MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

OBJETIVOS DE LA PRCTICA
-Identifcar metodologas para el estudio de microorganismos anaerobios en
muestras ambientales
- Reconocer los principales gneros microbianos anaerobios
-Conocer la importancia de los microorganismos anaerobios
MATERIALES
- 5 Frascos con 90 ml de agua peptonada
-15 recipientes con 9 ml cada uno de tioglicolato
- Tres balanzas
-Cinco morteros con sus respecti!os pistilos deben estar estriles
-" !idrio de relo# desin$ectados
-5 mec%eros de alco%ol
-&na #arra de anaerobiosis 'Campana desecadora(
-)0 ca#as de petri en!ueltas en papel en grupos de * ca#as para entregarle los
pa+uetes de * a cada grupo total )0 ca#as
-5 erlenme,ers cada uno con 100 ml de agar para Clostridium perfngrens
PROCEDIMIENTO A
1. Tomar una muestra de suelo-
2. .esar 10 gramos de la muestra en un $rasco estril
3. /gitar, mezclar %asta %omogenizar
4. Realizar diluciones en caldo tioglicolato %asta la diluci0n 10
-*
5. Realizar siembra por pro$undidad a partir de las diluciones anteriores es
decir una siembra por cada diluci0n en agar para Clostridium perfringens
(SPS).
6. Incubar en anaerobiosis a 12 3C por *4 %oras-
PROCEDIMIENTO B
1. Calentar 5as diluciones anteriores en ba6o 7ara a 20 3C por
apro8imadamente 15 minutos-
2. Inocular 1 ml de las diluciones anteriores en las ca#as de petri , luego
sembrar por pro$undidad con agar Clostridium perfringens, permitir la
solidifcaci0n del medio-
3. Finalmente incubar todas las diluciones ba#o condiciones anaerobias a 123C
por *4 %oras-
LECTURA DE RESULTADOS
Realizar el conteo de colonias sospec%osas 'Colonias negras( sulfto reductoras en
el agar 9.9 '9ulfto polimi8ina sul$adia8ina(- :ste agar contiene triptona como
$uente de carbono nitr0geno !itaminas , minerales- :l e8tracto de le!adura
proporciona las !itaminas del comple#o ; estimulando as el crecimiento microbiano-
:l citrato $rrico , sulfto de sodio act<an como indicadores de =
)
9- 5as colonias
$orman colonias con un precipitado negro debido al sul$uro de %ierro +ue es
producto de la reducci0n de sulfto a sul$uro mediante el agente tioglicolato +ue
reacciona con el %ierro del citrato $rrico- :l sul$ato de polimi8ina , sul$adia8ina
act<an como in%ibidores de otros microorganismos-