Autores: Echeverri, Gustavo1, Perez, Rosa M1., Contreras, Adriana1, Fandiño, Jolanys1, Pión, Alvaro2.

  1 Grupo de Investigación Microbiología y Ambiente, GIMA. Programa de Bacteriología. Universidad de San Buenaventura, Cartagena, Colombia. gustavo.echeverri@gmail.com. 2 Ingeambiente S.A, ESP, Relleno sanitario La Paz, Director Ambiental.

ENSAYO PILOTO PARA LA BÚSQUEDA DE LA CAPACIDAD DEGRADATIVA DE BACTERIAS AEROBIAS AISLADAS EN PISCINAS DE RECOLECCIÓN DE LIXIVIADOS DE UN RELLENO SANITARIO  

INTRODUCCION
 

El Relleno Sanitario Regional LA PAZ, en Turbana, operado por la empresa INGEAMBIENTE S.A.ESP, utiliza el sistema de operación mediante terrazas, que provee mayor estabilidad y tiene un manejo de lixiviados mediante filtros-canales, que los conducen a dos piscinas de tratamiento. El lixiviado puede contaminar suelo y aguas superficiales o subterráneas, impactando por microorganismos, sustancias tóxicas y nutrientes.   Buscar bacterias aerobias en lixiviados y su caracterización bioquímica, como el montaje de experimentos piloto para ver el comportamiento de la demanda bioquímica de oxígeno (DQO) en el tiempo, ha sido el objetivo de este trabajo, con el fin de ver la disminución de materia orgánica y a futuro poder usar estas bacterias In Situ como una alternativa de control.   Se aislaron e identificaron las bacterias aerobias Cryseobacterium indologenes, Corynebacterium aquaticum, Burkholderia cepacia, Stenotrophomona maltophilia, Streptococcus porcinus, Lactococcus garviae, Leuconostoc pseudomesenteroides, Streptococcus intermedium, Cryseobacterium meningoseptium. Se hicieron curvas de crecimiento a cada una de las bacterias, mostrando fase logarítmica y estacionaria. Se Determinaron parámetros iniciales en una prueba piloto para concretar protocolos para el ensayo de degradabilidad definitivo. Se hicieron 5 grupos testigo, 9 cepas puras encontradas y un consorcio de 3 bacterias, para someterlos a tiempos desde 0 a 168 horas.

OBJETIVO GENERAL
Buscar bacterias aerobias con capacidad de degradar materia organica en aguas de piscinas de recolección de lixiviados en un relleno sanitario. OBJETIVOS ESPECIFICOS •Aislar bacterias aerobias de los lixiviados de piscinas en un relleno sanitario •Caracterizar bioquimicamente las bacterias aisladas de estos lixiviados •Hacer un ensayo piloto para ver el comportamiento de degradabilidad de estas bacterias, midiendo la demanda química de oxígeno (DQO).

RESULTADOS Y CONCLUSIONES
      Se demostró la diversidad en la microflora de bacterias en las dos piscinas de recolección de lixiviados, entre las cuales se encontraron en el mes de Noviembre, Estafilococcus capitis, Shiguella sp., Acinetobacter iwoffi, Pseudomona stucery, Flavomona oryzihabieans, Estafilococcus saprofiticus, Enterobacter cloacae, Stenotrophomona maltophilia, y en el mes de Enero Burkholderia cepacia, Enterobacter cloacae, Stenotrophomona maltophilia, Corynebacterium aquaticum, Leuconostoc pseudomesenteroides, Lactococcus garviae, Cryseobacterium indologenes, Estreptococcus intermedium, Proteus vulgaris, Estafilococcus aureus, Cryseobacterium meningoseptium, Estreptococcus porcinus. Debido a que muchas bacterias no toleraron las condiciones adversas en las que se encontraron, se puede ver que en la época de lluvia las bacterias que crecieron fueron diferentes a las que crecieron en la época de sequía.    En la fase final del ensayo entre las 96 y las 168 horas, se presenta el valor más bajo de materia orgánica 15.4%, por el ensayo que contiene la cepa de Burkholderia cepacia   La bacteria que mostró mayor capacidad de degradación de la materia orgánica fue la Burkholderia cepacia en un 84.6% seguida de la Stenotrophomona maltophilia que presentó un porcentaje de 82%.   La bacteria Cryseobacterium indologenes presentó un porcentaje de 21.2%, de degradación de la materia orgánica presente en el lixiviado, siendo este valor el más bajo de todos los ensayos realizados.   Teniendo en cuenta el comportamiento de los testigos, se nota que el que presentó el menor porcentaje de degradación fue el lixiviado esteril más caldo nutritivo, con un valor de 19.1%, esto corrobora la capacidad degradativa que tuvieron las bacterias aisladas e identificadas en cada uno de los ensayos realizados.   Existen otras bacterias que también poseen capacidad de degradación de la materia orgánica presente en los lixiviados, ya que el lixiviado no esteril en el ensayo final realizado, presentó un porcentaje de degradación de 61.7%.  Las bacterias que se aislaron en este trabajo investigativo fueron de gran ayuda para acelerar el proceso de degradación de la materia orgánica presente en los lixiviados.  Tomando este trabajo como un primer ensayo experimental a nivel exploratorio, se demostró que las bacterias presentaron la capacidad necesaria para poder degradar la materia orgánica presente en el lixiviado de las piscinas de recolección en el Relleno Sanitario Regional LA PAZ.  Con base en los datos obtenidos en esta investigación se recomienda realizar el diseño de una planta a pequeña escala para hacer ensayos de degradación de materia orgánica IN SITU.

MATERIALES Y METODOS
La metodología utilizada para realizar esta investigación fue la siguiente:        Aislamiento de Bacterias Aerobias: utilizando técnicas sencillas de aislamiento sobre medios de cultivo enriquecidos incubadas a 37ºC, donde posteriormente de purificaron sobre agar nutritivo para conservarlas y seguir procedimientos de caracterización fenotípica por pruebas bioquímicasa.       Identificación Bioquímica: mediante el sistema de identificación BBL Crystal      Prueba de degradabilidad en bioreactores, midiendo DQO, segun el metodo de reflujo abierto frente a los tiempos de contacto, frente a controles y graficando para ver % degradabilidad.
Porcentajes de degradación de cada una de los ensayos. Horas.
 Ensayos 4-8 8-24 24-4 8 92.8 59.6 65.5 60.7 52.7 94.4 77.3 56.6 68 82.6 89.6 63.4 68 97.6 59.2 48-7 2 91.9 58.3 63 52.6 36.2 94.3 76.9 42.7 50.2 82.4 86.8 61.8 53.1 89.5 46.3 72-96 96-16 8 80.9 40.5 38.3 35.9 15.7 78.8 53.9 15.4 18 68.4 67.8 46.7 41.8 74.3 25.7 % final
10000 9000

Curva de degradación de la materia orgánica presente en el lixiviado, por las bacterias no patógenas aisladas en el mes de Enero de 2006

95.8 (T1) LE + CN 68.8 (T2) LNE + CN (T3) LNE (T4) LNE+ CN +1 CEPA (T5)LNE+ CN + 3 CEPAS (6) C. indologenes +CN (7) C. aquaticum + CN (8) B. Cepacia +CN (9) S. maltophilia + CN (10) S. porcinus + CN (11) L. garviae + CN (12) L. pseudomensenteroides +CN (13) S. intermedium +CN (14) C. meningoseptium + CN (15) LE + CN + 3 Cepas 78.9 76.4 78.7 97.0 90.8 81.8 93.8 86.7 97.8 82.2 97.5 99.1 94

95.2 66 72.4 67.9 70.8 94.4 89.7 65.8 83.5 86.7 95.1 67 77.7 97.6 69.7

87.1 48.3 49.2 41.5 20.9 83.7 65.4 25.1 30.5 72.7 81.3 53.1 46.7 86.5 39.4

19.1 59.5
DQO

8000 7000 6000

61.7 64.1 84.3 21.2 46.1 84.6 82 31.6 33.2

5000 4000 3000 2000 1000 0 0 4 8 24 Horas 48 72 96 168

LE+CN LNE+3Cepa S. maltophilia S. intermed

LNE+CN C.indologenes S. porcinus Mezcla

LNE C. aquaticum L. garvariae C. meningosept

LNE+1Cepa B. cepacia L. pseudom

Porcentaje total de degradación de la materia orgánica alcanzado en cada uno de los ensayos realizados.
100 90 80 70 Porcentajes de degradacion % 60 50 40 30 20 10

53.3 58.2 25.7 74.3

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Bioensayos

BIBLIOGRAFIA COLLAZOS, Héctor P. Diseño y Operación De Rellenos Sanitarios. ED. Carrera Séptima Ltda. Segunda Edición. Capitulo 2. KONEMAN, M.D Elmer, Diagnóstico microbiológico. ED. Medica Panamericana. 5 ed. Capítulo 1, 4. Manual de bacteriología II. IV semestre. METCALF & EDDY, INC. Ingeniería de aguas residuales. Tratamiento, vertido y reutilización. ED. Mc Graw Hill.3 ed. Volumen I. Capítulo 3. ORDOÑEZ, Consuelo. Evaluación Y Manejo de La Contaminación Urbana. ICFES. 1 ed. Pág. 158. TCHBANOGLOUS, George. THEISEN. HILL. Gestión Integral De Residuos Sólidos. ED. Mc Graw Hill. Tomo I. Capitulo 9. ACHA, American Public Halt Asociation. WPCA, American wored Word asociation. WPCF, wored pollution control federation. Standard methods for the examination of water and waste waters. 20 ed. 1998. Capitulo 5. E. Merck. Manual de medios de cultivo. 1994, Danmstadt, Alemania. Págs. 138, 195,197. Manual de bacteriología DIFCO. Medios de cultivo deshidratado y reactivo para procedimientos de laboratorio microbiológico y clínico. 9 ed. Pág. 24, 25, 26, 34,35. HOLGUIN, Marta. HIGUERA, Mariana. RUBIO, Blanca. VARGAS, Mercedes. MUÑOZ, Ana. DIAZ, Graciela. Manual De Técnicas De Análisis Para Control De Calidad Microbiológico Para Alimentos De Consumo Humano. 1998, Santa Fe de Bogota. INVIMA. Págs. 15,16 17,18, 19, 36, 37,38. ATLAS, Ronald. BARTHA, Richard. Ecología Microbiana y Microbiología Ambiental. ED. Pearson Educación S.A. Madrid 2002. 4 ed.

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