No 17

MARZO 2014

EL ENCUENTRO CON LA GERMINACIN

APUNTES AL MARGEN DEL DESARROLLO Y DIRECCIN DE
TESIS DE LICENCIATURA Estudio in-vitro sobre la
germinacin de Basidiosporas de Pleurotus ostreatoroseus
Sing., DE LA FACULTAD DE BIOLOGA, ZONA XALAPA DE
LA UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Armando Lpez Ramrez

Instituto de Investigaciones Forestales

Universidad Veracruzana

El objetivo del trabajo era obtener

cepas de Pleurotus ostreatoroseus a
partir de cultivos monospricos, cuerpo
fructfero y cultivos multiespricos. Al
Iniciar los experimentos con cultivos
multiespricos a partir de una cepa
obtenida en el ao de 1985 por A.
Lpez, se intentaron un gran nmero de
cultivos de los cuales ninguno fue apto
para obtener cepa ya que no se
desarrollaba micelio al paso de los das.
Esto nos condujo a una observacin
ms directa de las esporas que se
encontraban en cultivo; se conocieron
las esporas y se revisaron para
determinar si estas germinaban o no.
En este momento el objetivo del trabajo
da un giro y transforma exclusivamente
en un trabajo acerca de la germinacin.
Con la esporada obtenida en 1985 los
resultados obtenidos no fueron tan
favorables, ya que las esporas estaban
en un estadio de reposo, ya sea por el -

tiempo que llevaban almacenadas o por

la forma de almacenaje. Desconocemos
exactamente el factor pero, de cualquier
manera, estas esporas haban entrado
en latencia, de la que existen dos tipos:
una causada por agentes externos
(como
humedad, temperatura, etc.)
llamada latencia exgena y otra dada por
caractersticas internas propias de las
esporas, a la que se conoce como
latencia constitutiva. Nos atrevemos a
suponer que el tipo de latencia que
presentaban las esporas estudiadas se
latencia exgena.
Posteriormente cuando se obtuvieron
esporadas frescas se sembraron de
inmediato. Desde luego que la atencin
brindada no era para menos ya que
haba
que
estarlas
vigilando
al
microscopio para ver qu es lo que
sucedera con ellas, teniendo como nico
parmetro en este experimento al
tiempo.

Una vez iniciado el experimento se

midieron las esporas a su ancho y
largo, y revisndolas constantemente
nos pudimos dar cuenta que estas se
estaban hinchando cuando su volumen
era casi el doble en ancho y casi igual
de largo; despus de una espera de
casi 8 horas, llego el momento
esperado en el que brot, de la espora
hinchada, una protuberancia (llamada

tubo germinativo) mismo que creca de

manera
constante
para
despus
presentar una divisin transversal
(llamada
septo)
y
posteriormente
presentar este mismo tubo una
ramificacin lateral. Cabe aclarar que no
solo se observ un tubo, sino que en un
tiempo relativamente corto se form un
segundo tubo al otro extremo de la
espora.

Tablas: Formacin del Primer y Segundo tubo germinativo de

ostreatoroseus bajo diferentes condiciones de temperatura.
Temperatura
0

10 C
0
16 C
0
22-24 C
0
30 C
0
35 C
0
40 C

Tiempo de formacin del 1er tubo

germinativo
--------------12.00 hrs
8.00 hrs
4.15 hrs
-----------------------------

basidiosporas de Pleurotus

Tiempo de formacin del 2do tubo

germinativo
--------------38.45 hrs
12.45 hrs
7.00 hrs
-----------------------------

Fuente: Sosa Melgarejo Lilia. 1989.

Tablas: Eventos de la germinacin de basidiosporas de

temperatura.

Temperatura

10 C
0
16 C
0
22-24 C
0
30 C
0
35 C
0
40 C

Inicio de
hinchamiento

Tiempo
de
formacin
del 1er
tubo
germinativo

Tiempo
de
formacin
del 2do
tubo
germinativo

Tiempo
de
formacin
del 1er
septo en
el 1er
tubo
germinativo

--------6.30 hrs
1.45 hrs
2.00 hrs
1.15 hrs
1.05 hrs

--------12.00 hrs
8.00 hrs
4.15 hrs
-----------------

--------38.45 hrs
12.45 hrs
7.00 hrs
-----------------

--------36.30 hrs
10.15 hrs
7.30 hrs
-----------------

Pleurotus ostreatoroseus en funcin de la

Distancia
del
primer
septo al
pice

--------33 um
9.9 um
6.5 um
-----------------

Tiempo
de
formacin
de la 1ra
ramificacin en el
1er tubo
germinativo
--------39.45 hrs
15.30 hrs
8.30 hrs
-----------------

Distancia
de la
primera
ramificacin a la
espora

--------9.9 um
6.0 um
9.6 um
-----------------

Duracin
del
proceso
de
germinacin

--------180 hrs
100 hrs
85 hrs
-----------------

Fuente: Sosa Melgarejo Lilia. 1989.

Existen factores que afectan a la

germinacin a tal grado que esta se
puede dar o no, como son el caso del
pH,
luz,
humedad,
temperatura,
viabilidad de la espora as como
nutrientes en el medio.
Tomando al factor temperatura como
variable,
se
realizaron
varios
experimentos para ver que es lo que
suceda en las esporas y nos dimos
cuenta de que en temperaturas tan
mnimas como 100C y tan altas como
350C, estas no germinaban, pasando
tambin por los puntos de temperatura
ptima
para
esto.
Este mismo
experimento permiti darnos cuenta
que la temperatura tambin afecta a la
velocidad del inicio de la germinacin,
la velocidad de crecimiento del tubo
germinativo as como tambin el
porcentaje germinativo. Respecto a los
experimentos hechos con o sin luz no
se presento ningn cambio. Los
resultados fueron iguales con o sin luz.
Este fenmeno solo lo estbamos
viendo a nivel superficial de la espora y
de ello surgen muchas dudas qu es
lo que est pasando dentro de esta
espora? Porque aumenta de tamao?
Cmo es que se emite el tubo?
Para qu est apareciendo el tubo? Y
muchas preguntas ms.
Sera un tanto difcil dar respuestas
acertadas a cada una de las preguntas
que nos hicimos, sobre todo porque no
existe trabajo alguno acerca de la
germinacin de la especie aqu
estudiada; sin embargo, podramos
tener una idea de esto.

Qu es la germinacin?. Se han dado

varias definiciones de esto y se podran,
en cierto momento, complementar unas
con otras como que: se trata de un
cambio que presenta la espora de una
inactividad, o que existen cambios en las
esporas e tipo fisiolgico, bioqumico y
morfolgico. La germinacin de las
esporas es un proceso complejo que
involucra una serie de cambios
morfolgicos, fisiolgicos y bioqumicos,
bajo
determinadas
condiciones
ambientales adecuadas.
La palabra germinar se deriva del
vocablo latino germinare, que significa
brote. Desde tiempos pasados, se ha
considerado que las esporas germinan
en el momento en que se forma el primer
tubo germinativo. Sin embargo, ahora
conocemos que la formacin de dicho
tubo es parte de una secuencia de
eventos iniciados con anterioridad.
Convencionalmente, se le ha dividido en
dos fases: 1) hinchamiento de la espora
y 2) formacin del tubo germinativo.
Numerosos cambios estructurales has
sido observados en estas dos fases,
como son: visibilidad del retculo
endoplsmico; incremento en nmero y
talla de las mitocondrias; aumento en el
numero de ribosomas; sntesis del cido
desoxirribonucleico y cido ribonucleico;
sntesis de protenas; incremento en la
respiracin; incremento en la actividad y
cantidad de enzimas; disminucin de
materiales de reserva (cuerpos lipdicos,
manitol, trealosa); formacin de nueva
pared, etc.
La germinacin prcticamente es un
cambio de la espora a nivel de estructura
y metablico, pero an se desconocen ---

los factores que desencadenan estos

eventos.
El hecho es que en el inicio de este
fenmeno se da cuando la espora
empieza a hincharse y se debe a una
imbibicin de la misma con agua, as
como a cambio metablico que ya
existe dentro de ella. De manera
general podemos decir que las reservas
que tena la clula como lpidos,
carbohidratos,
etc.,
se
estn
degradando para dar lugar a energa
que es necesaria para este inicio de
actividad. Para que esto inicie es
necesario que enzimas preexistentes
en la clula se activen, as como que
tambin se formen otras debido a que
implica que la actividad de los
ribosomas aumente, as tambin su
nmero.
Existe adems incremento en el
nmero y talla de mitocondrias as
como una activacin y replicacin a
ADN y ARN.
El retculo endoplsmico, que
esporas latentes de otras especies
ha visto difuso, en este caso
encuentra abundante, as como
aparato de golgi.

en
se
se
el

Se ha encontrado que existe un poro

germinativo en las esporas por el cual
se emitir el tubo germinativo; sin
embargo, su emisin puede ser distinta.
Este puede ser una elongacin de la
pared de la espora ya existente o puede
ser la proyeccin de una nueva pared
que se forma internamente de la que ya
exista. Por afinidad a los grupos de ---

hongos estudiados con respecto al

tratado en este trabajo, suponemos que
se trate del segundo caso.
Se supone que el crecimiento del tubo
germinativo esta dado por vesculas
emitidas por el retculo endoplsmico y
que pasa a travs del aparato de golgi y
del dictiosoma para asociarse en la parte
apical y de esta manera crecer.
El tubo germinativo deja de serlo en el
momento en que presenta su primer
septo y pasa a ser una hifa. Una de las
funciones del septo es la de no permitir
el paso de los ncleos, pero si el paso de
citoplasma. Posteriormente a esto,
surgen las ramificaciones laterales y se
desconoce qu factores regulan la
emisin de esta pero se ha inferido que
es regida por el crecimiento apical.
Nuestros estudios de ultra estructura
mostraron que la superficie de la pared
de las basidiosporas de Pleurotus
ostreatoroseus es lisa, como se haba
observado en el microscopio de campo
claro por luz trasmitida.
Los
estudios
ultraestructurales
(microscopia electrnica de transmisin)
de las basidiosporas de Pleurotus
ostreatoroseus nos muestra que la
pared es delgada, en relacin al tamao
de la espora. La membrana se observa
con algunas ondulaciones, pero esto
probablemente sea inducido por la
tcnica de fijacin.
En base a las caractersticas de las
basidiosporas de P. ostreatoroseus, se
deduce que son quiescentes.

Arriba: ultraestructura de
basidiospora de Pleurotus
ostreatoroseus a 16,000x:
f=pared de la espora;
m= membrana citoplasmtica;
mn= membrana nuclear;
n=ncleo;
w=nuclolo;
cl=cuerpos lipdicos.

Derecha: Basidiosporas de P.
ostreatoroseus a 2,000

Fotos cortesa de Sosa Melgarejo Lilia. 1989

Caractersticas tales como:

-

Germinan en condiciones
adecuadas.
Germinan sin la adicin de
nutrientes.
Poseen una pared delgada en
relacin al a espora.

De acuerdo con Hawker y Madelin

(1976), la pared delgada de las esporas
es una caracterstica de aquellas que
germinan en condiciones adecuadas.
Las
basidiosporas
originalmente
reciben un ncleo proveniente del
basidio, pero en algunas ocasiones
puede dividirse y contener ms de uno,
como es el caso de las basidiosporas
de Psilocybe cubensis Sing, que tiene
dos ncleos (Ruch y Motta, 1987). Las
esporas estudiadas en este trabajo
tienen un solo ncleo, el que
originalmente recibi del basidio.
El ncleo de las basidiosporas, aqu
tratadas, presenta polaridad con los
cuerpos lipdicos (en un polo el ncleo,
y en el otro los cuerpos lipdicos). Se
desconoce el porqu de este fenmeno.
En basidiosporas de Psilocybe cubensis
Sing., tambin los cuerpos lipdicos
presentan
polaridad
en
ambos
extremos y los ncleos (2) en la parte
central (Ruch y Motta, 1987).
Los resultados obtenidos en este
trabajo son exclusivos para la especie
aqu tratada, as como tambin para
esporas que contaban de 1 a 4 meses
de almacenamiento en las condiciones
ya mencionadas.

Es de considerar que si se estudiaran

esporas con tiempo de almacenamiento
ms avanzado o en condiciones de
almacenamiento
diferentes,
los
resultados probablemente no seran los
mimos.
En experimentos posteriores a los ya
expuestos se observ que las esporas
que tenan ms de 5 meses de
almacenamiento, bajaron su porcentaje
germinativo, llegando a ser menor al
10%, por lo que se considera en periodo
de latencia.
Es de suponer que se trata de un
latencia exgena, probablemente
a la forma de almacenamiento
esporas o a alguna otra
desconocida.

tipo de
debida
de las
causa

El presente ensayo es un relato del

encuentro con el fenmeno de la
germinacin.
LITERATURA
-

Hawker, L. E.; M. F. Madelin. 1976.

The dormant spore. En: (Weber, D.J.;
H. Wilford eds.). The Fungal Spore.
John Wiley and Sons. New York.
Pags. 1-72.
Sosa Melgarejo, L. 1989. Estudio in
vitro sobre la germinacin de
basidiosporas
de
Pleurotus
ostreatiroseus
Sing.
(Fungi:
Basidiomyctes) de la Regin de
Xalapa,
Ver.,
Mxico.
Tesis
Profesional. Pags 4; 58-60.
Ruch, D. G.; J. J. Motta. 1987.
Ultraestructure and Cytochemistry of
dormant basidiospopre of Psilocybe
cubensis. Mycologia 79 (3): 387-389.