao dos vrus DNA
A replicao dos vrus DNA realizada pela
ao orquestrada da maquinaria da clula hospe-
deira associada com fatores codicados pelo v-
rus. A contribuio dos fatores virais na replica-
o desses vrus, no entanto, varia muito entre as
diferentes famlias. Em geral, os vrus DNA mais
simples (circovrus, parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
pois os seus genomas codicam poucos produ-
tos associados com funes replicativas. Por ou-
tro lado, os vrus DNA complexos (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquina-
ria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral.
A replicao da maioria dos vrus DNA
ocorre no ncleo da clula hospedeira. O genoma
desses vrus contm regies regulatrias que so
reconhecidas pela maquinaria celular de trans-
crio e, assim, podem utiliz-la para a produo
I DNA de cadeia dupla
Ib. Citoplasma
Ia. Ncleo
Polyomaviridae
Papillomaviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Poxviridae
Asfarviridae
II DNA cadeia simples Ncleo
Parvoviridae
Circoviridae
III RNA de cadeia dupla Citoplasma
Reoviridae
Birnaviridae
IV
RNA de cadeia simples,
sentido positivo
Citoplasma
Flaviviridae
Picornaviridae
Va. Ncleo
IVa.Traduo integral
do genoma
IVb.Traduo parcial
do genoma; mRNAs
subgenmicos
V
RNA de cadeia simples,
sentido negativo
Orthomyxoviridae
Bornaviridae
Vb. Citoplasma
Bunyaviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Paramyxoviridae
Filoviridae
VI
RNA de cadeia simples e
intermedirio DNA
Citoplasma/ncleo Retroviridae
VII
DNA de cadeia parcialmente
dupla e intermedirio RNA
Ncleo/citoplasma Hepadnaviridae
Classe Genoma Local de replicao Famlias
Astroviridae
Caliciviridae
Togaviridae
Coronaviridae
Arteriviridae
Tabela 5.2 Classificao dos vrus de acordo com o tipo de genoma, local de replicao e estratgia utilizada para
produzir os mRNAs.
Fonte: adaptado de altimore 1971). B (
Replicao viral 123
dos mRNA necessrios sntese de suas prote-
nas. Em diferentes graus, esses vrus tambm
utilizam enzimas e fatores celulares para o meta-
bolismo de nucleotdeos, para a sntese de DNA
e replicao do genoma.
Os poxvrus e asfarvrus se constituem em
excees, pois trazem, nos vrions, as enzimas e
fatores necessrios para a transcrio e modica-
o dos mRNA e codicam as enzimas e fatores
requeridos para a replicao do genoma. Mesmo
assim, so dependentes da maquinaria celular de
sntese protica. A replicao desses vrus ocorre
inteiramente no citoplasma.
O mecanismo de replicao do genoma
tambm apresenta diferenas entre as famlias,
devido a peculiaridades de estrutura, topologia
e organizao genmica. A replicao do geno-
ma circular de ta dupla dos poliomavrus, por
exemplo, realizada quase que exclusivamente
por enzimas e fatores celulares. A sntese das no-
vas cadeias utiliza um primer de RNA e ocorre de
forma bidirecional e semidescontnua, a exemplo
da replicao do DNA celular. A replicao dos
genomas DNA de ta simples (circovrus e parvo-
vrus) tambm envolve a participao predomi-
nante de fatores celulares e se inicia com a sntese
da ta complementar. Nos parvovrus, a prpria
extremidade 3 do genoma serve de primer para
o incio da replicao. A replicao do genoma
linear de ta dupla dos adenovrus se inicia com
um primer de protena, ocorre de forma contnua
e em duas etapas. Apenas uma das cadeias re-
plicada em cada etapa. A replicao do genoma
dos herpesvrus e poxvrus mais complexa e
envolve a participao de vrios fatores codica-
dos pelo genoma viral. Os herpesvrus parecem
replicar o seu genoma por um mecanismo de cr-
culo rolante, no qual a replicao inicia-se aps a
circularizao do genoma e resulta na produo
de multmeros, que so posteriormente clivados
em unidades genmicas. A replicao do genoma
dos hepadnavrus inclui uma etapa de transcri-
o reversa, na qual um RNA produzido a partir
do DNA genmico convertido em DNA de ta
simples e, posteriormente, em DNA de ta du-
pla.
As etapas do ciclo replicativo dos diferentes
grupos de vrus DNA esto ilustradas esquema-
ticamente nas Figuras 5.5 a 5.8 (a forma de apre-
sentao das etapas de replicao foi adaptada de
ROIZMAN e PALESE, 1996).
Genoma dsDNA DNA Prognie
Replicao
Morfognese
mRNA
Protenas
iniciais (NS)
Morfognese
Vrions
3
Egresso
Traduo
Protenas tardias
(estruturais)
Transcrio
genes iniciais
1
2
4
5
6
6
mRNA
Traduo
Transcrio
genes tardios
Figura 5.5. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ia ( ).
Os genes iniciais so transcritos antes da replicao do genoma (1) e geralmente codificam protenas no-estruturais
(NS) envolvidas nas etapas seguintes da replicao (2). Essas protenas, isoladamente ou em conjunto com fatores
celulares, atuam na replicao do genoma (3). Os genes tardios so transcritos aps a replicao do genoma (4) e
codificam protenas estruturais em sua maioria (5). As protenas estruturais so importadas para o ncleo, onde
ocorre amorfognese (6).
Adenoviridae, Herpesviridae, Polyomaviridae e Papillomaviridae
124 Captulo 5
3.5.1.1 Vrus da classe Ia
Os genes desses vrus so transcritos pela
maquinaria celular de transcrio, pois possuem
as regies regulatrias (promotores, enhancers),
que so reconhecidas pela RNApolII e pelos fato-
res de transcrio da clula hospedeira. Os genes
so classicados em duas ou mais classes e so
transcritos seqencialmente sob regulao tem-
poral restrita. Os genes iniciais (immediate-early e
early nos herpesvrus; early nas demais famlias)
so transcritos logo aps a penetrao na clula e,
geralmente, codicam protenas no-estruturais
que possuem funes regulatrias sobre outros
genes e tambm enzimas e fatores envolvidos na
replicao do genoma. A replicao do genoma
dos poliomavrus e papilomavrus realizada
quase que exclusivamente por fatores e enzimas
celulares; j os herpesvrus e adenovrus codi-
cam vrias protenas com funes replicativas
(DNA polimerase, protena de ligao no DNA,
helicase e quinases de nucleotdeos). Os genes
tardios so transcritos aps a replicao do geno-
ma e codicam principalmente protenas estrutu-
rais e/ou protenas envolvidas na morfognese.
Algumas protenas no-estruturais (NS), que so
necessrias nos estgios iniciais do prximo ciclo
de infeco, tambm so produzidas nessa etapa
e incorporadas na prognie viral (Figura 5.5).
3.5.1.2 Vrus da classe Ib
Os poxvrus e asfarvrus realizam o seu ciclo
replicativo inteiramente no citoplasma. Para isso,
trazem, nos vrions, as enzimas e fatores necess-
rios para a transcrio dos seus genes e proces-
samento dos transcritos. O genoma desses vrus
codica vrios produtos que atuam no metabo-
lismo de nucleotdeos e na replicao do genoma
(DNA polimerase, helicase, protena de ligao
no DNA e quinase de timidina), que, portanto,
realizada predominantemente por enzimas e
fatores virais. A expresso gnica ocorre em trs
etapas principais: inicial, intermediria e tardia.
Os genes iniciais so os primeiros a ser expres-
sos, e os seus produtos possuem funes diver-
sas, incluindo a concluso do desnudamento, a
replicao do genoma e ativao da transcrio
dos genes intermedirios. As protenas inter-
medirias atuam principalmente na ativao da
transcrio dos genes tardios, cujos produtos so
predominantemente protenas estruturais e/ou
que participam da morfognese da prognie viral
(Figura 5.6). Esses vrus codicam vrios produ-
Genoma DNA
(encapsidado)
DNA
livre
mRNA
intermedirios
Protenas
intermedirias
5
6
3
Egresso
mRNA iniciais
1 Transcrio
inicial
2
Protenas
iniciais (NS)
DNA prognie
7
8
mRNA
tardios
Protenas
tardias
4
9
9
Vrions
Traduo
Traduo Traduo
Transcrio Transcrio Morfognese
Morfognese
Replicao
Figura 5.6. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ib ( ). Os genes iniciais so transcritos pela
RNA polimerase viral ainda com o DNA parcialmente encapsidado, resultando nos mRNAs (1) que so traduzidos
nas protenas iniciais (2). Essas protenas participamdo desnudamento completo do genoma (3), na sua replicao (4)
e na transcrio (5) dos genes que codificam as protenas intermedirias (6). Estas protenas esto envolvidas na
transcrio dos genes tardios (7), que codificam principalmente protenas estruturais (8). Estas protenas participam
damorfognese dos vrions, juntamentecomoDNArecm-replicado(9).
Poxviridae e Asfarviridae
Replicao viral 125
tos que interferem com a resposta do hospedei-
ro infeco, dicultando o reconhecimento das
clulas infectadas pelo sistema imunolgico do
hospedeiro.
3.5.1.3 Vrus da classe II
A replicao do genoma dos parvovrus e
circovrus realizada predominantemente por
enzimas e fatores da clula hospedeira. A primei-
ra etapa da replicao a sntese da cadeia com-
plementar de DNA. O DNA de ta dupla (linear
nos parvovrus, circular nos circovrus) , ento,
transcrito pela RNA polII celular, originando os
mRNAs para a sntese de protenas virais. A re-
plicao dos parvovrus est intimamente asso-
ciada com a fase S do ciclo celular, demonstran-
do a dependncia de fatores celulares presentes
nesta fase. O genoma dos parvovrus replicado
de forma contnua, a partir de uma 3-OH loca-
lizada na extremidade do hairpin, formado pelo
pareamento das regies complementares termi-
nais. A sntese da nova cadeia seguida pelo des-
locamento da cadeia original, originando conca-
tmeros, que sero posteriormente clivados para
originar os monmeros de extenso genmica.
Os parvovrus encapsidam predominantemente
cpias de DNA de sentido negativo (aquelas que
sero transcritas), mas algumas espcies podem
encapsidar tambm cpias positivas e, ocasional-
mente, uma mistura das duas (Figura 5.7).
3.5.1.4 Vrus da classe VII
A replicao do genoma dos hepadnav-
rus envolve uma etapa de transcrio reversa e
ocorre parte no ncleo e parte no citoplasma. No
ncleo, o genoma de cadeia dupla parcial con-
vertido em um crculo covalentemente fechado
(ccc) por fatores celulares e virais e, subseqen-
temente, transcrito pela RNApolII celular. Alm
dos mRNA para a produo das protenas virais,
a transcrio produz RNAs com a extenso do
genoma (pgRNA). Esses pgRNAs serviro de
molde para a transcrio reversa, que realizada
pela polimerase viral, e ocorre no interior de cap-
sdeos pr-formados no citoplasma. A sntese da
cadeia complementar de DNA inicia em seguida,
mas interrompida por ocasio do egresso dos
vrions. Com isso, as partculas vricas contm
uma molcula de DNA de ta parcialmente du-
pla (Figura 5.8).
Figura 5.7. Ciclo replicativo dos vrus da classe II ( ). O genoma DNA de cadeia simples ,
inicialmente, convertido em DNA de cadeia dupla por polimerases e fatores auxiliares da clula hospedeira (1).
Apenas uma das cadeias (DNA de sentido negativo) transcrita pela RNA polimerase II celular, originando os
mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde so traduzidos (3). A replicao do genoma
depende da interao entre fatores celulares e virais e resulta na sntese de cpias de DNA de cadeia simples de
sentido positivo (4) e negativo (5). As molculas de DNArecm-replicadas so ento includas nos vrions, atravs de
interaes especficas comas protenas docapsdeo(6).
Parvoviridae e Circoviridae
DNA fita dupla DNA ss (-)
1
Genoma DNA
(cadeia simples)
Transcrio
Morfognese
mRNA
Protenas estruturais
e
No-estruturais (NS)
DNA ss (+)
Morfognese
Vrions Egresso
2
3 Traduo
4
5
5
126 Captulo 5
3.5.2 Replicao dos vrus RNA
A replicao dos vrus RNA enfrenta algu-
mas diculdades adicionais, impostas por pecu-
liaridades dos processos biossintticos das clu-
las hospedeiras. A replicao do genoma desses
vrus envolve a sntese de molculas de RNA de
sentido antigenmico, que servem de molde para
a subseqente sntese de RNAs de sentido gen-
mico. Essas reaes so realizadas por polimera-
ses especcas, que produzem molculas de RNA
a partir de moldes RNA (polimerases de RNA de-
pendentes de RNA). No entanto, as clulas euca-
riotas no possuem tais enzimas e, por isso, no
so capazes de replicar o genoma desses vrus.
Assim, para replicar o genoma, os vrus RNA de-
vem codicar as suas prprias enzimas replicati-
vas. As polimerases de RNA virais, cuja funo
produzir cpias do genoma, so denominadas
genericamente transcriptases ou replicases.
Os vrus RNA de polaridade positiva solu-
cionaram esse problema pela prpria natureza
do genoma: a enzima replicase codicada pelo
genoma e produzida pela traduo direta do
genoma logo no incio da infeco. Uma vez pro-
duzida, essa enzima se encarrega de replicar o
genoma, produzindo cpias de RNA de sentido
antigenmico, que servem de molde para a snte-
se de mais cpias de sentido genmico. Por isso,
o genoma desses vrus dito infeccioso, ou seja, a
sua introduo por mtodos articiais em clulas
permissivas (transfeco) resulta na ocorrncia
de todas as etapas do ciclo replicativo e na pro-
duo de prognie viral.
Por outro lado, o genoma dos vrus RNA de
polaridade negativa no pode ser traduzido, pois
possui o sentido complementar ao mRNA. Esses
vrus solucionaram esse problema de forma di-
ferente: trazem associado ao material gentico
algumas molculas da polimerase de RNA (repli-
case). Uma vez no interior da clula, a replicase
sintetiza cpias de RNA de sentido antigenmico
que servem de mRNA para a sntese das prote-
nas virais. Esses RNAs tambm servem de molde
para a sntese de mais cpias de RNA de sentido
genmico. O genoma dos vrus RNA de pola-
ridade negativa no infeccioso, ou seja, a sua
introduo (desprovido de protenas) em clulas
permissivas no resulta na ocorrncia das etapas
Sntese da
cadeia complementar
Vrions
Egresso 1
Transcrio
parcial
(Parcialmente ds)
Genoma DNA
DNAccc mRNA
Protenas estruturais
e polimerase
Traduo
PgRNA CDNA
DNApds
2
4 5
Transcrio
completa
Transcrio
reversa
3
6
7
8
A cadeia dupla
completada
Figura 5.8. Ciclo replicativo dos vrus da classe VII ( ). O DNA genmico , inicialmente, convertido
em uma molcula circular de cadeia dupla completa ccc (1). Essa molcula transcrita pela RNA pol II celular,
originando inicialmente mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde sero traduzidos em
protenas estruturais e no-estruturais (3). RNAs coma extenso integral do genoma (pgRNA) so, ento, produzidos
(4) e exportados para o citoplasma. A polimerase viral recm-produzida realiza a transcrio reversa do pgRNAs,
resultando em cDNA (5), que convertido em DNA de cadeia dupla (6). Capsdeos contendo o DNA de cadeia
parcialmente dupla podem voltar ao ncleo e reiniciar o ciclo (7) ou participar da morfognese das partculas vricas
(8).
Hepadnaviridae
Replicao viral 127
seguintes da replicao. Em resumo, a necessida-
de da polimerase de RNA para replicar o geno-
ma foi suprida, de formas diferentes, tanto pelos
vrus RNA de sentido positivo como pelos vrus
RNA de sentido negativo.
A replicao do genoma dos vrus RNA
ocorre em duas etapas. A primeira etapa envolve
a sntese de um RNA de sentido antigenmico,
tambm denominado replicativo intermedirio
(RI). Nos vrus RNA de polaridade positiva, o
RI possui polaridade negativa; nos vrus RNA
de polaridade negativa, o RI possui polaridade
positiva. A segunda etapa envolve a sntese de
RNA de sentido genmico, utilizando o RI como
molde. Em alguns vrus RNA de sentido positivo
(Classe IVb), o RI tambm serve de molde para a
sntese de mRNAs. Embora essas duas etapas fa-
am parte do processo replicativo, s vezes, rece-
bem denominaes diferentes: a sntese de RNAs
de polaridade positiva denominada transcrio;
a sntese da cpia negativa de RNA denomi-
nada replicao. Essas duas etapas so realizadas
pelas replicases virais, pois as clulas eucariotas
no possuem enzimas e funes para replicar o
RNA. Alm das replicases, esses vrus codicam
outras protenas no-estruturais (NS) com fun-
es diversas e que auxiliam, de algum modo,
na replicao do genoma. Atividades de helicase,
protease, ligao no RNA, ATPase, ribonuclease,
entre outras, j foram identicadas entre as pro-
tenas NS dos vrus RNA.
Como os vrus RNA independem da ma-
quinaria nuclear para a sntese e modicao
de cidos nuclicos, o seu ciclo replicativo pode
ocorrer inteiramente no citoplasma. Os ortomixo-
vrus constituem as excees, pois dependem de
segmentos dos mRNA celulares para a produo
e funcionalidade de seus mRNAs e, por isso, re-
plicam no ncleo da clula hospedeira.
Os retrovrus apresentam um mecanismo de
replicao que difere dos demais vrus RNA. Em-
bora possua polaridade positiva, o RNA genmi-
co no traduzido pelos ribossomos, e sim con-
vertido em uma molcula de DNA de ta dupla
pela enzima transcriptase reversa (RT) presente
nos vrions. Essa molcula de DNA, denominada
provrus, integrada ao genoma da clula hospe-
deira e, posteriormente, transcrita pela RNApo-
lII. A transcrio resulta em mRNAs para a snte-
se de protenas estruturais e da enzima RT, e em
cpias do RNA genmico, que ento includo
nas novas partculas vricas.
As etapas do ciclo replicativo dos diferentes
grupos de vrus RNA esto ilustradas esquema-
ticamente nas Figuras 5.9 a 5.13 (a forma de apre-
sentao das etapas de replicao foi adaptada de
ROIZMAN E PALESE, 1996).
RNA
anti-genmico
(-)
Genoma RNA (+) Replicao
4
Traduo
Morfognese
Poliprotena
Protenas no-estruturais
Protenas estruturais
Morfognese
Vrions
1 , 6
2 Clivagem
7
7
3
Egresso
Figura 5.9. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVa ( ). A ORF nica do genoma
traduzida em toda a sua extenso logo aps o desnudamento, resultando da produo de uma longa poliprotena (1).
medida que vai sendo produzida, essa poliprotena vai sendo clivada por proteases celulares e/ou virais dando
origem s protenas individuais, entre as quais a RNA polimerase viral (2). A RNA polimerase responsvel pela
replicao do genoma, que ocorre via produo de umintermedirio RNAde sentido negativo (3, 4). As novas cpias
de RNA de sentido positivo so, ento, utilizadas em novos ciclos de traduo (6), replicao (3,4) e/ou participam da
morfognese daprognie viral (7).
Picornaviridae e Flaviviridae
128 Captulo 5
3.5.2.1 Vrus da classe IVa
O genoma desses vrus contm uma ORF
nica e longa, anqueada por duas regies no
traduzidas (5UTR; 3UTR). Os genes das prote-
nas estruturais ocupam o tero 5 do genoma; o
restante da ORF contm os genes das protenas
no-estruturais (NS). Essa ORF traduzida em
toda a sua extenso logo aps o desnudamento,
originando uma poliprotena longa, que cliva-
da em protenas individuais medida que vai
sendo produzida (Figura 5.9). As protenas NS
recm-produzidas incluindo a replicase viral
realizam a replicao do genoma, que envolve a
sntese de um RNA de sentido antigenmico (de
polaridade negativa); que serve, ento, de mol-
de para a sntese de cpias de RNA de sentido
genmico. As regies 5UTR e 3UTR do genoma
contm seqncias importantes para a transcri-
o e replicao. O genoma dos vrus do gnero
Flavivirus possui a estrutura cap na extremidade
3; os demais membros da famlia Flaviviridae e os
picornavrus possuem estruturas secundrias (in-
ternal ribosomal entry site, IRES) na regio 5UTR,
que so reconhecidas pelos ribossomos para o
incio da traduo.
3.5.2.2 Vrus da classe IVb
O genoma desses vrus constitudo por
uma molcula de RNA de polaridade positiva,
mas a organizao genmica e a estratgia de
expresso gnica diferem do grupo anterior. Os
genes que codicam as protenas NS ocupam os
dois teros iniciais do genoma; o tero restante
contm os genes das protenas estruturais. No
incio da infeco, o RNA genmico traduzido
parcialmente, resultando na produo de uma
poliprotena que abrange a regio das protenas
NS. A clivagem dessa poliprotena resulta nas
protenas NS, incluindo a replicase viral. Utili-
zando o RNA genmico como molde, a replicase
sintetiza uma cpia de RNA de sentido antigen-
mico (polaridade negativa) com a extenso com-
pleta do genoma. Esse RNA antigenmico serve
de molde para a sntese de vrios mRNAs de
extenses variveis (denominados mRNAs sub-
genmicos), que sero traduzidos nas protenas
estruturais. O RNA antigenmico tambm serve
de molde para a transcrio completa e produo
de RNAs de sentido e extenso genmica. Resu-
mindo, embora o genoma desses vrus possua
polaridade positiva, apenas a regio da ORF, que
corresponde s protenas NS, traduzida pelos
ribossomos. As protenas estruturais so produ-
zidas pela traduo de mRNAs subgenmicos,
que, por sua vez, so produzidos pela transcrio
do RNA antigenmico. Uma caracterstica mar-
cante dessas famlias e que difere do grupo an-
terior a produo de mRNAs subgenmicos
(Figura 5.10).
Genoma RNA (+) Replicao
6
Transcrio Morfognese
mRNA
subgenmicos
Protenas
no-estruturais
Protenas
estruturais
Morfognese
Vrions
4
5 Traduo
7
3
Egresso
RNA
anti-genmico
(-)
Genoma RNA (+)
7
Poliprotena
regio 5
Replicao
6
1
2
Traduo
parcial
Clivagem
Figura 5.10. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVb
). ORNAgenmico de sentido positivo traduzido parcialmente, resultando emuma poliprotena (1) que
clivada emprotenas no-estruturais, incluindo a replicase (2). Areplicase recm-produzida replica o genoma emtoda a
sua extenso, produzindo uma molcula de RNA de sentido antigenmico (3). O RNA anti-genmico serve de molde
para a transcrio e produo de vrios RNAm subgenmicos de extenses variveis (4), cuja traduo resulta nas
protenas estruturais (5). Posteriormente tambmsoproduzidas cpias inteiras dogenoma RNAde sentidopositivo(6),
queservirodemolde para ciclos adicionais dereplicao(3) eserooportunamente encapsidadas (7).
(Coronaviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Caliciviridae e
Astroviridae
Replicao viral 129
3.5.2.3 Vrus da classe V

Esses vrus possuem um genoma RNA de
sentido negativo, no-segmentado (paramixov-
rus, rabdovrus e lovrus) ou segmentado (or-
tomixovrus, buniavrus e arenavrus) e trazem a
replicase viral nos vrions. Nos vrus com o ge-
noma no-segmentado, os genes so transcritos
individualmente, originando mRNAs que so
traduzidos nas protenas estruturais e NS (Figura
5.11). Nos vrus com o genoma segmentado, cada
segmento contm um (ou dois) gene(s), que tam-
bm so transcritos individualmente. Nas etapas
iniciais da infeco, a transcrio direcionada
para a sntese de mRNAs para a produo de pro-
tenas virais. Em fases tardias do ciclo, o modo de
transcrio deve ser alterado, de modo a produ-
zir os RNAs intermedirios de replicao (RI) de
sentido antigenmico. Nos vrus com o genoma
no-segmentado, esses RI possuem a extenso in-
teira do genoma e servem de molde para a sntese
de molculas de RNA de sentido genmico. Dois
tipos de RNAs de sentido positivo so, ento,
produzidos: os mRNA com a extenso dos genes
individuais (para a traduo); e o RNA RI, com a
extenso inteira do genoma (para a replicao).
Nos vrus com o genoma segmentado, a transcri-
o dos segmentos genmicos de RNA tambm
resulta em dois tipos de RNAs, com funes dife-
rentes (mRNAs para a traduo; RI RNAs para a
replicao). Os mRNAs e RIs, derivados de cada
segmento, no entanto, possuem tamanhos apro-
ximados. Os mRNAs possuem alguns nucleot-
deos a mais e a estrutura cap na extremidade 5
e uma cauda poliA na extremidade 3. Os RNAs
RI, sem cap ou poliA so produzidos tardiamente
na infeco e servem exclusivamente de molde
para a replicao e produo de segmentos de
RNA genmicos. Todas as etapas de transcrio
e replicao desses vrus ocorrem com o genoma
intimamente associado com protenas, principal-
mente a nucleoprotena (NP), formando o com-
plexo ribonucleoprotena (RNP).
Os arenavrus e os vrus do gnero Phlebovi-
rus (Bunyaviridae) apresentam uma estratgia pe-
culiar de expresso de alguns de seus genes. Os
RNA genmicos possuem polaridade negativa
e a maioria dos genes expressa pela estratgia
descrita acima. No entanto, um dos segmentos
genmicos contm seqncias codicantes de
protena tanto no sentido do genoma (sentido ne-
gativo) como no sentido antigenmico. Essa es-
RNA
antigenmico
(-)
Genoma RNA (-)
Replicao
4
Transcrio
Morfognese
Protenas estruturais
No-estruturais + NP
Morfognese
Vrions
1, 5
2 Traduo
6
6
3
Egresso
mRNA
Figura 5.11. Cicloreplicativodos vrus da classe V(
). Os genes individuais so transcritos pela RNA polimerase presente nos vrions, produzindo
mRNAs correspondentes a cada gene (1). A traduo desses mRNA resulta em protenas estruturais e NS (2). As
protenas NS, incluindo a replicase, participamda replicao do genoma. Areplicao ocorre via sntese de RNAs de
sentido antigenmico (3), que servem de molde para a sntese de RNAs de sentido genmico (4). As molculas de
RNA de sentido genmico servem de molde para novos ciclos de transcrio (5), replicao (3, 4) e sero
posteriormente encapsidadas (6).
Paramyxoviridae, Rhabdoviridae, Filoviridade, Orthomyxoviridae
e Bunyaviridade
130 Captulo 5
tratgia denominada ambissense e nica dessas
famlias.
3.5.2.4 Vrus da classe III

O genoma desses vrus composto por 10
a 12 segmentos (reovrus) ou dois segmentos
(birnavrus de animais) de RNA de ta dupla.
Nos reovrus, a maioria dos segmentos codica
apenas uma protena; poucos segmentos contm
dois genes. Logo aps a penetrao e ainda em
capsdeos semi-ntegros, a polimerase viral pre-
sente nos vrions realiza a transcrio primria de
cada segmento. Os mRNA resultantes possuem
duas funes: so traduzidos em protenas e, j
associados com as protenas estruturais recm-
produzidas, servem de molde para a replicao
(sntese de RNAs de sentido negativo). Dentro de
capsdeos pr-formados, os segmentos de RNA
de polaridade negativa recm-produzidos so
transcritos (transcrio secundria). Os transcritos
resultantes so utilizados predominantemente
para a produo de protenas nas fases tardias do
ciclo. Os eventos que ocorrem nas fases nais do
ciclo no esto esclarecidos, mas parecem envol-
ver a associao das protenas externas do caps-
deo com os complexos pr-formados entre o ge-
noma e outras protenas estruturais. A liberao
dos vrions maduros ocorre de forma ineciente
aps a lise celular. As molculas de RNA gen-
mico possuem funes distintas: as molculas de
RNA de polaridade negativa servem apenas de
molde para a transcrio. A funo aparente das
molculas genmicas de RNA positivo apenas
parear com as cadeias negativas. J as molculas
de RNAs de sentido positivo, produzidas duran-
te a infeco, possuem duas funes: podem ser
traduzidas em protenas (mRNAs) e/ou servem
de molde para a sntese das cadeias negativas (Fi-
gura 5.12).
3.5.2.5 Vrus da classe VI

A replicao do genoma dos retrovrus in-
clui etapas que ocorrem no citoplasma (logo aps
a penetrao do nucleocapsdeo na clula hospe-
deira) e no ncleo (aps a integrao do material
gentico viral no genoma da clula). O genoma
desses vrus composto por duas molculas idn-
ticas de RNA de sentido positivo que, no entanto,
no so traduzidas pelos ribossomos. No inico
da infeco, a molcula de RNA genmico con-
Replicao
Transcrio
primria e
secundria
Morfognese
mRNA
Protena no-estruturais
Morfognese
Vrions
1,6
2 Traduo
Egresso
Morfognese
inicial
Protenas estruturais
3
3
6
6
4
Pr-capsdeos
+ mRNA
Genoma RNA
(cadeia dupla)
Figura 5.12. Ciclo replicativo dos vrus da classe III ( ). A replicase viral trazida nos vrions
realiza a transcrio primria, produzindo mRNAs (1), que so traduzidos em protenas estruturais e no-estruturais
(2). Esses mRNAs formam complexos com as protenas estruturais recm-produzidas (3) e, no interior desses
complexos, servemde molde para a sntese de RNAs de sentido negativo, coma participao das protenas NS (4). As
molculas de RNA de cadeia dupla, resultantes da replicao (4), servem de molde para a transcrio secundria (5) e
para etapas adicionais de replicao (4). Essas molculas, j conjugadas com algumas protenas estruturais,
eventualmenteparticipamdamorfognese pelaassociaocomas demais protenas docapsdeo(6).
Reoviridae e Birnaviridae
Replicao viral 131
vertida em uma molcula de cDNA pela enzima
viral transcriptase reversa (RT, DNA polimerase
dependente de RNA), que, em seguida, con-
vertida em uma molcula de DNA de ta dupla.
Essa molcula, denominada provrus, ingressa no
ncleo e integrada no genoma da clula hospe-
deira, pela atividade integrase da polimerase vi-
ral. A integrao do provrus no genoma celular
assegura a perpetuao das informaes genti-
cas do vrus no hospedeiro, e absolutamente ne-
cessria para a continuao do ciclo replicativo.
A prxima etapa a transcrio dos genes virais
pela RNApolII e fatores de transcrio celulares.
A transcrio parcial do genoma produz mRNAs
que sero processados por splicing e sero tradu-
zidos nas glicoprotenas do envelope. A transcri-
o completa do genoma origina mRNAs com
duas nalidades: servirem de molde para a tra-
duo em protenas (RT, protena da matriz, do
capsdeo) ou constiturem o RNA genmico para
a morfognese da prognie viral. Considerando-
se que a transcrio do provrus que produz o
RNA genmico realizada pela maquinaria celu-
lar de transcrio, sem a participao de nenhum
fator viral, o genoma dos retrovrus o nico ge-
noma viral a ser sintetizado exclusivamente por
enzimas e fatores celulares (Figura 5.13).
3.6 Morfognese, maturao e egresso
Os vrus das diversas famlias apresentam
uma ampla diversidade estrutural, que vai des-
de partculas formadas pelo genoma e uma ca-
mada simples de protenas at vrions altamen-
te complexos. No entanto, independente da sua
complexidade estrutural, uma srie de interaes
entre os seus constituintes so necessrias para a
montagem das partculas vricas e a concluso do
processo de replicao. Essas interaes incluem:
a) formao das unidades estruturais do caps-
deo pela interao entre as respectivas protenas;
b) incorporao do genoma ao capsdeo pr-for-
mado ou em formao; e c) liberao da prognie
viral da clula infectada. No caso dos vrus enve-
lopados, a formao no nucleocapsdeo seguida
pela aquisio do envelope a partir de membra-
nas celulares, nas quais as protenas virais foram
previamente inseridas.
ssDNA
Transcrio
reversa
Morfognese
dsDNA
(provrus)
Provrus DNA
Integrado
Morfognese
Vrions
1
Egresso
Integrao
Genoma RNA (+)
Sntese da
cpia complementar
2
3
Transcrio
Splicing +Traduo
Traduo
4
5
7
6
8
RNAs de extenso
genmica
Glicoprotenas
do envelope
Pol+In
Protenas do
capsdeo
8
8
Figura 5.13. Ciclo replicativo dos vrus da classe V ( ). Logo aps o desnudamento, a enzima viral
transcriptase reversa (RT) sintetiza uma molcula de DNA complementar ao RNA genmico (1) que, em seguida,
convertida em DNA de cadeia dupla (dsDNA), tambm pela ao da RT (2). Esta molcula de dsDNA, denominada
provrus, penetra no ncleo e integrada no genoma da clula hospedeira pela atividade viral integrase (3). Os genes
presentes noprovrus so, ento, transcritos pela RNApolII celular, originandomRNAs de extensosubgenmica (4)
para a traduo nas protenas do envelope (5). Atranscrio do provrus emtoda a sua extenso resulta emmRNAs de
extenso genmica (6), que podemser traduzidos nas outras protenas estruturais e polimerase viral (7) ouparticipam
damorfognese das partculas virais (8).
Retroviridae
132 Captulo 5
Diferentemente de clulas eucariotas e pro-
cariotas, que se multiplicam por sso binria,
os vrions so formados pela associao de com-
ponentes pr-formados (genoma + protenas).
O processo de montagem das partculas vricas,
que ocorre ao nal do ciclo replicativo, deno-
minado genericamente de morfognese ou reunio.
A aquisio da capacidade infectiva pelas part-
culas vricas recm-formadas que ocorre prvia
ou concomitantemente com o seu egresso da c-
lula denomina-se maturao. Como, para muitos
vrus, esses processos ocorrem simultaneamente,
sero aqui abordados conjuntamente.
As diferentes etapas da formao da part-
cula vrica no ocorrem ao acaso. As associaes
entre os componentes so direcionadas e favore-
cidas por interaes qumicas especcas entre as
unidades proticas estruturais e entre estas e o
cido nuclico. Dependendo da estrutura e com-
plexidade da partcula vrica, da estratgia e local
de replicao, os vrus desenvolvem diferentes
estratgias de morfognese e maturao/egresso
de sua prognie.
3.6.1 Maturao intracelular
(citoplasmtica ou nuclear)
Alguns vrus (principalmente os desprovi-
dos de envelope) completam o processo de mor-
fognese das partculas (e a conseqente matura-
o) integralmente no citoplasma (vrus RNA) ou
no ncleo (vrus DNA). Dessa forma, a prognie
viral infecciosa pode ser encontrada nesses com-
partimentos, mesmo com a clula ainda ntegra,
ou seja, a maturao ocorre previamente ao egres-
so. Esses vrus geralmente so liberados quando
ocorre a destruio das clulas infectadas (Figu-
ra 5.14). Os vrus no-envelopados das famlias
Polyomaviridae, Papillomaviridae, Adenoviridae e Pi-
cornaviridae e tambm os membros da Poxviridae e
Asfarviridae (com envelope), enquadram-se nessa
categoria.
3.6.2 Maturao por brotamento em
membranas celulares
No ciclo replicativo dos vrus envelopados,
as glicoprotenas do envelope recm-sintetizadas
so inseridas em membranas celulares, isto , na
membrana do retculo endoplasmtico rugoso
(RER), no aparelho de Golgi ou na membrana
plasmtica. Os nucleocapsdeos recm-formados
interagem com a protena da matriz e/ou com
extremidades citoplasmticas dessas glicopro-
tenas e inserem-se (ou projetam-se) atravs da
membrana, incorporando o envoltrio. Esse en-
voltrio (envelope) composto pela membrana
lipdica dupla, contendo as glicoprotenas virais
1
3
2
Membrana plasmtica
Citoplasma
Meio extracelular
Figura 5.14. Maturaointracelular e egressodos vrus semenvelope. Os componentes docapsdeointeragementre si
e comogenoma (1), resultandonaformaodepartculas vricas infecciosas (2), quesoliberadas por lisecelular (3).
Replicao viral 133
inseridas. O processo de aquisio do envelope
denominado brotamento, pois o nucleocapsdeo
literalmente brota para o interior do RER (Figura
5.15), do Golgi ou para o exterior da clula (Fi-
gura 5.16). Os vrus que realizam brotamento em
membranas celulares, como forma de adquirir o
envelope e completar a sua morfognese/matu-
rao, podem ser liberados por exocitose sem in-
duzir necessariamente lise da clula.
Os vrus RNA de sentido negativo, alguns
vrus RNA de sentido positivo (togavrus) e os re-
trovrus completam a morfognese e a maturao
1
2
3
Membrana plasmtica
Citoplasma
Meio extracelular
Figura 5.15. Maturao intracitoplasmtica de vrus envelopados por brotamento em membranas celulares internas.
Interao dos nucleocapsdeos comas caudas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento e transporte no interior
devesculas (2), liberaopor exocitose (3).
1
2
3
4
Membrana plasmtica
Meio extracelular
Citoplasma
Figura 5.16. Brotamento e maturao de vrus envelopados na membrana plasmtica. Interao do nucleocapsdeo
com a protena matriz e/ou caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento atravs da
membrana plasmticae aquisiodoenvelope (2, 3), egressodepartculas infecciosas (4).
134 Captulo 5
somente no momento da liberao dos vrions na
superfcie da clula. Nesses casos, no possvel
detectar prognie viral infecciosa no interior das
clulas. Os vrions de outras famlias (Flaviviri-
dae, Coronaviridae, Arteriviridae, Bunyaviridae, Po-
xviridae) realizam o brotamento no RER e/ou no
aparelho de Golgi. Vrions infecciosos podem ser
encontrados em vesculas citoplasmticas deriva-
das desses compartimentos, nas quais so trans-
portados at a membrana plasmtica, onde so
liberados por exocitose.
Os herpesvrus apresentam uma estratgia
particular de morfognese, maturao e egres-
so. A replicao do genoma e a montagem dos
nucleocapsdeos ocorrem no ncleo, para onde
as protenas estruturais so importadas aps a
sua sntese no citoplasma. Os nucleocapsdeos
podem adquirir o envelope pelo brotamento na
membrana nuclear interna vrions completos
envelopados podem ser observados no espao
entre as membranas nucleares . Esses nucleo-
capsdeos podem perder o envelope ao sair desse
compartimento e readquir o envelope pelo bro-
tamento na membrana do RER. Nesses casos,
so transportados em vesculas e liberados ao
exterior por exocitose. Outros nucleocapsdeos
podem ser transportados atravs do citoplasma
at a membrana plasmtica, onde adquirem o en-
velope por brotamento. Ao contrrio de alguns
vrus envelopados, que no so lticos, a replica-
o dos herpesvrus inevitavelmente leva lise e
destruio celular.
Os efeitos da replicao viral na clula hos-
pedeira so muito variveis e vo desde infec-
es que no provocam alteraes detectveis at
a morte e lise celular. As conseqncias da repli-
cao viral em nvel celular possuem importncia
na patogenia das doenas vricas. Esses temas se-
ro abordados no Captulo 8.
4 Bibliograa consultada
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REPLICAO DOS VRUS DNA
Gustavo Delhon
1

1
Traduzido por Fernanda S.F.Vogel.
6
1 Introduo
2 Poliomavrus
2.1 O ciclo replicativo
2.2 O genoma dos PoVs
2.3 Expresso dos genes iniciais
2.4 Replicao do DNA
2.5 Expresso dos genes tardios
2.6 Morfognese e egresso
2.7 Concluses
3 Papilomavrus

3.1 O ciclo replicativo
3.2 O genoma dos PpVs
3.3 Expresso dos genes iniciais
3.4 Replicao do DNA e interferncia com o ciclo celular
3.5 Expresso dos genes tardios
3.6 Concluses
4 Adenovrus
4.1 O ciclo replicativo
4.2 O genoma dos AdVs
4.3.Expresso dos genes iniciais
4.4 Replicao do DNA viral
4.5 Expresso dos genes tardios
4.6 Concluses
5 Herpesvrus
5.1 O ciclo replicativo
5.2 O genoma dos HVs
5.3 Os genes virais
5.4 Expresso gnica
5.5 Replicao do DNA viral
5.6 Expresso gnica durante a infeco latente
139
140
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154
156
156
156
156
157
158
159
160
5.7 Concluses
6 Poxvrus
6.1 O ciclo replicativo
6.2 O genoma dos PoxVs
6.3 Expresso gnica
6.4 Replicao do DNA
6.5 Concluses
7 Bibliograa consultada
160

160
160
160
161
162
163
163
1 Introduo
A replicao dos vrus DNA realizada pela
ao orquestrada da maquinaria da clula hos-
pedeira, associada com fatores codicados pelo
vrus. A contribuio relativa dos fatores virais
na replicao desses vrus, no entanto, varia mui-
to entre as diferentes famlias. Em geral, os v-
rus DNA pequenos (parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
ou seja, os seus genomas codicam poucos pro-
dutos associados com funes replicativas. Por
outro lado, os vrus DNA grandes (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquina-
ria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral. Dessa
forma, qual seria a estratgia mais eciente para
a manuteno desses vrus na natureza? Na ver-
dade, ambas, pois tanto os vrus DNA pequenos
como os grandes tm conseguido se perpetuar,
sugerindo que uma perfeita adaptao a um ni-
cho tecidual mais importante do que a comple-
xidade do genoma e a estratgia de replicao.
Os mecanismos de replicao do genoma
tambm variam entre os vrus DNA, de acordo
com a estrutura e topologia do genoma e tambm
com a participao relativa de fatores celulares
e/ou virais (Figura 6.1). O genoma circular de
cadeia dupla dos poliomavrus (e provavelmente
dos papilomavrus), por exemplo, replicado de
forma bidirecional e semidescontnua, a partir de
uma origem nica. O complexo replicativo utili-
za um primer de RNA para iniciar a sntese, e o
mecanismo de replicao semelhante ao utiliza-
do pelas clulas eucariotas para replicar o DNA
cromossmico. O genoma linear de ta dupla dos
adenovrus possui uma origem em cada extremi-
dade. A replicao ocorre em duas etapas, e cada
cadeia parental replicada em uma dessas etapas.
O complexo replicativo utiliza uma oxidrila (OH)
ligada a uma protena viral (pTP), que est ligada
em cada extremidade do genoma como iniciador
da sntese de DNA (protein priming). A replicao
dos genomas dos herpesvrus e poxvrus mais
complexa. O genoma dos herpesvrus possui trs
origens e parece ser replicado por um mecanis-
mo de crculo rolante, no qual multmeros line-
ares so produzidos e, posteriormente, clivados
Adenovrus Parvovrus Herpesvrus Poxvrus
Poliomavrus
Papilomavrus
Ou
A B C D E
Figura 6.1. Ilustraoda replicaodogenoma dos principais vrus DNA. Os estgios intermedirios forampropostos
a partir deestudos fsico-qumicos e, microscopia eletrnica, realizados a diferentes intervalos aps a infeco.
Fonte: adaptada de Dulbecco e Ginsberg (1980).
140 Captulo 6
em unidades genmicas. A replicao do genoma
DNA linear de ta dupla dos poxvrus parece se
iniciar com a clivagem de uma das cadeias prxi-
ma a ala terminal do genoma, seguida de elon-
gao a partir da extremidade 3, gerada pela cli-
vagem. A replicao do genoma DNA linear de
ta simples dos parvovrus no abordada neste
captulo inicia-se com a elongao da extremi-
dade 3 livre, que se encontra exionada, e pros-
segue continuamente. Uma ilustrao esquem-
tica da replicao do genoma de diferentes vrus
DNA est apresentada na Figura 6.1.
O objetivo fundamental da replicao viral
produzir prognie viral vivel e abundante, que
assegure a propagao do vrus e a conseqente
transmisso a novos hospedeiros. A produo de
prognie depende da sntese de milhares de c-
pias do genoma viral e das protenas componen-
tes do vrion, associado com a montagem correta
e liberao eciente das partculas vricas. Esse
processo envolve uma srie de etapas reguladas
temporal e espacialmente, que incluem a expres-
so de genes virais e a induo e/ou represso
de alguns genes do hospedeiro. Muitas vezes, a
replicao viral est associada com alterao da
siologia celular, o que pode determinar dife-
rentes graus de patologia e at a morte da clula
hospedeira.
Embora a grande maioria dos vrus DNA
replique no ncleo, alguns deles desenvolveram
estratgias especiais que permitem a sua replica-
o no citoplasma da clula hospedeira. No de-
correr deste captulo, sero abordados os aspec-
tos replicativos das principais famlias de vrus
DNA e a estratgia de replicao dos prottipos
de cada famlia, enfatizando-se os aspectos mole-
culares e biolgicos da expresso gnica, a inter-
ferncia com funes celulares, para assegurar a
replicao (entre elas a induo do ciclo celular),
e a replicao do genoma propriamente dita. A
replicao dos circovrus e parvovrus ser abor-
dada nos Captulos 13 e 14, respectivamente. A
replicao dos hepadnavrus ser tratada, resu-
midamente, no captulo destinado s famlias de
interesse limitado em medicina veterinria.
Inicialmente, ser descrita a replicao dos
vrus da famlia Polyomaviridae, vrus relativa-
mente simples, cuja estratgia de replicao tem
sido amplamente estudada. De fato, a replicao
dos vrus DNA grandes pode ser considerada
como uma evoluo progressiva de complexida-
de quando comparada com os esquemas relativa-
mente simples de replicao dos poliomavrus. A
seguir, sero apresentados os principais aspectos
da expresso gnica, replicao do genoma e in-
terao com funes celulares dos papilomav-
rus, adenovrus, herpesvrus e poxvrus, respec-
tivamente.
2 Poliomavrus
A famlia Polyomaviridae contm um nico
gnero, Polyomavirus, que inclui o prottipo da
famlia, o vrus smio 40 (SV-40), e os vrus JC e
BK, que tm sido, esporadicamente, associados
com tumores em humanos. Os poliomavrus
(PoVs) so vrus DNA pequenos, sem envelope,
de simetria icosadrica, que infectam um amplo
espectro de hospedeiros desde pssaros at hu-
manos . As infeces pelos PoVs so geralmente
subclnicas. No entanto, a infeco de clulas que
no suportam uma replicao produtiva freqen-
temente resulta em transformao neoplsica.
Por isso, os PoVs so tambm conhecidos como
os pequenos vrus DNA tumorais.
Apesar de sua pequena importncia clnica,
os PoVs foram alvo de intensivos estudos biol-
gicos e moleculares, principalmente devido s
suas propriedades tumorignicas. As pesquisas
com os PoVs elucidaram importantes aspectos
da biologia celular. Dentre as maiores descober-
tas resultantes do estudo dos poliomavrus des-
tacam-se: a) estrutura do DNA superenrolado,
b) estrutura e funo da origem da replicao do
DNA, c) estrutura e funo dos promotores, d) des-
coberta dos enhancers e o seu papel na expresso
gnica, e) descoberta do mecanismo de splicing
alternativo dos transcritos (RNA mensageiros,
mRNA) e f) replicao do DNA cromossmico.
2.1 O ciclo replicativo
O mecanismo de penetrao dos PoVs nas
clulas hospedeiras ainda no est completamen-
te esclarecido. Embora estudos recentes tenham
demonstrado o envolvimento de molculas do
Replicao dos vrus DNA 141
complexo maior de histocompatibilidade do tipo
I (MHC-I) como receptores para o SV-40, ainda
no h evidncias conclusivas nesse sentido. Aps
a ligao aos receptores, os vrions so internali-
zados por endocitose caveolar e transportados ao
longo dos microtbulos at o retculo endoplas-
mtico. O mecanismo de transporte para o cito-
plasma e da para o ncleo no est esclarecido,
porm, sabe-se que o desnudamento do genoma
ocorre no interior do ncleo. Aps a sua liberao
no nucleoplasma, o genoma transcrito pela RNA
polimerase II celular e, subseqentemente, repli-
cado. Os mRNA virais produzidos so processa-
dos por splicing e exportados para o citoplasma,
onde so traduzidos. As protenas virais recm-
produzidas so transportadas de volta ao ncleo,
onde participam da replicao do genoma e, pos-
teriormente, da montagem das partculas vricas.
Durante esse processo, os mRNA e as protenas
virais necessitam interagir com componentes da
maquinaria celular responsvel pela exportao
e importao nuclear de macromolculas. A mor-
fognese das partculas virais ocorre no ncleo.
As partculas recm-formadas so transportadas
Citoplasma
3
4
6
7
8
9
5
4
3
1
1
2
2
x
x
Ncleo
Transformao
celular
5a
Clula permissiva Clula no-permissiva
A B
Figura 6.2. Cicloreplicativodos poliomavrus emclulas permissivas (A) e no-permissivas (B). A) Aps a penetrao
do vrion (1), o genoma desnudo no interior do ncleo (2), onde os genes iniciais so transcritos pela maquinaria
celular de transcrio (3). Os mRNAs so traduzidos nas protenas iniciais, ou seja, os antgenos T(4). Os antgenos T
ingressam no ncleo e interagem com o DNA viral e com fatores da clula hospedeira, resultando na replicao do
genoma (5). Aps a replicao, os genes tardios so transcritos (6) e a traduo dos mRNAs origina as protenas
estruturais (7) que ingressam no ncleo e interagem com o genoma para formar as novas partculas vricas (8). Os
vrions se acumulam no ncleo, so exportados em vesculas para o citoplasma e liberados por lise celular ou por
exocitose (9). Emclulas no-permissivas (B), as etapas 1 a 4 ocorremnormalmente. No entanto, o antgeno Tfalha em
interagir com os fatores celulares, no ocorrendo a replicao do DNA viral, nem a transcrio e expresso dos genes
tardios. O DNA viral persiste no ncleo da clula (5a) e os genes dos antgenos T continuam sendo expressos (3, 4),
podendo levar imortalizao e transformao celular. No h replicao do genoma e nem produo de prognie
viral.
Fonte: adaptado de Cole e Conzen (2001).
142 Captulo 6
at a superfcie celular, no interior de vesculas, e
liberadas por exocitose ou por lise celular, depen-
dendo do tipo de clula.
A infeco de clulas permissivas resulta na
ocorrncia de todas essas etapas e na conseqen-
te produo de prognie viral infecciosa. Por ou-
tro lado, a infeco de clulas semipermissivas
(geralmente de espcies heterlogas) resulta em
replicao abortiva, na qual ocorre apenas a ex-
presso dos genes iniciais, sem a replicao do
genoma ou produo das protenas tardias (pro-
tenas estruturais). A persistncia do genoma
viral nessas clulas, associada com a expresso
contnua dos antgenos T, pode levar imortali-
zao e transformao celular. As etapas do ciclo
replicativo dos PoVs em clulas permissivas e
no-permissivas esto representadas esquemati-
camente na Figura 6.2.
2.2 O genoma dos PoVs
O genoma dos PoVs constitudo por uma
molcula de DNA de ta dupla circular, com
aproximadamente 5.000 pares de bases (bp), que,
na maioria dos PoVs, est associado com prote-
nas. O genoma desses vrus encontra-se associa-
do com histonas celulares, formando estruturas
semelhantes aos nucleossomas e assumindo uma
congurao helicoidal semelhante cromatina
celular. Por essas razes, os seus genomas so ge-
ralmente denominados minicromossomos virais. A
replicao do genoma do SV-40 realizada basi-
camente por fatores e enzimas da clula hospe-
deira, com a participao de apenas uma protena
viral, o antgeno T. Por isso, a replicao do DNA
do SV-40 tem sido utilizada como modelo para se
estudar a replicao bidirecional semidescont-
nua do DNA cromossmico celular.
A organizao do genoma do SV-40 est re-
presentada na Figura 6.3. Cerca de 90% da exten-
so do genoma codicante, e os 10% restantes
representam regies no-traduzidas que possuem
funes regulatrias. O genoma do SV-40 codi-
ca seis protenas, sendo trs delas componentes
da estrutura do capsdeo (VP1, VP2 e VP3) e trs
protenas no-estruturais, denominadas antgeno
T pequeno (sT) e grande (lT), e a protena agno. A
protena agno parece participar na morfognese
dos vrions, pois interage com a VP1. Os PoVs de
roedores codicam uma terceira protena T, o an-
tgeno T mdio (mT), e no codicam a protena
agno.
Em vez de possurem regies codicantes
com seqncias regulatrias individuais, os PoVs
solucionaram o problema do genoma pequeno
realizando splicing alternativo em alguns trans-
critos, resultando, assim, na traduo em prote-
nas diferentes parcialmente homlogas. Alm
disso, o genoma apresenta uma concentrao das
seqn cias regulatrias para a transcrio e re-
plicao do DNA em uma pequena regio, o que
contribui para a compactao gentica (Figura
6.3).
2.3 Expresso dos genes iniciais
Aps o desnudamento do genoma no in-
terior do ncleo, o minicromossoma do SV-40
transcrito pelos complexos de transcrio da c-
lula hospedeira (RNA pol II e fatores de trans-
crio). O primeiro gene a ser transcrito o do
antgeno T, e a sua transcrio contnua resulta
em um acmulo gradual do mRNA especco
durante as primeiras 10 a 12 horas de infeco.
Como os mRNA do antgeno T so os primeiros
a serem transcritos e detectados, so denomina-
dos transcritos iniciais (E = early). Os transcritos
primrios do gene do antgeno T sofrem splicing
alternativo para originar mRNAs, que sero tra-
duzidos em duas protenas: o antgeno T grande
(lT) e pequeno (sT). Com isso, as protenas lT e sT
possuem parte de sua seqncia de aminocidos
em comum; sendo que o lT possui uma regio
adicional no presente no sT.
A transcrio dos genes iniciais controlada
por uma regio regulatria de 250 pb, localiza-
da imediatamente na direo 5 do stio inicial
de transcrio do gene do antgeno T (Figura
6.3). Essa regio regulatria apresenta pequenas
seqn cias de nucleotdeos, dispostas em la, ou
motivos (motifs) que, juntos, constituem o promo-
tor inicial do SV-40. Esses motivos atuam como
stios de ancoragem e ligao de componentes do
aparato de transcrio celular, incluindo a RNA
pol II e os fatores de transcrio. Logo acima do
promotor (na direo 5), existem duas cpias re-
Replicao dos vrus DNA 143
petidas de 72 pb que atuam como enhancers do
promotor. Essas seqncias de 72 pb so respon-
sveis pela ligao especca de fatores de trans-
crio, ou transativadores, cuja funo se ligar
ao DNA e aumentar a ecincia da transcrio a
partir do complexo basal de transcrio.
Alguns motivos presentes nos promotores
e enhancers virais so encontrados tambm nas
regies regulatrias de certos genes das clulas
hospedeiras. Esse aspecto molecular crucial
para o parasitismo do vrus. Possuindo regies
regulatrias semelhantes s da clula hospedeira,
o vrus pode seqestrar os componentes da ma-
quinaria celular de transcrio para sintetizar os
seus mRNA.
Alm disso, a regio regulatria do SV-40
contm vrias seqncias repetidas que servem
de stios de ligao para o antgeno lT, o que in-
72 72 21 21 22 TATA
III II I
Promoter inicial Enhancer
320 240 160 80 0/5243 5163 bp
Origem da replicao bidirecional
Organizao genmica
do SV-40
PL
Ori
PE
ST
17kT
VP1
VP3
VP2
LT
Core ORI Aux-1 Aux-2
RNA tardios m
RNA iniciais m
Figura 6.3. Estrutura e organizao do genoma do SV-40 (inferior) e organizao das regies regulatrias da
transcrio e replicao (superior). ORI: origem de replicao; PE: promotor dos genes iniciais; PL: promotor dos
genes tardios; lT: mRNAdo gene do antgeno Tgrande; sT: mRNAdo gene do antgeno Tpequeno; VP1, VP2 e VP3:
mRNA das protenas estruturais. >>: stios de ligao do antgeno; I: stio de regulao negativa da transcrio dos
mRNAiniciais; II: stios de ligao e separao do DNApara o incio da replicao; III: stios de regulao positiva da
transcriodos genes tardios.
Fonte: adaptado de Cole e Conzen (2001).
144 Captulo 6
dica que esta protena regula a sua prpria ex-
presso. Quando a quantidade de antgeno lT, na
clula infectada, atinge nveis altos, a ocupao
desses stios pelo prprio antgeno lT regula ne-
gativamente a transcrio do seu gene.
A prxima etapa do ciclo replicativo a re-
plicao do genoma viral. Como o genoma dos
PoVs no codica os produtos necessrios sua
prpria replicao, esses vrus dependem inte-
gralmente de enzimas e fatores celulares para re-
plicar o seu DNA. No entanto, apenas um peque-
no nmero de clulas no organismo encontra-se
na fase S do ciclo celular, fase em que a clula ex-
pressa os fatores necessrios para a replicao do
DNA nuclear. A maioria das clulas do organis-
mo j so diferenciadas ou so clulas que neces-
sitam estmulos externos (fatores de crescimen-
to, hormnios ou outros estmulos mitognicos)
para iniciar o ciclo celular. Os PoVs, assim como
outros vrus DNA, solucionaram esse problema
ao desenvolverem mecanismos para estimular as
clulas a entrarem em fase S e, assim, produzi-
rem os fatores necessrios replicao do seu ge-
noma. Dessa maneira, o SV-40 capaz de infectar
de forma persistente clulas renais diferenciadas
e que no esto em diviso de seu hospedeiro
natural.
A replicao do DNA cromossmico das c-
lulas ocorre durante a fase S do ciclo celular, mas
a sntese e o acmulo dos fatores necessrios
replicao do DNA iniciam na fase anterior (G1).
A transio entre as fases G1 e S controlada par-
cialmente pela protena do retinoblastoma (pRb)
e pelas protenas relacionadas p107 e p130. Em
clulas que no esto em diviso, as protenas da
famlia Rb impedem o incio da fase S pelo se-
qestro de fatores de transcrio que ativam os
genes das enzimas relacionadas com a replicao
do DNA, incluindo a DNA polimerase . Aps o
estmulo mitognico, a ciclina D liga-se nas cdk
4 e cdk 6, ativando-as, o que leva hiperfosfori-
lao da protenas Rb e resulta na liberao dos
fatores de transcrio (E2F) e incio da fase S.
Outros fatores tambm esto envolvidos no
controle da transio entre as fases G1 e S. O fator
de transcrio p53 pode prevenir a sntese no-
programada de DNA e bloquear o incio da fase
S quando so detectadas leses no DNA celular.
Dependendo do estgio siolgico da clula, a
p53 pode retardar o progresso do ciclo celular
ou induzir apoptose. Pelo seu papel na transio
G-S1, tanto a pRb como a p53 podem ser consi-
deradas guardis que evitam a diviso celular
extempornea e a transformao maligna das
clulas. Por isso, so conhecidas como protenas
antioncognicas.
Apesar desses mecanismos de controle do
ciclo celular, os PoVs conseguem induzir o incio
da fase S em clulas quiescentes porque o ant-
geno lT dos PoVs exerce um importante papel,
alterando o controle do ciclo celular por intera-
gir diretamente com a protena Rb e, em alguns
PoVs, tambm com a p53. Um pequeno domnio
prximo a regio N-terminal do antgeno lT se
liga especicamente s protenas da famlia Rb,
enquanto seqncias prximas regio C-termi-
nal so requeridas para a associao com a p53
(Figura 6.4). As conseqncias dessas interaes
so a inibio da funo da pRb e p53 e a conse-
qente expresso dos produtos necessrios re-
plicao do DNA viral e tambm celular.
Alm do efeito da ligao nas pRbs, o an-
tgeno lT capaz de estimular diretamente os
promotores dos genes envolvidos no controle do
ciclo celular, incluindo os genes que codicam as
ciclinas. Dessa forma, o antgeno lT utiliza dois
mecanismos para assegurar que a clula infecta-
da entre em fase S e, assim, propicie um ambiente
favorvel replicao viral.
A funo exata do antgeno T pequeno (sT)
durante a infeco produtiva ainda no est com-
pletamente esclarecida, porm sabe-se que esta
protena capaz de interagir com a fosfatase 2,
uma enzima reguladora do ciclo celular. Assim, o
sT poderia colaborar com o lT na induo da fase
S em clulas infectadas.
2.4 Replicao do DNA
A replicao do DNA circular dos PoVs en-
volve o relaxamento e a separao das cadeias do
DNA, a sntese da cadeias lhas de DNA e a reso-
luo e a separao das molculas replicadas. O
multifuncional antgeno lT exerce um papel fun-
damental no incio da replicao do DNA viral
ao se ligar em seqncias regulatrias, localiza-
Replicao dos vrus DNA 145
das nas proximidades do promotor/enhancer do
genoma do SV-40. Essa regio, conhecida por ori-
gem da replicao (ori), consiste de uma seqn-
cia central de 64 nucleotdeos, anqueada por
seqncias auxiliares (Figura 6.3). Como outras
protenas que se ligam ao DNA, o antgeno lT oli-
gomeriza ao interagir com os stios especcos na
ori. Hexmeros do lT formam um anel duplo ao
redor da ori e promovem a separao das cadeias
do DNA viral nesse local. Esse processo depen-
dente de energia, que fornecida pela hidrlise
de ATP catalisada por uma atividade ATPase do
prprio antgeno T (Figura 6.4).
As regies de ta simples do DNA associam-
se, ento, com a protena replicativa A (RPA), que
uma protena celular que se liga e mantm as
regies de ta simples separadas. Isso permite a
separao bidirecional das cadeias mediada pelo
antgeno lT, expondo regies de cadeia simples
para a processividade da replicao. O recruta-
mento da DNA polimerase (primase) e da topoi-
somerase I resulta na formao do complexo de
iniciao. A etapa de elongao envolve a sntese
bidirecional do DNA, que precedida pela ati-
vidade helicase do antgeno lT, que se move
frente do complexo replicativo (Figura 6.1A). Os
fatores do hospedeiro (PCNA e a DNA polime-
rase ) participam da sntese das cadeias leading
(contnua) e lagging (descontnua). A exonuclease e
ligase I da clula hospedeira so necessrias para
a remoo dos primers e ligao dos fragmentos de
Okazaki, produzidos pela replicao descontnua
de uma das cadeias. Como as cadeias parental e
recm-replicada de DNA, so circulares e perma-
necem entrelaadas. A prxima etapa envolve a
separao dessas molculas pela ao da enzima
celular topoisomerase II (Figura 6.1). As histonas
acumuladas no ncleo celular durante a fase S se
associam com os genomas virais recm-replica-
dos, formando, assim, uma prognie de minicro-
mossomos. As clulas infectadas contm mais de
200.000 cpias de DNA viral e, aproximadamen-
te, 50% destes so encapsidados para formar a
prognie viral. Em resumo, a replicao do DNA
do SV-40 compartilha vrias etapas e componen-
tes essenciais envolvidos na replicao do DNA
da clula hospedeira.
2.5 Expresso dos genes tardios
A replicao do DNA viral provoca uma
alterao no padro de expresso gnica, fa-
vorecendo a transcrio e expresso dos genes
tardios (L = late), que codicam as protenas do
capsdeo. O mecanismo de transio, passando
da expresso dos genes iniciais para a expresso
pRB
p107
p130
Hsc70
Domnio J
p53
p300
Zn HR
Antgeno T
N
L
S
L
X
C
X
E
Liga na ORI
Liga na p53
ATPase
Liga na p53
Figura 6.4. Estrutura funcional do antgeno T do SV-40. Nessa representao, esto indicados os motivos funcionais
do lT. Domnio J: stio de ligao da protena Hsc70; LXCXE: stio de ligao das protenas da famlia pRb; NLS: sinal
para localizaonuclear; stiode ligaona ORI; stiode ligaode Zn+; stiocomatividade ATPase; stios de ligao
nas protenas p53; HR: stioenvolvidonadeterminaodohost range.
Fonte: adaptado de Cole e Conzen (2001).
146 Captulo 6
dos tardios no bem conhecido. A redistribui-
o dos nucleossomos nas regies regulatrias
do genoma possivelmente desempenhe alguma
funo nesse processo, pois resulta na exposio
dos stios regulatrios dos genes tardios para o
reconhecimento pelo aparato celular de transcri-
o. O promotor que direciona a expresso dos
mRNA tardios possui alguns motivos presentes
tambm nos stios regulatrios dos genes iniciais,
incluindo as seqncias para a ligao do antge-
no lT.
Dois mRNA tardios principais so trans-
critos na direo oposta aos mRNA iniciais e
sofrem splicing alternativo. Os mRNA pequenos
so traduzidos na protena VP1 do capsdeo, e os
transcritos grandes originam a VP2 e VP3. Como
a seqncia que codica a VP3 est contida na
seqncia da VP2, a VP3 poderia ser produzida
pela clivagem da protena VP2. No entanto, tem
sido demonstrado que a traduo e sntese da
VP3 e VP2 so independentes.
A quantidade de mRNA tardios nas clulas
infectadas muito superior a dos mRNA iniciais.
Isso se explica pelo fato de que uma nica part-
cula vrica contm 360 molculas de VP1. Portan-
to, para uma prognie viral de 10
5
vrions por c-
lula, so necessrias 3.6 x 10
7-8
molculas de VP1.
Assumindo que cada molcula de mRNA pode
originar de 5.000 a 10.000 molculas de VP1, mais
de 30.000 molculas de mRNA da VP1 seriam ne-
cessrias para a produo de protena suciente
para encapsidar a prognie viral. O acmulo da
prognie de minicromossomos durante a replica-
o do DNA viral, com a conseqente amplica-
o dos moldes DNA e a ativao da transcrio
pelo antgeno lT, so os responsveis pelos nveis
altos de mRNA tardios nas clulas infectadas.
Recentemente, foi relatado que microRNAs
(miRNAs) so transcritos do genoma do SV-40
em fases tardias da infeco. Os miRNAs so
pequenos (aproximadamente 20 nt) e desempe-
nham funes regulatrias na expresso gnica
de eucariotas. A hibridizao desses miRNAs
com determinados mRNA-alvos resulta no silen-
ciamento dos genes correspondentes. Esse silen-
ciamento pode ocorrer por interferncia com a
traduo ou pela degradao dos mRNA. Assim,
dois mecanismos atuam para reduzir a expresso
do antgeno lT em fases tardias da infeco: a re-
presso da transcrio pelo prprio antgeno lT
e a interferncia pelos miRNAs. Surpreendente-
mente, clulas infectadas com isolados de campo
do SV-40 so menos susceptveis lise por linf-
citos T citotxicos do que clulas infectadas com
cepas mutantes que no induzem a sntese de
miRNAs. Provavelmente, a capacidade de snte-
se de miRNA se constitua em um mecanismo de
evoluo viral, permitindo a esses vrus escapa-
rem da vigilncia do sistema imunolgico.
2.6 Morfognese e egresso
Aps a sntese no citoplasma, as protenas
virais VP1, VP2 e VP3 so transportadas para o
interior do ncleo para a montagem dos vrions.
Esse transporte mediado por sinais de locali-
zao nuclear (NLS, seqncias especcas de
aminocidos) presentes nessas protenas. Essas
seqncias so responsveis pela interao das
protenas virais com o aparato de importao nu-
clear.
O mecanismo de montagem das partculas
virais (morfognese) dos poliomavrus no co-
nhecido. Capsdeos vazios podem ser inicialmen-
te pr-formados, seguidos da incorporao dos
genomas (como minicromossomos). Alternativa-
mente, os capsmeros individuais formados pe-
los pentmeros da VP1, associados com a VP2 e
com a VP3, podem interagir como o minicromos-
somo para a montagem dos capsdeos. A prote-
na agno, uma protena altamente bsica, codica-
da pela regio lder dos mRNA tardios de alguns
PoVs, facilita a morfognese por interagir com a
VP1. Nos PoVs de humanos, a agnoprotena atua
tambm na transcrio e replicao do DNA.
2.7 Concluses

A importncia crtica de uma nica prote-
na o antgeno lT em vrias etapas do ciclo
replicativo, como a transcrio, induo da fase S
e replicao do DNA, constitui-se em um aspecto
nico da famlia Polyomaviridae. O antgeno lT o
protagonista principal e possui vrias atividades
Replicao dos vrus DNA 147
biolgicas. Atua como regulador da transcrio
viral, como protena ligante de DNA, possui ati-
vidade helicase e ATPase e de chaperone, alm de
interagir com vrias protenas da clula hospe-
deira. A atividade do antgeno lT regulada por
vrias modicaes ps-traduo, como fosfori-
lao, glicosilao, acetilao e adenilao.
Os PoVs so tambm conhecidos como pe-
quenos vrus DNA tumorais, por causa de sua
capacidade de induzir a formao de tumores. A
infeco de clulas no-permissivas pode resul-
tar em replicao abortiva. No entanto, a integra-
o freqente do genoma viral nos cromossomos
da clula hospedeira pode resultar em expresso
contnua das protenas iniciais. O antgeno T pos-
sui um papel decisivo nos processos de imortali-
zao, transformao celular e oncognese, pro-
vavelmente por suas interaes com mltiplos
fatores celulares e pela interferncia com a regu-
lao do ciclo celular.
3 Papilomavrus
A famlia Papillomaviridae possui apenas o
gnero Papillomavirus, que inclui vrios vrus de
mamferos e de aves. Esses vrus esto freqen-
temente associados com leses proliferativas na
epiderme e nas mucosas (papilomas ou verrugas).
Alm de clulas epiteliais, alguns papilomavrus
(PpVs) tambm infectam clulas do tecido con-
juntivo, causando bropapilomas (p. ex.: papi-
lomavrus bovino-1, BPV-1). As leses causadas
pelos PpVs so geralmente benignas, mas alguns
desses vrus esto associados com a produo de
neoplasias malignas.
Os vrions dos PpVs so icosadricos, sem
envelope e possuem aproximadamente 55 nm de
dimetro. O genoma consiste de uma molcula
de DNA de ta dupla circular, com 6.800 a 8.400
pb que, a exemplo dos poliomavrus, est asso-
ciada com histonas da clula hospedeira, forman-
do um complexo semelhante cromatina celular
(minicromossomo).
3.1 O ciclo replicativo
O ciclo replicativo dos PpVs est estreita-
mente associado com o processo de diferenciao
dos queratincitos (ou das clulas equivalentes
em superfcies no-cutneas). Na epiderme, os
queratincitos representam cerca de 90% das c-
lulas e encontram-se em diferentes fases de dife-
renciao. As clulas menos diferenciadas esto
localizadas no compartimento basal (estrato ger-
minativo), e as mais diferenciadas localizam-se
no compartimento apical (estrato crneo). As c-
lulas em estgios intermedirios de diferenciao
esto localizadas nos estratos granuloso e espi-
nhoso. As clulas-tronco do compartimento basal
se multiplicam de forma assimtrica, originando
outras clulas-tronco e tambm clulas de transi-
o para a posterior diferenciao. Essas ltimas
deixam o estrato basal e penetram no estrato es-
pinhoso, onde iniciam o processo de diferencia-
o celular. O ritmo de multiplicao das clulas
basais assegura uma substituio contnua das
clulas escamosas da superfcie apical que vo
sendo desfoliadas.
A infeco de animais e pessoas pelos PpVs
provavelmente ocorre por meio de microleses,
que expem o compartimento basal, permitindo
a penetrao e incio da replicao viral. A liga-
o dos vrus s clulas mediada pelo sulfato de
heparina. No entanto, no se conhecem os recep-
tores especcos que mediam a ligao e penetra-
o do vrus nas clulas e tampouco o mecanismo
de desnudamento.
A infeco das clulas basais no produ-
tiva, ou seja, no resulta na produo de prog-
nie viral. O ciclo replicativo inicia nessas clulas
com a expresso limitada de genes virais (genes
iniciais) e replicao do DNA. No entanto, a re-
plicao s completada nas clulas diferencia-
das, onde ocorre a amplicao do DNA viral,
a expresso dos genes tardios, a morfognese e
egresso da prognie viral. Embora as clulas ba-
sais representem a fonte de fatores de replicao,
a infeco viral necessita de fatores que somente
esto presentes em clulas que esto na fase S,
para assegurar a expresso temporal dos genes e
a replicao do genoma.
3.2 O genoma dos PpVs
A Figura 6.5 apresenta a organizao do ge-
noma do papilomavrus bovino tipo 1 (BPV-1).
148 Captulo 6
Os genes do PpVs so classicados em iniciais
(E) ou tardios (T) e, ao contrrio dos PoVs, so
codicados em apenas uma das tas do DNA
genmico. Assim, a transcrio do DNA viral
realizada em apenas uma direo. Uma regio
no-traduzida, conhecida como regio longa de
controle (LCR), contm as seqncias regulat-
rias, incluindo a origem da replicao do DNA
e enhancers para a transcrio. Seis diferentes
promotores foram identicados no genoma do
BPV-1. Entre os diferentes PpVs, existe uma va-
riabilidade muito grande dos promotores, prova-
velmente reetindo os aspectos peculiares de re-
gulao em diferentes espcies ou em diferentes
stios de replicao.
3.3 Expresso dos genes iniciais
A expresso dos genes dos PpVs comple-
xa, em razo da presena de mltiplos promoto-
res, de stios de splicing alternativo e pela produ-
BPV-1
L2
4000
5000
6000
7000
7946/1
1000
2000
3000
CE
AL
P7185
PL
P7940
P89
P890
P2443
P3080
AE
L1
LCR
E6
E7
E8
E1
E2
E4
E3
E5
Figura 6.5. Estrutura e organizao do genoma do
papilomavrus bovino tipo 1 (BPV-1). LCR: regio longa
de controle (contm a origem de replicao); CE:
enhancer constitutivo; P: promoters (os nmeros
indicam a posio no genoma); AE: stio de
poliadenilao dos transcritos iniciais; AL: stio de
poliadenilao dos transcritos tardios; E1 a E8: mRNAs
dos genes iniciais; L1e L2: mRNAs dos genes tardios.
Fonte: adaptado de Fowley e Lowy (2001).
o diferencial de mRNAs em diferentes clulas.
Os mRNA dos PpVs so policistrnicos, ou seja,
contm mais de uma seqncia codicante (open
reading frame, ORF). No entanto, apenas uma des-
sas ORFs traduzida de cada mRNA. Nos PpVs
de humanos e de bovinos, os primeiros genes a
serem expressos so o E1 e E2, pela RNA pol II,
com o auxlio de fatores de transcrio espec-
cos de queratincitos.
A protena E2 desempenha um papel funda-
mental na transcrio e na replicao do DNA.
Essa protena contm uma regio para a ligao
no DNA e outra com funo de ativao da trans-
crio. A E2 se liga especicamente em determi-
nados promotores no LCR e controla positiva e
negativamente a expresso dos genes iniciais,
dependendo da sua concentrao e das intera-
es de suas regies regulatrias com o DNA.
Essa regulao ainda mais complexa devido
presena de diferentes isoformas da E2, que, pro-
vavelmente, possuam diferentes propriedades
regulatrias. Por outro lado, a nica e importante
funo da E2 na replicao do genoma estimu-
lar a ligao da E1 ao DNA, principalmente no
incio da infeco, quando a concentrao da E1
ainda baixa.
A E1 a maior e mais conservada protena
dos PpV. a nica protena viral diretamente en-
volvida na replicao do DNA viral. Essa prote-
na apresenta atividade ATPase/helicase e forma
hexmeros simples e duplos ao redor do DNA vi-
ral. Alm disso, a E1 forma complexos com pro-
tenas do hospedeiro que esto envolvidas com
a replicao do DNA, incluindo as subunidades
da DNA polimerase , a RPA e chaperone Hsp40.
Portanto, a E1 dos PpV semelhante ao antgeno
lT dos poliomavrus com relao atividade en-
zimtica, capacidade de recrutar fatores celulares
e no papel fundamental na iniciao da replica-
o do genoma viral.
3.4 Replicao do DNA e interferncia
com o ciclo celular
O resultado da atividade conjunta da E1 e
E2 a formao do complexo de iniciao que se
liga na origem de replicao do DNA. Esse even-
to precede e permite a elongao da cadeia, resul-
Replicao dos vrus DNA 149
tando na produo das cpias de DNA a serem
encapsidadas na prognie viral. importante sa-
lientar que todas as fases da replicao do DNA
viral ocorrem em sincronia com a replicao dos
cromossomos da clula hospedeira.
A replicao do DNA viral no compartimen-
to basal produz entre 20 e 100 cpias do genoma,
que so mantidos como DNAs extracromossmi-
cos no ncleo da clula hospedeira. Os genomas
virais so elmente distribudos entre as clulas-
lhas, e o processo de replicao s reiniciado
nos queratincitos em estgios avanados de di-
ferenciao (Figura 6.6).
A amplicao dos genomas virais que
ocorre em queratincitos diferenciados, denomi-
nada replicao vegetativa do DNA, representa
um desao para o vrus, pois essas clulas encon-
tram-se na fase G0 do ciclo celular. Acredita-se
que duas pequenas protenas virais, a E6 e a E7,
sejam responsveis pela criao de um ambiente
favorvel para a replicao vegetativa. Essas pro-
tenas tambm desempenham um papel central
na transformao celular e na induo de neopla-
sias, especialmente nos PpVs humanos de alto
risco. De fato, sabe-se muito mais sobre o papel
dessas protenas na transformao celular do que
em infeces produtivas. Por isso, deve-se anali-
sar com cautela as informaes a respeito do pro-
vvel papel da E6 e da E7 na infeco produtiva
no contexto da replicao vegetativa do DNA.
Estrato crneo
Camadas
granulares
Camadas
espinhosas
superiores
Camadas
espinhosas
inferiores
Clulas amplificadores
em trnsito (mitticas)
Clulas basais
e de reserva
(substituem as
amplificadoras)
Membrana basal
Derme
(tecido conjuntivo,
fibroblastos, endotlio
vascular)
Diferenciao dos
queratincitos
Replicao dos
papilomavrus
Liberao de vrions maduros
Vrions maduros
Morfognese dos vrions
Produo das protenas tardias
Amplificao vegetativa do DNA
Nveis altos de protenas iniciais (E4)
Protenas dependentes
da diferenciao E6 e E7
Protenas iniciais E1, E2, E3 e E4
Possvel stio alternativo
de infeco
Protenas iniciais E1 e E2
Infeco primria
Estabelecimento da replicao
Protenas iniciais E1 e E2
Vrus introduzido
por microleses
Figura 6.6. Diferenciao do epitlio cutneo e etapas da replicao dos papilomavrus em infeces benignas (no-
tumorais). As fases de diferenciao celular esto apresentadas esquerda da figura; e as etapas do ciclo replicativo
estoapresentadas direita.
Fonte: daptado de Chow e Broker (1997).
150 Captulo 6
De forma semelhante ao antgeno lT dos
PoVs, as E6 e E7 dos PpVs interagem com as
protenas celulares pRb e p53, que so protenas
antioncognicas envolvidas no controle do ciclo
celular. Quando a E6 expressa em camundon-
gos transgnicos, ocorre a hiperproliferao do
epitlio e o desenvolvimento de tumores epite-
liais. Esses efeitos dependem parcialmente da
habilidade da E6 de se ligar p53 e recrutar uma
ligase celular, que adiciona uma ubiquitina, a
p53, direcionando-a a degradao. A E6, ento,
ao remover a p53, que envolvida no controle do
ciclo celular, estimularia a clula a entrar em fase
S e retardaria a apoptose.
Estudos recentes sugerem que, alm dos efei-
tos mediados pela interao com a p53, a E6 pode
interferir com o ciclo e na sobrevivncia celular
por outros mecanismos. A E6 induz a hiperfos-
forilao e inativao da pRb, o que importante
para entrada da clula na fase S. Tambm induz a
expresso da telomerase, uma enzima que repli-
ca as extremidades do DNA e impede o encurta-
mento dos cromossomos aps a diviso celular.
A inativao da pRb e a expresso da telomerase
so importantes no processo de imortalizao de
clulas pelos PpVs. Alm disso, a E6 pode intera-
gir com a BAK, que uma protena pr-apoptose,
que expressa em altos nveis na camada apical
do epitlio estraticado. Assim como a p53, a in-
terao da E6 com a BAK resulta na ubiquitina-
o e posterior degradao da BAK. Por induzir a
degradao da p53 e BAK, a E6 impede ou reduz
a probabilidade da clula infectada sofrer apop-
tose em resposta infeco, aumentando o tempo
para o vrus completar o seu ciclo replicativo.
A E7 interage com vrias protenas celula-
res envolvidas no controle do ciclo e na diferen-
ciao celular, incluindo os membros da famlia
das protenas pRb, as deacetilases de histonas,
as ciclinas, cdks e fatores de transcrio da fa-
mlia dos AP-1. Embora o signicado de vrias
dessas interaes permanea incerto, sabe-se que
a ligao da E7 com a pRb resulta na degradao
da pRb e na conseqente liberao do fator de
transcrio E2F. A interao da E7 com fatores de
transcrio AP-1 est associada com a modulao
da transcrio de genes envolvidos com resposta
inicial a sinais mitognicos.
Em resumo, a E6 e a E7 atuam sobre regula-
dores importantes do ciclo celular e da sobrevi-
vncia das clulas infectadas, com o objetivo de
proporcionar tempo suciente para assegurar a
replicao e produo de prognie viral em clu-
las diferenciadas. A progresso do ciclo e a dife-
renciao celular so eventos mutuamente exclu-
dentes. De fato, a progresso no-programada do
ciclo celular em clulas diferenciadas geralmente
leva morte celular. Assim, a E6 e a E7, ao in-
uenciarem simultaneamente o ciclo celular e o
mecanismo de sobrevivncia, so capazes de re-
solver o impasse que levaria morte celular.
Alm do papel da E6 e E7, experimentos in
vitro tm demonstrado que a E5 do BPV-1 ativa
o receptor para o fator de crescimento derivado
das plaquetas (PDGF), uma protena que se liga
ao PDGF e proporciona o sinal mitognico. As-
sim, por mimetizar o PDGF, a E5 capaz de criar
sinais adicionais para criar um ambiente de fase
S propcio replicao viral.
3.5 Expresso dos genes tardios
A transcrio dos genes tardios controlada
por um promotor, que estimulado por fatores
de transcrio presentes somente em queratin-
citos em fase nal de diferenciao. Isso pode ex-
plicar porque a sntese das protenas estruturais e
a morfognese das partculas virais ocorrem ape-
nas em clulas diferenciadas. No entanto, evidn-
cias indicam que a expresso dos genes tardios
em queratincitos menos diferenciados repri-
mida por fatores do hospedeiro. Isso indica que
a regulao dos genes tardios e a conseqente
continuao do ciclo podem estar sujeitas tanto a
regulao positiva como negativa, ambas depen-
dentes de condies e fatores associados com o
estgio de diferenciao celular.
O mesmo promotor tardio direciona a snte-
se de mRNAs que codicam a E4, uma das pro-
tenas menos conservadas dos PpV. Dessa forma,
embora o gene da E4 esteja localizado na regio
dos genes iniciais, expresso em fases tardias. O
gene da E4 completamente sobreposto ao gene
da E2. No entanto, a sua seqncia de aminoci-
dos codicada por uma ORF diferente, fazendo
com que as seqncias de aminocidos da E2 e
Replicao dos vrus DNA 151
da E4 sejam completamente diferentes. A E4 se
associa com a queratina e, quando expressa em
altos nveis, pode induzir o colapso da cadeia de
queratina. Com base nessas observaes, pro-
vvel que a E4 participe da replicao, facilitando
o egresso das partculas vricas.

3.6 Concluses
Os PpVs dependem da diferenciao do epi-
tlio para completar o seu ciclo de replicao, e
a expresso dos seus genes regulada medida
que as clulas basais migram em direo super-
fcie do epitlio. Os produtos virais no apenas
controlam a expresso gnica dos genes virais e
a replicao do DNA viral como tambm modu-
lam o ciclo celular e os programas de apoptose
para assegurar a produo de prognie viral. Em
algumas circunstncias, infeces abortivas, sem
a realizao completa do ciclo replicativo viral,
podem ocorrer. A exemplo de outros vrus DNA
pequenos, essas infeces abortivas podem resul-
tar em transformaes neoplsicas.
4 Adenovrus
A Adenoviridae uma famlia de vrus DNA
grandes, no-envelopados, que infectam verte-
brados e produzem enfermidade leve no trato
respiratrio, gastrintestinal e genitourinrio. Os
adenovrus (AdVs) possuem a capacidade de in-
fectar uma grande variedade de clulas que no
esto em diviso. Por isso, tm sido muito utiliza-
dos como vetores para a transferncia de genes e
tambm para vacinas vetoriais. Por essas razes,
a biologia molecular dos AdVs conhecida com
detalhes.

4.1 O ciclo replicativo
Aproximadamente aps 40 minutos da pe-
netrao na clula, os vrions podem ser observa-
dos prximos ao ncleo. A internalizao parece
ativar a protease viral L3, que inicia o desmonte
da partcula vrica. A protena terminal (TP), que
uma protena que est associada de forma co-
valente na extremidade 5 do genoma, contm si-
nais de localizao nuclear, que so encarregados
de mediar a importao do genoma viral para o
ncleo da clula hospedeira.
A expresso gnica do AdVs divide-se em
fases inicial e tardia. As protenas iniciais so
necessrias para a transcrio dos genes virais
e para a replicao do DNA. Tambm esto en-
volvidas com a interferncia com os mecanismos
inamatrios e de apoptose desencadeados pelo
hospedeiro. Aps a replicao do DNA, ocorre a
expresso dos genes tardios, cujos produtos so,
em sua maioria, componentes estruturais das
partculas vricas. O ciclo replicativo se completa
em 20 a 24 horas e resulta na produo de apro-
ximadamente 10
4
partculas vricas por clula in-
fectada.
Embora a diviso da expresso gnica em
fases inicial e tardia seja conveniente do ponto de
vista didtico, o limite exato entre essas fases no
claro. Por exemplo, alguns genes iniciais conti-
nuam a ser expressos em fases tardias da infec-
o; e baixos nveis de expresso de genes tardios
podem ser detectados j no incio da infeco.
Essa sobreposio da expresso gnica inicial/
tardia tambm observada durante a replicao
de outros vrus DNA.

4.2 O genoma dos AdVs
Os genomas dos AdVs de mamferos so
constitudos por molculas lineares de DNA de
ta dupla, com aproximadamente 35 kb. Seqn-
cias repetidas invertidas (ITRs) com 36 a 200 pb
so encontradas nas regies terminais do geno-
ma. O genoma encontra-se associado com quatro
protenas virais (V, VII, X and TP) para formar o
ncleo (ou core) da partcula viral. A protena V
provavelmente medeia as interaes entre o n-
cleo e o capsdeo. Maiores detalhes da estrutura
das partculas vricas dos adenovrus esto apre-
sentados no Captulo 16.
Embora a organizao genmica seja conser-
vada dentro dos gneros, diferenas importantes
podem ser observadas entre vrus de gneros di-
ferentes. A maioria dos genes gnero-especcos
se localiza prxima s extremidades do genoma,
enquanto os genes conservados na famlia ten-
dem a se concentrar na regio central. Essa ca-
racterstica tambm observada em outros vrus
152 Captulo 6
DNA de ta dupla lineares, como os poxvrus
e herpesvrus. Nessas famlias, vrios genes g-
nero-especcos esto envolvidos nas interaes
do vrus com o hospedeiro, provavelmente para
favorecer a sua sobrevivncia em determinados
nichos biolgicos. Alguns desses genes parecem
ter sido capturados do hospedeiro em um passa-
do remoto.
O genoma dos AdVs codica aproxima-
damente 45 protenas, das quais apenas 12 so
encontradas nos vrions. Os genes virais so or-
ganizados em unidades de transcrio, cuja ex-
presso regulada temporalmente. Cinco unida-
des E1A, E1B, E2, E3 e E4 so expressas em
fases iniciais e uma (L) expressa tardiamente na
infeco. Duas pequenas unidades (IX e Iva2) so
expressas em fases intermedirias. O genoma do
AdV humano pode ser descrito como um bloco
central de genes com orientao para a direita,
interrompidos por genes iniciais da regio E3 na
mesma cadeia, e por genes E2 na cadeia oposta.
A regio terminal direita ocupada pelos genes
E4, e, esquerda, pelos genes E1A and E1B e dois
genes intermedirios (Figura 6.7).
Vrios mRNA so produzidos a partir de
cada unidade transcripcional. Com poucas exce-
es, os transcritos primrios das vrias unidades
so processados por splicing. De fato, uma das
mais importantes contribuies dos AdVs para a
1 2 i 3 Leader:
ML
IX
E1B
L1
L2
L3
L4
L5
x y z
E1A
L1 (iniciais)
VA
E3 (tardio)
E3
10 100 20 30 40 50 60 70 80 90
IV a2
E2A
E2B
E4
Figura 6.7 Estrutura do genoma e mapa de transcrio dos adenovrus. A linha dupla representa o genoma. Os
nmeros abaixo representam as unidades genmicas. Os transcritos iniciais (E: so representados por setas
finas; os transcritos tardios (L: so representados por setas espessas. A extenso das setas corresponde regio
codificante dos mRNAs. A maioria dos transcritos tardios inicia na regio prxima unidade 16 do mapa e contm
uma regio lder composta por trs seqncias (1, 2 e 3). As regies entre as seqncias lder e as respectivas setas so
removidas por (representamos ntrons).
early)
late)
splicing
Fonte: adaptado de Shenk (2001).
Replicao dos vrus DNA 153
Biologia foi a descoberta do splicing de RNA rea-
lizada durante estudos de expresso gnica.
A maioria das unidades de transcrio co-
dica uma srie de polipeptdeos com funes
relacionadas. Por exemplo, a unidade E1A co-
dica duas protenas que ativam a transcrio e
induzem a clula hospedeira a entrar na fase S,
enquanto a E2 codica trs protenas que atuam
na replicao do DNA viral.

4.3 Expresso dos genes iniciais
A regio da E1A, a primeira unidade trans-
cripcional a ser expressa, resulta em um transcri-
to primrio nico, que processado por splicing
diferencial em dois mRNAs. Os seus produtos,
as protenas 12S e 13S (em razo de diferenas
no coeciente de sedimentao dos mRNA), so
idnticas, com exceo de 46 aminocidos adicio-
nais presentes na E1A 13S.
Uma funo importante das protenas E1A
estimular a transcrio generalizada de genes
virais. Essa funo depende da habilidade das
protenas E1A de se ligarem em uma variedade
de fatores regulatrios da transcrio celular,
como as protenas CREB, AP1 e fatores basais
de transcrio como a protena ligante do TATA
(TBP). A ligao da E1A nesses fatores media-
da pelos domnios conservados CR1 e CR2 (12S e
13S) e CR3 (somente na 13S). Uma interao crti-
ca ocorre entre o CR3 e a subunidade mediadora
MED23, que estimula a montagem do complexo
de pr-iniciao nos promotores dos genes ini-
ciais e, provavelmente, tambm aumente a taxa
de incio da transcrio desses genes.
As protenas E1A tambm desempenham
um papel importante de induo do ciclo celular.
A exemplo dos poliomavrus, as protenas iniciais
dos AdVs focalizam a sua ao nos reguladores
principais do ciclo celular, a pRb e p53. A intera-
o entre as E1A e a pRb resulta na dissociao
dos complexos E2F-pRb e ativao da transcrio
de genes cujos produtos promovem a entrada na
fase S. Interessantemente, a E2F tambm se liga
e ativa os promotores da E1 e E2. Isso provavel-
mente represente um mecanismo para coordenar
a progresso do ciclo celular com a expresso g-
nica e replicao do DNA viral.
As protenas E1A inibem a p300/CBP, uma
protena que modica a estrutura da cromatina
para facilitar a atividade de fatores de transcrio,
como a p53. Ao se ligar na p300/CBP, as prote-
nas E1A antagonizam a ao da p53, liberando o
bloqueio para a progresso do ciclo celular. Alm
disso, a E1B de certos AdVs pode se ligar direta-
mente e bloquear a p53. A razo por que os AdVs
(e tambm os polioma e papilomavrus) utilizam
dois mecanismos para estimular o ciclo celular
desconhecida. Uma possibilidade que, in vivo,
podem existir clulas nas quais um dos mecanis-
mos mais eciente do que o outro. Uma anlise
mutacional demonstrou que, embora a ligao da
E1A nas protenas pRb ou p300/CBP possa indu-
zir a sntese de DNA em clulas quiescentes, am-
bas as regies so necessrias para induzir a fase
M, sugerindo que eventos tardios do ciclo celular
so, provavelmente, requeridos para assegurar
uma replicao viral eciente. Funes virais que
induzem a progresso do ciclo celular esto en-
volvidas na transformao de clulas de cultivo
por alguns sorotipos dos AdVs. No entanto, ne-
nhum AdV tem sido associado com tumores em
seu hospedeiro natural.
Os AdVs induzem apoptose na clula hospe-
deira em fases iniciais da infeco, principalmen-
te atravs de efeitos indiretos da E1A. Por outro
lado, vrias protenas virais, incluindo as E1B/55
kDa, E1B/19 kDa e E4orf6, atuam bloqueando a
apoptose por vrios mecanismos. A E1B e E4orf6
bloqueiam o mecanismo pr-apopttico depen-
dente da p53, ligando-se e inativando essa prote-
na. A E1B/19 kDa semelhante protena celular
antiapopttica Bcl-2, que se localiza na membra-
na mitocondrial e impede a ativao da caspase-
9, uma efetora da apoptose. Mutantes do AdVs
defectivos na E1B/19 kDa induzem morte celular
rpida, resultando em produo de prognie vi-
ral em quantidade reduzida quando comparada
com o vrus de campo.
A sobrevivncia das clulas infectadas tam-
bm depende da interferncia com sinais de mor-
te celular induzidos pela resposta imune. A E3
19 kDa uma glicoprotena transmembrana que
ca retida no retculo endoplasmtico (RE) e cujo
domnio luminal se liga em molculas do MHC-
I, provocando a sua reteno no RE. A E3 19 kDa
154 Captulo 6
tambm se liga no complexo TAP e o impede de
transferir peptdeos ao MHC-I. O efeito dessas
atividades a proteo das clulas infectadas do
reconhecimento e lise mediada por linfcitos T
citotxicos (CTLs). Os CTLs tambm podem in-
duzir lise celular, desencadeando sinais atravs
do receptor de Fas expresso nas clulas-alvo. O
complexo viral E3 14.4-kDa/E3 10.4-kDa interfe-
re com a apoptose mediada pelo Fas, induzindo
a degradao do seu receptor. Alm disso, esse
complexo tambm inibe a lise celular pelo fator
de necrose tumoral alfa (TNF), uma citoquina
antiviral potente. Provavelmente, as atividades
imunomodulatrias das protenas E3 dos AdVs
desempenhem importantes funes durante e re-
plicao viral in vivo.
Uma das respostas mais precoces contra
infeces vricas aquela mediada pelos interfe-
rons (IFNs) e , que agem de forma autcrina
e parcrina, induzindo um estado de resistncia
antiviral nas clulas. Os IFNs atuam por meio de
seu receptor, provocando a ativao da transcri-
o de genes cujos produtos possuem aes anti-
virais. Elementos-chave nesse mecanismo so as
quinases citoplasmticas denominadas STATs,
que, uma vez ativadas, so translocadas para o
ncleo, onde se ligam e ativam os promotores
responsivos ao IFN. As protenas E1A dos AdVs
atuam diretamente nos mecanismos mediados
pelos IFNs, ligando-se e inativando a STAT1 e,
assim, bloqueando a ativao dos genes respon-
sivos aos IFNs.
Em resumo, as protenas iniciais dos AdVs
atuam para assegurar uma expresso gnica ade-
quada, progresso do ciclo celular e modulao
das respostas do hospedeiro, at que o ciclo repli-
cativo seja concludo. Indiretamente, essas ativi-
dades contribuem para a disseminao do vrus
no organismo do hospedeiro. Estudos de infec-
es pelos AdVs in vivo tm demonstrado que
esses vrus no so inerentemente inamatrios,
indicando que conseguem moderar a resposta in-
amatria do hospedeiro.

4.4 Replicao do DNA viral
A maioria das funes necessrias para a re-
plicao do DNA dos AdVs so codicadas pela
regio E2 do genoma. Seqncias especcas de
51 bp, localizadas nas regies terminais repeti-
das, servem de origem de replicao (ori). Duas
protenas virais codicadas pela regio E2, a pro-
tena pr-terminal (pTP) e a polimerase de DNA,
se ligam nas primeiras 20 bases da ori. Uma ter-
ceira protena da E2, a protena ligante do DNA
(DBP), juntamente com fatores celulares, ligam-
se um pouco abaixo (na direo 3) e interagem
com o complexo pTP/polimerase. A principal
funo da pTP servir de primer para a inicia-
o da replicao do DNA viral. Essa protena ,
posteriormente, clivada para originar a TP, que
permanece ligada s extremidades 5 do genoma.
A DBP forma multmeros em uma das cadeias
do DNA, provocando a separao das cadeias,
evento que necessrio para a elongao das ca-
deias-lhas. A sntese de DNA se inicia na extre-
midade de uma das cadeias e se prolonga at a
outra extremidade, resultando em uma molcula
de cadeia dupla recm-replicada e uma molcula
parental de cadeia simples. No segundo estgio,
a cadeia simples deslocada na reao inicial serve
de molde para a sntese da cadeia complementar.
Em clulas de cultivo, a replicao do DNA viral
se inicia 5 a 10 horas aps a infeco e continua
at a morte celular. Uma ilustrao simplicada
da replicao do genoma dos AdVs est apresen-
tada na Figura 6.8. Maiores detalhes sobre este
mecanismo esto apresentados no Captulo 16.
4.5 Expresso dos genes tardios
O promotor principal tardio exibe um nvel
baixo de atividade durante as fases iniciais da
infeco e direciona a expresso da protena L1
52/55-kDa. Esta protena se associa com o geno-
ma e o empacota em etapas avanadas do ciclo.
medida que a replicao do DNA progride, a
atividade do promotor tardio aumenta e se torna
centenas de vezes mais ativo em fases tardias da
infeco. Esse promotor fortemente ativado pe-
las protenas E1A, mas as razes de sua ativao
tardia so desconhecidas.
A transcrio da regio tardia do genoma re-
sulta em um transcrito primrio longo, que pro-
cessado por poliadenilao em diferentes stios,
Replicao dos vrus DNA 155
e por splicing para gerar vrios mRNA tardios. O
acmulo citoplasmtico dos mRNA tardios fa-
vorecido por duas protenas virais, a E1B 55 kDa
e E4 34 kDa, que facilitam o movimento desses
transcritos do ncleo para o citoplasma. Conco-
mitantemente, o transporte de mRNA celulares
para o citoplasma inibido. A natureza dessa
discriminao (mRNA virais versus mRNA celu-
lares) no completamente conhecida, mas pode
envolver a relocalizao de fatores celulares re-
queridos para o transporte de mRNA nos centros
de transcrio virais.
Alm disso, os mRNA virais so preferen-
cialmente traduzidos em etapas tardias da infec-
o, por causa de vrios mecanismos regulatrios
virais. Um desses mecanismos a inativao do
fator de iniciao da traduo eIF-4F, que, nor-
malmente, se liga aos mRNA para facilitar a
traduo. As extremidades 5 dos mRNA virais
tardios contm uma regio no-codicante de
200 nt, que permite a esses mRNA serem tradu-
zidos na ausncia de eIF-4F ativo. Em contraste,
os mRNA celulares no so mais traduzidos na
ausncia do eIF-4F.
A maioria das protenas tardias dos AdVs
so componentes estruturais dos vrions e fatores
envolvidos na morfognese que, juntamente com
a replicao do DNA, produzem o cenrio para a
morfognese e egresso da prognie viral.
Primeira
etapa
Segunda
etapa
Circulariza
Lineariza
Tp
Tp
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
-OH
-OH
OH
OH
.pTp
+
Figura 6.8. Ilustrao esquemtica da replicao do genoma dos adenovrus. Na primeira etapa, apenas uma das
cadeias replicada de maneira contnua, a partir de uma das extremidades. A cadeia no-replicada circulariza ento
para a formao de uma nova origem de replicao. A replicao desta cadeia inicia na extremidade e prossegue ao
longo da cadeia, que, emseguida, assume a topologia linear. Ao final das duas etapas, as duas cadeias de DNAesto
replicadas.
.pTp
Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).
156 Captulo 6
4.6 Concluses
Os adenovrus codicam uma srie de pro-
dutos envolvidos na interferncia com os meca-
nismos de regulao do ciclo celular. As protenas
E1A so ativadores promscuos de vrios genes
virais e tambm induzem a clula a entrar em
fase S. Por outro lado, os efeitos indiretos dessa
ativao podem levar a clula infectada apopto-
se. Por isso, os AdV codicam tambm produtos
com atividade antiapopttica. Com isso, o vrus
tem tempo suciente para completar o seu ciclo
replicativo. No hospedeiro, os AdVs interferem
com o reconhecimento de clulas infectadas pelo
sistema imunolgico, tambm com o objetivo de
preservar a integridade das clulas infectadas
pelo tempo necessrio para a concluso do ci-
clo. Os AdVs tm sido intensivamente estudados
como potenciais vetores para terapia gentica e
vacinas contra vrus.
5 Herpesvrus
Os herpesvrus (HVs) so vrus grandes
(120-200 nm de dimetro), com envelope, que
possuem uma molcula de DNA de cadeia du-
pla linear como genoma. A famlia Herpesviridae
dividida em trs subfamlias, de acordo com
aspectos biolgicos e moleculares em comum:
Alphaherpesvirinae, Betaherpesvirinae e Gammaher-
pesvirinae. Todos os herpesvrus possuem a capa-
cidade de estabelecer infeces latentes em seus
hospedeiros. Os herpesvrus so encontrados em
praticamente todas as espcies de vertebrados.
5.1 O ciclo replicativo
Os HVs replicam o seu genoma no ncleo
da clula hospedeira e utilizam fatores virais e
celulares no processo de replicao. Dependendo
da expresso de determinados genes e das inte-
raes com a clula hospedeira, os HVs podem
apresentar dois tipos distintos de ciclo replica-
tivo. O primeiro ocorre nas clulas epiteliais ou
do tegumento durante a infeco aguda inicial,
logo aps a penetrao no hospedeiro. A infeco
dessas clulas resulta na expresso do conjunto
completo de genes virais e na produo de pro-
gnie viral infecciosa. A infeco produtiva com
produo de prognie incompatvel com a so-
brevivncia das clulas e resulta inevitavelmente
em lise. Esse ciclo ltico pode ser facilmente re-
produzido in vitro pela inoculao de HVs em
clulas de cultivo.
Aps a replicao ltica inicial, os HVs po-
dem permanecer em determinadas clulas do
hospedeiro em um estado no-replicativo duran-
te um longo perodo, provavelmente por toda a
vida do indivduo, sem que este apresente sinais
da infeco. Essa forma no-produtiva de infec-
o, que ocorre sem a expresso de genes virais
ou produo de prognie viral, denominada in-
feco latente. No entanto, estmulos especcos
muitos deles relacionados ao estresse podem
induzir o vrus em latncia a retomar a replicao
ativa e, assim, iniciar um novo ciclo de infeco
produtiva que culmina com a produo da pro-
gnie viral. Essa retomada da replicao ativa
denominada reativao. Grande parte dos conhe-
cimentos sobre a replicao produtiva dos HVs
foram obtidos a partir de estudos da replicao
in vitro pelo herpesvrus humano tipo 1 (vrus do
herpes simplex, HSV-1), que o prottipo da fa-
mlia Herpesviridae. Em contraste, muito menos se
conhece sobre a infeco latente pelos HVs pela
diculdade de sua reproduo in vitro.
5.2 O genoma dos HVs
O genoma dos herpesvrus consiste de uma
ta dupla linear de DNA com 125 a 240 kb. Os ge-
nomas dos HVs so classicados em seis classes
(A-F), com base na organizao do genoma pre-
sena, nmero e localizao de regies repetidas e
terminais (Figura 6.9). Por exemplo, nos genomas
da classe E (p. ex.: HSV-1), as seqncias termi-
nais so repetidas em uma orientao invertida
e justapostas internamente, dividindo o genoma
em uma regio curta (S) e outra longa (L), onde
cada regio anqueada por regies repetidas
e invertidas. O genoma do herpesvrus bovino
tipo 1 (BoHV-1) um genoma do tipo D, no qual
apenas a regio curta (US) anqueada pelas re-
gies repetidas invertidas (Figura 6.9). Em ambos
os casos, os componentes nicos podem estar na
mesma orientao ou invertidos em relao ao
Replicao dos vrus DNA 157
outro. O DNA extrado dos vrions consiste em
populaes equimolares que diferem apenas na
orientao relativa dos dois componentes. Os ge-
nes presentes nas regies repetidas obviamente
se encontram em mais de uma cpia no genoma.
Epstein-Barr (EBV), so sintetizados microRNAs
que apresentam potencial para silenciar a expres-
so de genes celulares e/ou virais.
5.3 Os genes virais
Aproximadamente 30 genes dos HV (deno-
minados centrais ou core genes) so conservados
entre os membros da famlia Herpesviridae, ou
seja, esto presentes nos genomas de todos os
HV examinados at o momento. Os produtos
desses genes so responsveis pelo metabolismo
dos nucleotdeos, pela replicao do DNA e pela
morfognese e estrutura dos vrions. Outros ge-
nes so conservados apenas entre membros de
uma determinada subfamlia. Por exemplo, os
alfaherpesvrus codicam transcritos associados
latncia, uma protena do tegumento que ativa
a transcrio dos genes iniciais e um regulador
da transcrio relacionado ao ICP4 dos HSV-1.
Alm desses, vrios outros genes so peculiares
a algumas espcies de vrus.
Os HVs da subfamlia Gammaherpervirinae,
principalmente, codicam genes de origem do
hospedeiro, provavelmente adquiridos por re-
trotransposio de cDNAs. Em alguns casos, os
genes virais codicam funes similares as dos
correspondentes celulares. Em outros casos, es-
ses genes foram alterados para modicar a sua
funo. Por exemplo, o homlogo da ciclina tipo
D (no herpesvrus humano tipo 8 [HHV-8]) no
responde a sinais que atuariam sobre a verso ce-
lular do gene, fazendo com que a ciclina tipo D
viral permanea constantemente ativada e capaz
de promover transformao celular. Na seo 5.4,
ser visto que a aquisio de genes do hospedeiro
uma caracterstica marcante dos poxvrus.
Cerca de 50% dos genes do HSV-1 no so
necessrios para a replicao viral em cultivo ce-
lulares, por isso so ditos no-essenciais (NE). No
entanto, esses genes so importantes para a repli-
cao e patogenia durante a infeco natural. V-
rios genes NE atuam antagonizando os mecanis-
mos de defesa antiviral do hospedeiro e, assim,
favorecendo a replicao do vrus.
Os HVs so capazes de alterar o ambiente
celular para favorecer a sua replicao, provocan-
do a inibio ou induo da sntese de macromo-
O genoma dos HVs contm entre 70 e 200
genes, e a maioria destes so monocistrnicos,
portanto, codicam apenas uma protena. Os ge-
nes esto presentes e so transcritos a partir de
ambas as cadeias de DNA. A expresso gnica
controlada por promotores com TATA box e a
transcrio realizada pela RNA polimerase II
celular. Quando os genes so sobrepostos, as suas
regies regulatrias esto localizadas na regio
codicante do gene adjacente. Uma caracterstica
comum dos genomas dos HV a existncia de
grupos de transcritos co-terminais da extremida-
de 3, cada um expressando uma ORF diferente.
Ao contrrio dos adenovrus, a grande maioria
dos transcritos dos HVs no sofrem splicing.
Alguns transcritos de genes dos HV parecem
no conter ORFs traduzveis. Um exemplo clssi-
co o transcrito associado com a latncia (LAT)
do HSV-1, que o nico RNA viral transcrito
durante a latncia desse vrus. No caso do vrus
R1 R4 R2 R3
Us
UL
UL
Us
A
B
C
D
E
F
Figura 6.9. Estrutura e organizao dos genomas dos
herpesvrus. As linhas representam seqncias nicas;
os blocos representam seqncias repetidas.
Representantes de cada grupo: A) Herpesvrus docatfish
de canal; B) Herpesvrus Saimiri; C) Vrus Epstein-Barr;
D) Vrus da varicella-zoster; E) Vrus do herpes simplex;
F) Herpesvrus Tupaia. Note que somente os genomas
do tipo F no apresentam seqncias repetidas. Os
alfaherpesvrus de maior importncia veterinria
(herpesvrus bovino tipo 1 [BoHV-1] e vrus da doena
deAujeszky[PRV]) possuemgenomas dotipoD.
Fonte: adaptado de Roizman e Pellet (2001).
158 Captulo 6
lculas, induo ou inibio da sntese de DNA
celular e, ainda, podem induzir a imortalizao
da clula hospedeira. Os HVs podem bloquear a
induo de apoptose, ativar os mecanismos me-
diados pelo interferon e a apresentao de ant-
genos e mimetizar determinadas funes imu-
nomodulatrias. Uma conseqncia geral dessas
atividades o retardamento na erradicao da
infeco das clulas hospedeiras, por um perodo
suciente para permitir a replicao viral com-
pleta ou o estabelecimento da infeco latente.
5.4 Expresso gnica
A cintica da expresso dos genes dos HVss
durante a infeco aguda produtiva tem sido es-
tudada detalhadamente em cultivo celular, mas
acredita-se que variaes possam ocorrer in vivo
e tambm entre tipos celulares diferentes. Como
na maioria dos vrus DNA, os genes dos HV so
expressos sob regulao temporal estrita. Os ge-
nes alfa ou de transcrio imediata (IE) so os pri-
meiros a serem expressos, seguidos pelos genes
beta ou iniciais (E), gama 1 (parcialmente tardios)
e pelos genes gama 2 ou tardios (L). Embora os
genes virais sejam transcritos pela RNA polII ce-
lular com o auxlio de fatores celulares de trans-
crio, protenas virais so necessrias e auxiliam
em cada etapa de transcrio.
Aps a penetrao do vrus, o nucleocaps-
deo envolto pelo tegumento transportado para
as proximidades dos poros nucleares, de onde o
DNA viral translocado para o interior do ncleo
e rapidamente circularizado. No HSV-1, a prote-
na VP16 do tegumento liga-se a duas protenas
celulares, HGF e oct-1, formando um complexo
que se liga especicamente aos promotores dos
genes IE, ativando a sua transcrio. A ativao
da transcrio dependente da regio C-termi-
nal da VP16, que atua facilitando a reunio dos
fatores de transcrio celulares responsveis pela
maquinaria de transcrio basal. A dependncia
da VP16 parece ser maior em clulas quiescentes
e diferenciadas encontradas in vivo.
Seis produtos IE so codicados pelo HSV-
1: os polipeptdeos ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 e 47
e a protena Us1.5. Os promotores desses genes
geralmente so mais complexos do que os de ou-
tras classes de genes virais. Alm do stio para
a ligao do complexo VP16/HCF/Oct-1, esses
promotores contm stios especcos para a liga-
o de uma variedade de fatores de transcrio
do hospedeiro (Figura 6.10).
As protenas IE ICP4, ICP27 e ICP22 regu-
lam a expresso dos outros genes virais e, por-
tanto, so indispensveis para a continuao do
ciclo replicativo. A deleo experimental do gene
do ICP4, o mais importante transativador viral,
resulta em um vrus incapaz de replicar. Outras
funes dos genes IE incluem a inibio de spli-
cing de mRNA (ICP27), a modulao do sistema
de degradao das protenas celulares (ICP0) e a
reduo da expresso das ciclinas indutoras da
fase S (ICP22/Us1.5). A expresso das protenas
IE alcana o pico mximo em 2 a 4 horas aps
a infeco. Como o ICP4 capaz de reprimir a
sua prpria expresso, acredita-se que contribua
para a supresso dos genes IE, que observada
nas fases tardias da infeco.
Classe
do gene
Promotor
IE (ICP4)
E (TK)
L (UL38)
+1
ICP4
TATAA
SP1 TIF SP1 ICP4 SP1 SP1 SP1 TIF
- 300
+1
+1
TATAA DAS
+20
-30
CCATT, SP1 SP1 TATA
Inr
Figura 6.10. Organizao dos promoters dos genes de
transcrio imediata (IE), iniciais e tardios
do vrus do herpes simplex (HSV-1). Cada classe
representada pelo promotor de um determinado gene.
Os retngulos indicamos stios de ligao dos fatores de
transcrio/ transativadores. As setas indicam o incio e
direo da transcrio. IE: stios para a ligao do
complexo VP16/HCF/oct-1 (TIF), do fator de transcrio
celular SP1 e do produto do gene ICP4; TATAA (TATA
box). Inr: iniciador; DAS.
(early) (late)
Fonte: adaptado de Roizman e Knipe (2001).
Replicao dos vrus DNA 159
As protenas codicadas pelos genes E (beta)
atingem o pico mximo de sntese cerca de 5 a 7
horas aps a infeco, embora alguns produtos
(p. ex.: a subunidade maior da ribonucleotdeo
redutase, RR) sejam sintetizados com cintica se-
melhante aos genes IE. As protenas E apresen-
tam diferentes funes, relacionadas com o me-
tabolismo de nucleotdeos e com a replicao do
DNA viral. O seu acmulo nas clulas infectadas
prenuncia o incio da replicao do DNA. Os pro-
dutos dos genes E envolvidos no metabolismo de
nucleotdeos (timidina quinase TK, dUTPase, RR)
e aqueles envolvidos na modicao e reparo do
DNA (uracil-N-glicosilase e nuclease alcalina)
no so essenciais para a replicao viral em c-
lulas de cultivo. Isto se deve ao fato de as clulas
em multiplicao expressarem enzimas prprias
com atividades semelhantes. No entanto, as pro-
tenas E so importantes in vivo e mutaes nos
seus genes resultam em vrus que apresentam
replicao deciente. Isso faz sentido principal-
mente nos alfaherpervrus HSV-1 e BoHV-1, que
so capazes de infectar diferentes tipos celulares,
inclusive neurnios. Os neurnios so clulas di-
ferenciadas que no se dividem e no expressam
protenas envolvidas no ciclo celular, incluindo
vrias protenas envolvidas no metabolismo de
nucleotdeos e na replicao do DNA. Por isso,
essas e outras protenas virais podem ser cruciais
para possibilitar a infeco de determinados ti-
pos celulares.
A expresso dos genes gama 1 inicia em n-
veis baixos aps o incio da replicao do DNA,
mas o seu nvel de expresso aumenta com o
avano do processo replicativo. Os genes gama
2 (L) comeam a ser expressos aps a sntese e
replicao do DNA viral. A transcrio dos genes
tardios ocorre a partir de genomas recm-replica-
dos, localizados em compartimentos de replica-
o nuclear, nos quais a ICP4 e a RNA polimerase
II se localizam.
Os promotores dos genes tardios consistem
de seqncias regulatrias localizadas a certa dis-
tncia dos genes, como tambm de seqncias lo-
calizadas na regio 5no-traduzida (Figura 6.10).
Alm da ICP4, a transcrio dos genes tardios
exige a presena da ICP27, uma protena multi-
funcional que estimula a transcrio das prote-
nas virais envolvidas na replicao do DNA viral.
A ICP27 movimenta-se entre o ncleo e o cito-
plasma das clulas infectadas, com funes nos
dois compartimentos. Evidncias indicam que a
ICP27 participa no recrutamento da enzima RNA
polimerase II celular para a transcrio dos ge-
nes tardios; auxilia na exportao dos transcritos
tardios para o citoplasma e estimula a traduo
desses mRNA nos poliribossomos.
5.5 Replicao do DNA viral
No incio da expresso dos genes iniciais, as
protenas UL9 (protena viral que se liga na ori-
gem de replicao), UL29 (protena que se liga em
DNA de ta simples) e UL5, UL8 e UL52 (com-
plexo helicase-primase) se dirigem ao ncleo e
se associam ao DNA viral, formando estruturas
focais chamadas de stios pr-replicativos. Aps
o recrutamento do complexo viral de replicao
de DNA (UL30/UL42), uma frao dos stios pr-
replicativos maturam para formar os comparti-
mentos virais de replicao.
As funes mais importantes da protena
UL9 so a de ligao especca na origem de re-
plicao (ori) e a separao das cadeias de DNA
neste stio. Acredita-se que isso favorea a mon-
tagem do complexo de iniciao, incluindo a as-
sociao da DNA polimerase viral. A sntese da
cadeia contnua envolve a separao das cadeias
do DNA e a sntese de um primer pelo complexo
helicase-primase, a partir do qual a cadeia nas-
cente pode ser sintetizada de forma contnua pela
DNA polimerase. A sntese da cadeia descontnua
mais complexa e envolve mltiplos ciclos de
sntese do primer, extenso, remoo dos primers
e ligao dos fragmentos de Okazaki adjacentes.
A sntese de DNA viral ocorre pelo mecanismo
de crculo rolante (rolling circle), que resulta em
molculas longas, contendo vrias unidades do
genoma unidas linearmente entre si. Essas mo-
lculas contm as quatro possveis formas iso-
mricas do genoma (no caso do HSV-1), que so,
ento, clivadas em unidades genmicas, que so
encapsidadas nos nucleocapsdeos (Figura 6.1).
Os fatores celulares induzidos na fase inicial
da infeco, incluindo vrios componentes da
maquinaria de reparo do DNA, acumulam-se nos
160 Captulo 6
centros de replicao viral. Esses fatores parecem
ser importantes para os centros de replicao do
HSV-1 se tornarem funcionais, sugerindo que um
estresse celular pode ser necessrio para a repli-
cao eciente dos HVs.

5.6 Expresso gnica durante a infeco
latente
A expresso de genes virais durante a in-
feco latente muito restrita e apenas um ou
poucos genes virais so transcritos. Por exem-
plo, durante a latncia em neurnios de gnglios
sensoriais, o HSV-1 e o BoHV-1 sintetizam uma
srie de transcritos a partir de uma regio bem
determinada do genoma (regio associada la-
tncia, LRT; transcrito associado latncia, LAT).
As demais regies do genoma permanecem ina-
tivas em relao transcrio. A razo dessa res-
trio da transcrio desconhecida, mas o am-
biente neuronal e sinais derivados de clulas do
sistema imunolgico tm sido implicados. Vrus
recombinantes que possuem mutaes na regio
do LAT/LRT so capazes de estabelecerem infec-
es latentes, mas so defectivos na reativao,
o que sugere um papel para esses transcritos na
reativao da infeco.
5.7 Concluses
Os herpesvrus possuem um genoma mais
complexo e codicam vrias protenas envolvi-
das nos processos replicativos. Com isso, esses
vrus so capazes de replicar em uma variedade
de clulas, independente do seu estado de divi-
so ou diferenciao. Ao contrrio do que ocorre
com os vrus DNA pequenos (polioma, papiloma
e adeno), os HV no necessitam induzir as clulas
a entrarem na fase S, pois codicam e/ou trazem
nos vrions grande parte dos fatores necessrios
replicao de seu genoma. No entanto, depen-
dem da maquinaria celular de transcrio e pro-
cessamento dos mRNAs. A replicao dos HVs
geralmente induz uma supresso da sntese de
macromolculas das clulas, geralmente levando
a alteraes metablicas incompatveis com a vida
celular. O estabelecimento de infeco latente se
constitui em uma estratgia muito eciente para
permitir a permanncia do vrus no hospedeiro.
A reativao ocasional dessas infeces permite
ao vrus ser transmitido e infectar novos hospe-
deiros, perpetuando-se, assim, na natureza.
6 Poxvrus
6.1 O ciclo replicativo
Os poxvrus (PoxV) so vrus DNA que re-
alizam o seu ciclo replicativo incluindo a repli-
cao do genoma integralmente no citoplasma,
uma propriedade que comum tambm ao vrus
da peste suna africana (ASFV), nico membro da
famlia Asfarviridae. Como as enzimas celulares
que participam da sntese de RNA e DNA esto
localizadas no ncleo, os PoxV devem trazer nos
vrions as suas prprias enzimas e fatores auxilia-
res. Esse cenrio ilustra o nvel de independncia
relativa que esses vrus conseguiram atingir em
relao clula hospedeira. No entanto, embora
codiquem grande parte das enzimas e fatores
de transcrio, os PoxV ainda so dependentes
de vrios fatores auxiliares da clula hospedeira.
O ciclo replicativo dos PoxV foi estudado in vitro,
utilizando-se o vrus da vaccinia (VV) como mo-
delo. Apesar da sua complexidade, o ciclo repli-
cativo do VV relativamente rpido, e a prognie
viral pode ser detectada j oito horas ps-infec-
o (pi).
6.2 O genoma dos PoxVs
Mais de 50 seqncias genmicas completas,
representando vrios gneros, espcies e isolados
de campo dos PoxV j foram obtidas, permitindo
uma descrio detalhada da estrutura, organiza-
o genmica e dos genes individuais.
O genoma dos PoxV consiste de uma mo-
lcula de DNA linear de ta dupla com 130-390
kbp, contendo seqncias repetidas invertidas do
tipo hairpin (ITRs) de 0.1 a 12.4 kb nas extremi-
dades (Figura 6.11). Nos Chordopoxvirus (ChPVs),
o nmero de genes de aproximadamente 150,
embora mais de 300 genes j tenham sido deduzi-
dos no genoma do PoxV do canrio (canaripox).
A densidade gnica alta, com uma mdia de um
gene por kb.
Replicao dos vrus DNA 161
Aproximadamente 90 dos 150 genes so
conservados no genoma de todos os ChPVs se-
qenciados at o presente, e codicam produ-
tos que participam da replicao do DNA, da
transcrio, da morfognese e da estrutura das
partculas virais. Nesses genes, tanto as regies
codicantes quanto os promotores so altamente
conservados. Em geral, grande parte dos genes
conservados esto localizados na regio central
do genoma.
Os genes localizados entre a regio central
e as extremidades do genoma tendem a ser es-
pcie-especcos e codicam protenas cujas fun-
es antagonizam a resposta imune do hospedei-
ro. Esses genes so chamados coletivamente de
genes de virulncia. Esto includos nesse grupo
os genes que codicam produtos homlogos s
citocinas e quimioquinas do hospedeiro, e genes
de receptores de citocinas e quimioquinas que
foram adquiridos do hospedeiro e modicados
durante a evoluo. Ao contrrio dos genes cen-
trais conservados, vrios genes de virulncia so
dispensveis para a replicao viral em cultivo
celular.
6.3 Expresso gnica
Como os outros vrus DNA, os PoxVs co-
ordenam os processos de replicao genmica e
morfognese por meio de uma regulao tempo-
ral da expresso de grupos de genes. A transcri-
o dos genes do VV pode ser dividida em trs
etapas: inicial, intermediria e tardia. A transcri-
o de vrios genes, no entanto, parece no obe-
decer a essa regulao estrita, ocorrendo continu-
amente ao longo do ciclo replicativo.
Os fatores de transcrio e enzimas neces-
srias para a transcrio dos genes iniciais esto
presentes nas partculas vricas infectantes. As-
sim, a transcrio desses genes inicia poucos mi-
nutos aps a penetrao viral, ainda no interior
de partculas parcialmente ntegras e, portanto,
antes do desnudamento ser completado. A trans-
crio inicial resulta na produo de aproxima-
damente 100 mRNA diferentes, que so expor-
tados do interior dos vrions para o citoplasma
para serem traduzidos. Entre as protenas dos
genes iniciais esto aquelas envolvidas nos me-
canismos de evaso do sistema imunolgico, no
desnudamento completo do genoma, na sntese
de DNA viral e na regulao da expresso dos
genes intermedirios.
Os produtos dos genes intermedirios so
principalmente fatores de transcrio utilizados
para a expresso dos genes tardios. As protenas
tardias, por sua vez, esto envolvidas na morfo-
gnese, fazem parte da estrutura das partculas
vricas e tambm incluem as enzimas e fatores de
transcrio que sero includos na prognie viral
para o prximo ciclo de replicao.
Os genes dos PoxVs so transcritos pela
RNA polimerase viral, que composta por nove
Repetio invertida Repetio invertida Seqncias nicas
160 kbp 10 kbp 10 kbp
0,9 kbp 1,3 kbp 1,3 kbp 0,9 kbp
Seqncias repetidas Seqncias repetidas
Figura 6.11. Estrutura do genoma dos poxvrus. Ogenoma consiste de uma molcula contnua de DNAde fita dupla,
sem extremidades livres. Nas duas extremidades, situam-se regies repetidas invertidas de aproximadamente 10 kb
cada. As seqncias nicas abrangemorestante dogenoma.
Fonte: adaptado de Murphy et al. (1999).
162 Captulo 6
subunidades. As duas subunidades maiores
apresentam um alto grau de similaridade nos
aminocidos, com as subunidades maiores das
RNA polimerases de eucariotas e procariotas,
mas as duas subunidades menores no apresen-
tam similaridade signicativa com as suas cor-
respondentes.
Aproximadamente a metade dos genes do
VV pertence ao grupo dos genes iniciais. Os pro-
motores desses genes possuem um resduo de
guanina (G) extremamente conservado na posi-
o 21, anqueado por uma regio varivel rica
em A-T. A transcrio dos genes iniciais requer a
RNA polimerase viral, o fator de transcrio ini-
cial (ou ETF, a nica protena de ligao ao DNA
codicada pelos PoxV) e ATP. No modelo atual,
o ETF se liga nos promotores iniciais e recruta
o complexo da RNA polimerase. A hidrlise de
ATP pelo ETF e a sua subseqente liberao do
complexo permite a RNA polimerase iniciar a
transcrio.
Estudos recentes sugerem que vrios fatores
de transcrio dos genes iniciais formam comple-
xos que se ligam aos promotores durante a mor-
fognese das partculas virais. Com isso, parte
dos fatores necessrios para a transcrio inicial
j estaria posicionada nos promotores, permitin-
do o rpido incio da transcrio, logo aps a pe-
netrao na clula hospedeira. As enzimas virais
guanilyl-transferase (capping enzyme), polimerase
poly-A e um fator de terminao da transcrio
tambm so importantes para a transcrio ini-
cial. A transcrio desses genes termina logo aps
o nal das ORFs, em resposta a uma seqncia
TTTTTNT (onde N qualquer nucleotdeo), lo-
calizada na cadeia de DNA oposta (codicante).
At o presente, nenhuma funo da clula hos-
pedeira foi identicada como necessria para a
iniciao e terminao da transcrio inicial.
Aps o desnudamento completo do geno-
ma, seguem-se as etapas de transcrio dos genes
intermedirios, a replicao do DNA e a transcri-
o dos genes tardios. Os promotores dos genes
intermedirios so bipartidos, possuindo um ele-
mento iniciador no stio de iniciao da transcri-
o e uma seqncia rica em A-T, localizada pr-
xima (na direo 5). A transcrio desses genes
requer fatores virais recm-sintetizados, como a
RNA polimerase, fatores ITF-A (helicase), ITF-B
(enzima que coloca o cap), VITF-2 (fator derivado
do hospedeiro) e B1R (protena quinase viral).
Os promotores dos genes tardios tambm
so bipartidos e contm um elemento iniciador
e uma regio rica em A-T logo acima. Alm da
RNA polimerase, trs produtos de genes inter-
medirios e um produto inicial so necessrios
para a transcrio dos genes tardios, embora as
funes desses produtos sejam desconhecidas.
Um fator de transcrio do hospedeiro tambm
parece estar envolvido na transcrio dos genes
tardios. A terminao da transcrio dos genes
tardios diferente daquela dos genes iniciais,
mas tambm requer a participao de produtos
virais.
6.4 Replicao do DNA
A replicao citoplasmtica do genoma se
constitui em um aspecto nico do ciclo replica-
tivo dos PoxV e ASFV. A replicao do DNA do
VV ocorre em fbricas virais, que so reas cito-
plasmticas totalmente envolvidas por membra-
nas derivadas do retculo endoplasmtico rugoso
(RER). O envolvimento dessas reas pelas mem-
branas do RER um processo que se completa
em, aproximadamente, 45 minutos a partir do
incio da infeco e parece ser inuenciado por
protenas virais de membrana. Em etapas tardias
da infeco, quando se inicia a morfognese, es-
ses envelopes membranosos do RER no so
mais visveis na estrutura celular.
Alguns PoxVs codicam enzimas envolvi-
das na sntese de deoxiribonucleotdeos (dNTPs),
para favorecer a sntese e replicao do DNA em
clulas que na esto em diviso. No caso do VV, a
replicao do DNA ocorre entre 3 e 12 horas ps-
infeco e resulta na produo de aproximada-
mente 10.000 cpias por clula, metade das quais
sero includas nos vrions.
Acredita-se que a replicao do DNA dos
PoxV se inicie com uma clivagem em uma das ca-
deias nas proximidades dos hairpins, seguida de
polimerizao seqencial a partir da extremidade
3, deslocamento da cadeia complementar e reso-
luo por concatmeros (Figura 6.1). A regio ter-
minal de 200 pb do genoma provavelmente serve
Replicao dos vrus DNA 163
de origem de replicao. A resoluo/separao
dos genomas individuais requer uma protena
viral tardia, a resolvase. Partculas vricas imatu-
ras, em associao com estruturas membranosas,
acabam envolvendo o DNA e amadurecem na
forma de vrions de formato retangular.
Vrios produtos virais desempenham fun-
es importantes da replicao do genoma do
VV, incluindo a polimerase de DNA e um fator
de processividade associado; a trifosfatase de
nucleosdeos, a protena de ligao em DNA de
ta simples, a topoisomerase I, protena quina-
se e glicosilase de uracil. Mutaes em qualquer
desses genes so deletrias para a capacidade dos
vrus replicar o seu genoma.
6.5 Concluses
Os PoxVs esto entre os vrus mais com-
plexos de animais e trazem nos vrions e/ou
codicam um nmero grande de enzimas e fato-
res necessrios transcrio, processamento de
seus mRNAs e replicao do genoma. Por isso,
independem da maquinaria celular de sntese
de RNA e DNA e realizam o ciclo replicativo in-
teiramente no citoplasma da clula hospedeira.
Os PoxVs tambm codicam uma srie de pro-
dutos que antagonizam a resposta imunolgica
do hospedeiro, permitindo, assim, que o ciclo
replicativo seja completado com a mnima inter-
ferncia dos mecanismos anti-virais. A facilidade
da manipulao do genoma, assim como a sua
extenso e capacidade de suportar a insero de
grandes segmentos de DNA, tm feito dos PoxV
vrus adequados para a construo de vetores va-
cinais.
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REPLICAO DOS VRUS RNA
Maria Elisa Piccone
1
& Eduardo Furtado Flores
1
Responsvel pela seo de vrus RNA de sentido positivo.
7
1 Introduo
1.1 Diversidade de estrutura, organizao e funcionalidade dos genomas
1.2 Stios de replicao
1.3 Indelidade das replicases e diversidade gentica
1.4 Outras protenas virais envolvidas na replicao
2 Vrus com genoma RNA de sentido positivo

2.1 Genomas com uma nica ORF, sem produo de mRNA subgenmicos
2.1.1 Estrutura e organizao do genoma
2.1.2 Traduo e replicao do genoma
2.2 Genomas com mais de uma ORF e produo de mRNAs subgenmicos
2.2.1 Estrutura e organizao genmica
2.2.2 Expresso gnica e replicao do genoma
3 Vrus com genoma RNA de sentido negativo
3.1 Vrus com o genoma no-segmentado
3.1.1 Estrutura e organizao do genoma
3.1.2 Transcrio
3.1.3 Replicao do genoma

3.2 Vrus com o genoma segmentado
3.3 Vrus com o genoma ambissense
4 Vrus com RNA de ta dupla
4.1 Estrutura e organizao do genoma
4.2 Transcrio
4.3 Replicao do genoma
5 Retrovrus
6 Bibliograa consultada
167
167
169
169
169
169
171
171
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176
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177
178
179
180
181
182
182
183
184
184
185
1 Introduo
Os vrus RNA compem um grupo amplo
e diverso de vrus que infectam desde insetos e
plantas at vertebrados superiores. So os nicos
organismos que possuem RNA como genoma, e,
por isso, precisaram se adaptar a certas condies
impostas pelas clulas hospedeiras para poder se
multiplicar. As clulas eucariotas no possuem
enzimas e reaes para a sntese de RNA a par-
tir de moldes RNA, etapa necessria para a re-
plicao do genoma desses vrus. No entanto, a
evoluo viral solucionou este impasse, pois o
genoma de um vrus RNA codica a sua prpria
enzima replicativa (RNA polimerase dependente
de RNA ou replicase). Em alguns vrus RNA, a
replicase e os fatores auxiliares para a replicao
do genoma so produzidos pela traduo dire-
ta do genoma, logo no incio do ciclo replicativo.
Em outros vrus RNA, o genoma no traduzido
diretamente e os vrions carreiam a enzima repli-
case e os fatores necessrios para a replicao do
genoma.
A replicao do genoma dos vrus RNA
(com exceo dos retrovrus) ocorre em duas eta-
pas e envolve a sntese de molculas intermedi-
rias (RNA complementar ou antigenmico). O
RNA antigenmico serve, ento, de molde para
a sntese de RNA de sentido genmico. A snte-
se de RNA com sentido de mensageiro (mRNA
ou sentido positivo) denomina-se transcrio, e
a sntese de RNA genmico denomina-se repli-
cao. Na verdade, transcrio e replicao so
termos equivalentes utilizados para designar a
sntese de molculas de RNA a partir de moldes.
A mesma enzima replicase, possivelmente assis-
tida por uma combinao diferente de fatores au-
xiliares ou submetida a modicaes qumicas,
responsvel tanto pela transcrio como pela
replicao. O complexo enzimtico envolvido na
transcrio geralmente chamado de transcrip-
tase; e o complexo responsvel pela replicao
denominado replicase.
Os retrovrus apresentam uma estratgia
de replicao nica, que difere dos demais vrus
RNA. Esses vrus possuem um genoma RNA
com sentido positivo, mas que no traduzido
diretamente. A replicao do genoma ocorre pela
produo de uma molcula de DNA complemen-
tar (provrus) que integrada aos cromossomos
celulares. A transcrio desse provrus pela RNA
polimerase II celular (RNApol II) resulta na pro-
duo do RNA para ser includo como genoma
nas partculas vricas.
A natureza do seu genoma resultou em al-
gumas conseqncias biolgicas e evolutivas
para os vrus RNA: a) a maioria deles realiza o
seu ciclo replicativo inteiramente no citoplasma
das clulas hospedeiras, b) poucos deles utilizam
o processamento de RNA (splicing) para a gerao
de diversidade de protenas; c) a alta taxa de erro
das replicases virais, associada com a ausncia de
autocorreo, resulta em uma alta freqncia de
mutaes, o que contribui para a grande variabi-
lidade gentica e antignica desses vrus.
1.1 Diversidade de estrutura, organiza-
o e funcionalidade dos genomas
Os genomas dos vrus RNA de animais so
todos compostos por molculas lineares, porm,
apresentam diferenas quanto funcionalidade,
estrutura e organizao (Tabela 7.1). A distino
inicial se refere funcionalidade do genoma, ou
seja, existem vrus com genoma RNA de senti-
do (ou polaridade) positivo e negativo. Os vrus
RNA de sentido positivo possuem as seqncias
codicantes de protenas (open reading frames,
ORFs) no mesmo sentido do genoma, ou seja, o
seu genoma pode ser diretamente traduzido em
protenas pelos ribossomos. Dentre estes, duas
propriedades principais so reconhecidas: al-
guns vrus possuem uma nica ORF no genoma
e outros genomas possuem mais de uma ORF e
produzem RNAs mensageiros subgenmicos
(mRNAsg).
Os RNAs genmicos dos vrus RNA de sen-
tido negativo no apresentam as ORFs na mes-
ma orientao do genoma, assim, no podem ser
diretamente traduzidos em protenas. As ORFs
esto presentes no RNA complementar, de senti-
do antigenmico. Ento, a produo de suas pro-
tenas depende inicialmente da sntese de mR-
NAs pela polimerase viral trazida nos vrions.
Dentre esses vrus, existem alguns cujo genoma
composto por uma molcula contnua de RNA
168 Captulo 7
e outros cujo genoma dividido em dois ou mais
segmentos. Dentre os vrus com o genoma seg-
mentado, existem alguns que possuem o genoma
ambissense, ou seja, codicam as suas protenas
por ORFs existentes tanto no RNA de sentido ge-
nmico quanto no RNA complementar.
Todos os genomas dos vrus RNA (sentido
positivo e negativo, segmentados ou no) so
compostos por molculas de RNA de ta sim-
ples (ssRNA). Um terceiro grupo formado por
vrus que possuem ta de RNA de cadeia dupla
(dsRNA) segmentada como genoma. Estes vrus
tambm trazem a enzima polimerase nos vrions,
que necessria para a transcrio e replicao
dos segmentos genmicos.
Os retrovrus representam uma exceo en-
tre os vrus RNA. O seu genoma possui polarida-
de positiva, porm no traduzido diretamente
pelos ribossomos. A replicao dos retrovrus
envolve a transcrio reversa (sntese de DNA a
partir de RNA), integrao do DNA proviral nos
cromossomos da clula hospedeira e transcrio
do provrus pelo aparato celular de transcrio.
Apesar dessa diversidade, praticamente to-
dos esses vrus convergem para um evento cen-
tral comum: a produo de mRNA reconhecveis
e traduzveis pela maquinaria celular de tradu-
o. A nica exceo composta pelos genes que
codicam protenas no-estruturais (e estruturais
em alguns casos) entre os vrus RNA de sentido
positivo, que podem ser traduzidos diretamente
do genoma.
Tabela 7.1. Classificao dos vrus RNA de acordo com a estrutura, organizao e polaridade do genoma e local
intracelular dereplicao
Famlia ss/ds
Picornaviridae
Local intracelular
ss Positiva Citoplasma
Topologia Polaridade Segmentos
Replicao
Linear 1
Flaviviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Caliciviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Astroviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Togaviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Coronaviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Arteriviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Retroviridae ss Positiva Ncleo/citoplasma Linear 2 (idnticos)
Birnaviridae ds Ambas Citoplasma Linear 2
Reoviridae ds Ambas Citoplasma Linear 10-12
Rhabdoviridae ss Negativa Citoplasma Linear 1
Filoviridae ss Negativa Citoplasma Linear 1
Bornaviridae ss Negativa Ncleo Linear 1
Paramyxoviridae ss Negativa Citoplasma Linear 1
Orthomyxoviridae ss Negativa Ncleo Linear 7-8
Bunyaviridae ss
Negativa ou
ambissense
Citoplasma Linear 3
Arenaviridae ss Ambissense Citoplasma Linear 2
RNA genmico
Replicao dos vrus RNA 169
1.2 Stios de replicao
Com exceo dos vrus das famlias Or-
thomyxoviridae e Bornaviridae, cuja replicao do
genoma ocorre no ncleo; e dos retrovrus, em
que o ciclo replicativo ocorre parte no citoplasma
e parte no ncleo, os demais vrus RNA realizam
o seu ciclo replicativo inteiramente no citoplasma
da clula hospedeira. Esses vrus so, portanto,
independentes da maquinaria nuclear de snte-
se e processamento de RNAs. Os ortomixovrus
replicam o genoma no ncleo e so dependentes
de oligonucleotdeos com cap, que so subtrados
dos mRNA celulares. Estes vrus, alm dos retro-
vrus, dependem ainda da maquinaria de pro-
cessamento de mRNAs celulares (splicing) para
o processamento de alguns de seus transcritos.
Alguns vrus RNA que replicam no citoplasma
(paramixovrus) utilizam mecanismos alternati-
vos para modicar os seus transcritos e produzir
diferentes protenas a partir de um mesmo gene.
1.3 Indelidade das replicases e
diversidade gentica
As replicases dos vrus RNA (RNAs poli-
merases dependentes de RNA) apresentam uma
taxa de erro aproximadamente 1.000 a 10.000 ve-
zes superior s polimerases de DNA. Alm disso,
essas enzimas no possuem a atividade de proo-
freading (correo de nucleotdeos incorretos adi-
cionados durante a sntese). O resultado disso
que pelo menos uma mutao em ponto pode ser
introduzida a cada replicao do genoma, o que
tem uma grande implicao para a diversidade e
evoluo desses vrus. Como conseqncia, uma
populao de vrus RNA no constituda por
uma prognie clonal homognea, e sim por uma
mistura de variantes agrupados em torno de uma
seqncia predominante e mais abundante. Essa
populao heterognea de vrus que compe
uma espcie viral denominada quasi-species. A
gerao contnua dessa populao heterognea
se constitui em uma grande vantagem evolutiva
para os vrus RNA, pois permite que variantes
geradas ao acaso possam apresentar vantagem
evolutiva e rapidamente se sobressair na popu-
lao quando submetidos determinada presso
de seleo. A rpida taxa de evoluo desses v-
rus possui implicaes importantes na epidemio-
logia, patogenia, diagnstico e para a produo
de vacinas.
1.4 Outras protenas virais envolvidas
na replicao
Alm das replicases, outras protenas que
participam da sntese de RNA so codicadas
por esses vrus. As funes exercidas por essas
protenas so diversas e incluem: a) direciona-
mento da polimerase e/ou do genoma aos locais
da clula onde ocorre a replicao; b) facilitao
do reconhecimento do stio de iniciao da snte-
se de RNA pela polimerase; c) encapsidao do
genoma RNA para a transcrio e replicao; d)
aumento da anidade da polimerase pelo RNA;
e) aumento da atividade da polimerase; f) sepa-
rao das cadeias de RNA para a polimerizao
(atividade de helicase); g) alterao da especi-
cidade da polimerase pelo molde RNA (troca de
transcrio para replicao). Ou seja, esses vrus
codicam uma srie de protenas, algumas com
atividades enzimticas, que atuam como co-fato-
res no processo de sntese de RNA e replicao
do genoma.
Alm de protenas, a sntese de RNAs virais
envolve a participao de componentes celulares,
denominados genericamente fatores do hospe-
deiro. A especicidade, as etapas de participao
e a dependncia relativa de fatores do hospedei-
ro para a sntese de RNA viral variam entre os
vrus.
2 Vrus com genoma RNA de sentido
positivo
Por denio, esses vrus codicam as suas
protenas no sentido do RNA genmico, ou seja,
as seqncias abertas de leitura (ORFs) que co-
dicam as protenas virais esto presentes na
mesma orientao do genoma. Por isso, o RNA
genmico pode ser usado como mRNA e ser di-
retamente traduzido pelos ribossomos. Os vrus
desse grupo possuem algumas caractersticas em
comum: a) replicam no citoplasma da clula hos-
pedeira; b) o RNA genmico serve de mRNA e
pode ser traduzido; c) o RNA genmico desprovi-
do de protenas infeccioso quando introduzido
170 Captulo 7
nas clulas; d) as protenas virais so sintetizadas
como poliprotenas precursoras. Essas polipro-
tenas so imediatamente clivadas em protenas
individuais por proteases virais e/ou celulares;
e) os vrions no contm enzimas.
As infeces por vrus RNA de sentido po-
sitivo no so exclusivas dos animais, e um gran-
de nmero desses agentes pode infectar tambm
bactrias ou plantas, constituindo gneros que
so classicados dentro dessas famlias de vrus.
Sete famlias de vrus animais possuem ge-
noma RNA de sentido positivo, e todos possuem
o genoma no-segmentado: 1) Picornaviridae, 2)
Flaviviridae, 3) Caliciviridae, 4) Astroviridae, 5) To-
gaviridae, 6) Arteriviridae e 7) Coronaviridae.
A replicao do genoma desses vrus envol-
ve a ao conjunta de vrios componentes, que
incluem protenas virais, seqncias especcas
no RNA viral e, provavelmente, vrios compo-
nentes celulares, como protenas e membranas.
Uma diferena fundamental entre grupos
de vrus RNA de sentido positivo se refere exis-
tncia de uma ou mais ORFs no genoma e a pro-
duo ou no de mRNAs subgenmicos (Figura
7.1; Tabela 7.2).
Figura 7.1. Estrutura e organizao do genoma dos vrus RNAde sentido positivo. As linhas contnuas representamo RNA
genmico; os retngulos representamos genes. Alocalizaodas ORFs e dos mRNAsubgenmicos tambmestindicada.
5
mRNA subgenmicos
5'
Pol
S E M N
NsP1 NsP2 NsP3 NsP4 C E3 E2 E1
Cap
Cap
3'
3'
3'
3'
3
L VP4 VP2 VP3 VP1 2A 2B 2C 3A 3B 3C 3D VPg polyA
Picornaviridae (FMDV) 7 - 8.5kb
Caliciviridae 7.3 - 8.3kb
Astroviridae 6.8kb
pro
N C
ms
E E1 E2 NS2-3 NS4-A NS4-B NS5A NS5B
Flaviviridae Pestivirus (gnero , BVDV) 12,3kb
poliC
poliA
poliA
poliA
poliA
poliA
VPg
VPg
ORF1
ORF1
ORF2
ORFs2-7
5-7 ORFs
ORF2
ORF2
ORF3
capsdeo p32 NTPase P30 VpG P76 (Pro - pol)
mRNA subgenmico
mRNA subgenmico
mRNA subgenmicos
ORF1a
ORF1b
Pro Pol Capsdeo
mRNA subgenmico
Togaviridae 9.7 - 11.8kb
Arteriviridae 13 - 15kb
Coronaviridae 27 - 32kb
L
L
ORF 1a ORF 1b
L a 2 b
4
3
5
6
7 3
3
5'
5'
5'
5'
5'
ORF nica
ORF nica
Cap
2 HE 4
L
ORF1a
ORF1b
Replicao dos vrus RNA 171
Nos vrus que possuem uma nica ORF no
genoma, todas as protenas so produzidas pela
traduo direta do RNA genmico, originando
uma longa poliprotena. Esta poliprotena cliva-
da por proteases celulares e/ou virais, originan-
do as protenas individuais. A clivagem ocorre
medida que a traduo vai se desenvolvendo, de
modo que a poliprotena inteira nunca detecta-
da nas clulas infectadas. Nesses vrus, os genes
que codicam as protenas estruturais esto loca-
lizados no tero 5 do genoma; enquanto as pro-
tenas no-estruturais inclusive a polimerase
viral so codicadas pelo restante do genoma
(Figura 7.1).
Entre os vrus em que o genoma possui mais
de uma ORF, as protenas no-estruturais (e a
polimerase) so codicadas na regio prxima
extremidade 5 do genoma (dois teros do geno-
ma). Apenas a ORF localizada na regio prxi-
ma extremidade 5 traduzida diretamente do
RNA genmico, resultando na sntese das prote-
nas no-estruturais, inclusive a polimerase viral.
A(s) outra(s) ORF(s) embora estejam presentes
no sentido do RNA genmico so expressas a
partir de RNAs subgenmicos (mRNAsg), que
so produzidos a partir da transcrio das mo-
lculas de RNA complementar (antigenmicos),
ou seja, esses vrus produzem uma parte de suas
protenas (no-estruturais) pela traduo direta
do genoma e outra parte pela traduo de mR-
NAs subgenmicos (Figura 7.1).
Nesta seo, sero apresentados alguns as-
pectos das principais estratgias utilizadas pelos
vrus RNA de sentido positivo para expressar os
seus genes e replicar o seu genoma, utilizando
exemplos de diferentes famlias.
2.1 Genomas com uma nica ORF, sem
produo de mRNA subgenmicos
Importantes vrus animais e de humanos
esto includos neste grupo, que composto por
membros das famlias Picornaviridae e Flaviviri-
dae. Dentre os patgenos humanos, esto o po-
liovrus, os rinovrus, os vrus da dengue e febre
amarela, e o vrus da hepatite C. Os principais
vrus animais deste grupo so: o vrus da febre
aftosa (FMDV, um picornavrus), que possui um
impacto sanitrio e econmico notvel na bovi-
nocultura e na economia de vrios pases; e os
pestivrus (famlia Flaviviridae) vrus da diarria
viral bovina (BVDV) e vrus da peste suna cls-
sica (CSFV).
2.1.1 Estrutura e organizao do genoma
O genoma desses vrus contm uma ORF
nica e longa, que abrange quase toda a extenso
* Protena terminal associada extremidade 5' do genoma.
** Apenas os vrus do gnero
*** Pestivrus, hepacivrus.
**** Pestivrus (BVDV).
Flavivirus.
Famlia
Picornaviridae
RNA
subgenmicos
7,2 - 8,5 VPG*, IRES poliA
Genoma (kb)
Extenso (kb) Extremidades 5' 3'
no
Flaviviridae 9,6 - 12,3 cap**,IRES*** poliC**** no
Astroviridae 6,8 VPG poliA sim (1)
Caliciviridae 7,3 - 8,3 VPG poliA sim (1)
Arteriviridae 13 - 15 cap poliA sim (6)
Togaviridae 9,7 - 11,8 cap poliA sim (1)
Coronaviridae 27 - 32 cap poliA sim (5-7)
Tabela 7.2. Principais caractersticas do genoma dos vrus RNA de polaridade positiva
172 Captulo 7
do genoma (Figura 7.1). Essa ORF anqueada
por duas regies no-traduzidas (5UTR, 3UTR),
que possuem extenses variveis, de acordo com
o vrus (podem atingir at 1.100 nt em alguns pi-
cornavrus). A extremidade 5 do genoma possui
estruturas especializadas que so importantes
para o direcionamento do genoma para o local da
replicao (5VPg), para o incio da traduo (cap
ou IRES) e replicao. A extremidade 3 polia-
denilada ou possui uma seqncia de citosinas,
como no caso dos pestivrus (Figura 7.1; Tabela
7.2). A regio 3 UTR geralmente menor e pos-
sui seqncias importantes para a replicao do
genoma.
2.1.2 Traduo e replicao do genoma
A primeira etapa na replicao desses vrus
a traduo do genoma em uma nica poliprote-
na, que a precursora de todas as protenas virais
(Figura 7.2). Essa poliprotena clivada seqen-
cialmente, medida que produzida, originan-
do os precursores intermedirios e, nalmente,
as protenas virais maduras. Nos picornavrus,
as clivagens so realizadas essencialmente por
proteases virais; nos membros da famlia Flavivi-
ridae, essas clivagens so realizadas por proteases
virais e celulares.
Uma das protenas maduras produzidas
pela traduo do genoma a replicase viral (poli-
merase de RNA dependente de RNA), que se en-
carrega de replicar o genoma. A replicao ocorre
em duas etapas: a) sntese de uma molcula de
RNA complementar (com a extenso do genoma)
e b) sntese de cpias de RNA de sentido gen-
mico a partir do RNA complementar. As mol-
culas de RNA de sentido genmico possuem trs
funes: a) servem de mRNA para a produo da
poliprotena; b) servem de molde para a sntese
de RNA complementar; e c) so encapsidadas
5'-
-3'
3'
L VP4 VP2 VP3 VP1 2A 2B 2C 3A 3B 3C 3D VPg
5'
ORF nica
IRES
Poliprotena
L
L P1 P2 P3
VP3 VP1 2A VP2 2B 2C 3A 3B 3C 3D VP4
Clivagem
Clivagem
Protenas estruturais Protenas no-estruturais
Figura 7.2. Organizao do genoma e expresso gnica de umpicornavrus (vrus da febre aftosa, FMDV). Aestrutura
IRES, reconhecida pelos ribossomos, est demonstrada na regio 5' no-traduzida. A ORF nica e longa traduzida
pelos ribossomos em uma longa poliprotena, que vai sendo clivada por proteases celulares medida que
produzida. As clivagens seqenciais originamprecursores intermedirios e, finalmente, as protenas virais maduras.
Replicao dos vrus RNA 173
como genoma nas novas partculas virais (Figura
7.3). Aps a morfognese dos vrions, ocorre lise
celular e a prognie viral liberada.
A cintica de replicao dos picornavrus
rpida e o ciclo completado em cinco a dez
horas. O RNA viral (vRNA) traduzido direta-
mente pelos polirribossomos, mas, aproximada-
mente 30 minutos aps a infeco, a sntese de
protenas celulares reduzida drasticamente.
Essa supresso da sntese protica a causa pri-
mria das alteraes morfolgicas celulares que
acompanham a infeco, genericamente denomi-
nadas como efeito citoptico (ECP). A supresso
parece ocorrer pela clivagem de fatores de tra-
duo celulares envolvidos no reconhecimento e
ligao s estruturas cap dos mRNAs celulares,
evento necessrio para o incio da traduo. Essa
clivagem atribuda protease 2A dos rinovrus
e enterovrus, e protease L do FMDV. Alguns
vrus deste grupo (a maioria dos isolados dos
pestivrus) so excees e no so citolticos.
Embora o genoma desses vrus se comporte
como mRNA e possa ser traduzido em protenas,
a sua estrutura diferente dos mRNA celulares.
Alm de codicar as protenas virais, esta mol-
cula possui importantes seqncias conservadas
e estruturas secundrias na regio 5 no-traduzi-
da (UTR). Entre as estruturas funcionais mais im-
portantes desta regio, destaca-se uma estrutura
secundria altamente complexa denominada In-
ternal Ribosomal Entry Site (IRES). Esta estrutura
direciona os ribossomos ao cdon de iniciao
da traduo, sobrepondo-se ao mecanismo usual
de iniciao da traduo dos mRNAs celulares.
Estruturas IRES j foram identicadas nos geno-
mas dos poliovrus, vrus da encefalomiocardite
(EMCV), FMDV, vrus da hepatite A e em alguns
membros da famlia Flaviviridae (vrus da hepati-
te C [HCV] e BVDV).
O mecanismo pelo qual o aparato de tradu-
o celular reconhece o IRES permanece desco-
nhecido, mas a participao de vrios fatores de
iniciao, alm de outros fatores celulares, tem
sido proposta. Ao contrrio dos poliovrus e dos
pestivrus, o genoma dos vrus do gnero Flavivi-
rus possui uma estrutura cap na extremidade 5,
mas parece ser traduzido por um novo mecanis-
mo que no depende do cap.
A regio 5 UTR do genoma dos vrus RNA
de sentido positivo tambm contm sinais para a
replicao do genoma. O balano entre traduo e
replicao parece ser mediado pela interao des-
sa regio com protenas virais e celulares. Outra
estrutura essencial para a replicao, conhecida
como sinal cis-acting de replicao (cre), tem sido
identicado no genoma de vrios vrus. Essas
Figura 7.3. Ilustrao simplificada das etapas de replicao dos vrus das famlias . O
genoma RNA , inicialmente, traduzido em protenas (1). A RNA polimerase produzida nesta etapa sintetiza o RNA
complementar (2) e, a seguir, cpias de sentido genmico (3). Alm de ser traduzido em protenas, o RNA de sentido
genmicoserve de molde para a sntese doRNAcomplementar e, posteriormente, encapsidadonas novas partculas
vricas (4).
Picornaviridae e Flaviviridae
5'-
-5'
-3'
3'-
RNA genmico (+)
RNA antigenmico (-)
Traduo (1) Encapsidamento (4)
Protenas
Replicao
2
3
174 Captulo 7
estruturas, embora aparentemente responsveis
pela mesma funo, esto localizadas em regies
diferentes dos genomas.
A regio 3 UTR do genoma contm estrutu-
ras secundrias e tercirias que so importantes
durante a replicao do genoma. Acredita-se que
ocorre uma interao direta entre as duas UTRs
(5 e 3) durante a traduo e replicao, mediada
por complexos do RNA com protenas. Existem
ainda evidncias de circularizao do genoma do
vrus da dengue (um avivrus) atravs de inte-
rao fsica entre as UTRs 5 e 3.
Durante a sua replicao, os picornavrus in-
duzem a proliferao de estruturas membranosas
envolvidas na replicao viral. Essas membranas
podem fornecer fatores celulares necessrios para
a replicao do RNA. Vrias protenas celulares
que interagem com o RNA genmico tm sido
identicadas e, em alguns casos, tm sido asso-
ciadas funcionalmente com a replicao.
2.2 Genomas com mais de uma ORF e
produo de mRNAs subgenmicos
Vrios patgenos animais e humanos utili-
zam esta estratgia de expresso gnica e replica-
o do genoma. Incluem-se entre eles os togav-
rus Sindbis e vrus das encefalites eqinas (EEEV,
VEEV e WEEV), os calicivrus (calicivrus felino,
FCV), os coronavrus (vrios patgenos animais
e humanos), os arterivrus (PRRSV, vrus da arte-
rite eqina) e os astrovrus. Pela sua organizao
genmica e estratgia de expresso similares, os
membros das famlias Coronaviridae e Arteriviri-
dae so agrupados na ordem Nidovirales. Os vrus
deste grupo de famlias apresentam vrias simi-
laridades de estrutura, organizao genmica e
expresso gnica com o grupo anterior, porm
tambm apresentam importantes diferenas.
2.2.1 Estrutura e organizao genmica
Os vrus deste grupo possuem molculas
de RNA de polaridade positiva como genoma,
com extenso entre 6.8 kb (astrovrus) a 32 kb
(coronavrus). Dependendo da famlia, a extre-
midade 5 possui uma protena ligada (VPg) ou
uma estrutura cap, enquanto a extremidade 3
poliadenilada. Os genes que codicam as pro-
tenas no-estruturais esto localizadas nos dois
teros prximos extremidade 5, e os genes das
protenas estruturais ocupam o tero restante do
genoma. Uma caracterstica comum a todos es-
ses vrus a produo de mRNA subgenmicos
(mRNAsg), em nmero e extenso variveis, que
so traduzidos nas protenas estruturais.
2.2.2 Expresso gnica e replicao do
genoma
A expresso gnica e a replicao do geno-
ma desses vrus apresentam algumas semelhan-
as com o grupo anterior: a) o genoma serve de
mRNA e traduzido diretamente pelos ribosso-
mos; b) a traduo resulta na produo de poli-
protenas, que so posteriormente clivadas nas
protenas individuais; e c) a replicao do geno-
ma ocorre via produo de um RNA de sentido
antigenmico. As principais diferenas se refe-
rem organizao do genoma (posio dos genes
das protenas estruturais versus no-estruturais),
nmero de ORFs e produo de mRNAsg.
Dentre esses vrus, os mais estudados so os
coronavrus e os togavrus. A seguir, ser descrita
a expresso gnica e replicao do vrus Sindbis,
um togavrus responsvel por encefalomielite
aguda em camundongos e extensivamente es-
tudado como modelo para diversos aspectos da
Virologia.
O genoma desse vrus contm duas ORFs,
cada uma codicando quatro protenas (Figura
7.4). Inicialmente, a ORF situada prxima ex-
tremidade 5 do genoma traduzida, resultando
na produo de uma poliprotena. Esta poliprote-
na clivada medida que vai sendo produzida,
originando as protenas no-estruturais, incluin-
do a replicase viral. Esta polimerase sintetiza,
ento, uma cpia de RNA de sentido negativo
(complementar ou antigenmica) com a extenso
completa do genoma. A molcula de RNA com-
plementar serve para dois propsitos: a) molde
para a sntese de RNAs de sentido e extenso ge-
nmicos que so encapsidados na prognie viral
e b) molde para a sntese de mRNAs subgenmi-
cos. Esses mRNAsg so traduzidos em uma poli-
protena que origina, por clivagem, as protenas
Replicao dos vrus RNA 175
do capsdeo e envelope. Os nucleocapsdeos se
formam no citosol, pela associao de mltiplas
cpias da protena do capsdeo com o genoma
RNA. As glicoprotenas do envelope so inseri-
das em membranas de organelas celulares, e os
vrions maturam por brotamento na membrana
plasmtica.
A transcrio dos mRNAs (uma nica esp-
cie, no caso dos togavrus) ocorre por iniciao
em um stio ou promotor interno. Uma vez sin-
tetizados, esses mRNAsg no so reconhecidos
como molde pela polimerase viral e apenas ser-
vem para a traduo nas protenas estruturais.
Essa estratgia permite a separao temporal da
sntese de protenas regulatrias (iniciais) e estru-
turais (tardias). A replicao desses vrus um
pouco mais complexa do que a dos picornavrus,
e a clula deve manter a sua integridade para
permitir o brotamento contnuo das novas par-
tculas vricas. De fato, a reduo da sntese pro-
tica celular muito menos dramtica at mesmo
em fases tardias da infeco.
A replicao dos calicivrus e astrovrus no
tem sido to caracterizada como os togavrus,
pois alguns desses vrus no replicam com eci-
ncia em cultivo celular. No entanto, os vrus de
ambas as famlias tambm produzem mRNAsg
durante a sua replicao.
Os coronavrus e arterivrus replicam fazen-
do uso de um mecanismo similar. Nos coronav-
rus, uma srie de 5 a 7 mRNAsg sobrepostos so
produzidos pela transcrio do RNA antigen-
mico (Figura 7.1). Cada mRNAsg inicia com uma
regio lder 5 idntica (com cap), o que indica um
mecanismo mais complexo de iniciao do que o
simples reconhecimento de um promotor inter-
no. Todos os mRNAsg possuem a mesma extre-
midade 3 e so traduzidos em vrias protenas
estruturais.
A exemplo dos outros vrus RNA de sentido
positivo, a replicao desse grupo de vrus ocorre
em complexos replicativos associados com mem-
branas intracelulares. As estruturas formadas e a
origem das membranas envolvidas, no entanto,
variam entre os vrus. Por exemplo, os complexos
replicativos de vrios picornavrus e avivrus
so associados com o retculo endoplasmtico,
enquanto os togavrus utilizam tambm as mem-
branas dos endossomos e lisossomos como stios
de replicao.
Poliprotena
Traduo
NSP1 NSP2 NSP3 NSP4
Clivagem
Replicao
5 3
RNA antigenmico (negativo)
Transcrio
Transcrio
Cap A (n)
RNA subgenmico
Traduo
Poliprotena
C
Clivagem
E3 E2 E1
m
NsP1 NsP2 NsP3 NsP4 C E3 E2
3' 5'
E1
A(n) Cap
Protenas estruturais
Protenas no-
estruturais
Figura 7.4. Ilustraoesquemticadaexpressognicae replicaodos togavrus (vrus Sindbis).
176 Captulo 7
3 Vrus com genoma RNA de sentido
negativo
Os vrus com genoma RNA de sentido nega-
tivo apresentam uma maior diversidade do que
o grupo anterior. Esses vrus possuem o genoma
geralmente mais extenso e codicam um nmero
maior de protenas. Essa complexidade pode de-
ver-se s diculdades adicionais da sua expresso
gnica e replicao, o que faz com que necessitem
codicar mais protenas e com funes diversas.
Os genomas dos vrus RNA de sentido ne-
gativo no so traduzidos diretamente em pro-
tenas, pois no possuem as ORFs no sentido ge-
nmico. Ao contrrio, as ORFs esto presentes na
ta de RNA complementar (RNA antigenmico).
A sntese das protenas virais, portanto, requer a
prvia produo de mRNAs. Estes mRNAs so
transcritos pela transcriptase/replicase viral,
usan do o RNA genmico como molde. Como o
RNA genmico no traduzido diretamente e
assim a polimerase no produzida no incio do
ciclo, como no grupo anterior esses vrus neces-
sitam trazer, nos vrions, as enzimas necessrias
para a sntese de RNA antigenmico e mRNA.
Os vrus RNA de sentido negativo compar-
tilham algumas caractersticas, tais como: a) os
vrions contm cpias da enzima replicase; b)
o RNA genmico desprovido de protenas no
infeccioso; c) so produzidos mRNAs indivi-
duais para cada gene, ou seja, so RNAs mono-
cistrnicos; d) os mRNAs possuem 5cap e so
poliadenilados (existem excees); e) o genoma
permanece associado com protenas durante a
transcrio e replicao; f) o RNA genmico de
vrios desses vrus forma estruturas semelhantes
a cabos de panela (panhandles), pela associao de
seqncias complementares presentes nas extre-
midades.
Neste grupo so encontrados vrus com dois
tipos de organizao genmica: os vrus com o
genoma no-segmentado, ou seja, uma molcula
nica de RNA; e os vrus com o genoma dividido
em vrios segmentos.
A estratgia de expresso gnica e replica-
o do genoma dos vrus RNA de sentido negati-
vo muito similar. Cada gene origina um mRNA
que codica uma protena, ou seja, so mRNAs
monocistrnicos. A replicao do genoma ocorre
por meio da produo de uma molcula de RNA
complementar (antigenmico), que serve de mol-
de para a sntese de RNA genmico.
Nos vrus com o genoma no-segmentado,
so produzidos vrios mRNAs de extenso cur-
ta, cada um correspondendo a um nico gene.
medida que os mRNAs so transcritos, ocorre a
atenuao da transcrio, sendo produzida uma
quantidade maior de mensageiros dos genes loca-
lizados na extremidade 3 do genoma. Esses mR-
NAs sero traduzidos em protenas. A produo
do RNA complementar (intermedirio na repli-
cao do genoma) envolve a transcrio completa
do genoma. Para isso, a replicase ignora os sinais
de terminao de cada gene e prossegue transcre-
vendo at a extremidade 5 da molcula molde.
Nos vrus com o genoma segmentado, cada
segmento genmico codica um ou ocasional-
mente dois produtos. Cada mRNA corresponde
aproximadamente extenso completa do res-
pectivo segmento genmico. Esses mRNAs pos-
suem 5 cap e so poliadenilados na extremida-
de 3. Os RNAs antigenmicos que serviro de
molde para a sntese de cpias de RNA genmico
possuem uma extenso semelhante, mas no
possuem cap na extremidade 5 e nem poliA na
extremidade 3.
3.1 Vrus com o genoma no-segmentado
Os membros de quatro famlias de vrus
possuem genoma RNA negativo no-segmenta-
do (Tabela 7.1). As famlias Paramyxoviridae, Fi-
loviridae, Bornaviridae e Rhabdoviridae compem
a ordem Mononegavirales, pelas semelhanas na
estrutura e organizao genmica, estratgia de
expresso gnica e replicao do genoma e por
semelhanas estruturais e funcionais das prote-
nas. Uma caracterstica marcante da replicao
desses vrus a grande estabilidade do complexo
ribonucleoprotena (genoma + nucleoprotena,
RNP). Esse complexo nunca desfeito durante
as diferentes etapas do ciclo replicativo, ou seja,
a transcrio e a replicao ocorrem utilizando,
como substrato (ou molde), um RNA fortemente
recoberto por mltiplas cpias da nucleoprotena
(N ou NP). Esses vrus apresentam tambm um
mecanismo interessante de regulao na trans-
Replicao dos vrus RNA 177
crio dos diferentes genes, chamado de atenu-
ao da transcrio, o que resulta na produo
de quantidades de protenas de acordo com a
necessidade do vrus. Os bornavrus apresentam
alguns aspectos nicos, como a transcrio e re-
plicao nuclear, splicing alternativo dos transcri-
tos primrios policistrnicos, uso diferencial de
sinais de incio e trmino de transcrio. Esses
aspectos os distinguem dos paramixovrus, lo-
vrus e rabdovrus.
As seguir, sero abordados os principais
aspectos da expresso gnica e replicao do v-
rus da estomatite vesicular (VSV), um membro
da famlia Rhabdoviridae. Grande parte das infor-
maes se aplica tambm aos outros membros da
ordem Mononegavirales.
3.1.1 Estrutura e organizao
do genoma
A estrutura e organizao do genoma de
vrus representativos das trs famlias que com-
pem a ordem Mononegavirales esto apresenta-
dos na Figura 7.5. Variaes na extenso do geno-
ma, no nmero de genes e na extenso das regies
intergnicas (IR) so encontradas nos vrus das
diferentes famlias. Porm, todos eles possuem
um grupo principal de genes em comum e a or-
ganizao genmica muito semelhante.
O genoma do VSV formado por uma mo-
lcula de RNA linear de ta simples, com apro-
ximadamente 11 kb. Os rabdovrus, em geral,
codicam um mnimo de cinco genes, na ordem
3 N P M G L 5, e o VSV codica outras
duas pequenas protenas (C e C) em outra fase
de leitura do gene P. Nos paramixovrus, vrias
protenas so produzidas a partir do gene P, pela
utilizao de diferentes cdons de iniciao, tra-
duo de diferentes ORFs e por um mecanismo
de edio. Neste mecanismo, so adicionadas
uma, duas ou trs guaninas (G) em um determi-
nado ponto do mRNA, resultando em mudana
de fase de leitura a partir deste local. Prximo
extremidade 3, existe uma regio no-codican-
te, que transcrita em um polinucleotdeo deno-
minado lder. A seqncia lder possui 47 nt (no
Figura 7.5. Estrutura e organizao do genoma de trs vrus representativos das famlias que compem a ordem
A) (vrus da estomatite vesicular, VSV); B) (vrus da cinomose,
CDV); C) (vrus Ebola). O genoma consiste de uma molcula linear de RNA de polaridade negativa,
representada pelotraocontnuo. Os blocos representamos genes, comregies intergnicas (IRs) entre eles. NouNP):
nucleoprotena; P: fosfoprotena (C e V, produtos secundrios do gene P); M (VP40): protena da matriz; G:
glicoprotena do envelope; F: protena de fuso; H: protena de ligao aos receptores, hemaglutinina; L: polimerase
viral. VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP30: nucleoprotena
menor; VP24: protena doenvelope. Onmerodegenes podevariar entre os vrus decadafamlia.
Mononegavirales. Rhabdoviridae Paramyxoviridae
Filoviridae
3
3
3
5
5
L
L
N
NP
P
VP35
M
VP40
G
GP
VP30 VP24
M N
F H L
5'
P/C/V
A
B
C
Rhabdoviridae (VSV)
(11-15kb)
Paramyxoviridae
(15-16kb)
Filoviridae
(19kb)
178 Captulo 7
VSV), no possui cap, no poliadenilado e no
traduzido em protena. Logo aps, existe um sinal
para o incio da transcrio do primeiro gene, que
seguida da adio de 5 cap no mRNA resultan-
te. Entre os genes, existem as regies intergnicas
(IR), sendo que cada uma possui um sinal para a
terminao da transcrio do gene anterior, uma
pequena regio interveniente e um sinal para a
iniciao da transcrio do gene subseqente (Fi-
gura 7.6). Prximo extremidade 5, existe uma
regio no-traduzida, denominada trailer. Em to-
das as etapas da replicao, o genoma permanece
fortemente associado com mltiplas cpias da
nucleoprotena N, formando o complexo ribonu-
cleoprotena (RNP).
3.1.2 Transcrio
Aps a penetrao e perda do envelope, o
nucleocapsdeo (RNA + protena) serve de molde
para a transcrio, que realizada pela replicase
viral. O complexo replicase formado pelas pro-
tenas L e P. A transcrio se inicia na extremi-
dade 3, a partir de onde a transcriptase sinteti-
za a seqncia lder de 47 nt. Segue-se, ento, a
transcrio individual e seqencial de cada gene,
resultando em mRNAs individuais que possuem
a estrutura cap na extremidade 5 e so poliadeni-
lados na extremidade 3. A cada regio intergni-
ca, a transcriptase faz uma pausa de aproximada-
mente 1 a 2 minutos e prossegue transcrevendo o
gene seguinte. No entanto, apenas 70 a 80% das
replicases prosseguem transcrevendo o prximo
gene. As demais se dissociam do genoma e ces-
sam a transcrio. Esse mecanismo de transcrio
seqencial, acompanhado de reduo do nme-
ro de transcriptases que prosseguem a sntese de
RNA aps cada IR, gera um gradiente de transcri-
o que importante para a regulao da quanti-
dade de mRNA produzido de cada gene. Assim,
Figura 7.6. Organizao do genoma e estratgia de transcrio do vrus da estomatite vesicular (VSV) da famlia
. O genoma representado pela linha contnua (as extremidades 3' e 5' e a seqncia lder esto
indicados). Os blocos representam os genes, com o nmero respectivo de nucleotdeos. Acima do genoma est
apresentada a seqncia comumdas regies intergnicas (IR), comos sinais para a terminao e incio da transcrio
dos genes subseqentes. Abaixo do genoma, esto representados os mRNAs produzidos pela transcrio seqencial
dos genes. O nmero relativo de mRNAs decresce medida que a transcrio se distancia do seu incio. N)
nucleoprotena; P) fosfoprotena; M) protena damatriz; G) glicoprotenadoenvelope; L) polimerase.
Rhabdoviridae
3 5
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
L = 6380 N = 1333 P = 821 M = 838 G = 1672
N
mRNA
P
mRNA
M
mRNA
G
mRNA
L
mRNA
IR
Lder = 47nt
IR IR
IR
AUACUUUUUUUGAUUGUC
UAUG AACAG A
A
A
A
A
m
7
G
Terminao Iniciao
Regio intergnica IR
Replicao dos vrus RNA 179
cada gene localizado na direo 5 do genoma
transcrito por um nmero progressivamente me-
nor de transcriptases, resultando em quantidades
decrescentes de mRNAs. Esse mecanismo de-
nominado atenuao da transcrio (transcription
attenuation). (Figura 7.6).
3.1.3 Replicao do genoma
A replicao do genoma inicia em um de-
terminado momento do ciclo, aps a sntese de
quantidade suciente de protenas virais, prin-
cipalmente de nucleoprotena. A replicao do
genoma desses vrus ocorre em duas etapas e
envolve a sntese de uma molcula de RNA com-
plementar com a extenso total do genoma. A
replicase no interrompe a transcrio a cada IR,
ignorando os sinais de terminao da transcrio
at a extremidade 5. Os mecanismos respons-
veis pela transio entre transcrio descontnua
(sntese de mRNAs) e transcrio contnua (snte-
se de RNA complementar) no so completamen-
te conhecidos, mas parecem ser dependentes do
acmulo da protena N (e provavelmente a P) nas
etapas iniciais do ciclo. Mltiplas cpias da prote-
na N se conjugariam fortemente com o transcri-
to lder, provocando um sinal de antiterminao,
que interferiria com a capacidade da replicase de
reconhecer os sinais de terminao presentes no
nal de cada gene, resultando na sntese de uma
molcula de RNA complementar com a extenso
do genoma (Figura 7.7). Outro modelo para a
troca do modo de transcrio descontnua para
a replicao sugere que dois complexos enzim-
ticos diferentes seriam responsveis por cada um
desses mecanismos. A fosforilao da protena P,
que faz parte do complexo, converteria o com-
plexo transcriptase (que realiza a transcrio des-
contnua) em complexo replicase (que realiza a
transcrio contnua).
O RNA antigenmico serve de molde para a
sntese das cpias genmicas. Esse processo fa-
cilitado pela inexistncia de sinais de terminao
da transcrio neste sentido do RNA. Tanto a sn-
tese de RNA antigenmico como a de RNA ge-
nmico so seguidas pela imediata encapsidao
dos RNAs recm-produzidos pela protena N. As
etapas de transcrio e replicao do genoma do
VSV esto ilustradas na Figura 7.7.
3
3
5
5
5
3
5
5
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
N
mRNA
P
mRNA
M
mRNA
G
mRNA
L
mRNA
Transcrio (1)
Replicao (2)
Replicao (3)
RNA genmico (-)
RNA genmico (-)
RNA antigenmico (+)
RNA pol
RNA pol
Figura 7.7. Etapas da transcrio e replicao do genoma do vrus da estomatite vesicular (VSV). A linha contnua
representa a molcula de RNA genmico, recoberta por mltiplas cpias da nucleoprotena. No incio do ciclo
replicativo, a transcrio descontnua resulta em mRNAs individuais de cada gene (1). Em uma determinada etapa,
com o acmulo da nucleoprotena (N), o complexo replicase realiza a sntese da molcula de RNA complementar (2),
que serve de molde para a sntese de molculas de RNA genmico (3). Note que tanto o RNA genmico (-) quanto o
RNA antigenmico ou complementar (+) permanecem recobertos por molculas da protena N (ou NP) durante os
processos detranscrioe replicao. As etapas ilustradas acima socomuns aos vrus daordemMononegavirales.
180 Captulo 7
3.2 Vrus com o genoma segmentado
Vrus de trs famlias possuem este tipo
de genoma: Orthomyxoviridae (7 ou 8 segmen-
tos); Bunyaviridae (trs segmentos) e Arenaviridae
(dois segmentos). Os ortomixovrus e a maioria
dos buniavrus possuem o genoma inteiramente
de sentido negativo, ou seja, as ORFs esto pre-
sentes no RNA complementar. O genoma dos
arenavrus e de alguns buniavrus possui senti-
do ambissense, ou seja, contm algumas ORFs no
sentido do RNA genmico e outras no sentido do
RNA complementar. O genoma no traduzido
diretamente, e esses vrus necessitam trazer a sua
replicase nos vrions. Por isso so classicados
como vrus RNA de sentido negativo.
Os ortomixovrus possuem o genoma seg-
mentado (inuenza A e B = oito segmentos; in-
uenza C = 7 segmentos) e replicam o genoma
no ncleo da clula hospedeira. A replicao no
ncleo faz desses vrus excees entre os vrus
RNA, juntamente com os bornavrus. A descrio
a seguir abordar o vrus da inuenza A.
O genoma do vrus da inuenza A consti-
tui-se por oito segmentos de RNA de polaridade
negativa, numerados de 1 a 8. Os segmentos 1 a 6
codicam uma protena cada; os segmentos 7 e 8
codicam duas protenas cada. Todos os segmen-
tos genmicos apresentam a mesma organizao
geral: possuem um gene (ou mais) na regio cen-
tral, anqueada por seqncias altamente con-
servadas nas extremidades 3 (12 nt) e 5 (13 nt)
(Figura 7.8). As regies terminais possuem sinais
para o incio da transcrio e replicao. Cada seg-
mento genmico encontra-se recoberto (encapsi-
dado) por mltiplas cpias da protena NP e est
associado com algumas protenas que formam o
complexo polimerase-replicase. Esse complexo
formado por trs protenas principais: PB1 (poli-
merase bsica 1); PB2 (polimerase bsica 2) e PA
(polimerase cida). O complexo RNA + prote-
nas associadas se denomina ribonucleoprotena
(RNP) e permanece estvel durante a replicao.
3-UCGCUUUCGUCC
A. RNA genmico (-)
C. RNA antigenmico (+)
GGAACAAAGAUGA-5
Cap-5---------GA
Cap-5---------GAGCGAAAGCAGG
8-13nt
8-13nt
AAA(n)-3
15-22nt
B. mRNA
Transcrio (1)
Traduo
Replicao
5-AGCGAAAGCAGG CCUUGUUUCUACU-3
2 3
Figura 7.8. Estrutura dos RNAs produzidos durante a replicao do vrus da influenza. A) RNAgenmico (vRNA); B)
mRNA; C) RNA antigenmico. A transcrio para a sntese de mRNA utiliza nucleotdeos com cap subtrados dos
mRNA celulares (1). Os mRNA apresentam uma extenso de 8-13 nt (com cap) em relao ao vRNA e os 15-22
nucleotdeos terminais so substitudos por uma cauda poliA. A primeira etapa da replicao do genoma envolve a
sntese do RNA de sentido antigenmico que exatamente complementar ao vRNA (2). A segunda etapa da
replicao envolve a sntese do vRNA ou genmico a partir do RNA antigenmico (3). Note que os mRNAs diferem
dos RNAantigenmicos, pelapresenade8-13 nt adicionais comcape caudapoliA.
Replicao dos vrus RNA 181
Cada segmento genmico transcrito indi-
vidualmente pelo complexo transcriptase. O pro-
cesso se inicia pela subtrao de seqncias de 8
a 13 nt, com cap na extremidade 5, de mRNAs
celulares. Essa atividade atribuda PB1, ou
seja, essa enzima literalmente furta os segmentos
iniciais de mRNAs celulares. Esses nucleotdeos
servem de primer para o incio da transcrio,
alm de possurem a estrutura cap, que neces-
sria para a traduo dos mRNA virais. A trans-
crio termina 15 a 22 nt antes da extremidade
5 de cada segmento, e seguida pela adio de
uma cauda de poliA. Os mRNAs virais no so,
portanto, exatamente complementares aos RNAs
genmicos: possuem uma extenso de 8 a 13 nt
em sua regio 5 e no possuem os 15-22 nt termi-
nais, sendo substitudos por uma cauda poliA.
A replicao dos RNA genmicos (vRNA)
ocorre em duas etapas: sntese do RNA antige-
nmico (complementar) e sntese de RNA gen-
mico (vRNA), utilizando o RNA antigenmico
como molde. A sntese do RNA antigenmico
no envolve a subtrao de nucleotdeos com
cap de mRNA celulares; inicia-se exatamente na
extremidade 3 do genoma e termina exatamen-
te na extremidade 5. Dessa forma, o RNA anti-
genmico exatamente complementar ao RNA
genmico. A transio entre a transcrio inicia-
da por primer + cap para a transcrio indepen-
dente de primer + cap parece envolver complexos
transcriptase/replicase diferentes. O acmulo da
protena NP e alteraes especcas na composi-
o do complexo polimerase seriam responsveis
pela transio entre transcrio e replicao. A Fi-
gura 7.8 apresenta a estrutura dos vRNA, mRNA
e RNAs antigenmicos produzidos durante a re-
plicao dos vrus da inuenza A.
3.3 Vrus com o genoma ambissense
Os arenavrus e alguns buniavrus possuem
genoma ambissense, ou seja, alguns genes so co-
dicados no sentido do RNA complementar, en-
quanto outros so codicados no sentido do ge-
noma, aps a sntese de mRNA, a partir da cpia
complementar de RNA. Em outras palavras, as
ORFs de alguns genes esto presentes no RNA
genmico (sentido positivo) e outras esto pre-
sentes no RNA complementar (sentido negativo).
As ORFs que esto no sentido do genoma ocu-
pam a metade 3 do genoma e no so traduzidas
diretamente. Como o genoma no traduzido
diretamente pelos ribossomos, esses vrus neces-
sitam trazer, nos vrions, a sua enzima transcrip-
tase/replicase e, por isso, so classicados junta-
mente com os vrus RNA de sentido negativo.
Os arenavrus possuem dois segmentos de
RNA como genoma: um segmento grande (large
= L) e outro segmento pequeno (small = S). Cada
um desses segmentos contm dois genes (Figura
7.9A). No segmento grande, o gene L possui pola-
ridade negativa, ou seja, a sua ORF est presente
no RNA complementar. Para que a protena seja
expressa, esse gene transcrito pela polimerase
viral, originando um mRNA, que , ento, tradu-
zido (Figura 7.9B). Por outro lado, o gene Z possui
polaridade positiva (a ORF est presente no RNA
genmico do segmento L). No entanto, este gene
no expresso pela traduo direta do genoma.
A sua expresso somente ocorre aps a sntese do
RNA complementar, a partir do qual o mRNA ,
ento, produzido (Figura 7.9B). A expresso deste
gene segue o mesmo padro dos genes expressos
atravs de mRNA subgenmicos, caractersticos
de algumas famlias de vrus RNA. No segmento
S, o gene NP possui polaridade negativa e a sua
expresso depende da sntese de mRNA. O gene
GP possui polaridade positiva e a sua expresso
segue o mesmo padro do gene Z do segmento L:
sntese do RNA complementar e transcrio do
seu mRNA. A estratgia ambissense de codica-
o de protenas encontrada ainda em vrus de
alguns gneros da famlia Bunyaviridae (Tospov-
rus e Phlebovrus).
A replicao do genoma segue o padro dos
outros vrus RNA e ocorre por intermdio de um
RNA complementar de sentido antigenmico. A
diferena que o RNA complementar serve de
molde para a sntese do RNA genmico e tam-
bm para a sntese do mRNA de um dos genes.
Em resumo, os genomas ambissense possuem
genes que so expressos de maneira semelhante
aos genomas RNA de sentido negativo (as ORFs
esto presentes no RNA complementar); e genes
182 Captulo 7
que so expressos como nos vrus RNA de senti-
do positivo (as ORFs esto presentes no sentido
genmico, embora no sejam traduzidas direta-
mente).
4 Vrus com RNA de ta dupla
So conhecidas atualmente seis famlias de
vrus que possuem RNA de ta dupla (ds RNA)
como genoma, e apenas duas abrigam vrus que
infectam vertebrados (Reoviridae e Birnaviridae);
destas, apenas a primeira possui patgenos de
mamferos. A famlia Reoviridae a maior e mais
diversa dessas famlias, contendo importantes
patgenos animais. O genoma desses vrus
composto por 10, 11 ou 12 segmentos de dsRNA,
dependendo do gnero. A maioria dos segmentos
codica apenas uma protena, mas alguns podem
codicar duas. Nos segmentos duplos de RNA,
apenas uma das tas contm as ORFs codican-
tes de protenas. O complexo replicase trazido
nos vrions, associado aos segmentos, e a sntese
dos mRNA virais ocorre no interior dos capsde-
os semi-ntegros.
4.1 Estrutura e organizao do genoma
Os vrus do gnero Orthoreovirus possuem
os prottipos da famlia Reoviridae, os reovrus
no-fusognicos de mamferos. O genoma desses
vrus composto por dez segmentos de dsRNA.
Os segmentos genmicos so denominados de
acordo com a sua migrao em gis de poliacri-
lamida (SDS-PAGE): L = grandes (L1, L2, L3);
M = mdios (M1, M2 e M3) e S = pequenos (S1,
S2, S3 e S4). Somente os segmentos S1 e M3 ori-
ginam duas protenas, o restante codica apenas
uma. Os dez segmentos dos orthoreovrus so
lineares e possuem as extremidades livres. Em-
bora se constituam em segmentos separados,
algumas evidncias indicam que os segmentos
genmicos encontram-se associados atravs de
suas extremidades nas partculas vricas. Cada
segmento de polaridade positiva possui uma es-
trutura cap (7-M-guanina) na extremidade 5, que
provavelmente adicionado por enzimas virais
no interior dos capsdeos. As extremidades 5 dos
segmentos de polaridade negativa possuem um
nucleotdeo difosfato. A cadeia codicante (e os
mRNAs) possuem uma regio no-traduzida de
Figura 7.9. Estrutura e expresso do genoma ambissense
dos arenavrus. A) Organizao dos segmentos
genmicos L (grande) e S (pequeno) com os respectivos
genes; B) Estratgia de expresso gnica do segmento
grande. O gene L possui sentido negativo e a sua
expresso depende inicialmente da transcrio e sntese
de mRNA(1). Ogene Zpossui sentido positivo, mas no
expresso pela traduo direta do genoma. A sua
expresso ocorre somente aps a sntese do RNA
complementar (2). Este serve de molde para a transcrio
e produo do mRNAcorrespondente (3). Os genes NP e
GP do segmento S seguem os mesmos padres de
expressodos genes Le Z, respectivamente.
RNA genmico
mRNA
RNA complementar
Transcrio (1)
Transcrio (3)
Replicao (2)
Traduo
Traduo
Protena L
mRNA
L
L
NP
L
Z
Z
GP
Z
-5' 3'-
Protena Z
A
B
Segmento grande (L)
Segmento pequeno (S)
3' - - 5'
3' - - 5'
5' - - 3'
- 5' 3' -
5' - - 3'
Replicao dos vrus RNA 183
Figura 7.10. Organizao do genoma dos vrus do gnero da famlia Ogenoma composto
por 10 segmentos de RNA de fita dupla, sendo que apenas uma das cadeias codificante (sentido positivo). No
segmentoL1, somostradas as duas cadeias, os demais mostramapenas a cadeia codificante. Os diferentes segmentos
apresentam uma organizao semelhante, possuindo uma ORF central flanqueada por pequenas regies no-
traduzidas nas extremidades 5' e 3'. A nomenclatura e nmero de aminocidos de cada protena esto apresentados
direita. Note que oito segmentos codificamapenas uma protena cada; os segmentos M3 e S1 codificamdois produtos
cada.
Orthoreovirus Reoviridae.
5'
5' 3'
3'
pp
Cadeia (+)
Cadeia (-)
L1=3854
L2=3916
L3=3901
M1=2304
M2=2203
M3=2241
S1=1416
S2=1331
S3=1198
S4=1196
Protena (aa) Gene (nt)
3 (1267)
2 (1269)
1 (1275)
2 (736)
1 (708)
NS (721 ) + NSC (681)
1 (455) + 1s (120)
2 (418)
NS (366)
3 (365)
12 a 32 nt prxima extremidade 5 e outra re-
gio no-traduzida de 35 a 73 nt na extremidade
3, intercaladas por ORFs que possuem entre 365
e 1.289 nt (Figura 7.10). Essas regies no-codi-
cantes possuem stios regulatrios da transcrio
e traduo.
4.2 Transcrio
A transcrio inicial ocorre ainda no interior
dos capsdeos, logo aps a penetrao dos vrions
no citoplasma da clula hospedeira, e apenas as
cadeias negativas so transcritas. Os mRNAs in-
dividuais so exatamente complementares aos
RNA moldes: possuem 5 cap e no so poliade-
nilados. Por isso servem tanto para a traduo
como de molde para a sntese do RNA comple-
mentar (Figura 7.11). Os mRNAs tardios, produ-
zidos aps a replicao do genoma, constituem
uma exceo por no receberem cap na extremi-
dade 5. Os mRNAs so rapidamente exportados
dos capsdeos e ganham acesso ao citoplasma
para serem traduzidos. Em fases adiantadas do
ciclo, j no interior de capsdeos recm-formados,
ocorre um novo ciclo de transcrio com a produ-
o de mais mRNA.
184 Captulo 7
4.3 Replicao do genoma
A segunda etapa da replicao, a sntese das
cadeias negativas, ocorre j em capsdeos pr-for-
mados no citoplasma da clula hospedeira, em
um local chamado de viroplasma, que constitui
uma fbrica de vrus dentro da clula hospedei-
ra. Para que isso ocorra, as protenas que formam
os capsdeos j so produzidas em etapas iniciais
do ciclo replicativo. Cada segmento de RNA (+)
serve de molde para a sntese da cadeia comple-
mentar (-), que permanece pareada com o mol-
de, restabelecendo, assim, a molcula genmica
dsRNA. A sntese da cadeia negativa se inicia na
extremidade 3 da molcula molde e prossegue
at a extremidade 5. Por isso, as cadeias positi-
vas e negativas so exatamente complementares
(Figura 7.11).
diretamente. A replicao tambm no ocorre
por meio de um intermedirio RNA, como nos
outros vrus RNA. Ao contrrio, a replicao do
genoma ocorre por meio de um intermedirio
DNA. Parte das etapas de replicao do genoma
ocorre no citoplasma e parte ocorre no ncleo da
clula hospedeira. Resumindo, as principais pe-
culiaridades do genoma e da replicao desses
vrus so: a) o seu genoma diplide, ou seja,
composto por duas molculas idnticas de RNA;
b) o RNA genmico possui polaridade positiva,
porm no traduzido em protenas; c) a repli-
cao do genoma ocorre por meio da sntese de
um intermedirio DNA (provrus), que incor-
5'
5'
5'
5'
5'
3'
3'
3'
3'
3'
RNA (+)
RNA (+)
RNA (-)
RNA (-)
Transcrio (1)
mRNA (+)
Traduo (2)
Protena
Genoma (ds)
Replicao (3)
Genoma (ds)
Figura 7.11. Etapas da expresso gnica e replicao dos
vrus RNA de fita dupla. A fita negativa do genoma
transcrita, originando RNAs de sentido positivo
exatamente complementares (1). Estes RNAs podem ser
traduzidos em protenas (2) e tambm servem de molde
para a sntese da molcula de sentido negativo (3),
restabelecendoa molcula genmica dedsRNA.
Figura 7.12. Ilustraoda estrutura e etapas da replicao
do genoma dos retrovrus. O genoma constitudo por
uma molcula de RNA de fita simples de 7 a 10 kb com
5'cap e poliA. Prximo s extremidades, o genoma
possui duas regies repetidas R (5' e 3') e duas regies
nicas (U5 e U3). Entre essas regies, localizam-se as
seqncias codificantes: genes . Aprimeira
etapa da replicao sntese do provrus DNA
(molcula de DNA de fita dupla correspondente ao
genoma) pela enzima viral transcriptase reversa (1). O
provrus contm as regies U3 e U5 duplicadas nas
extremidades opostas e integrado aos cromossomos
celulares pela ao da enzima viral integrase (2). Aps a
integrao, o provrus transcrito pela RNA polimerase
II celular (3) originando mRNAs idnticos ao genoma.
Estes mRNAs servem para a traduo em protenas e
tambm constituem o RNA genmico para serem
encapsidados naprognieviral.
gag, pol e env
AAAA Cap
.gag pol env
.gag pol env
.gag pol env
.gag pol env
R
R
R
R
R
R
U5
U5
U5
U5
U5
U3
U3
U3
U3
U3
Transcrio reversa (1)
Integrao (2)
Transcrio (3)
Genoma
Genoma
Provrus
Provrus Integrado
DNA
celular
DNA
celular
AAAA Cap
R R U5 U3
DNA
RNA
RNA
DNA
5 Retrovrus
Os retrovrus apresentam uma estratgia
peculiar de replicao do genoma que difere dos
demais vrus RNA (Figura 7.12). Embora esses
vrus codiquem as suas protenas no sentido do
genoma (por isso so considerados vrus RNA
de sentido positivo), o genoma no traduzido
Replicao dos vrus RNA 185
porado aos cromossomos celulares; d) o provrus
integrado transcrito, originando mRNAs para a
sntese protica e para serem incorporados como
genoma na prognie viral; e) as etapas iniciais da
replicao do genoma ocorrem no citoplasma e
so mediadas por enzimas virais (transcritase re-
versa); f) as etapas seguintes ocorrem no ncleo
e so mediadas por enzimas virais (integrao =
integrase, IN) e celulares (transcrio = RNA pol
II celular); g) o genoma dos retrovrus o nico
genoma viral sintetizado exclusivamente por en-
zimas e fatores celulares. Por isso, a sua estrutu-
ra idntica aos mRNA celulares: possui cap na
extremidade 5 e poliadenilado na extremidade
3. As principais etapas da replicao do genoma
dos retrovrus e a estrutura das molculas inter-
medirias esto ilustradas na Figura 7.12. Maio-
res detalhes sobre a expresso gnica e replicao
do genoma podem ser encontrados no Captulo
31.
6 Bibliograa consultada
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PATOGENIA DAS INFECES VRICAS
Eduardo Furtado Flores
1
1
Colaboraram em sees especcas: Janice Ciacci Zanella (Apoptose por vrus); Luiz Carlos Kreutz
(Padres principais de infeco) e Mariana S e Silva (Imunopatologia em infeces vricas).
1 Introduo
1.1 Conceitos bsicos
2 Patologia em nvel celular

2.1 Interaes dos vrus com as clulas
2.2 Efeitos da replicao viral nas clulas hospedeiras
2.3 Apoptose por vrus
3 Patogenia em nvel de hospedeiro
3.1 Penetrao e replicao primria
3.1.1 Pele e mucosas superciais
3.1.2 Trato respiratrio
3.1.3 Orofaringe e trato digestivo
3.1.4 Mucosa urogenital
3.2 Infeces localizadas versus infeces disseminadas (ou sistmicas)
3.2.1 Disseminao local
3.2.2 Disseminao hematgena
3.2.3.Disseminao nervosa
3.3 Localizao das infeces
3.3.1 Infeces em rgos e sistemas especcos
3.3.2 Infeces da pele e tegumento
3.3.3 Infeces do trato respiratrio
3.3.4 Infeces do trato digestivo
3.3.5 Infeces do sistema nervoso central
3.3.6 Infeces do sistema linforreticular e hematopoitico
3.3.7 Infeco fetal
4 Padres principais de infeco
4.1 Infeces agudas
8
191
191
193
193
196
196
197
197
197
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201
202
202
202
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209
209
211
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213
215
217
218
220
221
4.2 Infeces persistentes (ou crnicas)
4.2.1 Infeces latentes
4.2.2 Infeces persistentes ou crnicas
4.2.3 Infeces persistentes temporrias
4.3 Mecanismos envolvidos na manuteno das infeces persistentes
4.3.1 Restrio do efeito citopatognico
4.3.2 Infeco de clulas semipermissivas
4.3.3 Infeco de um pequeno nmero de clulas
4.3.4 Manuteno do genoma viral nas clulas hospedeiras
4.3.5 Evaso da resposta imune do hospedeiro
5 Oncognese por vrus
5.1 Oncognese por retrovrus
5.2 Pequenos vrus DNA tumorignicos
6 Imunopatologia em infeces vricas
6.1 Imunopatologia mediada por imunocomplexos
6.2 Imunopatologia mediada por linfcitos T citotxicos
6.3 Imunopatologia por induo de auto-imunidade
7 Imunossupresso por vrus
7.1 Replicao viral em clulas envolvidas na resposta imunolgica
7.2 Imunossupresso associada com a ativao do sistema imune
7.3 Produtos de moncitos e linfcitos ativados
7.4 Protenas virais
8 Bibliograa consultada
212
222
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223
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230
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232
234
1 Introduo
O termo patogenia ou patognese , apli-
cado s infeces vricas, refere-se ao conjunto
de mecanismos pelos quais os vrus produzem
doena em seus hospedeiros (pato = doena, g-
nese = origem, produo). A denio de doen-
a como sendo qualquer manifestao resultante
de alteraes da siologia do organismo abrange
um leque muito amplo de condies. Manifesta-
es patolgicas incluem desde aumentos leves
da temperatura corporal, alteraes de nimo e
apetite, at condies severas que, eventualmen-
te, resultam na morte do hospedeiro. Na maioria
das doenas, a patogenia multifatorial, resul-
tante da alterao de fatores endgenos ou ex-
genos, raramente determinadas por um fator ni-
co. Com as infeces vricas no diferente, pois
as conseqncias dependem das interaes entre
inmeros fatores do agente e do hospedeiro.
Grande parte dos sinais clnicos observados
nas doenas vricas conseqncia da resposta
do hospedeiro injria celular e tecidual. Por sua
vez, essa injria pode resultar de efeitos diretos
ou indiretos da replicao viral ou pode, ainda,
ser conseqncia da resposta imune do hospe-
deiro contra as clulas infectadas. De fato, a pa-
togenia de vrias doenas vricas est mais inti-
mamente ligada aos mecanismos imunolgicos
do hospedeiro do que s conseqncias diretas
da replicao viral nos tecidos. Em resumo, a pa-
togenia das infeces vricas determinada pela
combinao entre os efeitos diretos e indiretos da
replicao viral e as respostas do hospedeiro in-
feco.
Os mecanismos pelos quais os vrus pro-
duzem doenas em seus hospedeiros podem ser
examinados em diferentes nveis. As clulas so
as unidades fundamentais do organismo, nas
quais os vrus se multiplicam. Por isso, as clulas
se constituem nos locais de origem dos eventos
ligados infeco vrica que podem resultar em
doena. A replicao dos vrus, muitas vezes, in-
terfere com mecanismos siolgicos essenciais
da clula hospedeira, alterando as suas funes
em benefcio da replicao viral. A alterao de
processos celulares envolvidos na biossntese de
macromolculas e na manuteno da homeostase
celular, por exemplo, podem resultar em disfun-
o e at morte celular. Outras vezes, produtos da
replicao viral podem ser txicos para a clula
hospedeira. Essas alteraes esto freqentemen-
te envolvidas na origem de processos patolgicos
observados no organismo. Uma infeco pode re-
sultar em absoluta ausncia de efeitos deletrios
sobre as clulas e, conseqentemente, na ausn-
cia de manifestaes clnicas; ou pode resultar em
efeitos celulares graves, acompanhados de sinais
clnicos severos e morte do hospedeiro.
No hospedeiro, a complexidade de intera-
es que pode ou no resultar em doena
muito maior, e ainda acrescida da participao
dos componentes celulares e humorais da res-
posta imunolgica e de outros sistemas encar-
regados de manter a homeostasia e integridade
do organismo. Ao contrrio do que se imagina, a
ocorrncia de doena clnica em infeces vricas
um evento pouco freqente, considerando-se a
totalidade das infeces. Ou seja, a maioria das
infeces por vrus no resulta em alteraes or-
gnicas que se manifestem com sinais percept-
veis clinicamente. A ocorrncia ou no de doena
em uma determinada infeco vrica depende da
interao entre inmeros fatores do agente e do
hospedeiro, na qual os mecanismos imunolgi-
cos, destinados a manter a integridade e funcio-
nalidade do organismo, desempenham um papel
fundamental. A Figura 8.1 ilustra esquematica-
mente a relao entre infeco e doena em nvel
celular e de hospedeiro, com as conseqncias
derivadas da replicao nos diferentes nveis.
1.1 Conceitos bsicos
O termo patogenicidade se refere capaci-
dade de um determinado agente produzir do-
ena no hospedeiro. Vrus altamente patogni-
cos so aqueles capazes de produzir doena em
uma grande parcela dos hospedeiros infectados.
Como a patogenia das infeces depende tam-
bm das reaes do organismo, a patogenicidade
de um vrus modulada por suas interaes com
o hospedeiro. O termo virulncia, muitas vezes
utilizado como sinnimo de patogenicidade, se
refere ao nvel de severidade da doena causa-
da por um agente. Os vrus altamente virulentos
causam doena grave; enquanto vrus avirulen-
tos ou pouco virulentos (atenuados) no causam
192 Captulo 8
doena, ou causam doena leve, respectivamen-
te. A virulncia de um vrus pode ser medida de
vrias formas, incluindo o percentual de animais
que adoece ou morre aps inoculao experimen-
tal, grau de severidade dos sinais clnicos, nvel e
intensidade de alteraes histolgicas, entre ou-
tras.
A virulncia dos vrus determinada gene-
ticamente e pode variar entre isolados de uma
mesma espcie viral. No entanto, fatores do hos-
pedeiro podem interferir com e modular a viru-
lncia desses agentes. Embora em alguns vrus a
virulncia possa ser mapeada em um ou poucos
genes, para a maioria dos vrus essa uma carac-
terstica multifatorial. Em geral, os genes virais
envolvidos na virulncia podem ser divididos em
quatro classes: a) genes cujos produtos afetam a
capacidade replicativa do vrus; b) produtos g-
nicos que inuenciam a capacidade do vrus se
disseminar no hospedeiro; c) produtos virais que
se contrapem resposta imunolgica do hospe-
deiro e d) produtos virais txicos para a clula
e/ou hospedeiro. Muitos genes virais podem se
enquadrar em mais de uma classe, afetando a vi-
rulncia de mais de uma forma.
A identicao dos genes envolvidos na de-
terminao da virulncia dos vrus de importn-
cia em sade humana e animal um dos maiores
desaos da Virologia, pois pode permitir a mani-
pulao gentica desses agentes com ns vacinais
e/ou teraputicos. No entanto, essa nem sempre
uma tarefa fcil, pela complexidade das intera-
es vrus-clula, falta de sistemas apropriados
ou modelos animais adequados e pela diculda-
de de se estudar virulncia em cultivos celulares.
O termo susceptibilidade se refere s condi-
es oferecidas pelo hospedeiro para a ocorrncia
da infeco e doena. Por outro lado, resistncia
a oposio oferecida pelo hospedeiro instalao
da infeco. A susceptibilidade e resistncia de
um hospedeiro a um vrus so determinadas ge-
neticamente e podem variar entre indivduos de
uma mesma espcie, de acordo com fatores como:
raa, idade, sexo, condio corporal, estado sio-
Figura 8.1. O conceito iceberg das infeces vricas. Note que a maioria das infeces vricas no resulta em efeitos
perceptveis em nvel de hospedeiro. As manifestaes clnicas, quando ocorrem, constituem-se em reflexos da
disfunoe patologia emnvel celular e tecidual.
Efeito em nvel celular Efeito no hospedeiro
Morte do hospedeiro
Doena clssica e severa
Doena leve ou moderada
Infeco sem sinais
clnicos (assintomtica)
Exposio sem infeco
Exposio sem
infeco
Replicao viral sem
alteraes celulares visveis,
ou danos teciduais restritos
Disfuno celular,
efeito citoptico ou
transformao celular
Lise celular
Conceito das infeces iceberg
V
I
S
U
A
L
M
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N
T
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D
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A
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L

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I
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A
Patogenia das infeces vricas 193
lgico etc. A resistncia infeco pode ser de-
vida a mecanismos naturais (resistncia natural
ou inata) ou adquiridos (resistncia adquirida). O
termo imunidade muito utilizado para designar
a resistncia, principalmente a resistncia adqui-
rida. O termo refratariedade se refere a um grau de
resistncia absoluta a um determinado agente, e
uma caracterstica da espcie animal, e no do
indivduo.
O tropismo a predileo de um vrus por
determinadas clulas ou tecidos e pode ser de-
terminado por uma variedade de fatores celula-
res que so necessrios para a replicao viral. O
principal fator determinante do tropismo e que
possui inuncia direta no padro de distribui-
o e localizao das infeces a presena de
receptores especcos para o vrus. Maiores de-
talhes sobre os mecanismos envolvidos com o
tropismo celular dos vrus sero abordados ao
longo do texto.
2 Patologia em nvel celular
A compreenso da patogenia das doenas
vricas depende do conhecimento dos mecanis-
mos envolvidos em diferentes nveis. Os vrus
necessitam das macromolculas e de processos
biossintticos da clula hospedeira para se mul-
tiplicar. As interaes entre o vrus e os compo-
nentes celulares so complexas e, muitas vezes,
resultam em alteraes da siologia celular, po-
dendo levar injria e at mesmo morte da
clula. As patologias celulares associadas com a
replicao viral se constituem em um dos princi-
pais mecanismos de produo das doenas. Em
nvel celular, as infeces vricas podem resul-
tar em uma variedade de condies, a saber: a)
infeco no-produtiva, com bloqueio em uma
das etapas intracelulares da replicao, seguida
ou no de injria e morte celular; b) estabeleci-
mento de infeco latente, com limitada expres-
so gnica viral e persistncia do genoma viral
na clula hospedeira; c) infeco produtiva, com
produo de prognie viral infecciosa, acompa-
nhada de patologia ou morte celular; d) infeco
produtiva persistente, em que a clula sobrevive
e segue produzindo vrus em nveis baixos por
longos perodos e, at mesmo, indenidamente;
f) oncognese, seja pela incorporao de oncoge-
nes virais na clula hospedeira ou por alteraes
nas funes de genes celulares encarregados do
controle do ciclo celular.

2.1 Interaes dos vrus com as clulas

A maioria das alteraes da siologia celu-
lar resultantes da replicao viral se deve a efei-
tos secundrios das interaes entre os produtos
virais e componentes celulares; interaes estas
que so necessrias para a multiplicao dos v-
rus. Os efeitos txicos especcos de alguns pro-
dutos virais e o acmulo excessivo de protenas
e cidos nuclicos virais tambm podem levar
injria celular.
As interaes que resultam em alterao na
siologia celular podem ocorrer em qualquer eta-
pa do ciclo replicativo. A penetrao dos adeno-
vrus em clulas de cultivo acompanhada por
despreendimento das clulas da superfcie de
contato. Esse evento deve-se ligao da prote-
na penton dos vrions s molculas de integrinas
da membrana das clulas. Essa ligao altera as
interaes das integrinas com outras protenas da
membrana celular, necessrias para a aderncia
das clulas superfcie do frasco. A protena M2
dos vrus da inuenza produz canais inicos na
membrana dos endossomos durante o processo
de internalizao do vrus, atravs dos quais pr-
tons H
+
penetram para o interior das vesculas
endossmicas, acidicando o pH e facilitando o
processo de fuso/penetrao e desnudamento
do nucleocapsdeo. No entanto, as possveis con-
seqncias desse evento, para a siologia celular,
so desconhecidas.
Alguns vrus interferem com os mecanis-
mos de transcrio, processamento (splicing) e
transporte de RNA mensageiros (mRNA) celula-
res, estratgias que visam a favorecer a traduo
dos mRNA virais. Os adenovrus e herpesvrus
inibem a maturao e a exportao de mRNA ce-
lulares para o citoplasma; os vrus da inuenza
provocam a clivagem de mRNA celulares para
utilizar a extremidade 5 com cap para os seus
mRNA. Produtos dos vrus da inuenza, her-
pesvrus e poxvrus promovem a degradao de
mRNA celulares (Tabela 8.1).
Outros vrus alteram a especicidade ou
subvertem a maquinaria celular de traduo
194 Captulo 8
para a produo de suas protenas, em detrimen-
to das protenas celulares. A inibio da tradu-
o de mRNA celulares, e no de mRNA virais,
uma forma de subverso utilizada pelos vrus
para favorecer a sntese de suas protenas. Esses
mecanismos so utilizados por vrios vrus, in-
cluindo o vrus da estomatite vesicular (VSV),
o poliovrus, o vrus da febre aftosa (FMDV), os
adenovrus, entre outros. Essa interferncia pode
ter efeitos deletrios para a clula hospedeira,
que tem a sua sntese protica reduzida ou mes-
mo suprimida.
A inibio da sntese de DNA celular ou-
tro mecanismo utilizado por vrus RNA e DNA
durante a sua replicao. Essa inibio pode pro-
porcionar uma disponibilidade maior de precur-
sores (nucleotdeos), protenas e estruturas celu-
lares para a sntese dos cidos nuclicos virais e
replicao do genoma. possvel tambm que a
inibio da sntese de DNA celular, em alguns ca-
sos, seja uma mera conseqncia da inibio da
sntese protica da clula hospedeira pelo vrus.
Por outro lado, alguns vrus (poliomavrus,
papilomavrus e adenovrus) estimulam as clu-
las a entrar em fase S, com ativao da sntese de
DNA e subseqente diviso celular. Essa estra-
tgia tem por m estimular a clula a fornecer
condies e componentes (nucleotdeos, enzimas
replicativas e fatores de replicao) necessrios
replicao do genoma viral. Como conseqncia,
a clula hospedeira passa a oferecer as condies
necessrias replicao viral. Essa interferncia
com a regulao do ciclo celular, algumas vezes,
pode levar transformao tumoral dessas clu-
las.
A apoptose ou morte celular programada
um mecanismo de morte celular em resposta a
vrios estmulos, inclusive infeces vricas. Tem
sido demonstrado que vrios vrus so capazes
de desencadear a cascata de reaes que leva
apoptose da clula hospedeira. Por outro lado,
vrios vrus possuem produtos que inibem ou
retardam a apoptose, prolongando, assim, a vida
da clula e permitindo a concluso do seu ciclo
replicativo.
2A
pro
Poliovrus
Vrus Protena(s) Efeito Alvo
2A, 3A
Inibio da traduo cap-dependente
Inibio do trfego protico RER-Golgi
elF-4G
Desconhecido
2B, 2C
Proliferao de vesculas
membranosas
Desconhecido
Desconhecida Alterao do mecanismo da MAP4 MAP4
3C Inibio da transcrio Tbp, Complexo Tfflc
Vrus Sindbis
Aumento da permeabilidade da membrana
plasmtica
Na, K-ATPase? Desconhecida
Paramixovrus Fuso entre clulas formao de sinccios Membrana plasmtica F
E1B-55K, E4-34K
Adenovrus
Desconhecida Inibio da traduo cap-dependente
Bloqueio na acumulao de mRNAs
celulares no citoplasma
elF-4E
Protena celular envolvida
no transporte de mRNA
Produto do gene
(ribonuclease) vhs
Herpesvrus Desmontagem dos polissomas mRNA celular
Vrus do herpes
simplex
Inibio do transporte e
processamento de mRNA celular
Desconhecido ICP 27
Vrios vrus Despolimerizao do citoesqueleto Filamentos de actina. Desconhecida
Tabela 8.1. Protenas virais responsveis por efeitos especficos sobre mecanismos e estruturas das clulas
hospedeiras
Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).
Patogenia das infeces vricas 195
Protenas virais podem tambm interferir
com mecanismos celulares de modicao, locali-
zao e maturao de protenas, podendo resultar
em citopatologia. As glicoprotenas do envelope,
em especial, so alvos de extensivas modicaes
ps-traduo, maturao e transporte por meca-
nismos celulares, e a sua abundncia pode inter-
ferir com os processos celulares de processamen-
to de protenas endgenas.
A alterao da estrutura de membranas ce-
lulares, resultando em fuso e/ou alterao da
permeabilidade, tambm so efeitos da replica-
o de vrios vrus. Diversos vrus com envelope
possuem glicoprotenas que so necessrias para
promover a fuso do envelope com a membra-
na celular, permitindo a sua penetrao na clu-
la hospedeira. A expresso dessas protenas em
clulas infectadas pode resultar em fuso entre
clulas vizinhas, resultando na formao de mas-
sas citoplasmticas multinucleadas denominadas
sinccios. A fuso entre clulas vizinhas tambm
possvel pela ao direta das glicoprotenas vi-
rais no processo de penetrao. A fuso celular
uma forma de citopatologia produzida por vrus,
mas tambm pode ser considerada uma forma de
disseminao do vrus entre clulas.
Os produtos de alguns vrus produzem um
aumento na permeabilidade da membrana plas-
mtica da clula infectada. Em decorrncia disso,
o aumento da concentrao de ons sdio na c-
lula pode favorecer a traduo de mRNA virais.
Ento, para alguns vrus, o aumento da permea-
bilidade da membrana pode favorecer a sntese
preferencial de protenas virais.
A infeco por diversos vrus pode provo-
car a desorganizao ou mesmo a ruptura do ci-
toesqueleto da clula hospedeira. Uma reduo
na quantidade de lamentos de actina tem sido
observada na infeco por vrios vrus, incluindo
o vrus do herpes simplex humano (HSV), vrus
da cinomose (CDV) e VSV, entre outros. As con-
seqncias da desorganizao do citoesqueleto
no so bem claras, mas provavelmente possuem
relao com algumas alteraes morfolgicas ob-
servadas em clulas infectadas. provvel que as
alteraes na estrutura e funo do citoesqueleto
sejam efeitos secundrios da replicao viral e da
interferncia do vrus com outras funes celu-
lares.
A replicao de alguns vrus resulta na for-
mao de estruturas com morfologia mais ou me-
nos denidas no citoplasma ou no ncleo da c-
lula infectada. Essas estruturas so denominadas
genericamente corpsculos de incluso e so
formadas pelo acmulo de complexos de trans-
crio e replicao, produtos intermedirios da
replicao, protenas estruturais e no-estrutu-
rais, capsdeos, nucleocapsdeos e vrions em de-
terminados locais da clula. A localizao dos cor-
psculos de incluso reete o local de replicao
do respectivo vrus. Os corpsculos de Negri so
formados no citoplasma de neurnios infectados
pelo vrus da raiva; os corpsculos citoplasmti-
cos de Lenz so caractersticos da infeco pelo
CDV. A replicao dos reovrus acompanhada
da formao de grandes estruturas citoplasmti-
cas denominadas virossomos, que podem ocupar
grande parte do citoplasma. Os virossomos so
os locais de acmulo de cidos nuclicos e pro-
tenas virais e onde ocorrem os mecanismos de
replicao do genoma e montagem das partculas
vricas. A replicao dos herpesvrus neuropa-
tognicos (herpesvrus bovino tipo 5 [BoHV-5],
vrus da doena de Aujeszky [PRV]) resulta na
formao de corpsculos nucleares em neurnios
do sistema nervoso central (SNC). A presena de
corpsculos de incluso tem sido utilizada no
diagnstico histopatolgico de algumas viroses,
pela facilidade de observao e pelas suas carac-
tersticas tintoriais (podem ser basoflicos ou aci-
doflicos).
Pelo exposto, ca evidente que as interaes
entre os produtos virais e os componentes celu-
lares, durante o ciclo replicativo dos vrus, so
extremamente complexas e podem resultar em
uma variedade de alteraes da siologia celular.
Grande parte dessas alteraes foi investigada e
caracterizada em clulas de cultivo. Conseqen-
temente as informaes provenientes desses estu-
dos devem ser analisadas com cautela. No obs-
tante, possvel que grande parte das alteraes
observadas in vitro ocorra tambm in vivo. pro-
vvel tambm que as interaes entre os vrus e
as clulas hospedeiras sejam ainda mais comple-
xas no animal, pela participao de componentes
orgnicos ausentes nos frascos de cultivo. Nesse
sentido, os componentes celulares e humorais do
sistema imunolgico (citocinas e anticorpos) de
196 Captulo 8
outros sistemas de defesa e tambm do sistema
endcrino do hospedeiro certamente possuem
participao importante nas interaes dos hos-
pedeiros com esses agentes invasores. Exemplos
de protenas virais que interferem com mecanis-
mos especcos das clulas hospedeiras esto
apresentados na Tabela 8.1.
2.2 Efeitos da replicao viral nas
clulas hospedeiras
A replicao dos vrus nas clulas hospedei-
ras freqentemente resulta em alteraes na sio-
logia celular, tanto pela interferncia com proces-
sos metablicos e estruturas celulares quanto pela
ao txica de produtos da replicao viral. Em
particular, a interferncia com a sntese de macro-
molculas pode afetar negativamente a siologia
celular e, freqentemente, resulta em patologia.
Essas alteraes podem ser detectadas visual ou
bioquimicamente e tem sido mais caracterizadas
em clulas de cultivo. As alteraes morfolgicas,
associadas com a replicao de vrus em clulas
de cultivo, so denominadas coletivamente de
efeito citoptico ou citopatognico (ECP).
Como cada grupo de vrus pode afetar fun-
es e mecanismos celulares diferentes, o tipo de
ECP produzido tambm caracterstico de cada
espcie ou grupo de vrus. A patologia mais ex-
trema a lise ou destruio celular, e os vrus que
a induzem so denominados citolticos. A lise
celular caracterizada pela morte e desintegra-
o celular, freqentemente devida absoro
excessiva de lquido extracelular. Alguns vrus
produzem alteraes morfolgicas, como cito-
megalia ou arredondamento celular. A citomegalia
pode ser devida absoro de lquido, enquanto
o arredondamento geralmente conseqncia
de alteraes na estrutura e funo das bras do
citoesqueleto. Alteraes no citoesqueleto tam-
bm resultam em desprendimento das clulas do
substrato, efeito que pode ocorrer em estgios
avanados de patologia celular, por mecanismos
diversos. Os vrus que possuem glicoprotenas
fusognicas no envelope promovem fuso celu-
lar, com a formao de clulas gigantes multinu-
leadas, denominadas sinccios. Clulas fusiona-
das possuem vida curta e eventualmente sofrem
lise. A formao de vacolos outro tipo de ECP
produzido por vrus que replicam no citoplasma.
Corpsculos de incluso citoplasmticos ou nuclea-
res tambm so formados como resultado da re-
plicao de alguns vrus e podem ser observados
sob microscopia tica.
Embora a lise celular seja o mecanismo mais
atraente e fcil para explicar as patologias induzi-
das pelos vrus nos seus hospedeiros, certamente
no se constitui no nico mecanismo responsvel
pela produo das doenas. Vrus no citolticos
tambm podem causar patologias severas e at
a morte do hospedeiro. Nesse sentido, prov-
vel que outras formas de citopatologia que no
necessariamente a lise celular tambm possam
ser responsveis por patologias observadas em
animais doentes. Acredita-se que grande parte
das patologias observadas em doenas causadas
por vrus no-citopticos sejam conseqncias da
resposta imune do hospedeiro.

2.3 Apoptose por vrus
Apoptose ou morte celular programada
um processo bioqumico que funciona como uma
cascata que leva a morte ou suicdio celular.
Esse mecanismo ocorre naturalmente durante o
desenvolvimento embrionrio e fetal, manuten-
o da imunidade e da homeostase em organis-
mos multinucleados. Muitos vrus interferem
no processo de apoptose da clula hospedeira,
alterando reaes e componentes-chave desse
processo. Produtos de diferentes vrus promo-
vem ou inibem a apoptose atravs de diversos
mecanismos de ao. bvio que os vrus se be-
neciam ao evitar a apoptose, pois isso permite a
sobrevivncia da clula at que o ciclo replicativo
seja concludo. Porm, em alguns casos, a ocor-
rncia de apoptose vantajosa para o vrus. Em
tais casos, a formao de corpos apoptticos, con-
tendo vrus, resulta em fagocitose dessas estrutu-
ras e liberao do vrus no uido extracelular, o
que favorece a sua disseminao.
Os adenovrus, vrus da peste suna africana
(ASFV), vrus da anemia infecciosa das galinhas
(CAV) e os vrus da peste suna clssica (CSFV)
Patogenia das infeces vricas 197
so exemplos de vrus que produzem protenas
indutoras da apoptose. Protenas que inibem a
apoptose tambm so produzidas pelos adenov-
rus e ASFV e pelos vrus da vaccinia, herpesv-
rus bovino tipo-4 (BoHV-4), herpesvrus eqino
(EHV), vrus da doena de Marek, dentre outros.
3 Patogenia em nvel de hospedeiro
O resultado de uma infeco vrica de hos-
pedeiro depende de vrios fatores, a saber: a) ca-
pacidade de o vrus penetrar em um hospedeiro
susceptvel pela via adequada; b) realizar uma
replicao primria em tecidos prximos ao local
de entrada; c) escapar dos mecanismos naturais
de defesa do organismo; d) disseminar-se para os
tecidos e rgos-alvo; e) replicar ecientemente
nesses tecidos e f) produzir ou no injria tecidu-
al (provocar patologia). Embora os vrus apresen-
tem uma diversidade muito grande e participem
de interaes de especicidade e complexidade
diferentes com os seus hospedeiros, algumas eta-
pas da patogenia parecem ser comuns maioria
das infeces vricas. A seguir, sero abordadas
essas etapas.
3.1 Penetrao e replicao primria
O estabelecimento da infeco no hospedei-
ro depende da penetrao e replicao do vrus
em clulas prximas aos locais de entrada. Essa
replicao denominada primria necessria
para a amplicao do agente, de modo a supe-
rar as barreiras impostas pela resposta inata do
hospedeiro. A replicao primria geralmente
ocorre no prprio local de penetrao, em tecidos
prximos ou nos linfonodos regionais. Em geral,
os vrus podem utilizar mais de uma via para pe-
netrar nos seus hospedeiros. As principais vias de
penetrao de vrus nos animais sero apresenta-
das a seguir e esto ilustradas na Figura 8.2.
3.1.1 Pele e mucosas superciais
A pele se constitui em uma importante bar-
reira para a penetrao de vrus, pois a sua ca-
mada externa formada por clulas mortas e
no suporta a replicao viral. Alm disso, a sua
superfcie seca, levemente cida e possui uma
ora bacteriana permanente/residente que atua
como uma barreira natural. No entanto, solu-
Mucosa
conjuntival
Mucosa
respiratria
Pele
Mucosa
urogenital
Mucosa
intestinal
Mucosa
orofarngea
Figura8.2. Vias depenetraodevrus emseus hospedeiros.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
198 Captulo 8
es de continuidade mesmo imperceptveis
provocadas por abrases, pequenas incises ou
puncturas podem permitir a penetrao e insta-
lao de vrios vrus. Dentre os vrus que podem
penetrar atravs da pele semi-ntegra incluem-se
os papilomavrus, alguns poxvrus e herpesvrus
(Tabela 8.2). Esses vrus so geralmente transmi-
tidos por contato direto ou indireto, ou tambm
mecanicamente atravs de insetos. Se a penetra-
o for supercial, a replicao geralmente li-
mitada ao stio de penetrao, pois a epiderme
desprovida de vasos sangneos e linfticos que
poderiam servir para disseminar a infeco. No
entanto, a infeco de camadas mais profundas
da derme pode levar disseminao sangnea,
pois essa camada altamente vascularizada (Fi-
gura 8.3A). Em especial, os vrus que so trans-
mitidos por insetos hematfagos (alfavrus, avi-
vrus, buniavrus, alguns rabdovrus e orbivrus)
ou por procedimentos iatrognicos (retrovrus e
hepadnavrus) podem alcanar as camadas mais
internas e encontrar condies propcias para a
sua replicao primria. A abundncia de vasos
sangneos e linfticos na derme e em camadas
mais internas oferece condies para a dissemi-
nao desses agentes a partir do stio primrio de
replicao. Aps a replicao primria no tecido
drmico ou subdrmico, os vrions podem se dis-
seminar para os linfonodos regionais no interior
de clulas fagocticas ou livres na linfa e/ou san-
gue. Os herpesvrus invadem terminaes nervo-
sas localizadas nesses locais e so transportados
ao longo dos axnios ou dentritos at o corpo dos
neurnios. O transporte dos herpesvrus por -
bras nervosas ser abordado na seo 3.2.3.
Tabela8.2. Vrus animais quepenetramnohospedeiroatravs dapeleoudesuperfcies mucosas
Papilomavrus de vrias espcies;
Herpesvrus de vrias espcies;
Poxvrus de bovinos, sunos e ovinos; vrus da
estomatite papular bovina; poxvrus avirios;
Vrus da doena vesicular de sunos;
Vrus da estomatite vesicular (VSV).
Pequenas leses (puncturas,
abrases)
Via de penetrao Vrus
Picada de insetos (transmisso
mecnica)
Vrios poxvrus (mixomavrus, poxvrus suno, poxvrus
avirios);
Alguns retrovrus (vrus da anemia infecciosa eqina [EIAV],
vrus da leucose bovina [BLV]);
VSV.
Picada de insetos (transmisso
biolgica)
Vrus da peste suna africana (ASFV);
Vrus da lngua azul (BTV);
VSV, outros rabdovrus;
Vrus da febre do vale Rift (RVFV), outros buniavrus;
Todos os alfavrus;
Vrus do gnero flavivrus.
Mordeduras de vertebrados
Vrus da imunodeficincia felina (FIV);
Vrus da raiva (RabV);
Arenavrus (entre roedores);
Herpesvrus smio B.
Transmisso iatrognica
Papilomavrus de vrias espcies animais;
Retrovrus (BLV, EIAV);
Vrus da diarria viral bovina (BVDV), vrus da peste suna
clssica (CSFV).
Contato com a conjuntiva
Herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1), herpesvrus eqino 1(EHV-1);
Adenovrus canino tipos 1 e 2 (CAdV-1, CAdV-2).
Fonte: adaptada de Murphy et al. (1999).
Patogenia das infeces vricas 199
Aparentemente, as membranas mucosas su-
perciais poderiam se constituir em uma barreira
menos eciente para impedir a penetrao viral.
Ainda assim, so recobertas por uma camada de
muco que, pela sua natureza viscosa e pela pre-
sena de IgA, pode dicultar a penetrao dos
vrus. Os herpesvrus parecem ser capazes de
penetrar em mucosas intactas para iniciar a in-
feco, embora a ocorrncia de leses certamente
favorea a instalao da infeco.
Determinados vrus so introduzidos atra-
vs da pele diretamente no tecido subcutneo
ou mesmo no tecido muscular. O vrus da raiva
inoculado profundamente pela mordedura de
animais infectados; os arenavrus tambm so
transmitidos entre os roedores silvestres atravs
de mordidas; o herpesvrus smio B e o vrus da
imunodecincia felina (FIV) tambm podem ser
transmitidos por mordeduras. Essa inoculao
profunda facilita ainda mais a replicao prim-
ria e o estabelecimento da infeco.
Alguns vrus penetram no organismo pela
mucosa conjuntival e podem estar associados
com conjuntivite ou com infeces sistmicas. Os
adenovrus caninos tipos 1 e 2 (CAdV-1; CAdV-
2) podem penetrar por essa via; o herpesvrus
bovino tipo 1 (BoHV-1) pode causar conjuntivite
pela infeco direta da conjuntiva ou por conta-
minao a partir da cavidade nasal.
Os principais vrus de animais que penetram
nos seus hospedeiros atravs da pele e mucosas
superciais esto apresentados na Tabela 8.2.
3.1.2 Trato respiratrio
A mucosa do trato respiratrio provavel-
mente se constitui na principal via de penetrao
de vrus, por causa de sua grande superfcie e
grande quantidade de patgenos potencialmente
presentes no ar inspirado. No obstante, o siste-
ma respiratrio apresenta barreiras que limitam
ou reduzem as chances dos vrus que penetram
Herpesvrus de vrias espcies. Herpesviridae
Famlia Vrus
Adenovrus de vrias espcies. Adenoviridae
Vrus da parainfluenza (PIVs) e vrus
respiratrios sinciciais (RSVs).
Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae Vrus da influenza suna e eqina.
Coronaviridae
Vrus da bronquite infecciosa das
galinhas (IBDV).
Picornaviridae
Vrus da febre aftosa (FMDV);
rinovrus de vrias espcies.
Caliciviridae Calicivrus felino (FCV).
P
r
o
d
u
z
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m
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n

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s
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s
t

m
i
c
a
Herpesviridae
Vrus da doena de Aujeszky (PRV), vrus da
doena de Marek, vrus da febre catarral
maligna (MCFV).
Paramyxoviridae
Vrus da cinomose (CDV), vrus da peste
bovina (rinderpest).
Orthomyxoviridae Vrus da influenza aviria (AIV).
Flaviviridae
Vrus da diarria viral bovina (BVDV)*; vrus
da peste suna clssica (CSFV).
* O BVDV pode tambm causar doena respiratria.
Tabela8.3. Principais vrus quepenetrampelotratorespiratriopara iniciar a infecodohospedeiro
Fonte: adaptada de Murphy et al. (1999).
200 Captulo 8
pelo ar inspirado conseguirem atingir e penetrar
nas clulas epiteliais. As vias areas superiores e
inferiores contm um epitlio ciliado recoberto
com muco, cuja funo reter e, eventualmente,
expulsar as partculas inaladas. Alm de reter as
partculas vricas, o muco pode conter IgA espec-
ca, que pode neutralizar a infectividade dos v-
rus. Os alvolos so desprovidos dessas defesas,
porm possuem macrfagos residentes encarre-
gados de fagocitar e digerir partculas exgenas.
Alm disso, a temperatura nas vias areas supe-
riores aproximadamente 3 a 5C inferior tem-
peratura corporal, o que pode restringir a replica-
o de alguns vrus. Por isso, os vrus incapazes
de replicar temperatura corporal (rinovrus),
replicam somente no trato respiratrio superior.
J os vrus capazes de replicar sob temperatura
corporal, podem causar infeco no trato respira-
trio inferior.
Os vrus geralmente penetram no trato res-
piratrio atravs de aerossis produzidos por ex-
pectoraes (tosse e espirro) ou pelo contato nasal
com fmites contaminados. O hbito investigati-
vo olfatrio de vrias espcies animais se constitui
em um fator de risco que favorece as infeces da
mucosa nasal e do focinho. A maioria dos vrus
que penetra por essa via realiza a replicao pri-
mria em clulas epiteliais das vias respiratrias;
alguns podem replicar em macrfagos livres no
lmen respiratrio ou em espaos subepiteliais.
A replicao dos vrus que penetram pelas vias
areas pode car restrita ao epitlio respiratrio
ou se disseminar para outros tecidos e rgos. Ou
seja, os vrus que penetram pelo trato respirat-
rio podem produzir infeces localizadas ou dis-
seminadas (Tabela 8.3). Os tecidos subjacentes ao
epitlio respiratrio possuem vasos linfticos e
sangneos que facilitam a disseminao dos v-
rus at os rgos linfides secundrios e da para
o sangue (Figura 8.3B).

3.1.3 Orofaringe e trato digestivo
A mucosa do trato digestivo, desde a orofa-
ringe at os segmentos nais do intestino, pode
se constituir em local de penetrao para vrios
vrus, que produzem tanto infeces localizadas
como sistmicas. Os vrus adquiridos pela inges-
to de alimentos ou gua contaminada, ou pelo
contato oral com fmites, podem ser deglutidos
e alcanar o estmago e intestinos; ou podem
infectar as clulas superciais da orofaringe. Os
vrus que replicam na orofaringe podem ser, pos-
teriormente, deglutidos ou podem se disseminar
sistemicamente pela via hematgena. Os rotav-
rus, coronavrus, calicivrus e muitos enterov-
rus produzem infeces localizadas no intestino
delgado; o parvovrus canino penetra na muco-
sa da orofaringe e, por via hematgena, atinge o
epitlio intestinal, onde replica e provoca distr-
bios celulares que resultam em doena; o vrus
da diarria viral bovina (BVDV) pode penetrar
na mucosa da orofaringe e se disseminar sistemi-
camente. Alguns vrus podem penetrar atravs
Patogenia das infeces vricas 201
da mucosa intestinal e causar doena sistmica,
como alguns adenovrus de aves e de mamferos
e alguns enterovrus.
O trato digestivo apresenta vrias barrei-
ras que restringem ou dicultam a infeco por
determinados vrus. O pH cido do estmago,
a alcalinidade do intestino delgado, as enzimas
digestivas presentes na saliva e no suco pancre-
tico, e as enzimas lipolticas presentes na bile
restringem o nmero de vrus que capaz de in-
fectar o hospedeiro por essa via.
Como regra, os vrus no-envelopados so
mais resistentes ao pH cido do estmago. Ex-
cees incluem os rinovrus e o FMDV (picorna-
vrus), que so lbeis pH cido e no resistem
ao pH do estmago. Para estabelecer a infeco,
portanto, esses vrus devem penetrar na muco-
sa orofarngea ou nasal. Embora sejam sensveis
ao pH baixo e ao da bile, os coronavrus de
vrias espcies animais resistem s condies do
estmago e intestino e podem estabelecer infec-
es intestinais. Em geral, os vrus que causam
infeces intestinais, como os rotavrus, caliciv-
rus e enterovrus, so resistentes ao pH baixo e
ao da bile e, por isso, podem penetrar a partir
do lmen intestinal.
As enzimas proteolticas presentes no l-
men intestinal podem tambm favorecer a infec-
o por alguns vrus, pela clivagem e ativao de
protenas da superfcie dos vrions que so envol-
vidas na penetrao do vrus na clula hospedei-
ra. Como exemplos, citam-se: a tripsina, pancrea-
tina e elastina que aumentam a infectividade dos
rotavrus; e outras enzimas que ativam os proces-
sos de penetrao dos reovrus e de alguns coro-
navrus. Enzimas presentes em secrees respira-
trias tambm tm sido envolvidas na ativao
de protenas de fuso dos paramixovrus.
Os vrus associados com gastrenterite po-
dem infectar uma variedade de clulas do trato
gastrintestinal. Os adenovrus, rotavrus, caliciv-
rus e coronavrus infectam predominantemente
entercitos maduros quiescentes. Outros vrus
possuem tropismo por clulas das criptas que
esto em diviso (parvovrus) ou por clulas epi-
teliais especializadas, como as clulas M (polio-
vrus e reovrus). As clulas M podem tambm
capturar vrions no lmen intestinal e transport-
los para clulas mononucleares adjacentes, onde
ocorrer a replicao primria (Figura 8.3C).
Dentre os vrus animais que penetram pelo
trato digestivo e esto associados com diarria
esto os parvovrus (canino e felino), os rotav-
rus de vrias espcies, os coronavrus entricos,
os astrovrus e calicivrus. Outros vrus penetram
pelo trato digestivo e esto associados com doen-
a disseminada, geralmente sem diarria, como
os adenovrus de vrias espcies, os enterovrus,
o vrus do exantema vesicular de sunos, entre
outros. Estes vrus utilizam o epitlio intestinal
para a replicao primria e amplicao, de
onde ganham acesso ao sistema linftico e sang-
neo (Figura 8.3C).
3.1.4 Mucosa urogenital
A mucosa do trato genital da fmea pode
servir de local de penetrao tanto para vrus
sistmicos, que so excretados no smen, como
para vrus que produzem infeces localizadas
no trato genital masculino. No primeiro caso, a
transmisso pode ser pela monta natural ou pela
inseminao articial, j que os vrus encontram
condies ideais de sobrevivncia em smen in-
dustrializado. Os herpesvrus de vrias espcies
animais podem ser transmitidos pelo smen e/ou
pela cpula; o vrus da sndrome respiratria e
reprodutiva dos sunos (PRRSV) foi amplamente
disseminado pela inseminao articial; a monta
natural uma importante forma de transmisso
do vrus da arterite viral eqina (EAV). Os pa-
pilomavrus que causam leses genitais tambm
podem ser transmitidos pela cpula, por causa
do contato entre as mucosas. Embora o BoHV-1
possa ser excretado pelo smen durante a infec-
o aguda respiratria, a transmisso venrea
desse vrus est mais freqentemente associada
com a infeco genital (balanopostite).
Os tecidos submucosos so altamente ir-
rigados e fornecem condies propcias para a
disseminao dos vrus pela linfa ou pelo sangue
para os linfonodos regionais ou para tecidos mais
distantes. As terminaes nervosas, localizadas
na submucosa, constituem-se em alvos para a pe-
202 Captulo 8
netrao pelos herpesvrus, que so, ento, trans-
portados at gnglios nervosos regionais.
Embora com menor freqncia, fmeas que
desenvolvem infeces genitais tambm podem
transmitir o vrus para o macho durante a cpu-
la, o que favorece a disseminao do agente, pois
o macho infectado pode transmitir o agente para
outras fmeas.
3.2 Infeces localizadas versus
infeces disseminadas (ou sistmicas)
Os padres de distribuio e envolvimento
de diferentes rgos e tecidos variam amplamen-
te com os vrus e esto intimamente associados
com a biologia do agente, sendo dependentes de
suas interaes com o hospedeiro. Alguns vrus
produzem infeces localizadas, geralmente li-
mitadas s proximidades dos stios de penetrao
e replicao primria. Esse padro de infeco
caracterstico dos vrus respiratrios (rinovrus,
vrus da inuenza e parainuenza), gastrintesti-
nais (coronavrus e rotavrus) e de alguns vrus
que infectam a derme e epiderme (papilomav-
rus, alguns poxvrus, vrus da mamilite herptica
[BoHV-2]). Essas infeces esto geralmente limi-
tadas ao epitlio, mas a penetrao e envolvimen-
to de tecidos subjacentes e disseminao sistmi-
ca podem ocasionalmente ocorrer. As infeces
que se restringem aos stios de replicao prim-
ria e suas proximidades so ditas localizadas.
Outros vrus so capazes de se disseminar
a longas distncias pelo sangue ou pela linfa e
produzir infeces em rgos especcos ou in-
feces generalizadas. Exemplos incluem o CDV,
os parvovrus canino (CPV) e felino (FPLV), o
BVDV, os retrovrus, entre outros. As infeces
que se estendem alm dos stios de replicao
primria so chamadas de disseminadas; e as que
atingem vrios rgos ou sistemas so denomi-
nadas sistmicas ou generalizadas.
3.2.1 Disseminao local
Aps a replicao primria, muitos vrus se
disseminam localmente pela transmisso entre
clulas vizinhas. Essa forma de transmisso, no
entanto, no permite uma disseminao a longas
distncias e essas infeces so geralmente con-
troladas pela resposta imune do hospedeiro. Os
vrus que penetram na mucosa respiratria ou di-
gestiva e que so liberados pela superfcie apical
de clulas epiteliais podem ser transportados por
uidos ou pelo muco e se disseminar rapidamen-
te pelo lmen do rgo. A replicao de muitos
desses vrus ca restrita ao epitlio, com nenhu-
ma ou pouca invaso dos tecidos subjacentes. Pa-
ralelamente, os vrions podem ser transportados
at os linfonodos regionais, livres na linfa ou no
interior de clulas fagocticas. Esta geralmente
a primeira etapa na disseminao das infeces
sistmicas. Em geral, os vrus que so liberados
apenas na superfcie apical das clulas epiteliais
tendem a car restritos localmente, enquanto
aqueles que so liberados tambm pela superf-
cie basolateral so mais provveis de produzirem
infeces sistmicas.
3.2.2 Disseminao hematgena
O transporte pelo sangue oferece aos vrus
a oportunidade de atingir virtualmente todos os
rgos e tecidos em poucos minutos a partir dos
stios de replicao primria. Os vrions podem
penetrar no sangue diretamente atravs da pare-
de capilar, aps a infeco de clulas endoteliais
ou pela inoculao direta por insetos ou por ins-
trumentos contaminados. A disseminao hema-
tgena se inicia quando os vrions produzidos
nos stios primrios de replicao so liberados
no lquido extracelular e drenados pelo sistema
linftico, cujos capilares so mais permeveis do
que os capilares sangneos. Os vrions veicula-
dos pela linfa eventualmente ganham acesso
corrente sangnea, seja como partculas livres
no plasma, seja no interior de linfcitos ou mo-
ncitos/macrfagos infectados durante a sua
passagem pelos linfonodos regionais. De fato,
a patogenia de vrias infeces vricas est inti-
mamente associada com a infeco de clulas do
sistema imunolgico, que ocorre devido ao seu
contato com os vrions nos rgos linfides pe-
rifricos. Uma vez no sangue, os vrions se dis-
seminam rapidamente pelo organismo. O trajeto
Patogenia das infeces vricas 203
utilizado pelos vrus que penetram no organismo
atravs de superfcies cutneas ou mucosas para
atingir a corrente sangnea est ilustrado na Fi-
gura 8.4.
A presena de vrus no sangue denomi-
nada viremia e, dependendo da origem do vrus,
pode ser classicada em passiva ou ativa. A vire-
mia passiva resulta da introduo do vrus dire-
tamente no sangue, sem a prvia replicao em
tecidos. Esta introduo pode resultar de inocu-
lao direta por insetos hematfagos, por trans-
fuso sangnea ou por outras formas de inocu-
lao de sangue. Essas viremias so geralmente
transitrias e no duram mais de 12-24 h, mas
podem ser de tal magnitude a ponto de provocar
a infeco macia de alguns rgos. As viremias
ativas resultam da replicao viral em tecidos e
rgos do hospedeiro e geralmente atingem uma
maior magnitude e durao. Os vrus presentes
no sangue podem ter vrias origens, tais como: a)
partculas vricas presentes nos tecidos prximos
aos locais de penetrao podem ser capturadas
pelo sistema linftico e ter acesso ao sangue; b)
vrios vrus replicam em clulas localizadas nos
linfonodos, podendo ser liberados e ter acesso ao
sangue; c) alguns vrus so capazes de replicar
em clulas endoteliais e so liberados diretamen-
te na circulao; d) vrios vrus replicam em c-
lulas mononucleares do sistema linforreticular
(moncitos/macrfagos; linfcitos) e podem ser
liberados no sangue.
Em vrias infeces vricas, duas etapas de
viremia ativa podem ser detectadas. A viremia pri-
mria resulta da replicao viral nos stios iniciais,
geralmente atinge baixa magnitude, mas permite
a disseminao do vrus aos rgos secundrios
de replicao, denominados rgos-alvo. A repli-
cao viral nesses tecidos produz uma viremia se-
cundria, caracterizada por uma presena macia
de vrus no sangue e disseminao ainda maior
da infeco. Os resultados da viremia so vari-
veis e, freqentemente, resultam em infeco de
vrios tecidos perifricos, com resultados que de-
pendem do tropismo, da patogenicidade e viru-
lncia do vrus. Uma conseqncia freqente de
viremia em animais a transmisso transplacen-
tria do vrus ao feto, podendo resultar em uma
variedade de condies que vo desde uma infec-
o transitria at a morte fetal, seguida de abor-
tamento. As etapas da patogenia das infeces v-
ricas localizadas e disseminadas esto ilustradas
na Figura 8.5.
Capilar
sangneo
Tecido
conjuntivo
Histicito
Vaso
linftico
aferente
Superfcie corporal
Capilar
linftico
Seios linfticos
revestidos por
macrfagos
Tecido
linfide
Vaso
linftico
eferente
Ducto
torcico
Veia
Linfonodo
Figura 8.4. Trajeto dos vrus que penetram pela pele ou mucosas superficiais para atingir o sangue e se distribuir
sistemicamente.
Fonte: adaptada de Mims e White (1984).
204 Captulo 8
Figura 8.5. Etapas da patogenia das infeces vricas localizadas e sistmicas: papel da viremia na disseminao das
infeces.
Pele
Mucosas
Trato respiratrio
Trato digestivo
Infeco
Excreo
Herpesvrus
Influenza
Paramixovrus
Rotavrus
Papilomavrus
Coronavrus
Linfonodos
Sangue
Sangue
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m

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Transmisso
iatrognica
ou por vetores
Viremia
primria
Viremia
secundria
Fgado
Msculo
Medula
ssea Bao
Endotlio
vascular
Epitlio
respiratrio Pele
Trato respiratrio
(pulmes)
CDV
Rinderpest
Lumpy skin
CDV,
Togavrus
Flavivrus
Encfalo
Glndula salivar
ou rins
Raiva (g.salivar)
Arenavrus
Arenavrus
hantavrus
Excreo
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Fonte: adaptada de Mims e White (1984).
Patogenia das infeces vricas 205
No sangue, os vrions podem ser transporta-
dos livres no plasma, no interior de leuccitos ou
aderidos membrana de leuccitos, eritrcitos ou
plaquetas. Os avivrus, togavrus, enterovrus e
parvovrus circulam livres no plasma e produ-
zem a chamada viremia plasmtica. A concentra-
o de partculas vricas no sangue depende de
um equilbrio entre a sua produo nos tecidos
infectados e a taxa de remoo ou inativao no
sangue. A tarefa de remover vrions circulantes
cabe s clulas fagocticas do sistema retculo-en-
dotelial, principalmente s clulas de Kpfer no
fgado e, em menor proporo, aos macrfagos
dos pulmes, bao e linfonodos.
Os vrus que circulam livres no plasma po-
dem entrar em contato e infectar uma grande
variedade de clulas, mas dois tipos celulares
desempenham um papel importante para a con-
tinuidade da infeco: as clulas endoteliais e os
macrfagos adjacentes aos vasos. As interaes
entre os vrions circulantes e as clulas de Kpfer
no fgado podem resultar em: a) internalizao e
inativao dos vrions; b) internalizao, trans-
porte transcitoplasmtico e liberao dos vrions
na bile; c) infeco dessas clulas e liberao da
prognie viral de volta ao sangue, incrementan-
do a viremia; d) infeco celular e liberao dos
vrions recm-produzidos pela superfcie basal,
resultando na infeco macia de hepatcitos. A
infeco das clulas endoteliais pode favorecer a
invaso viral nos tecidos a partir do sangue.
Em etapas mais avanadas da infeco, os
anticorpos produzidos so capazes de se ligar e
neutralizar as partculas vricas livres no plasma
sangneo. A ligao dos anticorpos aos vrions
tambm facilita a fagocitose dos complexos an-
ticorpo-vrions por macrfagos adjacentes aos
vasos sangneos teciduais. Esses macrfagos se
ligam aos complexos imunes por meio de recep-
tores para a poro Fc das imunoglobulinas. A
maioria das viremias plasmticas possui durao
limitada e o seu trmino coincide com o apareci-
mento de anticorpos neutralizantes no soro.
Vrios vrus replicam em clulas sang neas,
particularmente moncitos e linfcitos B e T, e a
sua presena no sangue est predominantemente
associada com essas clulas. As viremias associa-
das a clulas apresentam algumas caractersticas
que as distinguem das viremias plasmticas, tais
como: a) no interior das clulas os vrus esto pro-
tegidos dos anticorpos neutralizantes e podem se
propagar a grandes distncias; b) os ttulos virais
so geralmente baixos; c) o isolamento do vrus
do sangue geralmente difcil e pode requerer
o co-cultivo de leuccitos com clulas de cultivo.
Essa diculdade de isolamento pode ser devida
aos baixos nveis de replicao do vrus e/ou
presena de anticorpos neutralizantes; d) em al-
gumas infeces, a viremia persiste por toda a
vida do animal e no termina com o aparecimen-
to dos anticorpos neutralizantes. Exemplos des-
se tipo de viremia so encontrados nas infeces
por retrovrus animais, como o FIV, o vrus mae-
di-visna (MVV), o vrus da leucose bovina (BLV)
e o vrus da anemia infecciosa eqina (EIAV).
Em algumas dessas infeces, a contnua evolu-
o gentica da populao viral produz variantes
que escapam da neutralizao por anticorpos e
que podem ser isolados do plasma. Esses vrus,
no entanto, parecem representar uma pequena
parcela do total de vrus que produzido e que
neutralizado e capturado nos complexos imu-
nes. O vrus da lngua azul (BTV) produz viremia
persistente e os vrions encontram-se aderidos
membrana dos eritrcitos. Embora mais estuda-
da em infeces persistentes, a viremia associa-
da a clulas tambm observada em infeces
agudas, como a infeco de ces pelo CDV, entre
outras. O BVDV pode ser encontrado em linfci-
tos e moncitos, mas viremia plasmtica tambm
pode ser detectada em animais persistentemente
infectados. Esses animais so imunotolerantes a
antgenos virais e, por isso, no produzem an-
ticorpos contra o vrus. Com isso, o vrus infec-
cioso pode ser continuamente isolado do plasma
desses animais.
3.2.1.1 Penetrao dos vrus nos tecidos

Os vrus que se disseminam pela via hema-
tgena devem ultrapassar a parede vascular para
invadir e replicar nos tecidos e rgos-alvo. Em-
bora seja uma etapa fundamental na patogenia
das infeces por virtualmente todos os vrus pa-
tognicos que produzem viremia, poucos deta-
lhes so conhecidos sobre a penetrao dos vrus
206 Captulo 8
nos tecidos. O mecanismo de penetrao utiliza-
do pelos vrus depende da sua biologia e tambm
da estrutura e relaes do endotlio vascular, que
varia muito entre os diferentes tecidos. Os pos-
sveis mecanismos utilizados, j demonstrados
para alguns vrus, esto ilustrados na Figura 8.6 e
descritos a seguir:
1) Penetrao passiva pelo espao entre as
clulas endoteliais. Esse mecanismo possvel
em alguns endotlios que apresentam fenestras
entre as clulas endoteliais, como o plexo coride
no SNC. Aps atravessar esta barreira, os vrus
podem infectar as clulas epiteliais do plexo co-
ride e ganhar acesso ao uido crebro-espinhal
e, assim, disseminar-se pelos espaos ocupados
por esse uido. Exemplos de vrus que prova-
velmente utilizam essa via de invaso incluem
o vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV) e o
retrovrus (MVV). Os vasos dos tbulos renais,
pncreas, clon e leo tambm apresentam fenes-
tras que podem servir para a penetrao dos v-
rus nos tecidos a partir do sangue;
2) Os vrions podem ser transportados atra-
vs do endotlio vascular por endocitose, segui-
da de transporte vesicular intracitoplasmtico e
exocitose na face oposta da clula endotelial. Para
que essas duas formas de invaso possam ocor-
rer, a concentrao de vrions no sangue deve ser
alta e contnua, e o uxo sangneo no local deve
ser lento, para permitir o contato e aderncia das
partculas vricas ao endotlio e/ou penetrao
pelos espaos interendoteliais;
3) Alguns vrus podem infectar as clulas
endoteliais e/ou clulas adjacentes e completar o
seu ciclo replicativo nessas clulas. Assim, a sua
prognie pode ser liberada atravs da superfcie
basal ou basolateral dessas clulas e infectar clu-
las teciduais subjacentes. Essa forma de invaso
tecidual j foi demonstrada para os picornavrus,
retrovrus, alfavrus e parvovrus. As clulas de
Kpfer, que esto localizadas entre as clulas
endoteliais dos sinusides hepticos, servem de
porta de entrada para vrus que so veiculados
no sangue. Os vrus podem ser transportados
passivamente ou replicarem ativamente nessas
clulas;
4) Os vrus que produzem viremia associada
a clulas, em moncitos ou linfcitos, podem ser
transportados atravs da parede vascular no in-
terior das clulas infectadas. As clulas mononu-
cleares do sangue esto freqentemente atraves-
sando a parede vascular e penetrando nos tecidos
em resposta a estmulos inamatrios e podem
funcionar como verdadeiros cavalos de Tria,
transportando os vrus para os tecidos. O movi-
mento de clulas atravs do endotlio em direo
aos tecidos denominado diapedese. Essa forma
de invaso tem sido demonstrada para o CDV,
vrus da febre amarela (YFV) e tambm para ex-
plicar a penetrao do vrus da imunodecincia
humana adquirida (HIV) no encfalo.
1
2
3
4
Lmen
do vaso
Tecido
Figura 8.6. Mecanismos de penetrao de vrus nos
tecidos a partir do sangue. 1) Penetrao pelos espaos
existentes entre as clulas endoteliais; 2) Transporte
ativo atravs das clulas endoteliais; 3) Infeco das
clulas endoteliais com posterior egresso da prognie
viral na face oposta do endotlio; 4) Transporte atravs
doendotlionointerior demoncitos/linfcitos.
3.2.1.2 Infeco celular mediada por
anticorpos (antibody-dependent enhancement
of viral infection, ADE)

A ADE um mecanismo utilizado por al-
guns vrus para penetrar produtivamente e repli-
car em clulas que expressam receptores para a
Patogenia das infeces vricas 207
poro Fc das imunoglobulinas, principalmente
os moncitos e macrfagos. Nessas clulas, os
receptores de Fc so importantes para a captura
e inativao de complexos imunes formados nos
uidos e tecidos corporais. O fenmeno de ADE
ocorre quando os vrions so recobertos por an-
ticorpos sem atividade neutralizante ou quando
os nveis de anticorpos especcos so baixos.
Assim, a ligao dos anticorpos no neutraliza
a infectividade dos vrions. No entanto, as clu-
las que expressam receptores para a regio Fc se
ligam aos complexos anticorpos-vrions atravs
da regio Fc. Essa ligao seguida pela inter-
nalizao dos complexos nas clulas, aps a qual
os vrions podem ser liberados no citoplasma e
iniciar a replicao. Ou seja, alm de no neutrali-
zar a infectividade dos vrions, os anticorpos au-
xiliam a sua penetrao nas clulas que possuem
receptores de Fc. Esse mecanismo somente ocor-
re para vrus que infectam naturalmente clulas
que expressam esses receptores. Embora a ADE
j tenha sido demonstrada para vrios vrus in vi-
tro, o seu papel na patogenia das infeces vricas
in vivo ainda controverso e parece se restringir
a poucos vrus, como o vrus da dengue em hu-
manos e o vrus da peritonite infecciosa felina
(FIPV, um coronavrus). Nesses casos, a presena
de anticorpos em nveis baixos contra um deter-
minado sorotipo do vrus resulta em um aumen-
to da severidade da doena por ocasio de uma
reinfeco com um sorotipo heterlogo. De fato,
tem sido demonstrado que a peritonite infecciosa
dos gatos mais severa em animais previamente
vacinados, reforando a possibilidade de que a
ADE contribua na patogenia da doena.
3.2.3 Disseminao nervosa
Vrios vrus se disseminam a partir dos s-
tios de replicao primria no interior de bras
nervosas cujas terminaes se distribuem nesses
locais. Essa forma de transporte utilizada por
vrus essencialmente neuropatognicos (vrus da
raiva e vrios alfaherpesvrus) e tambm por v-
rus cuja invaso do sistema nervoso representa
uma circunstncia da sua replicao e dissemina-
o hematgena (reovrus e poliovrus). Alguns
vrus, como o CDV e o vrus da artrite e encefa-
lite caprina (CAEV), replicam no SNC e produ-
zem doena neurolgica, porm parecem atingir
o encfalo pela via hematgena. Dentre os vrus
animais que utilizam a via nervosa para invadir o
encfalo e causar doena neurolgica se incluem
o BoHV-5, o PRV, o EHV, o vrus da raiva, o v-
rus da encefalite eqina venezuelana (VEEV) e
o vrus da doena de Borna (BDV). Em modelos
animais, o VEEV parece tambm utilizar a via
hematgena para invadir o encfalo e produzir
encefalite. Embora os vrus que se disseminam
pela via nervosa e replicam no sistema nervoso
sejam denominados classicamente vrus neuro-
trpicos, esses agentes so capazes de infectar
uma variedade de clulas. De fato, a replicao
inicial desses vrus ocorre geralmente no epitlio
e em tecidos adjacentes aos locais de penetrao,
aps a qual os vrions penetram nas terminaes
nervosas.
O mecanismo de penetrao dos vrus em
neurnios parece ser similar ao utilizado para
iniciar a infeco de outras clulas. Aps a pe-
netrao e desnudamento, o nucleocapsdeo
transportado passivamente ao longo dos pro-
cessos neuronais (dentritos e axnios) por trans-
porte axoplsmico rpido. O vrus pode ocasio-
nalmente replicar nos axnios ou dendritos, mas
este um processo lento e no requerido para
a disseminao. Drogas que inibem o transporte
axonal (p. ex.: colchicina) tambm bloqueiam a
progresso dos vrus o longo dos axnios.
Essa forma de disseminao tem sido estu-
dada com detalhes nos alfaherpesvrus, em que o
transporte neural at os gnglios sensoriais e au-
tonmicos essencial para o estabelecimento de
infeco latente, que, por sua vez, crtica para a
manuteno desses vrus na natureza (Figura 8.7).
Aps a replicao na mucosa nasal ou genital,
os vrions penetram em terminaes dos nervos
que se distribuem nas camadas subjacentes. Os
vrions ntegros ou partculas subvirais so trans-
portados em vesculas ao longo dos microtbulos
dos axnios ou dendritos at os corpos neuronais
que se localizam nos gnglios nervosos regionais
(gnglio trigmeo, no caso de infeco oronasal;
gnglios sacrais, no caso de infeco genital). O
transporte axonal de substncias das terminaes
nervosas em direo ao corpo neuronal deno-
208 Captulo 8
minado retrgrado. Ao alcanar os corpos neuro-
nais, os alfaherpesvrus replicam ativamente de
forma ltica ou estabelecem infeco latente. A
infeco latente caracterizada pela presena do
genoma viral inativo no ncleo dos neurnios,
sem expresso gnica ou produo de prognie
viral. Em determinadas circunstncias, geralmen-
te associadas com estresse, ocorre a reativao
da infeco, a retomada da expresso gnica e a
produo de partculas vricas infecciosas. Essas
partculas so transportadas de volta aos locais
de replicao primria pelas mesmas vias nervo-
sas que haviam servido de acesso para os vrons
aos corpos neuronais. O transporte de vesculas
e substncias do corpo neuronal em direo s
terminaes nervosas denomina-se antergrado e
permite a prognie viral alcanar os tecidos peri-
fricos, replicar e ser excretada.
Em alguns vrus (BoHV-5 e PRV), a repli-
cao nos corpos neuronais durante a infeco
aguda (e provavelmente tambm durante a re-
ativao da infeco latente) tambm pode ser
seguida pelo transporte antergrado da prognie
viral ao longo das bras nervosas em direo ao
encfalo. Esses vrus so capazes de se transmi-
tir atravs de sinapses nervosas e se disseminar
ao longo de circuitos neuronais sinapticamente
ligados, resultando em invaso e replicao no
encfalo. As infeces neurolgicas acompanha-
das de meningoencefalite severa so freqentes
em bovinos infectados pelo BoHV-5 e em sunos
jovens infectados pelo PRV. Alguns alfaherpesv-
rus que causam meningoencencefalite (BoHV-5,
por exemplo), parecem invadir o encfalo princi-
palmente pela via olfatria que, provavelmente,
se constitui em uma via mais eciente e rpida de
transporte do que a via trigeminal. Outros (PRV
e BoHV-1) parecem atingir o sistema nervoso,
principalmente pelos ramos sensoriais do nervo
trigmeo. O transporte neural permite a propa-
gao do vrus aos rgos-alvo sem exposio ao
sistema imunolgico.
Embora as vias hematgena e neural sejam
freqentemente consideradas como vias exclu-
dentes (alternativas) de disseminao viral, a
patogenia de alguns vrus parece envolver a par-
ticipao de ambas. A invaso dos vrus das en-
cefalites eqinas do leste (EEEV), oeste (WEEV) e
venezuelana (VEEV) no encfalo de animais in-
fectados experimentalmente, por exemplo, j foi
demonstrado que pode ocorrer por ambas as vias,
embora uma delas provavelmente desempenhe
um papel preponderante em infeces naturais.
Figura 8.7. Disseminao neural dos alfaherpesvrus animais do epitlio respiratrio para os gnglios sensoriais
durante a infeco aguda (transporte retrgrado) e do corpo dos neurnios para o epitlio nasal durante a reativao
da infeco latente (transporte antergrado). Durante a infeco aguda (e menos freqentemente durante a
reativao), podeocorrer transporte antergradoemdireoaoSNC, cominvasoe replicaoviral noencfalo.
Transporte retrgrado
Transporte antergrado
Latncia
Reativao
Mucosa nasal
Gnglio trigmeo
Crebro
Patogenia das infeces vricas 209
3.3 Localizao das infeces
3.3.1 Infeces em rgos e sistemas
especcos
O padro de doena sistmica produzida
durante uma infeco depende dos rgos e teci-
dos-alvo do vrus, das populaes de clulas des-
ses rgos que so infectadas e tambm do tipo
de alteraes produzidas pela replicao viral
nessas clulas. Felizmente, nenhum vrus capaz
de infectar todos os tecidos e clulas do hospe-
deiro. Na verdade, devido a sua dependncia de
processos bioqumicos e moleculares especcos,
a maioria dos vrus infecta um nmero limitado
de tipos celulares no hospedeiro. As Figuras 8.8
a 8.12 apresentam alguns padres peculiares de
disseminao, distribuio e localizao de in-
feces vricas em ces.
O termo tropismo utilizado para designar
a predileo dos vrus por determinadas clu-
las, tecidos ou rgos. Assim, o tropismo um
dos principais determinantes da patogenia das
infeces vricas. O tropismo celular ou tecidual
de um vrus determinado pela interao entre
mltiplos fatores virais e celulares, e pode ser in-
uenciado em diferentes nveis. A constituio e
siologia da membrana plasmtica (presena de
receptores, co-receptores, atividade endoctica,
espessura do citoesqueleto cortical etc.) podem
afetar as etapas iniciais da infeco (adsoro,
penetrao, desnudamento e transporte intra-
celular dos vrions). A presena de fatores de
transcrio, de transativadores ou inibidores e
de enzimas polimerases pode afetar a expresso
dos genes virais. Proteases e nucleases celulares
podem ativar ou inativar fatores virais. Os meca-
nismos celulares de transporte e distribuio de
macromolculas podem afetar a replicao, dis-
tribuio, morfognese e liberao da prognie
viral, ou seja, o tropismo de um vrus pode ser
determinado por fatores que atuam em qualquer
etapa do ciclo replicativo, desde o seu incio at a
etapa de egresso das partculas vricas.
A presena de receptores especcos na
membrana da clula hospedeira o principal fa-
tor determinante do tropismo para a maioria dos
vrus. Em geral, os receptores virais so restritos
a determinados tipos celulares ou tecidos, e ape-
nas estes podem ser infectados naturalmente. Por
isso, a distribuio de receptores nos tecidos e r-
gos um determinante importante da patogenia
dos vrus. Existem vrios exemplos de mutaes
naturais ou induzidas nas protenas virais de li-
gao nos receptores que resultam em alterao
no tropismo e/ou na virulncia do vrus mutan-
te. Esses exemplos ilustram a importncia das
interaes vrion-receptores como determinantes
do tropismo e da patogenia das infeces vricas.
Embora aparentemente seja o principal de-
terminante do tropismo, a presena dos recepto-
res no o nico fator que determina a capacida-
de do vrus infectar um determinado tipo celular.
Para alguns vrus DNA e retrovrus, a transcri-
o dos genes virais pode ser inuenciada pela
presena de fatores de transcrio e/ou inibido-
res celulares. A penetrao em clulas que no
Figura 8.8. Patogenia da parvovirose canina. O CPV
penetra pela via oronasal e replica inicialmente na
orofaringe e nas tonsilas. Aps a replicao primria, o
vrus atinge a corrente sangnea e transportado
sistemicamente pelosangue. Os stios de predileopara
a replicao secundria so as clulas das criptas do
intestino delgado, que expressamo receptor para o vrus
e esto em multiplicao ativa. A replicao viral
acompanhada de destruio dessas clulas e reposio
deficiente das clulas absortivas das vilosidades
intestinais. Os ces com gastrenterite pelo CPV
apresentam dificuldade de absoro de nutrientes,
diarria hemorrgica e desidratao. A infeco pelo
CPV em filhotes caninos com menos de seis semanas de
idade pode ser caracterizada por miocardite, pois nessa
fase as clulas domiocrdioestoemconstantemitose.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
210 Captulo 8
apresentem tais fatores pode resultar em infeco
abortiva, pois os genes virais no so expressos
ou so expressos em quantidades insucientes
vrions, que ocorre com ecincia diferente con-
forme o tipo celular. Assim, o tropismo desses v-
rus parcialmente determinado pela capacidade
de determinadas clulas de clivar a protena viral
de fuso. Esses exemplos ilustram a variedade de
fatores celulares que podem ser determinantes
do tropismo dos vrus por determinados tipos
celulares.
A distribuio dos vrus nos tecidos e rgos
do organismo depende de um balano entre o pa-
dro de disseminao e o seu tropismo celular e
tecidual. Os vrus que se disseminam pela via he-
matgena podem ter acesso a virtualmente todos
os tecidos do organismo. No entanto, a maioria
desses vrus infecta apenas alguns tecidos ou r-
gos ou podem ainda infectar apenas algumas
clulas especcas nesses rgos. Em resumo, a
disseminao hematgena permite ao vrus atin-
gir virtualmente todos os tecidos, mas no asse-
gura que a replicao ir ocorrer em todos os te-
cidos potencialmente atingidos. Por outro lado, a
disseminao neural predominantemente dire-
Os parvovrus dependem da atividade da
DNA polimerase celular e fatores associados
para a replicao do seu genoma; por isso esses
vrus apresentam tropismo marcante por clu-
las em diviso. Os papilomavrus dependem de
clulas cuja sntese e transporte de nucleotdeos
para o ncleo estejam ativos, alm da ativida-
de da DNA polimerase celular. O transporte de
nucleocapsdeos at as proximidades dos poros
nucleares uma atividade requerida para a repli-
cao dos adenovrus. A integrao do provrus
DNA de alguns retrovrus somente ocorre em
clulas em atividade mittica. A replicao dos
papilomavrus est estritamente associada com o
estgio de diferenciao dos queratincitos e dos
fatores celulares expressos por essas clulas. A
capacidade infectiva dos coronavrus e parami-
xovrus inuenciada pela clivagem e maturao
da protena envolvida na fuso e penetrao dos
Figura 8.9. Patogenia da coronavirose canina. O
coronavrus canino (CCoV) penetra pela via oral pela
ingesto de gua ou alimentos contaminados. O vrus
atinge o intestino pela passagem direta pelo trato
digestivo, pois resiste ao pH cido do estmago. No
intestino, o vrus infecta inicialmente as clulas das
vilosidades do duodeno e posteriormente se dissemina
at o leo. A replicao nas clulas absortivas das
vilosidades provoca uma enterite, que resulta em
reduo da absoro de nutrientes, diarria e
desidratao. O vrus excretado nas fezes um a dois
dias aps a infeco. OCCoVpode, ainda, disseminar-se
aos linfonodos mesentricos e, ocasionalmente, replicar
nobaoe fgado.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
Figura 8.10. Patogenia da hepatite infecciosa canina. A
infeco pelo adenovrus canino tipo 1 (CAdV-1) pode
ocorrer pela via oral, nasofaringeal e/ou conjuntival,
seguida de replicao primria nas tonsilas e placas de
Peyer. Durante a viremia primria, o vrus se dissemina
no organismo e infecta as clulas endoteliais dos vasos e
as clulas parenquimais de vrios tecidos. A replicao
no parnquima heptico resulta em hepatite, com a
ocorrncia de hemorragia e necrose no rgo. Tambm
so encontradas leses na crnea e glomerulonefrite,
resultantes da deposio de imunocomplexos. Oepitlio
tubular renal um stio de acesso limitado do sistema
imune, permitindo a persistncia do CAdV-1 nesse local
por vrios meses.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
Patogenia das infeces vricas 211
ciam a sua disseminao e localizao no orga-
nismo. Cada vrus, em particular, produz um ou
mais padres caractersticos de disseminao e
localizao de suas infeces. importante res-
saltar que cepas ou isolados de um mesmo vrus
podem apresentar padres diferentes de dissemi-
nao e distribuio, podendo resultar em mani-
festaes clnico-patolgicas distintas. A seguir
sero abordadas sucintamente as caractersticas
das infeces nos principais rgos ou sistemas
do organismo. Detalhes da patogenia de cada in-
feco vrica sero abordados nos captulos espe-
ccos.
cional, pois o vrus se dissemina ao longo de cir-
cuitos neuronais sinapticamente ligados e infecta
as populaes de neurnios que recebem bras
dos neurnios previamente infectados. Durante
a transmisso transinptica, alguns vrions po-
dem se disseminar localmente e infectar clulas
vizinhas, mas esta infeco ca geralmente limi-
tada. O egresso de vrions dos corpos neuronais
no SNC, por outro lado, pode resultar em disse-
minao local e infeco de outros neurnios e
tambm de clulas da glia.
3.3.2 Infeces da pele e tegumento
As clulas da epiderme e derme se consti-
tuem em alvos de replicao de vrios vrus. Es-
ses tecidos podem se constituir nos stios de re-
plicao primria aps transmisso por contato,
A localizao especca das infeces, isto ,
a distribuio do vrus em rgos, tecidos e em
grupos de clulas especcas determinada por
vrios fatores, que incluem a via de penetrao e
replicao primria, a via de disseminao, o tro-
pismo tecidual e celular do vrus. Alm desses fa-
tores, as interaes do vrus com os mecanismos
imunolgicos do hospedeiro tambm inuen-
Figura 8.11. Patogenia da traqueobronquite infecciosa
canina. Essa enfermidade pode ser causada por vrios
agentes virais e bacterianos, incluindo o vrus da
parainfluenza canina (CPIV-2) e o adenovrus canino
tipo 2 (CAdV-2). Os agentes penetram pela via
respiratria e replicam inicialmente no epitlio da
nasofaringe. Posteriormente a infeco se dissemina
para o epitlio pseudo-estratificado ciliado da traquia.
A injria epitelial pela replicao viral e o processo
inflamatrio resultam em perda da funo ciliar,
aumentoda produode muco, coma ocorrncia de tosse
seca, engasgos e aumento da secreo nasal. A
progresso da infeco para o trato respiratrio inferior
depende da infeco concomitante com bactrias e o
quadro clnico-patolgico pode evoluir para
pneumonia, com tosse produtiva e febre. As infeces
pelo CPIV-2 e pelo CAdV-2 so geralmente restritas ao
sistema respiratrio, no causando viremia ou
disseminaosistmica.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
Figura 8.12. Patogenia da cinomose canina. O CDV
penetra geralmente pela via oronasal e replica
inicialmente nos epitlios e em macrfagos das vias
areas superiores, faringe e tonsilas. A replicao
primria seguida de viremia que permite a
disseminao sistmica do vrus e infeco de uma
variedade de linfonodos e acmulos linfides, levando a
um quadro de imunossupresso. Em ces que no
conseguem montar uma resposta imune eficiente, o
vrus produz uma viremia secundria, dissemina-se e
replica em uma variedade de tecidos, incluindo clulas
epiteliais da pele, dos tratos digestivo, respiratrio e
urinrio, no sistema nervoso central e no sistema
retculo-endotelial. Esses animais podem apresentar
uma variedade de manifestaes clnicas, que possuem
correlao com os rgos/ tecidos afetados. A
incapacidade de erradicar o vrus pode resultar em
persistnciaviral noSNC.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
212 Captulo 8
abrases, vetores mecnicos (alguns poxvrus e
herpesvrus, papilomavrus) ou se constituir em
stios de replicao secundria aps uma disse-
minao hematgena (alguns poxvrus, CDV).
Por outro lado, os vrus que replicam na pele
ou na transio muco-cutnea oronasal e genital
podem produzir infeces localizadas (papilo-
mavrus) ou se disseminar para outros rgos a
distncia pela via sangnea (vrios poxvrus e
alguns herpesvrus) ou neural (vrios herpesv-
rus). O tecido drmico e subdrmico so ricos em
clulas e capilares sangneos e linfticos, a partir
dos quais os vrus podem se disseminar pelo or-
ganismo (ver Figuras 8.3A e 8.4).
Os efeitos da replicao viral nesses locais
so mais pronunciados e visveis em reas des-
providas de plos, como as extremidades das
orelhas, a transio muco-cutnea do focinho, da
vulva, bere e tetas, prepcio e escroto. As in-
feces por contato freqentemente resultam em
leses delimitadas, com o desenvolvimento de
eritema e edema localizados, mculas, ppulas,
formao e ruptura de vesculas, pstulas e ero-
ses. As eroses e a contnua exsudao podem
levar ao acmulo de brina, formando membra-
nas nas que recobrem as leses e, posteriormen-
te, dessecam e formam crostas. A contaminao
bacteriana das vesculas pode levar formao
de pstulas. Na infeco por alguns vrus (p. ex.:
vrus do ectima contagioso dos ovinos), as cros-
tas que se desprendem das leses contm o vrus
e podem mant-lo vivel durante meses no meio
ambiente, servindo de fonte de infeco para ou-
tros animais.
Algumas infeces sistmicas podem resul-
tar na formao de eritema, petquias e sufuses
na pele e/ou mucosas, sem estarem necessaria-
mente associadas com a replicao viral nesses
locais. Nesses casos, essas patologias esto asso-
ciadas com alteraes/leses no endotlio vascu-
lares e/ou com decincias sistmicas na coagu-
lao sangnea (p. ex.: trombocitopenia).
Embora vrios vrus produzam infeces
cutneas e, assim, esto presentes nas leses,
nem todos utilizam esta via de excreo para se-
rem transmitidos. Excees so os herpesvrus,
alguns poxvrus e os papilomavrus, que podem
ser transmitidos de forma mecnica por vetores
ou por contato a partir das leses superciais (ver
Figura 8.5).
3.3.3 Infeces do trato respiratrio
Estima-se que aproximadamente 90%
das infeces respiratrias de animais possuam
etiologia viral, isoladamente ou em infeces
mistas. A anatomia e siologia do trato respira-
trio favorecem o estabelecimento de infeces
veiculadas por aerossis, poeiras ou transmitidas
por contato direto ou indireto. Dentre os fatores
que favorecem as infeces respiratrias pode-
se mencionar: a) a inalao contnua de grande
quantidade de ar potencialmente contaminado;
b) o hbito investigativo olfatrio de vrias esp-
cies animais; c) a grande superfcie das vias respi-
ratrias, que se estendem desde as fossas nasais
at os alvolos pulmonares; d) a diversidade do
epitlio que reveste os diferentes segmentos do
trato respiratrio; e) o gradiente de temperatura
entre as fossas nasais (33C) e os alvolos (tem-
peratura corporal), que favorece a replicao de
alguns vrus; f) alm dos aspectos que favorecem
a replicao viral no epitlio respiratrio ou em
tecidos anexos, a abundncia e acessibilidade do
tecido linfide e a irrigao presente nos tecidos
subjacentes facilita a disseminao sistmica des-
ses vrus (ver Figura 8.3B). Da mesma forma, a
anatomia especca do epitlio olfatrio fornece
uma conexo direta com o SNC, o que favorece a
invaso do encfalo por vrios vrus (ex. BoHV-
5). Por isso, apesar dos mecanismos naturais de
defesa (muco e epitlio ciliar), o epitlio do trato
respiratrio um importante local de replicao
para vrios vrus.
Os vrus que replicam no trato respiratrio
podem produzir infeces localizadas (p. ex.:
vrus da inuenza, vrus da parainuenza, v-
rus sinciciais respiratrios) ou se disseminar a
partir desse local e infectar outros rgos e sis-
temas (CDV, BoHV-1 e 5 e BVDV) (ver Tabela
8.3). Alguns vrus tendem a replicar nas vias a-
reas superiores, causando rinite ou rinotraquete
(rinovrus e BoHV-1), outros replicam em seg-
mentos intermedirios, provocando traquete ou
bronquite (vrus da inuenza), enquanto outros
atingem regies mais internas e podem estar as-
Patogenia das infeces vricas 213
sociados com bronquiolite e pneumonia (vrus
sincicial respiratrio bovino, BRSV).
A replicao viral no epitlio respiratrio
acompanhada de edema e inamao, resultando
em interrupo da atividade ciliar, perda da in-
tegridade da camada de muco e destruio focal
ou multifocal de clulas epiteliais. A destruio
do epitlio e a perda da atividade ciliar contri-
buem para a colonizao bacteriana secundria.
O auxo de clulas inamatrias e acmulo de
transudato resultam no aumento da rea despro-
vida de muco e na exposio da superfcie celu-
lar. A infeco pode induzir a produo local de
citocinas, que exacerbam o processo inamatrio
e contribuem para a manifestao de sinais clni-
cos. Em estgios avanados, o edema da mucosa
associado com o acmulo de transudato, inl-
trado inamatrio e restos celulares necrticos
podem levar reduo importante do lmen e
conseqente diculdade respiratria. Contami-
naes bacterianas secundrias so freqentes
em vrias infeces vricas e, muitas vezes, so as
responsveis pela severidade do quadro clnico.
Alm dos vrus que produzem infeces lo-
calizadas pela sua replicao no epitlio respirat-
rio, outros vrus utilizam esse epitlio como porta
de entrada para a replicao primria e infeco
de outros rgos (ver Tabela 8.3). O BoHV-1 re-
plica no trato respiratrio e produz rinotraquete,
mas tambm pode se disseminar sistemicamente
e infectar o feto. O BoHV-5 e o PRV replicam no
epitlio nasal e invadem o SNC, onde replicam
maciamente e provocam meningoencefalite. O
BVDV pode penetrar e replicar na mucosa naso-
farngea, a partir da qual se dissemina sistemi-
camente e pode infectar o feto, podendo causar
aborto ou malformaes. O CDV tambm pode
utilizar a replicao respiratria como etapa ini-
cial de uma disseminao sistmica. Os parvov-
rus podem atingir o epitlio intestinal ou o feto
aps replicao primria e disseminao a partir
da mucosa orofarngea. Nos vrus que atingem os
rgos-alvo por viremia, a replicao secundria
ocorre no tecido linfide adjacente mucosa res-
piratria e tambm nos linfonodos regionais.
Os vrus que replicam no trato respiratrio,
produzindo infeces respiratrias ou sistmicas,
so excretados no muco nasal e/ou na saliva e
podem ser expelidos pela tosse, espirro, expecto-
raes ou durante a ingesto de gua e alimentos.
Esses agentes so transmitidos por contato direto
ou indireto e alguns podem ser veiculados por
aerossis a distncias relativamente grandes.
3.3.4 Infeces do trato digestivo
As infeces vricas do trato gastrintestinal
(TGI) so muito comuns, sendo superadas em
freqncia somente pelas infeces respiratrias.
A anatomia e siologia dos rgos que compem
o TGI tambm oferecem condies favorveis
para a instalao de infeces virais. Dentre estas
se destacam a exposio a uma grande quantida-
de de agentes ingeridos com a gua e alimentos,
a grande rea de superfcie e a existncia de dife-
rentes tipos de epitlio nos vrios segmentos do
TGI.
As infeces intestinais ocorrem de forma
direta, pela ingesto de partculas vricas (coro-
navrus, rotavrus e calicivrus), ou de forma in-
direta, por via hematgena aps a replicao viral
na orofaringe (parvovrus). Os vrus que atingem
o intestino aps a ingesto devem ser capazes de
resistir ao pH cido do estmago e aos sais bilia-
res do intestino delgado para estabelecer a infec-
o. Aps resistir a essas adversidades, o vrus
deve ultrapassar a camada de muco e penetrar
nas clulas epiteliais para iniciar a infeco.
De acordo com a sua biologia, os vrus asso-
ciados com infeco do TGI podem ser divididos
em trs grupos principais: a) os vrus associa-
dos primariamente com replicao no TGI e que
causam gastrenterite (parvovrus, calicivrus,
astrovrus, coronavrus e rotavrus); b) os vrus
excretados nas fezes, mas que no so enteropato-
gnicos (vrios enterovrus, picornavrus, alguns
adenovrus; vrus que causam hepatites); e c) v-
rus sistmicos que replicam no TGI e em outros
rgos, podendo estar associados com gastrente-
rite (exemplo: BVDV). Infelizmente, a biologia de
muitos vrus associados primariamente com gas-
trenterite muito pouco conhecida, pois muitos
deles no replicam bem em cultivo celular, o que
diculta o seu estudo e a produo de reagentes
para o diagnstico.
214 Captulo 8
Vrus de vrias famlias replicam no TGI e
esto primariamente associados com doena en-
trica e diarria. Embora esses agentes estejam
freqentemente associados com enterite com ca-
ractersticas clnicas semelhantes, a sua patoge-
nia apresenta algumas diferenas importantes. A
maioria desses vrus atinge o intestino pela via
oral e replica nos entercitos maduros das regi-
es mais altas das vilosidades do intestino del-
gado (ID) (Figura 8.13). Os vrus que replicam e
destroem essas clulas provocam a reduo da
capacidade digestiva e absortiva do rgo, re-
sultando em reteno de material parcialmente
ou no-digerido no lmen intestinal. Isso leva
reteno de gua, aumento de volume e fermen-
tao excessiva nos segmentos terminais do ID e
no intestino grosso, exacerbando o efeito osm-
tico que atrai gua para o lmen intestinal. Essa
condio conhecida como sndrome da m-ab-
soro primria.
Os parvovrus atingem o intestino delgado
pela via sangnea, aps a replicao na orofa-
ringe. Esses vrus infectam as clulas das criptas
intestinais, que so imaturas e se constituem nas
clulas progenitoras dos entercitos das vilosi-
dades (Figura 8.13). As clulas das criptas so os
alvos principais de replicao do CPV e FPLV,
pelo fato de apresentarem uma taxa acelerada de
diviso, o que favorece a replicao viral. Essas
clulas esto em diviso ativa, pois so encarre-
gadas de substituir gradativamente as clulas
das vilosidades que vo sendo esfoliadas. Com a
destruio das clulas das criptas pela replicao
viral, a substituio das clulas das vilosidades
se torna deciente. Isso leva tambm decin-
cia dos processos absortivos do ID, o que carac-
teriza a sndrome de m-absoro secundria. A
destruio das clulas das criptas pela replicao
viral resulta em achatamento das vilosidades e
reao inamatria severa. A destruio de en-
tercitos maduros leva exposio das camadas
adjacentes, hemorragia e desidratao. A presen-
a de sangue nas fezes se constitui em um achado
freqente em vrias infeces vricas intestinais,
podendo estar associada com nveis importantes
de mortalidade. Em ambos os casos, as vilosida-
des se tornam atroadas e achatadas, podendo
ocorrer necrose progressiva e descamao.
Embora a maioria desses vrus replique pre-
ferencialmente no epitlio do ID, alguns deles po-
dem infectar as clulas epiteliais das vilosidades
do intestino grosso. Em geral, a replicao desses
vrus ca restrita ao epitlio do intestino, com
pouca ou nenhuma replicao em clulas da l-
mina prpria e tecidos subjacentes. Outros vrus
infectam populaes especcas de clulas, alm
das clulas epiteliais, como os astrovrus (clulas
M e das placas de Peyer do ID).
Vilosidade
Clulas
das criptas
(mitticas,
secretrias)
m
o
v
i
m
e
n
t
o
d
o
s
e
n
t
e
r

c
i
t
o
s
e
m
m
a
t
u
r
a

o
Placas de Peyer
Linfonodo
Entercitos maduros
(no-mitticos,
absortivos)
A
Rotavrus
Astrovrus
Calicivrus
Coronavrus
Adenovrus
Torovrus
Torovrus
Astrovrus
Epitlio do Dome
(clulas M)
B
Parvovrus
Torovrus
Figura 8.13. Ilustrao simplificada da estrutura do epitlio do intestino delgado (A) e local de replicao de alguns
vrus entricos (B).
Fonte: adaptada de Conner e Ramig (1997).
Patogenia das infeces vricas 215
O BVDV est freqentemente associado com
quadros de enterite, nos quais a replicao viral
nos epitlios e/ou no tecido linfide adjacente
resulta em leses erosivas e ulcerativas dissemi-
nadas pelo trato GI. Com certa freqncia, essas
leses podem ser observadas ao longo do TGI,
incluindo a lngua, mucosa oral, esfago, rmen,
abomaso e intestino delgado. Alm da replica-
o nas clulas epiteliais, o carter sistmico do
agente e a sua capacidade de replicar em clulas
do sistema linforreticular provavelmente contri-
buem para a patogenia dessas leses.
Os vrus que replicam no epitlio intesti-
nal ou em rgos anexos (fgado) geralmente so
excretados em altos ttulos nas fezes e so trans-
mitidos principalmente pela via fecal-oral. Esses
vrus so geralmente resistentes s condies
ambientais, o que favorece a sua sobrevivncia
no ambiente e transmisso. Os vrus hepatotr-
picos (p. ex.: CAdV-1 e hepadnavrus) tambm
so excretados nas fezes. Alguns vrus replicam
em rgos anexos ao trato digestivo e so excre-
tados pela saliva, podendo ser transmitidos por
mordeduras (vrus da raiva em ces, gatos e mor-
cegos; arenavrus entre roedores; herpesvrus B
em macacos) ou pelo contato direto ou indireto
com as secrees contaminadas (CDV, CAdV-1 e
FMDV).
3.3.5 Infeces do sistema nervoso
central
O SNC se constitui em rgo-alvo para a re-
plicao de diversos vrus, cuja infeco geral-
mente revestida de signicado especial pela sua
importncia. Os vrus que produzem infeces
neurolgicas e encefalite geralmente invadem o
encfalo atravs dos nervos, mas vrios deles po-
dem atingir esse rgo pela via hematgena. Os
vrus que replicam em clulas do sistema nervoso
so ditos neurotrpicos, mas a maioria deles tam-
bm capaz de replicar em outras clulas. Duas
propriedades devem ser denidas com relao a
infeco neurolgica por vrus. O termo neuroin-
vasividade se refere capacidade dos vrus atingir
o SNC aps a replicao em stios perifricos. Os
vrus que produzem infeces neurolgicas sob
condies naturais so neuroinvasivos, pois do
contrrio no seriam capazes de alcanar o en-
cfalo aps a sua penetrao no hospedeiro. O
termo neurovirulncia se refere capacidade dos
vrus de replicar, disseminar-se no SNC e produ-
zir doena neurolgica. Para a maioria dos vrus
que produzem infeces neurolgicas, estas duas
propriedades esto presentes simultaneamente.
No entanto, tem sido demonstrado que alguns
vrus podem ser neurovirulentos se inoculados
diretamente no SNC, mas no so capazes de
atingir o encfalo aps replicao em stios peri-
fricos. Ou seja, so potencialmente neuroviru-
lentos, mas no neuroinvasivos. Alguns isolados
do BoHV-1, por exemplo, s produzem infeces
neurolgicas em coelhos aps a inoculao intra-
tecal ou intracerebral, no sendo capazes de in-
vadir o encfalo aps a inoculao intranasal ou
intraconjuntival.
A via nervosa fornece um acesso direto ao
encfalo, pois os vrus so transportados ao lon-
go de bras conectadas sinapticamente. O trans-
porte ao longo de axnios e dentritos e a trans-
misso atravs das sinapses permite aos vrions
percorrer longas distncias e atingir o encfalo a
partir dos stios perifricos de replicao.
A penetrao de vrus no SNC a partir do
sangue oferece obstculos adicionais, representa-
dos pela barreira hematoenceflica. Essa barreira
formada pela estrutura especializada da parede
de certos capilares, que apresentam clulas en-
doteliais justapostas; pela lmina basal espessa;
pelo plexo coride; e pelo epitlio ependimal,
que no apresenta espao entre as clulas. Em-
bora estas barreiras sejam ecientes para evitar
a penetrao de alguns vrus no SNC, parecem
no serem capazes de impedir a penetrao de
outros. provvel que alguns vrus consigam ul-
trapassar essas barreiras; outros podem infectar
as clulas endoteliais e serem liberados na face
oposta; uma minoria parece ser transportada do
sangue para o tecido nervoso no interior de clu-
las sangneas.
Aps a penetrao no tecido nervoso, o v-
rus pode se disseminar localmente pela infec-
o de neurnios e clulas da glia localizadas
nas proximidades; pode se disseminar pelos
espaos intercelulares; e pode tambm atingir
regies mais profundas dos SNC por transpor-
216 Captulo 8
te tran sinptico. Embora as manifestaes clni-
co-patolgicas mais importantes das infeces
neurolgicas devam-se a distrbios funcionais e
morte dos neurnios, uma variedade de clulas
pode ser infectada e contribuir para as patologias
observadas. Ou seja, as patologias neurolgicas
nem sempre so derivadas exclusivamente da in-
feco viral dos neurnios. Para vrios vrus que
produzem infeces neurolgicas, as clulas-alvo
da replicao no SNC ainda no so perfeitamen-
te denidas. A identicao das clulas-alvo da
replicao se constitui em um ponto-chave para
o entendimento da patogenia de muitas infeces
vricas neurolgicas.
Os efeitos mais deletrios e mais estudados
das infeces neurolgicas por vrus se devem
destruio dos neurnios infectados. Dependen-
do do nmero de neurnios infectados e destru-
dos, esses eventos podem resultar em doena
severa e na morte do hospedeiro, como ocorre
em animais de laboratrio infectados experimen-
talmente com alguns buniavrus, vrus da raiva,
herpesvrus e alfavrus. A morte celular pode
dever-se a uma variedade de mecanismos, mui-
tos j descritos na seco referente s interaes
do vrus com as clulas hospedeiras (seo 2.1).
A induo de apoptose em neurnios tambm
tem sido implicada na patogenia de alguns vrus
neurovirulentos. O tropismo especco do vrus
por determinadas subpopulaes de neurnios
pode inuenciar o padro de neurovirulncia e
as conseqncias clnico-patolgicas da infeco.
O poliovrus, por exemplo, infecta preferencial-
mente neurnios do corno anterior da medula
espinhal, resultando em sintomatologia caracte-
rstica. O buniavrus La Crosse infecta as clulas
de Purkinge do cerebelo de camundongos infec-
tados experimentalmente. A via de inoculao
e penetrao no SNC tambm pode determinar
as caractersticas clnico-patolgicas da infeco.
O curso clnico e os sinais clnicos apresentados
por coelhos inoculados com o BoHV-5 variam
de acordo com a via de inoculao (intranasal e
conjuntival), provavelmente reetindo diferentes
padres temporais e espaciais de replicao viral
no encfalo.
Embora a infeco e destruio de neur-
nios seja o mecanismo mais atraente e talvez
aquele de ocorrncia mais freqente para expli-
car os distrbios neurolgicos associados com as
infeces vricas do SNC, a ocorrncia de doena
neurolgica grave sem infeco neuronal macia
tambm tem sido descrita em infeces vricas.
Isso demonstra que alguns vrus podem causar
disfuno neuronal grave sem infeco ou morte
de um nmero signicativo dessas clulas, o que
poderia explicar, em parte, os casos de recupe-
rao clnica que eventualmente ocorram aps
infeces neurolgicas. Em muitos casos, ocorre
a infeco de um nmero varivel de clulas da
micrglia, de astrcitos e de oligodendrcitos,
com um envolvimento pouco signicativo de
neurnios. possvel que produtos virais txicos
para os neurnios sejam liberados por essas clu-
las no meio extracelular. A liberao de citocinas
e outros mediadores qumicos inamatrios tam-
bm tm sido implicados na disfuno neuronal
observada nessas infeces. Em particular, o xi-
do ntrico que produzido por clulas da glia em
resposta infeco vrica pode ser deletrio para
os neurnios. De fato, tem sido demonstrado que
as interaes entre clulas inamatrias e neur-
nios podem resultar em toxicidade e disfuno
neuronal, sem necessariamente induzir a morte
de neurnios. Os mecanismos efetores celulares
e humorais da resposta inamatria tambm
podem potencialmente contribuir para a injria
e disfuno neuronal. Esses mecanismos podem
explicar, em parte, a ocorrncia de doena neuro-
lgica severa e at mesmo fatal, desacompanha-
da de infeco neuronal signicativa, como ocor-
re em algumas situaes.
Alm das infeces neurolgicas agudas
com conseqncias clnico-patolgicas variveis
e freqentemente fatais alguns vrus estabe-
lecem infeces persistentes no sistema nervoso.
Uma parte das infeces agudas resulta em mor-
te do hospedeiro dentro de poucos dias, tendo,
assim, importncia epidemiolgica limitada (p.
ex.: encefalites eqinas por alfavrus e avivrus,
raiva e cinomose). Por outro lado, as infeces
persistentes podem ter conseqncias epidemio-
lgicas mais importantes, pela perpetuao da
infeco nos hospedeiros. Para estabelecer uma
infeco persistente, o vrus no pode matar as
clulas infectadas; ele deve manter a sua replica-
Patogenia das infeces vricas 217
o em nveis baixos e possuir estratgias para
escapar da vigilncia do sistema imunolgico.
De fato, nessas infeces, a extenso da injria
e leses geralmente muito pequena ou mesmo
ausente. Por outro lado, a persistncia viral em
clulas nervosas freqentemente associada com
imunopatologia em neurnios e clulas da glia.
O SNC apresenta caractersticas que podem
favorecer a persistncia de infeces vricas, entre
elas: possui uma populao estvel e heterognea
de clulas susceptveis a vrios vrus; uma rede
intrincada de processos (axnios e dendritos) que
permite a disseminao do vrus a longas distn-
cias; uma barreira hemato-enceflica que restrin-
ge o acesso de linfcitos T e anticorpos. No en-
tanto, alguns vrus infectam concomitantemente
clulas extraneurais e produzem viremia crnica,
indicando que o SNC pode no oferecer todas as
condies para a persistncia viral.
As infeces persistentes do SNC podem ser
classicadas em trs tipos principais, com conse-
qncias clnico-patolgicas e epidemiolgicas
diferentes: infeces latentes, infeces crnicas
defectivas e infeces crnicas produtivas. Os
alfaherpesvrus (PRV, BoHV-1, BoHV-5 etc.) es-
tabelecem infeces latentes em neurnios dos
gnglios sensoriais e autonmicos prximos ao
stio de infeco primria. Durante a infeco la-
tente, o genoma do vrus permanece inativo no
ncleo dos neurnios, sem expresso gnica ou
produo de prognie viral. Ocasionalmente, em
situaes de estresse, o vrus retoma a replicao
ativa e transportado de volta aos stios de pene-
trao, onde replica e excretado. A reativao
da infeco importante na epidemiologia des-
ses vrus, pois permite a excreo e transmisso
a outros animais. Algumas vezes a reativao
acompanhada de recrudescncia clnica, com o
desenvolvimento de leses no stio de penetra-
o, e tambm com o desenvolvimento espordi-
co de infeco neurolgica e meningo-encefalite
(BoHV-5). Ces que se recuperam da infeco
aguda pelo CDV acompanhada ou no de si-
nais clnicos podem car portadores do vrus,
que segue replicando em nveis muito baixos no
SNC, geralmente desacompanhado de excreo
viral. Eventualmente esses animais desenvolvem
um quadro de encefalite viral e vo a bito, mas
essa ocorrncia pode demorar anos. A persis-
tncia do vrus no SNC, aps a infeco aguda,
pode ser favorecida por mutaes que resultem
na produo de vrus defectivos. Outra forma de
infeco persistente no SNC a estabelecida pelo
retrovrus MVV, nos quais o vrus estabelece in-
feco crnica em clulas da linhagem macrofgi-
ca com produo de vrus ausente ou espordica.
O vrus da doena de Borna (BDV) de eqinos
tambm estabelece infeco persistente no siste-
ma nervoso, porm a produo de vrus parece
ser contnua, apesar de ocorrer em nveis baixos.

3.3.6 Infeces do sistema linforreticular
e hematopoitico
Vrios vrus utilizam clulas linforreticula-
res e/ou da linhagem hematopoitica como alvos
de replicao em infeces naturais. A variedade
de tipos celulares e a multiplicao contnua de
algumas dessas clulas favorecem a replicao
desses vrus. Da mesma forma, a contnua re-
circulao dessas clulas especialmente os lin-
fcitos favorece o carter sistmico dessas in-
feces. Em geral, a infeco se inicia nos rgos
linfides secundrios, aps a drenagem da linfa
dos tecidos ou com a passagem do sangue pelo
bao. Os vrus presentes na linfa e/ou sangue so
capturados por ou infectam clulas da linhagem
monoctica/macrofgica, clulas dentrticas ou
linfcitos dos linfonodos, bao, placas de Peyer
e outros acmulos linfides. A replicao viral
nessas clulas seguida da produo de prognie
viral que infecta um nmero adicional de clulas
prximas, alm de permitir a sua disseminao
sistmica atravs de clulas circulantes. Assim o
vrus pode se distribuir por outros rgos linfor-
reticulares e se disseminar nesses tecidos. Infec-
es de clulas progenitoras hematopoiticas da
medula ssea podem ocorrer nesses estgios da
infeco. Os macrfagos, clulas dendrticas, lin-
fcitos T e B so alvos de replicao de uma varie-
dade de vrus que causam doenas em animais.
Alm dessas, clulas progenitoras da linhagem
linfide, mielide ou hematopoitica da medu-
la ssea podem ser infectadas por alguns vrus e
comprometer a reposio das clulas sangneas
(alguns vrus induzem trombocitopenia).
218 Captulo 8
A infeco macia do sistema linforreticular
freqentemente leva depleo linfide e disfun-
o da resposta imunolgica. A disfuno do sis-
tema imunolgico pode resultar em decincias
na resposta a outros patgenos, com predisposi-
o a infeces secundrias. Vrios vrus animais
tm sido associados com infeco do sistema lin-
fide e induo de imunossupresso, incluindo o
vrus da doena de Gumboro em aves (IBDV), o
FIV e o vrus da imunodecincia bovina (BIV).
Outros vrus, como o BVDV, CSFV, CDV e CPV
podem estar associados com quadros transitrios
de supresso imunolgica. A imunossupresso
produzida por esses vrus pode dar-se em razo
de vrios mecanismos e ser abordada em seo
especca.
Alguns dos vrus mais virulentos para hu-
manos e animais esto associados com infeces
do tecido linforreticular e hematopoitico, in-
cluindo o vrus ebola (lovrus), arenavrus, han-
tavrus, o vrus da febre do vale Rift (um bunia-
vrus), o VEEV, CSFV e ASFV. Esses vrus esto
associados com doena severa, caracterizada pelo
curso agudo e pela ocorrncia de leses vascula-
res, disfunes hemodinmicas, de coagulao
sangnea e ocorrncia de eventos hemorrgicos.
Alguns isolados do BVDV tambm tm sido as-
sociados com doena aguda severa acompanhada
de componentes hemorrgicos. Essas enfermida-
des possuem algumas caractersticas em comum,
como o curso agudo, a ocorrncia de alteraes
vasculares, leses endoteliais com perda de lqui-
do vascular, proteinria e edemas. As manifesta-
es mais comuns da injria nos endotlios vas-
culares incluem hiperemia acentuada, petquias
e sufuses nas mucosas e serosas, equimoses e
hemorragias pontuais disseminadas em quadros
severos. Quadros de choque hipovolmico so
freqentes em estgios avanados da doena. As
hemorragias e extravasamento de plasma podem
ser por causa da injria nos endotlios vasculares
pela replicao viral nas clulas endoteliais, por
alteraes na coagulao sangnea (coagulao
intravascular disseminada com consumo de pla-
quetas) ou ainda por trombocitopenia primria.
3.3.7 Infeco fetal
Os tecidos embrionrios e fetais apresen-
tam uma alta taxa de multiplicao celular e, por
isso, constituem-se em stios de predileo para
a replicao de vrios vrus. Os vrus que infec-
tam o feto se disseminam pela via hematgena e
vrios deles produzem infeces inaparentes ou
leves nas fmeas prenhes. Nesses casos, as conse-
qncias maiores da infeco so devidas s per-
das reprodutivas. As conseqncias da infeco
fetal variam com a espcie e cepa do vrus, com
o status imunolgico da fmea e com a fase de
gestao em que ocorre a infeco. As infeces
que ocorrem em fases precoces da gestao so
geralmente acompanhadas de morte embrionria
ou fetal. Infeco fetal em estgios intermedirios
pode produzir teratogenia ou abortos e infeco
em fases avanadas pode induzir abortos, nati-
mortos ou resultar em resposta imunolgica e er-
radicao da infeco pelo feto.
A infeco fetal tambm pode representar
um meio para o vrus persistir na populao, pela
gerao de animais imunotolerantes e persisten-
temente infectados, capazes de disseminar o v-
rus por longos perodos. A produo de neonatos
persistentemente infectados caracterstica da
infeco fetal por cepas no-citopticas do BVDV
entre os 40 e 120 dias de gestao, e pode ocorrer
tambm com os pestivrus suno e ovino. Os efei-
tos da infeco fetal pelo BVDV esto ilustrados
na Figura 8.14.
Os efeitos observados no feto podem dever-
se replicao viral nos tecidos fetais e/ou repli-
cao na placenta e interferncia com as funes
placentrias. A mortalidade fetal pode ser segui-
da de reabsoro, mumicao fetal ou aborta-
mento. Os abortos associados com infeces vri-
cas geralmente ocorrem dias ou semanas aps a
infeco, o que diculta a deteco de vrus e/ou
produtos virais nos tecidos fetais e conseqente-
mente o diagnstico.
Dentre os vrus animais que produzem in-
feces embrionrias e fetais destacam-se:
Patogenia das infeces vricas 219
herpesvrus de vrias espcies: mortalida-
de fetal, abortos, doena ou mortalidade neona-
tal;
pestivrus de bovinos (BVDV), sunos
(CSFV) e ovinos (border disease virus BDV): mor-
talidade fetal, abortos, malformaes, natimorta-
lidade, nascimento de animais persistentemente
infectados;
vrus da lngua azul (BTV, um orbivrus)
em ovinos e bovinos: mortalidade fetal, abortos,
malformaes congnitas;
parvovrus suno (PPV): reabsoro em-
brionria, mortalidade fetal, abortos, mumica-
o, natimortalidade;
vrus da panleucopenia felina (FPLV): hi-
poplasia cerebelar;
vrus da leucemia felina (FeLV): leucemia,
mortalidade fetal;
vrus da sndrome respiratria e reprodu-
tiva dos sunos (PRRSV) e vrus da arterite viral
eqina (EAV): mortalidade fetal, abortos;
vrus Akabane (ovinos e bovinos): morte
fetal, abortos, malformaes, natimortalidade;
vrus da febre do vale Rift (RVFV) em ovi-
nos: mortalidade fetal e abortos.
Perdas reprodutivas por alguns desses agen-
tes tambm tm sido relatadas aps o uso de va-
cinas atenuadas contendo os respectivos agentes.
Por outro lado, para os vrus que causam perdas
reprodutivas importantes, a vacinao deve ser
realizada antes da cobertura ou inseminao para
prevenir a infeco fetal e, assim, minimizar as
perdas.
Natimortos
Malformaes
Bezerros PI
Infertilidade
Abortos
BVDV
ncp ou cp
ncp
Soropositivo, sem o vrus
Bezerro PI
ncp ou cp
0 280 120 40 80 160 200 240
D I A S D E G E S TA O
Efeitos na
fertilizao,
implantao
Embrio muito
susceptvel
Imunotolerncia (PI)
Leses no SNC
Atrofia da retina
Cegueira
Abortos
Bezerros saudveis
soropositivos
Figura 8.14. Efeitos da infeco de fmeas bovinas prenhes pelo vrus da diarria viral bovina (BVDV). As
conseqncias da infeco dependem do status imunolgico da fmea, da cepa do vrus (biotipo e virulncia) e do
estgiodedesenvolvimentodoembrio/feto.
220 Captulo 8
4 Padres principais de infeco
A sobrevivncia dos vrus como espcie
depende de infeces sucessivas e contnuas de
diferentes indivduos e/ou de infeces prolon-
gadas no mesmo indivduo. Por outro lado, o re-
sultado da infeco viral em um animal depende
de interaes mltiplas entre componentes virais
e do hospedeiro. Objetivamente, depende do
balano entre as estratgias virais para se perpe-
tuar no organismo e dos mecanismos de defesa
do hospedeiro para erradicar o agente. Apesar
da diversidade dos vrus e da complexidade de
suas interaes com os hospedeiros, dois padres
principais de infeco podem ser reconhecidos:
as infeces agudas e as infeces crnicas (ou
persistentes). No entanto, variaes e combina-
es desses tipos tambm ocorrem com freqn-
cia (Figura 8.15).
Alguns vrus produzem infeces agudas, que
se caracterizam pela curta durao e rpida er-
radicao do agente pela resposta imunolgica
do hospedeiro. Outros vrus produzem infeces
persistentes ou crnicas, caracterizadas pela per-
manncia do agente no hospedeiro por longos
perodos, muitas vezes pelo resto da vida. A na-
tureza autolimitante das infeces agudas se deve
principalmente ecincia do sistema imunol-
Infeco Aguda
Infeco Latente
Infeco Persistente
Infeco Persistente
temporria
Replicao viral
Manifestaes clnicas
Figura8.15. Principais padres deinfeco.
Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).
Patogenia das infeces vricas 221
gico do animal em combater e erradicar a infec-
o. Visto por outro ngulo, o carter transitrio
dessas infeces se deve incapacidade dos vrus
persistir no animal na presena da resposta imu-
nolgica. As infeces persistentes ou crnicas
tambm podem ser vistas sob duas ticas: a) do
ponto de vista do hospedeiro, a persistncia do
agente em seus tecidos reete a incapacidade do
sistema imunolgico de erradic-lo; e b) do ponto
de vista do agente, a persistncia o resultado
de estratgias evolutivas, que foram desenvolvi-
das para se adaptar ao hospedeiro e escapar da
vigilncia do sistema imunolgico, garantindo,
assim, a sua permanncia no animal.
4.1 Infeces agudas
A principal caracterstica das infeces agu-
das o curto perodo de tempo em que o vrus
replica no organismo do hospedeiro. o padro
de infeco mais estudado e conhecido e carac-
terstico de vrios vrus que replicam com ecin-
cia em animais e em cultivos celulares. O termo
aguda se refere rapidez de replicao e produ-
o de prognie viral, que seguida tambm por
uma rpida resoluo e erradicao da infeco.
Os nveis de replicao viral no organismo au-
mentam rapidamente, atingem um pico aps al-
guns dias e decrescem tambm com certa rapidez
(Figura 8.15). A reduo dos nveis de vrus no
organismo coincide com o desenvolvimento de
resposta imunolgica humoral (anticorpos) e ce-
lular (linfcitos T citotxicos). Em geral, a respos-
ta imunolgica capaz de erradicar o agente dos
tecidos aps alguns dias. Se, por um lado, o curto
perodo de replicao e excreo pode ser detri-
mental para a sobrevivncia do vrus na popula-
o, os altos ttulos de vrus que so excretados
favorecem a transmisso do agente.
importante ressaltar que o termo aguda se
refere cintica de replicao viral (nveis e tem-
po) e no s manifestaes clnicas. De fato, muitas
infeces agudas so absolutamente subclnicas,
ou seja, so desacompanhadas de manifestaes
clnico-patolgicas. No obstante, muitas vezes
as infeces agudas no podem ser controladas
pelo sistema imunolgico e resultam em doen-
a de severidade varivel, algumas vezes fatais.
Exemplos de infeces agudas incluem as infec-
es entricas por rotavrus em vrias espcies,
vrus da inuenza em sunos e eqinos, vrus da
raiva em vrias espcies, CPV, entre outras.
4.2 Infeces persistentes ou crnicas
As infeces crnicas ou persistentes se ca-
racterizam pela persistncia do vrus ou do ge-
noma viral no hospedeiro por longos perodos.
A maioria dessas infeces se inicia como uma
infeco aguda, caracterizada por uma rpida
replicao viral, acompanhada ou no de sinais
clnicos. No entanto, ao contrrio das infeces
agudas, a resposta imunolgica montada pelo
hospedeiro no capaz de erradicar o agente,
resultando na sua permanncia nos tecidos por
perodos variveis. Diferentes tipos de infeces
crnicas podem ser reconhecidos de acordo com a
biologia do agente, com a dinmica de replicao
viral (ausncia ou presena de replicao ativa) e
com a durao. Em geral, os nveis de replicao
e excreo viral nas infeces crnicas so muito
mais baixos do que nas infeces agudas e, algu-
mas vezes, podem ser dicilmente detectveis.
De acordo com a ocorrncia ou no de re-
plicao viral durante a persistncia, dois tipos
principais de infeces crnicas so reconheci-
dos: as infeces latentes e as infeces persisten-
tes. As infeces latentes so caracterizadas pela
permanncia do genoma viral nas clulas do hos-
pedeiro, na maior parte do tempo sem replicao
e produo de vrus. A replicao e produo de
prognie viral somente ocorrem em situaes es-
pordicas e duram horas ou poucos dias. J nas
infeces persistentes, a replicao viral ocorre
de forma contnua, em nveis variveis, e fre-
qentemente acompanhada de excreo do agen-
te. Em algumas infeces persistentes, no entan-
to, os nveis de replicao so to baixos e em
determinados tecidos do organismo que no
so acompanhados de excreo viral detectvel
(p. ex.: persistncia do CDV no encfalo de ces
adultos e persistncia do FMDV na faringe). Em
outras, a replicao e excreo viral ocorrem de
forma contnua e em nveis signicativos.
As infeces persistentes aquelas que cur-
sam com replicao viral contnua podem ser
agrupadas em duas classes, que so determina-
das pela biologia dos vrus e por suas interaes
222 Captulo 8
com o hospedeiro. Para alguns vrus, o estabe-
lecimento de infeco persistente uma regra
e ocorre em, virtualmente, todos os indivduos
infectados. Em outras palavras, a persistncia
uma caracterstica biolgica inerente s relaes
daquele vrus com os seus hospedeiros. Esse tipo
de infeco persistente se prolonga por tempo in-
determinado, provavelmente por toda a vida do
animal. Essas so as infeces persistentes clssicas
e so caractersticas das infeces pelos retro-
vrus animais, alm de outros vrus. Em outros
grupos de vrus, infeces persistentes podem
ser estabelecidas aps a infeco aguda, em um
nmero varivel de indivduos, e a persistncia
geralmente possui durao varivel, no necessa-
riamente indenida. Nesses casos, a persistncia
uma conseqncia provvel e muitas vezes
freqente da infeco, mas no se constitui em
regra ou padro biolgico da infeco por esses
vrus. Alm disso, grande parte dos animais que
se tornam portadores consegue erradicar a infec-
o aps algum tempo, determinando o m da
persistncia, ou seja, so infeces persistentes tem-
porrias (Figura 8.15).
Algumas infeces persistentes so acompa-
nhadas de sinais clnicos crnicos, que podem ser
brandos ou graves; outras vezes a infeco ab-
solutamente inaparente. Vrias infeces crnicas
resultam em patologias progressivas de desen-
volvimento lento (MVV, CAEV, vrus da pneu-
monia progressiva dos ovinos [OPPV] e FeLV),
em imunopatologia ou imunodecincia (EIAV,
FIV e LCMV) ou no desenvolvimento de neopla-
sias malignas (vrus da leucose aviria [ALV] e
BLV). Essas patologias so mais comumente ob-
servadas nas infeces persistentes clssicas.
Os locais de persistncia do vrus no so
necessariamente os mesmos em que o vrus re-
plicou e produziu patologias na fase aguda e, fre-
qentemente, incluem stios de acesso restrito do
sistema imunolgico. Os padres de replicao e
excreo viral durante as infeces crnicas tam-
bm so muito variveis. Em algumas infeces,
a replicao viral contnua e ocorre em nveis
moderados a altos; em outras, os nveis de repli-
cao so muito baixos, com pouca ou nenhuma
excreo viral. J as infeces latentes so carac-
terizadas por longos perodos de absoluta ausn-
cia de replicao viral intercaladas com episdios
espordicos de reativao, replicao e excreo
viral.
4.2.1 Infeces latentes

Esse tipo de infeco tpico dos alfaher-
pesvrus animais (BoHV-1, BoHV-5, PRV, EHV-
1, herpesvrus canino, herpesvrus felino, entre
outros) e se caracteriza pela permanncia do ge-
noma viral inativo em neurnios dos gnglios
sensoriais e autonmicos aps o trmino da repli-
cao na fase aguda. Durante a infeco latente
no ocorre produo de protenas virais, replica-
o do genoma ou produo de partculas vri-
cas. Com isso, os neurnios que abrigam o geno-
ma viral no so reconhecidos como infectados
pelo sistema imunolgico, o que permite ao vrus
escapar da vigilncia imunolgica. O genoma vi-
ral no integrado aos cromossomos celulares e
permanece como um epissomo, fortemente asso-
ciado com protenas celulares no ncleo dos neu-
rnios. Esporadicamente, geralmente associado
com situaes de estresse e produo de glico-
corticides endgenos, a infeco reativada e o
vrus replica de forma aguda e excretado. O pe-
rodo e a magnitude de excreo viral durante a
reativao so geralmente bem inferiores queles
observados durante a infeco aguda. A reativa-
o da infeco ocasionalmente acompanhada
de manifestaes clnicas, geralmente mais bran-
das do que aquelas observadas durante a infec-
o aguda. As reativaes ocorrem a intervalos
variveis (semanas, meses, anos) em uma parcela
dos indivduos e possvel que alguns hospedei-
ros no apresentem episdios de reativao. A
infeco latente representa um meio do vrus se
perpetuar no hospedeiro, e a sua reativao peri-
dica permite a sua excreo e transmisso.
4.2.2 Infeces persistentes ou crnicas
Essas infeces se caracterizam pela cont-
nua replicao e produo de partculas vricas
nos tecidos do hospedeiro por tempo ilimitado,
provavelmente por toda a vida do animal. pos-
svel se detectar o agente infeccioso em qualquer
momento aps a infeco aguda, desde que se
examinem os tecidos certos com tcnicas apro-
priadas. As infeces persistentes se estabelecem
porque o sistema imunolgico do hospedeiro no
consegue erradicar o vrus durante a infeco
Patogenia das infeces vricas 223
aguda. Subseqentemente, por diferentes me-
canismos, o agente consegue coexistir com uma
resposta imune que mantm um controle parcial
da infeco, sem conseguir elimin-la totalmente.
Os nveis de replicao nesse tipo de infeco va-
riam de acordo com o vrus. Alguns vrus man-
tm nveis considerveis de replicao de forma
contnua; outros apresentam uma replicao
mnima, s vezes, de difcil deteco. As infec-
es pelos retrovrus animais (EIAV, BLV, FeLV,
CAEV, entre outras), BTV e infeco persistente
pelo BVDV so exemplos clssicos de infeces
vricas persistentes.
No caso dos retrovrus, a manuteno da in-
feco se deve integrao denitiva de cpias
DNA do genoma viral nos cromossomos das
clulas hospedeiras, ou seja, as clulas infecta-
das cam persistentemente infectadas e, caso se
multipliquem, transmitem o genoma viral para
a sua prognie. Assim, geraes sucessivas de
clulas produzem vrus infecciosos ao longo da
vida do animal. No caso do BLV, a manuteno
da infeco persistente deve-se principalmente a
divises celulares contnuas e transmisso do ge-
noma viral para a prognie, do que produo
de vrus infecciosos. interessante observar que
os retrovrus, alm de inserir o seu material ge-
ntico nos cromossomos do hospedeiro, tambm
sofrem contnuas mutaes que contribuem para
a sua perpetuao no animal infectado.
As infeces persistentes pelo BVDV somen-
te ocorrem em animais que tenham sido infecta-
dos intra-uterinamente, entre os 40 e 120 dias de
gestao. Esses animais se tornam imunotoleran-
tes e so incapazes de montar uma resposta imu-
nolgica contra o vrus infectante. Assim, o vrus
pode replicar continuamente em altos ttulos no
tecido linforreticular e epitlios dos animais, sem
a interferncia do sistema imunolgico.
4.2.3 Infeces persistentes temporrias
Em alguns vrus, a infeco aguda pode ser
seguida de persistncia do agente nos tecidos do
hospedeiro por perodos variveis. Em algumas
delas, a persistncia ocorre apenas em alguns
animais, no se constituindo em uma regra. Em
outros casos, as infeces crnicas que se seguem
s infeces agudas parecem ocorrer na maioria,
seno em todos os animais. Os nveis de repli-
cao e excreo viral variam de acordo com o
agente e com a resposta do hospedeiro. A dura-
o da persistncia tambm varivel, podendo
ser de meses e at anos (ou at mesmo por toda a
vida do animal). Naqueles casos em que a erradi-
cao do agente ocorre aps algum tempo, pro-
vvel que o vrus tenha esgotado o seu arsenal de
estratgias para persistir no animal, sendo even-
tualmente combatido pelo sistema imune. Vrios
vrus produzem este tipo de infeco. O PRRSV
permanece replicando nos testculos de repro-
dutores sunos por at seis meses aps a infec-
o aguda. O CAdV-1 tambm pode permanecer
durante meses replicando no epitlio dos tbulos
renais, que so locais de acesso restrito do sistema
imunolgico. A infeco pelo CDV um exemplo
de infeco que geralmente aguda na maioria
dos animais mas pode se tornar crnica em uma
parcela dos ces que no conseguem erradicar o
vrus na fase aguda. Nesses animais, o vrus per-
siste replicando em nveis baixos no SNC. Essa
replicao no acompanhada de excreo viral
em secrees ou excrees. A maioria desses ani-
mais eventualmente desenvolve doena neuro-
lgica de curso fatal, em um prazo que varia de
meses a anos. No caso do calicivrus felino (FCV),
a persistncia do vrus no hospedeiro parece ser
favorecida pela ocorrncia contnua de mutaes
genticas que resultam em variantes virais que
escapam da resposta imune do animal. O FMDV
produz uma infeco clnica aguda (febre aftosa)
que se resolve em poucos dias. No entanto, uma
parcela dos animais permanece abrigando o vrus
na faringe por um determinado tempo. Os nveis
de replicao so geralmente muito baixos e pa-
recem no ser acompanhados de excreo viral.
Alguns arenavrus e hantavrus produzem
infeces crnicas em roedores silvestres. Essas
infeces so acompanhadas por viremia prolon-
gada muitas vezes por toda a vida e de trans-
misso vertical do vrus para a prognie. J as
infeces crnicas por hantavrus so caracteriza-
das por viremia transitria seguida de excreo
prolongada de vrus pela saliva, secrees nasais,
fezes e urina. Esses vrus podem ser ocasional-
224 Captulo 8
mente transmitidos para humanos e so impor-
tantes causas de febres hemorrgicas. A Tabela
8.4 apresenta as principais caractersticas das in-
feces virais persistentes.
Retroviridae
BLV bovina Linfcitos B.
Maedi/ Visna ovina Moncitos e macrfagos.
CAEV caprina Linfcitos, SNC, epitlio alveolar, moncitos e
macrfagos.
FIV/FeLV felina Clulas mielides, linfcitos T e B.
EIAV eqina Macrfagos e linfcitos.
ALV aves Clulas linfides, mielides, renais, sseas,
endoteliais e mesenquimais.
ovina Clulas epiteliais do sistema respiratrio.
Tipo Vrus Famlia/subfamlia Espcie Local de persistncia
Herpesviridae/
Alphaherpesvirinae
BoHV-1 bovina
Gnglios sensoriais e autonmicos, tonsilas e
linfcitos T (BoHV-1.1), linfonodos da regio
sacral (BoHV-1.2).
BoHV-5 bovina Gnglio trigmeo e stios do SNC.
BoHV-2 bovina Gnglio trigmeo, pele e linfonodos.
CaHV-1 canina Gnglios sensoriais e autonmicos.
FHV-1 felina Gnglios sensoriais e autonmicos.
CpHV caprina Gnglios sensoriais e autonmicos.
PRV suna Gnglio trigmeo, bulbo olfatrio, tronco
cerebral, medula espinhal, tonsilas.
EHV-1, 3 e 4 eqina Gnglios sensoriais e autonmicos.
GaHV-1 aves Gnglios sensoriais e autonmicos.
Herpesviridae/
Betaherpesvirinae
PCMV (SHV-2) suna
Glndula salivar, epitlio vesical e clulas
mononucleares.
Herpesviridae/
Gammaherpesvirinae
MCFV (AHV-1) ruminantes Clulas linfoblastides.
EHV-2 e 5 eqina Clulas linfoblastides.
Adenoviridae DAdV-A aves Clulas da glndula da casca e do oviduto.
L
a
t
e
n
t
e
P
e
r
s
i
s
t
e
n
t
e
Coronaviridae FIPV felina Macrfagos.
Paramyxoviridae CDV* canina SNC (oligodendrcitos).
Caliciviridae FCV felina Epitlio respiratrio e anexos.
Flaviviridae
BVDV, BDV e
CSFV**
bovina, ovina e
suna
Clulas do sistema imune, SNC, medula
ssea, clulas endoteliais e clulas
epiteliais dos sistemas respiratrio e
digestrio.
Alphaherpesvirinae MDV (GaHV-2) aves Linfcitos T.
Adenoviridae EAdV-2 eqina Mucosa respiratria, adenides.
Parvoviridae PPV*** suna Tecido linfide, rins e testculos.
BTV bovina e ovina Clulas hematopoiticas.
Reoviridae
DHBV, WHBV,
GSHBV
patos, gansos,
marmotas, esquilos
ovinos
Hepatcitos. Hepadnaviridae
V Jaagsiekte
OPAV
rus
Tabela8.4 Stios depersistnciadevrus queestabeleceminfeces latentes oupersistentes nos hospedeiros
Patogenia das infeces vricas 225
4.3 Mecanismos envolvidos na
manuteno das infeces persistentes
Os mecanismos envolvidos no estabeleci-
mento e manuteno das infeces persistentes
so muito complexos e pouco esclarecidos at o
presente. No entanto, independentemente dos
mecanismos responsveis, a manuteno de uma
infeco vrica no organismo deve preencher trs
condies essenciais: a) a infeco celular deve
ser no-citoltica (ou de citopatogenicidade limi-
tada); b) manuteno do genoma viral nas clu-
las do hospedeiro, e c) evaso da resposta imune
do hospedeiro. Vrios mecanismos adicionais ou
complementares tm sido sugeridos para expli-
car a persistncia desses agentes em tecidos do
hospedeiro, por longos perodos, a despeito da
resposta imunolgica desencadeada contra eles.
provvel que nenhuma infeco persistente seja
mantida por causa de apenas um desses mecanis-
mos; ao contrrio, provavelmente so mantidas
pela combinao de vrios deles.
4.3.1 Restrio do efeito citopatognico
Os vrus que produzem infeces no-cito-
lticas so mais propensos a estabelecerem infec-
es persistentes, pois a sua replicao no resul-
ta na destruio das clulas infectadas (ou resulta
em destruio limitada). Exemplos de vrus no-
citolticos que causam infeces persistentes so
alguns arenavrus (infeco renal persistente em
roedores), o BVDV (infeco de clulas do siste-
ma linforreticular) e o vrus da hepatite B (infec-
o no-citoltica de hepatcitos).
4.3.2 Infeco de clulas
semipermissivas
A replicao dos alfaherpesvrus em clulas
epiteliais e do tegumento altamente citoltica, o
que tambm observado em uma variedade de
clulas in vivo e in vitro. A infeco tambm ci-
toltica em vrios tipos de neurnios. No entanto,
alguns neurnios sensoriais e autonmicos no
so permissivos replicao ltica aguda. Como
Tabela 8.4 Continuao
Tipo Vrus Famlia/subfamlia Espcie Local de persistncia
P
e
r
s
i
s
t
e
n
t
e
t
e
m
p
o
r

r
i
a
Papillomaviridae
BPV-1 a 7 bovina Clulas epiteliais.
CaPV canina Clulas epiteliais.
EPV-1 e 2 eqina Clulas epiteliais.
Adenoviridae CAdV-1 canina Epitlio dos tbulos renais.
Asfarviridae ASFV suna e bubalina
Clulas mononucleares e fagocticas,
tonsilas e linfonodos.
Circoviridae PCV-1 e 2 suna
Clulas mononucleares sangneas,
macrfagos e linfcitos.
Picornaviridae FMDV
bovina, suna
e ovina
Mucosa da orofaringe.
Arteriviridae
PRRSV suna
Macrfagos, clulas germinativas
dos testculos.
EAV eqina
Macrfagos, clulas endoteliais e
mesoteliais.
TGEV suna Mucosas respiratria e intestinal.
Coronaviridae
IBV aves Clulas do epitlio renal.
* Alguns animais que se recuperam da doena ficam portadores,mas no excretam o vrus, que replica em nveis baixos no SNC.
**Fetos infectados em determinada fase de gestao ficam imunotolerantes e nascem persistentemente infectados.
***Alguns fetos infectados no tero se tornam imunotolerantes e ficam portadores, excretando o vrus por longos perodos.
BDV eqina Neurnios, astrcitos e oligodendrcitos. Bornaviridae
226 Captulo 8
conseqncia, aps penetrar e ter o seu ciclo re-
plicativo interrompido, o vrus estabelece infec-
es latentes nesses neurnios, ou seja, a infec-
o de clulas semi-permissivas infeco ltica
o mecanismo responsvel pela persistncia dos
alfaherpesvrus nos seus hospedeiros. Sob deter-
minadas condies, esses neurnios que abrigam
o genoma viral se tornam permissivos, o que de-
sencadeia a reativao e replicao viral.
4.3.3 Infeco de um pequeno nmero
de clulas
Essa forma de infeco tem sido observada
por alguns vrus in vitro e possvel que tambm
ocorra in vivo. Candidatos para esse tipo de mo-
dulao so os adenovrus e os arterivrus (EAV
em eqinos e PRRSV em sunos). A infeco per-
sistente no hospedeiro seria mantida atravs de
infeces sucessivas citolticas ou no de um
nmero pequeno de clulas a cada ciclo. Os vrus
produzidos por essas clulas infectariam outra
pequena populao de clulas e, assim, a infeco
se prolongaria sucessivamente. Provavelmente
algum mecanismo concomitante de evaso do
sistema imune seja necessrio para permitir a
ocorrncia dessas infeces continuadas, mesmo
em baixos nveis.
4.3.4 Manuteno do genoma viral nas
clulas hospedeiras
A manuteno do genoma viral nas clulas
do hospedeiro pode ocorrer por dois mecanis-
mos distintos: pela integrao do genoma viral
nos cromossomos da clula do hospedeiro, como
ocorre com as infeces pelos retrovrus, ou pela
manuteno do genoma como elemento extracro-
mossomal no ncleo da clula, como ocorre nas
infeces latentes pelos alfaherpesvrus e papilo-
mavrus.
4.3.5 Evaso da resposta imune
do hospedeiro
As estratgias de evaso do sistema imunol-
gico esto entre os mecanismos mais importantes
utilizados pelos vrus para assegurar a sua per-
sistncia no hospedeiro. Em muitos vrus, essas
estratgias provavelmente complementam os ou-
tros mecanismos envolvidos na permanncia do
agente no organismo. Os mecanismos mais utili-
zados pelos vrus para evaso da resposta imune
so: a) restrio de produo das protenas virais
(como no caso da latncia dos herpesvrus); b) in-
feco de locais imunologicamente privilegiados
(p. ex.: infeco das clulas do SNC pelo CDV e
e de clulas do epitlio seminfero dos testculos
pelo PRRSV); c) variao antignica (EIAV, FCV
e FMDV); d) tolerncia imunolgica (bovinos
persistentemente infectados pelo BVDV); f) inter-
ferncia com clulas e molculas do sistema imu-
nolgico (adenovrus e poxvrus).
5 Oncognese por vrus
A transformao celular e produo de tu-
mores esto entre as conseqncias da replicao
de alguns grupos de vrus nos seus hospedeiros.
De fato, acredita-se que uma parte considervel
dos tumores de humanos e animais possua a par-
ticipao direta ou indireta de agentes virais. De
acordo com o vrus, diferentes tipos celulares e
rgos podem ser afetados, com conseqncias
diversas. Alguns tumores induzidos por vrus
so benignos, mas uma parcela importante
constituda por neoplasias malignas que resul-
tam em doena progressiva e morte do animal.
Para alguns vrus indutores de tumores, os me-
canismos moleculares de oncognese j foram
razoavelmente esclarecidos. Para outros vrus,
no entanto, esses mecanismos permanecem obs-
curos e se constituem em temas de contnuas in-
vestigaes. Dentre os vrus animais associados
com neoplasias, encontram-se famlias de vrus
RNA (retrovrus) e DNA (poliomavrus, papilo-
mavrus, adenovrus e hepadnavrus).
5.1 Oncognese por retrovrus
Os retrovrus envolvidos com a produo
de tumores tambm chamados de oncornavrus
so amplamente distribudos na natureza e tm
sido isolados de virtualmente todas as espcies
animais. Esses vrus diferem entre si em relao
ao tropismo celular, potencial oncognico, per-
Patogenia das infeces vricas 227
odo de incubao e mecanismo de oncognese.
Com base no tempo necessrio para a produo
dos tumores, os oncornavrus podem ser dividi-
dos em vrus transformantes no-agudos, agudos
e transindutores. Os retrovrus transformantes
no-agudos induzem a formao de neoplasias
aps um longo perodo de incubao (meses at
dcadas), assim como os transindutores. Os re-
trovrus transformantes agudos induzem tumo-
res em um intervalo menor de tempo (semanas).
Os mecanismos de oncognese tambm variam
entre os grupos.
Os retrovrus transformantes no-agudos
esto envolvidos em vrios tipos de neoplasias,
incluindo linfomas e leucemias. Esses vrus no
possuem genes especcos com atividade onco-
gnica no seu genoma. Ao contrrio, induzem
oncognese pela integrao do seu genoma (pro-
vrus DNA) nas proximidades de proto-oncoge-
nes celulares ou de genes envolvidos no controle
do ciclo e diferenciao celular. Com isso, a ex-
presso desses genes alterada e pode levar
transformao tumoral. Este processo denomi-
nado de oncognese insercional.
Os retrovrus transformantes agudos podem
induzir a formao de tumores dentro de poucos
dias. Ao contrrio do grupo anterior, esses vrus
possuem oncogenes (genes oncognicos) no seu
genoma. Mais de 30 diferentes oncogenes j fo-
ram identicados no genoma de retrovrus ani-
mais e todos eles parecem ter sido adquiridos
integralmente ou por rearranjos do genoma dos
hospedeiros em infeces passadas. As funes
dos produtos desses oncogenes so variveis e
incluem desde quinases at fatores de transcri-
o. Uma caracterstica comum a quase todos os
oncogenes retrovirais identicados at o presente
que os seus produtos esto envolvidos em me-
canismos de sinalizao intracelular (signal trans-
duction). Retrovrus com essas caractersticas j
foram identicados em vrias espcies animais e
tm sido associados com uma grande variedade
de tumores, incluindo sarcomas, carcinomas e
linfomas em aves; sarcomas e linfomas em roedo-
res; brossarcomas e linfossarcomas em felinos; e
sarcoma em primatas.
Os retrovrus transformantes transindutores
produzem leucemias monoclonais de linfcitos T
e B aps um longo perodo de incubao. Entre
esses vrus se destacam o vrus da leucemia de
linfcitos T humano (HTLV) e o BLV. O genoma
desses vrus no possui oncogenes e o mecanismo
de induo da oncognese difere daqueles dos
dois grupos anteriores. A transformao tumo-
ral induzida por esses vrus parece estar ligada
funo dos produtos de dois genes acessrios, tax
e rex, que tambm possuem papel importante no
ciclo replicativo do vrus. A protena Rex essen-
cial para o ciclo replicativo ltico do HTLV, mas a
sua participao na oncognese permanece des-
conhecida. J a protena Tax necessria para o
ciclo ltico e tambm para a transformao tumo-
ral das clulas hospedeiras. Esta protena um
potente transativador de transcrio do provrus
viral e tambm de vrios genes celulares. J foi
demonstrado que vrios genes celulares que pos-
suem um papel potencial na regulao do ciclo
celular podem ser ativados pela protena Tax. Por
isso a ativao de genes envolvidos no controle
do ciclo celular um dos provveis mecanismos
de oncognese pelos retrovrus transindutores.
5.2 Pequenos vrus DNA tumorignicos
Algumas famlias de vrus DNA possuem
membros que tm sido associados com tumores,
seja em infeces naturais ou aps inoculao
experimental. Alguns deles produzem tumores
em animais e, por isso, possuem importncia em
medicina veterinria. Em particular, alguns vrus
das famlias Polyomaviridae e Papillomaviridae tm
sido associados com tumores em seus hospedei-
ros naturais e tm comprovado o seu potencial
oncognico aps inoculao em hospedeiros he-
terlogos. O primeiro vrus DNA tumorignico
identicado foi o CRPV (papilomavrus dos co-
elhos cauda-de-algodo) que causa papilomas
cutneos benignos nos hospedeiros naturais.
Quando inoculado em coelhos domsticos, no
entanto, o CRPV induz papilomas que tendem a
progredir e se tornar carcinomas. Vrios aspectos
da tumorignese associada com infeces virais
foram estudados nesse modelo animal. O papilo-
mavrus de camundongos tambm tem sido as-
sociado com tumores mltiplos, sobretudo aps
inoculao experimental em neonatos. O vrus
228 Captulo 8
smio 40 (SV-40), tambm um membro da famlia
Polyomaviridae, capaz de produzir tumores em
hamsters recm-nascidos. O SV-40 tambm tem
sido associado com alguns tumores raros em pes-
soas que foram vacinadas h aproximadamente
50 anos com uma vacina antipoliomielite conta-
minada com o vrus. Os papilomavrus bovinos
(BPVs) tambm tm sido associados com a indu-
o de tumores nos seus hospedeiros. O BPV-1
est associado com papilomas e bropapilomas,
tumores cutneos de carter benigno e com fre-
qncia muito menor, a tumores cutneos malig-
nos. O BPV-4 est associado com a produo de
carcinomas de laringe e esfago em bovinos, cuja
etiologia parece estar combinada com a intoxica-
o por samambaia. Os papilomavrus humanos
16 e 18 (HPV-16; HPV-18) esto envolvidos na
produo de um dos tumores mais freqentes
em humanos, o carcinoma de colo de tero de
mulheres.
Os mecanismos pelos quais esses vrus in-
duzem transformao neoplsica nas clulas hos-
pedeiras tm sido intensivamente estudados nas
ltimas dcadas. A capacidade oncognica desses
vrus tem sido atribuda a uma ou mais protenas
virais que se ligam e inativam protenas celula-
res envolvidas na regulao do ciclo celular. Em
particular, as protenas celulares pRb e p53 so os
alvos para o antgeno T, dos poliomavrus, e para
as protenas E6 e E7 dos papilomavrus. As pro-
tenas da famlia da pRb e p53 exercem um papel
regulatrio-chave no controle da estabilidade do
genoma, na proliferao, diferenciao e apopto-
se em clulas de mamferos. A sua inativao pe-
las protenas virais citadas resulta no descontrole
do ciclo celular e eventualmente pode resultar
em transformao neoplsica.
Os vrus da famlia Hepadnaviridae, tambm
conhecidos como vrus das hepatites B, tambm
tm sido associados com a produo de tumores
em seus hospedeiros naturais. Alm do vrus da
hepatite B humana (HBV), os hepadnavrus de
esquilos (GSHV) e de marmotas (WHV) esto
associados com o desenvolvimento de carcino-
ma hepatocelular, que ocorre ocasionalmente em
hospedeiros com hepatite crnica. Os mecanis-
mos responsveis pela transformao neoplsica
que ocorre nas infeces crnicas pelos hepadna-
vrus no esto completamente esclarecidos. V-
rios mecanismos tm sido propostos e acredita-se
que a oncognese pode resultar da combinao
de mais de um deles. Os mecanismos propostos
incluem: a) ativao de proto-oncogenes celula-
res pela insero do genoma viral nos cromos-
somos; b) ativao de proto-oncogenes celulares
pela protena X; c) injria e inamao heptica
crnica, com produo de substncias potencial-
mente mutagnicas. Em geral, o desenvolvimen-
to do carcinoma hepatocelular precedido por
uma infeco heptica crnica de longa durao.
6 Imunopatologia em infeces
vricas
O sistema imunolgico o responsvel pela
proteo do organismo contra agentes agresso-
res, porm a ativao da resposta imune nem
sempre capaz de controlar a infeco. Alm
disso, em determinadas situaes, a resposta
produzida pode induzir leses imunomediadas,
determinando a ocorrncia da doena. Vrias do-
enas vricas, como a AIDS, a dengue, a anemia
infecciosa eqina e a artrite-encefalite caprina,
entre outras, apresentam as leses resultantes da
resposta imunolgica como componentes de sua
patogenia.
A resposta imune em infeces vricas tem
como objetivo a eliminao e/ou neutralizao
das partculas virais livres, pela ao de anticor-
pos e do complemento; alm da destruio das
clulas infectadas, pela citotoxicidade celular
dependente de anticorpo (ADCC), linfcitos T
citotxicos (CD8+) e lise por clulas natural killer
(NK). Em algumas situaes, essa resposta su-
ciente para eliminar o vrus do organismo. No
entanto, em outras situaes, essa resposta pode
causar injria tecidual, doena e at matar o hos-
pedeiro. Em alguns casos, comum a coexistn-
cia do hospedeiro com o vrus, com a ocorrncia
de injrias celulares e teciduais mnimas, muitas
vezes sem o comprometimento da sade geral do
animal.
O grau de leso que a resposta imunolgica
pode produzir no hospedeiro depende, em parte,
dos rgos envolvidos. Se a infeco ocorre no
SNC ou no corao, as leses so geralmente gra-
ves, enquanto uma resposta localizada na pele,
por exemplo, possui conseqncias limitadas.
Patogenia das infeces vricas 229
Os vrus podem induzir imunopatologias
por diferentes mecanismos, como a induo de
auto-imunidade, imunossupresso e pela depo-
sio de imunocomplexos, que caracteriza a re-
ao de hipersensibilidade do tipo III. As leses
imunomediadas ocorrem com maior freqncia
em infeces persistentes ou crnicas, e princi-
palmente em infeces por vrus no-citolticos.
6.1 Imunopatologia mediada
por imunocomplexos
A conseqncia imunopatolgica mais fre-
qente em infeces vricas agudas ou persis-
tentes a formao de imunocomplexos. Esses
complexos so formados por anticorpos ligados
a partculas vricas ou a antgenos virais solveis.
Quando esses imunocomplexos so produzidos
em excesso, podem resultar em imunopatologia.
Isso ocorre quando os antgenos virais no so
eliminados ecientemente ou quando a replica-
o do vrus no controlada de forma eciente
pelo sistema imunolgico. Dependendo do tipo
de anticorpo e da sua capacidade neutralizante,
os complexos podem carrear vrus viveis que
podem penetrar produtivamente em clulas que
possuam receptores para anticorpos (receptores
para a poro Fc), como macrfagos e linfcitos
ativados. Leses de glomerulonefrite imunome-
diada so freqentemente observadas em infec-
es vricas como a hepatite infecciosa canina, pe-
ritonite infecciosa felina, imunodecincia felina,
peste suna clssica, peste suna africana, entre
outras.
Doenas mediadas por imunocomplexos so-
mente ocorrem quando a sua produo excede a
capacidade do organismo de remov-los dos te-
cidos e uidos corporais. Em condies normais,
os imunocomplexos produzidos so removidos
atravs de fagocitose por macrfagos e clulas
mesangiais antes que eles se depositem e causem
algum tipo de leso. Quando em excesso, a de-
posio dos imunocomplexos ocorre geralmente
em locais com funo de ltragem de lquidos
orgnicos, como os glomrulos renais, a parede
dos vasos sangneos, as membranas sinoviais e
o plexo coride. As leses causadas pela deposi-
o dos imunocomplexos no so resultantes da
sua ao fsica e sim da ativao local do com-
plemento e dos eventos inamatrios resultantes
dessa ativao.
A deposio de imunocomplexos na pare-
de dos vasos e nos tecidos seguida do aumento
da permeabilidade vascular local, mediada por
aminas vasoativas como a histamina e seroto-
nina. A ligao da regio Fc dos anticorpos dos
imunocomplexos a receptores Fc das membranas
provoca a liberao das aminas vasoativas prove-
nientes de baslos, plaquetas e mastcitos que
circulam no local da deposio. A poro Fc se
liga ao componente C1 e ativa a via clssica do
complemento. Ocorre a atrao de neutrlos
para o local de deposio, e a formao do com-
plexo de ataque membrana (MAC), o que con-
tribui para a injria local.
Os receptores para a poro Fc das imuno-
globulinas G esto presentes no plexo coride,
onde possuem distribuio periventricular. A
localizao desses receptores parece ter relevn-
cia na distribuio das leses por deposio de
imunocomplexos observadas na infeco pelo
MVV e CAEV em pequenos ruminantes (ovinos
e caprinos).
Na anemia infecciosa eqina, os anticorpos
se ligam a vrions livres no plasma, e os imuno-
complexos so depositados principalmente nos
glomrulos renais, levando glomerulonefrite
imunomediada. A circulao desses imunocom-
plexos tambm pode levar hemlise, resultan-
do em anemia.
O FeLV pode induzir deposio de imu-
nocomplexos e imunodecincia. Algumas ve-
zes ocorrem altos nveis de antgenos virais e a
formao e deposio de imunocomplexos leva
glomerulonefrite imunomediada. Em outros
casos, ocorre depleo linfide, em parte pela
ADCC. Essa depleo leva a uma maior suscepti-
bilidade a infeces secundrias, como estomati-
tes crnicas, gengivites, leses de pele e abscessos
subcutneos.
As leses imunomediadas podem ocorrer
tambm como seqelas de infeces virais, sem
envolvimento direto na patogenia da infeco,
como a sndrome oftlmica que ocorre em ces
convalescentes da infeco pelo CAdV-1. A leso
caracterizada pela deposio de imunocomple-
230 Captulo 8
xos na crnea, resultando em opacidade, conhe-
cida como olho azul.
6.2 Imunopatologia mediada por
linfcitos T citotxicos
Os linfcitos T citotxicos (CTLs, CD8+) pos-
suem um papel relevante na erradicao de infec-
es vricas dos hospedeiros, pela sua capacidade
de identicar e lisar clulas infectadas por vrus.
Os CTLs reconhecem peptdeos virais conjuga-
dos com molculas do MHC-I na superfcie das
clulas infectadas, atravs das molculas TCR +
CD8. Alm de lisar clulas infectadas, os CTLs
parecem ser capazes de erradicar certos vrus (p.
ex.: vrus da hepatite B humana), sem a necessi-
dade de lisar as clulas infectadas, provavelmen-
te interferindo (atravs de citocinas) com alguma
etapa da replicao viral. Dessa forma, a infeco
aguda pelo HBV geralmente erradicada por
uma resposta vigorosa mediada principalmente
por CTLs especcos para antgenos do vrus.
Por outro lado, a resposta imunolgica de
alguns pacientes no consegue erradicar a infec-
o e esses indivduos se tornam portadores de
infeco heptica crnica. Nesses indivduos, a
resposta mediada por CTLs fraca ou indetect-
vel, provavelmente devido a uma expanso clo-
nal deciente. Essa resposta fraca e contnua tem
sido implicada na patogenia da infeco crnica,
levando a leses necro-inamatrias crnicas no
fgado, ou seja, a injria celular de intensidade
fraca, porm contnua, resultaria em um proces-
so inamatrio persistente que resulta em hepa-
tite crnica. Eventos semelhantes ocorrem em ca-
mundongos inoculados com o LCMV.
6.3 Imunopatologia por induo de
auto-imunidade
A induo de auto-imunidade outro me-
canismo de imunopatologia que pode ocorrer em
algumas infeces virais. Nesse mecanismo, pode
ocorrer estimulao antignica por determinantes
antignicos de protenas virais que sejam seme-
lhantes a protenas do hospedeiro ou por distr-
bios na ativao de linfcitos, que podem produ-
zir anticorpos contra protenas prprias. Assim,
os linfcitos T que possuem papel essencial na
resposta imune contra vrus so responsveis
pela modulao da intensidade da resposta, li-
mitando os danos causados por uma resposta
agressiva. A expanso clonal dessas clulas em
resposta a epitopos de protenas do hospedeiro,
evento que pode ocorrer em determinadas infec-
es vricas, est envolvido na induo de auto-
imunidade. Esse processo ocorre, por exemplo,
na encefalomielite murina de Theiler, em que a
resposta especca de clulas T ao vrus ocorre
junto com uma resposta imune contra a prote-
na bsica da mielina, induzindo desmielinizao
auto-imune.
7 Imunossupresso por vrus
Grande parte das infeces vricas acom-
panhada por disfunes no sistema imunolgico,
muitas das quais podem ser detectadas in vivo e
demonstradas experimentalmente in vitro. Fre-
qentemente, essas alteraes ocorrem concomi-
tantemente com uma resposta imunolgica efeti-
va contra o vrus que as induziu. Por outro lado,
alguns vrus suprimem a resposta imunolgica
contra os seus antgenos, proporcionando condi-
es para o estabelecimento de infeces prolon-
gadas ou persistentes. As alteraes imunolgicas
causadas por infeces vricas podem aumentar
a susceptibilidade do hospedeiro a infeces se-
cundrias, dicultar ou retardar a resposta contra
a prpria infeco, ou levar a um desequilbrio
amplo e duradouro na resposta imunolgica con-
tra vrios agentes. Falha em responder a outros
antgenos, tanto por vacinao como infeco
natural, resposta deciente em provas de hiper-
sensibilidade retardada e resposta proliferativa
e citotxica decientes, tm sido associadas com
diversas infeces vricas em humanos e animais.
Ativao policlonal de linfcitos B, que pode re-
sultar em um aumento inespecco do nvel de
imunoglobulinas plasmticas e dicultar o diag-
nstico sorolgico da infeco, alm de reduzir
a resposta a antgenos recm-introduzidos, tam-
bm tem sido identicada em algumas infeces.
Patogenia das infeces vricas 231
Os mecanismos envolvidos nesses eventos,
no entanto, nem sempre so facilmente elucid-
veis, sobretudo pela diculdade de se mimetizar
experimentalmente in vitro a complexidade das
interaes imunolgicas que ocorrem in vivo. Em
geral, os mecanismos envolvidos com imunossu-
presso por vrus podem ser devidos replica-
o viral em clulas que participam da resposta
imunolgica, alterao da resposta imunolgica
normal pela resposta especca contra o vrus ou
a efeitos indiretos da replicao e/ou de produ-
tos virais. A Tabela 8.5 apresenta um resumo das
alteraes imunolgicas j identicadas em in-
feces vricas e os mecanismos potencialmente
envolvidos.
7.1 Replicao viral em clulas
envolvidas na resposta imunolgica

Diversos vrus replicam em clulas da linha-
gem mielide e/ou linfide, cujas clulas dife-
renciadas esto envolvidas com a resposta imu-
nolgica natural e adquirida. Para alguns vrus,
essas clulas se constituem nos principais alvos
da replicao, enquanto, para outros, elas repre-
sentam apenas uma parcela das populaes celu-
lares infectadas. A infeco e destruio de clu-
las imunolgicas o mecanismo mais atraente e
lgico na tentativa de explicar a imunossupresso
causada por vrus. No entanto, este no o ni-
Famlia Vrus
Flaviviridae
Picornaviridae
Retroviridae
Parvoviridae
Adenoviridae
Arteriviridae
Coronaviridae
Orthomyxoviridae
Paramyxoviridae
Rhabdoviridae
Arenaviridae
Reoviridae
Herpesviridae
Poxviridae
Famlia/
grupo
Alteraes imunolgicas Mecanismos
Susceptibilidade
a infeces
Proliferao
linfide
reduzida
Aumento nas
imunoglobu-
linas
Replicao em
clulas
imunolgicas
Ativao do
sistema
imune
Produtos de
moncitos e
linfcitos Th
Protenas
virais
+
+ +
+
+
+
+
+
+ +
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Tabela8.5. Principais alteraes imunolgicas e seus mecanismos deinduo, por diferentes grupos devrus
Fonte: adaptada de Griffin (1997).
232 Captulo 8
co e talvez nem seja o mecanismo mais relevante
envolvido na supresso da resposta imunolgica
por vrus.
Na verdade, na grande maioria das infec-
es vricas imunossupressivas estudadas, o per-
centual de clulas de determinada populao que
infectada raramente atinge 1%. Essa pequena
proporo infectada dicilmente seria suciente
para explicar a decincia imunolgica associada
com essas infeces.
O HIV, por exemplo, infecta linfcitos
TCD4+. Em clulas quiescentes, o vrus se encon-
tra em um estado de latncia, sem o genoma in-
tegrado nos cromossomos celulares. Por ocasio
da ativao dessas clulas, que seguida da inte-
grao do provrus DNA, a replicao viral ini-
ciada. A frao de linfcitos TCD4+ circulantes
que infectada situa-se em torno de 0,01 a 1%,
sendo que menos de 10% destas produzem pro-
gnie viral. Essa proporo de clulas infectadas
no justica as severas alteraes imunolgicas
observadas nos pacientes soropositivos, indican-
do a participao de outros mecanismos na imu-
nossupresso.
J o IBDV, um birnavrus de galinhas, infec-
ta liticamente populaes de linfcitos B que es-
to em diviso, resultando em imunossupresso
profunda pela extensiva perda dessas clulas.
Nos animais afetados, ocorre uma disfuno na
resposta humoral, mediada por linfcitos B.
Dentre os vrus animais que infectam clulas
do sistema imunolgico se incluem: a) vrus que
infectam linfcitos T: vrios retrovrus animais
(p. ex.: FeLV e FIV) e GHV-2 (vrus da doena de
Marek); b) vrus que infectam linfcitos B: birna-
vrus (IPNV e IBDV), vrus da leucemia murina
(MuLV), retrovrus smio, BVDV e BLV; c) vrus
que infectam clulas da linhagem monoctica-
macrofgica: VEEV, LCMV, vrus da inuenza,
vrus Maedi-Visna, CAEV, vrus da parainuen-
za, vrus da peste suna africana (ASFV). ASFV,
vrios coronavrus, circovrus, arterivrus (PRR-
SV, EAV, LDEV), EIAV e ALV.
7.2 Imunossupresso associada com a
ativao do sistema imune
Muitas alteraes da resposta imunolgica
ocorrem no contexto da resposta desencadeada
contra o vrus infectante. Seriam, portanto, con-
seqncias inevitveis da resposta necessria
para combater este agente e montar uma respos-
ta duradoura que proteja contra reinfeces. Nes-
se sentido, decincias imunolgicas podem ser
resultantes de: a) ativao generalizada de lin-
fcitos T sem os sinais apropriados (muitos dos
quais morrem por apoptose); b) produo anor-
mal (quantitativa e qualitativamente) de citoci-
nas; c) depleo de linfcitos T vrus-especcos
pela sua ativao em resposta ao agente. A parti-
cipao desses mecanismos na imunossupresso
evidenciada pelo fato de que os nveis mximos
de supresso coincidem com o aparecimento da
resposta imunolgica especca e erradicao do
agente. Esse tipo de imunossupresso tem sido
detectado em infeces pelo vrus da inuenza,
vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV), entre
outros.
7.3 Produtos de moncitos e linfcitos
ativados
Vrias interleucinas so produzidas por c-
lulas especializadas em resposta a infeces v-
ricas, incluindo os interferons do tipoI (IFN alfa
e beta), IL-2 e receptor de IL-2, entre outras. A
maioria dessas interleucinas atua modulando
e estimulando a resposta celular e/ou humoral
contra o agente infeccioso. No entanto, j foram
identicados vrios fatores produzidos por mo-
ncitos e linfcitos ativados que inibem a resposta
imunolgica. A resposta contra o vrus de New-
castle, por exemplo, caracterizada pela reduo
da atividade dos linfcitos T citotxicos contra
um segundo vrus, associada com supresso dos
nveis de IFN. As interleucinas 4 e 10 (IL-4, IL-10)
produzidas por linfcitos ativados suprimem a
funo de moncitos/macrfagos.
7.4 Protenas virais
Diversas protenas codicadas por vrus in-
terferem com a resposta imunolgica do hospe-
deiro, retardando ou suprimindo esta resposta,
permitindo, assim, a replicao e disseminao
do vrus no hospedeiro (Tabela 8.6). Algumas
dessas protenas podem ser secretadas pelas clu-
las infectadas e interferir com a funo de clulas
Patogenia das infeces vricas 233
no-infectadas. J foi demonstrado, por exemplo,
que a hemaglutinina do vrus da inuenza afeta
diretamente a funo de neutrlos. Outras pro-
tenas virais podem se ligar a receptores de su-
perfcie celular e interferir com a sua funo. Por
exemplo, as glicoprotenas gE e gI do HSV (e pro-
vavelmente de outros alfaherpesvrus) se ligam
na poro Fc das imunoglobulinas, impedindo
que ocorra a ativao do complemento na super-
fcie de clulas infectadas e prevenindo, assim, a
destruio dessas clulas. Protenas virais podem
tambm atuar como superantgenos, ligando-se a
receptores de linfcitos T e estimulando-os at a
exausto e depleo. A protena E3/19 K dos ade-
novrus se liga com a cadeia pesada da molcula
de MHC-I, retendo-a no retculo endoplasmti-
co. Assim, as clulas infectadas pelos adenovrus
no apresentam peptdeos virais associados com
o MHC-I e no so reconhecidas pelos linfcitos
Tc. Alguns poxvrus e herpesvrus tambm su-
primem a expresso de MHC-I na superfcie das
clulas infectadas. Os poxvrus codicam prote-
nas que so secretadas pelas clulas infectadas e
interferem com a ao de interleucinas produzi-
das em resposta infeco. Alguns desses vrus
codicam uma protena que se liga ao fator de
necrose tumoral (TNF) e o impede de se ligar
superfcie das clulas infectadas. O vrus do mi-
xoma codica uma protena homloga ao recep-
tor do interferon gama (IFN ). Os vrus da vacci-
nia e cowpox codicam protenas que se ligam e
inibem a funo da IL-1, IFN- e TNF.
Em resumo, a infeco e alterao da funo
de clulas envolvidas na resposta imunolgica
no o nico mecanismo de imunossupresso
causado por vrus. provvel que a imunossu-
presso observada nas infeces vricas, em sua
maioria, deva-se interao de mltiplos fatores,
que incluem citocinas/interleucinas, infeco e
disfuno de clulas imunolgicas e efeitos de
protenas virais especcas.
Apresentao de antgenos
peloMHC-I a linfcitos
citotxicos
Produo de citocinas por
macrfagos
Produo de citocinas por
linfcitos Th
Lise celular mediada por
anticorpos e complemento
Vrus do herpes simplex
Vrus vaccinia
Adenovrus
Vrus do mixoma (Pox)
Vrus vaccina
Cowpox
Orthopox
Tanapox
Vrus do mixoma
Vrus do herpes simplex
Cadeia pesada MHC-I
gE+gI
gC
Poro Fc das Igs
C3b
VCP C3b+C4b
E3/19K
ICP47
UL-18
?
?
crmA
orfB8R
38kDa
37kDa
?
TAP
TNF
IFN gama
IFN gama
IFN gama, IL-2, IL-5
TNF
IL-1 beta
TNF
IL-1 beta
Beta 2-microglobulina Citomegalovrus
Famlia Vrus
Mecanismo efetor Vrus Protena viral Protena-alvo
Tabela8.6. Protenas virais queinterferemcoma respostaimunolgicadohospedeiro
Fonte: adaptada de Griffin (1997).
234 Captulo 8
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RESPOSTA IMUNOLGICA CONTRA VRUS
Luiz Carlos Kreutz
9
1 Introduo
2 Resposta imune inata
2.1 Interferon tipo I
2.2 Sistema complemento
2.3 Clulas natural killer
2.4 Clulas dendrticas
2.4.1 Interao entre as DCs e clulas NK
2.4.2 O papel das DCs na resposta imune adquirida
3 Resposta imune adquirida
3.1 Reconhecimento de antgenos pelo sistema imunolgico
3.1.1 Reconhecimento de antgenos pelos linfcitos B
3.1.2 Reconhecimento de antgenos pelos linfcitos T
3.2 Resposta imune celular
3.2.1 Importncia dos linfcitos Tc na imunidade antiviral
3.3 Resposta imune humoral
3.4 Respostas primria e secundria/memria imunolgica
3.5 As imunoglobulinas na defesa antiviral
3.5.1 Mecanismos de ao das imunoglobulinas
3.6 O papel da resposta humoral e celular na imunidade antiviral
4 Mecanismos virais de evaso da resposta imune
4.1 Infeces latentes no sistema nervoso central
4.2 Variaes antignicas
4.3 Induo de tolerncia
4.4 Integrao do material gentico viral no genoma do hospedeiro
4.5 Infeco de stios imunologicamente privilegiados
4.6 Interferncia com funes do sistema imunolgico
239
239
240
242
242
243
243
243
244
244
244
245
249
250
250
252
253
254
255
256
256
256
257
257
257
258
5 Consideraes nais
6 Bibliograa consultada
258
258
1 Introduo
A imunidade ou resistncia do hospedeiro
contra infeces vricas depende da atuao in-
tegrada da resposta imune inata e da resposta
imune adquirida. Os mecanismos envolvidos na
resposta imune inata atuam imediatamente aps o
contato do hospedeiro com os antgenos virais,
no possuem capacidade de discriminao entre
os vrus e no necessitam de exposio prvia
para serem desencadeados. Os mecanismos en-
volvidos na resposta imune adquirida, por sua vez,
desenvolvem-se seqencialmente e de forma
mais lenta e sincronizada, resultando na induo
de clulas efetoras, que iro combater o agente, e
de clulas de memria, que possuem vida longa
e que sero efetivamente reestimuladas em expo-
sies posteriores ao mesmo agente.
A diviso entre a resposta imune inata e
adquirida no absoluta, e essas duas formas
de resposta esto interligadas, atuando conjun-
tamente no combate aos agentes agressores. Os
principais protagonistas da conexo entre essas
respostas so as clulas dendrticas (dendritic cells,
DCs). Essas clulas circulam pelos tecidos perif-
ricos, onde capturam antgenos, e se dirigem aos
rgos linfides secundrios, onde estimulam as
clulas linfides. Alm disso, as infeces vricas
so acompanhadas de estmulos qumicos e celu-
lares que formam uma intrincada rede de infor-
maes, que visam maximizar o mecanismo imu-
nolgico mais efetivo contra a maioria dos vrus:
os linfcitos T citotxicos (Tc).
Os componentes da imunidade inata so ati-
vados precocemente aps a infeco e se encarre-
gam de limitar e restringir a replicao viral at
que os mecanismos da resposta imune adquirida
tenham sido desencadeados. Na resposta inata
contra vrus, atuam principalmente o interferon
do tipo I (IFN-I), clulas natural killer (NK) e os
componentes ativos do complemento. A resposta
imune adquirida mediada por clulas (linfci-
tos T) e por molculas circulantes (anticorpos),
produzidas por clulas derivadas dos linfcitos
B. As citocinas (ou interleucinas [ILs]) so pep-
tdeos produzidos por uma variedade de clulas
que moderam e inuenciam a funo de outras
clulas do sistema imunolgico.
2 Resposta imune inata
A resposta imune inata (tambm denomina-
da natural ou inespecca) mediada por clulas e
molculas. Previamente estimulao dessa res-
posta, mecanismos naturais de proteo contra a
penetrao de patgenos, como a pele, os plos,
o muco, enzimas, peptdeos antivirais e anti-bac-
terianos representam as barreiras iniciais contra
os agentes infecciosos. A ausncia ou disfuno
desses mecanismos provavelmente resultaria em
um aumento da freqncia e da severidade das
infeces. Embora sejam considerados compo-
nentes da imunidade inata, essas barreiras no
sero abordadas nessa reviso. Aqui, ser dado
enfoque aos mecanismos imunolgicos naturais
que efetivamente participam da imunidade anti-
viral e, principalmente, que cooperam com a ati-
vao da resposta imune especca.
A resposta imune inata assim denominada
em razo de algumas caractersticas peculiares,
tais como: a) atua imediatamente aps o con-
tato com o agente; b) no discrimina diferentes
tipos de antgenos; c) atua com intensidade rela-
tivamente constante e d) no possui memria.
questionvel se, agindo isoladamente, a resposta
inata seria capaz de erradicar uma infeco vri-
240 Captulo 9
ca estabelecida. No entanto, os seus mecanismos
efetores se constituem em obstculos importan-
tes, que retardam a progresso do processo infec-
cioso, controlando-o temporariamente e, assim,
permitindo o desenvolvimento da imunidade es-
pecca. Os principais componentes da resposta
inata contra vrus so representados pelo IFN-I,
sistema complemento, clulas NK e DCs. Esses
mecanismos so desencadeados seqencialmente
aps a infeco vrica e antecedem o desenvolvi-
mento dos mecanismos especcos (Figura 9.1).
2.1 Interferon
O primeiro obstculo infeco viral re-
presentado pelos IFN-I, que foram justamente
identicados pela sua capacidade de interferir
com a replicao viral. O IFN-I compreende dois
tipos principais: interferon alfa (IFN-) e interfe-
ron beta (IFN-), que so produzidos por vrios
tipos de clulas em resposta s infeces vricas.
Vrios vrus so potentes indutores de IFN-I, e
a sua induo est associada com a produo de
RNA de ta dupla no interior da clula durante a
replicao viral. A interao de alguns vrus com
os receptores celulares tambm parece estimular
a produo de IFN-I. Qualquer clula nucleada
capaz de produzir IFN-I em resposta a uma infec-
o por vrus, mas evidncias recentes indicam
que as DCs plasmacitides (pDCs) representam a
principal fonte dessa citocina.
O IFN-I produzido por clulas infectadas
secretado no meio extracelular e se distribui lo-
calmente, interagindo com as clulas vizinhas
e induzindo um estado de resistncia antiviral
(Figura 9.2). Essa interao mediada por recep-
tores especcos na superfcie celular, que esto
amplamente distribudos nos tecidos. A ligao
do IFN-I aos receptores desencadeia uma srie
de sinais intracelulares que induzem a transcri-
o de genes cujos produtos esto envolvidos na
resposta mediada pelos IFNs. Os principais efei-
tos antivirais do IFN-I so devidos degradao
de RNAs mensageiros (mRNA) e inibio da tra-
duo. Dessa forma, esta citocina inibe a sntese
de protenas na clula-alvo, tornando-a um meio
imprprio para a replicao viral, uma vez que
os vrus dependem integralmente da maquinaria
celular de sntese protica para a sua replicao.
Ativao de:
Clulas NK;
Linfcitos Tc;
Macrfagos.
Aumento da
expresso
do MHC-I
Estado de resistncia antiviral
-
(inibio da sntese protica, degradao de mRNA)
1
2 2 3 3
4
5
6
4
2
Figura 9.2. Induo e principais funes do IFN-I na resposta imune inata. A presena de RNA de fita dupla em
clulas infectadas por vrus induz a produo de IFN-I (1), que secretado no meio extracelular (2). O IFN-I interage
com receptores nas clulas vizinhas (3) e desencadeia uma srie de reaes que resultam na induo de um estado de
resistncia antiviral (4). OIFN-I tambmpromove umaumentona expressodoMHC-I (5), almde ativar clulas NK,
linfcitos Tc e macrfagos (6).
Resposta imunolgica contra vrus 241
O IFN-I desencadeia uma srie de reaes
intracelulares que levam expresso da enzima
2-5-adenilato sintetase. Essa enzima sintetiza
oligmeros de adenina (oligo-A), que, por sua
vez, ativam a endorribonuclease RNAse L. A
ativao da RNAse L resulta na degradao de
mRNA celulares e virais. Alm disso, o IFN-I
promove a ativao da enzima protena kinase R
(PKR), que fosforila e inativa o fator de iniciao
da traduo (elongation initiation factor 2 - eIF-2).
Com isso, a traduo de mRNAs celulares e virais
tambm ca inibida. Outro grupo de IFN-I induz
um estado antiviral pela induo das protenas
Mx, que tambm contribuem para a inibio da
sntese protica celular.
O IFN-I atua tambm como fator de sobre-
vivncia para as pDCs, promove o desenvolvi-
mento, maturao e atividade microbiocida dos
macrfagos e ativa as clulas NK, que, por sua
vez, interagem sinergisticamente com as DCs.
Alm de seu papel na imunidade inata, o
IFN-I possui um papel importante no desenvol-
vimento da imunidade especca, por meio de
diferentes mecanismos, tais como: a) induo da
expresso de molculas do complexo de histo-
compatibilidade principal do tipo I (MHC-I), o
que favorece o processamento e a apresentao
de antgenos endgenos; b) ativao das DCs,
produzindo um aumento da expresso de recep-
tores e produo de citocinas; c) estimulao da
Figura 9.3. Mecanismos efetores associados com a resposta imune inata. A infeco viral (1) resulta na produo e
secreo de IFN-I pelas clulas infectadas (2). O IFN-I secretado induz um estado de resistncia antiviral nas clulas
vizinhas (3); ativa clulas NK (4), DCs (5), linfcitos Tc (6) e estimula a atividade fagoctica dos macrfagos (7).
Simultaneamente, a presena de vrions pode levar ativao do complemento (8); cujos componentes ativados
atraem e ativam fagcitos (9, 10), opsonizam vrions, facilitando a fagocitose (11) ou promovem a lise de vrus
envelopados (12).
1
2
3
4
7
6
5
8
9
10
12
11
Dcs
Linfcitos Tc
Fagcito
NK
Clula
infectada
Clulas vizinhas
242 Captulo 9
sobrevivncia e proliferao de linfcitos T de
memria; d) estimulao da produo de inter-
feron gama (IFN-) pelas DCs e linfcitos T; e)
participao direta e indireta na diferenciao e
atividade dos linfcitos B. Os mecanismos de ati-
vao e as atividades desempenhadas pelo IFN-I
na resposta imune infeces vricas esto ilus-
trados nas Figura 9.2 e 9.3.
2.2 Sistema complemento
O sistema complemento composto por um
conjunto de protenas presentes no plasma san-
gneo na forma inativa. Essas protenas podem
ser ativadas pela presena de complexos imunes,
formados pela ligao de imunoglobulinas com
antgenos (via clssica de ativao), pela deposi-
o espontnea do componente C3b do comple-
mento na superfcie de microorganismos (via al-
ternativa) ou devido ligao com protenas que
se ligam manose (via da lecitina). A ativao
do complemento por qualquer uma dessas vias
resulta em uma cascata de ativao seqencial,
com a formao de molculas intermedirias que
possuem diversas atividades biolgicas, princi-
palmente ligadas ativao do processo inama-
trio. Dentre as funes dos componentes ativa-
dos do complemento destacam-se: opsonizao;
quimiotaxia e ativao de neutrlos e outras
clulas inamatrias; degranulao de mastci-
tos com conseqente vasodilatao e aumento da
permeabilidade capilar e formao do complexo
de ataque membrana (membrane attack complex,
MAC), formado pela associao dos componen-
tes C5-9 e que se inserem na membrana de clulas
infectadas ou no envelope de vrions, resultando
na sua destruio.
O componente mais importante do comple-
mento denominado C3, que, a partir da ativa-
o da cascata, clivado de forma contnua e es-
pontnea, gerando os produtos C3a e C3b. Uma
vez produzido, o C3b se deposita em superfcies
que no possuam cido silico, como o envelope
de diversos vrus, e, assim, desencadeia a cascata
de ativao do complemento, que culmina com a
formao do MAC e com a destruio do vrion. A
presena de cido silico na superfcie das clulas
animais (e eventualmente em algumas bactrias
e fungos) torna-as resistentes ao complemento,
pois inibe a ligao de alguns componentes que
do continuidade cascata e posterior formao
do MAC.
2.3 Clulas natural killer
As clulas natural killer (NK) so derivadas
de progenitores linfides da medula ssea e foram
assim denominadas em razo de sua capacidade
de destruir clulas tumorais e clulas infectadas
por vrus na ausncia de um reconhecimento an-
tgeno-especco. Constituem o que se conven-
cionou chamar de terceira populao de linfcitos
(linfcitos B, T e clulas NK). Por no possurem
marcadores especcos de linfcitos B ou de lin-
fcitos T, foram inicialmente chamadas de clulas
nulas (null cells). As clulas NK esto presentes
principalmente nos tecidos linfides perifricos e
atuam direta, pela capacidade de destruir clulas
infectadas, e indiretamente mediante a secreo
de citocinas. A atividade das clulas NK precede
a ativao da resposta imune especca. A des-
truio de clulas infectadas por vrus realizada
inicialmente pelas clulas NK e, posteriormente,
pelos linfcitos Tc.
A capacidade das clulas NK em distinguir
clulas infectadas de clulas no-infectadas est
relacionada com a presena de receptores inibido-
res da destruio (killing inhibitory receptors = KIR)
na sua superfcie. Esses receptores reconhecem as
molculas do complexo de histocompatibilidade
principal do tipo I (MHC-I), que esto presentes
na superfcie de virtualmente todas as clulas do
organismo. A expresso do MHC-I est geral-
mente reduzida em clulas infectadas por vrus e
em clulas tumorais. Dessa forma, utilizando os
receptores KIR, as clulas NK podem detectar se
uma clula est expressando molculas do MHC-
I em nveis normais. A ligao dos KIR em mol-
culas do MHC-I inibe a ao das clulas NK. No
caso da expresso das molculas de MHC-I estar
reduzida, essa clula torna-se alvo de destruio
pelas clulas NK.
O mecanismo utilizado pelas clulas NK
para destruir as clulas-alvo semelhante ao uti-
lizado pelos linfcitos Tc. O contato com a clula
infectada estimula as NK a liberarem perforinas
Resposta imunolgica contra vrus 243
no meio extracelular. As perforinas so protenas
semelhantes aos componentes C5-C9 do comple-
mento e produzem pequenos poros na membra-
na plasmtica da clula-alvo. As clulas NK libe-
ram ento as granzimas, que penetram por estes
poros e induzem morte celular por apoptose.
Durante a resposta inata, as clulas NK des-
troem clulas infectadas independentemente do
reconhecimento de antgenos especcos. No cur-
so da resposta imune especca e aps a produo
de anticorpos antivirais, as clulas NK tambm
podem participar da destruio de clulas infec-
tadas. Nesse caso, anticorpos produzidos contra
antgenos virais se ligam em antgenos virais pre-
sentes na superfcie das clulas infectadas. Essa
ligao facilita o seu reconhecimento pelas clu-
las NK, pois estas possuem receptores para a por-
o Fc das imunoglobulinas. Essa atividade de-
nominada citotoxicidade celular dependente de
anticorpos (antibody dependent cellular citotoxicity,
ADCC) e tambm pode ser mediada por outras
clulas que possuem receptores para a poro Fc
(macrfagos, neutrlos e eosinlos).
Alm de destruir clulas infectadas por v-
rus, as clulas NK contribuem para a defesa anti-
viral pela secreo de vrias citocinas, incluindo
o IFN- e fator de necrose tumoral alfa (TNF-).
Essas clulas tambm possuem receptores para
vrias citocinas (IL-2, IL-12 e TNF-) que podem
inuenciar na sua atividade.
2.4 Clulas dendrticas
As clulas dendticas (DCs) constituem uma
populao heterognea de clulas que diferem
entre si em relao origem, fentipo, localiza-
o, funo e necessidades para o desenvolvi-
mento. As DCs que se originam de progenitores
mielides da medula ssea so semelhantes aos
moncitos e so denominadas de DCs mielides
(mDCs). Por outro lado, as DCs que se originam
dos progenitores linfides so denominadas de
DCs plasmacitides (pDCs) e se assemelham aos
plasmcitos. As mDCs so encontradas em qua-
se todos os tecidos e rgos, com exceo do
crebro, dos olhos e dos testculos. So especial-
mente abundantes nos linfonodos, na pele e em
tecidos subjacentes a superfcies mucosas, locais
freqentes de penetrao de agentes virais. As
clulas de Langerhans (LC), por exemplo, esto
localizadas na epiderme; DCs intersticiais esto
localizadas na derme, nas mucosas e em tecidos
perifricos. Por outro lado, as pDCs encontram-
se principalmente nos rgos linfides, como a
medula ssea, timo, bao, tonsilas e linfonodos.
As mDCs desempenham a importante funo de
apresentar antgenos aos linfcitos T e transferir
antgenos aos linfcitos B, eventos que se consti-
tuem no principal elo entre a imunidade inata e
a imunidade adquirida. Alm disso, as pDCs so
as principais clulas produtoras de IFN-I durante
as infeces virais e participam ativamente da es-
timulao das clulas NK.
2.4.1 Interao entre as DCs e clulas NK
As DCs estimulam as clulas NK por meio
de mediadores solveis e tambm por contato di-
reto. A interao entre as DCs e as clulas NK
importante para a ativao das prprias DCs. A
ativao das DCs pelas clulas NK depende de
contato direto, da proporo NK:DCs e de citoci-
nas como o TNF-. Clulas NK pr-ativadas por
IL-2 so potentes estimuladoras das DCs, agindo
tanto de forma isolada como em sinergismo com
estmulos inamatrios, como os lipopolissaca-
rdeos (LPS). A interao entre as clulas NK e
DCs parece ocorrer nos locais da infeco, onde
existem DCs imaturas residentes e para onde
migram as clulas NK em resposta a estmulos
inamatrios. Essa interao pode ocorrer tam-
bm nos linfonodos e em outros rgos linfides
secundrios, para onde as DCs migram aps cap-
turar antgenos nos tecidos perifricos.
2.4.2 O papel das DCs na resposta
imune adquirida
As DCs constituem o principal elo entre a
imunidade inata e a imunidade adquirida. As
DCs so especializadas na captura e apresenta-
o de antgenos aos linfcitos T, evento essencial
para a estimulao dessas clulas em resposta a
antgenos. Por sua vez, a estimulao de linfcitos
Th resulta na produo de citocinas que ativam
tanto a resposta mediada por clulas (Tc) como a
resposta humoral (linfcitos B plasmcitos). Os
244 Captulo 9
estmulos para a proliferao dessas clulas so
fornecidos por mediadores solveis (citocinas ou
interleucinas) produzidos pelas prprias DCs, ou
no microambiente dos linfonodos, onde os linf-
citos so ativados.
As DCs encontram-se nos principais locais
de penetrao dos vrus e tambm nos linfonodos
e em outros tecidos linfides secundrios. Con-
seqentemente, o contato dos vrus ou de suas
protenas com as DCs praticamente inevitvel
e fundamental para que as DCs processem ade-
quadamente os antgenos virais e os apresentem
s diferentes populaes de linfcitos.
Os mecanismos envolvidos na resposta imu-
ne inata contra vrus esto ilustrados na Figura
9.3.
3 Resposta imune adquirida
Os mecanismos imunolgicos especcos
contra as infeces vricas so desencadeados
aps a estimulao direta ou indireta dos linfci-
tos T e B pelos antgenos virais e possuem como
caractersticas principais: especicidade (cada c-
lula reconhece apenas um determinante antig-
nico); diversidade (capacidade de reconhecer uma
grande variedade de antgenos) e memria imu-
nolgica (capacidade de produzir uma resposta
qualitativa e quantitativamente diferente em ex-
posies subseqentes a um determinado antge-
no). Alm disso, a resposta imune especca se
caracteriza pela tolerncia a antgenos do prprio
organismo.
De acordo com os mecanismos efetores, a
resposta imune especca pode ser dividida em
celular e humoral. A resposta celular media-
da pelos linfcitos T auxiliares (T helper ou Th)
e linfcitos Tc. A resposta humoral mediada
pelos anticorpos produzidos pelos plasmcitos,
clulas derivadas dos linfcitos B. Embora sejam
tratados separadamente com ns didticos, os
mecanismos envolvidos nessas duas respostas
so complementares e atuam conjuntamente no
combate s infeces vricas. A importncia rela-
tiva desses mecanismos, no entanto, varia entre
os diferentes vrus, de acordo com a sua biologia.
Para alguns vrus, a resposta mediada por linfci-
tos Tc fundamental na erradicao da infeco;
para outros, a resposta humoral desempenha um
papel mais importante na proteo. O conheci-
mento dos mecanismos especcos envolvidos na
resposta imunolgica contra cada vrus funda-
mental para a elaborao de vacinas.
A etapa inicial da resposta imunolgica es-
pecca o reconhecimento de antgenos pelos
linfcitos Th, Tc e B. Em resposta ao contato com
o antgeno, os linfcitos Th secretam vrias citoci-
nas, que estimulam a atividade de outras clulas
envolvidas na resposta imunolgica. Os linfcitos
Tc reconhecem e destroem clulas infectadas por
vrus e tambm secretam algumas citocinas. Esti-
mulados pelo contato com o antgeno, os linfci-
tos B proliferam e se diferenciam em plasmcitos.
Os anticorpos, produzidos pelos plasmcitos so
protenas solveis que possuem diversas funes
no combate aos agentes invasores.
3.1 Reconhecimento de antgenos pelo
sistema imunolgico
A capacidade de distinguir antgenos pr-
prios de antgenos no-prprios (neste caso, os
antgenos virais) se constitui no evento central
da resposta imune adquirida. Antgenos no-
prprios devem ser reconhecidos como tal, e o
seu reconhecimento deve induzir uma resposta
que resulte na sua eliminao e/ou inativao.
Por outro lado, os antgenos prprios devem ser
igualmente reconhecidos, porm devem ser tole-
rados. Ou seja, antgenos do prprio organismo
no devem estimular uma resposta imunolgi-
ca. A resposta imunolgica especca contra v-
rus mediada por diferentes subpopulaes de
linfcitos: os linfcitos Th, Tc e B. Essas trs po-
pulaes de linfcitos apresentam mecanismos
efetores distintos e reconhecem os antgenos de
formas diferentes. A seguir sero apresentados
os mecanismos de reconhecimento de antgenos
pelos linfcitos B e T.
3.1.1 Reconhecimento de antgenos
pelos linfcitos B
Os linfcitos B reconhecem os antgenos vi-
rais atravs de receptores de membrana denomi-
Resposta imunolgica contra vrus 245
nados BCRs (B cell receptors). Os BCRs so mol-
culas de imunoglobulinas das classes IgD e IgM,
que possuem uma regio altamente varivel, ca-
paz de se ligar a uma variedade muito grande de
determinantes antignicos. Os BCRs podem se
ligar a antgenos de qualquer natureza qumica,
sejam protenas, carboidratos, lipdios ou outras
macromolculas, ou seja, os linfcitos B podem
reconhecer e responder a antgenos proticos e
no-proticos, desde que esses possuam regies
complementares s regies variveis dos seus
BCRs. Isso faz com que os linfcitos B reconhe-
am antgenos na sua forma nativa, solvel ou
no, sem a necessidade de processamento prvio.
No caso dos vrus, os principais antgenos reco-
nhecidos pelos linfcitos B so as protenas de
superfcie dos vrions, devido a sua localizao
e acessibilidade aos BCRs. Protenas virais inse-
ridas em membranas celulares, alm de prote-
nas secretadas pelas clulas infectadas, tambm
podem estimular os linfcitos B. Os linfcitos B
tambm podem reconhecer antgenos virais cap-
turados e armazenados na superfcie das DCs,
sob a forma de pequenas esferas (icossomos). Do
ponto de vista de proteo, os anticorpos induzi-
dos contra protenas de superfcie (do capsdeo
ou envelope) possuem importncia especial, pois
podem se ligar e neutralizar a infectividade dos
vrus.
Os locais de contato entre os antgenos e os
linfcitos B locais de reconhecimento do antge-
no so principalmente os rgos linfides peri-
fricos, dentre estes, os linfonodos.
3.1.2 Reconhecimento de antgenos
pelos linfcitos T
O reconhecimento de antgenos pelos linf-
citos T mais complexo e requer que o antgeno
seja previamente processado e apresentado por
clulas e molculas especializadas. Os linfci-
tos T no so capazes de responder a antgenos
em sua forma nativa, solvel ou no, e somente
so estimulados por antgenos proticos, ou seja,
apenas as protenas virais estimulam a resposta
celular. Dependendo da sua origem e da forma
como so processadas, as protenas virais podem
ser reconhecidas pelos linfcitos Th, pelos Tc ou
por ambos. A forma de reconhecimento de ant-
genos por esses dois tipos de linfcitos, no entan-
to, diferente:
3.1.2.1 Reconhecimento de antgeno
pelos linfcitos Th
Os linfcitos Th reconhecem antgenos virais
atravs de seus receptores de membrana, deno-
minados TCRs (T cell receptors), juntamente com
a molcula acessria CD4. Por isso, so tambm
chamados de linfcitos T CD4+. Para que um an-
tgeno protico seja reconhecido pelo complexo
TCR+CD4 e estimule o linfcito Th, ele deve ser
previamente processado e apresentado de forma
adequada por clulas especializadas. O processa-
mento do antgeno protico envolve a sua inter-
nalizao por endocitose ou fagocitose, clivagem
enzimtica em peptdeos de 12 a 16 aminocidos
e conjugao dos peptdeos com molculas do
complexo de histocompatibilidade principal do
tipo II (MHC-II). Esses processos ocorrem em
compartimentos citoplasmticos especializados
(endossomos, fagossomos e retculo endoplasm-
tico). Os complexos MHC-II + peptdeo so, en-
to, transportados at a superfcie celular, onde
cam expostos espera do reconhecimento pelos
linfcitos Th. O reconhecimento dos complexos
MHC-II + peptdeos realizado pelos receptores
TCR+CD4 existentes na membrana dos linfcitos
Th e resulta na ativao desses linfcitos. Essa
via de apresentao denominada exgena, pois
ocorre com protenas extracelulares que so pre-
viamente internalizadas e processadas. Protenas
estruturais dos vrions, protenas virais secreta-
das pelas clulas infectadas ou extravasadas no
meio extracelular aps a lise celular podem ser
processadas desta maneira e ser apresentadas
aos linfcitos Th. Em resumo, os linfcitos Th re-
conhecem antgenos virais proticos, desde que
devidamente processados e apresentados em as-
sociao com molculas do MHC-II por clulas
especializadas (Figura 9.4).
Embora um nmero grande de clulas do or-
ganismo seja capaz de capturar protenas e outras
macromolculas no meio externo e process-las,
somente um grupo restrito de clulas expressa
molculas do MHC-II. Dentre estas, incluem-se
246 Captulo 9
as clulas da linhagem monoctica/macrofgica
(moncitos, macrfagos, CDs, clulas interdi-
gitantes e LC), algumas clulas endoteliais e os
linfcitos B. Ou seja, somente essas clulas so ca-
pazes de apresentar antgenos virais presentes no
meio extracelular (exgenos) aos linfcitos Th. As
clulas que possuem como funo precpua a cap-
tura, processamento e apresentao de antgenos
aos linfcitos Th so denominadas genericamente
clulas apresentadoras de antgenos (APCs) pro-
ssionais e, dentre estas, destacam-se as DCs e os
macrfagos. Embora no se constituam em APCs
prossionais, os linfcitos B tambm apresentam
antgenos virais de forma eciente aos linfcitos
Th. A via exgena de apresentao de antgenos
aos linfcitos Th est representada esquematica-
mente na Figura 9.4.
3.1.2.2 Reconhecimento de antgeno
pelos linfcitos Tc
Os linfcitos Tc reconhecem protenas virais
atravs dos TCRs, juntamente com a molcula
acessria CD8. Por isso, essas clulas tambm so
chamadas de linfcitos T CD8+. Para que as pro-
tenas virais sejam reconhecidas pelos receptores
TCR+CD8 e estimulem os linfcitos Tc, tambm
devem ser adequadamente processadas e apre-
sentadas. No entanto, essa forma de processa-
mento e apresentao somente ocorre com as
Figura 9.4. Apresentao de antgenos virais extracelulares e resposta por linfcitos Th. Antgenos virais
extracelulares so internalizados por endocitose e/ou fagocitose (1) e processados proteoliticamente no interior de
vesculas (2), gerando peptdeos que so conjugados com molculas do MHC-II no retculo endoplasmtico (3). Os
complexos peptdeo-MHC-II so transportados at a superfcie celular (4), onde so reconhecidos pelos linfcitos Th
(5). Os linfcitos Th, estimulados por esse contato, secretam interleucinas (6) que possuem diversas aes
modulatrias sobre as clulas envolvidas narespostaimunolgica.
Clula apresentadora
de antgeno (APC)
ncleo
Linfcito Th
1
2
3
4
5
6
6
Resposta imunolgica contra vrus 247
protenas sintetizadas no interior das clulas du-
rante a infeco, e no com protenas extracelu-
lares que so internalizadas. Por isso, essa via de
apresentao denominada endgena. Protenas
virais produzidas no interior das clulas durante
o ciclo replicativo so clivadas enzimaticamente
em peptdeos de 8 a 12 aminocidos, que so con-
jugados com molculas do MHC-I. Os complexos
MHC-I+peptdeos virais so transportados at
a superfcie celular, onde cam expostos (Figu-
ra 9.5). Esse um processo siolgico e resulta
tambm na apresentao de fragmentos de pro-
tenas celulares. No entanto, apenas os peptdeos
resultantes da clivagem das protenas virais so
capazes de estimular os linfcitos Tc. O reconhe-
cimento dos complexos MHC-I+peptdeo rea-
lizado pelos complexos TCR+CD8 existentes na
membrana dos linfcitos Tc. Essa interao gera
estmulos que, em conjunto com citocinas produ-
zidas pelos Th e DCs, levam ativao dos linf-
citos Tc. Resumindo, os linfcitos Tc reconhecem
protenas virais endgenas, aps o seu processa-
mento e conjugao com molculas do MHC-I.
Como, virtualmente, todas as clulas do organis-
mo com exceo dos neurnios expressam o
MHC-I, a infeco de quaisquer dessas clulas
por vrus ir resultar no reconhecimento e res-
posta mediada por linfcitos Tc. Acredita-se, no
entanto, que as DCs sejam mais efetivas na indu-
o dos linfcitos Tc, pois, alm da apresentao
Replicao viral
prossegue...
...
Qualquer clula nucleada
ncleo
1
2
3
4
5
6
7
7
Linfcito Tc
Figura 9.5. Apresentao de antgenos virais endgenos e resposta por linfcitos Tc. Aps a penetrao do vrus (1), as
protenas virais so produzidas pelo aparato celular de traduo (2). Parte dessas protenas so processadas pelos
proteassomos (3), resultando empeptdeos que so conjugados commolculas do MHC-I no RE (4). Esses complexos
so transportados at a superfcie celular (5), onde sero reconhecidos pelos linfcitos Tc (6). Ativados pelo contato
como antgeno e por citocinas, os linfcitos Tc liberamo contedo citotxico de seus grnulos (7), destruindo a clula
infectada.
248 Captulo 9
do MHC-I+ peptdeos, so capazes de fornecer
os sinais adicionais para a ativao integral dos
Tc. Essa via de apresentao e reconhecimento de
antgenos muito importante na resposta a infec-
es vricas, pois permite ao sistema imunolgico
reconhecer clulas infectadas por vrus e ativar o
mecanismo mais efetivo para a sua destruio, os
linfcitos Tc. Tanto as protenas estruturais como
as no-estruturais produzidas durante a replica-
o viral podem ser processadas e apresentadas
aos linfcitos Tc. A via endgena de apresentao
de antgenos aos linfcitos Tc est representada
esquematicamente na Figura 9.5.
As DCs desempenham um papel muito im-
portante no processo de apresentao de antge-
nos a outras clulas do sistema imunolgico. As
DCs podem ser infectadas por uma variedade de
vrus e, assim, apresentar fragmentos de prote-
nas virais conjugadas com o MHC-I aos linfcitos
Tc. Alm de apresentar esses antgenos, as DCs
fornecem estmulos qumicos (citocinas) para a
ativao integral desses linfcitos (Figura 9.6). As
DCs podem detectar vrions ou protenas virais
atravs de receptores do tipo TLR 7 e 9, resultan-
do em uma cascata de eventos intracelulares que
as induzem a produzir citocinas e acelerar o seu
Figura 9.6. Interaes entre as DCs e os linfcitos e estimulao da resposta adquirida. As DCs so capazes de
apresentar peptdeos exgenos aos linfcitos Th(1), estimulando-os a produzir citocinas do tipo Th1 (2a) ouTh2 (2b).
Oreconhecimento de antgenos emsoluo ou nos icossomos da superfcie das DCs (3), juntamente comas citocinas
do tipo Th2, estimula os linfcitos B a proliferar (4) e se diferenciar em plasmcitos, que so clulas secretoras de
anticorpos (5). Os linfcitos Tc podem reconhecer antgenos endgenos na superfcie de clulas infectadas ou nas
DCs (6). Este reconhecimento, juntamente comas citocinas do tipo Th1 (2a), ativa os linfcitos Tc que se tornamCTLs
(7). Ao reconheceremo mesmo padro antignico (MHC-I+ peptdeo viral) na membrana de clulas infectadas (8), os
CTLs descarregamoseuarsenal citotxicoqueresultaemapoptosee morte celular (9).
Clula
dendrtica
Linfcito Th
Linfcito Tc Linfcito B
Clula infectada
Plasmcito
CTL
1
2a
2b
3
3
4
5
6
7
8
9
Resposta imunolgica contra vrus 249
processo de maturao. As DCs possuem pro-
longamentos citoplasmticos denominados den-
dritos, que aumentam a sua superfcie, facilitan-
do, com isso, a interao com as demais clulas
do sistema imunolgico. As DCs so capazes de
capturar e armazenar antgenos em pequenas es-
feras na sua superfcie, denominadas icossomos.
Dessa forma, as DCs podem oferecer e transferir
antgenos para outras DCs, para macrfagos e
mesmo para os linfcitos B. As interaes entre
as DCs e as clulas envolvidas na resposta imune
adquirida esto ilustradas na Figura 9.6
O contato entre os antgenos e as clulas do
sistema imunolgico apresentao e reconheci-
mento de antgenos ocorre principalmente nos
linfonodos e outros tecidos linfides secundrios.
Nesses tecidos, o microambiente existente favore-
ce as interaes entre o antgeno, as DCs e outras
APCs, linfcitos T e B e clulas acessrias, resul-
tando na estimulao eciente de uma gama de
clulas envolvidas com a resposta imunolgica
especca. Alm de se constituir no evento cen-
tral da imunidade adquirida, o reconhecimento
de antgeno e a conseqente estimulao de po-
pulaes de linfcitos T e B representa a etapa
inicial da resposta imunolgica especca.
3.2 Resposta imune celular
A resposta imune especca mediada por
clulas representada pela atividade dos linfci-
tos T, pois a participao das demais clulas (ma-
crfagos, DCs e clulas NK) faz parte da resposta
inata e ocorre de forma inespecca. Os mecanis-
mos efetores dos linfcitos Th e Tc so distintos.
Os linfcitos Th modulam a resposta imunolgi-
ca atravs das citocinas, que agem estimulando e
modulando a atividade de uma variedade de c-
lulas do sistema imune. Os linfcitos Tc possuem
a funo precpua de identicar e destruir clulas
infectadas por vrus.
De acordo com as citocinas produzidas, dois
tipos de respostas mediadas por linfcitos Th po-
dem ser identicadas: as respostas do tipo Th1 e
Th2. A resposta do tipo Th1 caracterizada pela
secreo de IFN-I, IL-2, IL-12 e TNF-. Essas ci-
tocinas atuam principalmente na estimulao
da imunidade celular (linfcitos Tc, DCs, clulas
NK e macrfagos). A resposta do tipo Th2 carac-
teriza-se pela secreo de IL-2, IL-4, IL-5, IL-10,
citocinas que atuam principalmente na ativao
da imunidade humoral. Essas citocinas possuem
papel importante na ativao, proliferao e di-
ferenciao de linfcitos B e secreo de anticor-
pos, ou seja, as citocinas produzidas pelos Th em
resposta ao antgeno estimulam tanto a resposta
celular como a resposta humoral. O balano entre
as respostas do tipo Th1 e Th2 depende da bio-
logia de cada vrus e de suas interaes com o
sistema imunolgico.
A funo principal dos Tc na resposta an-
tiviral a destruio de clulas infectadas por
vrus. Para muitas infeces vricas, a resposta
celular, mediada pelos Tc, representa a forma
mais eciente de combate e erradicao da in-
feco. A ativao dos linfcitos Tc ocorre aps
o reconhecimento de antgenos apresentados por
clulas infectadas. Esta ativao depende de dois
estmulos bsicos: a estimulao resultante do
reconhecimento dos complexos peptdeo-MHC-I
na superfcie das clulas clulas infectadas e as
citocinas produzidas pelas DCs ou pelos linfci-
tos Th ativados (Figura 9.6). Os complexos pep-
tdeo-MHC-I so reconhecidos exclusivamente
pelo TCR e CD8 dos linfcitos Tc. Aps a sua
ativao, esses linfcitos tornam-se competentes
para destruir as clulas que apresentem o mes-
mo complexo peptdeo-MHC-I que induziu a sua
estimulao. Esses complexos sero encontrados
nas clulas que albergam o vrus infectante. Os
linfcitos Tc ativados e capazes de destruir clu-
las infectadas so denominados CTLs (citotoxic T
lymphocytes). Ao entrar em contato com a clula
infectada, os linfcitos Tc aderem a ela por meio
do complexo TCR/CD8 e de outras molculas de
superfcie. Essas interaes resultam na reorga-
nizao do citoesqueleto, polarizando o linfcito
Tc com o objetivo de descarregar o seu arsenal
citotxico sobre a clula infectada. Entre os com-
ponentes citotxicos dos linfcitos Tc encontram-
se as perforinas, que possuem a capacidade de
induzir a formao de poros na clula-alvo. Os
linfcitos Tc tambm secretam as granzimas, que
penetram nas clulas atravs dos poros e ativam
mecanismos intracelulares que culminam com a
morte programada da clula (apoptose). Poste-
250 Captulo 9
riormente, o linfcito Tc desprende-se da clula
e parte em busca de novas clulas-alvo, caracte-
rstica que lhe confere o codinome de serial killer
entre as clulas do sistema imunolgico. O meca-
nismo de destruio celular pelos linfcitos Tc
similar ao desencadeado pelas clulas NK.

3.2.1 Importncia dos linfcitos Tc na
imunidade antiviral
Clulas infectadas por vrus podem produzir
milhes de novas partculas virais em um perodo
de poucas horas. A disseminao dos vrions en-
tre as clulas ocorre pela liberao de partculas
virais no meio extracelular ou pela transmisso
direta dos vrions entre clulas. A transmisso
direta entre clulas minimiza a possibilidade de
um encontro indesejado dos vrions com as c-
lulas e molculas do sistema imunolgico. Nesse
caso, as nicas defesas das clulas infectadas so
a produo de IFN-I e a apresentao dos ant-
genos virais associados ao MHC-I. Dessa forma,
a presena do vrus no interior das clulas pode
ser detectada pelas clulas vizinhas (via IFN-I) e
pelos linfcitos Tc.
A estratgia do organismo em utilizar os
linfcitos Tc para destruir precocemente clulas
infectadas muito apropriada, pois prefervel
destruir pequenas fbricas de vrions a tentar ina-
tivar milhes de partculas vricas disseminadas
no organismo e com o potencial de infectar no-
vas clulas. O processamento e apresentao de
protenas virais aos linfcitos Tc em fases iniciais
da infeco permite ao hospedeiro identicar e
destruir as clulas infectadas antes do incio da
produo da prognie viral. No obstante, alguns
vrus desenvolveram estratgias para evitar ou
retardar o reconhecimento de clulas infectadas,
a m de assegurar a concluso do ciclo replicati-
vo e a liberao de prognie viral.
3.3 Resposta imune humoral
A resposta especca humoral mediada
pelas imunoglobulinas (Igs), popularmente co-
nhecidas como anticorpos. As Igs so produzidas
e secretadas pelos plasmcitos, que so clulas
originadas da proliferao e diferenciao dos
linfcitos B em resposta a antgenos (Figura 9.7).
As Igs apresentam cinco classes principais, com
estrutura e funes diferentes: IgG, IgM, IgA, IgE
e IgD. Imunoglobulinas das classes IgM e IgD so
tambm encontradas na superfcie dos linfcitos
B, onde servem de receptores (BCRs) para o reco-
nhecimento de antgenos por essas clulas.
Devido aos mecanismos de diversidade e
especicidade, cada linfcito B e a sua prognie
possuem BCRs idnticos entre si e com a capaci-
dade para reconhecer um nico determinante an-
tignico. Felizmente, o organismo possui bilhes
de linfcitos B com BCRs diferentes e, por isso,
capazes de reconhecerem e responderem a uma
variedade virtualmente innita de antgenos. A
capacidade de reconhecimento de antgenos pe-
los linfcitos B depende exclusivamente do BCR
e, conseqentemente, os linfcitos B podem re-
conhecer antgenos solveis e tambm antgenos
no-proticos. Ou seja, os linfcitos B reconhecem
os antgenos em sua forma nativa, sem a necessi-
dade de processamento e apresentao prvios,
como ocorre com os linfcitos T.
A ativao dos linfcitos B depende da sua
interao com os antgenos virais (via BCR) e da
ao de citocinas secretadas pelos linfcitos Th,
tambm em resposta ao reconhecimento do an-
tgeno. As DCs desempenham um papel funda-
mental nesse processo, pois podem transferir an-
tgenos aos linfcitos B por meio dos icossomos
e, simultaneamente, apresentar antgenos ao lin-
fcitos Th (Figuras 9.6 e 9.7).
Por outro lado, os linfcitos B, aps reconhe-
cerem um antgeno, podem interagir diretamente
com os linfcitos Th, em um processo de estimu-
lao recproca. importante ressaltar que os lin-
fcitos B, alm de secretarem imunoglobulinas,
tambm so excelentes APCs, ou seja, podem
apresentar antgenos associados ao MHC-II aos
linfcitos Th. As citocinas produzidas pelos Th,
juntamente com o reconhecimento do antgeno
pelo BCR, resultam em estimulao, proliferao
e diferenciao dos linfcitos B em plasmcitos,
clulas secretoras de anticorpos. As DCs tambm
podem fornecer citocinas importantes para uma
adequada estimulao dos linfcitos B.
O contato com o antgeno e as citocinas pro-
duzidas pelos Th estimulam os linfcitos B a se
Resposta imunolgica contra vrus 251
multiplicarem de forma rpida e abundante. As
clulas resultantes dessa proliferao podem ter
dois destinos: a grande maioria se diferencia em
plasmcitos e uma minoria se diferencia em c-
lulas de memria. Os plasmcitos possuem vida
relativamente curta; as clulas de memria pos-
suem vida longa. Tanto os BCRs presentes na
membrana dos linfcitos B de memria como as
imunoglobulinas secretadas pelos plasmcitos
possuem a mesma especicidade dos BCRs do
Figura 9.7. Mecanismos envolvidos na estimulao dos linfcitos B e produo de anticorpos. Partculas vricas ou
antgenos virais drenados pela linfa nos tecidos perifricos penetramnos linfonodos pelos vasos aferentes (1). Esses
antgenos podem ser reconhecidos diretamente pelos linfcitos B (2) ou em icossomos na superfcie das DCs (3).
Tanto as DCs como os linfcitos Bpodemprocessar e apresentar antgenos virais aos linfcitos Th(4, 5), que secretam
citocinas emresposta (6). Estas citocinas atuamnos linfcitos B, estimulando a sua proliferao (7) e diferenciao em
plasmcitos (8) ouemclulas de memria (9). Os plasmcitos secretamgrande quantidade de anticorpos (10) que tm
acesso aos lquidos corporais (11). Clulas fagocticas e/ou DCs podem tambm penetrar nos linfonodos j com
antgenos virais capturados nos tecidos perifricos e os apresentar aos linfcitos The B.
Crtex
Centros
germinativos
D
i
f
e
r
e
n
c
i
a

o
P
r
o
l
i
f
e
r
a

o
A
t
i
v
a

o
Vaso aferente
Vaso eferente
1
2
3
4
5
6
7
7
8 9
10
11
Clulas
dendrticas
B Th
Clula de
memria
Plasmcitos
Linfonodo
252 Captulo 9
linfcito B que os deu origem. A estimulao e
proliferao dos linfcitos B ocorrem nos rgos
linfides secundrios, sobretudo nos linfonodos.
Os anticorpos produzidos so secretados no meio
extracelular e atravs dos vasos eferentes podem
ter acesso corrente sangnea e, posteriormen-
te, aos tecidos. Os processos de reconhecimento
do antgeno, proliferao e diferenciao dos lin-
fcitos B esto ilustrados esquematicamente na
Figura 9.7.
3.4 Respostas primria e
secundria/memria imunolgica
Os linfcitos possuem um perodo de vida
relativamente curto aps a sua produo a par-
tir dos progenitores linfides na medula ssea.
No entanto, a sua sobrevivncia pode ser pro-
longada desde que encontrem o antgeno que os
estimule a proliferar e se diferenciar, ou seja, os
linfcitos que no encontram o antgeno que os
estimule possuem vida curta; aqueles que encon-
tram o antgeno complementar ao seu BCR tm a
sua vida prolongada. Dessa forma, a presena de
antgenos especcos no organismo literalmente
resgata os linfcitos da morte, estimulando-os a
proliferar e se diferenciar, gerando uma resposta
imune, denominada resposta primria. O principal
evento da resposta primria a expanso dos
clones de linfcitos que possuem receptores para
os antgenos introduzidos pela primeira vez no
organismo. Porm, a maioria das clulas origina-
das pela expanso clonal se diferenciar em clu-
las de vida curta, os plasmcitos. Os plasmcitos
exercem a sua funo de secreo de Igs e sobre-
vivem por algumas semanas ou meses. Felizmen-
te, aps a expanso clonal, uma frao pequena
dos linfcitos estimulados no se diferencia em
plasmcitos, e sim em clulas de memria. Es-
tas mantm a capacidade de reconhecimento do
mesmo antgeno que as estimulou (pois possuem
os BCRs com especicidade idntica aos da clu-
la original) e sobrevivem no organismo por um
longo tempo. As clulas de memria habitam a
medula ssea e circulam pelo organismo. Ao en-
contrarem o mesmo antgeno que as estimulou
previamente (vrions ou protenas virais), essas
clulas respondem rapidamente, produzindo
uma resposta proliferativa e de diferenciao r-
pida e intensa. Essa resposta denominada res-
posta imune secundria. Embora mais estudados
em linfcitos B, pela facilidade de quanticao
dos anticorpos, os eventos envolvidos na respos-
ta primria e secundria provavelmente ocorram
de forma semelhante aos linfcitos T. A resposta
primria a um determinado vrus pode resultar
de infeco natural ou de vacinao e prepara o
sistema imunolgico para responder e montar
uma resposta secundria caso ocorra uma reex-
posio posterior ao agente.
A memria imunolgica de linfcitos B e T
diferente. A produo contnua de anticorpos
especcos tem sido detectada vrias dcadas
aps a infeco por alguns vrus. Como a vida
mdia dos anticorpos no organismo de poucas
semanas, isto indica que ocorre uma produo
contnua de anticorpos para que os nveis sejam
mantidos. Uma possvel explicao para esse fato
de que linfcitos B de memria seriam cons-
tantemente reestimulados a se diferenciarem em
plasmcitos secretores de Igs, pois os plasmci-
tos possuem vida curta. O contato freqente com
o antgeno e as conseqentes reestimulaes
podem decorrer da reexposio ao prprio mi-
croorganismo ou resultar de reatividade cruzada
com antgenos semelhantes, prprios ou heter-
logos. Alm disso, recentemente foi observado
que as DCs possuem a capacidade de armazenar
antgenos em seus dendritos por perodos pro-
longados e liber-los lentamente para os linfci-
tos de memria, provocando a sua reestimulao
contnua. Isso poderia proporcionar uma estimu-
lao prolongada no somente dos linfcitos de
memria, mas tambm de linfcitos que ainda
no haviam sido estimulados (naive ou virgens).
Estes, ao chegarem aos rgos linfides, encon-
trariam com o antgeno pela primeira vez, geran-
do novamente uma resposta imune primria e,
conseqentemente, a produo de mais linfcitos
de memria.
Ao contrrio da fase efetora da resposta hu-
moral cuja produo de anticorpos pode persis-
tir por longos perodos a fase efetora da resposta
celular de curta durao. A presena prolonga-
da de linfcitos Th e Tc efetores seria deletria
para o organismo, pois a secreo persistente de
Resposta imunolgica contra vrus 253
citocinas e a atividade citoltica continuada po-
deriam resultar em imunopatologia. Aps a fase
efetora, as clulas T de memria so encontradas
com freqncia mais alta e podem responder com
mais rapidez e ecincia a estmulos antignicos
secundrios. A rapidez e ecincia com que as
clulas T de memria se deslocam para os stios
de infeco e respondem a estmulos secundrios
faz com que no seja necessria a preexistncia
de clulas efetoras para gerar uma resposta pro-
tetora.
Uma das questes fundamentais na resposta
imune est relacionada com os mecanismos que
garantem a sobrevivncia e manuteno das c-
lulas T e B de memria. A estabilidade da mem-
ria dos linfcitos Tc, por exemplo, mantida por
divises celulares lentas e continuadas. As clu-
las B de memria podem ser mantidas por esti-
mulaes paralelas, ou seja, por citocinas produ-
zidas pelas clulas Th e DCs em resposta a outros
antgenos. No entanto, embora a medula ssea
apresente o ambiente ideal para a manuteno,
replicao e sobrevivncia dessas clulas, acredi-
ta-se que a reexposio e contato com o antgeno
sejam importantes para a manuteno das clulas
B de memria. Com isso, as reestimulaes con-
tribuiriam para a reposio das clulas secretoras
de Igs e a conseqente manuteno dos nveis de
anticorpos circulantes.
O conhecimento dos eventos que ocorrem
durante a resposta primria e secundria fun-
damental para o entendimento das bases imu-
nolgicas da proteo induzida por vacinas. A
vacinao induz uma resposta primria, com a
conseqente expanso de clones de linfcitos B
e T especcos para os antgenos vacinais. Com
isso, so produzidos plasmcitos e linfcitos T
efetores, que possuem vida curta; e, principal-
mente, clulas B e T de memria, que possuem
vida longa e so capazes de responder ao mesmo
padro antignico que induziu a sua prolifera-
o. A infeco subseqente de um animal vaci-
nado ir induzir uma resposta secundria, com
estimulao e proliferao muito mais rpida e
intensa de linfcitos T e B, pois o nmero dessas
clulas especcas para o antgeno agora muito
maior, resultado da expanso clonal da resposta
primria. Esta infeco resulta em estimulao
dos linfcitos de memria, que proliferam e se di-
ferenciam em clulas efetoras, a exemplo do que
ocorreu na resposta primria, porm com muito
maior ecincia e rapidez. O resultado a produ-
o de linfcitos Th e Tc efetores e de plasmcitos
secretores de anticorpos, que se encarregam de
combater o vrus invasor.
3.5 As imunoglobulinas na defesa
antiviral
A importncia dos anticorpos na imunidade
antiviral tem sido muito discutida e parece va-
riar de acordo com a biologia do vrus e tambm
com o estgio da infeco (infeco primria ver-
sus reinfeco). Como os anticorpos aparecem
apenas tardiamente durante a infeco primria,
acredita-se que desempenhem um papel secun-
drio na erradicao dessa infeco. O papel prin-
cipal nesses casos seria assumido pelos linfcitos
Tc. Os anticorpos teriam participao mais efeti-
va na proteo em casos de reinfeco, quando
atuariam limitando e restringindo a penetrao e
disseminao do vrus no organismo. Alm dessa
diferena, a importncia relativa dos anticorpos
e da imunidade celular variam de acordo com a
biologia e interaes de cada vrus com o hospe-
deiro.
Os principais locais de produo de anti-
corpos pelos plasmcitos so os centros germi-
nativos dos linfonodos e as regies equivalentes
dos outros rgos linfides secundrios. As Igs
esto presentes nos uidos do organismo (plas-
ma sangneo, saliva, lgrima, urina, colostro/
leite, muco, secrees, lquido cfalo-raquidiano
e lquido sinovial) e so capazes de se ligar es-
pecicamente no determinante antignico que
induziu a sua formao. Para vrias infeces
virais, a quantidade de Igs especcas presentes
no soro sangneo pode ser correlacionada com
proteo. Por isso, esse parmetro utilizado
para o monitoramento dos provveis nveis de
proteo e da necessidade de novas imunizaes.
Considerando-se que a resistncia antiviral deve-
se, em grande parte, atividade dos linfcitos Tc
(que efetivamente destroem clulas infectadas), a
quanticao dos anticorpos no pode ser consi-
derada o indicador nico de proteo. No obs-
254 Captulo 9
tante, a sorologia muito utilizada para se avaliar
os nveis de imunidade como um todo, visto que
os mtodos para detectar e quanticar a funo
de linfcitos T so de difcil aplicao.
3.5.1 Mecanismos de ao
das imunoglobulinas
As Igs possuem vrias atividades biolgicas
que potencialmente podem estar envolvidas na
resposta antiviral. Algumas dessas atividades j
foram demonstradas in vivo e a sua participao
na resposta antiviral parece ser inquestionvel;
outras somente foram demonstradas inequivoca-
damente in vitro e/ou possuem um papel contro-
verso na resposta imunolgica contra os vrus. A
seguir so listadas as principais atividades anti-
virais dos anticorpos (essas atividades na defesa
contra vrus esto ilustradas na Figura 9.8):
Neutralizao: a interao dos vrions com
os receptores celulares para o incio da infeco
mediada por regies especcas das protenas
de superfcie dos vrions (anti-receptores). Anti-
corpos produzidos contra essas regies possuem
a capacidade de se ligar aos vrions e impedir a
interao com os receptores celulares, neutrali-
zando a sua infectividade. Esses anticorpos so
denominados genericamente neutralizantes e
constituem uma parcela do total de anticorpos
produzidos contra os vrus. Anticorpos com ati-
vidade neutralizante so direcionados contra pro-
tenas de superfcie dos vrions. A neutralizao
de partculas virais pode ocorrer por Igs da clas-
se IgA, presente nas mucosas e em secrees; ou
por IgM e IgG, presentes no plasma sangneo.
Um dos desaos da vacinologia a induo de
proteo slida nas mucosas, pela estimulao de
IgA com capacidade de neutralizar as partculas
vricas nos locais mais freqentes de penetrao
viral (sistema respiratrio, digestrio e reprodu-
tivo) e, assim, impedir a instalao da infeco.
A neutralizao da infectividade o mecanismo
mais direto de ao dos anticorpos contra vrus e,
talvez, o mais importante;
Aglutinao: as IgM e IgG possuem a ca-
pacidade de aglutinar partculas virais e, com
isso, facilitar a sua remoo mediada pelo siste-
ma complemento e por clulas fagocticas;
Opsonizao: o revestimento de partculas
vricas por molculas de imunoglobulinas (IgM e
IgG) facilita a ligao e remoo dessas partcu-
las pelas clulas fagocticas, via receptores para a
poro Fc das Igs. A ativao do sistema do com-
plemento tambm gera fragmentos capazes de
opsonizao viral (C3b);
Ativao do complemento: a ligao das
Igs aos antgenos resulta em alteraes tridi-
mensionais na sua regio Fc, expondo stios de
ligao para o componente C1 do complemento,
iniciando a sua ativao em cascata. O resultado
a estimulao de vrios mecanismos da imuni-
dade inata (vasodilatao, aumento da permeabi-
lidade capilar, quimiotaxia para fagcitos, entre
outros) e a formao do MAC sobre a superfcie
dos vrions, o que pode resultar na inativao
da infectividade dos vrus envelopados. A liga-
o de anticorpos em protenas virais inseridas
na membrana de clulas infectadas pode ativar o
complemento e levar formao do MAC. Com
isso, a clula infectada pode sofrer lise osmtica.
Esse mecanismo pode tambm ocorrer com bac-
trias;
Citotoxicidade mediada por clulas de-
pendente de anticorpos (ADCC): durante a re-
plicao de alguns vrus, certas protenas virais
podem ser inseridas na membrana plasmtica da
clula infectada. Anticorpos especcos so pro-
duzidos contra essas protenas e se ligam a elas na
superfcie celular. Com isso, a clula infectada se
torna alvo para algumas clulas do sistema imu-
nolgico que possuem receptores para a poro
Fc das Igs (clulas NK e neutrlos) e destroem
a clula. Embora a ADCC tenha sido amplamen-
te demonstrada in vitro, a sua importncia in vivo
ainda desconhecida;
Outras atividades dos anticorpos: embo-
ra as Igs desempenhem funes bencas para a
manuteno da integridade e funcionalidade do
organismo, pelo combate a agentes infecciosos
potencialmente nocivos, eventualmente podem
participar de processos que so prejudiciais ao
hospedeiro. A presena de grande quantidade
de antgenos no plasma sangneo pode levar
formao disseminada de complexos antgeno-
anticorpo. Esses complexos geralmente so re-
movidos pelas clulas fagocticas. No entanto,
quando esto em excesso, depositam-se em locais
Resposta imunolgica contra vrus 255
como as superfcies articulares e tbulos renais
e, freqentemente, causam imunopatologia. O
revestimento de vrions com anticorpos sem ati-
vidade neutralizante pode, ao invs de neutrali-
z-lo, potencializar a sua infectividade. Essas Igs
so reconhecidas por clulas que possuem recep-
tores para a poro Fc (moncitos e macrfagos),
resultando na internalizao eciente de vrions
recobertos com anticorpos, facilitando a infeco
dessas clulas, ou seja, os anticorpos aumentam
a ecincia de penetrao desses vrions. Esse
mecanismo denominado Antibody Dependent
Enhancement (ADE) e tem sido descrito para v-
rios vrus, dentre os quais o vrus da dengue, o
coronavrus felino e o vrus da imunodecincia
humana (HIV). O papel da ADE na patogenia
dessas doenas, no entanto, ainda tema de de-
bates.
3.6 O papel das respostas celular e
humoral na imunidade antiviral
Os avanos no estudo da imunologia antivi-
ral tm resultado na emergncia de importantes
componentes e mecanismos anteriormente rele-
gados a papis secundrios na resposta imune,
Figura 9.8. Atividades dos anticorpos na resposta contra vrus. Neutralizao da infectividade (1), aglutinao (2),
opsonizao e fagocitose (3), ativao do complemento (4), lise de vrus envelopados mediada por complemento (5),
ADCC(6) e lisecelular mediadapor complementodependentedeanticorpos (7).
1
2
3
6
7
5
4
Tc
256 Captulo 9
como as DCs. No entanto, o papel exato de cada
componente na intrincada cadeia de relaes ce-
lulares e moleculares que resultam na eliminao
de uma determinada infeco vrica ainda no
est satisfatoriamente esclarecido. O esclareci-
mento desses mecanismos depende do entendi-
mento detalhado da biologia e da patogenia de
cada infeco e das interaes peculiares de cada
vrus com o sistema imunolgico. No obstante,
pode-se armar que os linfcitos Tc so funda-
mentais na erradicao da infeco primria, pela
destruio das clulas infectadas. Os anticorpos
no teriam grande participao no combate in-
feco primria, pois aparecem tardiamente no
curso da infeco. Seriam de fundamental impor-
tncia por ocasio de uma reexposio ao agente,
prevenindo e/ou limitando a infeco atravs de
neutralizao viral e de outros mecanismos que
restringiriam a disseminao do vrus no orga-
nismo. Caberia aos linfcitos Th o papel de co-
ordenar e moderar as duas respostas (humoral,
mediada por linfcitos B; e celular, mediada por
linfcitos Tc) pela secreo de citocinas.
4 Mecanismos virais de evaso da
resposta imune
A ocorrncia contnua de doenas virais so-
mente possvel devido ao sucesso desses mi-
croorganismos em produzir infeces, resistir ou
escapar dos mecanismos antivirais do hospedei-
ro e se disseminar para outros hospedeiros sus-
ceptveis. Hospedeiros imunes impedem a pro-
gresso da infeco, o que reduz drasticamente
a possibilidade de transmisso do vrus para ou-
tros animais. Dezenas ou centenas de milhares de
anos de coexistncia, alm da rapidez com que
os vrus se multiplicam e evoluem geneticamen-
te, permitiram o desenvolvimento de estratgias
que lhes permitem evitar ou resistir s defesas do
hospedeiro, causando infeces produtivas, agu-
das ou crnicas, e garantindo a sua manuteno e
perpetuao na natureza. Dentre os mecanismos
utilizados pelos vrus para compatibilizar a sua
existncia e perpetuao, apesar dos mecanis-
mos imunolgicos do hospedeiro, destacam-se
os seguintes: infeces latentes no sistema ner-
voso central, variaes antignicas, induo de
tolerncia, integrao do material gentico viral
no genoma do hospedeiro, infeco de stios imu-
nologicamente privilegiados e interferncia com
funes do sistema imunolgico.

4.1 Infeces latentes no sistema
nervoso central
O estabelecimento de infeces latentes
um eciente mecanismo de perpetuao no hos-
pedeiro utilizado pelos vrus da famlia Herpesvi-
ridae. A fase de latncia, que se segue infeco
aguda, caracterizada pela presena do genoma
viral inativo em neurnios, sem sntese protica