INTRODUCCIN A LA CROMATOGRAFA DE GASES

Introduccin a la cromatografa.
Definicin
Principios bsicos
Cromatografa de Gases
Campo de aplicacin
Partes de un cromatgrafo de gases

LA CROMATOGRAFA DE GASES Y SUS
APLICACIONES
22 DE OCTUBRE DE 2007
INTRODUCCIN A LA CROMATOGRAFA
Definicin
Principios bsicos
Definicin
Tcnica que permite separar
los componentes de una
muestra debido a su diferente
afinidad entre dos fases
inmiscibles entre s, una
estacionaria (liquida o slida) y
otra mvil (gas o lquida)

to
t1
t2
A B
A B
Flujo de fase mvil
La muestra se introduce en la fase mvil y es transportada a
lo largo de la columna que contiene una fase estacionaria
distribuida.
Las especies de la muestra experimentan interacciones
repetidas (repartos) entre la fase mvil y la fase estacionaria.
Cuando ambas fases se han escogido de forma adecuada, los
componentes de la muestra se separan gradualmente en bandas
en la fase mvil.
Los componentes abandonan la columna en orden creciente
de interaccin con la fase estacionaria.
La amplia gama de seleccin de materiales para la fase mvil
y la estacionaria permite separar molculas que difieren muy
poco en sus propiedades fsicas y qumicas.

Clasificacin de los mtodos cromatogrficos
Cromatografa
Cromatografa de gases Cromatografa de lquidos
Gas Lquido
GLC
Gas Slido
GSC
Lquido Lquido
LLC
Lquido Slido
LSC
Intercambio
inico
IEC
Exclusin
EC
Casos particulares:
Intercambio Inico: Los componentes inicos de la muestra se separan por el
intercambio selectivo con contraiones de la fase estacionaria
Exclusin: La fase estacionaria proporciona una clasificacin de molculas basada
en la geometra y el tamao molecular
Comportamiento cromatogrfico de los compuestos
El comportamiento cromatogrfico de un componente de una muestra
puede describirse de diversas formas:
VR Volumen de retencin
Volmen de fase mvil necesario para transportar la banda de un
componente desde el punto de inyeccin, a travs de la columna, hasta
el detector (en el mximo de pico del componente)
tR tiempo de retencin
Tiempo necesario para que el componente, una vez inyectado pase a
travs de la columna y alcance el detector (en el mximo de pico del
componente)
k razn de reparto
Es una medida del tiempo que el componente est en la fase
estacionaria en relacin con el tiempo que est en la fase mvil
to
t1
t2
A B
A B
Flujo de fase mvil
tB
A B
tA
A
Seal
tiempo
to



t1



t2



tB



tA
k razn de reparto
tR tM VR - VM
k= =


Seal
tiempo
to












tB



tA
tM
VM
Donde tM es el tiempo de retencin de
un compuesto que no interaccionara con
la fase estacionaria y tR es el tiempo de
retencin del compuesto de inters. Lo
mismo se puede expresar en relacin con
Los volmenes de retencin.
El objetivo de la cromatografa es doble:
Separar los distintos componentes de la muestra
Identificar los componentes previamente separados
Separar los distintos componentes de la muestra
Selectividad y eficiencia
Buena selectividad
Eficiencia baja
Baja selectividad
Buena eficiencia
Buena selectividad
Buena eficiencia
Identificar los componentes previamente separados
Seleccin de detectores adecuados que permitan el anlisis
cualitativo.
La seleccin de un detector est relacionada con la naturaleza de las
sustancias a determinar.
Los componentes de una muestra se identifican por su tiempo de
retencin
Se pueden emplear tcnicas que aporten una mayor informacin sobre
la naturaleza de los componentes: Acoplamiento con Espectrometra de
Masas

Anlisis Cuantitativos basados generalmente en la integracin
del rea bajo los picos.
Calibracin con patrones o estndares: Si se realizan determinaciones
cromatogrficas de muestras de concentracin conocida de alguno de
sus componentes, se puede realizar una recta de calibrado y
posteriormente el anlisis e integracin de una muestra de
concentracin desconocida del citado componente permitir la
cuantifcacin del mismo.
Estndar interno: Permite que varen las condiciones de operacin entre
muestra y muestra.
Cromatografa de Gases
Es la tcnica a elegir para la separacin de compuestos
orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y voltiles


Un cromatgrafo de gases consiste en el acoplamiento de
varios mdulos bsicos ensamblados para:
Proporcionar un flujo constante de gas portador
Permitir la introduccin de vapores de la muestra en la
corriente de gas que fluye
Contener la longitud apropiada de fase estacionaria
Mantener la columna a la temperatura apropiada (o la
secuencia del programa de temperatura)
Detectar los componentes de la muestra a medida que
eluyen de la columna
Proveer una seal legible proporcional en magnitud a la
cantidad de cada coomponente

Cromatografa de Gases
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Gases
Sistema de inyeccin
El modo estndar es la inyeccin
directa, la muestra es inyectada
con una jeringa a travs de un
septum de goma a un alineador de
vidrio donde es vaporizada y
transportada por el gas al interior
de la columna.
El bloque de inyeccin, se
mantiene a una temperatura tal que
permita convertir prcticamente de
forma instantnea la muestra
lquida en un tapn de vapor.
Existen jeringas especiales para
muestras gaseosas. Tambin se
puede emplear un lazo o bucle
para incoporar las muestras
gaseosas al flujo de gas portador
Sistema de inyeccin
El modo de separacin ms
extendido en la actualidad se basa
en el empleo de columnas
capilares. Estas columnas
requieren muy pequeos
volmenes de muestra.
Esto se logra empleando un
inyector que incorpora un divisor
de flujo (split). Normalmente se
introduce en la columna un 1%
Cuando las sustancias a separar se
encuentran a muy bajas
concentraciones se realiza
inyeccin sin divisor (splitless)
Sistema de inyeccin
Para el anlisis de compuestos
orgnicos voltiles en muestras
slidas y lquidas, se han
desarrollado algunas tcnicas
auxiliares:
Espacio de cabeza (Head space)
Purga y trampa (Purge and trap)

Espacio de cabeza (Head space)
Se analiza la fase de vapor en
equilibrio termodinmico con la
muestra en un sistema cerrado.
Para ello se procura un equilibrio
estable, mediante el control de la
temperatura del vial que contiene
la muestra.
Posteriormente, se arrastra la fase
vapor al interior del cromatgrafo.
T equilibrio
Gas portador A la columna
Purga y trampa (Purge and trap)
Es aplicable solo a muestras lquidas.
Consiste en la continua renovacin del gas en
equilibrio con la muestra, con lo que se
consigue el desplazamiento dinmico de los
compuestos voltiles de la muestra lquida a la
fase gaseosa.
Los vapores se arrastran a una trampa donde
quedan retenidos y se van concentrando.
Finalizado el proceso se calienta la trampa y se
arrastran los vapores al interior del
cromatgrafo.
T
1) Gas portador
trampa
T baja
T
2) Gas portador
trampa
T alta
A la columna
Columnas cromatogrficas
Columnas capilares Columnas Empacadas
Columnas cromatogrficas empacadas
Se construyen con tubo de acero
inoxidable, niquel o vidrio.
Los dimetros interiores van de 1,6 a 9
mm.
La longitud suele ser inferior a los 3 m.
Se rellenan de un material adsorbente
adecuado a las sustancias que se quiere
separar.

Columnas cromatogrficas capilares
Se construyen con slice fundida.
Los dimetros interiores suelen ser de 200-250 m.
La longitud suele ser superior a los 20 m.
Hay dos tipos:
Empacadas con partculas slidas ocupando el total del dimetro de
la columna (micro-empacadas)
Tubulares abiertas, con trayectoria para el flujo abierta y sin
restriccin por el centro de la columna
Ejemplos de fases estacionarias en cromatografa de gases
Separaciones por punto de ebullicin de compuestos en un
intervalo amplio de pesos moleculares:
Escualano
Polidimetilsiloxano
Para hidrocarburos insaturados y otros compuestos
polidifenildimetilsiloxano
policarboranometilcianoetilsilicn
Para compuestos nitrogenados
poliamida
policianoetilmetilsilicon
Para alcoholes, steres, cetonas y acetatos
polietilenglicol
pentaeritritol tetracianoetilado

Las columnas cromatogrficas se enrollan, se sujetan en un
soporte y se introducen en el interior de un horno

El horno debe poderse calentar y enfriar rpidamente

La temperatura se debe poder programar para poder trabajar en
rgimen de gradiente

Muchas aplicaciones y mtodos cromatogrficos requieren
comenzar a temperaturas por debajo de la ambiental

Horno
T1





T2> T1
Horno
Caractersticas ideales de un detector para Cromatografa de
Gases:
Sensibilidad alta y estable; tpicamente 10
-8
g soluto/s
Bajo nivel de ruido
Respuesta lineal en un amplio rango dinmico
Tiempo de respuesta corto
Buena respuesta para toda clase de compuestos orgnicos
Insensibilidad a las variaciones del flujo y la temperatura
Estabilidad y robustez
Simplicidad en su operacin
Identificacin de compuestos positiva
Tcnica no destructiva
Pequeo volumen en prevencin del mezclado de componentes

Sistemas de deteccin
Sistemas de deteccin
Detector de ionizacin de llama (FID)
Este detector aade hidrgeno al
eluyente de la columna.
La mezcla pasa a travs del
conducto de un mechero, donde se
mezcla con aire externo y luego
arde.
Cuando entra en la llama material
ionizable del eluyente de la columna
Se quema y la corriente aumenta
notablemente.
Este detector es ideal para compuestos
oxidables.
No responde a los compuestos de
carbono totalmente oxidados, como
carbonilos o carboxilos y grupos ster

Sistemas de deteccin
Detector de conductividad trmica (TCD)
Utiliza un filamento caliente colocado
en el flujo de gas emergente.

La cantidad de calor por conduccin
que pierde el filamento hacia las
paredes del detector depende de la
conductividad trmica de la fase
gaseosa.

Es til para determinar la presencia
incluso de pequeas cantidades de
materiales orgnicos que producen una
reduccin relativamente grande en la
conductividad trmica del eluyente de
la columna.
Sistemas de deteccin
Detector de captura de electrones (ECD)
El eluyente pasa entre dos electrodos.
Uno de los electrodos tiene en su
superficie un radioistopo que emite
electrones de alta energa conforme
decae.
Los electrones bombardean el gas
portador (N2) formndose un plasma
que contiene iones positivos, radicales
y electrones trmicos.
Se aplica una diferencia de potencial
de modo que se recolectan los
electrones generados.
Los compuestos que absorben
electrones reaccionan con los
electrnes trmicos disminuyendo la
corriente del detector, la cual es
medida y permite la cuantificacin

Sistemas de deteccin
Detector de espectroscopa de masas (MS)
Los eluyentes son ionizados y
fragmentados.
Los iones resultantes se dirigen a
travs de un cuadrupolo y se ordenan
en funcin de su masa.
Ese detector permite obtener el
espectro de masas del compuesto que
ha eluido.
Podemos por tanto conocer, adems
del tiempo de retencin el espectro de
masas del compuesto y contrastarlo
con bibliotecas de espectros.
Se trata por tanto de un detector
universal para la mayora de los
compuestos conocidos.
Cromatografa Inica
Polaridad
Basndose en la polaridad de la fase estacionaria y la
fase mvil, se distinguen los siguientes mtodos de
cromatografa lquida:
Polaridad de la
fase estacionaria
Polaridad de la
fase mvil
inico
polar
no polar
no polar polar inico
Cromatografa en
fase normal
Cromatografa en
fase reversa
Cromatografa de pares inicos
Cromatografa inica
El intercambio inico como mecanismo de
separacin
La gran mayora de las separaciones por cromatografa
inica ocurren por intercambio inico sobre fases
estacionarias con grupos funcionales cargados. Los
correspondientes contraiones del eluyente se localizan en la
vecindad de los grupos funcionales y se intercambian con
iones del analito de la misma carga en la fase mvil. Para
cada ion el proceso de intercambio se caracteriza por un
equilibrio de intercambio inico correspondiente, que
determina la distribucin del analito (M
+
A
-
) entre la fase
mvil y la fase estacionaria:
| | | |
| | | |
f.e. f.m.
f.m. f.e.
A
E A
E A
K

=
A
-
es el ion del analito
E
-
es el ion del eluyente (contraion)

+ +
. e . f . m . f . m . f . e . f
A E A E
El intercambio inico como mecanismo de
separacin
El grupo ms importante de intercambiadores inicos son los
basados en resinas sintticas hechas de un copolmero de
estireno y divinilbenceno.

Los intercambiadores catinicos se obtienen por posterior
sulfonacin de esta resina de estireno-divinilbenceno. Los
intercambiadores aninicos por posterior clorometilacin
seguida de aminacin.

Intercambiador catinico Intercambiador aninico
Cromatografa inica
Tambin llamada cromatografa de intercambio inico, determina
iones inorgnicos y orgnicos, normalmente por conductividad.

Se utilizan dos tipos de tcnicas en la prctica:

Supresin qumica, en la que la conductividad de fondo se suprime
tanto qumica como electrnicamente. Normalmente utilizada en
aniones.

Supresin electrnica, en la que se emplean eluyentes con sales de
cidos orgnicos en baja concentracin sobre intercambiadores de
iones de muy baja capacidad para alcanzar una conductividad de
fondo relativamente baja, que puede ser suprimida directamente
por medios electrnicos.
Se basa en el uso de sales de cidos dbilmente disociables (NaHCO
3
, por
ejemplo) como eluyentes. Estos eluyentes se pueden eliminar en gran medida
mediante una reaccin post-columna de acuerdo con el siguiente proceso



El cido carbnico formado como resultado del intercambio catinico se disocia
muy dbilmente, por lo que aporta poca conductividad.

Por otro lado, los iones de la muestra sufren la reaccin correspondiente. Por
ejemplo, para el cloruro



El proceso de supresin convierte el NaCl al correspondiente cido fuerte, el
cual tiene una mayor conductividad que la sal original. Cuanto menor fuerza
tenga el cido producido, el incremento en sensibilidad debido a la supresin
qumica ser menor.
Supresin qumica
Supresin qumica
Eluyente - bomba
Inyeccin de
muestras
Separacin
Supresin Deteccin
Sin supresin qumica
Eluyente: cido ftlico
Con supresin qumica
Eluyente: HCO
3
-
/CO
3
-

Aniones
Cationes sin supresin qumica
Eluyente - bomba
Inyeccin de
muestras
Separacin
Supresin Deteccin
Deteccin por conductividad
La conductividad es una medida de la capacidad que tienen las
disoluciones de electrolitos para transportar la corriente por
migracin inica en un campo elctrico aplicado entre dos
electrodos.
La conductividad () es directamente proporcional a la
concentracin para disoluciones diluidas, siguiendo la relacin




Donde
es la conductividad equivalente en Scm
2
mol
-1
c(eq) es la concentracin equivalente en eq/l o normalidad

1000
) eq ( c A
= k
Eluyente - bomba
Inyeccin de
muestras
Separacin
Derivatizacin
Deteccin
Deteccin UV/VIS
Directa: Se usa en la determinacin de iones que absorben
fuertemente en el rango UV (nitrito, nitrato y aniones
orgnicos, p.e.) en presencia de altas concentraciones de iones
inorgnicos (cloruro, fosfato y sulfato, p.e.) que tienen escasa
o nula absorcin UV.

Indirecta: Se utiliza con eluyentes de alta absorcin UV
(ftalato, p.e.). De este modo, los iones con menor actividad
UV que el eluyente darn picos negativos y los iones con
mayor actividad UV que el eluyente darn picos positivos.

Con reaccin post-columna: Usada en la deteccin de metales
de transicin (Fe, Ni, Cu, Mn y Zn, p.e.)
Eluyente - bomba
Inyeccin de
muestras
Separacin
Deteccin
Deteccin electroqumica
Se utiliza ocasionalmente. Requiere que los iones a determinar sean
susceptibles de oxidarse o reducirse. Entre ellos hay muchos
compuestos orgnicos (azcares y aminas, p.e.), metales de
transicin y aniones como nitrito, nitrato, haluros, sulfuro, cianuro,
sulfito y sulfato.

Hay cuatro tcnicas diferentes :
Amperometra: Medida de la corriente a potencial constante
Culombimetra: Medida de la corriente a potencial constante con
100% de conversin del analito
Voltametra: Medida de la corriente frente al potencial en un rango
definido de potencial
Amperometra de pulsos: Medida de la corriente a pulsos de
potencial constante
Estado, cantidad y preparacin de muestras
Los lquidos que sean acuosos o miscibles en el agua se pueden
analizar directamente. Los lquidos, slidos y gases inmiscibles
en agua deben ser extrados o disueltos en disolucin acuosa
antes del anlisis.

El volumen tpico a analizar es de 5 a 200 l, aunque se puede
partir de volmenes tan grandes como 100 ml, utilizando
tcnicas de preconcentracin cromatogrficas cuando se
requiera una mayor sensibilidad.

Dilucin y filtracin son los procedimientos ms comunes de
preparacin de muestras. Se requiere extraccin para muestras
no acuosas o preconcentracin para muestras diluidas. La
necesidad de derivatizacin precolumna es rara.
Tcnicas complementarias
Absorcin atmica, emisin atmica y plasma de
acoplamiento inductivo. Se usan para determinar la cantidad
total de un metal en vez de una cierta forma inica.