Determinao de cido Ascrbico em Frmacos e Sucos

de Frutas por Titulao Espectrofotomtrica

Determination of Ascorbic Acid in Pharmaceutical
Formulations and Tropical Fruit Juices by means of
Spectrophotometric Titration
Sueli Prcio Quinia
Departamento de Qumica
Universidade Estadual do Centro-Oeste UNICENTRO
spquinaia@unicentro.br
Mrcia Ferreira
Departamento de Qumica
Universidade Estadual do Centro-Oeste UNICENTRO
Resumo: Um procedimento de titulao espectrofotomtrica para a determinao de
cido ascrbico (AA) em frmacos e sucos de frutas tropicais baseado na decomposio
do complexo de [Fe
3+
(SCN
-
)
n
]
+3-n
pela reduo com AA foi descrito. A praticabilidade
do procedimento foi vericada atravs da determinao do cido ascrbico (AA) em
amostras de suplementos alimentares e nos sucos dos frutos ara (Psidium cattleianum),
acerola (Malphigia glaba), Maracuj (Passiora edulis), uvaia (Eugenia pyriformis) ,
buti (Butia eriosphata) e laranja (Citrus sinensis). Os frutos foram resfriados para
minimizar a oxidao do AA. O teor de AA determinado na acerola foi duas vezes
maior do que o quanticado nas espcies de laranja, buti e uvaia. O maracuj foi o
fruto que apresentou o menor teor de AA. Os resultados mostraram que o mtodo foi
rpido e sensvel quando comparado ao recomendado pela literatura.
Palavras-chave: cido ascrbico; sucos de frutos tropicais; titulao
espectrofotomtrica
Abstract: A procedure for spectrophotometric determination of ascorbic acid
in pharmaceutical formulations and tropical fruits juices based on [Fe3+(SCN-
)n]+3-n complex decomposition by reduction has been described. The feasibility
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Revista Cincias Exatas e Naturais, Vol.9 n 1, Jan/Jun 2007
of the procedure was veried by determination of ascorbic acid (AA) in samples of
pharmaceutical food formulations and in juices made of ara (Psidium cattleianum),
acerola (Malphigia glaba), maracuj [passionfruit] (Passiora edulis), uvaia
(Eugenia pyriformis), buti (Butia eriosphata) and orange (Citrus sinensis) fruits. The
fruits were frozen to minimize AA oxidation. The AA level determined in acerola
was twice the amount found in species of orange, buti and uvaia. Passionfruit
presented the lowest level of AA. The results have shown that the spectrophotometric
method was fast and sensitive, unlike the recommendations in literature.
Key words: ascorbic acid; tropical fruit juices; spectrophotometric titration
Introduo
O cido ascrbico (AA) faz parte de um grupo de substncias qumicas
complexas necessrias para o funcionamento adequado do organismo. uma
vitamina hidrossolvel, o que signica que o organismo usa o que necessita e
elimina o excesso
1
. O AA encontra-se em equilbrio entre as formas reduzida e
oxidada (cido L-ascrbico e cido L-dehidroascrbico, respectivamente). A
carncia dessa vitamina pode ser originada atravs de uma dieta mal equilibrada.
Os cidos L-ascrbico e dehidroascrbico ocorrem em quantidades signicativas
nas frutas ctricas, tomate, batata e em vrias outras frutas e verduras.
A principal causa da degradao do AA a oxidao, aerbica ou
anaerbica, ambas levando formao de furaldedos, compostos que
polimerizam facilmente, com formao de pigmentos escuros. A estabilidade
do AA aumenta em baixas temperaturas e a sua perda ocorre com facilidade
durante o aquecimento dos alimentos
1,2
.
43
QUINIA, S. P.; FERREIRA, M.
Os mtodos clssicos para a determinao do AA baseiam-se no seu forte
poder redutor. Para sucos de frutas, a tcnica mais utilizada a da titulao de
Tillmans que se baseia na reduo do 2,6 diclorofenol-indofenol por uma soluo
de AA, mas este mtodo sofre a interferncia de ons ferrosos, estanho, cobre
cuproso e sulto que so redutores, interferindo portanto na anlise
3,4
.
Encontram-se na literatura vrios procedimentos analticos para a
determinao do AA, sendo a espectrofotometria de absoro molecular muito
utilizada na determinao devido a facilidade de reduo do [Fe
3+
(SCN
-
)n]
+3-n

pelo AA e posterior complexao do Fe
2+
com substncias que absorvem na regio
de comprimento de onda do ultra-violeta ao visvel
5,6,7,8,9,10
.
O efeito benco do AA como vitamina aliado ao seu emprego como
aditivo em alimentos, leva-nos a desenvolver novos procedimentos analticos
para a determinao do AA em frmacos e em alimentos. Avaliar a quantidade
de AA constitui um importante fator para o controle da qualidade de alimentos,
bebidas e frmacos. Sua caracterizao em frutos tropicais relevante, pois pode
contribuir para um aproveitamento mais racional dos recursos naturais gerando
benefcios sociais e econmicos.
O objetivo desse experimento foi otimizar um procedimento analtico
rpido e econmico para a determinao do teor de AA presente em suplementos
vitamnicos e sucos de frutas. A reao da titulao foi baseada na destruio do
complexo [Fe(SCN)
n
]
(+3-n)
pelo AA presente nas amostras.
Materiais e mtodos
Solues de reagentes e amostras
Todos os reagentes utilizados na execuo do trabalho foram de grau
analtico (PA) e a gua utilizada na preparao de todas as solues foi ultra-pura
(Human UP 900). Soluo de tiossulfato de sdio: 1,0 x 10
-1
mol L
-1
padronizada
com dicromato de potssio. Soluo de iodo: 3,0.10
-2
mol L
-1
padronizada com
soluo padro de tiossulfato. Em todos os procedimentos envolvendo iodo, usou-
se uma soluo de amido 1% m/v como indicadora do ponto nal da titulao.
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A soluo do complexo de Fe
3+
foi preparada a partir do reagente cromognico
tiocianato de potssio. Uma soluo padro de AA 1,1.10
-2
mol L
-1
foi utlizada
nas titulaes espectrofotomtricas para a otimizao do mtodo analtico.
Desenvolveu-se o trabalho com amostras comerciais de suplementos
vitamnicos base de AA e frutas coletadas na regio de Guarapuava-PR. Os frutos
foram resfriados aps a coleta e o teor de AA foi determinado no mesmo dia. Para
as amostras de laranja e maracuj, extraiu-se e ltrou-se o suco. As amostras de
buti, uvaia, acerola e ara foram despolpadas e ltradas.
Titulao iodomtrica de frmacos
Pesou-se exatamente a massa da pastilha do suplemento vitamnico
contendo o AA. A amostra foi solubilizada com gua e transferida para um balo
volumtrico de 100 mL. Pipetou-se 25 mL da amostra e transferiu-se para um
erlenmeyer de 250 mL. Adicionou-se 5 mL da soluo de amido. Fechou-se o
erlenmeyer com plstico PVC contendo uma pequena abertura para inserir a
ponta da bureta e titulou-se com a soluo de iodo 3,0.10
-2
mol L
-1
rapidamente
at o aparecimento da cor azul
11
.
Otimizao do procedimento analtico para a titulao
espectrofotomtrica de frmacos e sucos de frutas
As determinaes de AA foram realizadas em um espectrofotmetro UV-
VIS (E225 D, monofeixe). Para efetuar as anlises, utilizou-se a tcnica da titulao
espectrofotomtrica do complexo Fe
3+
[(SCN)
n
]
+3-n
com solues contendo o AA.
soluo de Fe
3+
[(SCN)
n
]
+3-n
sob agitao, adicionou-se um volume medido do
titulante e efetuou-se as leituras de absorvncia. A operao foi repetida alm do ponto
de equivalncia. A curva de titulao espectrofotomtrica foi otimizada usando-se
solues padro do complexo de Fe
3+
e de AA. O comprimento de onda utilizado nas
medidas foi de 460 nm, escolhido com base no espectro obtido atravs de uma curva
de absorvncia versus comprimento de onda (Figura 1). A gura 2 apresenta a titulao
do complexo Fe
3+
[(SCN)
n
]
+3-n
(4,7.10
-4
mol L
-1
) com AA (1,1.10
-2
mol L
-1
), o ponto
45
QUINIA, S. P.; FERREIRA, M.
de encontro entre as duas retas forneceu o volume exato para quanticar o teor de AA.
Foi observado o decrscimo de absorbncia da soluo de Fe
3+
[(SCN)
n
]
+3-n
pela adio
do AA. A juno da amostra contendo o AA reduziu o Fe
3+
a Fe
2+
desfavorecendo
a ligao entre o tiocianato e o ferro. A variao de absorvncia foi proporcional
concentrao de AA adicionada durante a titulao. As medidas espectrofotomtricas
foram realizadas a cada adio do titulante e o ponto de equivalncia foi determinado
gracamente. Quando a titulao foi realizada atravs de agitao manual, obteve-
se uma mistura lenta entre o titulante e titulado e a repetibilidade entre as triplicatas
de uma mesma amostra no foram boas, gerando erros de at 58% na recuperao
do analito, no entanto, com a utilizao de agitao magntica durante a titulao,
a recuperao do analito foi satisfatria e os grcos obtidos apresentaram retas bem
denidas. Traou-se uma curva de calibrao para o tiocianato de ferro (1,0.10
-5
a
8,0.10
-4
mol L
-1
) no comprimento de onda otimizado a m de identicar a faixa
linear de trabalho da tcnica. O coeciente de regresso linear obtido para a curva foi
de 0,9981. Para cada amostra de suco de frutas analisada, utilizou-se 25 mL de soluo
padro de tiocianato de ferro de concentrao denida.
Figura 1. Espectro de absoro molecular para o complexo Fe3+[(SCN)n]+3n
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Figura 2. Curva da titulao espectrofotomtrica do complexo Fe
3+
[(SCN)
n
]
+3-n

4,75.10
4
mol L
-1
com soluo de AA padro 1,1.10
-2
mol L
-1

Resultados e discusses
A volumetria de oxido-reduo a tcnica recomendada pela legislao
para a determinao do AA
4
. No entanto, a tcnica passvel da introduo de
erros sistemticos provenientes do analista, alm de consumir uma quantidade
considervel de reagentes. As titulaes espectrofotomtricas tm diversas vantagens
sobre as titulaes clssicas e determinaes colorimtricas diretas. A presena
de outras substncias que absorvem no mesmo comprimento de onda no
provoca, necessariamente, interferncias, pois somente a variao de absorvncia
signicativa. No procedimento proposto, por meio da titulao espectrofotomtrica
com AA, a amostra foi o agente titulante e a soluo padro de tiocianato de ferro
o titulado. No procedimento analtico, foram tomadas alquotas durante o processo
de titulao para a vericao das absorvncias a cada adio de titulante. As
alquotas eram ento retornadas ao frasco de titulao e dada a sequncia da mesma.
47
QUINIA, S. P.; FERREIRA, M.
A pelcula de lquido que cou aderida a cubeta de leitura no introduziu um erro
signicativo nas medidas, pois os valores obtidos atravs do estudo da adio e
recuperao de analito foram da ordem de 96% a 102%. Os teores de AA obtidos
por espectrofotometria de absoro molecular no UV-VIS foram satisfatrios, pois
apresentaram concentraes iguais s obtidas com a tcnica tradicional (volumetria
iodomtrica). A tabela 1 apresenta os resultados obtidos nas determinaes das
amostras usando tcnicas analticas distintas.
Tabela 1. Determinao de cido ascrbico em frmacos (n=3)
Frmaco Titulao Iodomtrica Titulao Espectrofotomtrica
E 1,110 g 0,002 1,120 g 0,030
R 1,030 g 0,004 0,980 g 0,007
C 1,090 g 0,002 1,060 g 0,020
Como o mtodo de titulao espectrofotomtrica proposto apresentou-se exato,
o mesmo foi aplicado para a determinao do AA em sucos de frutas tropicais. O suco
de algumas frutas apresentaram uma pequena absoro no comprimento de onda de
460 nm. Quando necessrio, estes valores foram subtrados dos valores de absorvncia
a cada volume de amostra adicionado. A concentrao do titulado foi da ordem de
10
-4
mol L
-1
, uma concentrao pequena quando comparada aos teores de AA obtidos
nas amostras. Portanto, nesse caso o efeito da diluio durante o processo de titulao
pode ser considerado desprezvel pelo uso do titulante sucientemente concentrado.
A gura 3 apresenta as curvas das titulaes espectrofotomtricas obtidas
para as frutas laranja bahia, laranja lima, laranja pra, acerola, maracuj, buti,
uvaia e ara. O perl obtido nas curvas de titulao para as amostras foi o
mesmo demonstrado para a curva obtida com os padres de AA e do complexo
de Fe (Figura 2). O tiocianato de ferro se decomps a medida que alquotas dos
sucos contendo AA foram introduzidas na titulao. Pode ser vericado que a
quantidade de amostras e reagentes gastos no procedimento foram pequenos. A
tabela 2 apresenta os teores de AA encontrados nos sucos de frutas em estudo.
A acerola, tal como esperado, mostrou-se uma fonte rica em AA (1,254 g L
-1

do suco), enquanto que, a buti e laranja foram caracterizadas como uma fonte
mdia (0,505 0,687 g L
-1
do suco). A literatura cita que o teor de AA pode variar
48
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de acordo com o grau de maturao das frutas
12
. Em nosso estudo, o composto
AA foi determinado em frutos completamente maduros. Todas as titulaes
apresentaram desvios padro relativos inferiores a 2% para as triplicatas.
As frutas ara, uvaia e buti so encontradas com facilidade na regio de
Guarapuava-PR. Essas frutas apresentaram teores de cido ascrbico inferiores
acerola, no entanto, so teores signicativos e que podem ser introduzidos na dieta
alimentar da populao gerando benefcios sociais e econmicos para a regio.
Tabela 2. Determinao de cido ascrbico em frutas por titulao espectrofotomtrica
(n=3)
Sucos de Frutas Teor de cido ascrbico (g L
-1
)
Acerola 1,254 0,003
Buti 0,687 0,002
Laranja Lima 0,547 0,006
Laranja Pera 0,536 0,014
Laranja Bahia 0.505 0,003
Uvia 0,482 0,007
Ara 0,393 0,030
Maracuj 0,221 0,012
Figura 3. Determinao de AA por titulao espectrofotomtrica: (a) Laranja Bahia, (b)
Laranja Lima, (c)Laranja Pra, (d) Maracuj, (e) Buti, (f ) Uvaia, (g) Acerola, (h) Ara
Continua
49
QUINIA, S. P.; FERREIRA, M.
Concluses
A titulao espectrofotomtrica demonstrou ser vivel para a determinao
de cido ascrbico em frmacos e sucos de frutas, pois utiliza pequenos volumes
de reagentes, possibilita maior rapidez nas anlises e elimina erros sistemticos que
podem ocorrer durante a determinao do AA pela tcnica tradicional de anlise.
A uvia, o ara e a buti so frutos regionais comuns em Guarapuava, PR,
portanto, podem ser facilmente incorporados na dieta alimentar de crianas e
adultos a m de suprir as necessidades dirias.
Agradecimentos
Os autores agradecem UNICENTRO pela bolsa de Iniciao Cientca
institucional concedida a acadmica Mrcia Ferreira.
Referncias
1.BOBBIO, F.; BOBBIO P. Introduo a Qumica de Alimentos. 2. ed. So Paulo:
Livrarias Varella, 1992.
50
Revista Cincias Exatas e Naturais, Vol.9 n 1, Jan/Jun 2007
2. DOSUNMU, M. I.; JOHNSON, E. C. Chemical evaluation of the nutritive
value and changes in ascorbic acid content during storage of the fruit of bitter
kola (Garcinia kola). Food Chem., v.54, p.67-71, 1995.
3. GARDENER, P. T.; WHITE, T. A. C.; McPHAIL, D. B.; DUTHIE, G. G.
The relative contributions of vitamin C, carotenoids and phenolics to the antio-
xidant potencial of fruit juices. Food Chem., v.68, p.471-474, 2000.
4. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1. Mtodos Qumicos e Fsicos
para a Anlise de Alimentos. 3. ed. So Paulo. 1985.
5.ARYA S. P.; MAHAJAN M.; JAIN P. A. Colorimetric method for ascorbic acid
assay of pharmaceuticals. Chemia Analityczna, 43 (2) 231-239, 1998.
6. ARYA S. P.; MAHAJAN, M. Nitroso-R salt as a sensitive spectrophotometric rea-
gent for the determination of vitamin C. Analytical Letters, 30 (14) 2541-2553, 1997.
7. ARYA S.P. e MAHAJAN M. Spectrophotometric determination of ascorbic
acid using an iton II-pyridine-picolinic acid complex. Analytical Sciences. 12 (6)
941-945, 1996.
8. SULTAN S.M. e DESAI N.I. Mechanistic study and kinetic determination of vita-
min C employing the sequential injection technique. Talanta 45 (6) 1061-1071, 1998.
9. MA W. X. Determination of ascorbic acid in medicine by sulfosalicylic acid
spectrophotometry. Spectroscopy and Spectral Analysis. 19 (3) 507, 1999.
10. FERREIRA S. L. C.; BANDEIRA M. L. S. F.; LEMOS V. A.; SANTOS H.
C.; COSTA A. C. S.; JESUS D. S. Sensitive spectrophotometric determination of
ascorbic acid in fruit juices and pharmaceutical formulations using 2-5-bromo-2-
pyridylazo-5-diethylaminophenol. Fresenius Journal of Analytical Chemistry. 357
(8) 1174-1178, 1997.
11. Ofcial Mettods of Analysis of the Association of Ofcal analytical Chemist.
14 ed. Arlington, 1984.
12. VENDRAMINI, A. L.; TRUGO, L. C. Chemical composition of acerola fruit
(Malpighia punicifolia L.) at three stages of maturity. Food Chem., v.71, p.195-198, 2000.