Laboratorio de Patologa Clnica

Mdulo 1 Prctica: Serie Roja Grupo: 1

Integrantes: Azucena Hernndez, Daniela Aguilar, Daniel Flota, Estefana Rodrguez y Flor Garza

1. Objetivo de la prctica
1.1. Hematocrito (por micromtodo). Determinar el cociente entre el nmero de eritrocitos y el total de
sangre en una muestra sangunea, es decir, el hematocrito.
1.2. Hemoglobina. Determinar cuantitativamente la hemoglobina en sangre total mediante el mtodo de
cianometahemoglobina.
1.3. Conteo diferencial leucocitario. Determinar el porcentaje aproximado de cada uno de los tipos
leucocitarios en la sangre del paciente.

2. Fundamentos
2.1 Hematocrito (por micromtodo). El hematocrito es la fraccin de volumen que ocupan los glbulos
rojos en relacin al resto de los elementos sanguneos. Se centrifuga una muestra de sangre en un microcapilar
hasta compactar los glbulos rojos y comparar el volumen que ocupan estos con el volumen total.
Debido a que los capilares no estn graduados, debe ser medida la longitud de la columna de sangre,
incluyendo la del plasma y aquella de los glbulos rojos, utilizando una regla milimtrica y una lente magnificadora,
o bien con dispositivos comerciales disponibles.
2.2 Hemoglobina. La sangre es diluida en una solucin de ferrocianuro de potasio y cianuro de potasio.
El ferrocianuro de potasio oxida la Hb a Hi (metahemoglobina)
Posteriormente, el cianuro de potasio provee los iones de cianuro (CN-) para formar HiCN
(cianmetahemoglobina), la cual tiene un espectro de absorcin mxima a una longitud de onda de 540 nm.
La absorbancia de la solucin se mide en un espectofotmetro a 540 nm y se compara con aquella de la
solucin estndar de HiCN. Dicha absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de Hb.
2.3 Conteo diferencial leucocitario. Esta prueba da a conocer un porcentaje relativo de cada tipo de
leucocito, as como permite reconocer poblaciones anormales de estos, lo cual tiene grandes implicaciones clnicas
para el paciente. Se debe de complementar con el conteo absoluto de los leucocitos, ya que un conteo relativo
puede variar si el paciente leucopenia o leucocitosis

3. Material
3.1. Hematocrito (por micromtodo). Muestra sangunea proporcionada con EDTA como anticoagulante,
tubo de hematocrito capilar de 7 cm de largo de 1 mm de calibre, plastilina, microcentrfuga a 11,000 rpm y guantes.

3.2. Hemoglobina. Muestra sangunea proporcionada con EDTA como anticoagulante, estndar, dos
pipetas automticas con sus respectivas puntillas, etiquetas, tubos y gradilla, espectofotmetro 540 nm, gasas y
guantes
3.3. Conteo y diferencial leucocitario. Portaobjetos, frotis sanguneo teido, microscopio electrnico y
aceite de inmersin

4. Procedimiento
4.1. Hematocrito (por micromtodo)
Usando una lanceta estril, realiza una puncin en el dedo. Con sangre de un tubo de hemograma, inclinar
para llenar el capilar del micro-hematocrito por contacto de uno de los extremos con la sangre.
Taponar el extremo prximo con plastilina hasta la lnea indicada.
Centrifugar el capilar por la duracin de 5 minutos a 12000 rpm (rotaciones por minuto) en una centrifuga
para hematocrito.
o En caso de que el capilar sea nico, utilizar un segundo capilar en el lado opuesto para hacer
contrapeso, evitando el rompimiento.
Calcular el porcentaje que ocupa la columna formada por glbulos rojos a la longitud total que ocupa la
sangre dentro del capilar con el uso de una regla.
o Hematocrito (%):

4.2. Hemoglobina
Usando una pipeta automtica, coloca 1mL de reactivo de hemoglobina en un tubo. Marcar como blanco
(BK).
Usando otra pipeta automtica coloca 1 mL de reactivo de hemoglobina en un tubo. Marcar como problema
(Pb)
o Con una pipeta automtica colocar 5 microlitros de sangre del tubo de hemograma procurando limpiar la
punta de exceso de sangre antes de dispersar la sangre en el tubo Pb.
o Mezclar la sangre y el reactivo con golpecitos ligeros con el dedo.
o Reposar la mezcla por 3 minutos.
Medicin de transmitancia:
o Usando el espectrofotmetro a una longitud de onda especifica (540 nm), presionar <%T> para
transmitancia.
o Insertar cubeta con el blanco en el portacubeta, cerrar la puerta y oprimir <SECOND FUNCTION> y
<100%>.
o Remover el blanco y colocar la muestra Pb y cerrar la perta. Aparecer en la pantalla el valor de
transmitancia.
Calcular hemoglobina:
o Hb :

4.3. Conteo y diferencial leucocitario.
Usando una lanceta estril, realiza una puncin en el dedo pulgar. En el caso de sangre en un tubo de
hemograma, utilizar solo una gota sin mezcla de anticoagulante.
Depositar la gota en la parte central de portaobjetos.
Tomar un cubreobjetos lateralmente entre las yemas de los dedos, y con una inclinacin de 45 grados,
deslizar la gota de sangre sobre la superficie del portaobjetos con dos movimientos: primero atrs y luego
adelante para formar una forma de lengua.
Dejar que la laminilla se seque, con la zona de la muestra hacia arriba.

Conteo Leucocitario:
o Se coloca una gota de aceite de inmersin en el frotis y se observa bajo el microscopio a 100 x.
o Se determin el tipo de leucocito de 100 clulas blancas.
o Se coloc el nmero absoluto de los leucocitos vistos.

5. Resultados
5.1 Hematocrito (por micromtodo). 39
5.2 Hemoglobina.
Abs paciente
Abs estndar
0.187
0.236
ndice eritrocitario:
Hb
Hto
11.88
39
5.3 Diferencial sanguneo:
Valor obtenido Valores de referencia
Neutrfilos segmentados 35 40-60%
Neutrfilos en banda 9 0-3%
Linfocitos 44 20-40%
Atpicos 3
Monocitos 4 2-8%
Eosinfilos 4 1-4%
Basfilos 1 0.5-1%
Total 100 100%

x
Conc. Estndar = hemoglobina (g/dl)
X 15 = 11.88 g/dl
X100= CMHC (30-36%)
X100 = 30.46%
6. Conclusiones
De acuerdo a los resultados obtenidos en las pruebas, se puede establecer que la paciente maneja
parmetros normales en relacin a sus glbulos rojos, por lo cual no padece de anemia, sin embargo, se encuentra
levemente disminuido el nmero de neutrfilos y levemente elevado el nmero de linfocitos y neutrfilos en banda.

7. Fuentes Bibliogrficas
Lichtman M. Kipps T. Seligsohn U. Kaushansky K. Prchal J.(2010). Williams Hematology. New York: McGraw- Hill
Companies.
McPherson R., Pincus M. (2011). Henry's Clinical Diagnosis and Management by laboratory methods 22
nd
ed.
Philadelphia: Elsevier Saunders.
Rodak B. (2004). Hematologa fundamentos y aplicaciones clnicas 2a ed. Buenos Aires: Editorial Panamericana.