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SANTO ANDRÉ
MARÇO / 2010
Sumário
1. INTRODUÇÃO..................................................................................................................2
2. OBJETIVOS.......................................................................................................................5
3. METODOLOGIA...............................................................................................................5
3.1. Materiais .....................................................................................................................5
3.2. Métodos ......................................................................................................................5
4. RESULTADOS ..................................................................................................................6
5. DISCUSSÃO ....................................................................................................................11
6. CONCLUSÃO..................................................................................................................12
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS .............................................................................13
2
1. INTRODUÇÃO
As proteínas são compostos orgânicos de estrutura complexa e elevado peso
molecular e apresentarem funções variadas, são sintetizadas a partir de apenas 20
aminoácidos diferentes. Mesmo o número de monômeros diversos parecendo
pequeno, como as proteínas são compostas por centenas de aminoácidos e cada
um deles podendo estar presente mais de uma vez, a probabilidade de construção
de moléculas diferentes é muito grande [1].
Os aminoácidos são compostos que apresentam, na sua molécula, um grupo
amino e um grupo carboxila, com exceção da prolina. Tem uma fórmula básica
comum, na qual os grupos amino e carboxila estão ligados ao carbono α, ao qual
também se liga um átomo de hidrogênio e um grupo variável chamado cadeia lateral
ou grupo R (Figura 1)[1].
O ponto isoelétrico é o ponto onde cada molécula possui carga elétrica total
nula, sendo possível calcular o pH neste ponto de acordo com a equação (1.1).
pK i + pK j
PI = (1.1) (VOET, 2006 p.70)
2
Sendo pKi e pKj valores de pKa antes e depois da espécie neutra,
respectivamente. No caso de aminoácidos sem cadeia polar, como a glicina, pKi e
pKj representam pKa 1 e pKa 2. Em aminoácidos com cadeia lateral polar, com uma
função carboxila (ácidos aspártico e glutâmico), pKi representa pKa1 e pKj o pKaR
(pKa do radical R). No caso de aminoácidos com amina em sua cadeia lateral, pKi
representa o pKaR e pKj o pKa2 [2].
2. OBJETIVOS
Esta experiência tem por objetivos a determinação dos valores de pKa de
aminoácidos por meio da construção dos gráficos das titulações ácido-base. E
comparar os perfis das curvas e correlacionar os valores de pKa com os grupos
presentes nos aminoácidos.
3. METODOLOGIA
3.1. Materiais
• Soluções 0,1 mol/L de glicina, arginina e ácido glutâmico.
• Solução 4 mol/L de HCl.
• Solução 0,25 mol/L de NaOH.
• pHmetro.
• 1 pipeta volumétricas de 20 mL.
• 1 pipeta de Pasteur.
• 1 Bureta.
• 3 béqueres de 100 mL.
3.2. Métodos
Foram pipetados 20 mL de solução 0,1 mol/L da solução de um dos
aminoácidos em um béquer de 100 mL. Em seguida, o pH da solução foi medido
com uso do pHmetro e anotado.
6
4. RESULTADOS
Os resultados das titulações dos três aminoácidos encontram-se na Tabela 1
Tabela 1 – pH em função do NaOH adicionado aos 3 aminoácidos.
Glicina Arginina Ácido Glutâmico
pH inicial = 7,5 pH inicial = 10,85 pH inicial = 2,83
V NaOH (mL) pH Glicina V NaOH (mL) pH Arginina V NaOH (mL) pH
0,00 1,04 0,5 1,01 0,00 0,97
1,00 1,18 1,00 1,06 0,50 1,00
2,00 1,26 1,50 1,13 1,00 1,06
3,00 1,40 2,00 1,17 1,50 1,12
4,00 1,55 2,50 1,22 2,00 1,18
5,00 1,72 3,00 1,27 2,50 1,26
6,00 1,88 3,50 1,32 3,00 1,33
7,00 2,06 4,00 1,38 3,50 1,40
8,00 2,25 4,50 1,44 4,00 1,49
9,00 2,45 5,00 1,50 4,50 1,58
10,00 2,66 5,50 1,57 5,00 1,66
11,00 2,99 6,00 1,63 5,50 1,76
12,00 3,68 6,50 1,66 6,00 1,85
13,00 8,70 7,00 1,75 6,50 1,96
14,00 9,19 7,50 1,82 7,00 2,00
15,00 9,51 8,00 1,91 7,50 2,05
16,00 9,75 8,50 1,94 8,00 2,27
17,00 9,96 9,00 2,00 8,50 2,40
18,00 10,21 9,50 2,10 9,00 2,54
19,00 10,40 10,00 2,21 9,50 2,70
20,00 10,76 10,50 2,32 10,00 2,83
21,00 11,26 11,00 2,41 10,50 3,02
22,00 11,84 11,50 2,56 11,00 3,40
23,00 12,17 12,00 2,79 11,50 3,53
7
pH Glicina
14,00
12,00
10,00
8,00
pH
6,00
4,00
2,00
0,00
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00
NaOH (mL)
pH Arginina pH Arginina
14,00
12,00
10,00
8,00
pH
6,00
4,00
2,00
0,00
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00
NaOH (mL)
pH
pH ácido Gluitâmico
14
12
10
8
pH
0
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00
NaOH (mL)
14,00
12,00
10,00
8,00
pH
6,00
4,00
2,00
0,00
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00
NaOH (mL)
(1.2)
Analisando as formas em equilíbrio da esquerda para a direita, tem-se a forma
ácida neutra básica, assim nas formas possíveis do aminoácido, que o grupo
NH3+ só se dissocia se o grupo –COOH já estiver completamente dissociado em –
COO– [3].
Equação de Equilíbrio para a Arginina (1.3):
11
(1.3)
Analisando as formas em equilíbrio da esquerda para a direita, tem-se a forma
altamente básica levemente básica neutra ácida. Isso justifica a existência
de três pKa's, sendo dois do lado básico da curva da Figura 7.
Equação de equilíbrio para o Ácido Glutâmico (1.4):
(1.4)
Analisando as formas em equilíbrio da esquerda para a direita, tem-se a forma
básica neutra levemente ácida altamente ácida. Isso justifica a existência de
três pKa's, sendo dois do lado ácido da curva da Figura 8.
5. DISCUSSÃO
Poder-se-ia utilizar soluções de concentrações menores de NaOH tal como
analisar em intervalos de adição menores Provavelmente facilitaria a visualização
dos valores de pKa pois aumentaria o número de pontos da curva, tornando a
visualização mais precisa.
No caso da glicina, que não possui grupo ionizável na cadeia lateral, não
haveria necessidade de maior quantidade de pontos na curva (menor concentração
da base) por ser apolar, ela não apresenta outro pKa intermediário que interferiria na
construção do gráfico.
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6. CONCLUSÃO
Conclui-se que é possível determinar os valores de pKa dos aminoácidos por
titulações ácido-base sendo os valores de pKa1 e pKa2, respectivamente, para a
glicina, 2 e 10; arginina 2, 9.5 e pKaR = 10; ácido glutâmico 2,10 e pKaR = 4.
Como os aminoácidos possuem os grupos COOH- e NH3+, os valores de pKa
serão próximos de 2 e 9, variando para cada aminoácido.
Também se conclui que as curvas de titulação são similares quanto à forma da
curva no gráfico permitindo comparar seus pKa entre si e também analisar o
comportamento em diferentes pH.
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7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS