You are on page 1of 9

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu

Cluj-Napoca

Aciunea terapeutic a virusurilor


oncolitice in tratarea melanomului la
oareci.

Autori: Hrapa Iona


Hosu Andrei
Horiceanu Andreea
Hubeishie Kareen

Data: 3.12.2015

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca

Introducere
Virusurile oncolitice sunt virusuri care atac preferenial celulele
canceroase. Aceste tulpini fie naturale dar mai ales modificate genetic prezint o
specificitate asupra celulelor cu proliferare ridicat. Studiile n acest domeniu au
nceput nc din sec al XIX-lea. Complicaiile iniiale au fost legate de intervenia
sistemului imun care mpiedica infecia viral. Aceast tehnic a fost
abandonat din lipsa tehnologiei i a cunotinelor de inginerie genetic ns n
prezent, viroterapia n combinaie cu chemoterapia sau radioterapia au artat o
scdere considerabil a toxicitii tratamentului convenional dar mai ales a
mortalitii.

Scopul acestui studiu este de a demonstra eficienta viroterapiei n tratarea


melanomului la oareci, ct mai ales de a oferi un model terapeutic clinic.

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca

Materiale i metode
Am ales ca animal experimental oarecele. Datorit dimensiunilor lor reduse i timpului scurt
de generare i reproducere, pstrarea oarecilor este relativ simpl i necostisitoare. n plus, deoarece
acetia au fost utilizai pe scar larg n cercetare de zeci de ani, le este foarte bine cunoscut biologia i
genetic, existnd de asemenea un numr mare de instrumente i tehnici pentru a-i studia.
Am avut de ales ntre:
1. oareci SCID*1 injectai cu esut tumoral uman
2. oareci SCID umanizai*2* injectai cu esut tumoral uman
3.

oareci GEMMs*3** cu mutaii induse genei p53*4*** respectiv genei


CDKN2A*5****

n prezentul studiu am ales tipul 2 de oareci deoarece mimeaz cel mai bine micromediul unei
tumori umane. oarecii martor vor face bineneles parte din aceeai categorie.

Procedeele prin care unei tulpini virale i se atribuie capacitate oncolitica difer. O prim metod
este aa numita atenuare prin care virusului i sunt inactivate anumite gene responsabile de funcia
viral, care vor fi exprimate doar n celulele ce se replica activ. Astfel virusul capta specificitate pentru
celulele tumorale.
O alt metod implica modificare nveliului proteic spre a inti doar celulele tumorale.
Impedimentul care revine n ambele cazuri este sistemul imun al gazdei ntruct anticorpii sau
interferonii inactiveaz virusul nainte s ajung la celulele inta. Acest lucru se poate rezolva fie prin
imunosupresie fie prin ageni antiangiogenici la nivelul tumorii.
n studiul de fa am condus 3 experimente pentru evaluarea efectelor acestui tip de virus n
cazul melanomului deja avansat (stadiu III). Animalele au fost grupate n 3 loturi: lotul martor (M),
lotul injectat direct n tumora (T) respectiv lotul injectat intravenos (Iv)

Soareci cu Imunodeficienta severa combinata


Soareci cu imunodeficienta severa carora li s-a transplantat maduva osoasa umana pentru reconstituirea
sistemului imun.
***
Genetically Engeneered Mouse Models
****
O antioncogena care codifica o proteina implicata in apoptoza celulelor maligne
*****
Gena implicata in dezvoltarea melanomului malign
**

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca

Protocol Experimental
Test1
Pentru primul test am condus un experiment pentru a verifica aciunea oncolitica a virusului
HSV1*6 n dou ipostaze. Pentru facilitarea urmririi aciunii acestuia am utilizat nite gene
reporteri*7* marcate radioactiv. oriceii au fost n prealabil injectai cu esut tmoral uman.
E.1

Am lucrat cu 50 M, 50 T, respectiv 50 Iv. Astfel, n prima zi fiecrui grup (cu excepia celui
martor) i s-a administrat intratumoral respectiv intravenos 0.5 ml de ser coninnd virusul HSV1 i
s-a urmrit evoluia tumorii pe o perioad de 15 zile. Rezultatele au fost uramtoarele:

Mortalitatea
Numarul de soareci

50
40
30

20

10

Iv

0
Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Evoluia melanomului la Lotul Martor. Se observ


evoluia grav i metastazarea tumorii

Durata medie de viata


12
10

zile

Iv

2
0
Experimentul 1

Virusul Herpes Simplex


gene ce codifica markeri proteici usor de identificat

**

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca

E.2 Pentru al doilea experiment am decis s administrm grupului T pe lng ser i un agent
antiangiogenic (IL 12*) pentru inhibarea vascularizaiei tumorale ce teoretic va duce la nfometarea
tumorii i implicit la diminuarea aciunii sistemului imun. Grupul Iv n loc de IL 12 i s-a administrat
imunosupresori (Glucocorticoizi). Am urmrit apoi mortalitatea i evoluia tumorii identic cu
experimentul anterior.

Numar soareci

Mortalitatea
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0

M
T+IL12
Iv+Glucocorticoizi

Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua Ziua
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Evolutia melanomului la Lotul Iv

Evolutia melanomulu la Lotul T

n urma testului 1 am ajuns la concluzia c administrarea tumoral da rezultatele cele mai bune
iar cea intravenoasa acioneaz mai lent dar mpiedica metastazarea. S-a observat o cretere a vieii
medii de 2.3 ori n cazul grupuli T i o cretere de 1.85 n cazul grupului Iv

Interleukina 12- inhiba angiogeneza

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca
12
10

Zile

8
M
6

Iv

2
0

Experimentul 2 (T+IL12 si Iv+Gluc)

Test 2
E.1 Din cauza rezultatelor destul de nesatisfctoare am decis s combinm cele dou experimente
anterioare. Unui alt lot de 50 de oricei SCID umanizai, n urma injectrii subcutanate de celule
tumorale dintr-un melanom uman, li s-au administrat o doz intratumorala coninnd virusul HSV1 cu
agenii antiangiogenici respectiv o doz intravenoasa coninnd serul cu imunosupresorii. Am obinut
urmtoarele rezultate:

Mortalitatea
60

Numar soareci

50
40
30
20
10
0

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
M

T+ Iv

Evolutia melanomului la Lotul T+Iv

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca

Durata de viata medie


30
25

zile

20

15
10

T+Iv

5
0

Experiment 3

In urma testului 2 s-a observat o cretere a duratei medii de via de 6 ori cat i o diminuare
semnificativ a tumorii sau chiar o distrugere completa a acesteia.

Evaluarea costurilor
Item
350 oareci NCID umanizai
500ml ser cu HSV1
ntreinere + hrana
Ageni antiangiogenici
Glucocorticoizi;
Echipament pentru detectarea
radioactivitii

Pret
+/- 10500 RON
+/- 400 RON
+/- 150 RON
+/- 200 RON
+/- 50 RON
+/- 500 RON

Total:

+/- 11800 RON

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca

Concluzii
Studiile pe animale indic faptul c un pretratament cu agent
antiangiogenetic (un medicament care mpiedic creterea vaselor de snge) ar
putea mbunti eficacitatea virusurilor care atac tumorile. Acelai lucru este
valabil i cu imunosupresoarele. n combinaie tratamentul ar putea distruge nu
numai tumora iniial ct i metastazele acesteia.
Un experiment similar a fost efectuat cu o alt tulpin de virus: RIGVIR.
Spre deosebire de acesta ns, n care mortalitatea era redus la pn de 4 ori,
experimentul nostru a crescut durata medie de via cu pn la de 6 ori. n 2004
viroterapia cu acest virus oncolitic (RIGVIR) a fost introdus clinic n Letonia n
tratamente de chemo i radioterapie ducnd la o scdere a mortalitii cu de 4
pn la 6 ori fa de cei pe tratament clasic. Acest lucru ne d ncredere n faptul
c i metoda noastr ar putea aciona sinergist alturi de tratamentul clasic.
Particularitatea studiului nostru const n combinarea unor metode ce izolat nu
ofer rezultate destul de satisfctoare dar care mpreun duc la o cretere
exponenial a duratei medii de via i chiar vindecarea tumorii.
n viitor viroterapia alturi de tratamentele deja actuale mpotriva melanomului ar
putea prelungi semnificativ viaa pacientului i poate chiar distruge neoplasmul n
totalitate. Cu toate acestea, mai trebuiesc efectuate studii preclinice pentru
evaluarea eficacitii i siguranei utilizrii acestor virusuri oncolitice.

Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu


Cluj-Napoca

Bibliografie
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2562196/
https://en.wikipedia.org/wiki/Oncolytic_virus
http://www.medicalstudent.ro/boli-infectioase/virusul-oncolitic.html
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26319388
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22739258
https://en.wikipedia.org/wiki/Humanized_mouse
https://google.ro/images
https://en.wikipedia.org/wiki/Melanoma