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FILOGEOGRAFA: OBJETIVOS, MTODOS Y EJEMPLOS

Anala A. Lanteri y Viviana A. Confalonieri

a filogeografa se define, en sentido estricto, como el anlisis espacial de

los linajes gnicos (Avise et al., 1987). Este anlisis se aplica a niveles
infraespecfico o de especies cercanamente emparentadas y surgi hace
poco ms de diez aos, en virtud del progreso que han tenido dos aspectos
de la biologa evolutiva moderna: uno tecnolgico, gracias al cual se comenz a disponer de datos de variabilidad intraespecfica en la forma de secuencias de ADN, y otro conceptual o terico, que implic la aplicacin de la
teora de la coalescencia al estudio de procesos microevolutivos. Dado
que enfatiza los aspectos histricos de la actual distribucin de los linajes
gnicos, la filogeografa puede considerarse como una subdisciplina de
la biogeografa histrica, que integra conceptos y tcnicas de gentica
molecular, gentica de poblaciones, demografa, sistemtica filogentica,
etologa y paleontologa (Avise, 1994, 2000). Dos campos de estudio
tradicionalmente separados tanto en sus enfoques tericos como metodolgicos, como son la gentica de poblaciones y la sistemtica, han
encontrado puntos de coincidencia en el enfoque filogeogrfico (Avise
et al., 1987).
La filogeografa aplica por primera vez el anlisis de genealogas gnicas al estudio de la evolucin de las poblaciones y permite sacar conclusiones con respecto a las secuencias de colonizacin, diversificacin y
extincin de los linajes gnicos en determinadas reas. Adems, el estudio comparado de los patrones filogeogrficos de varias especies
codistribuidas contribuye a plantear hiptesis sobre posibles eventos
comunes de vicarianza o dispersin y a identificar las causas geolgicas,
ecolgicas o etolgicas que pudieran haber influido en ellos.
En un sentido amplio, la filogeografa comprende los estudios
filogenticos de la distribucin espacial de cualquier caracterstica (morfolgica, etolgica, etc.); sin embargo, en la actualidad la disciplina se basa
principalmente en el anlisis de ADN mitocondrial (ADNmt). En especies animales, el ADNmt se ha convertido en un instrumento fundamental del anlisis filogeogrfico, pues adems de no recombinar, presenta una tasa de mutacin elevada y herencia casi exclusivamente materna (Gillespie, 1986; Harrison, 1989). Dado que los haplotipos o
variantes del ADNmt registran una historia matrilineal de eventos
mutacionales, es posible conectarlos de un modo filogenticamente inteligible en un filograma, el cual se superpone con la distribucin geogrfica del grupo en estudio (Avise, 2000).
El crecimiento del nmero de trabajos sobre filogeografa, desde sus
inicios en 1987, ha sido explosivo y abarca casi todos los grupos animales
incluido el Homo sapiens (Avise, 1998, 2000). Entre las mltiples aplicaciones del anlisis filogeogrfico cabe sealar los estudios destinados a
determinar el lugar de origen y las vas de dispersin de especies consideradas plagas agrcolas o que han colonizado archipilagos volcnicos
(Roderick y Gillespie, 1998; Confalonieri et al., 2000; Juan et al., 2000); el
grado de estructuracin poblacional de una especie (Osentoski y Lamb,
1995); las causas de la variacin poblacional observada en caracteres
cromosmicos o genticos y su correlacin con gradientes geogrficos y/
o ecolgicos (Confalonieri et al., 1998); el tipo de especiacin (simptrida
o divergencia aloptrida mltiple) que explica la co-ocurrencia de distintos morfotipos de una especie (Bernatchez y Dodson, 1990); el reconocimiento de poblaciones en riesgo de extincin (Avise, 1989; 1996; Moritz,
1994 a,b, 1995); y los estudios de filogeografa comparada, que permiten
ponderar la influencia de la dispersin y la vicarianza en la evolucin de
especies codistribuidas (Bermingham et al., 1997; Cunningham y Collins,
1998). Una mencin especial merecen las investigaciones basadas en

ADNmt, tendientes a reconstruir las relaciones filogenticas de la especie

Homo sapiens, a corroborar la principal hiptesis sobre su origen (out of
Africa) y a poner a prueba distintos modelos de evolucin para las poblaciones humanas durante el pleistoceno (del candelabro, multirregional y
del remplazo africano) (Ayala, 1995 a,b; Ayala et al., 1994; Brown et al.,
1982; Cavalli-Sforza et al., 1994; Li y Sadler, 1992; Nei, 1995). Estos
estudios han sido pioneros y han permitido que la metodologa de anlisis
empleada en humanos se extendiera al resto de los grupos animales.
El presente captulo tiene por finalidad principal hacer una resea
de los objetivos, principios y mtodos de anlisis de la filogeografa, y
discutir algunos ejemplos resultantes de nuestra labor de investigacin y
tomados de la literatura, con el fin de ilustrar el desarrollo creciente y la
importancia de este nuevo campo de estudio.
Marcadores utilizados en estudios filogeogrficos
Un requisito fundamental para poder establecer genealogas gnicas
es el uso de marcadores genticos o secuencias de ADN que no
recombinen. Si se trabaja con muestras de genes nucleares provenientes de individuos entre los cuales existe o existi alguna vez flujo gnico,
es altamente probable que haya habido recombinacin gentica durante el apareamiento de cromosomas homlogos en la meiosis. Este proceso puede llegar a desvirtuar profundamente las verdaderas genealogas de las secuencias, motivo por el cual la mayora de los trabajos de
filogeografa utilizan marcadores de herencia citoplasmtica no
mendeliana, como el ADN de las mitocondrias (ADNmt) y de los
cloroplastos (ADNcp), o marcadores nucleares en donde se haya constatado que existe poca o ninguna recombinacin gentica.
En la actualidad la mayor parte de los estudios filogeogrficos se
basan en el estudio de secuencias de ADN, sin embargo, los primeros
trabajos sobre filogeografa llevados a cabo cuando las tcnicas de
secuenciacin no eran tan accesibles, se realizaron sobre otro tipo de
informacin, por ejemplo la que proveen los fragmentos de restriccin.
En tal sentido, una de las tcnicas ms utilizadas ha sido la de RFLP
(polimorfismos para la longitud de fragmentos de restriccin) sobre
ADNmt total (Thorpe et al., 1993; Confalonieri et al., 1998).
Secuencias del ADN mitocondrial. El ADNmt de los animales es una molcula circular, que carece de histonas asociadas. Esta
ltima caracterstica sera uno de los factores que favorecen su alta tasa
de mutacin y justifican su empleo a escala microevolutiva, a diferencia
de los genes nucleares (Brown et al., 1979; Wolfe et al., 1987). En la
mayora de los animales el ADNmt se hereda por va materna, pues
todas las mitocondrias las aporta la gameta femenina, habindose detectado transmisin de ADNmt a travs del esperma solo en una pocas
especies (Anderson et al., 1995).
Las clulas somticas tpicas poseen cientos a miles de mitocondrias,
cada una con varias copias de ADNmt, sin embargo, en general existe
un haplotipo mitocondrial preponderante por cada individuo. Esta caracterstica denominada homoplasmia, resulta fundamental para poder
realizar un anlisis filogeogrfico donde las unidades de estudio son los
individuos, y probablemente se debe a que dentro de cada poblacin
intracelular de ADNmt, las mutaciones se fijaran en forma rpida por
un proceso anlogo a la deriva gnica.

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Algunas de las propiedades que hacen que el ADNmt sea un marcador particularmente til para estudios filogeogrficos a nivel microevolutivo en especies animales, son las siguientes:
1. El ADNmt exhibe un extenso polimorfismo y una alta tasa de
mutacin, por lo que evoluciona ms rpidamente que el ADN nuclear
de copia simple.
2. La mayora de las variantes del ADNmt involucran sustituciones
nucleotdicas y son pocos los casos en que se observan cambios de
longitud en la molcula.
3. La herencia del ADNmt es casi siempre materna y normalmente
no presenta recombinacin gentica intermolecular.
4. La mayora de los individuos son homoplsmicos para un ADNmt
prevalente.
Secuencias de genes de cloroplastos y nucleares. Tanto
el ADN de los cloroplastos como el ADNmt de vegetales presentan
una evolucin lenta en comparacin con el ADNmt de animales (Wolfe
et al., 1987). Adems, el ADNmt de las plantas tiene una elevada incidencia de reestructuraciones (Palmer, 1992) por lo que, hasta el momento, se ha empleado en escasos estudios filogeogrficos (Golden y
Bain, 2000; Maskas y Cruzan, 2000; Schaal y Olsen, 2000). No obstante, la menor vagilidad y la existencia de hibridacin interespecfica y de
introgresin, hacen de las plantas un material promisorio, ya que mediante estos estudios podran resolverse interrogantes relacionados con
niveles particulares de subestructuracin geogrfica, que han llevado a
la descripcin de subespecies, variedades y ecotipos.
Actualmente, la filogeografia de las plantas tiene puestas sus expectativas en el genoma nuclear (Schaal y Olsen, 2000), sin embargo, aunque se
dispone de tcnicas moleculares para el aislamiento de los dos posibles
alelos (haplotipos) en un tejido diploide (Ort et al., 1997), se ha encontrado escaso nmero de regiones nucleares neutras que exhiban poca
recombinacin gentica y elevada variabilidad intraespecfica.
Marco terico: La teora de la coalescencia
En una poblacin de tamao constante, a lo largo de las sucesivas generaciones y en forma permanente surgen nuevos alelos por mutacin,
mientras que otros se pierden por deriva gentica (asumiendo neutralidad); es decir, que todos los alelos de un gen en una generacin derivan de
(o coalescen hacia) un nico alelo ancestral. La coalescencia es bsicamente un modelo de separacin de linajes y deriva gnica que se retrotrae en el
tiempo, hasta un ancestro comn (Harding, 1996).. El tiempo de coalescencia puede verse afectado por diversos procesos que operan a nivel
poblacional, como por ejemplo fluctuaciones en el tamao de las poblaciones, existencia de seleccin natural o variaciones en el flujo gnico.
La teora de la coalescencia provee un marco conceptual para el estudio de los procesos que influyeron histricamente sobre las poblaciones y
que dieron lugar a la distribucin actual de su variabilidad gentica. Contempla el tratamiento matemtico y estadstico formal de las genealogas gnicas,
dentro y entre especies prximas (Felsenstein, 1971; Griffiths, 1980). Se
aparta de la teora de gentica de poblaciones tradicional, pues se basa en la
teora neutralista (Kimura y Ohta, 1969; Kimura, 1980). Considera que las
mutaciones neutras se acumulan a lo largo de las ramas de los rboles (o
filogramas) que representan las genealogas gnicas.
El esquema de la figura 1 representa la separacin de linajes del
ADNmt dentro de una poblacin durante ms de 40 generaciones,
conectando madres e hijas. De los siete linajes fundadores, todos excepto uno se extinguen. Los linajes que llegan a la actualidad coalescen
en una hembra comn, ubicada diez generaciones antes y el camino de
conexin entre ellos describe una jerarqua que se refleja en el ADNmt.
Estas genealogas matrilineales seran anlogas a las genealogas
patrilineales que se obtienen a partir de genes del cromosoma Y de los
mamferos o, a la herencia de los apellidos en la mayora de las sociedades humanas (ver cuadro I).

Fig. 1. Separacin de linajes gnicos de ADNmt dentro de una poblacin, durante 40

generaciones, conectando madres e hijas. Los linajes que llegan a la actualidad coalescen
en una hembra comn, en la generacin 30. Las lneas negras ms gruesas ilustran la
jerarqua que se refleja en el ADNmt (Modificado de Avise, 2000).

Cuadro I. Haplotipos mitocondriales y herencia matrilineal

Los haplotipos del ADN registran una historia matrilineal de eventos
mutacionales.
Este tipo de herencia sera anloga a la evolucin de los apellidos en muchas
sociedades humanas.
Hermanos y hermanas heredan el apellido del padre y no un apellido recombinado
y esto posibilita la reconstruccin de genealogas familiares patrilineales.
Las mutaciones seran anlogas a los cambios que puedan haber surgido en esos
apellidos. Por ejemplo, Lanteri viene de Lanter y ha derivado tambin en Lantieri.

La coalescencia para herencias matrilineales fue formulada por Avise et al. (1988) a partir de una formulacin de Tajima (1983) para rboles de genes nucleares bajo seleccin neutral. Dichas formulaciones
permiten calcular las probabilidades para los tiempos de coalescencia
de pares de linajes y de conjuntos de linajes. Asimismo, dado que en el
proceso de coalescencia influyen de un modo determinante factores
demogrficos poblacionales y la dinmica de los procesos de extincin y
recolonizacin, se han analizado distintos modelos de estructura
metapoblacional (Griffiths y Tavar, 1997).

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Las metodologas tradicionales de la gentica de poblaciones no
consideran los factores histricos cuando estiman el flujo gnico intra e
interpoblacional. Los estudios filogeogrficos, en cambio, permiten identificar patrones que sealan la existencia de barreras antiguas al flujo
gnico (Roderick, 1996; Avise, 2000). Tienen en cuenta el flujo gnico
histrico y la fragmentacin poblacional en un contexto filogentico.
Por ejemplo, cuando se interrumpe el flujo gnico entre dos poblaciones, stas comenzarn a diferenciarse genticamente hasta que todos
los alelos de cada poblacin lleguen a tener un ancestro comn ms
cercano entre s, que con los alelos de la otra poblacin. A este estado
se lo denomina monofilia recproca (Fig. 2), y se llega luego de que los
alelos han transitado por estados previos de parafiletismo y polifiletismo
(Avise, 2000). Si se hacen inferencias sobre el pasado histrico de las
poblaciones cuando stas todava no alcanzaron el estado de monofilia,
es posible hallar todava variacin allica ancestral, que puede ser interpretada errneamente como debida a flujo gnico interpoblacional
(Schaal y Olsen, 2000).
Mtodos de anlisis de datos
Anlisis cladstico de datos filogeogrficos. Willi Hennig,
el padre de la sistemtica filogentica, distingua claramente un patrn
jerrquico ramificado para las especies y taxones superiores (relaciones
filogenticas) y un patrn reticulado o red de linajes anastomosados,
por debajo del nivel de especie, producto de las relaciones reproductivas
entre individuos (relaciones tocogenticas) (Hennig, 1968) (Fig. 3). Bajo
este marco conceptual, no hubiese sido correcto intentar reconstruir

Fig. 2. Representacin del proceso de separacin de linajes matrilineales, en dos poblaciones separadas por una barrera antigua al flujo gnico (flecha gruesa). En distintos
momentos de la historia evolutiva, las poblaciones A y B aparecen sucesivamente como
polifilticas, parafilticas y recprocamente monofilticas (Modificado de Avise, 2000).

Fig. 3. Relaciones tocogenticas entre individuos y filogenticas entre especies (Modificado de Hennig, 1968). Los puntos negros y blancos representan machos y hembras, respectivamente.

filogenias de individuos de reproduccin biparental (Lanteri, 1995). Sin

embargo, las genealogas de haplotipos mitocondriales o de cloroplastos
(o de genes nucleares que cumplan con las condiciones previamente
mencionadas) presentan una estructura jerrquica ramificada que se
puede representar mediante cladogramas, y por lo tanto resulta vlido
aplicar la metodologa cladstica a nivel infraespecfico, no solo en organismos asexuales sino en aqullos que se reproducen sexualmente (Avise
et al., 1992; Avise, 2000).
En filogeografa se aplican los mismos algoritmos de parsimonia o
de mxima verosimilitud que se emplean para reconstruir rboles de
especies o de taxones superiores (Soltis et al., 1998; Swofford, 1996).
El resultado es un cladograma denominado filograma, dado que en las
diferentes longitudes de las ramas se expresa la cantidad de cambio
evolutivo (Fig. 4). Por eso se considera que la filogeografa ha tendido
un puente entre gentica de poblaciones y sistemtica, entre genealogas gnicas y filogenia de especies, y entre micro y macroevolucin
(Avise et al., 1988). Los principales aspectos a tener en cuenta en un
anlisis filogeogrfico son los siguientes:
1. Cada haplotipo de una misma especie o de especies prximas,
puede interpretarse como una unidad terminal del anlisis filogentico.
2. Los datos a analizar son secuencias de genes, como por ejemplo
Citocromo Oxidasa I o II (COI o COII) del ADNmt.
3. Las relaciones genealgicas entre haplotipos se representan a
travs de filogramas.
4. Los algoritmos para obtener filogramas son similares a los que se
emplean para reconstruir filogenias de especies o taxones superiores.
5. Los filogramas se superponen a la distribucin geogrfica a fin de
interpretar el proceso evolutivo responsable de la dispersin de la, o las
especies en estudio. En tal sentido se han propuesto pruebas estadsticas para evaluar la robustez de la asociacin entre filograma y geografa.
En el filograma de la figura 4 se observan dos filogrupos bien definidos, separados por varios pasos mutacionales. Esta separacin puede
estar correlacionada con una mayor distancia geogrfica o con algn
otro tipo de aislamiento (geogrfico, ecolgico o etolgico) de largo
plazo. Dentro de cada filogrupo, los haplotipos se separan generalmente por un solo paso mutacional y la presencia de varios haplotipos distintos en un mismo filogrupo, evidencia mayor variabilidad gentica y
mayor tiempo de divergencia (Scataglini et al., 2001).
Anlisis estadstico de datos filogeogrficos. Templeton
(1998) propuso una metodologa especfica para la evaluacin estadstica del anlisis filogeogrfico, denominada anlisis cladstico anidado. Esta

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filogrupo A

Fig. 5. Cladograma no enraizado de cinco haplotipos (A hasta E). El clado anidado 2-1
contiene a los clados subordinados 1-1 y 1-2. Los miembros de cada clado estn separados por un solo paso mutacional (e.g. haplotipos A y B dentro del clado subordinados
1-1; o clado subordinado 1-1 con respecto al 1-2).

filogrupo B

Fig. 4. Filograma hipottico de una especie, en el que se observan dos filogrupos

claramente separados por ocho pasos mutacionales. Dentro de cada uno de ellos, los
distintos haplotipos (representados por crculos) se separan por un solo paso mutacional.
Los crculos negros representan los haplotipos ms comunes de cada filogrupo.

metodologa permite, en primer trmino, detectar y probar estadsticamente los mecanismos evolutivos responsables de la distribucin espacial de los patrones de variacin gentica observada, y en segundo lugar,
detectar posibles deficiencias en los esquemas de muestreo.
El primer paso del anlisis es convertir el rbol de haplotipos obtenido mediante parsimonia, en una red de clados anidados, para lo cual
deben aplicarse ciertas reglas de anidacin (Templeton y Sing, 1993). Una
vez aplicadas estas reglas, el rbol de genes incluir clados anidados, donde cada nivel sucesivo de la jerarqua se considera ms antiguo que los
clados subordinados (Fig. 5). El segundo paso consiste en analizar en forma conjunta el cladograma anidado y su distribucin geogrfica, tomando
en consideracin las frecuencias de cada uno de los haplotipos en las
distintas poblaciones. Para esto se calculan dos tipos de distancias: distancias de cada clado (Dc), que representan la dispersin geogrfica de los
miembros de un clado (= haplotipos o clados subordinados) con respecto al centro geogrfico de dicho clado, y distancias de los clados anidados
(Dn), que representan el desplazamiento del centro geogrfico de cada
clado anidado, con respecto al centro geogrfico del clado entero que los
contiene (Fig. 6) (Cruzan y Templeton, 2000). Por ltimo, se calculan las
diferencias promedio entre las Dc y Dn, para los clados terminales versus
los clados internos, y se determina su significacin estadstica mediante
pruebas de permutacin al azar (Templeton y Sing, 1993).
La hiptesis nula del anlisis estadstico es que todos los haplotipos
de los clados anidados se distribuyen geogrficamente al azar. Si esta
hiptesis se rechaza, significa que existen asociaciones significativas en-

Fig. 6. Ejemplo hipottico de anlisis de asociacin geogrfica del clado 1-1 de la figura
5. Los cuadrados blancos representan la ubicacin geogrfica de las poblaciones que
solo incluyen haplotipo A, y los cuadrados mitad gris y mitad blanco, poblaciones con
igual cantidad de haplotipos A y B. Los crculos delimitados con guiones, indican las
distancias Dc (de cada clado) y Dn (de los clados anidados), que representan niveles de
dispersin con respecto al centro geogrfico de cada haplotipo (Dc A y Dc B), y al
centro geogrfico del clado 1-1 (Dn A y Dn B). Este ltimo centro est indicado con un
pequeo rombo (Modificado de Cruzan y Templeton, 2000).
tre los haplotipos y su distribucin geogrfica (Templeton et al., 1995).
Los procesos bsicos que explicaran estas asociaciones son los siguientes: a) aislamiento por distancia, debido a flujo gnico restringido; b)
fragmentacin histrica, y c) expansin del rea de distribucin de las
poblaciones, que incluye eventos de colonizacin a distancia. Cuando
la hiptesis nula no se rechaza, se interpreta que el esquema de muestreo
es inadecuado para detectar estructuracin geogrfica o que las poblaciones observadas son panmcticas a lo largo de toda el rea muestreada.
Recientemente, Templeton (2001) propuso que su mtodo de anlisis
anidado sea empleado adems, para poner a prueba el concepto cohesivo de especie. De acuerdo con este concepto, una especie es un
linaje evolutivo cuyos lmites estn determinados por fuerzas genticas

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y ecolgicas que crean una comunidad reproductiva cohesionada.
Como se mencion previamente, el mtodo permite poner a prueba
la hiptesis nula que el grupo de individuos analizados pertenece a un
nico linaje evolutivo (es decir que conforma una unidad panmctica).
De rechazarse la hiptesis nula y comprobarse la existencia de ms de
un linaje evolutivo, se puede inferir la presencia de ms de una especie
cohesiva. Sin embargo, dado que todas las especies cohesivas pertenecen a distintos linajes evolutivos pero no todos los linajes evolutivos son
especies cohesivas, se recomienda superponer el rbol de haplotipos
anidados, sobre rboles obtenidos a partir de otros caracteres
(morfolgicos o de genes nucleares o annimos = RAPDs) en los que
pueda verificarse la existencia de flujo gnico actual y calcular distancias
para estas nuevas variables. Si la existencia de linajes es concordante
con la diferenciacin que se evidencia en otros caracteres, entonces
dichos linajes podran elevarse a la categora de especie.
Algunos resultados de estudios filogeogrficos
El anlisis filogeogrfico pone en evidencia los diferentes grados de
estructuracin poblacional de las especies (Avise et al., 1987). En aqullas de gran vagilidad (e.g. especies de cetceos, peces, invertebrados
marinos, iguanas marinas) las poblaciones son generalmente poco divergentes y estn estructuradas dbilmente desde el punto de vista
filogeogrfico (Palumbi, 1994; Rassmann et al., 1997). Por lo contrario,
las especies de escasa vagilidad (e.g. tortugas terrestres, aves no voladoras) suelen presentar estructuras filogeogrficas fuertes (Baker et
al.,1995; Osentoski y Lamb, 1995; Walker y Avise, 1998). Sin embargo, existen factores que determinan que la estructura poblacional sea
fuerte pese a la gran capacidad de dispersin de la especie, por ejemplo, ciertas caractersticas del comportamiento, como filopatra al sitio
natal o fidelidad al grupo social (Austin et al., 1994). Las hembras de
muchas especies animales son filoptridas con respecto al sitio natal, en
consecuencia la especie se estructurar espacialmente en funcin de
los linajes matrilineales revelados por el ADNmt. En algunos murcilagos la filopatra de las hembras determina estructuras filogeogrficas fuertes pese a su gran vagilidad, y las colonias de leones marinos de las
costas del Pacfico se encuentran bastante estructuradas debido a una
filopatra regional (Avise, 2000).
Entre las especies con estructura filogeogrfica muy marcada cabe
mencionar al kiwi caf de Nueva Zelanda (Apteryx australis), ave no voladora en que cada poblacin posee un haplotipo de ADNmt diferente;
inclusive, algunos linajes de ADNmt son muy divergentes a pesar de que
no se diferencian morfolgicamente (Barker et al., 1995). La evaluacin
de la congruencia entre los datos aportados por el ADNmt y los caracteres morfolgicos (principalmente morfomtricos) es muy importante para
adoptar decisiones taxonmicas y distinguir especies, subespecies u otros
grupos intraespecficos (Normark y Lanteri, 1995, 1998). Por ejemplo,
en el caso de la abeja Apis mellifera se haban descrito alrededor de 20
subespecies taxonmicas, pero estudios ms modernos permitieron distinguir solo tres unidades morfomtricas principales, procedentes del sur
del Sahara y frica tropical; del norte de frica y oeste del Mediterrneo;
y del Medio Oriente y sudeste de Europa (Ruttner, 1988). Esta unidades
coinciden con linajes que se reconocen claramente mediante el ADNmt
y genes nucleares, y seran el resultado de un aislamiento de largo plazo al
flujo gnico (Smith y Brown, 1990).
Filogeografa y especies plaga: El picudo del algodonero. Anthonomus grandis se conoce vulgarmente como picudo mexicano del algodonero (Coleoptera: Curculionidae) y es la plaga ms daina de ese cultivo en Amrica (Burke et al., 1986). Se cree que es
originaria del sur de Mxico y que habra colonizado el sur de Estados
Unidos y vastas regiones de Amrica del Sur en tiempos histricos, como
consecuencia del aumento en extensin de reas cultivadas con algodn. En la Argentina se detect por primera vez en el ao 1993, por lo

que se iniciaron investigaciones a nivel micro y macrogeogrfico con el

fin de dilucidar el origen de las poblaciones de dicha plaga.
En una primera etapa, se realiz la caracterizacin gentica de poblaciones de Amrica del Sur, Mxico y EUA, mediante la tcnica de
RAPDs (anlisis de polimorfismos del ADN amplificados al azar), que se
viene aplicando con xito desde 1990 para analizar la variabilidad gentica
de poblaciones naturales y determinar el origen geogrfico de especies
plaga (Williams et al., 1990; Lenney Williams, 1994). Los datos resultantes se utilizaron para construir un rbol de neighbor joining en el
cual las poblaciones procedentes del Parque Nacional Iguaz (Argentina, provincia de Misiones), mostraban menor distancia gentica con las
poblaciones de Mxico que con las restantes de Argentina (provincia de
Formosa), Brasil y Paraguay, obtenidas de reas algodoneras (Scataglini et
al., 2000). Esta menor distancia entre la poblacin de Misiones y la de
Mxico, estaba correlacionada con una mayor similitud en parmetros
poblacionales que reflejaban una elevada variabilidad gentica. Se plante
entonces la posibilidad que en Amrica del Sur existieran por un lado
poblaciones colonizadoras recientes, con bajos niveles de variabilidad
gentica, distribuidas principalmente en reas de cultivos de algodn, y
por otro lado, poblaciones ancestrales con altos niveles de variabilidad
gentica, que habran llegado a estas latitudes como resultado de un proceso natural de extensin del rea geogrfica de la especie.
Para poner a prueba la hiptesis precedente se inici un estudio
filogeogrfico basado en el anlisis de secuencias de los genes mitocondriales COI y COII (citocromo oxidasa I y II) (Confalonieri et al., 2000;
Scataglini et al., 2001). Como resultado del anlisis filogeogrfico del gen
COI se identific un haplotipo mitocondrial, al que se denomin A, que
es el ms frecuente (o el nico) en las muestras de Texas (EUA), sur de
Brasil, Paraguay y Argentina (Formosa), pero que est ausente en las poblaciones de Misiones y de Mxico. Un patrn similar se obtuvo a partir
del gen COII. Asimismo, result significativo que las muestras de Mxico
y Misiones renen el mayor nmero de haplotipos mitocondriales, lo
que es caracterstico de poblaciones ancestrales, en contraposicin con
las de Paraguay y Formosa, que incluyen un solo haplotipo, lo cual es
tpico de poblaciones colonizadoras recientes. Los filogramas de haplotipos
mitocondriales resultantes y el posterior anlisis cladstico anidado
(Templeton, 1998) permitieron corroborar la hiptesis planteada al analizar marcadores annimos (RAPDs), sobre la existencia de poblaciones
ancestrales del picudo del algodonero en la provincia de Misiones, de
modo que dicha especie habra arribado al rea por dispersin natural,
siguiendo la distribucin de sus plantas huspedes en tiempos geolgicos.
Por lo contrario, las poblaciones de zonas algodoneras de Paraguay,
Brasil y Argentina (Formosa) corresponderan a un linaje de ADNmt,
morfolgicamente similar a la denominada forma del sudeste, originaria del cinturn algodonero del sudeste de Estados Unidos. Segn el
anlisis de Templeton (1998), los haplotipos de este linaje muestran una
asociacin geogrfica significativa que podra explicarse por colonizacin
a distancia. Esto confirmara la hiptesis de comunidad de origen de las
poblaciones sudamericanas procedentes de zonas algodoneras, con los
picudos del sudeste de EUA, como consecuencia de un evento de colonizacin reciente relacionado con la extensin del cultivo del algodn.
Estudios filogeogrficos en islas volcnicas. Entre los
numerosos trabajos sobre filogeografa publicados en aos recientes,
cabe sealar aquellos cuyo objetivo ha sido estudiar el origen, secuencia de colonizacin y diversificacin de la fauna que habita en archipilagos volcnicos, como los de Canarias, Hawaii y Galpagos (De Salle y
Hunt, 1987; Roderick y Gillespie, 1998; Emerson et al., 2000 a,b; Juan
et al., 2000). Para algunos grupos animales se han registrado patrones
filogeogrficos que sugieren una secuencia de colonizacin congruente
con la diferente edad geolgica de las islas, la cual se relaciona con la
secuencia temporal en que dichas islas han emergido desde el fondo
del ocano y han estado disponibles para ser colonizadas desde el continente. En otros casos se evidencian patrones filogeogrficos mucho
ms complejos, producto de colonizaciones sucesivas desde el conti-

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nente o recolonizaciones desde islas cercanas, extinciones y divergencia en situaciones de alopatra (en distintas islas) o simpatra (en
diferentes zonas ecolgicas de la misma isla). Por ejemplo, en el
archipilago de Canarias, la secuencia de colonizacin por parte de
Brachyderes rugosus (Coleoptera: Curculionidae) ha seguido la regla
de la progresin corolgica en el sentido de Brundin (1972) (Emerson
et al., 2000 a); en el caso de Calathus (Coleoptera: Carabidae) se
identificaron tres eventos de colonizacin independientes, con dispersiones subsecuentes entre islas (Emerson et al., 2000 b); y en una
especie de Nesotes (Coleoptera: Tenebrionidae) que habita en Gran
Canaria, se reconocieron morfotipos asociados con distintos ambientes ecolgicos (Rees et al., 2001). Asimismo se han estimado
los tiempos en que se habran producido los eventos de colonizacin: Calathus y Brachyderes habran arribado a las islas y comenzado su diversificacin hace menos de 2 millones de aos, en tanto
que Hegeter y Pimelia (Coleoptera: Tenebrionidae) se habran comenzado a diversificar hace 6.5 y 8 millones de aos, respectivamente (Rees et al., 2001).
Nuestro grupo de investigacin ha comenzado a realizar un estudio filogeogrfico en el gnero Galapaganus (Coleoptera, Curculionidae), distribuido en el archipilago de Galpagos y en las costas
del norte de Per y Ecuador, cuyo objetivo es poner a prueba hiptesis previas con respecto a la secuencia de colonizacin de las islas
del archipilago y diversificacin de la especies. Estudios filogenticos
anteriores mediante el anlisis de caracteres morfolgicos (Lanteri,
1992) y moleculares (Sequeira et al., 2000), sugieren la existencia
de un patrn de colonizacin recurrente desde el norte de Per y
recolonizaciones entre islas geogrficamente prximas. El cladograma
obtenido a partir de secuencias de ADNmt (COI) indica que la especie ms basal, G. galapagoensis, se distribuye en la isla ms antigua
del archipilago (San Cristbal), que adems es la isla ms cercana al
continente, y por lo tanto el blanco ms adecuado para una colonizacin. Asimismo, en San Cristbal, que presenta zonacin
ecolgica, se distribuye ms de una especie de Galapaganus, hecho
que sugiere un proceso de diversificacin en simpatra o microalopatra (diferentes hbitats de una misma isla). La edad de la divergencia entre G. galapagoensis y las restantes especies del archipilago se estim en 7.2 millones de aos (Sequeira et al., 2000), mediante un reloj molecular calibrado para artrpodos sobre la base
de estudios realizados en poblaciones de la mariposa Heliconius erato,
cuya filogenia matrilineal de ADNmt permite separar dos filogrupos
distribuidos al este y oeste de los Andes, que habran divergido hace
aproximadamente 1.5 a 2 millones de aos (Brower, 1994). Dado
que en el caso de Galapaganus la edad de la divergencia excede la
edad geolgica mnima para las islas del archipilago (aunque coincide con dataciones moleculares realizadas para otros grupos animales como iguanas, geckos y lagartos), se concluy que su diversificacin podra haber comenzado en islas actualmente sumergidas
(Christie et al., 1992).
La estimacin de edades de divergencia de linajes gnicos est en la
actualidad estrechamente asociada con los estudios filogegrficos, dado
que tanto la teora de la coalescencia como los conceptos tericos en
que se basan los relojes moleculares tiene sus races en la teora
neutralista (Kimura y Ohta, 1969; Kimura, 1980). Las calibraciones de
relojes moleculares y dataciones basadas en ADNmt han recibido diversas crticas, sobre todo porque dichas calibraciones toman en cuenta
evidencias biogeogrficas o fsiles a veces inciertas, o porque los diferentes sitios y genes de ADNmt evolucionan a tasa muy variable dentro
de cada linaje (Wolfe et al., 1987), o se dan sustituciones mltiples
(multiple hits) que pueden distorsionar las tasas de sustitucin nucleotdica. Sin embargo, el empleo de relojes moleculares para estimar edades mnimas de divergencia y para comparar estos resultados con otras
estimaciones (fsiles o geolgicas) se ha extendido a lo largo del tiempo
y los resultados obtenidos, aunque provisionales, resultan muy tiles
(Avise, 2000).

Filogeografa comparada y sus aportes a la biogeografa histrica

La filogeografa comparada tiene por objeto analizar las relaciones
filogenticas de haplotipos mitocondriales de varias especies
codistribuidas, con el objeto de establecer patrones en comn (Bermingham y Moritz, 1998; Ronquist, 1997). Si varias especies codistribuidas estn estructuradas filogeogrficamente de modo similar, se puede
interpretar que reflejan o comparten una historia comn, y que han sido
afectadas por factores evolutivos o ecolgicos similares. En filogeografa
comparada se emplean los mismos mtodos que en biogeografa cladstica
o de la vicarianza (Rosen 1975; Platnick y Nelson, 1978; Morrone y Crisci,
1995). Uno de los procedimientos ms corrientemente utilizados es el
anlisis de parsimonia de Brooks (Brooks, 1985, 1990).
En muchos casos, las ramas principales de los rboles de genes de
ADNmt, representan filogrupos (poblaciones, grupos de poblaciones o
subespecies) cuya distribucin es congruente con los lmites de provincias o distritos biogeogrficos reconocidos tradicionalmente (Avise,
2000). La congruencia entre patrones filogeogrficos de distintas especies codistribuidas es frecuente, sin embargo, por lo general no hay
concordancia en la profundidad temporal de la divergencia (Cunningham
y Collins, 1998). En la figura 7 se representan patrones filogeogrficos
hipotticos de tres especies codistribuidas, los cuales son congruentes.
En el primer caso la separacin entre los dos filogrupos de la especie es
muy antigua, y en los otros dos es ms reciente, debido a la ocurrencia
de eventos vicariantes seguidos de extincin y recolonizacin.

Fig. 7. Representacin de tres escenarios evolutivos diferentes, para tres especies

codistribuidas que muestran un patrn filogeogrfico similar. En el cuadrante A los
filogrupos se separan por una barrera muy antigua al flujo gnico; en B y C, la profundidad temporal de la separacin entre filogrupos es menor, debido a que se produjeron
eventos vicariantes seguidos de extincin y recolonizacin.

191
En la Pennsula de Florida (EUA), diversas especies incluyendo peces e invertebrados marinos, peces de agua dulce y aves costeras, muestran una elevada congruencia entre filogrupos de la cuenca del Atlntico y de la cuenca del Golfo de Mxico. Durante los ciclos glaciares del
pleistoceno, el nivel del mar era ms bajo que en la actualidad y estos
grupos debieron estar an ms aislados, pero en los ciclos interglaciares,
cuando el nivel del mar subi por el aumento de la temperatura, algunas especies ms vgiles se dispersaron, de modo que ciertos genotipos
del Golfo se introdujeron en los de la costa Atlntica del sur de Florida
(Bermingham y Avise, 1986).
Estudios moleculares de alozimas y ADNmt llevados a cabo en peces tropicales, camarones y otros invertebrados marinos permiten separar, en la mayora de los casos, las poblaciones del Ocano Pacfico de
las que actualmente se distribuyen en el Ocano Atlntico tropical
(Knowlton et al., 1993; Bermingham et al., 1997). Esta separacin coincide aproximadamente con el levantamiento del Istmo de Panam
hace unos 3 millones de aos, de modo que la filogeografa permite
evidenciar el evento vicariante producto del levantamiento de dicho
Istmo. Sin embargo, no hay coincidencia absoluta en la profundidad temporal de la separacin, lo cual indica que cuando las poblaciones de
algunas especies estaban separadas, entre otras todava exista flujo
gnico. Inclusive hay quienes postulan un contacto postvicariante, ocurrido recientemente va circumtropical, a travs del Ocano ndico.
Las distribucin espacial y la profundidad de separacin de numerosos filogrupos intraespecficos parecen estar consistentemente
correlacionadas con los ciclos climticos del pleistoceno (Webb y Bartlein,
1992; Pitelka et al., 1997). La separacin de especies, en cambio, tiende a ser ms antigua y por lo general se ha iniciado previamente al
cuaternario. Por ejemplo, Avise y Walker (1998) estudiaron los filogrupos
mayores de aves canoras actuales de Amrica del Norte. El ADNmt
evidencia que el 76% de dichos grupos data del pleistoceno (1.1 millones de aos) y que la separacin de estas especies con sus hermanas,
data del plioceno (2.8 millones de aos). Dataciones similares de los
tiempos de especiacin se han obtenido para mamferos, donde los
tiempos evolutivos medios se han estimado en 1.2- 3.2 millones de
aos (Avise et al., 1998).
El pleistoceno, que comenz hace aproximadamente 2 millones
de aos, fue un tiempo de extraordinarias oscilaciones climticas, en
que las edades glaciares fueron interrumpidas sucesivamente por perodos de climas templado-clidos similares a los que han predominado
en tiempos recientes (ltimos 10,000 aos). En regiones tropicales que
no fueron ocupadas por glaciares, los ciclos del pleistoceno tambin
tuvieron gran efecto sobre la flora y fauna, ya que alternaron episodios
de climas hmedos y clidos, con otros ciclos ridos y ms frescos. Una
de las hiptesis propuestas para explicar los procesos de especiacin
reciente en la cuenca del Amazonas es el Modelo de Refugios (Haffer,
1969, 2001; Vanzolini y Williams, 1970, 1981), el cual postula que
como consecuencia de las fluctuaciones climticas del pleistoceno se
produjeron sucesivas expansiones y contracciones de las reas de selva y de sabanas, y por lo tanto, ciclos de vicarianza y dispersin de las
especies y poblaciones. Durante las fases de aridez, la selva habra
cubierto solo pequeas reas disyuntas que actuaron como refugios y
habran posibilitado la persistencia de ciertas especies. Presiones de
seleccin locales habran favorecido la diferenciacin de las poblaciones en dichos refugios. En las fases hmedas, la expansin de las selvas y la dispersin de las poblaciones previamente aisladas, producira
el patrn complejo tpico de zonas de contacto secundario. En la cuenca
Amaznica se han encontrado reas de hibridacin, introgresin o
simpatra secundaria comunes a varias especies, que no coinciden con
ninguna barrera fsica o ecolgica actual, pero que estaran sugiriendo
barreras histricas al flujo gnico (Simpson Vuilleumier, 1971). La
metodologa propuesta por la filogeografa se ha convertido en una
herramienta valiosa para poner a prueba el modelo de refugios y para
identificar reas de contacto secundario entre poblaciones o especies
diferenciadas durante el pleistoceno.

Conclusiones
La filogeografa ha contribuido a equilibrar el nfasis que la biogeografa ecolgica otorga a la seleccin natural contempornea en la distribucin
de los organismos, ya que bajo la ptica de la teora neutralista la seleccin
natural no es la nica fuerza capaz de generar patrones geogrficos.
El enfoque filogeogrfico establece un balance entre dispersin y
vicarianza, para explicar las causas histricas de la distribucin, y permite
identificar factores, como por ejemplo extinciones y recolonizaciones o
eventos de expansin del rea geogrfica, que tambin son determinantes fundamentales de la distribucin.
Los estudios filogeogrficos contribuyen a reconocer especies
cohesivas y grupos infraespecficos (subespecies, poblaciones, ecotipos),
a estimar sus tiempos de divergencia, y a establecer las causas de su
diversificacin y distribucin geogrfica.
Resulta de gran utilidad para identificar zonas de contacto secundario, y para distinguir entre especiacin simptrida y co-ocurrencia de
poblaciones diferenciadas previamente en alopatra.
Ayuda a interpretar historias complejas donde se han producido
eventos de colonizacin a distancia, divergencia temporal en hbitats
fragmentados, dispersin, extinciones y sucesivas recolonizaciones, e.g.
biogeografa de islas volcnicas, dispersin de plagas y diferenciacin
especfica e infraespecfica durante el pleistoceno.
rboles de genes como los que se obtienen mediante los anlisis
filogeogrficos, proveen una estimacin a largo plazo del tamao efectivo
de las poblaciones, su tasa de mutacin e intensidad de su flujo gnico histrico.
La filogeografa comparada pone a prueba la hiptesis nula de congruencia entre las historias evolutivas y de distribucin de los filogrupos
intraespecficos, en reas geogrficas determinadas, con el fin de establecer la secuencia espacial y temporal de la diversificacin.
Agradecimientos
A la Ing. Sonia Surez, por su colaboracin en la confeccin de las
ilustraciones, y al Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET) por su constante apoyo econmico.
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