Helsingin Sanomat 2006

Esitt:
Deadly
Peptides
Polypeptidit joka vrin laskostuessaan
Horror
Show
tappavat
vaikka
lehmn!
Marc Baumann
Helsingin Yliopisto
Lketieteellinen tiedekunta
Biomedicum Helsinki
Puh: 09-19125200/Fax: 09-19125206
shkposti: marc.baumann@helsinki.fi
http://research.med.helsinki.fi/corefacilities/proteinchem

Australia /Papua Uusi Guinea 1950

Carleton Gajdusek

Vincent Zigas

KURU potilas

KURU potilaita (naiset ja lapset?)

KURU aivot

Aivot lhestulkoon kadonneet

Virus teoria

Virukset ovat pieni pakkauksia perimainesta jotka

voivat lisnty vain solun sisll

tartunta

sairaus

tervehtyminen

vieraan
aineen
mr
elimistss

pivt
Huom: Taudin syntyyn tarvittava aika ei oikein tsm KURU taudissa...

vasta-aine

vieras aine

tunnistus

tunnistus

tunnistus

Vasta-aineen tuotto hiiriss ei onnistu

Huom: KURU potilailla ei ole tulehdusta eik kuumetta

Lampaan tarina
Tohtori Bill Hadlow ottaa yhteytt...

Scrapie tautia sairastava lammas

(to scrape ...)

Hadlow huomaa ett:

Lampaan aivot
muistuttavat
erehdyttvsti KURU
potilaiden
aivoja!

Tll vlin amerikkalaiset

huomaavat ylltten ett:
KURU potilaan
aivomateriaalin
siirto apinaan
johtaa apinan
killiseen
kuolemaan ???

Ihmisest ----> apinaan

lampaasta ----> lampaaseen

Back to the future I

Palataan hetkeksi
Saksaan
1900-luvun alkuun...

Saksa 1900/Breslau

Tll tyskentelee
tohtori Creutzfeldt
Alois Alzheimerin
johtamalla osastolla
kun...

Saksa 1900/Breslau

23-vuotias Bertha Elschker

tuodaan sairaalaan Alois
Alzheimerin johtamalle osastolle
jossa Hans Gerhard Creutzfeldt
tyskentelee
Mit Bertha sairastaa??

Berthan aivot muistuttavat

erehdyttvsti myhemmin
lydettvn KURU potilaan
aivoja!

1913 tohtori Creutzfeldt

raportoi uudesta taudista
joka nimetn
Creutzfeldt-Jacobin taudiksi

Back to the Future II

Amerikkalaiset ryhtyvt tutkimaan molempia

tauteja vaikka esim. Gadjusek ei usko ett taudit
liittyisivt mitenkn toisiinsa...
(Cadjusek tekee virheen...)

Stanley Prusiner esittytyy...

Stanley B. Prusiner

Stanley Prusiner ei usko Cadjuseki

vaan ryhtyy sooloilemaan...

Taudin aiheuttaja saadaan eristetty biokemiallisin

menetelmin (Stanley Prusiner)

Geelisuodatus menetelm

KURU ja CJD potilaan aivoista lytyy kummallisia

sikeit
(elektronimikroskooppinen kuva)

Rakennetutkimus paljastaa Prioni proteiinin muuttuneen muodon

Tappava
muoto

Tavallinen
muoto

Prioni proteiini esiintyy lhes

jokaisessa solussa ja lhes
jokaisessa oliossa

Prioni proteiinin aiheuttamia tauteja tunnetaan muitakin

KURU on vain yksi muoto niiden joukossa

Miksi Taudin patogeneesi on niin erikoinen?

Prionit ovat yksinkertaisia proteiineja jotka ovat paljon pienempi

kuin pienimmt virukset. Prionit eivt sisll perintainesta.
Kaikki muu thn asti tunnettu tarttuvia tauteja aiheuttava aine
sislt geneettist materiaalia.

Prionit eivt ole kuin loiset eli parasiitit jotka asuvat isnnssn,
saaden aikaan usein pitkkestoisia loistauteja.
SILTI prionit aiheuttavat erittin pitkkestoisia tauteja

Prionit eivt myskn ole kuin bakteerit joita suojaa usein vahva
seinm jolloin ne voivat sily isnnstn vapaana pitknkin.
SILTI prionit silyvt vuosia...

Prionin tappava muoto levi elimiss ja ihmisiss

Kaikki tunnetut prionisairaudet ovat

tappavia. Koska elimistn puolustuskoneisto
ei tunnista niit vieraaksi, niille ei muodostu
vasta-aineita. Lampaan Scrapie tauti
lydettiin jo 1800 luvulla.
Se on siit lhtien levinnyt muihin elimiin
kuten minkkiin, kissoihin ja lehmn,
saastuneen ruoan vlityksell.

Prioni-taudin oireet voivat olla aivan erimuotoiset!

Scrapie tautia sairastava lammas raapii itsen...

Ihmisen Prionitaudit
Prioniproteiini voi aiheuttaa taudin sellaisenaan, tai perinnllisess
muodossa geneettisen muutoksen kautta.
Uudessa Guineassa, alkuasukkaat levittivt Kuru tautia sydessn
toistensa avoja (kannibalismi).
Creutzfeldt-Jakobin tauti (CJD) kehittyy usein itsestn, mutta 1015% CJD taudista periytyy prioniproteiinin geenivirheen vuoksi.
CJD:n sisartauti, kuolettava nukkumistauti (fatal familial insomnia
(FFI) tai Gerstmann -Strussler-Scheinkerin tauti (GSS), ovat aina
perinllisi.
Uusi CJD:n tyyppi on levinnyt n. 150 potilaaseen, leviten saastuneen
lehmnlihan vlityksell (Hullun lehmn tauti ihmisess).

Eri prionit tuhoavat aivojen eri osia

Prionit tuhoavat aivoja. Sieniminen muoto saavutetaan kun hermosolut kuolevat.
Taudin vaikutus riippuu siit mik osa aivoista on tuhoutunut.

Cerebral cortex Kun tm osa tuhoutuu,

potilas menett muistinsa ja henkisen tasonsa,
joskus myskin nkkyky heikkenee(CJD).
Thalamus Tmn osan tuhoutuminen aiheuttaa
tappavan nukkumistaudin (FFI).
Cerebellum Tmn osan tuhoutuminen
aiheuttaa lihaskontrollin pettmisen.
(Kuru, GSS).
Brain stem Thn osaan levinnyt prioni
aiheuttaa hullun lehmn taudin.(BSE).

Geneettiset mutaatiot aiheuttavat prioniproteiinin muotojen erilaisuuden

jolloin se levittytyy aivojen eri osiin. Perinllisess
nukkumistaudissa (familial insomnia (FFI), mutoitunut prioni
(violetit nelit) kerntyy talamukseen. Tmn seurauksena potilas ei voi
en nukkua. Creutzfeldt-Jakobin taudissa, prioniproteiini kerntyy
lhinn cerebraalisen cortexin alueelle (punaiset pisteet ja alueet).

Tohtori Jekyllista tohtori Hydeksi

Prionproteiini voi omaksua kaksi eri kolmiulotteista rakennetta.

Normaali muoto (PrPc) voi muuttaa muotoaan tappavaksi
(PrPSc) muodoksi. Muutos aiheuttaa ketjureaktion jolloin
yh useampi PrPc muuttuu PrPSc muotoon.Kun PrPSc proteiinia
on muodostunut tarpeeksi alkaa proteiini sikeisty. Nm sikeet
tuohoavat hermosoluja. PrPSc on erittin kestv. Se ei tuhoudu
korkeissakaan lmptiloissa, ei steilyll eik vahvoilla kemikaaleilla.

Prionisairaudet voivat tarttua kolmella eri tavalla

1. Horisontaalinen transmissio esim. lampaasta
lehmn (BSE).
2. Perinllisesti, mutaatio prioniproteiinissa
siirt taudin vanhemmasta lapseen.
3. Tauti voi synty itsestn.
4. Tauti voi siirty iatrogeenisesti
Infektiivisyyden leviminen BSE taudissa
Kun lehm sy rehua joka on tehty lampaan
ruhon osista, prionit siirtyvt ptsist
hermosoluihin josta ne kulkeutuvat aivoihin.
Tll prionit kerntyvt ja muuttavat
normaalin prionin sairaaksi proteiiniksi
PrPSc. Vuosia myhemmin, BSE syntyy
kun tarpeeksi vr muotoa on syntynyt.
Hermosolut kuolevat ja lehmn kuolema alkaa.

Iatrogeeninen siirto
Aivokudos esimerkki .

Kuru epidemia alkoi kauan sitten ja on vhentynyt vuodesta 1950.

Hullun lehmn taudin epidemia alkoi 1985 jolloin n. 170 000 lehm oli sairastunut.

Kuru tauti

Tm kuva nytt kuinka tauti hvisi

alkuasukkaiden joukosta kun ne lopettivat
kannibalisimin. Lapsissa tauti hvisi
nopeammin kuin aikuisissa.
Taudin sairastumisaika on jopa 30 vuotta.

Hullun lehmn tauti

Tm kuva nytt BSE epidemian

levimisen. Se saavutti maksimaalisen
arvonsa 1992 kun 37,000 elint sairastui
samana vuonna. Kun rehun kytt lopetettiin,
BSE:n esiintyminen vheni huomattavasti.
Kuinka kauan ihmiset sairastuvat?

What happens with

the prion?
==> not much

Vietetn viel hetki historiassa...

Ja katsotaan mist prionitaudeissa on oikein kysymys?

Back to the Future III

Saksa 1900

Mit teki Alois Alzheimer?

Alois Alzheimerin tauti

Amyloidikertymt sisltvt sikeit

(elektronimikroskooppinen kuva)

Sikeet muodostuvat vain pienest osasta proteiinia

APP

Alzheimerin proteiinin hyv muoto

Alzheimerin proteiinin tappava muoto

Rakennetutkimus paljastaa Alzheimerin proteiinin muuttuneen muodon

Tappava
muoto

Tavallinen
muoto

Miksi tllaiset proteiinit

tappavat???
Liimateoria

Alzheimerin-taudin tutkimus on osoittanut, ett...

SDS-PAGE sitoutumiskoe

Kaikki AD:n geneettiset

riskitekijt aiheuttavat
vrn laskostumisen
lisntymisen.

Hyv muoto tappava muoto

Mist vr laskostuminen
johtuu???

Alzheimerin Amyloidin Prekursori Proteiini

sA

Kriittiset aminohapot

Kriittisten aminohappojen fysikaalis-kemialliset ominaisuudet:

Alzheimerin Amyloidi

Prioni proteiinin kriittisten aminohappojen alue

Riittk tm?

Prion hypothesis proven?

SPONGIFORM DISEASES:
Waiting for the Final Experiment

Science, Dec 16, 2005

Sikeistyvien proteiinien kalastus

otetaan kriittiset aminohapot ja etsitn
tietokoneella olevista proteiini-tietopankeista
samankaltaisia aminohappoja muista
proteiineista

Random database search...

Amphoterin

.MSSYAFFVQT .

Alzheimers Amyloid

.HQKLVFFAED .

Baumann et al (2000) Biochem. J. 349: 77-84

Kriittisten aminohappojen fysikaalis-kemikaaliset ominaisuudet:

Amphoteriini

Baumann et al (2000) Biochem. J. 349: 77-84

Amphoteriinin sekvenssi
GKGDPKKPRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKH
PDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFE
DMAKADKARYEREMKTYIPPKGETKKKFKD
PNAPKRPPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLS
IGDVAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKL
KEKYEKDIAAYRAKGKPDAAKKGVVKAEKS
KKKKEEEDDEEDEEDEEEEEEEEDEDEEED
DDDE

Endo-Lys

Endo-Lys

GKGDPKKPRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKH
PDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFE
DMAKADKARYEREMKTYIPPKGETKKKFKD
PNAPKRPPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLS
IGDVAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKL
KEKYEKDIAAYRAKGKPDAAKKGVVKAEKS
KKKKEEEDDEEDEEDEEEEEEEEDEDEEED
DDDE

Amphoteriinin muodostama sie

Amphoteriini
ja apoE
yhdess
ApoE

SDS-PAGE sitoutumiskoe

Amphoteriini
ja apoE
yhdess
ApoE

SDS-PAGE sitoutumiskoe

Voimmeko ennakoida kuka tekee

amyloidia ja sikeistyy??

Chou and Fasman .

Secondary structure prediction

1.4

1.5

Beta-sheet
1.3

Alpha-helix

Beta-sheet
1.2

1.1
1

Alpha-helix

0.9

Beta-turn
0.7

Protein-xfragment
Amphoterin

0.8

Beta-turn

Gelsolin fragment
0.5

M S S Y A F F V Q T C

0.6

N G N

1.4

1.6
1.4

Beta-sheet

1.2

Beta-sheet
1.2

Alpha-helix

Alpha-helix

0.8

Beta-turn

Beta-turn

0.8

0.6

Islet amyloid fragment

Alzheimers amyloid fragment

0.6

S N N F G A I L S S

0.4

H Q K L V F

In Conclusion
Amyloids are quite naturally occuring
risk factors for the life
which the nature can just sometimes
not deal with.
They form spontaneously by mutations
which are only controlled by the evolution.
BAD LUCK or ???

Olemme siis tekemisiss aivan tavallisen ja sangen

yleisen asian kanssa. Luonnossa on monia
prioniproteiinin kaltaisia proteiineja. Kaikki
ne tavallaan hiritsevt elimistn toimintaa,
jotkut enemmn kuin toiset. Pahimmat tappavat
nopeasti, vaarattomimmat hitaammin.

The Yeast story...

Yeast uses a prion-like protein for to control its life
in various environmental conditions.
It keeps this protein in an amyloid-like form if it is not
needed
When needed, it can produce the same protein in a
soluble form.

Loppuuko tm tarina thn???

BREAKING NEWS
Reuters: Mad cow disease in Croatia
From correspondents in Zagreb, February 17, 2006
CROATIA today said it had detected bovine spongiform
encephalopathy (BSE) in a dead heifer (hieho), in the country's
first case of mad cow disease.
18 Feb 2006
No More Additional Cases of Mad Cow Disease in Canada
23 Feb 2006
New mad cow case reported in Poland

What About Other Animal TSE's?

One BSE case in US
TSE's has been found in the United States:
Scrapie in sheep and goats, transmissible mink
encephalopathy, and chronic wasting disease of deer and
elk.

Elk on hirvi ja mink minkki???

Minkeille ollaan syttmss BSE rehua ja niit

pstetn vapaaksi juuri sinne miss hirvet ovat!!!

Prioni proteiinin kriittisten aminohappojen alue

Ei niin pahaa ettei jotain

hyvkin...

TIEDE, 3/2007

Amyloidit esiintyvt aina

kahdessa muodossa.

Amyloidogenic
proteins

Pathogenic
form

Non-pathogenic
form

Amyloidogenic
conformation

Non-amyloidogenic
conformation

Sequences of Alzheimers -sheet breaker peptides

1

695
C

APP

A1-42 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGVVIA
42

-sheet breaker peptides

iA11
iA9
iA7
iA6
iA5
iA4
iA3

RDLPFFPVPID
RDLPFFPVD
LPFFPVD
LPFFVD
LPFFD
LPFF
PFF Soto and Baumann (1996) Biochem. Biophys. Res.
Commun. 226: 672-680

Activity of a -sheet breaker peptide

In vitro activity

Control

Treatment

Activity in rat model

Control

Treatment

Activity in cells

Control

Treatment

Some amino acid polymorphisms in PrP of human, sheep,

and mouse appear to influence the onset and phenotype of
prion disease
Notably, position 166 (129 in human) is polymorphic
for Met or Val in human PrP and modulates protease
sensitivity of PrPsc.
All cases to date of vCJD, the novel human variant caused by the
BSE prion strain from cattle, are homozygous for Met166. However,
Heterozygosity is not a general protective feature.
Residues 127157 play a major role in the PrPc/PrPsc interface.

Susceptibility Degree to scrapie can now be established by molecular techniques

Scrapie is a fatal, degenerative disease affecting the central nervous system of sheep
and goats. It is one of the transmissible spongiform encephalopathies (TSE). The
infectious agent is a prion that does not cause detectable immunitary or inflammatory
response. So no external signals are visible in the first step of the disease. Infected flocks
can contain a high percentage of susceptible animals. Animals sold from infected flocks
can spread scrapie to other flocks.
Since no vaccine or therapeutic means are currently available, scrapie control programs
rely on selective breeding of scrapie resistance individuals.
Genetically, susceptibility to scrapie is largely controlled by three polymorphic amino
acid positions of the ovine prion protein gene and reliable genotyping of corresponding
DNA polymorphism can be used as a basis for selection decisions.

GenotypeGroup NSP* Degree of resistance/susceptibility to scrapie

ARR/ARR

Sheep that are genetically resistant to scrapie

ARR/AHQ
ARR/ARH
ARR/ARQ

Sheep that are genetically resistant to scrapie, but will need

careful selection when used for further breeding

ARQ/ARH
ARQ/AHQ
AHQ/AHQ
ARH/ARH
AHQ/ARH
ARQ/ARQ

Sheep that genetically have little resistance to scrapie and

will need careful selection when used for further breeding

ARR/VRQ

Sheep that are genetically susceptible to scrapie and should

not be used for breeding unless in the context of controlled
breeding programme

AHQ/VRQ
ARH/VRQ
ARQ/VRQ
VRQ/VRQ

Sheep that are highly susceptible to scrapie ans should

not be used for breeding