1.

Sterilisasi alat dan bahan

Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ini harus disterilkan sebelum
dipakai. Alat-alat yang dipakai seperti gelas, labu ukur, tabung reaksi dan cawan petri
disterilkan di dalam oven pada suhu 160-170C selama 2 jam. Media yang digunakan
dalam penelitian disterilkan di dalam autoclaf pada suhu 121C selama 15 menit,
dimana pada suhu ini endospora dan bakteri dapat dibunuh. Jarum ose sebelum
digunakan disterilkan dengan nyala bunsen.
2. Pembuatan media
5.1

Larutan Standart Mc. Farland

Campurkan larutan asam sulfat 1% sebanyak 9,95 ml dengan larutan
barium klorida 1,175% sebanyak 0,05 ml ke dalam tabung reaksi dan
dikocok homogen.

5.2

Media Brain-Heart Infusion Broth (BHI)

Masukkan 37 g serbuk BHI dan 1 L aquades ke dalam labu erlenmeyer dan
dipanaskan hingga larut sempurna. Kemudian disterilkan dalam autoclaf
pada suhu 121C selama 15 menit.

5.3

Larutan NaCl 0,9%

Timbang serbuk NaCl sebanyak 9 g dan dilarutkan ke dalam 1 L aquades
pada labu erlenmeyer dan dipanaskan hingga larut sempurna. Kemudian
disterilkan dalam autoclaf pada suhu 121C selama 15 menit.

5.4

Media agar Mc. Conkey

Timbang serbuk Mc.Conkey sebanyak 25 g dan dilarutkan ke dalam 500 ml
aquades pada labu erlenmeyer dan dipanaskan hingga larut sempurna.
Kemudian disterilkan dalam autoclaf pada suhu 121C selama 15 menit.
Selanjutnya dituang ke dalam cawan petri.

5.5

Pembuatan suspensi bakteri

Satu ose bakteri Escherichia coli disuspensikan ke dalam 2 ml media BHI
dan diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37C. Kemudian diencerkan
dengan NaCl 0,9% sampai kekeruhannya sama dengan standar Mc. Farland
(108 CFU/ml).

5.6

Pembuatan kontrol positif

1 tablet ampisilin 500 mg digerus hingga halus kemudian ditimbang
sebanyak 0,0001 g. Selanjutnya dilarutkan dalam 10 ml aquades.