You are on page 1of 57

Saliva, o noua sursa

neinvaziva de determinari
biochimice
SALIVA
• CE ESTE ?
• CARE ESTE COMPOZITIA
ACESTEIA ?
• CE ROLURI ARE ?
• CE COMPUSI PUTEM DETERMINA ?
• CE SEMNIFICAŢIE CLINICĂ AU ?
Sa analizam saliva…
• “oglinda” organismului
• fluid heterogen cu proteine,
electroliti, hormoni si alti compusi
transportati din sange
• solutie de “spalare”, un lubrifiant,
rezervor de ioni, sistem tampon si
antioxidant remarcabil
• prima linie defensiva in stresul
oxidativ

Cavitatea orala:
• mediu extrem de dinamic si unic
• singurul loc din organism unde
tesuturile mineralizate sunt expuse
mediului exterior si care implica
interactiuni complexe intre suprafete
diferite, tesut gazda moale si
tare/alimente/aer/microorganisme
• continut permanent de salivă, care
încearcă să facă faţă unui mediu
extrem de dinamic

AVANTAJELE SALIVEI
• recoltare rapida, oriunde , oricand si
nestresanta
• stabilitate mare a probelor si posibilitate
pastrarii lor indelungate
• tehnica neinvaziva
• repetarea testelor se realizeaza mai usor
• minimalizarea contaminarii pacientilor si a
personalului medical
• concordanta excelenta cu nivelul sanguin
pentru aproape toti compusii
• sensibilitate comparabila cu a sangelui si
specificitate mai mare in unele cazuri


• ofera posibilitatea efectuarii unor
studii in dinamica
• permite o colaborare mai stransa si
permanenta cu pacientul
• nu necesita un echipament special
• se preteaza excelent pentru
screening

Interesul pentru saliva
• evolutia tehnicilor de determinare cu
o mare sensibilitate→concentratia
componentelor salivare este de 10-
100 de ori mai mica decat in sange
• saliva - unanim recunoscuta ca mijloc
de investigare si diagnostic in mai
multe domenii medicale:
endocrinologie, medicina legala,
toxicologie, medicina interna,
medicina dentara
Mandel spunea:
• “Saliva nu este un lichid obişnuit;
aceasta este lipsită de sinceritatea
transpiraţiei, dramatismul sângelui şi
elocvenţa lacrimilor”
• a devenit o alternativă neinvazivă
pentru biochimia clinică
Functiile salivei
• protectie împotriva infecţiilor
bacteriene, virale şi fungice
• implicată în masticaţie,
deglutiţie, vorbire, retenţie
dentară, degustare şi probabil în
comunicarea chimică(sărut !!!!!)

Provenienţa salivei
• produsă de trei glande majore (2
parotide, 2 submandibulare şi 2
sublinguale) şi de glande minore(GSM)
localizate în buze, mucoasa orală şi
limbă
• contribuţia relativă a glandelor
salivare individuale la saliva totală
este diferită în condiţii normale şi de
stimulare
SECRETIA SALIVARA

GLANDELE SALIVARE
• Parotide
• Sublinguale
• Submaxilare
• Glande mici diseminate
în mucoasa bucală
SALIVA: PROPRIETĂŢI
• Volum: 1-1,5l/zi
–  la stimularea alimentară
–  la repaus alimentar şi somn
• Aspect: opalescent, filant
• pH: 6,7 (5,6-8)
• Osmolaritate: 50-100 mOsm (hipotonă)
• Vâscozitate: 

SALIVA: COMPOZIŢIE
• Amilaza salivară: hidrolizează amidonul preparat  dextrine  maltoză
• Mucinele salivare: roluri: în formarea bolului alimentar,
asigură masticaţia, deglutiţia şi vorbirea,
participă la sistemele tampon.
• Natriul şi clorul: SALIVA < plasmă.
• Potasiul şi bicarbonatul: SALIVA > plasmă.
• Calciul: forme săruri anorganice
compuşi organici, fixat de macromolecule.
• Fluorul: rol în formarea fluorapatitei care asigură rezistenţa smalţului.

• Alţi constituenţi:
– oImunoglobulinele asigură apărarea antibacteriană. IgA secretor este
sintetizată în glandele salivare.
– oLizozimul distruge mucopolizaharidele din peretele bacteriilor;
– oTiocianatul are un rol antibacterian, inhibând dezvoltarea bacteriilor,
virusurilor şi micoplasmelor.

SALIVA: ROLURI
1. Rolul digestiv – amilaza salivară realizează digestia
amidonului până la maltoză.
2. Rolul protectiv prin:
1. lubrefierea structurilor moi şi dure din cavitatea bucală
2. formarea filmului de mucină de la suprafaţa alimentelor
şi a structurilor buco-dentare
3. Rol antibacterian, intervenind în menţinerea igienei buco-
dentare, prin lizozim, tiocianat, imunoglobuline.
4. Rol de stimulare a receptorilor gustativi în urma solubilizării
constituenţilor alimentari, inducând senzaţia de gust şi
reflexele secretorii salivare, gastrice, pancreatice.

SALIVA: ROLURI
5. Rol în menţinerea echilibrului
hidroelectrolitic şi acido-bazic.
6. Rol excretor pentru:
1. metaboliţi (uree, amoniac),
2. substanţe toxice (Pb, Hg, alcool, cocaină, nicotină),
3. hormoni,
4. virusuri (poliomielitei, parotiditei epidemice,
rabiei),
5. medicamente.

Saliva reziduală
• produsă în proporţie de 60% de
glanda submandibulară / sublinguală şi
30% de parotidă
• prezentă aproape permanent în
cavitatea orală
SALIVA TOTALĂ
• secretată de glandele salivare dar
include şi constituenţi proveniţi din
sânge, bacterii şi produşi ai acestora,
viruşi, celule epiteliale descuamate,
electroliţi, fluid crevicular (fluid
gingival) şi resturi alimentare →
• ideală pentru identificarea unor
biomarkeri ai afecţiunilor orale şi
sistemice
• frecvent studiată pentru evaluarea
afecţiunilor sistemice
Saliva totala
• Constituentii serici (medicamente,
hormoni)
• ajung in saliva pe cai diferite: transport
activ, difuzie pasiva si ultrafiltrare
• sau ca rezultat al secretiei fluidului
crevicular
• in functie de gradul de inflamatie al
gingiei, fluidul crevicular, f. mult studiat in
ultimul timp- considerat fie un transudat
seric sau, mai frecvent, un exudat
inflamator ce contine constituenti serici
Recoltarea salivei
• Cu/fara stimulare
• Stimulare – masticatia - guma de
mestecat sau parafina
• - gustativa – aplicare de
acid citric pe limba
• Afecteaza concentratia unor
constituenti
• Saliva nestimulata- afectata de
gradul de hidratare, expunerea la
lumina, pozitia corpului, momentul
recoltarii

COMPOZITIA SALIVEI
• Componentii salivei -
”mirror of the body’s
health"

COMPOZIŢIA CHIMICĂ
• mai mult de 99% apă- cel mai apos
produs de secreţie al organismului
• substanţa uscată (  0,5%): substanţe
organice (2/3) şi anorganice (1/3)-
foarte dependentă de alimentele
ingerate
Compusi anorganici si
organici
• cele mai importante componente
anorganice-Ca, fosfat
• bicarbonat, Na, K, Cl, I, F,
• cele mai importante componente
organice-proteinele
• identificate prin electroforeză cel
puţin 150
• Saliva totală -  2,2 g/L (10-
500µg/mL) salivar
Albumina

• 1 -10% din proteinele totale salivare şi
concentraţia ei scade cu creşterea fluxului
salivar
• rol antioxidant + uratul şi ascorbatul
• Valori crescute la pacienţii supuşi
chimioterapiei şi la care apare
stomatita→marker predictiv al
complicaţiior
• Valori scazute la pacientii diabetici,
probabil datorita accentuarii stresului
oxidativ la nivelul cavitatii orale, in
conditiile existentei unei boli parodontale
• rolul albuminei in saliva, desi minor, nu
poate fi neglijat, deoarece, în
absenta acesteia, activitatea de
scavenger a uratului scade
• scaderea albuminei la pacientii cu
parodontopatii indica un consum
accentuat al acestei proteine , in
conditiile cresterii stresului oxidativ

Saliva mai conţine
• Factori de crestere: factorul de creştere
neuronal (NGF), epitelial (EGF), insulin-like
(IGF)- justifică activitatea paracrină şi
endocrină a glandelor salivare
• în saliva parotidiană – parotina -activitate
hormonală-implicată în calcifiere şi
menţinerea homeostaziei calcemice
• chemokine şi citokine -implicate în procese
acute, inflamatorii şi imunoreglatoare
• Chemokinele şi receptorii lor - cheia
înţelegerii infecţiilor cu HIV



Citokinele salivare
• grup de GP cu rol imunoreglator
• secretate şi de keratinocitele
mucoasei orale → mucoasa are, pe
lângă alte funcţii şi o foarte
importantă funcţie imunitară
• implicate în inflamaţie, apărarea
antivirală şi antitumorală

Compuşi cu greutate
moleculară mică
• saliva totală  18 aminoacizi
• cel mai abundent – Gly- probabil datorită
scindărilor hidrolitice ale proteinelor prin
intermediul enzimelor bacteriene
• GABA şi fosfatidiletanolamine
• tetrapeptină (Gly-Gly-Lys-Arg) - implicată
în metabolismul plăcii dentare
Alte proteine
salivare
• proteina care îndepărtează mirosul -
odorant – binding protein- leagă
acidul 3-metil-2-hexenoic,
componentul major al mirosului
transpiraţiei
• aceeaşi proteină - implicată în
respiraţia patologică, cu miros
neplăcut (ca o sursă de acizi volatili)
şi în comunicarea chimică (sărutul
!!!!, salivatia sugarilor la vederea
parintilor )
Sialina
• oligopeptidă
• stimulează metabolismul bacteriilor prin
creşterea producerii de acid lactic din
glucoză
• creşterea pH-ului prin sinteza de compuşi
bazici
• denumită şi factor de creştere a pH-ului
• rezultatul amplificării metabolismului -
îndepărtarea rapidă a glucidelor
• important sistem tampon alternant
sistemului bicarbonat

DEFENSINELE
- denumire sugestivă
• Peptide cu valenţe antimicrobiene şi
citotoxice
• Valori crescute în salivă au fost
detectate la pacienţii cu cancere
orale

Istoric
• Surprinzator- saliva a fost utilizata in scop
diagnostic in urma cu aproape 2000 de ani
!!!
• In medicina traditionala chineza- saliva si
sangele- sunt “frati”
• Au origine comuna → semnificatie
diagnostica
• hipersalivatia→arsuri gastrice
• saliva dulce in afectiuni ale splinei sau
intoxicatii cu metale
Afectiuni sistemice (ereditare,
autoimune, cancer si boli
infectioase)

• Afecteaza direct sau indirect
glandele salivare → volumul si
compozitia salivei
• Modificarile unor markeri specifici →
diagnosticul si prognosticul acestor
afectiuni

BOLI EREDITARE

• Fibroza chistica- concentratii salivare
crescute de calciu, fosfati(incidenta
calculilor dentari la copii), proteine si
lipide(alterarea proprietatilor fizico-
chimice ale salivei), uree, acid uric,
prostaglandine si EGF(epidermal growth
factor) cu activitate biologica scazuta
• 17-OHP(17-hidroxi-progesterona)-
excelent test screening –hiperplazia
congenitala a glandelor suprarenale-
corelare perfecta intre nivelul salivar si cel
sanguin
Afectiuni autoimune
• Alterare- flux salivar, pH, capacitate
tampon, profilul citokinelor-
diagnosticul si monitorizarea
sindromului Sjögren (Sindromul Sjögren reprezinta o boala
inflamatorie sistemica, cronica, de etiologie necunoscuta, caracterizata prin
uscaciunea gurii, ochilor si altor mucoase, frecvent asociata cu manifestari reumatoide
cu caracter autoimun (poliartrita reumatoida, sclerodermie, lupus eritematos sistemic)
si in care se intalneste un infiltrat limfocitar in tesuturile afectate. )
CANCER
• Datorita localizarii sale, saliva –fluid
biologic ideal pentru screening-ul leziunilor
orale premaligne si maligne, prognosticul
malignizarii
• Markerii tumorali identificati in saliva –
utili in screening-ul afectiunilor maligne
orale- anticorpii p53(P53 mutation and
mitotic infidelity !!!!) si defensinele
• Nivelul catechinelor salivare(provenite din
ceai) şi activitatea catechin-esterazei
salivare-rol în prevenirea cancerului oral şi
esofagian
• Prognosticul cancerului de san si ovar
Boala Alzheimer
• Activitatea
acetilcolinesterazei salivare -
marker util al modificarilor
asociate bolii si al eficientei
terapeutice cu inhibitori ai
enzimei
Saliva-mediu ideal
• pentru evaluarea markerior
turnoverului tesutului osos
• impact deosebit in implantele dentare
• diagnosticarea si monitorizarea
osteoporozei si parodontopatiilor
• fosfataza alcalina, osteocalcina,
osteopontina, etc.
Afectiuni virale
• Saliva- o alternativa utila pentru
diagnosticul hepatitelor virale(A,
B, C)
• sensibilitate si specificitate
remarcabile
HIV
• Teste salivare pentru diagnosticul HIV-Orasure®
(SUA)
• recoltarea si analiza salivei –modalitate simpla,
sigura, rapida, bine tolerata si precisa de
diagnosticare a infectiei cu HIV
• concordanţă excelentă între concentraţia sanguină
si cea salivara
• saliva pacienţilor infestaţi cu HIV - cantităţi
semnificativ mai mari de colagenaze şi inhibitori ai
acestora, comparativ cu pacienţii care nu sunt
seropozitivi-HIV
Monitorizarea
medicamentelor
• Avantajele salivei
• - corelare perfecta intre nivelul salivar si
cel sanguin→index al nivelului
sanguin(etanol)
• - apar rapid in saliva→detectare rapida
• - monitorizare rapida a nivelului unor
medicamente sau depistarea consumului
acestora
• - monitorizarea expunerii la tutun
(tiocianat , cotinina, enzime) sau toxine,
consumul de droguri
Toxine
• Saliva - mediu optim de monitorizare a
unor substanţe chimice toxice pentru
organismul uman (pesticide, tetraclorură
de carbon, nitraţI, etc.) reprezantând în
acelaşi timp şi o modalitate de evaluare a
concentraţiei tisulare a acestor compuşi

Substante sau compusi care
sunt corelati cu nivelul de
stres
• Modificări ale unor componente salivare,
glucagon, cortisol, adrenalină, noradrenalină,
dopamină, peroxizi lipidici, antioxidanţi, sunt
relevante în stres, aşa cum au evidenţiat
determinările efectuate pe personalul medical
de pe ambulanţe, pacienţii care se prezintă la
cabinetele stomatologice, etc.
• Remarcabilă este şi corelarea perfectă între
parametrii salivari şi cei sanguini în stresul
oxidativ

HORMONI
• Concordanţă excelentă între concentraţia sanguină şi
cea salivară
• Reflecta concentratia hormonilor liberi
• Saliva- curent folosita pentru determinarea de cortisol,
dehidroepiandrosterona, testosteron, estradiol, estriol
si progesterona
• monitorizare a pubertăţii precoce sau întârziate, a
hiperplaziei corticosuprarenalei, bolii Addison,
amenoreei, hipopituitarismului, dezvoltarea fătului în
ultima perioadă a sarcinii
• progesterona şi estradiolul în salivă s-a impus ca o
metodă neinvazivă de investigare a funcţiei ovariene




Hormoni
• Cortisolul( C ), testosteronul( T ) şi raportul T/C în salivă
variază semnificativ în timpul competiţiilor sportive şi in
perioada de recuperare
• Cortisolul salivar creşte semnificativ în cursul competiţiilor
sportive nivelul salivar al testosteronei fiind neafectat
• La sfârşitul competiţiei, cortisolul scade rapid, în
aproximativ 1,5 ore, la valoarea bazală iar testosterona
creşte rapid, rezultând un raport T/C foarte mare. In
perioada de recuparare fizică, raportul se menţine crescut ,
>30% faţă de condiţiile bazale, timp de 5 zile
Cortisolul salivar
• Raportul T/C scăzut din timpul competiţiei
corespunde fazei catabolice
• Perioada de refacere post-competiţională
se caracterizează printr-o senzaţie de
oboseală, incapacitate de antrenare
intensivă, recunoscută şi de antrenori şi,
paradoxal, printr-un raport T/C mare,
corespunzător aşa-numitei faze anabolice
• cortisolului salivar facilitează
diferenţierea pacienţilor cu obezitate de
cei cu sindrom Cushing şi poate fi un
parametru util de screening pentru
pacienţii cu sindrom Cushing


Determinari de Ig
• sportivii de performanţă(atleti, jucatori de
tenis, schiori) -stresul fizic din perioada
antrenamentelor şi a competiţiilor induce o
supresie a sistemului imunitar oral
→diminuare semnificativă a IgA salivară
• La aceleaşi concluzii -studiu efectuat cu
cadre didactice, în timpul anului universitar
şi studenţi, după o sesiune de examene
• Persoanele cu bună dispoziţie, cu mult
umor, se caracterizează printr-o
concentraţie crescută de IgA salivară şi
deci predispoziţie mai mică la afecţiuni
respiratorii sau oro-dentare

• Extrem de utila in screening-ul infectiilor
virale(virusul herpesului la om,
citomegalovirus, Epstein-Barr)
• IgA – cel mai bun marker al infectiei cu
rotavirus(RV)
• IgA - rol major în mecanismul de apărare
local
• relaţie inversă între IgA şi
susceptibilitatea la carii
• subiecţii cu concentraţii salivare mici de
IgA şi IgM -incidenţă mare a cariilor
dentare
Boli infectioase
• Posibilitatea monitorizarii prin
detectarea de anticorpi specifici in
saliva
• Helicobacter pylori – stimuleaza
sinteza de anticorpi specifici IgG
(ELISA si PCR)
• A relevat prevalenta in
saliva→explica transmiterea pe cale
orala
Recent …
• diagnosticarea unor afecţiuni dureroase
cronice(artrita reumatoidă, osteoartrita,
migrenele, etc.) prin estimarea
concentraţiei salivare de serotonină,
substanţă P(SP), calcitonin gene-related
peptide(CGRP), factorul de creştere
neuronal(NGF)
• Concentraţiile salivare ale acestor
parametrii sunt semnificativ crescute la
pacienţii cu astfel de afecţiuni, comparativ
cu persoanele sănătoase.
• Concentraţiile salivare ale SP şi CGRP sunt
de aproape 3 ori mai mari decât în plasmă

In patologia orala
• Parametrii salivari ca peroxidaza salivară, acidul
uric, albumina, acidul ascorbic, GGT- indicatori
ideali ai stresului oxidativ din diferite afecţiuni
orale: gingivite, parodontopatii, etc.
• Potenţialul antioxidant al salivei, asigurat în
principal de acidul uric, precum şi concentraţia
antioxidanţilor salivari scad în gingivite şi
parodontopatii
• Activităţile mieloperoxidazei din LPMN
polimorfonucleare, determinată prin
chemiluminescenţa LPMN şi peroxidazei salivare
cresc în gingivite si parodontopatii, constituind
un bun indicator al procesului inflamator

Markeri ai afectiunilor
orale
• AST si FA din saliva – markeri ai
afectiunilor parodontale
• sistemul enzimatic salivar-compromis
in cazul expunerii la fum de tigara
• GGT salivar – marker al stresului
oxidativ indus de fumul de tigara


• cistatina S salivară - biomarker al rezistenţei la
placa bacteriană
• nivelului salivar al amilazei şi lizozimului -
modalitate neinvazivă de monitorizare a
activităţii glandelor salivare
• Trombomodulina( TM )-proteoglican din
keratinocitele gingivale poate regla activitatea
trombinei
• rol anticoagulant major- receptor al trombinei-
acţionează ca şi cofactor în activarea proteinei C
• scăzută în inflamaţiile gingivale şi parodontopatii
• Parodontopatiile din diabet se corelează cu valori
crescute ale metaloproteazelor salivare-utile
astfel în monitorizarea afecţiunilor parodontale
asociate diabetului
Perspective
• elaborarea unor biomolecule în care
domeniile structurale să corespundă unor
necesităţi individuale
• salivă artificială care să includă
oligozaharide ale PRG - facilita lubrifierea
în masticaţie diminuând astfel abraziunile
asociate xerostomiei
• un domeniu adeziv de la mucină sau
fibronectină, prin cuplare cu un domeniu de
la lactoferină sau peroxidază →
tratamentul afecţiunilor orale asociate
plăcii dentare
Continuarea
investigaţiilor pe salivă
• va conduce cu siguranţă la descoperirea
unor noi utilităţi, saliva putând să ne ofere
în continuare multe surprize
• Era genomica in care am intrat a deschis
noi perspective determinarilor pe saliva-
determinari de ADN, ARN
• Dovada: initierea in 2004 a unui consortiu
de cercetare multidisciplinara da catre
National Institute of Dental and
Craniofacial Research pentru elaborarea
unui catalog complet al proteinelor salivare
(Human Salivary Proteome Project)