GENETICA

MEDICINA DENTARA

CURS

14 octombrie 2013

AUTOR:
PROF.DR. EMILIA SEVERIN
UMF Carol Davila
Bucuresti

ADN-ul din celula umana

- molecule

NUCLEU

MITOCONDRIE
CELULA SOMATICA
Source: Getty Images, Dorling Kindersley

GENETICA MD

dublucatenare,
liniare,
neramificate,
organizate in
22 crz.
autozomi, X si
Y.

- molecule
dublu-catenare,
circulare,
neramificate,
organizate in
crz.
mitocondrial.
- o mitocondrie
are 2-10
molecule ADN.

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN
NUCLEAR

ADN
MITOCONDRIAL
ADNmt

ADN-ul nuclear uman

B-ADN

A-ADN;

B-ADN

Z-ADN;

1. Structural este reprezentata

de forma B-ADN dar in anumite
conditii fiziologice isi poate
schimba conformatia
(modificari conformationale):

2. Respecta regulile lui Chargaff

ORGANISM
Homo sapiens

COMPOZITIA IN BAZE (%)

A/T

G/C

A+T/G+C

30,9

19,9

29,4

19,8

1,05

1,0

1,52

3.Se gaseste in
cantitate
constanta in:

GENETICA MD

RAPORTUL BAZELOR

celula GAMETICA:
3,5x 10-9mg ADN
(C corespunde unui
set haploid de
cromozomi, adica 23
crz.)

celula SOMATICA:
7 x 10-9mg ADN
(2C corespunde celor
2 seturi haploide de
cromozomi, adica 46
crz.)

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

MITOZA
CENTRIOL

redistribuie in mod egal cantitatea de ADN

nuclear in celulele fiice
4.Cantitatea ADN per
celula/nucleu este
constanta: CADN=
3,5x10-9mg

CENTRIOL

4C

ADN

2C

MITOZA
ANAFAZA
Separarea
cromatidelor

2C

2C
2C

ADN

2C

ADN

4C
ANAFAZA
Migrarea cromatidelor
spre polii fusului

INTERFAZA
CANTITATEA ADN in timpul MITOZEI:
PROFAZA
4C
METAFAZA 4C
ANAFAZA
2C / 2C
TELOFAZA 2C / 2C

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul nuclear uman

- pe parcursul ciclului
celular cantitatea de
ADN este variabila dar
mitoza repartizeaza in
mod egal cantitatea 4C
ADN in celulele fiice.

5. Cantitatea ADN per

celula/nucleu este
constanta:

Cantitatea de ADN

MITOZA

4C

2C

2C

4C

G1
GENETICA MD

G2 M

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

INTERFAZA

ADN-ul nuclear uman

6. Dimensiunea:

Exprimata prin nr.de

perechi de baze 6x109
p.b. pentru cele 46
molec. ADN nuclear

0,34 x 10-9 m x 3 x 109 =

1,02 m

Exprimata in mm este
106 mm / set haploid
de cromozomi

1nm= 10-9 m= 10-6 mm

7.Masa moleculara : 2x1012 daltoni / celula haploida.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul nuclear uman

- expunerea ADN nativ
la temperaturi ridicate
(peste 800C) produce
ruperea leg. de H care
unesc p.b.
complementare
generand doua catene.
ADN nativ

8.DENATURARE - RENATURARE:

ADN denaturat

ADN renaturat

Racire lenta

t0

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

DENATURAREA/RENATURAREA ADN

Prin denaturare
(separarea
catenelor)
molecula ADN isi
pierde capacitatea
de transformare.

Daca racirea se
face brusc, cele 2
catene disociate
nu au la dispozitie
un timp suficient
pentru a-si putea
gasi secventele
complementare si
raman separate.

Daca racirea se
face lent catenele
vor renatura.

Denaturarea / Renaturarea
au loc in conditii naturale
(replicare, transcriere) si
experimentale.
GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

HIBRIDIZAREA MOLECULARA

HOMODUPLEX
ADN /ADN

RENATURARE

DENATURARE

ARN
HETERODUPLEX
ADN /ARN

DENATURARE;
Adaugare de ARN

GENETICA MD

RENATURARE

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul celulei umane

ADN-ul nuclear
provine de la ambii
parinti.

ADN-ul mitocondrial
provine numai de
la mama.

CELULELE COPILULUI

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN-ul mitocondrial uman (ADNmt)

1.Dimensiune:
~16,6Kb;

2.Numar molecule:
100 10.000 copii/celula;

3.Structura:
dublu-catenar, cu diferente de densitate
intre cele doua catene; catena grea
(H=heavy) bogata in guanina si catena
usoara (L=light) bogata in citozina.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

11

NUMARUL DE MITOCONDRII IN CELULA UMANA

TIPUL de CELULA
Majoritatea celulelor somatice: 100-10.000
Limfocite:
1000
Ovocite:
100.000
Spermatozoid: cateva sute
Hematia si celulele diferentiate terminale ale
epidermei NU au mitocondrii.

ARN-acidul ribonucleic
ADN

ARN
Baza

Baza
DEZOXIRIBOZA

Grup fosfat

RIBOZA

Grup fosfat

NUCLEOTIDE
Pirimidine

Purine

Pirimidine

Purine

BAZE

POLINUCLEOTIDE
SURSA:http://www.phschool.com/science/biology_place/biocoach/bioprop/rna.html

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

13

ADN versus ARN

COMPONENTE STRUCTURALE ALE ADN si ARN
ADN si ARN

Exclusiv in ADN

TIMINA

ADENINA

GUANINA

Exclusiv in ARN

CITOZINA

URACIL

GRUP FOSFAT
DEZOXIRIBOZA

GENETICA MD

RIBOZA

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

14

TRANSCRIPTOM ARN-omul
ARN necodant (ARNnc)
DEFINITIE:
setul de
transcripte,
molecule de
ARN codante si
necodante,
produse intr-o
celula /
tesut / organ,
intr-un anumit
moment;
reflecta genele
care sunt
exprimate in
acel moment.

GENETICA MD

- molecule functionale netranslate in

proteine
- Reprezinta 4/5 din transcriptom

1. Implicat in sinteza de proteine

( ARNr, ARNt)

2. Implicat in procesarea post-

transcriptionala sau replicarea ADN

(ARN-telomeraza)

3. Implicat in reglare genica

(microARN sau ARNmi, ARN

interferent mic sau ARNsi, ARN
antisens sau ARNa)

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

15

ARN-urile CELULARE
LOCALIZARE SI FUNCTII IN CELULA EUCARIOTA
* Toate tipurile de ARN sunt transcrise in nucleu

LOCUL

unde isi indeplineste functia

in celula

TIPUL DE ARN

FUNCTIE

ARN mesager (ARNm)

Nucleu si citoplasma

Transcriptie translatie
Purtator al mesajului genetic al unei
gene ADN din nucleu in citoplasma

ARN ribozomal (ARNr)

Citoplasma

Translatie
Component structural si functional al
ribozomilor (sinteza proteica)

Citoplasma

Translatie
Transportul aminoac. din citoplasma la
ribozomi (sinteza proteica)

ARN de transfer (ARNt)

ARN nuclear mic (ARNsn)

Nucleu

Matisare
Prelucrarea ARNm precursor

ARN nucleolar mic (ARNsno)

Nucleu

Modificarea ARN-urilor
Biogeneza si maturarea ARNr si ARNt

micro ARN (ARNmi)

Citoplasma

Reglare genica
Inhiba translatia ARNm sau
degradeaza ARNm

ARN interferent mic (ARNsi)

Citoplasma

Reglare genica
Degradarea ARN

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

16

SINTEZA TIPURILOR MAJORE DE ARN CELULAR

ADN

GENE ARNr

GENE ARNt

ARNr

GENE pt. sinteza

proteinelor

ARNt

ARNm

NUCLEU
CITOPLASMA

LANT POLIPEPTIDIC

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN
T
R
A
N
S
C
R
I
P
T
I
E
T
R
A
N
S
L
A
T
I
E
17

ARN-urile in celula eucariota

CITOPLASMA

ADN
Transcriptie

NUCLEU

ARNm

Proteine

ARNt

Translatie

ARNm

RIBOZOM

GENETICA MD

Membrana
celulara

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

18

SINTEZA ARN (transcriptie)

ARN polimeraza

ADN-catena 5 3
Ribonucleotide

ARN
MATRITA
ADN-catena 3 5

Directia transcriptiei

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

19

SINTEZA ARN (transcriptie)

ARN-polimeraza

ADN

ARN

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

20

ARNm-acidul ribonucleic mesager

PURTATOR DE MESAJ
GENETIC :

- (transporta
informatia
genetica)

- se sintetizeaza
in nucleu sub
forma ARNhn.

- se formeaza
ARNm matur

GENETICA MD

- este prelucrat
posttranscriptional,
MATISARE.

- trece din nucleu

in citoplasma
unde participa la
sinteza proteica.

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

21

ARNr-acidul ribonucleic ribozomal

Monocatenar, cu
regiuni bicatenare.

Punti de hidrogen

Localizat in nucleol
(locul de sinteza si
asamblare al
subunitatilor ).
Baze azotate
Coloana fosfoglucidica

Rol in translatie.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

22

ARNr

proteine

subunitate

Ribozomi
asamblati

P
R
O
C
A
R
I
O
T
E

E
U
C
A
R
I
O
T
E
GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

23

ARNt-acidul ribonucleic de transfer

- micropolimer,

- CCA loc de
legare al
aminoacizilor.

monocatenar, cu
regiuni bicatenare,
adopta forma literei
alpha.
Modelul molecular
3D al ARNt

Diagrama structurii ARNt

Loc de
legare
al aac.

Brat DHU

Regiuni
bicatenare

Brat
acceptor
Brat TC

- anticodon:
complem. unui
codon ARNm, rol
in translatie.

Baze
rare

Anticodon

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

24

ARNt-acidul ribonucleic de transfer

ARNm
GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

25

REPLICAREA moleculei ADN

Sinonime:

Duplicatia
ADN

Biosinteza sau
sinteza ADN

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

26

REPLICAREA moleculei ADN

DEFINITIE:

GENETICA MD

Procesul prin care

este duplicata
molecula de ADN
bicatenara.

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

27

REPLICAREA ADN si CICLUL CELULAR

Crestere celulara
Pregatirea
DIVIZIUNII celulare

4C
ADN

4C
ADN

MITOZA

Diviziune celulara

2C
ADN

18 -24

ORE

2C
ADN

Crestere celulara
Pregatirea
REPLICARII ADN

REPLICAREA ADN

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

28

MODELE TEORETICE DE REPLICARE A

MOLECULEI ADN EK

Modelul
CONSERVATIV

Modelul
SEMICONSERVATIV
Modelul
DISPERSIV

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

29

IPOTEZE (MODELE
TEORETICE) DE REPLICARE A

MOLECULEI ADN Ek

Molec.ADN inainte de REPLICARE

Model semiconservativ

Dupa prima REPLICARE

Model conservativ

Model dispersiv

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

30

IPOTEZE (MODELE
TEORETICE) DE REPLICARE A

MOLECULEI ADN Ek
Model conservativ

Model dispersiv

Model semiconservativ

Molec.ADN
inainte de REPLICARE

prima
REPLICARE

a doua
REPLICARE

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

31

EXPERIMENTUL LUI
MESELSON & STAHL, 1958

Au experimentat pe Escherichia coli

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

32

EXPERIMENTUL LUI MESELSON & STAHL

ETAPE:

Prin centrifugare se
separa 15N de 14N.

Au crescut bacteriile pe
un mediu de cultura cu
NH4Cl in care azotul era
marcat cu 15N (izotopul
greu si stabil al azotului).

Dupa mai multe generatii,

bacteriile devin mai
dense.

Extrag ADN-ul bacteriilor

si il centrifugheaza.

Dupa mai multe generatii

trec bacteriile pe un
mediu cu azot normal
(14N).

La intervale de timp,
20-30, se extrage ADN si
se separa prin
centrifugare.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

33

EXPERIMENTUL LUI MESELSON & STAHL

Transfer pe un
mediu cu 14N si
REPLICARE

Mediu de cultura
cu 15N

CENTRIFUGARE

REPLICARE in
mediu cu 14N

CENTRIFUGARE

CENTRIFUGARE

14N
15N

INTERPRETAREA REZULTATELOR

ADN initial
Catena
VECHE

GENETICA MD

Catena
NOUA

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

34

EXPERIMENTUL LUI MESELSON & STAHL

ADN se replica semiconservativ sau prin alte modele?

METODA

Extractie
ADN

REZULTATE

Extractie ADN
dupa 20
dupa 40

ADN usor
ADN intermediar
ADN greu
ADN original

Prima
replicare

A doua
replicare

INTERPRETARE

Concluzie: ADN se replica SEMICONSERVATIV

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

35

ADN usor
Solutie
(clorura de
cesiu)

ADN greu

ADN

intermediar

ADN usor
ADN

intermediar

GENETICA MD

1) Prin centrifugarea in solutie de

CsCl2 a ADN nemarcat se
formeaza o banda caracteristica
la varful tubului de centrifuga.

2) Prin centrifugarea in solutie de

CsCl2 a ADN marcat cu 15N se
formeaza o banda caracteristica
la baza tubului de centrifuga.

3) Prin centrifugarea in solutie de

CsCl2 a ADN hibrid (o catana
marcata si una nemarcata) se
formeaza o banda cu pozitie
intermediara, la mijlocul tubului
de centrifuga.

EXPERIMENTUL lui
MESELSON&STAHL,
1958

Separarea moleculelor
ADN prin centrifugare in
functie de greutatea lor
moleculara.

4) Prin centrifugarea in solutie de

CsCl2 a moleculelor ADN
nemarcate si hibride se
formeaza benzi distincte
caracteristice fiecarui tip de
molecula.

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

36

SINTEZA ENZIMATICA A ACIZILOR NUCLEICI

IN VITRO

Arthur
KORNBERG, 1956
Izoleaza o enzima
numita

ADN POLIMERAZA
din bacteria E.coli
ADN POLIMERAZA:
1) produce elongatia in directia
5-3
2) reduce frecventa erorilor
(proofreading)
3) excizeaza primer-ul (actiune
exonucleazica)

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

37

ADN POLIMERAZELE la Ek:

- familie de proteine cu activitati diferite:
replicarea, repararea si recombinarea ADN.

FAMILIA ADN polimerazelor (Pol):

- Pol are rol de ARN primaza;
- Pol intervine in repararea ADN;
- Pol si realizeaza elongatia ADN.
1. Polimerizarea nucleotidelor extinzand catena ADN dar
nu pot initia sinteza unei catene.
2. Reduce frecventa erorilor de replicare (autocorectie sau
proofreading) prin verificarea corectitudinii ultimului
nucleotid inserat in timpul replicarii
( activitate exonucleazica 3-5).

3. Corectarea bazelor modificate sau alterate dupa

replicare prin activitate exonucleazica 5-3.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

38

REPLICAREA ADN IN VITRO Kornberg,1956

Foloseste un sistem celular liber format din:

1. Catena matrita (amorsa) ADN;
2. toate cele 4 dezoxiribonucleozide trifosfate (dATP, dTTP, dGTP, dCTP);
3. enzima ADN POLIMERAZA.

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

39

SINTEZA ADN in vivo

Modelul OKAZAKI (1968) foloseste E.coli

Reiji si Tsunako OKAZAKI

1) Enzima ADN
polimeraza NU poate
initia sinteza;

2) ADN polimeraza
permite
polimerizarea
nucleotidelor numai
in directia 5 3.

GENETICA MD

Modelul are in vedere

caracteristicile
ADN POLIMERAZEI:

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

40

MECANISMUL MOLECULAR AL REPLICARII ADN

De la ORI replicarea
progreseaza in
ambele directii pana
cand ADN este
complet duplicat;

La nivelul ORI se
fixeaza pe ADN
proteinele de initiere
a replicarii;

De la ORI cele doua

catene se separa
formand o structura in
forma de Y sau
furculita de replicare;

Procesul de replicare incepe

din punctele de origine a
replicarii numite ORI;

GENETICA MD

Replicarea este initiata

prin aparitia unui
PRIMER;

REPLICAREA
ADN
in vivo

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

ADN polimeraza adauga

nucleotide la extremitatea
3 OH a primer-ului.

41

MODELUL REPLICARII ADN

CATENA ADN
AMORSA

FURCA DE REPLICARE

FRAGMENTE OKAZAKI
formate pe CATENA INTARZIATA

CATENA AVANSATA

DIRECTIA REPLICARII ADN

CATENA ADN
AMORSA

GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

42

MECANISMUL REPLICARII ADN

a catena amorsa 3-5;

b catena nou sintetizata continuu (CATENA AVANSATA);
c catena nou sintetizata discontinuu (CATENA INTARZIATA);
d furca de replicare;
e primer;
f fragment (piesa) OKAZAKI
GENETICA MD

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

43

FRAGMENT (piesa) OKAZAKI

( la Ek are intre 100

200 nucleotide fiind
de 10X mai scurta
comparativ cu piesa
Okazaki de la Pk).

GENETICA MD

- scurta secventa ADN sintetizata

pe catena intarziata in timpul
replicarii ADN.

CURS 3 - A nu se copia sau distribui fara copyright

44

NE REVEDEM PESTE DOU

SPTMNI , acelai loc i
aceeai or

LUNI
28
octombrie