You are on page 1of 10

CAPITOLUL 11

Separarea prin cromatografie de lichide (LC)


11.1. Istoric
nceputul cromatografiei de lichide este atribuit lui wet (1903), care a reuit
pentru prima dat separarea unor compui naturali colorai pe o coloan umplut cu
carbonat de calciu, utiliznd o faz mobil alctuit din solveni organici. Dezvoltarea
cromatografiei de lichide ca tehnic analitic are loc ceva mai trziu i este legat de
necesitatea crescnd de separare a compuilor organici din matrici complexe.
In iunie 1941, Societatea Britanic de Biochimie, i inea cea de-a 214-a edin
de comunicri, la Institutul Naional de Cercetri Medicale. La aceast ntlnire Martin i
Synge, doi tineri chimiti (Martin avea 31 de ani; Synge 26), au prezentat o lucrare
despre separarea i determinarea amino-acizilor N-acilai din probe de ln, printr-o nou
metod analitic. Acetia au separat acetil-prolina de acetil-leucina, utiliznd o coloan
umplut cu silicagel impregnat cu ap (un material foarte polar) i cloroform ca faz
mobil. Lua natere astfel cromatografia de partiie, recunoscut apoi ca separare prin
cromatografie de lichide n faz normal.[106,107] Exact 10 ani mai trziu, Martin i un alt
tnr cercettor (A.James 29 ani) trimiteau spre publicare o lucrare descriind un proces
cromatografic n care faza mobil este un gaz.[108,109] Se puneau bazele cromatografiei
de partiie gaz-lichid. In anul 1948 Martin i grupul su de cercetare ncep cercetri la
Institutul Naional din Londra cu privire la problema separrii cromatografice a acizilor
grai, cu caten hidrocarbonat mare. Aplicarea separrii cromatografice n faz normal
nu a dat rezultatele dorite, deoarece coeficienii de partiie ai acestor compui erau
aproape total n favoarea fazei mobile. Deci retenia i astfel separarea lor pe o coloan
polar nu avea loc. Ideea de a schimba rolurile celor dou faze a venit imediat. Astfel au
realizat prima faz staionar nepolar prin tratarea kiselgurului cu Si(CH3)2Cl2, care
devine total neaderent de ctre solveni polari i hidrofili. In anul urmtor au realizat
pentru prima dat separarea acidului lauric (C12) de acidul stearic (C18). Mai trziu,
tehnica bazat pe acest principiu avea s fie cunoscut ca separare prin cromatografie
de lichide n faz invers, dei pn n 1970 chiar i IUPAC considera aceast tehnic
analitic doar de interes istoric. Prin realizarea fazelor staionare chimic legate aceast
tehnic ia o mare dezvoltare, n prezent fiind cea mai important tehnic analitic de
separare.[110] Contribuiile eseniale ale lui Martin i Synge la dezvoltarea cromatografiei
au fost rspltite n anul 1952 prin acordarea Premiului Nobel n Chimie.
Prima faz staionar sintetizat este atribuit autorilor Halasz i Sebastian
(1969), care au refluxat silicagelul cu 1-octanol, obinnd eterul avnd la baz o structur
destul de instabil n prezena apei, caraterizat de legturile Si-O-C:
Si OH + HO-(CH2)7CH3

Si O

(CH2)7CH3 + HOH

In 1970 Kirkland i DeStefano au ataat lanuri hidrocarbonate la structura silicagelului


prin utilizarea reactivilor de derivatizare de tip silanic, obinnd structuri mult mai stabile
179

pe baz de legturi Si-O-Si, ca n exemplul urmtor:


CH3
Si OH + Cl

CH3

Si (CH2)7CH3

Si O Si (CH2)7CH3 + HCl

CH3

CH3

Horvath, Knox, Soczewinski, Snyder, Scott, Kirkland, Guiochon sunt doar cteva
nume mari de oameni de tiin care au adus contribuii fundamentale, teoretice sau
experimentale, la dezvoltarea cromatografiei de lichide ca tehnic analitic de mare
performan.
11.2. Clasificarea separrilor prin cromatografia de lichide
Retenia n cromatografia de lichide este un proces complex, care implic
interacii ale speciilor din proba injectat att cu faza mobil, ct i cu faza staionar.
Cunoaterea mecanismului dup care se desfoar procesul de retenie are ca prim
avantaj pentru analist posibilitatea prediciei acestuia i mai ales alegerea acelor condiii
experimentale pentru atingerea unor selectiviti maxime ntre analii. Cea mai important
clasificare a separrilor LC este bazat pe mecanismul care st la baza separrii, care la
rndul su depinde de natura celor faze (staionar i mobil) participante n procesul de
separare cromatografic. Cele mai importante clase de separri LC sunt urmtoarele:
A) Cromatografia de lichide n faz normal (NP-LC normal-phase liquid
chromatography) n care faza staionar este polar, iar faza mobil este alctuit dintrun solvent nepolar cu un coninut mic de modificator polar.
B) Cromatografia de lichide n faz invers (RP-LC reversed-phase liquid
chromatography) n care faza staionar este nepolar i hidrofob, iar faza mobil este
alctuit dintr-un solvent polar.
C) Cromatografia de lichide prin mecanism de schimb ionic (IC ion
chromatography), n care faza staionar este un schimbtor de ioni, iar faza mobil este
apoas cu un pH controlat.
D) Cromatografie de lichide prin mecanism de excludere (sau cromatografie pe
gel), n care faza staionar este un gel cu porozitate controlat, iar componenii probei
sunt separai n funcie de forma i dimensiunea molecular.
E) Cromatografie de lichide bazat pe interacia diferit a compuilor asimetrici
cu anumite structuri din faza staionar (numite selectori de chiralitate).
Cele mai importante separri cromatografice se efectueaz n prezent pe o
coloan cromatografic, confecionat dintr-un metal. In interiorul coloanei se gsete
faza staionar, fixat la capete ntre dou frite. Diametrul i lungimea sunt parametri
constructivi, funcie de care coloanele se mpart n mai multe clase, descrise n tabelul
urmtor.
Cromatografia de lichide planar este o tehnic cu aplicaii din ce n ce mai puin
utilizate n practic analitic. Cromatografia pe hrtie sau cromatografia n strat subire n
diverse variante (ascendent sau descendent) pot decurge prin unul din mecanismele
de mai sus, iar vizualizarea compuilor separai sub forma de spoturi se poate face
utiliznd proprietatea de absorbie sau de fluorescen a analiilor separai, cu sau fr
reactiv de derivatizare (aa-numita developare). Exist i posibilitatea ca spoturile
rezultate s fie izolate i apoi printr-o procedur de extracie cu un solvent adecvat,
analitul coninut s fie determinat printr-o tehnic spectrometric.
180

[111]

Tabel 11.1. Clasificarea coloanelor n LC n funcie de dimensiuni.


Descriere
i.d. (mm)
Debit optim faz mobil
d.p. (m)
Coloane deschise

< 0,025

< 25 nL/min

Coloane nanobore

0,025 0,1

25-4000 nL/min

0,1 - 1

0,4 200 L/min

1-2

3-5

0,05 1 mL/min

Coloane capilare
Coloane microbore
Coloane narrow-bore

2-4

3-5

0,3 3 mL/min

Coloane normal-bore

4-5

3-7

1 10 mL/min

Coloane semi-preparative

5 - 10

5 - 12

5 40 mL/min

Coloane preparative

> 10

5 - 20

> 20 mL/min

11.3. Faze mobile n cromatografia de lichide


Faza mobil (nepolar) n cromatografia de lichide n faz normal (NP-LC) este
alctuit din dou componente principale:
a) solventul nepolar, care poate fi unul dintre solvenii: pentan, hexan, ciclohexan;
b) modificator polar (ntr-un procent foarte mic): tetrahidrofuran, 2-propanol, acetonitril,
eteri, esteri, cloroform, etc.
Acetia pot fi clasificai n solveni slabi (cu putere elutropic mic) i solveni tari
(putere elutropic mare, dup cum se poate observa din tabelul 11.2).
Faza mobil (polar) n RP-LC este n general alctuit din dou componente
principale: componenta apoas i componenta organic. Parametrii fazei mobile care
influeneaz retenia n RP-LC sunt urmtorii:
Natura modificatorului organic (acetonitril, metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol,
tetrahidrofuran, dioxan, etc); puterea elutropic a modificatorului organic este o msur a
capacitii sale de a micora factorul de capacitate (timpul de retenie) al analiilor: cu ct
puterea elutropic este mai mare, cu att timpul de retenie va fi mai mic.
Coninutul modificatorului organic (% n volume): de regul, cu ct concentraia
modificatorului organic este mai mare, cu att timpul de retenie al analiilor este mai mic
(prin creterea solubilitii analiilor n faza mobil);
pH-ul i componentei apoase din faza mobil influeneaz retenia analiilor cu
proprieti acido-bazice;
Natura acidului (acizi formic, acetic, trifluoracetic, tricloracetic) sau a tamponului utilizat
n componenta apoas (se pot utiliza soluii tampon pe baz de fosfat, borat, acetat, etc,
cu amoniac, trietilamina, dar cu pH-ul cuprins ntre 2 i 8);
Tria ionic a componentei apoase (care depinde de concentraia unor sruri adugate,
sau de concentraia soluiei tampon);
+
Natura i concentraia agenilor de formare de perechi ionice (R4N ; R-SO3 ; R-O-SO3 ,
etc).
Solvenii folosii n LC trebuie s fie filtrai (pentru a nu conine particule n
suspensie), degazai i de puritate cromatografic. Folosirea unor solveni cu particule
solide n suspensie conduce la colmatarea coloanei cromatografice i a sistemului
cromatografic. Prezena unor gaze (N2 sau O2) dizolvate n faza mobil poate influena
181

detecia, deoarece dup ieirea din coloana cromatografic fluxul mobil are o presiune
mai mic dect n coloan i astfel se pot forma bule gazoase care pot perturba n
procesul de detecie.
11.4. Faze staionare n cromatografia de lichide
Faz normal
Cea mai important faz staionar n cromatografia de lichide n faz normal
este silicagelul (SiO2). Acesta este considerat un adsorbant foarte polar, datorit
gruprilor silanol reziduale din matricea sa. De asemenea, Al2O3, ZrO2, sau TiO2 sunt
menionate des ca faze staionare polare n NP-LC. Fazele staionare polare legate sunt
derivate din silicagel; acestea conin grupri funcionale polare X, precum hidroxil, nitro,
cian, sau amino, legate printr-un lan hidrocarbonat scurt R:
CH3
Si O Si R X
CH3

Dintre acestea, aminopropil-silicagelul sau dihidroxipropil-silicagelul sunt cele mai


utilizate faze staionare legate n separrile LC prin acest mecanism.
CH 3

CH 3
Si O

Si CH 2 CH 2 CH 2 NH2

Si O

Si CH 2 CH
CH 3

CH 3
Aminopropil-silicagel

CH 2

OH OH

Dihidroxipropil-silicagel

Utiliznd tehnica derivatizrii amino-silicagelului cu acidul dodecamolibdofosforic


s-au realizat noi faze staionare polare, utilizate n separarea compuilor aromatici.
Retenia puternic a compuilor aromatici pe astfel de faze staionare polare se explic
prin interacia puternic a orbitalilor din nucleele aromatice cu orbitalii d ai Mo.[112]
Si

OH

O
Si

(CH2)3-NH3

(CH2)3-NH3

(CH2)3-NH3

O
Si

3PMo12O40

O
Si

Faz invers
In cromatografia de lichide n faz invers (RP-LC) fazele staionare sunt
hidrofobe. Acestea se pot obine prin modificarea chimic a silicagelului (sau chiar
182

aluminei) sau pot fi de natur polimeric. De aceea, aceste faze staionare se mai
numesc i faze chimic legate (bonded phases). Principiul de sintez a fazelor chimic
legate se bazeaz pe reacia gruprilor silanol reziduale din matricea silicagelului tratat
termic cu un agent de silanizare. In figura urmtoare, prin reacia de derivatizare, n una
din cele dou modaliti menionate, s-a introdus radicalul hidrocarbonat octadecil legat
de matricea silicagelului.[113,114]
In funcie de natura radicalului R grefat prin intermediul reactivului de derivatizare
de tip silanic se disting urmtoarele faze staionare (redate n ordinea descresctoare a
hidrofobicitii lor):
-C18H37 (octadecil-silicagel, sau C18);
-C8H17 (octil-, sau C8);
C6, C4, C2
-C6H5 (fenil-);
-C6H4-NO2 (nitrofenil);
-(CH2)3-CN(cianopropil).
CH3

CH3
OH + X

Si

Si

(CH2)17CH3

Si

(CH2)17CH3

Si
CH3

CH3

Si

pKa = 5-7

(CH2)17CH3

O
Si

OH

Si

OH + X

O
Si

Si
X

Si

O
(CH2)17CH3

Si

Si

(CH2)17CH3

O
O

Si

(CH2)17CH3

Si

(CH2)17CH3

X
OH

Si

Silicagel

Densitate:
2
4,5 mol/m

Densitate:
2
8 1 mol/m

Fig. 11.1. Modaliti de obinere a fazelor staionare chimic modificate din silicagel,
utiliznd reactivi de derivatizare mono-funcionali sau tri-funcionali, i unele caracteristici
ale suprafeei silicagelului nainte i dup derivatizare.

Cu toate acestea, n materialul rezultat dup reacia de silanizare o parte


nsemnat a gruprilor silanol rmn intacte. Prezena acestora n compoziia fazei
staionare poate influena mecanismul de separare, datorit interaciunilor dipol-dipol sau
183

prin legturi de hidrogen cu grupri similare din moleculele de analit. Derivatizarea


complet a acestora conduce la faze staionare complet inertizate (cunoscute n literatura
de specialitate ca faze staionare de tip end-capped) i se poate efectua prin utilizare
unui reactiv de derivatizare trifuncional, plus aplicarea n final a unei silanizri cu
trimetilclorsilan, care datorit volumului su mai mic poate accesa restul de grupri
silanol, ecranate steric de gruprile chimic legate deja introduse anterior.
Fazele staionare chimic modificate de tip monolitic, coninnd radicali
hidrocarbonai R, se obin prin procese sol-gel. Aceste materiale au un aspect ceramic,
caracterizate de o porozitate nalt, iar radicalii R sunt orientai n afara matricei solide.
Prepararea unor astfel de materiale de tip ceramic pornete de la reactivul de baz
tetrametoxisilan, care prin hidroliz acid (n prezen de HCl) formeaz compui
intermediari cu legturi Si-OH, datorat reaciei:[115]
Si(OCH3)4 + n HOH Si(OCH3)4-n(OH)n + n CH3OH

In continuare au loc reacii de condensare ce conduc la formarea de legturi siloxanice,


iar structura devine tridimensional:
Si OH + HO Si

Si O Si

+ HOH

Si OCH3 + HO Si

Si O Si

+ CH3OH

Dac alturi de tetrametoxisilan se adaug ntr-un raport molar ales trimetoxialchilsilan;


structura tridimensional rezultat va conine radicali hidrocarbonai R legai de atomul de
siliciu. Ecuaia reaciei poate fi scris n mod simplificat astfel:
OCH3
x CH3O Si OCH3
OCH3

R
+ y CH3O Si OCH3

HOH

O
O

OCH3

( Si O ) (Si O )
x

+ (4x + 3y) CH3OH

La nclzire, molecule de ap i metanol sunt eliminate din porii materialului format.


Acesta poate lua forma unei bare care apoi se introduce n coloana cromatografic.
Fazele staionare modificate din silicagel au o mare aplicabilitate n cromatografia
de lichide, dar prezint i unele inconveniente. Dou dintre inconvenientele cele mai
serioase ale acestor faze staionare sunt:
- domeniul de pH al componentei apoase utilizate este relativ restrns (2-8); la pH-uri sub
2 are loc hidroliza gruprilor O-Si(CH3)2-R, iar la pH-uri mai mari de 8 are loc dizolvarea
silicagelului;
- acestea nu pot fi utilizate n separri cromatografice pentru concentraii ale componentei
apoase n faza mobil apropiate de 100%. In acest caz lanurile hidrocarbonate legate de
structura silicagelului colapseaz, ele neputnd a reveni la conformaia iniial dup
utilizarea de faze mobile total sau aproape total apoase (mai mari de 98%).
Colapsarea lanurilor hidrocarbonate este similar formrii micelelor, lanurile
hidrocarbonate avnd tendina de a micora suprafaa de contact cu mediul apos. In Fig.
11.2 sunt redate tendinele unei suprafee de silicagel chimic modificat cu lanuri
184

hidrocarbonate, n prezena unei faze mobile coninnd un procent semnificativ de


modificator organic, comparativ cu o faz mobil cu un coninut apropiat de 100% ap.
Mediu foarte polar (100% ap)

Mediu polar (solvent organic / ap)

CH3

CH3

O Si

O Si
CH3

CH3

Lanuri hidrocarbonate de tip C18

CH3

CH3
O Si

O Si

CH3

CH3

CH3

CH3

O Si

O Si

CH3

CH3

Fig. 11.2. Conformaii ale lanurilor C18 n prezena unui mediu ap + modificator (solvent) organic
(partea stng) i n prezena unui mediu total apos (partea dreapt).

Acest ultim inconvenient s-a putut rezolva prin realizarea de faze staionare
chimic modificate, coninnd grupri polare intercalate ntre lanul hidrocarbonat i atomul
de siliciu. O astfel de structur este mai flexibil la faze mobile total sau aproape total
apoase. Sinteza lor presupune dou etape, una de introducere a gruprii polare, urmat
de introducerea radicalului hidrofob R. Dou dintre posibilitile aplicate n obinerea
fazelor staionare chimic legate cu grupri polare intercalate sunt prezentate n
continuare. Calea de sintez a fazelor staionare legate, cu grupare polar intercalat de
tip amidic este urmtoarea:[116]
CH3

OH
OH

CH3

CH3 CH2O

OH

Si

OH

NH2

NH2

Si
CH3
CH3

CH3

NH2

Si

OH CH3

OH
(silicagel)
CH3

O
OH

Si

Grupa amidica

NH

CO

CH3

Si

CH3

NH

CO

C
Cl

OH CH3

Fig. 11.3. Procedeu de derivatizare a silicagelului pentru obinerea fazelor staionare chimic legate
cu grupare polar amidic intercalat.
185

Calea de sintez a fazelor staionare legate, cu grupare polar intercalat de tip


carbamic, este redat mai jos:[116]
O

CH3

OH

OH

CH3

OH

Si

Cl

CH3

OH

N
H

Si

OH

N
H

CH3
CH3

- HCl

Grupare
carbamica

Si

OH CH3

N
H R
O

Fig. 11.4. Procedeu de derivatizare a silicagelului pentru obinerea fazelor staionare


chimic legate cu grupare polar carbamic intercalat.

Rspuns detector

Introducerea gruprii polare influeneaz procesul de retenie cromatografic.


Gruparea polar poate interaciona cu grupri polare din moleculele de analit. In cazul
gruprilor polare intercalate de tip amidic sau carbamic, pot interveni interacii - ntre
analit i gruparea polar din faza staionar. Astfel, n exemplul redat n Fig. 11.5, ordinea
de eluie se poate modifica n cazul perechii de analii trans-stilben i dibenzil la eluia
printr-o coloan umplut cu faz staionar C18 cu grupare polar intercalat, comparativ
cu una C18 clasic. Spre deosebire de dibenzil, molecula de trans-stilben posed n plus
o dubl legtur carbon-carbon, care determin o interacie mai puternic cu legturile
din gruprile polare ale fazei staionare. In schimb, n cazul separrii pe o coloan clasic
C18, ordinea de eluie este dat de ordinea hidrofobicitii; trans-stilbenul este mai puin
hidrofob dect dibenzilul, datorit dublei legturi (vezi Tabelul 2.4), astfel c va elua
primul din coloana cromatografic.

Rspuns detector

min

min

Fig. 11.5. Compararea separrii unui amestec de trans-stilben i dibenzil, pe o coloan


cu faz staionar C18 (sus) i faz staionar C18 cu grupare polar intercalat (jos).
Condiiile de separare identice pentru cele dou coloane: faza mobil compus din
70% CH3OH i 30% H2O; debit 1 mL/min; 40C; detecie UV 254 nm.[117]
186

11.5. Mecanismul de separare LC n faz normal


Cromatografia de lichide n faz normal se aplic de obicei la separarea
compuilor organici foarte polari, cum sunt aminoacizii.
Cromatografia lichid-solid (LSC) este de obicei denumit ca o tehnic de
separare n faz normal, caracterizat de utilizarea unui adsorbant anorganic sau a unei
faze staionare chimic legate cu grupri funcionale polare, iar ca faz mobil neapoas
unul sau mai muli solveni organici apolari (n special hexanul) n amestec cu un solvent
polar, pn la realizarea unei valori optime a triei solventului din punct de vedere al
polaritii. In cadrul acestei separri, pe suprafaa fazei staionare se formeaz un strat
de molecule adsorbite ale fazei mobile, cu o compoziie ce depinde de alegerea fazei
mobile, care de multe ori nu reflect compoziia acesteia sau modificarea ei n timpul unui
proces de separare n gradient de solvent. Retenia unui solut este determinat de
balana interaciunilor moleculei de solut cu moleculele fazei mobile i a moleculelor
adsorbite pe suprafaa fazei staionare. Pentru acest proces s-au propus pn n prezent
dou modele de retenie:[30] a) modelul competiional dezvoltat de Snyder i Soczewinski;
b) modelul interaciilor de solvent, propus de Scott i Kucera.
In forma cea mai simplificat, modelul competiional presupune c suprafaa
ntreag a adsorbantului este acoperit de un monostrat de molecule ale fazei mobile.
Retenia are loc prin dislocuirea unui numr de molecule de faz mobil, adsorbite la
nivelul centrilor activi ai fazei staionare, echivalente ca volum cu molecula de solut. In
urmtoarea etap are loc dislocuirea moleculei de solut adsorbit de ctre molecule ale
fazei mobile. O reprezentare schematic a acestui model simplu de explicare a reteniei
n NP-LC este redat n figura urmtoare.
Analit

Modificator
polar

Fig. 11.6. Reprezentarea schematic a modelului competiional de retenie


n cromatografia de lichide n faz normal.

Conform modelului competiional dat n Fig. 11.6, retenia se bazeaz pe


urmtoarele dou procese fizice care au loc la suprafaa fazei staionare:
Si-OH + nS Si-OH(S)n
Si-OH(S)n + A Si-OH(S)n-xA + xS

, n care Si-OH reprezint centrul de adsorbie de pe suprafaa adsorbantului (considerat


ca fiind gruparea silanol rezidual din structura silicagelului), la care se adsorb n
molecule de solvent polar S din faza mobil, iar molecula de analit A va dislocui x dintre
moleculele de solvent adsorbite.
187

Pentru ca analitul s elueze din coloana cromatografic este necesar ca acest


proces s fie reversibil. De aceea tria interaciei sale cu centrul activ nu trebuie s fie
foarte puternic. Dup cum se poate observa, modelul competiional neglijeaz orice
interacie ntre molecula de analit i moleculele fazei mobile. Predicia reteniei este
redat de relaia simplificat:
k
log 1 = (1 2 )
k2

(11.1)

reprezint parametrul de trie al fazei mobile (putere elutropic), care semnific energia
liber de adsorbie a moleculelor de solut per unitate de suprafa de faz staionar, iar
parametrul este specific moleculei de solut (n dependen de volumul molar). In tabelul
de mai jos sunt redate valorile parametrului pentru cei mai importani solveni utilizai n
mecanismul de faz invers n HPLC.
Tabel 11.2. Valorile parametrului pentru solveni utilizai n NP-LC.
pentru
Solvent
Silicagel
Alumina
n-hexan

0,01

0,01

1-clorbutan

0,20

0,26

cloroform

0,26

0,40

izopropileter

0,34

0,28

acetat de etil

0,38

0,58

tetrahidrofuran

0,44

0,57

acetonitril

0,50

0,65

[118]

Modelul bazat pe interacia moleculelor de solut, respectiv a modificatorului polar


din faza mobil, presupune formarea a dou straturi adsorbite, ca urmare a interaciilor
dipol-dipol. Atunci cnd concentraia modificatorului polar este mic, formarea celui de-al
doilea strat de molecule de modificator polar adsorbite, n interacie cu primul strat i cu
centrul activ, nu are loc, iar interacia moleculei de solut cu centrul activ devine mai
puternic, conducnd la timpi de retenie mari. Dimpotriv, atunci cnd concentraia
modificatorului polar crete, are loc formarea celui de-al doilea strat de molecule
adsorbite, iar molecula de solut va interaciona mult mai slab cu centrul activ, datorit
ecranrii celor dou straturi adsorbite. Ca urmare, timpul de retenie al solutului va fi de
data aceasta mai scurt, fiind dat de relaia simplificat:
1
= + C mod ificator
tr

(11.2)

polar

Aceast relaie este ns valabil pentru un domeniu relativ ngust al concentraiei


modificatorului polar din faza mobil.

188