Professional Documents
Culture Documents
Introducere
Floarea-soarelui (Helianthus annuus L.) este cultivat de aproape 3000 de ani n
America de Nord. n principal, seminele sale sunt folosite ca surs de ulei dar i ca hran.
Iniial floarea-soarelui a fost introdus n Europa prin Spania, din Mexic i ulterior s-a
raspndit n toata Europa. Primele documente privind acest transfer dateaz din 1568
(Dodonaeus).Producia de floarea -soarelui a crescut n Europa, n cursul primului i al doilea
razboi mondial cnd, practic a devenit plant de cultur.
Diversitatea genetic este extrem de important pentru dezvoltarea i adaptarea la
mediu a plantelor de cultur.Accentul n ceea ce privete ameliorarea florii-soarelui este pus
n principal pe dezvoltarea hibrizilor cu cretere viguroas (efect heterozis ) folosind sisteme
CMS (citoplasmic male sterility ).Totui baza genetic a hibrizilor actuali de floarea-soarelui
este extrem de ingust.Cultivarea florii-soarelui se face aproape exclusiv pe baza hibrizilor ce
au la baza sursa Leclercq de androsterilitate citoplasmatic. Prima surs CMS a fost
descoperit de Leclercq n 1969, n urma ncrucirii interspecifice dintre H.petiolaris i
H.annuus. Datorit folosirii aproape exclusive a acestei surse CMS pentru obinerea de
semine hibride, toi hibrizii din cultur sunt puternic inrudii, cel puin n ceea ce privete
citoplasma lor. Eforturile n domeniul ameliorrii vizeaz mai ales creterea variabiliti
genetice a hibrizilor de floarea-soarelui, prin dezvoltarea de noi sisteme CMS.
IOANA ISPAS
(exprimarea enzimei barnaza folosind un promotor specific anterelor) sau prin biotehnologie
(fuziunea de protoplati, embriogeneza somatic).
Fenotipul CMS (cytoplasmic male sterility) este n multe cazuri asociat cu mutaii n
genomul mitocondrial i este sub controlul genelor nucleare, dominante, de restaurare a
fertilitii (Hanson,1991).La multe specii de plante, amelioratorii au identificat una sau mai
multe gene nucleare, care confer fertilitate, cnd plantele purtatoare ale acestor gene sunt
ncruciate cu prini cu citoplasm androsteril.
Daca o linie CMS este ncruciat cu o linie fertil, homozigot pentru gena Rf (linie
restauratoare) se obin hibrizi F1 heterozigoi, pentru alela Rf ( fertili). Meninerea liniei CMS
este realizat prin ncruciarea unei linii aproape izogene, lipsit de gena Rf (linia
menintoare). Propagarea liniilor restauratoare i menintoare are loc prin self-fertilizare.
Dac aceast gen este introdus la printele productor de polen (prin liniile de
restaurare a fertilitii ) sterilitatea mascul este suprimat iar hibrizii obinui n F1 sunt
heterozigoi pentru gena Rf, produc polen i sunt masculi fertili. Liniile CMS inbred sunt
reproduse prin ncruciarea unei varieti fertile izonucleare, lipsit de alele de restaurare
(linia menintoare de fertilitate) cu linia CMS inbred. Liniile de restaurare i de meninere se
pot apoi propaga prin self-fertilizare.
S-au descoperit prin experiene de ameliorare noi surse CMS, n care s-au realizat
backcrossuri, prin care s-au produs substituiri ale genomului nuclear de la o linie ameliorat
cu background-ul citoplasmatic al altei linii. Plantele CMS n populaiile rezultate n urma
backcrossului au aprut fie datorit ndeprtrii alelelor de restaurare prezente n genotipul
original, fie datorit incompatibilitilor citoplasm-nucleu (Hanson,1991 ).
Plantele CMS apar spontan n populaiile ameliorate din camp i iniial au fost induse
prin ncruciri interspecifice i mutagenez. n majoritatea cazurilor fenotipul CMS provine
din rearanjri la nivelul genomului mitocondrial, de la progenitorii masculi fertili sau ca
rezultat al evenimentelor de recombinare intra sau intermoleculare. Aceste mutaii pot fi
silenioase fenotipic, n background-ul nuclear original. Totui dac, sursa de androsterilitate
citoplasmatic care conine mutaia este transferat ntr-un background diferit non-fertil, apare
fenotipul steril mascul. Aceasta se datoreaz incapacitii nucleului de a supresa sau compensa
mutaia n toate stadiile de dezvoltare ale plantei (Leaver,1991).
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
de la H.mollis s-au obinut prin hibridizri interspecifice ale plantelor mascule sterile
cu linia HA89, hibrizi masculi sterili. Prin ncruciarea cu H.debilis vestitus, H.annuus
RHA274 i prin polenizare deschis s-au obinut 100% progeni masculi sterili. Sursa CMS
a fost denumit CMS-MOL1.
3 alte surse CMS deriv din:
H.strumosus .Aceast linie androsteril a fost obinut prin ncrucirile interspecifce
dintre H.strumosus i floarea soarelui cultivat (cod: CMS-STR1).
H.argpophyllus (cod FAO: CMS-ARG4)
H.praecox sp. Praecox. ncrucirile interspecifice ntre H.praecox i H.annuus
produc n generatia F3, plante mascule sterile. Backcrossurile cu liniile B au generat n
multe cazuri 100% plante mascule sterile. Noua surs a fost denumit CMS-PRP2.
2 surse CMS deriv din :
H.praecox.Toate ncrucirile care implic H.praecox cu H.annuus produc plante
sterile (cod FAO: CMS-PRA I).
H.petiolaris.Toate ncrucirile care implic H.petiolaris i H.annuus produc plante
sterile (CMS-PET5).
3 surse CMS au fost induse prin mutagenez (raze gamma): CMS MUT3, MUT4, MUT 5.
n tabelul 1 sunt prezentate speciile de origine ale ctorva linii CMS la floareasoarelui.
Tabelul 1. Sursele CMS de la floarea-soarelui.
Denumirea uzual
a liniei CMS
KOUBAN
INDIANA 1
VIR 126
397
517
519
521
NS-ANN-81
NS-ANN-2
FUNDULEA 1
AN-67
AN-58
AN-2-91
AN-2-92
CMS-G
CMS-DP
CMS-VL
HEMUS
PEREDOVICK
STADION
Denumirea speciei
Cod FAO
H.annuus lenticularis
H.annuus lenticularis
H. lenticularis
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus salbatic
H.annuus texanus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
H.annuus
ANL1
ANL2
ANL3
ANN1
ANN2
ANN3
ANN4
ANN5
ANN6
ANN7
ANN8
ANN9
ANT1
ANN10
ANN11
ANN12
ANN13
ANN14
ANN15
ANN16
ANN17
ANN18
MUT1
MUT2
MUT3
53
IOANA ISPAS
ANOMALUS
ARGOPHYLLUS
BOLANDERI
DV-10
EXILIS
EXI2
CMG2
CMG3
MOLLIS
NEGLECTUS
CANESCENS
FALLAX
PET/PET
CMS clasica
CMG1
PETIOLARIS BIS
PET34
PRAECOX
PHIR-27
PRAECOX
PRP-28
RUN-29
RESINOSUS 243
VULPE
RIG-M-28
STRUMOSUS
H.anomalus
H.argophyllus
H.bolanderi
H.debilis
H.exilis
H.exilis
H.giganteus
H.maximiliani
H.mollis
H.neglectus
H.niveus canescens
H.petiolaris fallax
H.petiolaris petiolaris
H.petiolaris Nutt.
H.petiolaris Nutt.
H.petiolaris Nutt.
H.petiolaris
H.praecox
H.praecox hirtus
H.praecox praecox
H.praecox praecox
H.praecox
H.resinosus
H.rigidus
H.rigidus
H.strumosus
ANO1
ARG1
BOL1
DEB-1
EXI1
EXI2
GIG1
MAX1
MOL1
NEG1
NIC1
PEF1
PEP1
PET!
PET2
PET3
PET4
PRA1
PRH1
PRP1
PRP2
PRR1
RES1
RIG1
RIG2
STR1
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
55
IOANA ISPAS
Figura 1. Regiuni himere din ADN mitocondrial de la diferite plante, asociate cu androsterilitatea citoplasmatic
.
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
IOANA ISPAS
Figura 3. Organizarea unei regiuni din ADN mitocondrial situat ntre atpA i cob la liniile fertile de H.annuus
(Baso ), H.petiolaris (fertile ) i linii mascule sterile de H.annuus (BASO-CMS)(dup Horn,1991 ).
58
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
Figura 4. Harta detaliat a inseriei de 5kb situat n aval de gena atpA la liniile mascule sterile Baso (CMS) ce
prezint citoplasma PET1.
Ipoteza inversiei, anterioar inseriei, este susinut de faptul c, n cteva cazuri clare,
orfH708 intact este localizat n aval de gena atpA. Inversia pare s existe ntr-o serie de
subpopulaii minore ale DNA mitocondrial.
n linile androsterile inseria de 5 kb creaz un nou orf de 522 nucleotide (orfH522)
ncepnd cu nucleotidul 164 n aval de codonul stop al atpA. Acest ORF specifica fie folosirea
singurului codon start, o protein de 19,5kDa, sau o protein de 14,5kDa (Kohler si colab.,
1991). Primele 57pb ale orfH522 sunt homoloage cu cele ale orfB de la Oenopthera (Hiesel i
colab., 1987). Aceast parte a orf H522 prezint de asemenea homologie cu secvena 5a
orfH708 localizat mai jos de gena cob n liniile fertile. Secvenele rmase ale orfH522 nu
prezint homologie cu o anumit gen mitocondrial cunoscut sau cu alte secvene din
libraria EMBO. Nu s-a reuit obinerea de semnale de hibridizare folosind sonde din aceast
regiune cu DNA mitocondrial sau cu DNA plastidial din plantele fertile. Totui o secven
situat la 11 nucleotide n aval de orfH522, este homoloag cu partea de nceput a genei atp 9
la floarea-soarelui (Kohler si colab., 1991, Recipon, 1990).
IOANA ISPAS
homoloag cu DNA mitocondrial de la liniile fertile, const dintr-o secven de circa 1kbz,
localizat n liniile fertile ntre gena coxI i cox III. Totui sondele Ins 2 i Ins 3 ce acoper
restul secvenelor de inserie de 5kb nu produce semnale de hibridizare cu DNA mitocondrial,
DNA nuclear din plantele fertile (Horn, 1991, Zetsche i Horn, 1993) i nici cu DNA
plastidial. S-a ajuns la concluzia c att orfH522 ct i inseria par s fie compuse din
secvene diferite parial homoloage cu DNA mitocondrial i cu DNA nuclear i parial cu
secvene de origine necunoscut.
Un fragment de 1,7kb ce reprezint o parte din insert a fost folosita ca sond. S-a
constatat c o secven de 9kb ce acoper o parte din Dna mitocondrial MAX1 prezint
homologie cu orfH873 ca i cu orfH522. Totui aceast ultim secven nu prezint
homologie cu gena atpA i gena cob.
Populaia investigat la H. petiolaris a artat o organizare identic a ADN mitocondrial
din regiunea de flancare a genei atpA i a genei cob n liniile fertile de H.annuus.Dac
subpopulaia de molecule DNA ce prezint inversia, reprezint organizarea iniial a DNA
mitocondrial n H.petiolaris, atunci se pare c ncruciarea interspecific a cauzat evenimente
de recombinare care au condus la organizarea specific a PET1.
Linia androsteril MAX1 conine o regiune homoloag cu secvena de inserie de 5kb
din PET1 (Hahn i Friedt, 1992, Hahn i Friedt, 1994). Cercetrile au fost realizate pe 5
populaii slbatice de H. maximilliani (MAX30 , MAX40, MAX42, MAX44, MAX 1654). Sa constatat ca populatia MAX30 a aratat aceeai homologie i o organizare identic a DNA
mitocondrial ca i MAX1 (Hahn, 1993).
Aceste rezultate pot fi interpretate astfel: inseria de 5 kb poate fi datorat fie unor
noi evenimente de recombinare, induse de ncrucirile interspecifice ale H. petiolaris cu
H.annuus, fie de secvena de inserie original, care a fost deja prezent n populaia iniial
de H.petiolaris.
O alt ipotez legat de apariia liniei androsterile PET1 este aceea c, zona rearanjat
a locusului atpA observat n PET1 este deja prezent ca sublimon n DNA mitocondrial de
la liniile fertile (Laver i colab., 1991, Moneger i colab., 1994 ). Orf H522 se pare c are
originea n molecule de ADN substoechiometrice, care rezult din evenimente aberante de
recombinare. Sublimonul se pare mai degrab, c a fost amplificat n cursul primei ncruciri
,dect c a fost rezultatul unei noi recombinri n linia mascul steril, indus de
incompatibilitatea citoplasm-nucleu. Aceast teorie este argumentat de amplificarea unui
fragment din DNA mitocondrial de la linia fertil, cu primeri alei pentru zona rearanjat a
PET1, ceea ce corespunde cu analiza Southern, in care s-a observat c zona rearanjat a
locusului atpA apare la un nivel redus n linia fertil i invers (Laver i colab., 1991).
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
IOANA ISPAS
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
PRR1, DEB1, PII4, GVL) i a stabilit importana efectelor nucleare i citoplasmatice pentru
caracteristicile biologice studiate: nlimea plantelor, diametrul capului i coninutul n ulei.
Principalele concluzii confirm prevalena efectelor nucleare asupra celor citoplasmatice
i puternicele interacii nucleu-citoplasm.
1. Cantitatea de smn. Nu s-au nregistrat efecte citoplasmatice semnificative asupra
acestei nsuiri. S-au observat o serie de efecte pozitive pentru anumii hibrizi, combinaii
ale surselor CMS: ANN2 i GIG1. Efecte negative s-au nregistrat n cazul folosirii liniilor
CMS: ANN2, ANN4, PET2, MAX1, PET 1.
2. Inlimea plantelor. La sursele ANN1, ANN2, PET2, PET1,s-a constatat c
androsterilitatea citoplasmatic determin creterea plantelor n nlime.
3. Coninutul n ulei. Nu s-au detectat efecte pozitive ci mai degrab efecte negative n
cazul hibrizilor ce au ca prini liniile CMS: ANL2, PET2, PET1.
4. Perioada de inflorire. Tendina noilor surse CMS este de a crete durata nfloririi
(hibrizii provenii din liniile CMS: ANL2, ANN1, ANN4, ANO1, BOL1, MAX1 i PET1
sunt cu nflorire trzie).
Prin analiza varianei s-a aratat c interaciile nucleu-citoplasm sunt mai mari, n cazul
BOL1 , MAX1, ANO1, dect n cazul liniilor CMS GIG1 sau PET1.
Efectele liniilor androsterile asupra unor caractere de importan agronomic sunt n
general reduse, rar sunt semnificative i n multe cazuri au tendina de a determina efecte
negative. O posibil explicaie este aceea c liniile inbred bazate pe citoplasma androsteril
PET1 au beneficiat de o ameliorare lung, eforturile amelioratorilor conducnd la o relaie
optim ntre genotipul nuclear i cel mitocondrial la H.petiolaris. Totui unele combinaii
nuclearo-citoplasmatice exprim un potenial ridicat pentru caracterele agronomice majore,
dar n majoritatea cazurilor acestea sunt greu de prevzut.
63
IOANA ISPAS
o gena
2 gene
3 gene
2 gene dominante
2 gene complementare
o gena dominant
64
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
MAX1
ANT1
ANN2
ANN3
2 gene complementare
1 gen dominant
2 gene complementare
o genadominant
o gen dominant
RIG1
PEF1
2 gene complementare
2 gene complementare
RMAX1, CMG3
RHA274 (Rf1)
Rf-ANT
P21, RMAX1, PPI413178
P21,
RPET2,
PI
413180,RHA280
RPET2
Zaria, HA60.
Daca CMS apare ca rezultat al achiziiei unor gene noi i care genereaz o
substan toxic, genele nucleare implicate n restaurarea fertilitii afecteaz
abundena genei ce codific substana toxic sau chiar exprimarea acestei gene.
Acest utim model coincide cu datele obinute la Petunia (Pruitt i Hanson,1991),
porumb (Zea mays) (Dewey i colab.,1987, Wise, 1987), orez (Kadowaki i
colab.,1990).La porumb i petunie, aciunea genelor nucleare implicate n restaurare se
traduce prin reducerea exprimrii genelor de la locusurile himerice la nivelul tuturor
esuturilor. La linia CMS Petiolaris de la floarea-soarelui, analiza restaurrii fertilitii
sugereaz c abundena redus a transcriptului este specific celulelor mam,
premeiotice ale polenului (Smart i colab., 1993).
O alt ipotez este corelaia dintre genele de restaurare i genele implicate n
controlul recombinrii DNA mitocondrial, al amplificrii sau meninerii
moleculelor substoechiometrice. Introducerea genelor de restaurare ale
fertilitii poate determina alterri ale genomului mitocondrial sau
amplificarea preferenial a moleculelor substoechiometrice preexistente.
Editarea RNA n mitocondriile plantelor (Covello i Gray, 1989, Gualberto,
1989, Hiesel, 1989) reprezint un alt mecanism potenial care explic aciunea
genelor de restaurare a fertilitii ntruct editarea diferenial la plantele
restaurate va permite obinerea de transcripi cu structur primar i
secundar alterat.
La fasole, prezena alelelor restauratoare este determinat de deleia DNA
mitocondrial la nivelul unei regiuni specifice (Mackenzie i colab.,1988, Mackenzie i
Chase, 1990, Johns i colab., 1992). Alterarea genomului mitocondrial ncepe n generaia F1
i determin o fertilitate parial a polenului.Restaurarea incomplet a fertilitii se pare c
65
IOANA ISPAS
66
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
Figura 4. Sitususri de poliadenilare identificate la nivelul ADN mitocondrial de la plantele sterile i restauratori.
IOANA ISPAS
Frana cu o linie derivat de la T66006-2-1. S-a ajuns la concluzia c linia canadian poart
gena Rf1 de restaurare a fertilitii, n timp ce sursa francez de restaurare poart o gen sau
mai multe, diferite de Rf1.
Kinman (1974) a artat c, pentru ca fenomenul de restaurare a fertilitii s se
exprime complet, este necesar i o a doua gen dominant, complementar cu Rf. El a
descoperit n populaia F2, (rezultat n urma ncrucirii CMS PET1 cu o linie compozit
R1970), un raport de segregare de 9:7(fertil/steril), i a denumit aceast gen Rf2.Astfel au
fost obinute o serie de plante homozigote Rf2Rf2, mascule i femele sterile, cu citoplasm
PET1. ntruct a fost prezent doar gena Rf2, plantele parentale femele au exprimat o
sterilitate complet.
Vranceanu i Stoenescu (1978) au determinat relaiile alelice ntre diferite surse de
gene de restaurare ale fertilitii. ncrucirile ntre sursele MZ1398 i T66006-2-1B au
indicat c MZ-1398 are o gen de restaurare diferit, alta dect Rf1 din T66006-2-1B. Ei au
confirmat c T66006-2-1B i MO-1338 din Canada au aceeai gen Rf1.Controlul genetic al
restaurrii fertilitii polenului pare s fie dat de aciunea cumulativ a 2 gene dominante nonalelice, ce dau un raport de segregare de 9:6:1 (fertil/parial fertil /steril). Acest studiu i datele
prezentate de Fick i colab. (1974) au indicat c factorul de restaurare derivat din aceste linii
este codificat de o gen diferit de Rf1 sau de Rf2.
Dominguez-Gimenez i Fick (1975) au raportat prezena a 4 gene de restaurare ale
fertilitii printre descendenii de tip slbatic H.annuus i H.petiolaris, i a presupus c cel
puin 2 alele dominante trebuie s fie prezente la unul din cei patru loci, pentru a se exprima
complet restaurarea fertilitii.
Una dintre genele care par a fi prezente la prinii femeli din liniile androsterile de
HA89(PET1), confirm concluziile lui Kinman (1970), Fick i Zimmer (1974b) i anume c
majoritatea liniilor CMS au factori de restaurare.
Artemenko (1987) a artat c o singur gen dominant a controlat restaurarea liniei
CMS OD2625. Gena de restaurare descoperit i are originea n linia Progress (derivat din
ncruciarea interspecific ntre H.tuberosus L. i H.annuus ). Aceast gen ca i cea care
codific restaurarea fertilitii la H.petiolaris au fost localizate pe cromozomi homologi(nu sau observat fenomene de crossing-over ntre ele ).
Kukosh (1984) a raportat prezena unei singure gene dominante Rf1, responsabil de
restaurarea fertilitii mascule pentru linia androsteril derivat de la H.annuus ssp.
Lenticularicke ,sau citoplasma CMS ANL1. S-au descoperit totui cteva linii menintoare
ale PET1, ce pot restaura CMS ANL1. Aceste gene se disting funcional de Rf1 i Rf2, prin
aceea c plantele purtatoare prezint antere normale dar sterile, cnd sunt prezente n genomul
plantelor cu citoplasma PET1. Acest studiu confirm prezena factorilor de restaurare Rf, la
prinii CMS PET1.
Cercetri ample ntreprinse de Anashchenko i Kukosh (1984) i Anashchenko i
Duka (1985 ) au confirmat controlul genetic al restaurrii fertilitii mascule la floareasoarelui. Ei au studiat 40 de linii de restaurare a fertilitii, din punct de vedere al controlului
genetic, la nivelul citoplasmei androsterile PET1. S-a constatat c 5 dintre ele controleaz
restaurarea prin 2 gene dominante independente, n timp ce 4 linii controleaz restaurarea
prin 2 gene dominante complementare.
CMS ANL1 a fost restaurat de 11 din cele 27 de linii, printr-o singur gen
dominant. n schimb, alte linii au controlat restaurarea prin: 3 gene non-alelice dominante, 2
gene dominante complementare i 3 gene dominante complementare. La o linie s-a constatat
c controlul genetic al restaurrii fertilitii s-a realizat prin 2 gene non-alelice cu efecte
cumulative iar n generaia F2 s-au observat 3 clase fenotipice n raportul 1:2:1(fertil/parial
fertil/steril). Anaschchenko i colab. (1974) au observat c restaurarea fertilitii la liniile
68
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
androsterile ANL1 este mai complex dect la liniile androsterile PET1, fiind implicate mai
mult de 3 perechi de gene ce controleaz restaurarea fertilitii. Lucrnd cu linii de restaurare
a fertilitii pentru liniile androsterile ANL1 i PET1 Anaschchenko i Duka (1986) au
descoperit linii care au 2 gene non-alelice ce controleaz restaurarea fertilitii, la liniile
androsterile ANL1 i PET1.
Liniile BC8, CMS HA89 (PET2), CMS HA89 (GIG1) i CMS HA89(MAX1) au
aprut prin substituiri la nivelul ADN din genomul HA89 cu secvene de ADN de la plantele
cu androsterilitate citoplasmatic CMG1, CMG2, i CMG3 (Miller&Wolf, 1991). Plantele
fertile au fost apoi ncruciate, pentru a produce linii de restaurare RPET2, RGIG1 si RMAX1
(Miller si Wolf,1991).Pentru a studia modul n care se transmite restaurarea cele 3 surse CMS,
liniile respective au fost apoi ncruciate cu liniile corespunztoare de restaurare a fertilitii
(Kurai i Miller,1992). Analiza descendenilor BC1F1 din F2, a indicat c au fost necesare 2
gene dominante pentru restaurarea complet a fertilitii la RPET2. Aceast concluzie a fost
diferit de cea a lui Whelan (1980), care n studiile sale preliminare a indicat c restaurarea
complet a necesitat 2 gene dominante complementare. O gen dominant din RGIG1 i 2
gene dominante complementare din RMAX1 controleaz restaurarea citoplasmei respective.
Linia RHA274(Rf1) nu a fost eficient n restaurarea fertilitii la liniile androsterile PET2 i
GIG1, dei o gen dominant din RHA274 a controlat restaurarea fertilitii la linia
androsteril MAX1.
Iuoras i colab.(1992) au descoperit o nou surs CMS, stabil la diferite condiii de
mediu: CMS ANT1, derivat de la H.annuus ssp texanus Heiser. n studii pe plante fertile
provenite din ncruciarea CMS ANT1 cu H.annuus ssp. Texanus, s-a descoperit c o singur
gen dominant, controleaz restaurarea fertilitii la liniile androsterile. Linia restauratoare a
fost denumit Rf-ANT.
Plante androsterile au fost descoperite i la liniile de H.annuus: PI 413178 i PI
413180 (Jan, 1988). Aceste surse de CMS stabile au fost denumite ANN2 i ANN3. Sursele
CMS au fost ncruciate cu testere de restaurare i cu plante fertile rezultate de la PI413178 i
PI 413180 (Jan,1991). Liniile P21, RMAX1 i linia fertil 413178 au restaurat linia CMS
ANN2 (controlat de o singur gen dominant ), n timp ce P21, RPET2 i linia fertil
413180 au restaurat linia CMS ANN3 (controlat de o singur gen dominant) iar linia
RHA280 a restaurat CMS ANN3 (controlat de 2 gene complementare dominante).
Restaurarea fertilitii la liniile androsterile de floarea-soarelui este controlat de
aranjamente complexe de gene ce reacioneaz variabil fa de liniile CMS. Studiile de
transmitere a restaurrii fertilitii sunt complicate de genele complementare existente n
cteva linii parentale femele ca i de genele prezente n liniile de restaurare a fertilitii.
Sunt necesare n viitor studii complexe, la nivelul genelor alele, pentru a se face
distincie ntre genele implicate n restaurarea fertilitii liniilor androsterile i a determina
corelaiile existente ntre genele corespunztoare aflate in liniile androsterile respective.
Perspective
Actualmente se studiaz corelaiile dintre apoptoz la plante i cea de la mamifere din
punct de vedere al cilor moleculare de semnalizare. De exemplu s-a analizat modul de
eliberare al citocromului c, ceea ce antrenez casacada de enzime proteolitice care determin
degradarea specific a DNA nuclear i moartea celular. Analiza imunocitochimic a artat c
citocromul c a fost eliberat din mitocondrii n celulele tapet nainte de evenimentele
morfologice asociate cu moartea celular. Cercetrile cu markeri biochimici i morfologici
specifici apoptozei, efectuate pe citoplasma PET1 de la floarea-soarelui (Baker, 2001) au
69
IOANA ISPAS
indicat c aceasta surs determin apoptoza prematur a celulelor tapetului care se extinde
ulterior si n alte esuturi ale anterelor.
Bibliografie selectiv
BINO, R. J. (1985). Histological aspects of microsporogenesis in fertile, cytoplasmic male
sterile and restored fertility Petunia hybrid.Theor.Appl.Genet.,69,423-428.
BLUM, B., SIMPSON, L. (1992). Formation of guideRNA/mRNA chimeric molecules in
vitro, the initial step of RNA editing is dependent on an anchor sequence. Proceedings of the
National Academy of Sciences of the USA 89: 11944-11948.
BRAUN, C. J., SIEDOW, J. N., WILLIAMS, M. E., LEVINGS III, C. S. (1989).
Mutations in the maize mitochondrial T-urf 13 gene eliminate sensitivity to a fungal
pathotoxin. Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 86, 4435-4439.
BRAUN, C. J., SIEDOW, J. N., WILLIAMS, M. E.,LEVINGS III, C. S (1990). Fungal
toxins bind to the urf 13 protein in maize mitochondria and E.coli.Plant Cell,2,153-161.
BURLOV, V. V. (1974). Utilization of male sterility in sunflower breeding for heterosis
p.353-360.In Proc.6th. Int.Sunflower Conf. Bucharest, Romania.22-24 July, 1974.Int.
Sunflower Assoc.Paris, France.
CONNETT, M. B., HANSON, M. R., (1990).Differential mitochondrial transport through
the cyanide-sensitive and cyanide insensitive pathway in isonuclear lines of cytoplasmic male
sterile ,male fertile and restored Petunia. Plant Physiol., 93, 1634-1640.
COVELLO, P. S., GRAY, M. V. (1989). RNA editing in plant mitochondria. Nature, 341,
662-666.
CROUZILLAT D., LEROY, P. PERRAULT A., LEDOIGT G. (1987).Molecular analysis
of the mitochondrial genome of Helianthus annuus in relation to cytoplasmic male sterility
and phylogeny. Theor. Appl. Genet. 74:773-780..
DEWEY, R. E., LEVINGS III, C. S., TIMOTHY, D. H. (1986). Novel recombinations in
the maize mitochondrial genome produce a unique transcriptional unit in the Texas male
sterile cytoplasm. Cell, 44, 439-449.
DEWEY, R. E., LEVINGS III, C. S., TIMOTHY, D. H (1987). A mitochondrial protein
associated with cytoplasmic male sterility in the cytoplasm T of maize. Proc. Natl. Acad.
Sci., USA , 84, 5374-5378.
FAURON, C. M., CASPER, M., GESTELAND, R., ALBERTSEN, M. (1992). A multi
recombination model for the mitochondrial rearrangements seen in maize CMS-T
regenerated plants. The Plant J., 2, 949-958.
FOLKERTS, O., HANSON, M. R. (1991). The male sterility-associated pcf gene and the
normal atp9-1 gene in Petunia are located on different mitochondrial DNA molecules.
Genetics, 129, 885-895.
FUJIKI Y., HUBBARD AL., FOWLER S., LAZAROW PB. (1982). Isolation of
intracellular membranes by means of sodium carbonate
tratment: application to
endoplasmatic reticulum. J. Cell Biol. 93, 97-102.
GEORGIANA -TODOROVA J. (1984). Interspecific hybridisation in the genus Helianthus
L. Z. Planzenzuchtg. 93:265-279.
GERSTEL, D. U. (1980). Cytoplasmic male sterility in Nicotiana. Tech. Bull. N. C. Agr.
Res. Ser., 2635, 1-31.
HAHN, V., FRIEDT, W. (1992). Molecular analysis of the mitochondrial DNA of
cytoplasmic male sterile sunflower cytoplasm MAX1. In: Proc.13 th International Sunflower
Conf. Pisa, Italy, pp. 1466-1471.
70
Aspecte moleculare privind citoplasma androsteril PET1 de la floarea soarelui (Helianthus annuus L.)
HAHN, V., FRIEDT, W (1994). Molecular analysis of the CMS-inducing MAX1 cytoplasm
in sunflower. Theor. Appl. Genet. (in press).
HAKANSSON, G., GLIMELIUS, K., BONNETT, H. T. (1990). Respiration in cells and
mitochondrial of male fertile and male sterile Nicotiana species. Plant Physiol., 93, 367-373.
HANSON, M. R. (1991). Plant mitochondrial mutations and male sterility. Annu.Rev.
Genet., 25, 461-486.
HERNOLD, M., SUHARSONA, S., LITVAK, S., ARAYA, A. (1992). Male sterility
induction in transgenic tobacco plants with non-edited atp9 mitochondrial gene from wheat.
In Book of poster abstracts XIII th Eucarpia Congress, pp. 85-86.
HORN, R., KOHLER, R. H., ZETSCHE K. (1991). A mitochondrial 16kDa protein is
associated with cytoplasmic male sterility in sunflower. Plant Mol. Biol. 17, 29-36.
HORN R. (2001) . Molecular diversity of male sterility inducing and male fertile cytoplasms
in the genus Helianthus. Theor. Appl. Genet. (im Druck).
HORN, R., HUESTEDT J. E. G., HORSTMEYER A. (1996). The CMS-associated 16
kDa protein encoded by orfH522 is also present in other male sterile cytoplasms of sunflower.
Plant Mol. Biol. 30: 523-538.
KOHLER R.H., HORN R., LOSSL A.,ZETSCHE K. (1991). Cytoplasmic male sterility in
sunflower is correlated with the co-transcription of a new open reading frame with the atpA
gene. Mol. Gen. Genet. 227: 369-376.
HORN R., FRIEDT W. (1998) .CMS mechanisms in sunflower How many are there? In:
Plant Mitochondria: From Gene to Function, eds. IM Moller, P Gardestrom, K Glimelius, E
Glaser, Backhuys Publishers, Leiden, S. 79-82.
IWABUCHI, M., KYOZUKA J., SHIMAMOTO, K. (1993). Processing followed by
complete editing of an altered mitochondrial atp6 RNA restores fertility of cytoplasmic male
sterile rice. EMBO J., 12, 1437-1446.
JOHNS, C., LU, M., LYZNIT, A., MACKENZIE, S. (1992). A mitochondrial DNA
sequence is associated with abnormal pollen development in cytoplasmic male sterile bean
plants. The Plant Cell, 4, 435-449.
KADOWAKI, K. I., SUZUKI, T., KAZAMA, S. (1990), A chimeric gene containing the 5
portion of atp6 is associated with cytoplasmic male sterility of rice. Mol. Gen. Genet., 224,
10-16.
KAUL, M. L. H. (1988). Male sterility in higher plants. In:Monographs an theoretical and
Applied Genetics, Springer -Verlag, Berlin Heidelberg, New York, vol10, pp. 758-775.
KINMAN, M. L. (1970). New developments in the USDA and state experiment station
sunflower breeding programs, p.181-183. In Proc. 4th. Int. Sunflower Conf. Memphis, T. N.
23-25 June (1970). Int. Sunflower Assoc.Paris France.
KOHLER, R., HORN, R., LOSSL, A., ZITSCKE, K. (1991). Cytoplasmic male sterility in
sunflower is correlated with the co-transcription of a new open reading frame with the atp A
gene. Mol. Gen. Genet., 227, 369-376.
KURAL A., J. F., MILLER (1992). The inheritance of male fertility restoration of the
PET2, GIG1 and MAX1 sunflower cytoplasmic male sterility sources p.1107-1112.In
Proc.13 th Int.Sunflower Conf. Pisa Italy 7-11 Sept.,1992.Int. Sunflower Assoc. ,Paris ,
France.
LEAVER, C. J. (1991). Mitochondrial Genetic Information In: Huang A. H. C. (ed).
Molecular Approaches to Compartimentation and Metabolic Regulation.American Society of
Plant Physiologists. pp. 48-58.
LECLERCQ P. (1966). Une sterilite male utilisable pour la production dhybrids simples de
tournesol. Ann. Amelior. Plant, 16, 135-144..
71
IOANA ISPAS
LEROY P., BAZETOUX S., QUETIER F., DELBUT, J., BERVILLE A. (1985). A
comparison between mitochondrial DNA of an isogenic male sterile (S) and male fertile (F)
coryle (HA 89) of sunflower. Curr. Genet 9, 245-251.
LU, B., HANSON, M. R. (1992). A single nuclear gene specifies the abundance and extend
of RNA editing of a plant mitochondrial transcript. Nucleic Acids Res., 20, 5699-5703.
MACKENZIE S. A., CHASE PR, D. R., BASSETT, M. J. (1988). Mitochondrial DNA
rearrangement associated with fertility restoration and cytoplasmic male sterility in
Phaseolus vulgaris L. Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 85, 2714-2717.
MARIANI C., GOSSELE, V., DE BEUCKELEER, M., DE BLOCK ., M. GOLDBERG,
R. B., DE GREEF, W. (1992). A chimeric ribonuclease inhibitor gene restores fertility to
male sterile plants. Nature, 357, 384-387.
MILLER J. F., S. L.,WOLF (1991). Registration of three cytoplasmic male sterility and
three restorer sunflower germoplasm lines. Crop Sci., 31, 500.
MONEGER F., SMART, C. J., LEAVER, C. J. (1994). Nuclear restoration of cytoplasmic
male sterility in sunflower is associated with tissue -specific regulation of a novel
mitochondrial gene. EMBO J., 13, 8-17.
NIVISON H., HANSON T., M. R. (1989). Identification of a mitochondrial protein
associated with cytoplasmic male sterility in Petunia. Plant Cell, 1, 1121-1130.
RECIPON H. (1990). The sequence of the sunflower mitochondrial ATP-ase subunit 9 gene.
Nucl. Acids Res. 18, 1644.
SAMALL, I., SUFFOLK, R., LEAVER, C. J. (1989). Evolution of plant mitochondrial
genomes via substoechiometric intermediates. Cell, 58, 69-76.
.SCHEIKE, R., GEROLD, E, BRENNICKE A., MEHRING -SEMPLER, M.,WRICKE,
G. (1992). Unique patterns of mitochondrial genes transcripts and proteins in different male
sterile cytoplasms of Daucus carota. Theor. Appl. Genet., 83, 419-427.
SICULELLA L., PALMER JD. (1988). Physical and gene organization of mitochondrial
DNA in fertile and male sterile sunflower CMS-associated alterations in structure and
transcription of the atpA gene. Nucleic Acids Res., 16, 3787-3799.
SKORIC, D. (1988). Sunflower breeding. Uljarstvo, 25 (1), 1-90.
SMART, C. J., LEAVER,C. J. (1993). Cell specific regulation of the mitochondrial
genome during male
flower development in sunflower. Journal of Cellular
Biochemistry.Keystone Symposia and Molecular and Cellular Biology, pp.24.
SNEEP J., HENDRIKSEN, A. J. T. (1979). Plant Mitochondria. Publication of Kouinklijk
Kweekbedrijf en Zaadhandel D. J. von der Have 1879-1979, Pudoc,Wageningen, pp. 127130.
SPASSOVA. M., MONEGER, F., LEAKER, C. J., CRISTOV M., ATANASSOV, A.
NYKAMP, H. J. J., HILLE, J. (1993). Molecular analysis of three independently selected
cytoplasmic male sterile sunflower sources.Mol.Gen.Genet.,submitted.
WHELAN, E. D. P. (1978). Hybridzation between annual and perennial diploid species of
Helianthus. Can. J. Genet. Cytol. 20, 523-530.
WHELAN, E. D. P., W. DEDIO (1980). Registration of sunflower germoplasm composite
crosses CMS 1,CMS2,CMS3. Crop Sci. 20, 832.
YOUNG, E., G., HANSON, M. R. (1987). A fused mitochondrial gene associated with
cytoplasmic male sterility is developmentally regulated. Cell, 50, 41-49.
ZABALETA, E., MOURAS A., HERNOULD, M., SUHARSONO AND ARAYA A.
(1996). Transgenic male-sterile plant induced by an unedited atp9 gene is restored to fertility
by inhibiting its expression with antisense RNA. Proceedings of the National Academy
Sciences of the USA 93: 11259-11263.
72