TUGAS KIMIA MEDISINAL

MEKANISME OBAT ANTIKANKER

CYCLOPAMINE

Disusun Oleh:
Aulia Siti Nurhayati

260110100151

Oktavia S D S

260110100152

Dewi Gayuh Lestari

260110100153

Maratussholikhah N

260110100154

Lovi Deliani

260110100155

Septian Anggadibya

260110100158

Ghina Rahimah

260110100159

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS PADJADJARAN
2013
0

Cyclopamine and Hedgehog Signaling:

Chemistry, Biology, Medical Perspectives
Biology Of Cyclopamine
Pada akhir tahun 1970-an Nuslein-Volhard dan Wieschaus mempelajari
mutasi di lalat buah Drosophila melanogaster dan mengidentifikasi lebih dari 50 gen
berbeda yang secara langsung berpengaruh pada perkembangan embrio di
Laboratorium Biologi Molekuler Eropa di Heidelberg. Salah satu gen ini
menyebabkan tumbuhnya lapisan duri di bagian bawah larvanya ketika telah
mengalami mutasi. Karena larva ini mirip dengan landak sehingga gennya dinamakan
gen landak (hh). Christiane Nusslein-Volhard dan Eric F. Wieschaus bersama dengan
Edward B. Lewis dianugerahi hadiah Nobel di bidang kedokteran pada tahun 1995
untuk penelitian mereka di bidang genetika mengenai perkembangan embrio awal.
Gen landak mengkode tiga protein unik: Shh (Sonic hedgehog), Ihh (India
hedgehog), dan DHH (Desert hedgehog). Ketiga protein tersebut adalah ligan dari
reseptor ikatan membrane yang menempel (protein 12-transmembran) dan
mengaktifkan sinyal untuk jalur hedgehog, dimana ligan tersebut memiliki pengaruh
tidak langsung pada transkripsi gen hedgehog-response. Dengan tidak adanya ligan
hh, ikatan membran dengan protein Patched1 ( Ptch1 ) ditemukan di dasar silia
primer dekat Sentrosom. Silia adalah ekor yang menyerupai tonjolan pada membran
sel yang dapat ditemukan di hampir setiap sel eukariotik. Mereka terlibat dalam
pendeteksian sinyal mekanik dan kimia dan bekerja untuk membuat sinyal yang
mengontrol pembelahan dan polaritas sel. Ptch1 menghambat di dasar silia utama
yang mengakibatkan pemindahan Smo, protein 7 - transmembran dari kompartemen
intraseluler ke silia dengan mekanisme yang belum diketahui. Sehingga, Sufu
(penekan protein gabungan) tetap aktif , yang akhirnya menyebabkan pemutusan
proteosomal dan transformasi faktor transkripsi Gli2 dan Gli3 menjadi bentuk
repressor. Faktor Gli2/3R menekan transkripsi gen hedgehog-response. Interaksi ini
1

kurang dapat dipahami, meskipun penelitian yang lebih baru menunjukkan bahwa
translokasi Smo dari endosom ke membran silia dihambat oleh pengaruh Ptch1 pada
lipid yang merupakan kompartemen ini.
Ikatan dari ligan hh menghasilkan pemindahan Ptch1 keluar dari silia dan
degradasi oleh lisosom. Kemudian, Smo berpindah ke silia, sehingga mencegah
pemutusan Gli2 dan Gli3. Gli2 yang teraktivasi kemudian berikatan dengan promotor
Gli dalam nukleus dan merangsang transkripsi gen hedgehog-response.
Gen hedgehog merupakan kunci pengaturan dari perkembangan embrio. Pada
serangga, sinyal hedgehog mengatur perbaikan segmentasi dan pengembangan sayap.
Keberadaan gen Shh pada mamalia dilaporkan oleh Tabin dan rekan kerjanya pada
tahun 1993. Pada mamalia, gen tersebut memperbaiki pembentukan tungkai,
kerangka, otot, kulit, mata, paru-paru, gigi, sistem saraf, dan usus serta berperan
dalam pembelahan sperma dan tulang rawan.
Selama penelitian pada sinyal hedgehog, Beachy dan rekan kerjanya mencari
cara sederhana untuk mengontrol jalur ini yang tidak melibatkan gen knock-out.
Penggunaan molekul kecil sebagai probe biokimia merupakan alternatif yang lebih
mudah dan lebih cepat. Namun, molekul yang mampu mempengaruhi sinyal
hedgehog tidak diketahui pada saat itu.
Pada awalnya, Beachy dan rekannya menduga cyclopamine sebagai
penghambat biosintesis kolesterol (berdasarkan kesamaan struktural molekul ini).
Namun, asumsi ini terbukti salah. Pada tahun 1998, Beachy dan rekannya akhirnya
mengidentifikasi bahwa cyclopamine berinteraksi dengan protein Smo pada jalur hh,
sehingga menghambat aktivitas pada jalur ini bahkan ketika terdapat ligan hh.
Cyclopamine mengikat Smo dan menghambat aktivitasnya dengan perubahan
konformasi. Namun, hal ini bergantung pada sinyal hh pada kolesterol dan
metabolitnya karena diperlukan C-terminal cholesteroylation dari ligan hh di proses
pematangan nya. Seperti yang terdapat pada gambar 1 :

Gambar 1. Jalur pengaktifan sinyal hedgehog. A) Dengan tidak adanya ligan hh,
Ptch1 menghambat Smo memasuki silia, sehingga Sufu tetap aktif, faktor transkripsi
Gli2 / 3 diputus oleh proteosom, dan transkripsi gen target hh dicegah. B) Ikatan dari
hasil ligan hh di Ptch1 dihambat dan Smo berpindah ke silia, dimana Sufu dihambat
dan bentuk aktif dari factor Gli2 / 3 dapat mengaktifkan transkripsi gen hh dalam
nukleus; cyclopamine menghambat aktivitas Smo dan menyebabkan deaktivasi jalur
hh.
Ketika domba hamil menelan cyclopamine, perkembangan embrio akan
terganggu karena sangat bergantung pada sinyal hh di beberapa tahap (misalnya, pada
hari ke-14 kehamilan), yang menyebabkan malformasi (kesalahan pembentukan
embrio) telah diamati di Idaho.
Relevansi medis Cyclopamine dan Hedgehog Signaling
Jalur Hedgehog (hedgehog pathway) adalah hal penting dalam proses
perkembangan dan regulasi sel punca (stem cell) serta proliferasi dan diferensiasi sel
progenitor. Penyimpangan aktivasi jalur hedgehog akan mengarah ke keganasan,
termasuk karsinoma sel basal, medulloblastoma, rhabdomyosarcoma, prostat,
pankreas, usus besar, prostat, dan kanker payudara. Penghambatan sinyal hh
menyediakan rute ke terapi antikanker baru. Inhibitor jalur Hedgehog (HPI) terbukti
efektif dalam penelitian in vitro pada sel kanker dan baru baru ini aktivitas inhibisi
kanker juga ditunjukkan dalam uji klinis.
3

Karsinoma sel basal dianggap berasal dari sel-sel pluripotensial (sel yang
dapat berubah menjadi sel-sel lain) yang ada pada stratum basalis epidermis atau
lapisan folikuler. Sel ini diproduksi sepanjang hidup dan membentuk kelenjar sebasea
dan kelenjar apokrin. Tumor tumbuh dari epidermis dan muncul di bagian luar
selubung akar rambut dan sel stem folikel rambut tepat dibawah duktus glandula
sebasea. Sinar ultraviolet menginduksi mutasi pada gen supresor tumor p53 yang
terletak pada kromosom 17p. Mutasi gen supresor tumor pada lokus 9q22 yang
menyebabkan sindrom nevoid basalioma, suatu keadaan autosomal dominan ditandai
dengan timbulnya karsinoma sel basal secara dini.
Pada hampir semua tipe karsinoma sel basal terjadi mutasi gen yang
mengkode molekul reseptor Hedgehog (Hh), jalur signal yang berperan dalam
diferensiasi sel. Ada tiga jenis yang diketahui yaitu sonic HH (SHH), Indian HH
(IHH), dan desert HH (DHH). Terjadi aktivasi yang tidak sesuai pada jalur signal
hedgehog (HH) yang ditemukan secara sporadik pada kasus karsinoma sel basal
familial. Awalnya dikenali sebagai penentu pada segmen polarity dalam spesies lalat
Drosophila melanogaster, jalur signal HH memainkan peranan penting dalam
pertumbuhan makhluk bertulang belakang. SHH yang disekresi akan mengikat
protein patched tumor-supressor homologue 1 (PTCH1), maka menghapuskan supresi
signal intraseluler yang disebabkan oleh PTCH1 oleh protein transmemran yang lain,
smoothed G-rotein-coupled receptor (SMO). Target berikutnya bagi SMO termasuk
faktor transkripsi family GLI.
Sonic hedgehog (SHH) berinteraksi dengan kompleks reseptor yang terdiri
dari patched tumor-supressor homologue 1 (PTCH1)-suatu supresor tumor-dan
smoothed G-rotein-coupled receptor (SMO). Tanpa SHH, PTCH1 berinteraksi dan
mengsupresi signal transduksi dari SMO. Ikatan antara SHH dengan PTCH1
menyebabkan SMO menghantar signal ke nukleus dengan perantara faktor transkiptor
golongan GLI. Kurangnya PTCH1 yang fungsional menyebabkan transduksi signal
dari SMO tidak mengalami interupsi dan menyebabkan aktivasi target.

Hilangnya fungsi mutasi PTCH1 termasuk mutasi germ-line yang ditenukan

pada pasien dengan sindrom karsinoma sel basal nevoid (Gorlins syndrome) telah
ditemukan pada 30-40% secara sporadic dalam kasus karsinoma sel basal. Tanpa
kehadiran PTCH1, SMO sangat aktif, menyebabkan aktivasi target secara terusmenerus. Gangguan lain pada jalur HH yang telah memberikan implikasi pada
perkembangan penyakit ini termasuk mutasi fungsi pada SHH, SMO, dan GLI.
Transgenic human-skin model menggambarkan bahwa aktivasi jalur HH merupakan
kondisi awal dalam pembentukan tumor. Molekul inhibitor yang kecil pada jalur
signal HH seperti cyclopamine merupakan terapi mekanis yang menjanjikan.

Figure1.Tissues where Hedgehog activity is important for normal development and

can play a role in their conversion to tumors. Activating components of the Hh
pathway support normal development of the organs and tissues indicated, but are
potential proto-oncogenes that promote tumor growth in those same tissues when
overactive. Restraining components of the normal Hh pathway also support
development,but function as tumor suppressors that allow tumor growth if they are
damaged in adult hood.This schematic depicts the array of tissues in which Hh
supports development and can promote tumorigenesis.Colors denote the role Hh

plays in the formation of the tumors:red is category 1,yellow is category 2 and green
is category 3.
Model Kanker melibatkan Hedgehog Signaling
Tiga model dasar dibahas dalam literatur terbaru untuk partisipasi dari jalur hh
pada kanker (Gambar 2) :

a. Tipe 1 kanker (ligan independen, mutasi dipicu), Ditemukan pertama kali.

Pasien dengan sindrom Gorlin, yang termasuk kategori ini, memiliki insidensi
tinggi

untuk

Basal Cell

Carcinoma (BCC), medulloblastoma,

dan

rhabdomyosarcoma. Dasar molekuler untuk pengembangan dari jenis

keganasan yang diwariskan menginaktivasi mutasi pada Ptch1 (melalui
hilangnya

heterozigositas

dan / atau menonaktifkan mutasi), yang

menyebabkan hh sinyal teraktivasi tanpa adanya ligan.

Pasien Gorlin adalah kandidat yang sangat baik untuk terapi dengan inhibitor
Smo atau komponen lain pada jalur hh.
b. Tipe 2 kanker tergantung pada hh ligan yang disekresikan oleh autokrin. Selsel tumor yang sama keduanya menghasilkan ligan hh. Jenis sinyal hh ada di
sel kanker usus besar manusia
c. Tipe 3 kanker tergantung pada hh ligan yang disekresikan oleh parakrin.
Penelitian terbaru menunjukkan bahwa kelebihan produksi ligan hh oleh sel6

sel tumor terjadi pada kebanyakan kanker terkait dengan penyimpangan hh

sinyal hh. Protein Hedgehog mungkin merangsang sel-sel stroma dekat tumor
(sel endotel, sel epitel, fibroblas, dan sel-sel kekebalan tubuh). Hasilnya hal
itu menjadi dukungan tidak langsung untuk pertumbuhan tumor melalui
mekanisme berasal dari sel-sel stroma. Mekanisme tersebut termasuk
dukungan dari sel tumor, termasuk tumor batang sel, stimulasi angiogenesis
tumor, efek pada matriks ekstraseluler, dan sekresi komponen jalur sinyal
molekuler yang melibatkan insulin-seperti Insulin Growth Factor IGF) dan
Wnt.
d. Sebuah varian dari jenis hh signaling yang disebut sinyal "Reverse-parakrin"
(tipe 3b), di mana ligan hh disekresikan dari sel stroma ke sel penerima dalam
tumor.

Overview of the three categories of Hh related tumor

Cyclopamine
8

Pengobatan Kanker Pankreas dengan Cyclopamine dan Turunannya

Lebih dari 90% dari kanker pankreas adalah duktus adenocarcinoma. Duktus
adenocarcinoma adalah penyebab kematian keempat paling umum terkait kanker
pada wanita dan pria di Amerika Serikat. Pada tahap metastasis, kanker pankreas
dapat hampir tidak pernah dikontrol oleh salah satu obat yang tersedia, dan pada lima
tahun tingkat kelangsungan hidup diperkirakan kurang dari 2%. Bahkan dalam kasuskasus stadium awal, penyakit lokal, dimana reseksi bedah dengan maksud kuratif bisa
dilakukan, mayoritas pasien terjadi kekambuhan lokal atau terjadi metastasis di
organ-organ jauh, dan akhirnya meninggal (mati). Upaya intensif telah dilakukan
dalam beberapa tahun terakhir untuk mengembangkan strategi terapi yang secara
langsung menargetkan penyebaran metastasis tumor, dan diantisipasi bahwa strategi
tersebut akan memiliki dampak klinis yang luar biasa. Baru-baru ini,
penelitian

melibatkan

analisis

urutan/rangkaian

sedunia

(global)

sebuah
yang

mengidentifikasi jalur sinyal-hh sebagai salah satu Core (Inti) jalur sinyal yang
mengalami perubahan somatik pada hampir semua kanker pancreas. Penghambatan
sinyal hh dengan cyclopamine telah meningkatkan tingkat kelangsungan hidup dalam
rekayasa geneticpada

model tikus dari kanker pancreas dan menghapus atau

meniadakan metastasis sistemik yang timbul dari xenograft orthotopik. Studi ini juga
menyediakan lebih banyak bukti bahwa sinyal hh adalah target yang valid (benar)
untuk pengembangan terapi baru kanker pankreas dan akan bernilai mengevaluasi
dalam pengaturan klinis.
Sejak cyclopamine menampilkan afinitas rendah untuk Smo, memiliki
bioavailabilitas yang buruk pada pemberian oral, suboptimal farmakokinetik, dan
stabilitas metabolisme rendah, turunan IPI-269.609 (Skema 10) dikembangkan. Ini
mempertahankan potensi cyclopamine, tetapi telah meningkatkan sifat fisikokimia
dan metabolik stabil. IPI-269.609 secara mendalam menghambat metastasis sistemik
dalam penentuan xenografts orthotopik dari jalur sel kanker pankreas manusia. IPI926 (Skema 10), semisintetik baru analog cyclopamine dengan banyak sekali
10

peningkatan potensi dan profil farmakokinetik yang relatif baik terhadap

cyclopamine, kemudian dirancang dan disintesis. Dengan menggunakan model yang
sangat invasif dan rekayasa genetika yang mematikan kanker pankreas. IPI-926
menunjukkan peningkatkan kelangsungan hidup bila digunakan dalam kombinasi
dengan gemcitabine dalam hal ini dinyatakan resistensi gemcitabine pada model
tikus. Studi ini jelas menunjukkan bahwa penghambatan jalur hh dalam stroma hasil
tumor ganas pengurangan yang mencolok pada reaksi fibrosis padat yang menyertai
tumor ini. IPI-926 juga meningkatkan neovaskularisasi tumor, sehingga memudahkan
distribusi gemcitabine dalam sel-sel ganas. Studi ini menunjukkan bahwa pasien
dengan kanker pankreas stadium lanjut adalah yang paling mungkin untuk
mendapatkan keuntungan dari terapi penghambatan jalur hh.
Inhibitor Jalur Hedgehog untuk Pengobatan Kanker Sel Basal dan
Medulloblastoma
Kanker sel basal merupakan penyebab kanker kulit yang paling umum di
USA. Kanker sel basal disebabkan paparan sinar UV. Pembedahan sering dilakukan
untuk metode penyembuhan jenis kanker ini, namun masih ada kanker jenis ini yang
telah berkembang menjadi kanker yang dapat membahayakan hidup, tidak dapat
dioperasi, menyebar secara lokal, atau tumor metastatik.
Inhibitor jalur Hedgehog (hh) pada tingkat Smo seperti siklopamin, dapat
menjadi metode pengobatan yang baik untuk kanker sel basal. Krim siklopamin
diberikan kepada pasien yang akan dioperasi sel kankernya, dan hasilnya semua
tumor mengecil dengan cepat. Analisis histologi dan imunohistokimia menunjukan
adanya inhibisi proliferasi dan induksi diferensiasi dan apoptosis yang sangat efisien
pada sel tumor. Induksi yang efisien dan selektif terhadap diferensiasi dan apoptosis
sel tumor secara in vivo dengan penghambatan transient terhadap sinyal hh
memberikan metode pengobatan yang rasional terhadap kanker sel basal.

11

GDC-0449 adalah inhibitor Smo dan secara struktur tidak berkaitan dengan
siklopamin. GDC-0449 memiliki aktivitas antitumor pada kanker sel basal yang
menyebar secara lokal atau metastatik. Penemuan ini mengkonfirmasi bahwa
keterlibatan jalur hh pada kanker sel basal dan penghambatannya dapat menjadi
metode pengobatan untuk tumor yang tidak dapat dioperasi.

Pasien berumur 26 tahun dengan medulloblastoma metastatik diberi

pengobatan dengan GDC-0449. Hasil pengobatan menunjukan regresi tumor yang
cepat tapi sementara dan penurunan gejala secara dramatis. Hal itu disebabkan mutasi
gen hh-signaling pada tumor menyebabkan resistensi pada pasien medulloblastoma.
Mutasi tersebut disebabkan oleh asam amino substitusi pada residu asam aspartat dari
Smo yang telah diawetkan dapat mengganggu kemampuan GDC-0449 untuk
mengikat Smo sebagai inhibitor jalur hh. Perlu ditekankan untuk menemukan
inhibitor Smo generasi kedua untuk mengatasi resistensi tersebut.
Studi klinik tersebut menunjukan bahwa jalur hedgehog dapat menjadi dasar
dari agen terapi kelas baru yang penting dengan implikasi mendalam pada onkologi.

12