Capitolul 14

14
RECOMBINAREA GENETIC
Prin recombinare genetic se definete fenomenul
producerii unor combinaii genetice noi prin rearanjarea,
reasortarea sau redistribuia materialului genetic cuprins n
dou uniti genetice diferite.
Recombinarea genetic este un proces general n natur
i reprezint una din cheile mecanismelor prin care se formeaz
noi indivizi, proces important n selecia natural. Mecanismele
de recombinare genetic sunt diferite la procariote i eucariote.
Recombinarea genetic la
eucariote
La eucariote recombinarea materialului genetic este
asigurat n general de procesele legate de nmulirea sexuat i
de fenomenele de transpoziie (vezi cap. 8). n dependen de
cantitatea de material implicat n recombinare deosebim:
- recombinare genomic recombinarea materialului
ereditar n procesul fecundaiei;
- recombinarea intercromozomic asortarea independent
a cromozomilor neomologi n anafaza I a meiozei;
- recombinarea intracromozomic recombinarea genelor
ntre cromozomii omologi n procesul crossing-overului;
- recombinarea prin transpoziie inserarea secvenelor
scurte de ADN ntr-un loc nou n acelai sau alt cromozom.
219

Capitolul 14

Recombinarea genomic
Eucariotele superioare se caracterizeaz printr-un
mecanism particular de nmulire nmulire sexuat, la care
particip dou celule specializate - gameii. De regul, gameii
sunt de origine diferit (matern i patern). Contopirea
gameilor haploizi poart denumirea de fecundare, iar celula
rezultat ce conine materialul genetic al ambilor gamei zigot. Participarea gameilor (unui organism) la fecundaie este
aleatorie, asigurnd formarea diferitor tipuri de zigoi, ceea ce
reprezint recombinarea genomic.
Fuziunea celor doi gamei haploizi reface setul diploid
de cromozomi, caracteristic speciei. Mitozele succesive ale
zigotului duc la creterea i dezvoltarea organismului
pluricelular. ncepnd cu zigotul toate celulele somatice vor
avea cromozomii n perechi de omologi identici ca morfologie
i structur genic, dar diferii ca origine.
Recombinarea intra- i intercromozomic
La animale formarea gameilor are lor n gonade. Din
celule precursoare (gametogonii), care sunt celule cu set
diploid de cromozomi i sunt identice genetic cu zigotul, se
formeaz gamei haploizi. Procesul de maturizare a gameilor
este reprezentat de meioz. Meioza este un mecanism complex
ce implic desfurarea succesiv a dou diviziuni, care se
termin cu njumtirea setului de cromozomi n celulele fiice.
Din fiecare celul cu un set de 2n (set diploid) cromozomi se
formeaz 4 gamei cu cte 1n (set haploid) de cromozomi
proces invers fecundaiei. Gameii rezultai din meioz sunt
produi ai recombinrii inter- i intracromozomice. Aceste
tipuri de recombinare au loc n diferite etape ale meiozei.
Meioza este precedat de o interfaz premeiotic n care
are lor replicarea ADN. ntre cele dou diviziuni exist o
perioad scurt interkineza n care nu are loc replicarea
ADN.
220

Capitolul 14

I diviziune meiotic diviziunea

reducional
Diviziunea reducional este responsabil de
njumtirea setului de cromozomi i de recombinarea inter- i
intracromozomic.
Profaza I
Profaza I a meiozei reprezint cea mai important i
complex faz, n care are loc conjugarea cromozomilor i
recombinarea intracromozomic. Aceast faz este divizat n
cinci etape n care are loc condensarea continu a cromatinei i
formarea aparatului de diviziune.
Leptotenul (leptonemul) cromozomii bicromatidieni
se condenseaz, devin vizibili i au aspectul unor filamente
subiri.
Zigotenul (zigonemul) reprezint momentulcheie
n
care
are
loc
conjugarea
cromozomilor omologi
(perechea
de
cromozomi
identic
dup lungime, form,
structur, dar de origine
diferit unul matern i
altul
patern).
Conjugarea omologilor
are loc centromer - la
centromer, telomer la
telomer, gen alel la
gen alel, formnd
bivaleni sau tetrade
(doi
cromozomi
Fig. 14.1. Structura bivalentului
omologi bicromatidieni)
(tetrada)
(fig. 14.1). Procesul
conjugrii este facilitat de complexul sinaptonemal, format
221

Capitolul 14

din proteinele axului cromozomic, care asigur

apropierea cromatidelor i stabilizeaz tetradele.
Cromozomii X i Y, nefiind omologi, n timpul
conjugrii se unesc prin capetele lor, formnd un bivalent
vezicula sexual.
Pachitenul (pachinemul) se caracterizeaz prin
schimbul reciproc de fragmente ntre cromozomii omologi
crossing-overul,
care
reprezint
recombinarea
intracromozomic a materialului genetic. Astfel, fiecare dintre
cromozomi va conine material genetic de la ambii prini, iar
noua combinaie de gene va fi transmis generaiilor
urmtoare.
Un
rol
important
n
realizarea
crossing-overului
l are complexul
sinaptonemal n
cadrul cruia se
formeaz
un
complex catalitic
multiproteic
nodul
de
recombinare,
responsabil
de
ruperea
i
Fig. 14.2. Complexul sinaptonemal
reunirea
ncruciat a fragmentelor omoloage (fig. 14.2).
Diplotenul (diplonemul) reprezint faza n care
cromozomii omologi ncep s se separe unul de altul prin
dezorganizarea complexului sinaptonemal. Omologii rmn
unii n punctele, n care a avut loc crossing-overul, formnd
chiasme (fig. 14.1). Numrul chiasmelor coincide cu numrul
nodulilor de recombinare.
222

Capitolul 14

Diachineza se remarc prin fenomenul de

terminalizare a chiasmelor deplasarea chiasmelor spre
extremitile cromozomilor. Bivalenii rmn unii doar prin
capete.

Fig. 14.3. Succesiunea principalelor evenimente din profaza I

La sfritul profazei I au loc urmtoarele procese:

disocierea anvelopei nucleare, maturizarea kinetocorilor (cte
un singur kinetocor pentru fiecare cromozom),
unirea
bivalenilor la fusul de diviziune.
Metafaza I
n metafaza I are loc aranjarea bivalenilor n plan
ecuatorial,
formnd
placa
metafazic.
Centromerii
cromozomilor omologi sunt orientai spre poli opui. La
sfritul metafazei I are loc disocierea chiasmelor terminale i
eliberarea cromozomilor omologi din bivalent (fig. 14.4).
Anafaza I
Anafaza I se caracterizeaz prin disjuncia
cromozomilor omologi din bivalent i migrarea cromozomilor
bicromatidieni spre polii celulei (fig. 14.4). Spre fiecare pol
migreaz cte un cromozom din fiecare pereche (la om se
formeaz 23 bivaleni, astfel la fiecare pol ajung cte 23
cromozomi bicromatidieni). Cromozomii materni i cei paterni
223

Capitolul 14

Fig. 14.4. Mecanismele de disjuncie

a cromozomilor n meioz

224

segreg independent unii

de alii, nct are loc o
combinare independent a
cromozomilor neomologi
recombinare
intercromozomic.
Numrul de combinaii
posibile poate fi 2n (la om
223
=
83886068
combinaii).
Telofaza I
n
telofaza
I
cromozomii bicromatidieni
se gsesc la polii celulei i
are loc decondensarea lor
parial; se reorganizeaz
membrana nuclear, iar
prin citikinez se formeaz
doi gametocii secundari
cu
set
haploid
de
cromozomi bicromatidieni.
Diviziunea II
diviziunea ecvaional
Dup interkineza
scurt, are loc diviziunea
ecvaional
n ambele
celule rezultate din I
diviziune. Diviziunea II
este
asemntoare
cu
mitoza
i
asigur
repartizarea
egal
i
identic a cromatidelor n
celulele gamei (fig. 14.4).

Capitolul 14

Mecanismul molecular al
crossing-overului
n procesul crossing-overului particip dou molecule
omoloage de ADN, care sunt apropiate fizic prin intermediul
complexului sinaptonemal. Recombinarea are loc ntre
secvene nalt specifice i se bazeaz pe principiul
complementaritii. Este un mecanism foarte precis i se
efectueaz cu o acuratee strict.
Procesul de recombinare necesit ruperea duplexelor de
ADN, formarea monocatenelor i reunirea ncruciat a
secvenelor complementare. Ca rezultat al ncrucirii
moleculelor, se formeaz o configuraie cruciform specific,
numit structura Holliday (fig. 14.5).

Fig. 14.5. Modelul Holliday de recombinare

225

Capitolul 14

n dependen de modul de tiere a acestei

structuri se pot obine molecule recombinate de ADN de dou
tipuri:
(1) molecule recombinate cu secvene heteroduplexe
(numai una din catene este recombinat);
(2) molecule recombinate, prin schimb reciproc de
fragmente bicatenare.
Crossing-overul nu este un proces obligatoriu la toate
eucariotele (de ex., la masculii dipterelor el n-a fost nregistrat).
Mecanismul molecular de reglare, inclusiv proteinele implicate
nu sunt deocamdat bine studiate. S-au gsit omologii ntre
unele proteine participante la crossing-over cu proteinele de
recombinare la E.coli.
Recombinarea genetic
la procariote
La procariote exist mai multe tipuri de recombinare
genetic, bazate pe proprietatea ADN de a forma heteroduplexe
i capacitii de a insera fragmente strine de ADN.
Recombinarea natural se produce atunci cnd dou
molecule de ADN omoloage sunt prezente n aceeai celul. La
bacterii recombinarea genetic general se efectueaz prin
transferul unor fragmente de ADN de la o celul la alta prin
fenomenele de transformare, conjugare, sau prin transducie
(vezi cap. 5).
Recombinarea prin transpoziie se caracterizeaz
prin inserarea unor noi secvene de ADN ntr-o molecul
gazd fr existena omologiei ntre secvenele implicate (vezi
cap. 8).
Recombinarea situs-specific se realizeaz ntre
succesiuni specifice de nucleotide ale moleculelor de ADN
bacterian i ADN fagic. Condiia pentru realizarea recombinrii
este prezena secvenelor omoloage n ambele molecule i a
226

Capitolul 14

unui complex enzimatic particular care asigur

recunoaterea secvenelor implicate n recombinare.
Mecanismul molecular al recombinrii la E.coli
Modelul cel mai accesibil pentru studierea recombinrii
genetice este E.coli. n procesul de recombinare particip:
- molecula ADN bicatenar recipient cu situsul chi (secven
conservat la bacterii, localizat la fiecare 5-10kb, format
din 8 perechi baze 5' GCTGGTGG3' );
3' CGACCACC5'

fragmentul ADN monocatenar donor (ADN fagic, ADN

plasmidic);
complexul proteic RecBCD format dintr-o endonucleaz, o
exonucleaz i o ADN-helicaz;
proteina RecA ce catalizeaz reacia de formare a
heteroduplexurilor (fig. 14.6);
proteine SSB care stabilizeaz monocatenele.

Fig. 14.6. Rolul proteinei RecA n recombinarea

genetic la bacterii

Moleculele monocatenare donor se formeaz prin

denaturarea unor molecule de ADN sau rezult din replicarea
a ADN fagic (vezi cap. 7). Pentru formarea heteroduplexului
din molecula de ADN recipient se excizeaz una din catene, iar
de cealalt caten original se unete complementar ADN
monocatenar donor.
227

Capitolul 14

Etapele recombinri:
(1) Complexul RecBCD gsete n molecula ADN recipient
secvena chi. RecBCD denatureaz ADN bicatenar i
produce o ruptur n una dintre catene, obinndu-se un
capt 3' liber.
(2) Proteina RecA asigur recunoaterea captului 3' liber i
catalizeaz unirea complementar cu fragmentul de ADN
donor monocatenar.
(3) Catena donor nlocuiete una dintre catenele originale,
formnd un heteroduplex (ADN recombinat).
(4) Catena dislocuit este eliminat.
Exist recombinare cu fragmente bicatenare omoloage
de ADN, catalizat de complexul proteic RuvABC. Acest
proces este
asemntor cu mecanismul crossing-overului
descris la eucariote.
Verificarea cunotinelor:
1. Definii
noiunile: recombinare genetic, complex
sinaptonemal, nodul de recombinare, bivalent, cromozomi
omologi, structura Holliday, heteroduplex.
2. Care este importana biologic a recombinrii genetice?
3. Care sunt tipurile de recombinare genetic la procariote i
la eucariote?
4. Cnd i cum are loc crossing-overul?
5. Care este importana biologic a anafazei I?
6. Care sunt condiiile pentru recombinarea genetic la
bacterii?

228