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SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA, TURISMO Y ALIMENTOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
JUAN GUILLERMO CUBILLOS HINOJOSA
Microbiologo Agroindustrial (c)MSc.

DETERMINACION DEL GRUPO COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES
FECALES (E.coli) EN ALIMENTOS MEDIANTE LA TECNICA DE
FERMENTACION EN TUBOS MULTIPLES
NUMERO MÁS PROBABLE (NMP)
1. INTRODUCCION
El grupo coliformes está formado por todas las bacterias aerobias y anaerobias facultativas,
gram negativas, no formadoras de esporas y con forma de baston que fermentan lactosa,
produciendo gas y acido en 48 horas a 35ºC+/-2. Este grupo lo comprenden varios géneros
de la familia Enterobacteriacea; se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza,
agua y suelo. Es habitual encontrarlos en el tracto intestinal del hombre y animales de
sangre caliente.
La determinación de coliformes fecales (E.coli) en los alimentos se utiliza para
diferenciarlos de otros grupos coliformes de otros orígenes. Los fecales son indicadores del
contacto de la materia prima o el procesamiento del alimento con materia fecal.
La presencia de coniformes en el alimento es signo de mala calidad higiénica en el proceso,
mala manipulación del alimento, recontaminación después del proceso y aun de
contaminación fecal.
La técnica de fermentación en tubos múltiples, los resultados del estudio de los tubos y
diluciones replicados se comunican en términos de Numero Mas Probable (NMP) de
microorganismos existentes. Esté numero, basado en determinadas formulas de
probabilidad, es un calculo de la densidad media de coliformes en la muestra.
2. OBJETIVO


Determinar el grupo coliformes totales en muestras de alimentos.
Adquirir destreza en la determinación de coliformes fecales (E.coli) en los
alimentos.
Adquirir destreza en el montaje de la técnica de fermentación de tubos múltiples.

MATERIALES           Caldo Bilis Verde Brillante Agua peptonada Tubos de ensayo tapa rosca Campanas Durham Micropipeta Pipetas de 1mL Maceradotes Probetas Incubadora Gradillas 4.coli)   Tomar a partir de los tubos positivos en C. utilizando tres tubos por cada dilucion. Prueba confirmatoria de (E. totales una azada y transferirlas a los tubos con caldo bilis verde brillante. .3. METODOLOGÍA Procesar la muestra y realizar las diluciones seriadas en agua peptonada. Prueba para coliformes totales   Pipetear 1mL de cada una de las diluciones del homogenizado del alimento en tubos con caldo bilis verde brillante. Agitar suavemente los tubos e incubarlos a 35ºC +/-2 durante 24-48 horas.5°C+/-2 durante 24-48h.coli)  Tome los tubos positivos de la prueba anterior y siémbrelos en una caja Petri que contenga EMB. Agitar los tubos e incubarlos a 44. Prueba para coliformes fecales (E.

Pe p 10-2 9 ml APep 10-3 1 m l 1 m l Incubar 35ºC +/-2 durante 24-48 horas + + + Incubar 44.5ºC +/-2 durante 24-48 horas .Técnica de NMP para 9 tubos (Muestras diluidas líquidas o sólidas) 10 Gram os 10 ml 1ml 1ml 90 ml Agua pept ona 10-1 1 m l 9 ml A.

1998.coli siguiendo las características establecidas por el medio cultivo EMB y reporte los tubos confirmados como positivos. se puede usar la siguiente fórmula para hallar el NMP por g ó mL: (NMP de la tabla x Factor de dilución intermedio de la lectura)/ 100 = NMP/g ó mL 7.coli en agar EMB. que se observa por el desplazamiento del medio en la campana de Durham. Enumeración de coliformes y E. 6.coli Obsérvese las colonias típicas de E. obsérvese los tubos que muestren fermentación (turbidez) y producción de gas. 2002. están directamente relacionados con la frecuencia con que se presentan una serie de resultados positivos. repórtelos como positivos.coli) Pasado en tiempo de incubación.  Los resultados se expresan como NMP/ g ó mL de alimento.  Confirmación de E.  Coliformes fecales (E. Manual de técnicas de análisis para control de calidad microbiológico de alimentos para consumo humano. coli NMP. Los resultados de un análisis de NMP. Cap 4 Metódo II . que son los más probables que ocurran cuando un número dado de organismos están presentes en una muestra de alimentos. LECTURA DE RESULTADOS  Coliformes totales Pasado en tiempo de incubación. que se observa por el desplazamiento del medio en la campana de Durham. BIBILOGRAFIA   INVIMA. Nota: En caso de realizar más diluciones que las que posea la tabla empleada. obsérvese los tubos que muestren fermentación (turbidez) y producción de gas. EXPRESION DE LOS RESULTADOS  De acuerdo a la serie obtenida en cada una de las pruebas. obsérvese la tabla anexa de NMP para tres tubos. BAM. repórtelos como positivos. teniendo en cuenta la prueba confirmatoria de E.Confirmar tubos positivos sembrándolos en EMB e incubando a 35°C+/-2 5. hay veces dependiendo del alimentos se expresa como NMP / 100mL.

ANEXO TABLA NO. 1 TABLA DE NMP CUANDO SE USAN 9 TUBOS PARA MUESTRAS DILUIDAS NÚMERO DE TUBOS POSITIVOS NMP/g ó mL LIMITES DE CONFIANZA 10-1 10-2 10-3 99% 95% 000 <3 <1 23 <1 17 010 3 <1 28 1 21 100 4 1 35 2 27 101 7 1 36 2 28 110 7 2 44 4 35 120 11 1 50 2 38 200 9 3 62 5 48 201 14 3 65 5 50 210 15 5 77 8 61 211 20 5 80 8 63 220 21 4 177 7 129 300 23 10 230 10 180 301 40 10 290 20 210 310 40 20 370 20 280 311 70 20 520 30 390 320 90 30 660 50 510 321 150 50 820 80 640 322 210 100 1900 100 1400 330 200 100 3200 200 2400 331 500 200 6400 300 4800 332 1100 333 >2400 .