You are on page 1of 84

I.

CURS INTRODUCTIV
Virusurile reprezint o categorie specific de ageni infecioi, fundamental diferii, structural i
funcional, de oricare dintre organismele cunoscute. Din cauza dificultilor de observare, cultivare i
studiere, foarte mult vreme au fost analizate prin prisma unor caractere evidente: filtrabilitatea,
dimensiunile foarte mici, parazitismul obligatoriu intracelular, inactivarea prin cldur. Aceste caractere
s-au dovedit a nu fi definitorii n raport cu ali ageni infecioi, fapt care explic ncadrarea greit i
absurd a bacteriilor mici filtrabile, parazite obligatorii intracelular, ca intermediari ntre bacteriile
adevrate i virusuri.
Recunoaterea tiinific a virusurilor ca entiti particulare se datoreaz lui Andre Lwoff, care n
1953 i n 1981 a ncercat s stabileasc ansamblul caracterelor originale ale lumii virusurilor, descriind
deosebirea dintre virus i non-virus.
A. CARACTERE GENERALE ALE VIRUSURILOR: MORFOLOGIA, TAXONOMIA,
COMPOZIIA CHIMIC, STRUCTURA I MULTIPLICAREA VIRUSURILOR.
Nr.
crt.
1
2

Caracterul

VIRUSURI

Tip de organizare

organizare acelular

Unitate de
structur i
funcie
Stri posibile de
existen

virionul

Morfologie

Dimensiuni

virionul - particula viral matur, complet, infecioas, form


n care virusul se gsete la sfritul procesului de replicare n
celula gazd i este eliberat n mediul exterior
virusul vegetativ - genomul viral aflat liber n celula gazd,
pregtit de replicare
provirusul - genomul viral integrat n genomul celulei gazd
o virioni de form cilindric alungit, adic de bastona rigid
(VMT) sau flexibil (bacteriofagii filamentoi)
o virioni de form sferic (izodiametric, de exemplu virusul
poliomielitei)
sau
sferoidal
(virusurile
gripale,
adenovirusurile, herpesvirusurile)
o virioni de form paralelipipedic (poxvirusurile)
o virioni cu form de cartu (virusul rabic)
o virioni n form de cirea cu coad sau mormoloc
(bacteriofagii T par).

PROCARIOTE
organizare celular de tip
procariot
celula bacterian

- celula bacterian
vegetativ, capabil de
cretere i replicare
- sporul bacterian, form
facultativ de rezisten
o
o
o
o
o
o

coci
cocobacili
bacili
bacterii spiralate
bacterii filamentoase
bacterii ptrate

(http://e-ducation.net/microorganisms.htm)

- dimensiunea variaz de la 20nm (parvovirusuri) pn la 300nm


(poxvirusuri);
- se poate determina prin:
ultrafiltrare
ultracentrifugare, determinnd constanta de
sedimentare i aplicnd legea lui Stokes
microscopie electronic

dimensiuni de 1 - 10

Taxonomie i
nomenclatur

Compoziie
chimic
- acizii nucleici
- proteinele

- glucidele i
lipidele

- echipamentul
enzimatic

Grupare clasic n funcie de:


- gazd
- tipul i structura acidului nucleic,
- dimensiuni,
- arhitectura capsidei,
- prezena peplosului;
Virusurile sunt cuprinse n regnul Vira; cele animale sunt
grupate n: ordine (este luat n considerare un singur ordin,
Mononegavirales), familii, subfamilii, genuri, specii, cu nume
latine sau termeni informaionali (referitori la gazd, boal,
aspect morfologic, zona de izolare, caractere combinate). Se
utilizeaz nomenclatura latin cu terminaiile cunoscute pentru
taxoni, dar nu este o denumire binomial. Uneori se folosesc
combinaii de litere i cifre.
Specia este un taxon greu de definit n virologie, fiind
reprezentat de obicei prin tulpini virale, care au similitudini
antigenice i genomice.
Taxonomia actual folosete criteriile urmtoare:
proprietile morfo-structurale ale virusurilor
(dimensiune, form, simetrie, peplos)
proprietile genomului (tip de acid nucleic, numr de
catene, topologia moleculei, polaritatea catenei, numr de
segmente genomice, dimensiunile genomului, secvena
nucleotidelor i procentul G + C)
proprietile proteinelor virale (numr de proteine n
capsid, greutatea molecular a acestora, funciile proteinelor
virale, secvena de aminoacizi)
particulariti ale replicrii virale (strategia replicrii,
caracteristicile transcrierii, sediul asamblrii virionilor, modul de
eliberare a acestora)
proprieti fizico-chimice (stabilitate la aciunea unor
factori fizici, chimici)
proprietile biologice (particulariti serologice, spectrul de
gazd, tropismul tisular, ci de transmitere, vectori)
distribuie geografic
- fie ADN (la dezoxiribovirusuri), fie ARN (la ribovirusuri)
- virusurile mici au n structura capsidei un numr fix de
molecule proteice de acelai fel; virusurile complexe au n
capsid mai multe tipuri diferite de molecule proteice, dar
numrul este limitat i fix; rolul proteinelor virale este structural
i n mod excepional enzimatic; o consecin a numrului fix de
proteine este dispunerea lor simetric n capsid, ntr-un mod
unic.
- virusurile nu au glucide i lipide, cu excepia unor proteine
glicolizate; uneori sunt prezente n nveliul extern, provenind de
la celula gazd n care s-au replicat, deoarece peplosul nu este
codificat integral de genomul viral
- virusurile sunt lipsite de echipament enzimatic, neputnd s i
sintetizeze constituenii, s produc energie i s utilizeze
resursele mediului; nu se pot cultiva pe medii acelulare; uneori
virusurile prezint enzime cu rol n replicarea genomului viral,
n favorizarea ptrunderii virusului n celul sau a eliberrii din
celula gazd.

Denumire binar, utilizare


de taxoni

Reovirus = Respiratory
Enteric Orphan virus;
Papovaviridae = Papilom,
Polioma, Vacuolizant
Picornavirus = Pico (lat.
pico = mic), genom ARN
ECHO virusuri = Enteric
Cytopathogenic Human
Orphan

- ADN n genomul bacterian,


ARN n citoplasm
- bacteriile au un potenial de
aproximativ 3-4 mii de
proteine diferite, cu rol
structural sau enzimatic.
Numrul lor este variabil,
randamentul sintezei de
proteine fiind inegal, funcie
de importana proteinei pentru
celula bacterian.
- glucidele i lipidele sunt
prezente n mod constant n
structura bacteriilor
- bacteriile au n mod constant
un echipament enzimatic cu
grad diferit de complexitate,
n funcie de nutriia
bacteriilor; este mai complex
la bacteriile autotrofe, se
simplific la cele heterotrofe
i la bacteriile parazite
obligatoriu intracelular

Structur
intern

virionul cuprinde:
- constitueni eseniali
- genomul viral
- capsida viral
- constitueni accesorii: peplosul (nveliul extern)
Genomul i capsida alctuiesc mpreun nucleocapsida,
caracteristic virusurilor nude, neacoperite.
Genomul e reprezentat de o molecul de acid nucleic, fie ADN
(dezoxiribovirusuri: adenovirusuri, poxvirusuri, herpesvirusuri,
papovavirusuri), fie ARN (ribovirusuri: virusurile gripale,
paragripale, virusul rujeolic, virusul rabic, poliovirusul, VMT), cu o
greutate molecular diferit de la un virus la altul. Molecula de acid
nucleic este monocatenar sau bicatenar, linear sau circular,
dispus helical, mpachetat pentru a forma o structur compact.
Unele virusuri au informaia genetic sub form de segmente
multiple ncapsidate ntr-o capsid comun sau n capside diferite,
caz n care infecia se poate produce numai cnd n organismul gazd
ptrund toate capsidele ce poart informaia genetic necesar
replicrii virale. Avantajul genomului segmentat const n aceea c
mesajele genetice mai mici sunt mai uor replicate i transmise n
celula eucariot animal sau vegetal, putnd fi traduse simultan,
facilitnd procesul de replicare viral. Genomul viral poart
informaia genetic necesar pentru propria replicare i pentru
devierea metabolismului celulei gazd n sensul sintezei de
constitueni virali. Acidul nucleic viral determin infeciozitatea
virusurilor.
Capsida este nveliul proteic ce acoper i protejeaz genomul
viral. Este alctuit din uniti morfologice de natur proteic, numite
capsomere. n funcie de dispunerea capsomerelor, virusurile
prezint trei tipuri de simetrie:
- helical (helicoidal): capsomerele sunt formate dintr-un singur
polipeptid (sunt monomere), reprezentnd unitatea morfologic i
structural a capsidei;
- icosaedric: capsomerele sunt oligomere, ele reprezentnd numai
unitatea morfologic a capsidei, alctuit din mai multe uniti
structurale; pot fi pentoni (sunt pentamere) sau hexoni (sunt
hexamere);
- mixt (binar).
Rolul capsidei virale este de a proteja materialul genetic viral de
degradarea produs de nucleazele celulare, de a contribui la fixarea i
ptrunderea virusului n celula gazd, de a determina spectrul de
gazd a virusului prin specificitatea interaciunii capsidei virale cu
receptorii specifici complementari prezeni pe suprafaa celulei
gazd. Conine determinani antigenici responsabili de producerea
rspunsului imun n organismele infectate.
Peplosul este un nveli extern prezent la virusurile acoperite, cu
nivel complex de organizare, cu rolul de a pstra stabilitatea
nucleocapsidei i de a favoriza fixarea virionului pe celula gazd. E
alctuit dintr-un dublu strat lipidic, n care sunt implantate formaiuni
de natur glicoproteic, numite spicule. Spiculele pot fi prismatice
alungite (hemaglutininele) sau n form de ciuperc
(neuraminidazele).

celula bacterian cuprinde:


- perete celular
- membran
- citoplasm
- nucleoid
- ribozomi
- vacuole
- incluzii
- spori
- capsul
- flageli

n componena virusurilor intr 3 tipuri de proteine:


 proteinele capsidale, cu greutate molecular de 12 - 110 kdal; la cele mai multe virusuri ele sunt
identice, la altele sunt diferite;
 proteine interne, situate n interiorul nucleocapsidei virale, alctuind mpreun cu acidul nucleic
viral corpul central (nucleoidul viral); rolul lor este de a menine genomul viral n form
condensat;
 proteine cu rol enzimatic, prezente la unele virusuri animale; existena acestor enzime nu infirm
faptul c virusurile nu au echipament enzimatic de biosintez, ele avnd rol n replicarea
genomului viral.
Exemple:
 ARN-polimeraza poxvirusurilor i a virusului gripal este o transcriptaz ce
sintetizeaz ARN pe matri de ADN;
 ARN-polimeraza ARN - dependent realizeaz sinteza de ARN pe matri de
ARN;
 neuraminidaza virusului gripal, localizat la nivelul spiculelor din nveliul extern,
degradeaz mucoproteinele i receptorii celulari de la nivelul cilor respiratorii ale
animalelor, favoriznd infecia viral;
 reverstranscriptaza este o ADN polimeraz ARN - dependent prezent la
virusurile ARN oncogene (HIV, retrovirusuri).
CLASIFICAREA VIRUSURILOR
Dei au o structur acelular i nu sunt incluse n sistemele de clasificare a lumii vii, virusurile sunt
suficient de diverse nct s necesite o clasificare util n studiul i identificarea lor. Virusurile se pot
clasifica ntr-o manier general n:
 virusuri nude i acoperite
 virusuri ADN i ARN
 virusuri helicale, icosaedrice i mixte
 virusuri ale plantelor, animalelor, bacteriilor
Nomenclatura virusurilor nu implic utilizarea termenilor binominali latinizai. Numele de
familie, subfamilie i gen se scriu cu iniial mare i cu caractere italice. Numele speciei, cu unele excepii,
nu se scrie cu majuscul i nici cu caractere italice. Numele taxonului precede termenul pentru unitatea
taxonomic. Denumirea virusului are diferite proveniene: aspectul (forma, mrimea), zona geografic sau
anatomic de izolare, efectele asupra gazdei.
Exemplu:
 Familia Herpesviridae, subfamilia Alphaherpesviridae, genul Simplex, herpesvirus 2 uman (herpes
simplex virus 2);
 Ordinul Mononegavirales, Familia Rhabdoviridae, genul Lyssavirus, virus rabic.
Exemplu:
 togavirus virus cu o anvelop ca o manta (tog);
 bunyavirus virus izolat iniial dintr-o zon din Africa numit Bunyamwera;
 adenovirus virus descoperit n vegetaiile adenoide (aden (gr.) = gland);
 herpesvirus virus denumit dup caracterul de rspndire a erupiei (herpes (gr.) = a se furia);

Multiplicare

10

Simetrie
molecular
Proprieti
biologice

11

12

Parazitism
absolut

Multiplicarea virusurilor se realizeaz prin replicare viral


(replicarea informaiei genetice virale, sinteza componentelor
virale, asamblarea particulelor).
Etapele principale ale replicrii virale sunt:
- Adsorbia i fixarea reversibil a virusurilor pe celul
consecin a ciocnirilor ntmpltoare ntre virusuri i celul,
proces nespecific, reversibil
- Fixarea ireversibil a virusurilor pe celul proces ireversibil,
datorat diferitelor grade de specificitate a fixrii virusului pe
celula gazd (receptor celular de virus structuri virale
corespondente); este determinat de complementaritatea
geometric i electrostatic
- Ptrunderea virusurilor n celul:
- virusurile animale ptrund integral prin endocitoz
(viropexie) sau fuziune;
- virusurile vegetale ptrund prind leziunile mecanice ale
peretelui celular;
- bacteriofagii i injecteaz genomul n interiorul celulei
bacteriene
- Decapsidarea i eclipsa eliberarea genomului viral de nveliul
proteic
- Migrarea intracelular pn la locul de replicare:
- direct (transmembranar)
- indirect, prin structuri canaliculare preformate
- Sinteza proteinelor timpurii pornind de la genomurile virale
infectante (iniiale); sunt proteine de reglare, enzimatice i de
matrice
- Replicarea genomului viral
- Sinteza proteinelor tardive pornind de la genomurile progene,
nu de la cele parentale; sunt proteine structurale, de reglare, de
morfogenez (eafodaj) i proteine care faciliteaz eliberarea
virusurilor din celul
- Morfogeneza viral prin autoasamblarea componentelor virale
sau prin depunerea simetric pe suprafaa unor proteine de
morfogenez
- Eliberarea virusurilor din celul lent sau exploziv
simetrie constant a aranjrii moleculelor proteice n capsid:
- helical
- icosaedric
- binar (mixt)
Virusurile nu au capacitatea de a produce energie cu potenial nalt
(ATP), nu fac sinteza independent a constituenilor proprii, nu au
capacitatea de a crete i de a se divide. Se reproduc obligatoriu n
celula gazd vie, pornind exclusiv de la genomul viral.

Pentru virusuri este constant i obligatoriu. Virusurile utilizeaz


sistemele enzimatice, ARN de transfer i ribozomii gazdei n
cursul parazitismului intracelular. n celulele infectate cu virusuri,
metabolismul celular sufer modificri eseniale, fiind deviat n
sensul sintezei constituenilor virali, pornind de la informaia
genetic strin, adus de genomul viral n celul. Procesele de
sintez celular continu un timp, deoarece metaboliii eseniali
celulari sunt necesari n sinteza de constitueni virali. Competiia
dintre virus i celula gazd are loc la nivelul diataxiei (producerea
de constitueni): cea celular e blocat sau diminuat, iar diataxia
viral este activ.

Bacteriile se multiplic prin:


- diviziune direct,
- fragmentare,
- nmugurire,
- prin spori.

lipsete o simetrie molecular


Bacteriile au un metabolism
energetic propriu, chiar i
cnd sunt parazite intracelular; au capacitatea de a
crete pn la un punct critic
urmat de diviziune.
Multiplicarea PK pornete de
la ansamblul integrat al
constituenilor celulari.
La bacterii parazitismul nu
este absolut. Bacteriile nu
utilizeaz n cursul
parazitismului intracelular
sistemele enzimatice ale
gazdei, ci pe cele proprii.

B. ORIGINEA I EVOLUIA VIRUSURILOR


n 1897 Beijerinck denumea virusurile contagium vivum fluidum, considerndu-le organisme
primitive, cu dou componente eseniale pentru lumea vie: acizii nucleici i proteinele. n sprijinul ipotezei
apartenenei virusurilor la lumea vie a fost invocat procesul multiplicrii lor, considerat analog
multiplicrii bacteriene.
Studiile ulterioare de biologie molecular au demonstrat c replicarea viral pornete numai de la
genomul viral, spre deosebire de multiplicarea bacterian, care pornete de la ansamblul integrat al
structurilor bacteriene.
Puini virologi consider virusurile organisme vii. Luria considera n 1973 c sistemele biologice
sunt caracterizate prin pstrarea configuraiei specifice dup ce au fost izolate, pstrnd capacitatea de a fi
reintegrate n circuitul materiei vii. Din acest punct de vedere, virusurile ar putea fi considerate organisme
vii. Crick era de prere c virusul separat nu este un organism viu, dar sistemul virus - celul are toate
proprietile sistemelor biologice.
Majoritatea cercettorilor nu consider virusurile organisme vii. Dificultatea ncadrrii virusurilor
n lumea vie deriv din faptul c nu exist o definiie unanim acceptat a vieii. Crick (1966) precizeaz
trei proprieti minimale ale organismelor vii: capacitatea de cretere, metabolismul, producerea de
descendeni identici. Monod (1971) consider ca definitorii pentru sistemele biologice: morfogeneza
autonom, proprietatea de reproducere, reproducerea invariant la nivel molecular, teleonomia
(proprietatea de a avea o structur i o organizare adaptate supravieuirii individului i speciei). n 1980
Rich consider c sistemele biologice prezint un flux de energie i un flux de informaie, care
coordoneaz reaciile chimice.
Dintre celulele cunoscute, bacteria este cea mai simpl unitate de integrare i reproducere,
constituind un minim vital (F. Jacob, 1970). Virusurile sunt diferite de celulele vii din foarte multe puncte
de vedere, ele fiind inerte n afara celulelor, numai mpreun cu acestea constituind un sistem biologic, n
contextul procesului infecios.
Virusurile sunt entiti foarte evoluate, chiar dac structura lor este foarte simpl. Acest fapt este
dovedit de eficiena lor n exploatarea celulelor vii, printr-un parazitism absolut, n ciuda dimensiunilor
reduse ale genomului.
Genomul virusurilor este capabil s codifice funciile minime necesare replicrii, avnd modaliti
multiple de citire a informaiei genetice reduse. Capsida viral este suficient de stabil nct s protejeze
genomul viral, dar i suficient de labil nct s se dezasambleze uor dup ptrunderea virusului n celul.
Au fost elaborate trei teorii privind originea virusurilor:
- teoria evoluiei regresive
- teoria originii din ADN i/sau ARN
- teoria evoluiei virusurilor ca linie separat, din molecule primare cu proprieti de autoreplicare.
Teoria evoluiei regresive consider c virusurile sunt rezultatul unei simplificri treptate a
funciilor i structurii unor organisme parazite intracelular, cu pstrarea numai a capacitii de replicare a
ADN i a mecanismelor de interaciune cu celula gazd.
Aceast teorie se refer la protozoare parazite, rickettsii, chlamidii. Rickettssiile sunt bacterii
parazite intracelular, Gram negative, care se multiplic prin diviziune direct, realiznd propriile sinteze.
Chlamidiile sunt bacterii parazite de dimensiuni reduse, care mult vreme au fost considerate a fi virusuri,
dar au structur procariot i se multiplic pornind de la ansamblul structural al celulei.
Acelai proces al simplificrii structurale i funcionale ar fi stat la baza formrii organitelor
celulare de tip mitocondrii i cloroplaste, cu dimensiuni asemntoare cu ale bacteriilor, cu ADN cu
configuraie molecular similar cu cea a ADN-ului bacterian, dar care codific sinteza de ARNt i ARNr.
Deoarece nu se cunosc afiniti structurale sau funcionale ntre virusuri i microorganismele
parazite obligatoriu, se presupune c virusurile s-ar fi putut forma prin evoluia regresiv a unor organite
celulare. De exemplu, capsida ar putea fi similar cu un organit de tipul flagelului, care se autoasambleaz
din monomeri proteici.

Teoria originii virusurilor din acizii nucleici celulari presupune c genomul celular genereaz
molecule care dobndesc capacitatea de a se replica independent.
ARN-ul celular poate realiza trei tipuri de funcii catalitice:
- funcia de matri pentru sinteza unor catene noi
- activitatea ribonucleazic
- funcia de nndire a unor secvene nucleotidice.
Toate aceste trei proprieti sunt caracteristice viroizilor i virusoizilor, entiti infecioase
subvirale alctuite din molecule autoreplicative de ARN (viroizii sunt patogeni pentru plante, virusoizii
sunt acoperii i de o capsid codificat de un virus helper).
Existena viroizilor i a virusoizilor a condus la ideea c virusurile ar proveni din molecule de
ARN autoreplicative, sub aciunea catalitic a polimerazelor celulare. Genomurile virale ADN ar fi evoluat
prin transcriere invers.
n celule exist molecule de ADN cu capacitate de autoreplicare, ca de exemplu plasmidele i
transpozonii. Unele se replic dup un model similar cu cel al retravirusurilor, printr-un intermediar ARN,
care ulterior este reverstranscris la ADN. Elementele genetice mobile accelereaz rata evoluiei
genomului, prin deplasarea unor gene ntre plasmide i cromozomi.
Transpozonii din structura genomului viral se pot deplasa ntre genomurile celulelor infectate,
accelernd rata evoluiei celulare i virale, realiznd noi combinaii de gene. Inseria transpozonilor n
genomul viral poate duce la inactivarea unor gene sau la activarea transcrierii altor gene adiacente situsului
de inserie, ceea ce determin modificri ale genomului respectiv.
Multe virusuri ADN se aseamn cu transpozonii prin secvenele terminale repetate invers (de
exemplu Herpesviridele, Adenoviridele), ntre care se gsesc genele de replicare.
Aceast teorie se bazeaz pe capacitatea de recombinare a virusurilor. Unele virusuri se integreaz
frecvent n genomul celulei gazd i pot prelua gene celulare (n special virusurile defective). Proteinele
virale se sintetizeaz n citoplasm, ca i proteinele celulare. Ipoteza originii celulare a virusurilor pare a fi
valabil pentru retravirusuri i pentru virusurile ADN, ns nu este adecvat pentru virusurile ARN.
Se poate considera c virusurile ARN au evoluat din celelalte dou categorii. Baltimore (1998)
consider c cele patru grupe de virusuri ARN (cu genom monocatenar de polaritate pozitiv sau negativ,
cu genom dublu catenar, retravirusurile) au evoluat n paralel, independent, n special retravirusurile, care
au puine n comun cu celelalte categorii.
Virusurile cu genom ADN posed mecanisme de recombinare, care le confer posibilitatea unor
rearanjri genomice profunde i unor interaciuni cu ADN-ul celulei gazd. Mecanismele de recombinare
permit acestor virusuri s se integreze i s se excizeze din genomul celulei gazd, s preia gene celulare
pe care s le transfere la o nou gazd. Cele mai multe virusuri ADN au rat de mutaie inferioar
virusurilor cu genom ARN, fapt dedus indirect din diferite observaii (de exemplu rezistena cptat n
timp fa de unele medicamente antivirale).
Retravirusurile i hepadnavirusurile aparin att ribovirusurilor, ct i dezoxiribovirusurilor.
Probabil au evoluat din elemente retroide (secvene genice transcrise ntr-o molecul de ARN, dar
transcrise invers de o ADN-polimeraz ARN dependent). Retravirusurile au capacitatea de a se
recombina n stadiul de ADN, ca provirusuri. Reverstranscriptaza are proprietatea de a se comuta de la o
matri la alta n timpul sintezei primei catene de ADN, cu o frecven destul de mare, determinnd
recombinri ce pot avea un rol major n evoluia virusurilor.
Virusurile cu genom ARN sunt diverse. Este posibil ca unele virusuri ARN s aib originea n
repliconi primordiali de ARN (de exemplu molecule de ARNm cu capacitate de autoreplicare) sau ar putea
s derive prin recombinare sau reasortare genetic, ori prin mutaii ale ARN-ului celular.
Majoritatea ribovirusurilor sunt de fapt un mozaic de gene virale i celulare, iar prin recombinarea
secvenelor genomice de la mai multe virusuri diferite pot s apar virusuri noi. Virusurile pot evolua
astfel rapid, dar pot avea i perioade de relativ staz evolutiv.

Rata nalt de recombinare la ribovirusuri se datoreaz frecventei schimbri de matri de la o


caten la alta de ARN pe care o realizeaz ARN polimeraza (replicaza). Virusurile cu genom ARN de
polaritate pozitiv realizeaz recombinri omologe (n timpul replicrii pe matria cu o secven
complementar de baze) sau heterologe, care determin schimbri majore ale genomului, cu importan
evolutiv. La virusurile cu genom ARN cu polaritate negativ recombinarea este mult mai rar.
Recombinrile neomologe produc n acest caz particule defective interferente, cu efect modulator asupra
multiplicrii virale.
La virusurile cu genom ARN segmentat, diferite segmente genomice de la virusuri diferite
nrudite, care infecteaz simultan aceeai celul gazd, se pot reasorta, rezultnd virusuri recombinate.
La virusuri frecvena evenimentelor mutaionale este foarte mare, rata de evoluie a virusurilor
fiind de milioane de ori mai rapid dect a gazdelor lor. Evoluia virusurilor este strict adaptativ, pentru
c ele sunt supuse permanent presiunii selective a factorilor de aprare a gazdei. Rata mutaiilor nu trebuie
ns s depeasc un prag ce ar genera un virus incapabil de multiplicare. Virusurile se multiplic la
limita superioar a mutabilitii i adaptabilitii.
Datorit ratei nalte de mutaie, clonele de ribovirusuri i retravirusuri sunt cvasispecii care
prezint variaii genetice genomice. Populaiile de cvasispecii confer virusurilor ARN o adaptabilitate
perfect la mediul gazdei i o capacitate evolutiv deosebit de rapid. Pn i cele mai stabile secvene
genomice ale ribovirusurilor sufer mutaii cu o rat superioar n raport cu dezoxiribovirusurile. Acest
lucru se datoreaz absenei funciei de corectare a ARN polimerazei, n timp ce majoritatea ADN
polimerazelor virale i corecteaz erorile proprii.
Dintre toate enzimele de transcriere i replicare a genomului ARN viral, reverstranscriptazele au
cea mai mare predispoziie la erori. Genomul integrat al retravirusurilor este copiat relativ fidel de aparatul
enzimatic al celulei, de aceea retravirusurile endogene evolueaz foarte lent comparativ cu cele exogene.
Baza ubicvitii ribovirusurilor (care domin patogeneza viral la om, animale i plante) este
tocmai heterogenitatea lor genetic. Mutabilitatea lor accentuat poate influena severitatea infeciei virale.
C. GENOMUL VIRAL: ORGANIZARE FIZIC, MODALITI DE CODIFICARE A
INFORMAIEI GENETICE, INFECIOZITATEA ACIZILOR NUCLEICI VIRALI
Virionii posed doi constitueni eseniali i definitorii: genomul i capsida, care alctuiesc
mpreun nucleocapsida virusurilor nude, fr nveli extern.
Genomul viral este reprezentat de o molecul de acid nucleic, ADN sau ARN. Deoarece acidul
nucleic are dimensiuni mai mari dect capsida, el este mpachetat n interiorul acesteia cu ajutorul unor
poliamine (protamina) i proteine bazice (histone spermice: spermina i spermidina), care duc la formarea
unor legturi ionice ntre gruprile cationice ale factorilor de mpachetare i regiunile polianionice din
molecula de acid nucleic. Dup natura moleculei de acid nucleic, virusurile sunt dezoxiribovirusuri
(adenovirusurile, poxvirusurile, herpesvirusurile, papovavirusurile), care au genom de tip ADN i
ribovirusuri (virusurile gripale, paragripale, virusul rujeolic, virusul rabic, poliovirusul, VMT), cele cu
genom ARN.
Majoritatea virusurilor infecioase pentru om, animale i plante sunt ribovirusuri. n virion
genomul ribovirusurilor este asociat cu nucleoproteine i cu proteine de replicare, dar se disociaz de
nucleopreoteine cnd ajunge n citoplasma celulei gazd. Genomul dezoxiribovirusurilor este complexat
cu proteine att n starea mpachetat n virion, ct i ca genom liber n citoplasma celulei gazd.
La virusurile infecioase pentru celulele animale informaia genetic are caracter discontinuu, ca i
a gazdelor lor.
Dimensiunile genomului variaz n limite foarte largi, avnd o greutate molecular de la 1,2 1,8x106 Da n cazul virusurilor mici (virusurile paragripale), 2,5x106 Da n cazul adenovirusurilor,
200x106 Da n cazul virusurilor mari (poxvirusurile). Dimensiunile genomului ribovirusurilor sunt relativ
uniforme, cel mai mare genom fiind cel al reovirusurilor (15x106 Da). Genomul dezoxiribovirusurilor
variaz ca dimensiune mai mult, ntre 106 Da (virusul hepatitei B) i 185x106 Da (avipoxvirusul).

Exprimat n kilobaze, mrimea virusurilor variaz de la 4 - 5 kb la parvovirusuri i 150 - 300 kb la


poxvirusuri. La virusurile acoperite genomul reprezint aproximativ 1 - 2% din masa virionului, pe cnd la
cele nude acest procent e mult mai mare, de 25 - 50%.
Numrul de gene virale este diferit, virusurile mici au 3 - 4 gene, pe cnd cele cu genom mai mare,
ca de exemplu poxvirusurile, au 240 de gene. Compoziia n baze (G + C%) a genomurilor virale variaz
ntre 35 - 75%, demonstrnd o diversitate deosebit att ntre familiile de virusuri, ct i n cadrul aceleiai
familii. Coeficientul G + C% are semnificaie pentru taxonomia virusurilor. n general, virusurile cu
potenial oncogen au un coeficient G + C% mai apropiat de cel al celulelor mamiferelor, care este de
aproximativ 40% - 45%. Grupul adenovirusurilor cuprinde virusuri neoncogene, cu coeficient G + C 58%,
slab oncogene, cu coeficient G + C 52%, oncogene, cu coeficient G + C 48%.
Virusurile defective sunt cele care fie nu au genom, fie au unul incomplet, lipsit de unele gene.
Acestea nu se pot replica, de aceea necesit prezena n aceeai celul a unor virusuri helper, care s
suplineasc deficienele virusurilor defective.
O particularitate important a virusurilor este aceea c fac economie de informaie genetic.
Aceasta este necesar datorit dimensiunilor mici ale virusurilor i se realizeaz pe mai multe ci.
a. La virusurile mici capsida viral este format dintr-un singur tip sau din puine tipuri de
proteine dispuse simetric, helical sau icosaedric; pentru sinteza lor este necesar o singur gen sau puine
gene din genomul viral;
b. Virusurile pot utiliza unele proteine din celula gazd pentru efectuarea unor funcii virale.
De exemplu replicaza fagului Q (o ARN polimeraz) este format din 4 polipeptide diferite, dintre
care numai una este codificat de informaia genetic viral, celelalte sunt preluate din celula gazd;
c. Virusurile cu un genom defectiv (care nu au n structura genomului lor genele necesare pentru
codificarea proteinelor din capsid) utilizeaz informaie genetic furnizat de virusuri helper, asociate cu
cele defective, care suplinesc deficienele virusului principal, determinnd o sintez n exces de
capsomere. n funcie de virusul helper, virusurile defective pot avea capside cu proteine diferite, dei
informaia genetic specific e aceeai. Se consider c, n cazul majoritii retrovirusurilor oncogene, prin
achiziionarea de protooncogene celulare virusul devine defectiv, pierznd un segment din genom,
deoarece informaia sa genetic trebuie s rmn la aceeai dimensiune.
De exemplu, virusul sarcomului Rous are capacitatea de a produce transformarea malign a unor
celule animale, dar nu se poate replica dect n asociere cu virusul leucemiei murine, care i furnizeaz
informaia genetic necesar sintezei proteinelor capsidale. Un alt exemplu l constituie virusul hepatitei B,
care are rol de virus helper pentru replicarea virusului hepatitic delta.
d. Unele polipeptide virale ndeplinesc n acelai timp funcii structurale (intrnd n componena
capsidei) i funcii de reglare n procesul de replicare viral.
e. Virusurile utilizeaz mai multe mecanisme de transmitere a informaiei genetice de la genom la
proteine; datorit dimensiunilor reduse ale capsidei, virusurile utilizeaz gene suprapuse, o secven de
ADN putnd codifica mai mult dect o protein. Suprapunerea se poate realiza prin:
- nndirea acelorai secvene codificatoare ale moleculei de ARNm n succesiuni diferite; acest
mecanism este activ numai n cazul virusurilor care au o faz nuclear a procesului de replicare
(adenovirusuri, herpesvirusuri, papovavirusuri, virusuri influenza), deoarece enzimele care particip la
clivarea i nndirea ARNm sunt localizate n nucleul celulei eucariote;
- iniierea traducerii mesajului la dou sau chiar trei situsuri diferite; n procesul de translaie se
pot genera mai multe ARN-uri mesagere cu extremitatea 3 identic, dar care difer prin extremitile 5
(noi situsuri de traducere a ARNm, open reading frames = ORF); se sintetizeaz dou sau mai multe
polipeptide sub controlul aceluiai determinant genetic.
- modificarea cadrului de citire n timpul traducerii informaiei la proteine, care este rezultatul
unei mutaii punctiforme. Aceeai informaie genic poate fi folosit n mai multe cadre de citire
(schimbarea cadrului de citire, frame shifting, citire defazat, care are o alt semnificaie genic);

De exemplu, un polinucleotid sintetic cu o structur monoton poate fi translatat n mod diferit,


ducnd la sinteza unor polipeptide diferite:
CTG CTG CTG CTG - poliasparagin
C TGC TGC TGC TGC - poliarginin
CT GCT GCT GCT GCT - politreonin
f. Pe baza informaiei genetice coninut ntr-o caten de ARN, unele virusuri determin sinteza
unei singure poliproteine mari, care este apoi scindat de o proteaz n proteine mai mici.
De exemplu, genomul ARN al poliovirusului este tradus ntr-un singur lan polipeptidic, care este
scindat apoi n zece tipuri diferite de proteine.
g. O alt modalitate de a face economie de informaie genetic este aceea a genomurilor
segmentate (divizate, multipartite).
Unele virusuri ARN patogene pentru om i animale au genom segmentat, segmentele fiind
ncorporate n aceeai capsid. Fiecare segment codific sinteza unei proteine sau a ctorva proteine
diferite. Existena genomului viral segmentat confer virusului avantajul unei mari variabiliti printr-o
pseudorecombinare, deoarece tulpini de virus de origini diferite pot ajunge s produc o coinfecie a
aceleiai gazde i segmentele se pot reasorta, ajungnd s fie ncorporate n aceeai capsid segmente
provenind de la tulpini virale diferite. Fa de proprietile antigenice noi ale variantelor noi de virus
(aprute n urma pseudorecombinrii) populaia nu prezint anticorpi i astfel se pot produce epidemii sau
chiar pandemii, uneori cu consecine grave. De asemenea, segmentele mici de ARN pot fi uor exprimate
n celula gazd, facilitnd procesul de replicare a virusurilor respective.
De exemplu, virusurile gripale prezint un genom cu 8 segmente de ARN monocatenar,
reovirusurile au genomul alctuit din 10 - 12 segmente de ARN dublu catenar.
i plantele pot fi infectate de virusuri ARN cu genom segmentat, dar segmentele se gsesc n capside diferite. Pentru a
se produce infecia, toate capsidele caracteristice virusului trebuie s ptrund concomitent n aceeai gazd, pentru ca
informaia genetic s fie complet. De exemplu virusul mozaicului lucernei, alfa alfa virus (AAV) prezint patru tipuri de
virioni: trei sub form de bastona, cu cte o molecul diferit de ARN i unul de form elipsoidal, cu dou segmente de ARN.

Semnificaia biologic a genomului viral


Genomul viral reprezint materialul genetic al virusului, de tip ADN sau ARN, care conine
ntreaga informaie genetic necesar desfurrii ciclului de replicare n celula gazd sensibil: pentru
replicarea genomului, pentru devierea metabolismului celulei gazd n sensul sintezei de constitueni
virali, pentru sinteza proteinelor structurale i de reglare, pentru asamblarea i eliberarea din celula gazd a
virionilor nou formai.
Genomul viral asigur potenialul de variabilitate a virusurilor i infeciozitatea acestora. Prin
variabilitate, care asigur propagarea virusurilor n natur, se produc modificri antigenice care mresc
posibilitatea de infecie a gazdelor.
Genomul dezoxiribovirusurilor animale (cu excepia celor din grupul Pox), precum i genomul
bacteriofagului se pot integra periodic n genomul celulei gazd. Informaia genetic pentru integrare i
meninerea ei este furnizat de genomul viral. Unele virusuri animale capabile de integrare n genomul
celulei gazd produc concomitent transformarea malign a celulei (virusurile oncogene). Virusurile
oncogene cu genom ARN (din grupul oncornavirusurilor, n care sunt incluse i HIV I, HIV II) se
integreaz prin intermediul transcrierii ARN viral n ADN dublu catenar, acesta din urm integrndu-se n
genomul celulei gazd. Aceste virusuri ARN produc enzima numit reverstranscriptaz, care este o ADN
polimeraz ARN - dependent, capabil s sintetizeze ADN pe matri de ARN.
Infeciozitatea acizilor nucleici virali
Deoarece n ciclul de replicare a virusului se pornete de la genomul viral i nu de la ansamblul
integrat al componentelor sale, genomul viral este infecios. Aceast infeciozitate a fost demonstrat
iniial pentru ADN-ul fagic purificat (Hershey i Chase, 1952) i pentru ARN-ul VMT-ului (Gierer i
Schramm, 1956).

Acidul nucleic viral prezint infeciozitate dac sunt ndeplinite urmtoarele condiii:
a) moleculele de acizi nucleici extrase i purificate s fie ntregi
b) acidul nucleic s acioneze direct ca ARNm (genomurile ARN cu caten pozitiv) sau transcrierea
lor s se fac cu ajutorul ARN-polimerazelor celulei gazd (genomurile ADN).
Dac virusul este de tip ARN cu caten negativ, transcrierea genomului viral la ARNm se face cu
ajutorul polimerazelor virale de acompaniament care se gsesc n virionii maturi i genomul respectiv n
stare pur este practic lipsit de infeciozitate. n acest caz infecioase sunt numai particulele virale mature.
c) celulele care accept acizii nucleici purificai trebuie s fie sensibile la infecia cu particulele virale
ntregi din care au fost extrai acizii nucleici respectivi.
Genomul de tip ARN dublu catenar caracteristic reovirusurilor nu este infecios, deoarece ARN-ul
dublu catenar nu reprezint o matri normal pentru replicare sau transcripie. Reovirusurile posed o
enzim de tip transcriptaz, cu ajutorul creia se sintetizeaz ARNm folosind ca matri catena negativ
din ARN-ul dublu catenar.
Structura genomului este variat:
o de tip ADN sau de tip ARN
o monocatenar sau dublu catenar
o linear sau circular
o genom segmentat, n aceeai capsid sau capside diferite.
Toate virusurile ARN cu molecul dublu catenar au genomul segmentat, dar virusuri ADN cu
genom segmentat nu se cunosc.
Virusurile cu genom ADN (dezoxiribovirusuri)
a) Genomul ADN monocatenar linear este ntlnit la fagul filamentos M13 i la virusurile din
Familia Parvoviridae (cuprinde cele mai mici virusuri (parvus = cel mai mic), care determin
boli la insecte i obolani), i anume genul Parvovirus i genul Dependovirus (ca de exemplu
cele defective asociate adenovirusurilor).
ADN monocatenar linear
b) Genomul ADN monocatenar circular a fost evideniat la fagul x 174.
ADN monocatenar circular
Moleculele genomice de ADN monocatenar, lineare sau circulare, au o tendin accentuat de a se
plia, formnd bucle dublu catenare n ac de pr, ori de cte ori secvenele de baze permit formarea unui
numr semnificativ de perechi, reunite prin intermediul punilor de hidrogen. Astfel molecula este foarte
compact. Odat cu formarea parial a unei catene duble, molecula se pliaz i este favorizat o
mpachetare optim.
c) Genomul ADN dublu catenar linear, cu secvene terminale repetate identic, care prezint
redundan terminal, ca de exemplu bacteriofagul T7 de la Escherichia coli.
a

c
a b c
| | | | | |
ADN dublu catenar linear
a' b' c'
a' b' c'
d) Genomul ADN dublu catenar linear, cu secvene terminale complementare i n ordine
invers (cazul adenovirusurilor). Aceste molecule pot fi circularizate cu ajutorul a dou
molecule de proteine de circularizare, care se leag covalent la capetele 5 ale ADN i
interacioneaz ntre ele.
a b c
c' b' a'
| | | | | | | |
ADN dublu catenar linear
a' b' c'
c b a
|

Genomul ADN dublu catenar linear, cu redundan terminal i permutare circular


(bacteriofagii din seria T par: T4, T6 etc.)
abcdef
xyzabc
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
ADN dublu catenar linear
a'b'c'd'e' f'
x'y'z'a' b'c'
abcdef
xyzabcdef
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
a'b'c'd'e' f'
x'y'z' a'b'c'd'e' f'
e) Genomul ADN dublu catenar linear cu extremiti monocatenare complementare
(extremiti coezive = cohesive ends), ca de exemplu bacteriofagul de la Escherichia coli,
care prezint la extremiti cte o monocaten format din 12 nucleotide complementare
(cohesive ends left = cos L, cohesive ends right = cos R), ce pot forma legturi de H, ceea ce
duce la circularizarea moleculei cnd fagul este extras din celula bacterian.
cos R
|||||||||||| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | ||||||||||||
ADN dublu catenar linear
cos L
f) Genomul ADN dublu catenar linear cu extremiti nchise (virusul vaccinal din grupul
poxvirusurilor)
ADN dublu catenar linear
g) Genomul ADN dublu catenar circular nchis (virusurile din grupul Papova, din care face
parte i virusul simian SV40, evideniat de Vinograd prin ultracentrifugare n gradient de
clorur de cesiu)

ADN dublu catenar circular


Genomul viral dublu catenar poate fi linear sau circular nchis, cu diferite grade de supraspiralizare
i de condensare.
Virusurile cu genom ARN (ribovirusuri)
a) Genomul ARN monocatenar linear e ntlnit n cazul virusul mozaicului tutunului, cu acidul
nucleic dispus dup o simetrie helical, corespunztor capsidei, dar i n cazul
picornavirusurilor, din care face parte virusul hepatitic A.
ARN monocatenar linear
b) Genomul ARN monocatenar intens pliat, datorit existenei unor regiuni complementare n
cadrul moleculei; forma este de "ac de pr" sau floral, prin mperecherea bazelor
complementare (de exemplu bacteriofagii ARN cu mas molecular mic).

ARN monocatenar
c) Genomul ARN monocatenar circular (de exemplu la virusul encefalo - miocarditei
oarecelui)
ARN monocatenar circular

d) Genomul ARN dublu catenar linear segmentat este caracteristic reovirusurilor, care au
10-12 segmente de ARN.
|

ARN dublu catenar linear segmentat

n cazul virusului gripal exist n natur mai multe variante, n funcie de specia de animal pe care
o poate mbolnvi. Segmentele de ARN monocatenar sunt specifice pentru fiecare variant, determinnd o
mare variabilitate a virusului gripal, cu dobndirea de noi caracteristici n urma unei pseudorecombinri
(ntr-o coinfecie cu variante diferite de virus gripal).
Majoritatea ribovirusurilor au ca genom o molecul de ARN monocatenar de polaritate pozitiv
("+", care funcioneaz ca ARNm i este tradus n proteine fr o transcriere prealabil) sau negativ
("-", care nu este tradus direct, ci este transcris mai nti n ARNm). Numai reovirusurile au genom ARN
dublu catenar.
D. GENETICA VIRAL
Genetica viral studiaz ereditatea, variabilitatea i determinarea caracterelor virale. Studiul
geneticii virale a permis elucidarea unor aspecte moleculare de replicare a acizilor nucleici, ale
transcripiei i traducerii informaiei genetice, a reverstranscrierii.
Dac genotipul viral este reprezentat de totalitatea genelor din genomul viral, fenotipul viral este
reprezentat de totalitatea caracterelor exprimate de un anumit virus:
caracterele morfologice
proprietile antigenice
caracterul de patogenitate
spectrul de gazd
dependena de gazd
caracterele de cultivare in vitro
spectrul electroforetic i cromatografic al proteinelor structurale i al celorlalte proteine codificate de
genomul viral.
Mutaiile pe care le pot suferi virusurile produc la nivel molecular alterri ale secvenelor de
nucleotide, modificnd fenotipul acestora. Mutaiile virusurilor pot fi:
- spontane, care apar n condiii obinuite de mediu; sunt produse de ageni fizici i chimici naturali
(radiaii UV naturale, mutageni chimici ce se gsesc n mod natural n mediu); n general, virusurile
ARN prezint o rat a mutaiilor mai mare dect virusurile ADN, deoarece ribovirusurile nu au
mecanisme de corectare a replicrii, aa cum au ADN polimerazele implicate n replicarea ADN;
virusurile cu gazde mai puine prezint o rat mai sczut a mutaiilor;
- induse, care reprezint intensificarea apariiei proceselor mutaionale de cel puin dou ori,
supunnd suspensiile virale la aciunea unor ageni mutageni, care mresc rata de apariie a
mutaiilor mult peste valorile normale:
- fizici:
 radiaii UV cu lungimea de und de 260nm, care sunt absorbite intens de ADN i produc
hidratarea citozinei (slbind legturile de H cu guanina) i dimerizarea timinei, mpiedicnd
mperecherea normal a bazelor;
 radiaii ionizante (X, , , ), care produc mutaii punctiforme;
- chimici:
 care interacioneaz cu ADN i produc modificri directe; suspensiile virale tratate repetat cu
nitrosoguanidin, dimetilsulfonat, hidroxilamin in vitro sunt apoi inoculate la o gazd
sensibil, unde se replic;

 care sunt analogi ai bazelor purinice (adenin i guanin), ca de exemplu 2-aminopurina i


pirimidinice (citozin, timin, uracil), ca de exemplu 5-bromuracilul, i sunt ncorporai n
ADN-ul viral n timpul replicrii acestuia.
Mutaiile pe care le sufer virusurile pot fi mutaii non-sens atunci cnd n urma substituirii unei
baze azotate un codon normal este nlocuit cu unul stop sau non-sens; unele gazde permit citirea codonilor
non-sens deoarece conin supresori ai mutaiei, dar ntr-o celul gazd normal, nesupresoare virusul
mutant non-sens nu se va putea replica.
i n cazul virusurilor se ntlnesc mutaii nainte i napoi, prin care virusurile trec de la
forma slbatic la cea mutant i respectiv de la cea mutant la cea iniial. Mutanii napoi se numesc
revertrani i sunt responsabili de lipsa de stabilitate a unor mutani selectai.
Tipuri de mutani virali
Prin mutagenez virusurile formeaz o serie de mutani, ale cror caractere sunt modificate stabil
comparativ cu ale virusurilor iniiale, fiind denumite caractere marker. Dac modificrile duc la
pierderea infeciozitii virusurilor i a capacitii lor de replicare n celula gazd, se numesc mutaii
letale. Unele mutaii sunt condiionat letale, caracterul letal se exprim sau nu n funcie de anumite
condiii concrete de mediu. n condiii nepermisive sau restrictive mutaia letal se exprim, pe cnd n
condiii permisive mutaia letal nu se manifest.
Principalele tipuri de mutani virali folosite n studiile de genetic viral sunt:
- mutanii termosensibili (ts = temperature sensitive) sunt condiionat letali pentru markerul de
termosensibilitate;
Virusurile mutante ts calde se pot replica n celulele gazd la temperatura de 37C, dar la
temperaturi mai mari nu mai sunt capabile de replicare; au fost obinute i tulpini virale mutante derivate
din tipul slbatic, care se pot multiplica doar la temperatura suboptimal de 32C (mutani ts reci). Muli
mutani ts au o virulen mai mic dect tulpinile slbatice i sunt utilizai pentru selecia de tulpini folosite
n vaccinoterapie.
- mutanii dependeni de gazde (hd) au drept caracter marker replicarea pe linii celulare ce provin
de la diferite specii;
n timp ce pe linia celular permisiv se pot replica att virusul slbatic, ct i cel mutant, pe linia
celular nepermisiv se replic doar virusul slbatic, deoarece virusul mutant hd nu poate realiza dect o
infecie de tip abortiv a celulei gazd, neformndu-se virioni progeni.
- mutanii spectrului de gazde (hr = host range) sunt cei care au un spectru de gazde diferit de cel
pe care l prezint virusul slbatic, datorit unor modificri ce sunt recunoscute de ctre receptorii
de pe suprafaa membranelor celulare;
- mutanii de rezisten sunt acei mutani virali care rezist la aciunea substanelor antivirale
eficiente n cazul virusurilor slbatice iniiale sau chiar la aciunea anticorpilor monoclonali
specifici;
- mutanii morfologici, frecvent folosii n studiile de genetic viral, determin n culturi de celule
formarea unor plaje de liz celular diferite comparativ cu virusurile slbatice, uor de recunoscut,
n ceea ce privete claritatea plajei, dimensiunile acesteia i conturul ei;
- mutanii cu patogenitate atenuat se pot obine prin cultivarea virusurilor la temperaturi
suboptimale i n culturi de celule provenind de la specii de animale ndeprtate filogenetic de
specia gazd obinuit, prin pasaje multiple; aceti mutani se folosesc pentru obinerea de
vaccinuri vii atenuate, de aceea mutaiile care afecteaz patogenitatea trebuie s fie stabile.
Recombinarea genetic la virusuri
Alturi de mutaii, recombinarea genetic a virusurilor contribuie la variabilitatea genetic a
acestora. Coinfecia unei celule gazd cu dou tipuri diferite de virusuri permite interschimburile genetice
ntre genomurile celor dou virusuri, astfel nct, dup replicare, vor exista cele dou tipuri iniiale de
virioni, dar i recombinani, ale cror genomuri prezint noi combinaii de gene.

Recombinrile genetice ntlnite la virusuri sunt:


recombinri intramoleculare, realizate prin rearanjri de segmente din genomurile parentale,
frecvente n cazul virusurilor ADN, mai puin la cele cu genom ARN nesegmentat;
- recombinri prin reasocieri ale unor segmente genomice, frecvente la virusurile cu genom
segmentat; de exemplu la virusurile gripale rata recombinrii prin reasocieri de segmente genomice
este de aproximativ 50% (Moisa I., 1998).
Complementarea reprezint fenomenul prin care doi mutani virali, derivai din acelai virus
slbatic, cu alterri n regiuni diferite ale genomului, se suplinesc reciproc n timpul replicrii n coinfecia
unei celule gazd, rezultnd virioni maturi n condiii restrictive pentru fiecare mutant n parte. Este o
interaciune fenotipic i nu o recombinare genetic.
-

II. PATOGENEZA INFECIEI VIRALE


Patogenitatea virusurilor este capacitatea lor de a determina apariia unui proces infecios, n
condiii naturale sau de laborator, cu consecine asupra strii de sntate a organismului gazd.
Patogeneza virusurilor se refer la totalitatea mecanismelor declanate de relaiile complexe dintre
virusuri i organismele infectate, care induc starea de boal.
Virulena este capacitatea unei tulpini virale de a infecta organismul gazd, de a se replica i de a
induce leziuni la o gazd sensibil, determinnd starea de boal. Ea exprim cantitativ gradul de
patogenitate a unei anumite tulpini virale asupra unui anumit organism gazd.
Virulena depinde de o serie de factori, care in fie de virus, fie de organismul gazd. Pentru a
determina manifestrile specifice, un virus trebuie s ptrund n interiorul acestuia pe o anumit cale,
ntr-o anumit doz infectant i s poarte gene caracteristice implicate n tropism. n ceea ce privete
gazda, virulena viral depinde de gradul de susceptibilitate, vrst, sex, grupa sangvin, strile
fiziologice, starea de nutriie, intensitatea reaciilor imune ale gazdei.
Susceptibilitatea la infecie a gazdei este determinat de prezena sau absena unor receptori de
virus specifici pe suprafaa celulelor gazdei, receptori de care depind spectrul de gazd al virusului i
tropismul su celular. De exemplu receptorii pentru virusurile gripale sunt glicoproteine ce conin acid
neuraminic. Unele antigene majore de histocompatibilitate de pe suprafaa celulelor int pot influena
susceptibilitatea la infecia viral.
Vrsta organismului gazd influeneaz susceptibilitatea la virus:
- virusul herpetic determin infecii generalizate la nou nscut;
- la copii virusul hepatitic de tip B mrete riscul cronicizrii infeciei;
- adenovirusurile, virusul respirator sinciial determin infecii mai grave la copii dect la aduli;
- adulii pot fi mai sever afectai dect copiii de ctre virusurile: poliomielitic (care determin
neuroparalizii), varicela-zoster (care poate da complicaii pulmonare), urlian (dup pubertate poate
determina orhite).
Sexul organismului gazd poate influena i el virulena viral, unele boli virale fiind mai frecvente
la brbai (mononucleoza produs de virusul Epstein Barr), altele la femei (infecia cu virusul
citomegalic).
Starea de malnutriie favorizeaz virulena viral, pentru c att deficitul imunitar care se poate
instala, ct i absena unor factori nutritivi eseniali pot s duc la evoluii severe ale infeciilor virale.
Strile fiziologice, ca de exemplu sarcina, hipercolesterolemia, pot agrava unele infecii virale, de
exemplu la femeile gravide infecia cu virus hepatitic E este mai sever.
Patogeneza bolilor virale implic mai multe tipuri de interaciuni:
- interaciuni virus - organism gazd
- interaciuni virus - celul gazd.
1. Interaciunile virus - organism gazd
Virusul care a infectat un organism gazd sensibil se replic n diferite esuturi sau celule,
determinnd apariia strii de boal, numit viroz, care este de obicei transmisibil.
Cile de intrare n organismul gazd depind de tipul de virus:
o calea respiratorie
 este caracteristic unui numr mare de virusuri, ca de exemplu: virusuri gripale, virusuri
paragripale, adenovirusuri, rhinovirusuri, virusul respirator sinciial, virusul urlian, virusul
rujeolos;
 prin poarta de intrare respiratorie virusurile intr sub form de aerosoli contaminani,
rspndii n aer de persoana bolnav prin strnut sau tuse;
 de obicei virusurile se replic iniial n celulele epiteliale ale mucoasei respiratorii, dup care
infecia se generalizeaz.

o calea digestiv
 este caracteristic virusurilor lipsite de peplos, care n general rezist la aciunea factorilor
limitativi de la nivelul tractului digestiv (suc gastric foarte acid, proteaze, sruri biliare);
 unele virusuri rmn la nivelul mucoaselor bucal i faringian (virusul Epstein-Barr, virusul
citomegalic), pe cnd altele ajung la nivelul epiteliului intestinal, producnd fie o
simptomatologie local (rotavirusurile, coronavirusurile, unele picornavirusuri), fie una
generalizat (virusurile hepatitice A, E - hepatotrope, virusul poliomielitic - neurotrop);
 n cazul rotavirusurilor i coronavirusurilor, unele enzime proteolitice digestive transform n
factori activi de ataare i replicare viral unii precursori inactivi de la nivelul capsidei virale.
o calea cutanat
 virusurile pot depi bariera cutanat i pot ptrunde n esuturile subiacente dac integritatea
tegumentului este afectat prin:
- mucturi de animale infectate (virusul rabic);
- nepturi de insecte hematofage, care vehiculeaz arbovirusurile (bunyavirusuri,
flavivirusuri);
- rniri superficiale (papilomavirusurile, poxvirusul moluscum contagiosum, care
produce tumori benigne numite negi sau veruci);
- utilizarea de instrumentar nesteril sau produse contaminate n cursul manevrelor
medico-chirurgicale sau stomatologice (virusurile hepatitice B, C, Delta, HIV).
o calea genital i anal
 este caracteristic virusurilor cu transmitere sexual; ele ptrund n organism prin escoriaii
sau leziuni ale epiteliului vaginal, uretral sau anal;
 pe aceast cale ptrund: herpesvirusul de tip 2 (vulvo-vaginite, cervicite), papilomavirusuri
(tumori benigne la nivelul mucoasei vaginale sau carcinoame de col uterin), HIV, virusul
hepatitic B, virusul citomegalic.
o calea conjunctival
 este caracteristic virusurilor ce produc afeciuni oculare (conjunctivite, keratite), de exemplu
unele adenovirusuri, herpesvirusuri sau enterovirusul 70.
Cile de diseminare a virusurilor n organism
Odat ptrunse n organism, unele virusuri se pot replica la poarta de intrare, determinnd un focar
de infecie primar, sau pot ajunge n zonele adiacente prin contiguitate. Alte virusuri se rspndesc n
organism determinnd infecii sistemice, pentru a ajunge la esuturile pentru care au afinitate. Acestea din
urm pot folosi dou ci de diseminare n organism:
o calea sangvin i limfatic
 calea hematogen este utilizat de virusurile care au ptruns direct n circulaia sangvin prin
diferite manevre medico-chirurgicale sau nepturi ale insectelor hematofage;
 ele se replic iniial la poarta de intrare, ajung n ganglionii limfatici regionali i apoi n
canalul toracic, dup care ptrund n circuitul sanguin producnd viremia primar; dup
afectarea sistemului reticulo-endotelial virusul se replic intens, se elibereaz n circulaia
sangvin producnd viremia secundar i apoi disemineaz n organism i se localizeaz
specific, conform tropismului lor;
 diseminarea virusurilor pe cale sangvin se poate face n asociaie cu limfocitele T sau B
(virusul Epstein-Barr, virusul rujeolos), macrofagele (HIV i lentivirusurile), adsorbite de
eritrocite (unele arbovirusuri) sau trombocite (parvovirusuri), ori pot circula libere n plasm
(picornavirusurile).
o calea nervoas
 este caracteristic pentru virusurile care au afinitate pentru sistemul nervos central: virusul
rabic, virusul poliomielitei, arbovirusurile, herpesvirusurile;
 fenomenul de diseminare a virusurilor pe filetele nervoase se numete septinevrit;

 acest tip de diseminare a fost demonstrat prin evidenierea particulelor virale de virus rabic
sau herpesvirus n culturi de celule neuronale;
 viteza de deplasare a virusurilor este destul de mic, de 3mm/zi pentru virusul rabic,
8-15mm/zi pentru virusurile herpetice;
 unele virusuri afecteaz sistemul nervos central dup ce iniial au fost diseminate n organism
prin viremie (enterovirusurile, arbovirusurile, HIV), trecnd bariera hematoencefalic.
Tropismul celular/tisular al virusurilor
Tropismul virusurilor reprezint afinitatea specific a acestora pentru anumite specii de animale,
plante (genotropism), pentru anumite esuturi (histotropism) sau celule (citotropism). Virusurile pot fi
clasificate n funcie de tropismul lor n:
o virusuri dermotrope - cu afinitate pentru piele i mucoase: Poxvirusuri, Papilomavirusuri;
o virusuri neurotrope - cu afinitate pentru celulele SNC: virusul rabic, arbovirusurile;
o virusuri respiratorii - virusurile gripale, paragripale, adenovirusurile;
o virusuri dermo-neurotrope - cu afinitate pentru att pentru piele, ct i pentru SNC:
herpesvirusurile
o virusuri organotrope - cu afinitate pentru anumite organe interne: hepatotrope (virusuri hepatitice
A, B, C, Delta, E), pentru glandele salivare (virusul urlian), afinitate pentru celulele hepatice,
renale, splenice (virusul febrei galbene);
o virusuri pantrope - cu afinitate pentru sistemul reticulo-endotelial: virusul Ebola;
o virusuri enterotrope - cu afinitate pentru intestin: virusul poliomielitic, ECHO, Coxsackie,
rotavirusurile.
Majoritatea virusurilor au o afinitate deosebit pentru esuturile embrionare, de aceea virusuri care
la adult produc mbolnviri uoare pot s produc malformaii la embrioni (efect teratogen) sau infecii
neonatale severe dac se infecteaz transplacentar. Se cunosc mai multe tipuri de virusuri cu efect
teratogen: virusul rubeolos, virusul citomegalic, virusul herpetic de tip 2, virusul urlian, virusul gripal,
virusurile Coxsackie B.
Maladiile virale sunt nsoite de simptome caracteristice, corelate cu localizarea tisular a leziunilor
specifice. Virusurile au afinitate n special pentru celule normale sau patologice care se divid intens, dar i
pentru celule nalt specializate (de exemplu celule nervoase). Aceast afinitate ar fi explicat prin existena
unor receptori specifici pentru virus pe suprafaa celulelor, necesari interaciunii iniiale dintre virus i
celul.
Cile de eliminare a virusurilor din organismul gazd sunt variate; virusurile prsesc gazda n
care s-au multiplicat i ajung la o nou gazd receptiv. Sunt reprezentate de:
 secreii nasofaringiene (virusuri respiratorii);
 secreii oculare, conjunctivale (adenovirusuri);
 secreii i excreii din leziunile tegumentare (virus variolic, herpesvirus);
 saliv (virus urlian);
 materii fecale (enterovirusuri);
 urin (virus citomegalic, virus urlian);
 snge (HIV, arbovirusuri);
 secreii vaginale sau uretrale (herpesvirus tip 2).
Transmiterea virusului la o nou gazd se poate face prin:
- contact direct ntre organismul bolnav i persoana sntoas (contact sexual, srut,
muctur);
- intermediul obiectelor, apei, alimentelor contaminate cu secreii ce conin virusul;
- aer ncrcat cu aerosoli (picturi Pflgge), pulberi sau picturi de saliv contaminate;
- nepturi de insecte hematofage care funcioneaz ca vectori;
- transfuzii de snge, plasm, ser, transplant de organe, folosirea de instrumente sau
materiale contaminate.

Tipuri de infecii virale


Rspunsul imun al organismului gazd influeneaz n egal msur evoluia procesului infecios,
ca i virulena agentului patogen. Cnd replicarea virusului n celulele receptive depete un anumit prag
se instaleaz starea de boal, nsoit de alterri profunde ale substratului celular. Dac nu este atins pragul
critic, organismul poate inactiva i elimina virusul, fr ca viroza s se produc.
n funcie de tipul de virus, virulena sa i interrelaiile virus - gazd, infeciile virale sunt:
- acute
- inaparente
- persistente.
a) Infecia viral acut
n cadrul infeciei virale acute virusul se replic intens, fie la poarta de intrare n organism
producnd infecii localizate, fie n organele int sensibile dup diseminarea lor pe cale sangvin
(viremie) sau nervoas (septinevrit), producnd infecii generalizate sau sistemice. Evoluia virozelor
acute presupune parcurgerea urmtoarelor etape:
de incubaie - intervalul de timp dintre momentul contactului cu virusul infectant i apariia
primelor simptome, care marcheaz debutul bolii; este caracteristic fiecrui virus, de la 1-3
zile (virusuri care dau infecii localizate la poarta de intrare) pn la 2-3 sptmni (n cazul
virusurilor care dau infecii sistemice) sau chiar civa ani n cazul lentivirusurilor (HIV);
de debut - este asociat viremiei primare, n care multiplicarea viral este redus; este
reprezentat de simptome nespecifice generale (febr, astenie, dureri musculare, articulare),
care dispar la cteva zile de la debut;
de stare - corespunde perioadei n care virusul se replic n organele sau esuturile pentru care
are afinitate; se manifest simptomele clinice caracteristice, care depind de organele int
afectate de virus, rspunsul imun al gazdei i terapeutica folosit;
de convalescen - este perioada n care virusul este eliminat din organism, urmnd vindecarea
virozei.
n funcie de severitatea infeciei, viroza se vindec sau se soldeaz cu decesul gazdei, din acest
punct de vedere virozele acute putnd fi:
 autolimitante, ca urmare a interveniei sistemului imun al gazdei;
o prin rspunsul imun umoral, sistemul imun al organismului gazd limiteaz infecia la poarta
de intrare sau mpiedic diseminarea virusurilor prin viremie primar sau secundar;
o anticorpii de tip IgA de la suprafaa mucoaselor limiteaz infecia, iar anticorpii circulani de
tip IgM i IgG neutralizeaz virusurile n timpul viremiei, astfel nct acestea nu mai ajung la
organele int;
o rspunsul imun celular duce la distrugerea i eliminarea celulelor infectate cu virus, realiznd
vindecarea.
 cu evoluie letal, dac virusul este foarte virulent sau rspunsul imun, mai ales de tip celular, este
deficitar. Deficienele congenitale sau dobndite ale imunitii celulare conduc la infecii virale grave,
letale. n unele cazuri viroza are o evoluie fulminant, supraacut, decesul survenind rapid, dup
debutul bolii.
b) Infecia viral inaparent (asimptomatic)
Acest tip de infecie nu este nsoit de simptome clinice evidente, ptrunderea virusului n organism
i chiar replicarea sa fiind urmate de neutralizarea i eliminarea virusului, de obicei printr-un rspuns imun
eficient. Frecvena mbolnvirilor inaparente se pare c este mult mai mare dect cea a mbolnvirilor
simptomatice (Evans, 1976). Pentru descrierea raportului mbolnvirilor a fost introdus termenul de
aisberg, mbolnvirile aparente fiind reprezentate de partea vizibil, superioar, a icebergului.

c) Infecia viral persistent


Corespunde situaiei n care virusul sau genomul su este meninut o perioad lung de timp n
organismul gazd. Unele infecii acute pot conduce la infecii persistente, care se ntlnesc sub trei forme
in vivo: cronice (productive), latente i lente, corelate in vitro cu culturi echilibrate, purttoare i
transformante. Pentru a se produce o infecie persistent, virusul nu trebuie s lizeze celula infectat
(efectul citopatic s fie minim), genomul viral trebuie s fie meninut timp ndelungat n celula gazd i s
fie evitat eliminarea virusului de ctre efectorii sistemului imun al organismului (Mihescu, 2000). Pentru
unele virusuri, persistena nseamn etape succesive de infecie productiv i latent (de exemplu virusul
hepatitei B infecteaz productiv hepatocitele i latent limfocitele).
c1) Infecia viral cronic (productiv) este o infecie persistent, n care producerea de virus este
ndelungat i continu, chiar dac uneori simptomele nu sunt evidente. Multiplicarea permanent a
virusului determin adesea revenirea formei acute a bolii sau o form atenuat a acesteia. Cronicizarea
unei infecii virale este determinat de dou aspecte ale relaiei virus - celul gazd:
 celula infectat nu este recunoscut de sistemul imun al gazdei; infecia este nsoit de un
slab rspuns imun, o stare parial de toleran imunologic; n cazul virusului hepatitic de
tip B integrarea ADN-ului viral n genomul celulei gazd i existena unor antigene
lipoproteice comune ale membranei celulare i ale peplosului viral determin cronicizarea
bolii i un rspuns imun umoral redus.
 virusul slbatic sau mutanii aprui in vivo nu sunt citopatogeni; in vitro n culturi de celule
se produc infecii cronice echilibrate cu astfel de virusuri: fiecare celul din cultur este
infectat cu virus necitopatogen, se elibereaz constant mici cantiti de virus, dar celulele nu
sunt lizate i metabolismul lor nu este influenat;
c2) Infecia viral latent este o infecie persistent, ondulant, n care perioadele acute nsoite de
replicare viral alterneaz cu perioadele de laten, n care virusul localizat n anumite celule nu se replic.
Multiplicarea virusului nu este permanent, ci la anumite intervale de timp. Infeciile latente sunt produse
n special de virusuri ADN.
Este caracteristic virusurilor din familia Herpesviridae. Virusurile herpetice 1 i 2 se replic iniial
la poarta de intrare, dup care sunt diseminate prin nervii senzitivi n ganglionii senzitivi regionali, unde
rmn n stare de laten. Periodic au loc recidive n care ADN-ul viral se replic, sintetizndu-se virioni
maturi, infecioi, care se propag centrifug pe cale nervoas, determinnd leziuni la locul iniial de
replicare. Reactivarea virusurilor se produce datorit unor factori foarte variai:
- stri de stres, expunere la soare, vnt, febr
- infecii bacteriene
- anumite alimente sau medicamente
- perturbri metabolice sau hormonale.
Virusul Epstein - Barr i are sediul latenei n celulele epiteliale ale orofaringelui i n limfocitele
B cu receptori specifici, iar virusul citomegalic n macrofage i limfocitele TH i TS.
Modelul in vitro al infeciei latente este reprezentat de culturile celulare purttoare, n care
replicarea productiv a unui virus este limitat de faptul c majoritatea celulelor din cultur sunt
nesusceptibile sau sunt protejate de inhibitori din mediul de cultur, iar numrul de celule receptive din
cultur e mic.
c3) Infecia viral lent este o infecie persistent degenerativ, cu o lung faz de incubaie (ani,
zeci de ani), cu evoluie progresiv lent, cu final letal. i corespunde in vitro cultura de celule
transformat malign, cu genomul viral de obicei integrat n genomul tuturor celulelor din cultur. Astfel de
infecii sunt caracteristice virusurilor din subfamilia Lentivirinae, din care face parte virusul
imunodeficienei umane (HIV). Virusul se multiplic iniial la poarta de intrare n celulele fagocitare i n
celulele Langerhans (celule derivate din mduva osoas pe linie mieloid), disemineaz apoi n ganglionii
limfatici i n snge (viremie primar, ce poate fi nsoit de semne clinice). Dup intervenia
mecanismelor celulare imunitare, viremia primar scade rapid, iar genomul viral se integreaz stabil n

ADN-ul celular (celule ce exprim antigene CMH II). Producerea unei infecii cronice sau latente depinde
de interaciunea virusului cu celula gazd (limfocit T4+); infecia cronic este condiionat de incapacitatea
mecanismelor de aprare imun de a elimina virusul (Mihescu, 2000).
Virusul rujeolos poate s aib o evoluie spre panencefalit subacut sclerozant la 10 ani de la
faza acut a mbolnvirii. Din categoria infeciilor lente fac parte i cele produse de prioni.
Mecanismele persistenei virale
Producerea persistenei virale se refer la meninerea virusului sau mcar a genomului su n celula
infectat i poate fi explicat prin mecanisme virale sau legate de gazd. Mecanismele virale pot
presupune:
- persistena genomului care poate avea loc n celulele care se divid, provirusul se replicndu-se
odat cu diviziunea celulei gazd (de exemplu n cazul retravirusurilor), dar i n celulele care nu se divid
(neuronii); n acestea, genomul viral persist sub form fizic independent, ca o molecul circular (de
exemplu n cazul herpesvirusurilor).
- evitarea mecanismelor de aprare imun, prin:
- exprimarea limitat a informaiei genetice a virusurilor, astfel nct proteinele virale de multe
ori nu sunt sintetizate, deci nici exprimate la suprafaa celulelor infectate;
- infectarea de ctre virusuri a celulelor cu statut special din punct de vedere imun, de exemplu
a celor din SNC, ctre care este limitat traficul de limfocite; n acest fel, celulele infectate nu
sunt recunoscute de ctre limfocite;
- prezena unor variaii antigenice virale, care apar rapid prin evenimente mutaionale
frecvente, sub presiunea selectiv a aprrii specifice;
- fenomenul de toleran imunitar, explicat prin absena unor limfocite Tc reactive fa de
virusul respectiv.
2. Tipuri de relaii virus celul gazd
Interaciunea dintre virus i celula gazd, concretizat prin replicarea virusurilor, corespunde unui
tip unic de parazitism, parazitismul absolut i a putut fi studiat mai bine odat cu folosirea culturilor de
celule. Afectarea organismului la nivelul unor grupuri de celule, mpreun cu o scdere a aprrii imune a
organismului, duce la manifestrile clinice ale bolii virale.
Virusurile prezint un citotropism pronunat, avnd afinitate pentru anumite tipuri de celule ale
organismului, datorit interaciunii specifice dintre unele componente de suprafa ale virusului i
receptorii corespunztori de pe membrana celular. Infectarea celulei de ctre un virus duce la formarea
unui complex celul - virus, cu proprieti diferite de ale celor dou componente iniiale, determinate de
interaciunea celor dou genomuri. Acest complex are dou posibiliti de evoluie:
- evoluia independent
- evoluia dependent (de tip integrativ).
A. Evoluia (starea) independent a celor dou uniti care formeaz complexul corespunde situaiei
n care virusul nu are genomul integrat n cel al celulei, se replic independent i ntr-un ritm
propriu, determinnd manifestrile specifice infeciei productive. Aceast evoluie poate fi:
a. de tip citocid (atunci cnd se ajunge la liza celulei gazd),
b. de tip echilibrat (cnd interaciunea virus - celul gazd are o evoluie moderat).
n infecia productiv virusul infecteaz celule permisive, preia controlul activitilor celulare
deviindu-le n sensul sintezei de constitueni virali, informaia genetic viral se exprim integral, se
formeaz noi particule virale progene, care dup liza celulelor vor fi eliminate n mediu (sistem
independent citocid, infecie litic productiv). Celulele permisive aparin de regul speciilor pe care
virusul le infecteaz n natur, caracterul permisiv fiind controlat de gene din genomul celular i de nivelul
de difereniere celular. Celulele semipermisive permit replicarea viral cu o rat mai mic, iar
degradarea i liza celulei apar ntr-un interval de timp mai mare dect n cazul celulelor permisive.
Celulele embrionare sunt mai permisive. Celulele nepermisive provin de obicei de la animale care n mod

obinuit nu sunt gazde pentru virusul infectant. Ele nu permit replicarea normal a virusului i nu se
ajunge la formare de virioni progeni, infecia viral fiind abortiv.
Sistemul independent echilibrat caracterizeaz infeciile persistente, n care virusurile ptrunse n
celul se replic autonom, cu o rat sczut, fr a inhiba biosintezele celulare, pentru o lung durat de
timp. Persistena viral se produce i in vitro, nu numai in vivo, virusul replicndu-se n celula gazd fr a
determina modificri metabolice profunde i fr a liza celula. n culturile de celule sunt ntlnite dou
tipuri de infecii persistente:
- infeciile echilibrate cronice - toate celulele din cultur sunt infectate cu virus necitocid, produs
continuu, uneori mai intens, dar celulele rmn viabile, continu s aib metabolism i s se divid,
virusul fiind transmis celulelor fiice; in vitro nu pot fi eliminate cu anticorpi neutralizani;
- starea de purttor se datoreaz infeciei cu un virus citocid, care se multiplic ntr-un numr mic de
celule permisive din cultur, restul celulelor fiind nepermisive; anticorpii neutralizani adugai n
cultur pot vindeca starea de purttor.
B. Evoluia dependent (interaciunea de tip integrativ) presupune integrarea genomului viral n
genomul celulei gazd (ca provirus) i persist n celula infectat, precum i n celulele fiice.
Aceast relaie de tip integrativ este caracteristic virusurilor oncogene care infecteaz celulele
animale sensibile.
Provirusul prezint aceeai informaie genetic viral, dar aceasta nu se exprim, deoarece genele
virale sunt blocate de un represor codificat de virus. Printr-un fenomen de inducie litic represorul poate fi
inactivat i se iniiaz replicarea viral, urmat de liza celulei i eliberarea de virioni progeni.
n cazul virusurilor oncogene, integrarea parial sau total a genomului viral determin modificri
ale funciilor celulelor normale, care in vitro reprezint transformarea malign a acestora, iar in vivo
carcinogeneza (formarea de tumori maligne). Uneori celulele transformate malign produc virioni progeni
(transformare productiv), alteori acest proces nu este detectabil.
n cazul retravirusurilor neoncogene interaciunea de tip integrativ nu duce la transformare
malign, ci este mecanismul molecular obligatoriu al multiplicrii virale.
3. Interaciuni intervirale
n cazul infeciei unei celule gazd cu mai multe tulpini virale (cu genom similar, dar nu identic),
ntre acestea pot avea loc interaciuni genomice sau negenomice.
A. Interaciunile genomice pot fi:
a. recombinri intramoleculare (interschimb de segmente genomice ntre dou genomuri, cu
obinerea unui genom recombinat);
b. recombinri prin reasortare genomic la virusurile ARN cu genom segmentat;
c. reactivarea prin multiplicitate (multiplicity reactivation) - a fost observat la virusuri ARN
cu genom segmentat i la virusuri cu ADN dublu catenar, care au fost inactivate cu U.V.;
prin inocularea acestor virusuri la gazde sensibile la concentraii mari de inocul s-a
remarcat apariia de virioni maturi infecioi, probabil datorit faptului c mutaiile letale
erau la diferii virioni la alte gene;
d. reactivarea ncruciat (cross reactivation) - reprezint reactivarea unui virus inactivat
care a fost inoculat simultan cu un virus activ nrudit, dar cu genotip diferit; prin
recombinare pot rezulta virioni maturi care dein i gene de la virusul inactivat.
B. Interaciunile negenomice se stabilesc tot n cazul infeciilor mixte, dar ele nu sunt ereditare:
a. complementaritatea ntre virusuri nrudite - de exemplu prin coinfecia unei celule gazd
cu doi mutani ts ce au provenit din acelai virus de tip slbatic;
b. complementaritatea ntre virusuri asociate nenrudite;
c. amestecul fenotipic - apare n cazul coinfeciilor celulelor gazd cu dou virusuri nrudite
dar cu markeri genetici diferii; virionii progeni rezultai prezint genomul de la un singur
virus parental, dar capsida are un amestec de caractere fenotipice;

d. mascarea fenotipic - este interaciunea dintre dou virusuri nrudite care infecteaz
simultan aceeai celul gazd, n care capsida unuia dintre virusuri capteaz genomul
celuilalt;
e. autointerferena viral - este un fenomen ntlnit n cazul inoculrii unor concentraii mari
de virus, unde apar particule virale defective, care au pierdut mai ales segmentele mari de
ARN; probabil ARN polimerazele celulare nu satisfac cerinele ridicate de replicare a
genomului viral, iar segmentele mai mari, sunt mai puin transcrise. Fenomenul a fost
observat n cazul pasajelor virusului gripal pe ou embrionate de gin (Von Magnus,
1952).
Patologia celulelor infectate cu virusuri
n interaciunea dintre virus i celula gazd, cu ct sensibilitatea celulei este mai mare, cu att
modificrile produse de virus sunt mai mari.
n celulele permisive, multiplicarea virusului duce deseori la alterri i moarte celular, dar uneori
celula rmne viabil i modificrile produse de virus sunt mai puin ample. n celulele nepermisive
dezoxiribovirusurile nu se pot multiplica, dar determin cu o frecven redus transformarea malign a
celulelor.
Modificrile pe care virusurile le produc n culturile de celule, de natur biochimic sau
morfologic, reprezint efectul citopatogen (ECP); ele pot servi la stabilirea tipului de virus infectant,
deoarece au o anumit specificitate. Efectele citopatogene sunt de mai multe feluri.
A. Efectul citotoxic exercitat de virusuri este cauza morii celulare consecutiv lezrii morfologice a
celulelor infectate cu cantiti mari de virus, ca urmare a toxicitii proteinelor capsidale. Moartea
celulelor survine nainte de formarea virionilor progeni.
Ex.: Adenovirusurile inoculate masiv n culturi celulare determin rotunjirea i desprinderea rapid
(n 24 de ore) a celulelor, efectul toxic fiind determinat de proteina pentonic din capsida acestor virusuri.

a)

b)

Culturi de celule HeLa (din carcinom de col uterin uman) colorate Giemsa infectate cu adenovirus
(Erica Suchman and Carol Blair, Colorado State UniversityFort Collins)
a) la 5 zile: rotunjirea celulelor i gruparea lor
b) la 7 zile: celule grupate n ciorchine i mari zone de liz celular

B. Efectul citocid (citolitic) se remarc n cazul virusurilor cu replicare productiv n celulele


permisive, ce determin leziuni morfologice i metabolice care conduc la moartea celulei. Celulele
se desprind de suport i prezint modificri morfologice evidente de tipul: rotunjire, vacuolizare,
ratatinare (zbrcire i deshidratare), liz. Identificarea i diferenierea celulelor omorte poate fi
realizat cu ajutorul coloranilor vitali (rou neutru), pentru care nu au afinitate dect celulele
viabile.
C. Efectul sinciial este exercitat asupra celulelor din culturi de ctre virusuri cu nveli extern, care
au proteine structurale de fuziune (herpesvirusuri, retrovirusuri, paramixovirusuri). Celulele au
tendina de a fuziona, formnd sinciii.
Ex.: virusul Sendai din Familia Paramyxoviridae prezint n nveliul viral o protein
polifuncional Fo, implicat n fuziunea virusului cu membrana celulei gazd, n hemoliz i n fuziunea a
dou celule (de acelai tip sau de tipuri diferite). Datorit acestor proprieti, virusul Sendai este folosit n
tehnici de inginerie genetic pentru obinerea de hibridoame productoare de anticorpi monoclonali.

Cnd virusul este inactivat prin iradiere devine neinfecios, nu se mai replic, dar i pstreaz
capacitatea de a induce fuziunea celular dac este inoculat n doze mari. Fuziunea care are loc n absena
replicrii virale este numit fuziune indus din exterior.
Cnd celulele sunt infectate cu doze mici de virus, acesta se replic, iar proteinele virale de fuziune
ajunse la suprafaa celulei gazd ca s participe la asamblarea virionilor progeni determin fuziunea celulei
cu celulele nvecinate i deci formarea de sinciii (fuziune indus din interior).
D. Efectul citochinetic este urmarea interaciunii de tip integrativ dintre virus i celula gazd. Celulele
transformate malign n urma integrrii genomului virusurilor oncogene au ritmul de diviziune
modificat, prolifereaz haotic prin pierderea inhibiiei de contact.
E. Efectul incluziogen este reprezentat de acumularea de corpi de incluziune n celulele gazd n care
s-au replicat virusurile.
Incluziile virale pot fi localizate:
- n nucleu, acidofile, ca n cazul virusurilor ADN cu replicare intranuclear (herpesvirusuri
corpusculii Cowdry tip A, virusuri papiloma umane, virusul varicela-zoster, poliovirusuri corpusculii Cowdry tip B);
- n nucleu, bazofile (adenovirusuri corpusculii Cowdry tip B, citomegalovirusuri corpusculii
ochi de bufni)
- n citoplasm, eozinofile (poxvirusuri corspusculii Guarnieri, virusul urlian, virusul rabic
corpusculii Negri, moluscum contagiosum corpusculii Henderson-Paterson)
- intranuclear i intracitoplasmatic (virusul rujeolos)
- perinuclear (reovirusuri).
Incluziile sunt unice sau multiple, au form rotund, oval, piriform, neregulat, cu dimensiuni
ntre 1-30m. Incluziile reprezint sediul sintezei componentelor structurale virale (poxvirusuri,
reovirusuri) sau al asamblrii particulelor virale mature (papovavirusuri).
Unele incluzii virale sunt utile n diagnosticul infeciilor virale:
a) corpusculii Babe - Negri din infeciile cu virus rabic - intracitoplasmatice, acidofile, n
neuronii cornului lui Ammon
b) corpii Guarnieri - incluzii intracitoplasmatice acidofile, n infeciile cu virus variolic
c) incluzii intranucleare n varicel
d) corpusculii Cowdry - incluzii intranucleare din infeciile cu virusuri herpetice.
Unele incluzii virale sunt utile n diagnosticul infeciilor virale:
e) corpusculii Babe - Negri din infeciile cu virus rabic - intracitoplasmatice, acidofile, n
neuronii cornului lui Ammon
f) corpii Guarnieri - incluzii intracitoplasmatice acidofile, n infeciile cu virus variolic;
acetia sunt incluzii intracitoplasmatice mari, provenite din corpii Paschen (particule de
virus vaccinal sau variolic observate ntr-un numr relativ mare de celule scuamoase ale
pielii), sub aciunea virusurilor variolic sau vaccinal;
g) incluzii intranucleare n varicel
h) corpusculii Cowdry - incluzii intranucleare din infeciile cu virusuri herpetice; sunt
corpi eozinofili alctuii din acid nucleic i proteine, ntlnii n celule infectate cu
virusuri herpetice, virus varicela-zoster sau citomegalovirus; sunt de dou tipuri: A (n
infecii herpetice) i B (n infecii cu poliovirus).

(http://pathology.mc.duke.edu/neuropath/CNSlecture2/negri.jpg)
(http://ictvdb.bio-mirror.cn/Images/Murphy/negri.htm)

(http://www.vaccineinformation.org/photos/rabicdc001.jpg)
(http://visualsunlimited.photoshelter.com/image/I0000OTWQx71asO0)

Corpusculii Babe Negri

(http://dermpath.tripod.com/dpqz27contpg2.html)

Corpii Guarnieri

(http://quizlet.com/11770751/neuro-path-3a-flash-cards/)

Corpii Cowdry
a) Encefalit cu virus herpes simplex: neuronii infectai prezint
incluzii mici, intranucleare, eozinofile
b) Virus herpes simplex: incluzii intranucleare Cowdry de tip A

Mecanismele implicate n producerea efectului citopatic, ca rezultat al infectrii celulelor de ctre


virusuri, sunt:
- modificri metabolice (ale metabolismului ADN, ARN i proteinelor), determinnd inhibarea
biosintezelor de compui macromoleculari ai celulei:
- blocarea ARNm celular n nucleu (adenovirusuri)
- blocarea asocierii ARNm celular cu ribosomii (herpesvirusuri, poxvirusuri,
myxovirusuri);
- inhibarea replicrii ADN celular i maturrii ARN premesager n ARNm celular;
- pierderea funciilor normale ale membranei celulare;
- modificri ale poziiei organitelor celulare, ca urmare a apariiei incluziilor virale;
- modificri ale citoscheletului (n special a microfilamentelor de actin; matricea nuclear se
dezorganizeaz, iar cromatina se redistribuie);
- modificarea permeabilitii i a rezistenei membranei lizosomale, urmat de alterri morfologice
progresive, care culmineaz cu liza celulei gazd.

III. PARTICULARITI ALE UNOR FAMILII DE VIRUSURI


Dup clasificarea Baltimore, virusurile fac parte din urmtoarele categorii:
I: virusuri cu genom ADN dublu catenar (Adenovirusuri, Herpesvirusuri, Poxvirusuri)
II: virusuri cu genom ADN monocatenar de sens pozitiv (Parvovirusuri)
III: virusuri cu genom ARN dublu catenar (Reovirusuri)
IV: virusuri cu genom ARN monocatenar de sens pozitiv (Picornavirusuri, Togavirusuri)
V: virusuri cu genom ARN monocatenar de sens negativ (Orthomyxovirusuri, Rhabdovirusuri)
VI: virusuri cu genom ARN monocatenar de sens pozitiv cu reverstranscriptaz (cu un ADN
intermediar) (Retravirusuri)
VII: virusuri cu genom ADN dublu catenar cu reverstranscriptaz (Hepadnavirusuri)

Dup tipul i organizarea genomului viral, precum i n funcie de simetria capsomerelor capsidale,
virusurile pot aparine urmtoarelor categorii:
1. VIRUSURI CU GENOM ARN
A. VIRUSURI CU SIMETRIE HELICAL, NVELITE
a) Virusuri cu genom ARN monocatenar de polaritate negativ
FAMILIA ORTHOMYXOVIRIDAE
Familia Orthomyxoviridae cuprinde agenii etiologici ai gripei. Virusurile gripale se mpart, din
punct de vedere antigenic, n trei genuri: A, B i C. Diferenele antigenice se manifest la nivelul nucleoproteinei
(NP) asociate cu ARN-ul.
Virusurile gripale de tip A cuprind specii patogene pentru om, animale domestice (cai, porci) sau
slbatice (foci, nurci), psri (rae, curcani, gini etc.), fiind responsabile de apariia periodic a unor
epidemii sau pandemii de grip. Virusurile gripale de tip B determin la om gripa sporadic, la intervale de
timp de aproximativ cinci ani. Virusurile gripale de tip A i B au genomul alctuit din opt segmente de ARN,
iar virusurile gripale de tip C au genomul cu apte segmente.
Izolate de la gazda infectat, orthomyxoviridele sunt virusuri de form izodiametric, cu diametrul de
100 - 120nm, iar dup pasaje repetate pe ou embrionate de gin virionii apar de form alungit, avnd
simetrie helical cu nucleocapsid flexibil.
n alctuirea virionilor intr nveliul extern, pe suprafaa cruia se gsesc dou feluri de spicule, de
hemaglutinin (HA) i neuraminidaz (NA) i corpul central al virionului, format din proteina matriceal (M),
n care se gsesc cele 7 - 8 segmente de ARN monocatenar linear, nucleoproteina (NP) i trei proteine mari cu
funcie polimerazic, PB1, PB2, PB3.
Studiile de microscopie electronic au demonstrat c regiunea central a virionului este un helix unitar,
rezultat probabil prin nlnuirea lax a segmentelor genomice, care se desprind cu uurin. Moleculele de ARN
sunt monocatenare lineare, dar se pliaz i formeaz o structur n ac de pr, cu puni intramoleculare n
zonele de complementaritate.
Hemaglutininele (HA) reprezint 25% din proteinele virale; n numr de 500 - 1000/virion, n funcie
de tulpina de virus, sunt n raport de 5:1 cu neuraminidazele; sunt glicoproteine de form alungit, cu
aspectul unui trimer de molecule proteice HA; au mare variabilitate antigenic i au capacitatea de a se lega de
receptorii de suprafa ai hematiilor i ai celulelor epiteliului respirator, realiznd faza de adsorbie a virionului.
Neuraminidaza (NA) este un spicul cu form de buton sau ciuperc. Neuraminidazele sunt n numr
de 50 - 200/virion, n funcie de tulpina de virus i sunt formate dintr-o poriune paralelipipedic alctuit din
4 uniti i o tij ce se termin cu o poriune hidrofob inclus n peplos. Neuraminidazele sunt dispuse
neuniform pe suprafaa peplosului. Se pare c rolul neuraminidazei este acela de traversare a stratului de mucus
de la suprafaa epiteliului respirator i de desializare a glicoproteinelor din peplos, astfel nct se previne
agregarea virionilor i se favorizeaz eliberarea lor din celul. Neuraminidaza este important nu pentru
antigenitatea virusului, ci pentru asamblarea i eliberarea virionilor, deoarece ariile membranare unde se
formeaz nveliul viral conin doar glicoproteine desializate. Neuraminidaza are rol i n digestia enzimatic a
receptorilor celulari de virus, facilitnd internalizarea virusului, fiind implicat n eluia virusurilor de pe
hematii.

Nucleoproteina viral (NP) se acumuleaz n timpul infeciei n nucleu. Are rol structural, dar i
n transcrierea i replicarea genomului viral. Are specificitate antigenic de tip A, B i C.
Proteina M tapeteaz interiorul nveliului viral. Ambele variante antigenice ale proteinei M, M1 i
M2, sunt codificate de segmentul 7, prin schimbarea cadrului de citire. Proteina M1 este asociat cu
ribonucleoproteina prin interaciuni electrostatice, avnd rol n nmugurirea virusurilor ARN cu genom de
polaritate negativ. Proteina M2 funcioneaz ca un canal ionic prin care protonii sunt transportai n
interiorul nucleocapsidei.
Proteinele cu rol polimerazic (PB1, PB2, PB3) catalizeaz replicarea ARN-ului genomic i se
acumuleaz n nucleul celulei.
Proteinele nestructurale (NS1 i NS2) sunt codificate de segmentul 8 genomic la virusurile A i B, iar la
virusurile de tip C de ctre segmentul genomic 7. Se sintetizeaz n celul n timpul replicrii virale, sunt
localizate n nucleul celulei gazd, dar nu intr n structura virionilor maturi. Proteina NS1 formeaz incluzii
paracristaline prin acumulare timpurie masiv n nucleul celulei, iar proteina NS2 se sintetizeaz tardiv.

(http://micro.magnet.fsu.edu/cells/viruses/influenzavirus.html)
(http://www.ifpma.org/resources/influenza-vaccines/the-influenza-virus/the-influenza-virus.html)
n procesul de transcriere a informaiei genetice virale, ase dintre cele 8 segmente codific
sinteza cte unui polipeptid, iar dou segmente codific sinteza a cte dou polipeptide.
Catenele de ARN de polaritate negativ sunt transcrise de o ARN-polimeraz ARN dependent
viral, incapabil de a iniia sinteza ARNm i de a determina metilarea moleculei la captul 5, drept
pentru care replicarea virusurilor gripale are o etap nuclear. Sinteza ARNm necesit primeri de 10-13
nucleotide (deoarece polimerazele virale doar alungesc o caten preexistent), n generarea crora
intervine proteina nestructural NS1, care are rol i de endonucleaz. Ea cliveaz mesagerii celulari la
captul 5, dar se asociaz i de cozile poli-A, inhibnd transportul ARNm celulari n citoplasm, primerii
devenind disponibili pentru sinteza de ARN viral. Primele copii de ARN viral sunt traduse n polimeraze,
nucleoprotein i proteina nestructural NS1, care sunt transportate n nucleu i devin disponibile replicrii
genomului viral.
n timpul replicrii, catena de ARN de polaritate negativ este copiat n catene antigenomice de
polaritate pozitiv. Unele dintre acestea, neprelucrate dup transcriere, rmn n nucleu i joac rol de
matri pentru sinteza catenelor genomice de polaritate negativ. Altele sunt prelucrate de enzimele
celulare prin bonetare la captul 5 i prin legarea secvenei poli-A la captul 3, jucnd rol de ARNm.
Ulterior, ARNm este transportat n citoplasm i tradus la proteine virale. Unele proteine (HA, NA, M)
migreaz ctre membrana celular, altele (polimerazele, NP, NS) sunt transportate n nucleu, unde se
asociaz cu segmentele genomice de polaritate negativ.

Nucleocapsida se asambleaz n nucleu, iar nveliul viral la nivelul membranei plasmatice.


nmugurirea virusului este iniiat de asocierea nucleocapsidei cu cteva spicule glicoproteice inserate n
membran. Complexul stimuleaz legarea mai multor spicule i se produce deformarea membranei i
nglobarea complet a nucleocapsidei. nmugurirea este coordonat n special de proteina M1, apoi
particula viral se desprinde prin formarea unui por al mugurelui i clivarea membranei. Are loc
reasortarea proteinelor, cele celulare fiind nlocuite cu proteine virale.
Apariia unor noi variante genetice i antigenice de virus gripal se datoreaz fenomenului numit
shift genetic. Este un proces de variaie genetic ampl, caracteristic virusurilor gripale de tip A,
segmentele genomice reasortate provenind de la tulpini de virus cu specificitate distinct de gazd. Au fost
identificate 14 variante antigenice ale HA i 9 variante NA, dintre care doar H1, H2, H3, N1 i N2 sunt
infecioase pentru om i animale. Tipurile antigenice prezint subtipuri (tipul A prezint subtipurile A0 varianta izolat iniial, A1, A2 i A3), fiecare apariie a unui nou subtip corespunde propagrii unei
pandemii. Driftul genetic este un proces de variaie antigenic limitat a subtipurilor, de obicei sezonier,
n care se pstreaz relaiile serologice ncruciate unidirecionale cu varianta antigenic precedent
(anticorpii specifici noii variante au efect neutralizant asupra variantei anterioare, dar invers nu e valabil).

(http://www.microbiologybytes.com/blog/category/influenza/page/3/)

(http://gallus.reactome.org/cgi-bin/eventbrowser?DB=test_gallus_reactome_release_2_myisam&ID=168255&)

FAMILIA PARAMYXOVIRIDAE
n familia PARAMYXOVIRIDAE (ordinul Mononegavirales care cuprinde virusurile ARN
monocatenare cu polaritate negativ) sunt ncadrate virusuri sferice sau filamentoase nvelite, cu simetrie
helical, care produc afeciuni ale omului, maimuelor, bovinelor, ovinelor, caprinelor, caninelor, psrilor
i murine. Au genom unitar, constituit dintr-o molecul de ARN monocatenar de polaritate negativ.
Cuprinde dou subfamilii i urmtoarele genuri:
Subfamilia Paramyxovirinae
o Avulavirus cu virusul Newcastle
o Henipavirus
o Morbillivirus cu virusul rujeolos, agentul etiologic al rujeolei
o Respirovirus cu virusul Sendai, virusurile paragripale 1 i 3
o Rubulavirus cu virusurile paragripale 2 i 4, virusul paragripal simian, virusul urlian,
agentul etiologic al parotiditei epidemice (oreionului);
Subfamilia Pneumovirinae
o Pneumovirus cu specia tip virusul respirator sinciial, care determin pneumonii i bronite
la sugari i copii mici;
o Metapneumovirus cu metapneumovirusul uman, pneumovirusul avian
n alctuirea paramyxovirusurilor intr nucleocapsida, cu genomul ARN monocatenar i proteine
asociate (nucleoproteina - NP sau proteina N) i peplosul. Au diametrul de 150-200nm; unele particule
sferice au chiar 400nm diametru, iar formele filamentoase provin din cele sferice la care nveliul viral este
rupt i nucleocapsida despiralizat.
Nucleocapsida este flexibil, cu simetrie helical; capsomerele interacioneaz lax, astfel nct
nucleocapsida se mpacheteaz n peplos. ARN-ul este strns mpachetat n interiorul capsidei.
Peplosul prezint glicoproteine de nveli la unii din reprezentanii familiei, care faciliteaz
ataarea virusurilor de celulele sensibile. Hemaglutinina poate avea i activitate neuraminidazic, de aceea
este numit hemaglutinin-neuraminidaz (HN).
Nucleoproteina (NP, proteina N) are un rol esenial n asamblarea virionilor.
Proteina de fuziune (F) de la nivelul peplosului faciliteaz fuziunea acestuia cu suprafaa
lipoproteic a membranei celulei sensibile n colaborare cu hemaglutinin - neuraminidaza. Ea este
sintetizat sub forma precursorului F0, dar ulterior este clivat n dou subuniti, F1 i F2, care rmn
legate prin puni bisulfitice. Dup fuziunea cu nveliul celular, nucleocapsida viral este eliberat n
citoplasm.
Proteina matriceal (M) tapeteaz nveliul viral i are rol n recunoaterea specific ntre proteina
N i glicoproteinele de nveli n procesul de asamblare viral.

Virusul rujeolos
(http://www.microbiologybytes.com/blog/2012/02/21/the-nucleocapsid-protein-of-measles-virus-blocks-host-interferon-response/;
http://www.turbosquid.com/FullPreview/Index.cfm/ID/535412)

Replicarea paramyxoviridelor are loc n ntregime n citoplasm, deoarece posed ARN


polimeraze dependente de ARN ce catalizeaz transcrierea i replicarea genomului viral: proteinele L
(Large) i P, cu funcie polimerazic. Acestea iniiaz sinteza ARNm fr a necesita primeri exogeni,
boneteaz captul 5 i poliadenileaz captul 3 al ARNm monocistronici, care sunt molecule mai scurte
dect ARN genomic. Transcrierea ncepe de la extremitatea 3, se oprete i se reiniiaz la fiecare
jonciune genic; reiniierea este mai puin eficient, de aceea numrul moleculelor de ARNm transcrise
dintr-un cistron este proporional cu poziia sa fa de captul 3 al genomului.
Virusurile subfamiliei Paramyxovirinae diversific proteinele codificate fr a mri dimensiunea
genomului, fie prin schimbarea cadrului de citire, fie prin adugarea nucleotidelor fr matri n timpul
transcrierii.
Pentru replicare este necesar ca ARN genomic de polaritate negativ s serveasc la sinteza de
ARN antigenomic, acesta jucnd rol de ARNm i de matri pentru sinteza genomurilor progene.
Mecanismul trecerii de la transcrierea n ARNm la sinteza replicativ a ARN antigenomic depinde de
cantitatea de protein N, care are rol esenial n replicarea genomului i asamblarea virionilor. Cnd
cantitatea de protein N este crescut, polimeraza ignor semnalele reglatoare ale transcrierii i
sintetizeaz catene antigenomice.
Asamblarea nucleocapsidelor are loc n dou etape: asocierea nucleoproteinei cu ARN genomic,
formnd nucleoproteina helical, urmat de asocierea proteinelor auxiliare ale nucleocapsidei. Proteinele
virale de nveli sunt glicozilate la nivelul aparatului Golgi i reticulului endoplasmic, apoi nlocuiesc
proteinele celulare inserate n stratul lipidic al membranei, la situsurile de nmugurire. Ulterior proteina M
se agreg prin interaciuni necovalente pe suprafaa intern a nveliului nascent, iar nucleocapsida
recunoate proteina M la situsurile respective.
FAMILIA RHABDOVIRIDAE
Familia Rhabdoviridae cuprinde peste 100 virusuri patogene pentru om, mamifere, reptile, peti,
crustacee, plante, dintre care 70 sunt patogene pentru vertebrate.
Virusurile acestei familii au un spectru larg de gazd, unele dintre ele infectnd att plantele, ct i
artropodele care le transmit. Artropodele reprezint rezervorul originar, din care s-au adaptat virusurile
infecioase pentru mamifere i plante.
Rhabdoviridele aparin la dou genuri:
- genul Lyssavirus, cu specia tip virusul rabic, agentul etiologic al turbrii, transmis la mamifere
prin muctura unui animal bolnav;
- genul Vesiculovirus, cu specia tip virusul stomatitei veziculare (VSV), agentul etiologic al unor
epizootii ale bovinelor i ecvinelor, accidental transmis la om prin neptur de nar. Acest
virus este prototipul Familiei Rhabdoviridae.
Virusurile acestei familii au form de glon, cu excepia unor virusuri fitopatogene, care au aspect
baciliform; au diametrul de 50-100nm, iar lungimea de 100-430nm. Uneori apar virioni defectivi, cu
dimensiuni mai mici, care dein doar 20-50% din genom.
n alctuirea lor intr nucleocapsida i un nveli extern.
Genomul este nesegmentat, de tip ARN monocatenar cu polaritate negativ, asociat cu o
nucleoprotein i cu alte dou proteine minore din punct de vedere cantitativ, fosfoproteina i ARN
polimeraza L.
Peplosul are lipidele derivate din membrana celulei gazd, prezint o glicoprotein integrat cu rol
de hemaglutinin, precum i o protein matriceal (M) la interior.
Replicarea rhabdovirusurilor este similar cu cea a paramixovirusurilor. Receptorul celular pentru
virusul rabic este receptorul nicotin acetilcolin, dup care virusul este internalizat n vezicula de
endocitoz i ribonucleoproteina viral este eliberat n citoplasm.
Genomul viral este transcris secvenial n ARNm, aciune catalizat de ARN polimeraza viral,
rezultnd copii monocistronice de ARNm, ce codific proteinele virale (fiecare molecul de ARNm conine
informaia necesar sintezei unei proteine). Activitatea de replicaz a polimerazei virale duce la sinteza unei

catene antigenomice cu polaritate pozitiv, care servete ca matri pentru sinteza catenelor genomice cu
polaritate negativ. Nucleoproteina complexeaz att catenele genomice, ct i cele antigenomice, pentru a
le proteja de aciunea nucleazei. Comutarea de la transcriere la replicare este condiionat de cantitatea de
nucleoprotein (o cantitate mare de nucleoprotein duce la copierea continu a matriei i sinteza catenelor
genomice).
Proteinele virale se sintetizeaz n citoplasm, la nivelul ribozomilor liberi, cu excepia
glicoproteinei de nveli, care se sintetizeaz la nivelul ribozomilor asociai reticulului endoplasmic rugos.
Nucleoproteina i genomul viral formeaz complexul ribonucleoproteic, care se condenseaz i
spiralizeaz. Virusurile sunt eliminate prin nmugurirea celulei, la nivelul situsurilor membranare n care
s-au inclavat spiculele glicoproteice.
Majoritatea rhabdovirusurilor sunt eliminate prin nmugurirea membranei plasmatice, dar unele
dintre ele se asambleaz prin nmugurire la nivelul membranelor intracitoplasmatice (citorhabdovirusurile
la nivelul membranelor reticulului endoplasmic, iar nucleorhabdovirusurile la nivelul membranei nucleare)
i se acumuleaz n spaiul perinuclear.
Virusul rabic are form de glon, cu diametru 70-80 nm i lungimea de 240nm. Din punct de
vedere antigenic se deosebesc 4 serotipuri: 1 - serotipul clasic, de strad, ntlnit n Europa, 2 - Lagos, 3 Mokola, ntlnite n Africa, 4 - serotipul Duvenhagen. Primele 3 dau imunitate ncruciat. Virusul rezist
3-5 ore la pH-ul acidului gastric, pn la 45 zile n cadavrele n putrefacie, rezist la congelri decongelri. n stare liofilizat poate rezista 4 ani, lumina solar l distruge n dou sptmni.
Virusul rabic se transmite prin mucturi, zgrieturi, cu inoculare de saliv infectant, riscul de
producere a bolii fiind cu att mai mare cu ct zonele afectate sunt mai inervate sau mai apropiate de
sistemul nervos central.
Prima multiplicare se realizeaz n celulele musculare striate locale, iar a doua multiplicare a
virusului se realizeaz n placa neuromotorie. Dup fixarea pe terminaiile nervoase, se deplaseaz centripet
ctre sistemul nervos central, iar de acolo se poate deplasa centrifug, diseminnd n organe (septinevrita).
Septinevrita este responsabil de paralizii, iar multiplicarea n sistemul nervos central este
rspunztoare de hiperestezii i de manifestrile de agresivitate. n neuronii din creier, mduva spinrii i
ganglionii nervoi ai animalelor moarte de turbare se ntlnesc corpusculii Babe Negri (incluzii oxifile
caracteristice).
Turbarea (rabia) este o boal letal, pentru care nu se cunoate nc nici un tratament. Se folosesc
vaccinuri inactivate, puternic imunogene, obinute de exemplu pe culturi celulare pulmonare de maimu
sau pe ou embrionate. Se pot utiliza i seruri imune preparate din plasma donatorilor hiperimuni.

Replicarea virusului rabic (http://pathmicro.med.sc.edu/virol/rabies.htm)

Virusul rabic i corpusculii Babe Negri din esut cerebral


1, 4. (http://bhavanajagat.com/tag/negri-bodies/)
2, 3. (http://pathmicro.med.sc.edu/virol/rabies.htm)

B. VIRUSURI CU SIMETRIE ICOSAEDRIC, NUDE SAU NVELITE


a) Virusuri cu genom ARN monocatenar de polaritate pozitiv
FAMILIA PICORNAVIRIDAE
Familia Picornaviridae cuprinde virusuri mici (25-30nm), lipsite de peplos, cu o capsid cu
simetrie icosaedric i genom de tip ARN. Au tropism pentru diferite esuturi, provocnd la om i animale
(bovine, maimue, porcine, murine) o serie de afeciuni digestive, respiratorii i ale sistemului nervos.
Capsida are 60 capsomere identice, dispuse dup o simetrie riguroas, care conin 5 protomeri;
fiecare protomer este format din cte o copie a celor 4 proteine, VP1, VP2, VP3 i VP4. Aceste proteine sunt
sintetizate sub forma unei singure poliproteine, care apoi este clivat de proteaze celulare, chiar n timpul
traducerii.
Genomul este o molecul de ARN monocatenar cu polaritate pozitiv, care funcioneaz direct ca
ARNm, cu o lungime de 2500nm. Molecula de ARN este poliadenilat la captul 3 cu o secven de
lungime variabil, iar la captul 5 este legat covalent o protein genomic (proteina genomic a
virionului = VPg), cu rol n iniierea sintezei ARN (jucnd rol de primer) i n mpachetarea ARN n
virion.
Fam. Picornaviridae include 9 genuri, dintre care doar 5 infecteaz omul:
a) genul Enterovirus, cu virusuri care afecteaz tractul intestinal, sunt rezistente la pH acid i la
aciunea detergenilor:
virusul poliomielitic tip 1,2.3:
virusul Coxsackie grup A (serotipurile 1 - 22 i 24) i grup B (serotipurile 1 - 6):
virusul ECHO (serotipurile 1 - 9, 11 - 27, 29 - 34)
alte enterovirusuri (serotipurile 68 - 71);
b) genul Rhinovirus cuprinde peste 115 serotipuri de virusuri, care sunt agenii etiologici ai
"guturaiului" sau rcelii comune, localizndu-se la nivelul nasofaringelui; sunt sensibile la pH acid
i se transmit prin aerosoli;
c) genul Hepatovirus cuprinde virusul hepatitei A (enterovirusul 72);
d) genul Parechovirus - cuprinde echovirusurile 22 i 23, care produc infecii ale tractului digestiv i
respirator; ocazional, acestea produc encefalite i paralizii;
e) genul Kobuvirus cuprinde virusuri ce produc gastroenterite.
Celelalte 4 genuri infecteaz diverse specii animale:
f) genul Cardiovirus cu specia tip virusul encefalomiocardite murine;
g) genul Aphthovirus cuprinde virusul febrei aftoase, deosebit de contagioas la animalele domestice
i slbatice (bovine, porcine, ovine, caprine);
h) genul Erbovirus, cu o singur specie, virusul rinitei echine B, cu dou serotipuri;
i) genul Teschovirus, care cuprinde virusuri ce produc polioencefalomielite porcine.

Virusul poliomielitic prezint 3 serotipuri, majoritatea infeciilor fiind produse de serotipul 1.


Infecia cu acest virus se face pe cale fecal-oral, receptorul celular fiind reprezentat de proteina CD155;
se fixeaz numai pe celule de om i de maimu. Replicarea iniial a virusului se face la nivelul esutului
limfoid faringian i intestinal, urmat de viremia primar i de invazia sistemului nervos central. Infecia
neuronal este litic i determin paralizii, fiind afectai n special motoneuronii din coanele anterioare ale
mduvei spinrii, ajungndu-se la paralizia muchilor striai. Virusul nu se replic la nivel muscular.
Poliomielita se poate manifesta sub forma infeciilor inaparente sau cu simptome minore (de tip
pseudo-gripal, date de viremia primar) ori majore (cu paralizii flasce).
In vitro, poliovirusul poate infecta i alte tipuri de celule (de exemplu, celule renale de maimu,
linii celulare HeLa), diferite de cele ale epiteliului intestinal i de motoneuronii medulari. In vitro suprafaa
celulelor respective este modificat din cauza condiiilor de cultivare, fapt care duce la demascarea unor
receptori celulari normali, care erau n stare ascuns.

(http://www.learnodes.com/2007/09/03/polio-virion-released-into-the-gut/)
(https://eee.uci.edu/clients/bjbecker/PlaguesandPeople/lecture17.html)

Virusurile Coxsackie au ca receptor celular o protein de suprafa, cu dou domenii similare cu


ale imunoglobulinelor, care leag i adenovirusurile. Multe dintre infeciile produse de aceste virusuri nu
sunt precis diagnosticate. De obicei virusul Coxsackie A este asociat cu exantemul (virusul Coxsackie
A16), herpangin (ulceraii dureroase la nivelul limbii i vlului palatin, nsoite de febr i dificulti la
nghiire), iar virusul Coxsackie B cu miocardite, afeciuni respiratorii sau chiar paralizii. Unele infecii
cauzate de aceste virusuri seamn cu cele cauzate de rinovirusuri. Pot produce meningite aseptice,
Echovirusurile (enteric cytopathic human orphan) infecteaz n special copiii, producnd febra
acut i deseori meningite aseptice, precum i simptome comune cu ale altor boli bacteriene sau virale.
Rhinovirusurile infecteaz numai omul, datorit specificitii receptorului reprezentat de proteina
ICAM-1, de pe suprafaa celulelor epiteliale (dar i a altor celule), receptor exprimat n special n
condiiile existenei unei inflamaii. Simptomele sunt cele ale unei rceli.
Multe boli febrile nespecifice sunt cauzate de enterovirusuri, n special la copiii mici. Virusurile
se pot transmite chiar transplacentar, formele cele mai grave fiind la nou-nscuii ale cror mame au
contractat boala cu puin timp naintea naterii copilului i nu au avut timp s sintetizeze anticorpi
specifici, pe care s i transmit copilului.
Virusul hepatitei A (HAV) este un virus nenvelit, cu capsid icosaedric de 28nm diametru i un
genom ARN monocatenar de sens pozitiv, prezent sub forma unui singur serotip. Receptorul celular de pe
hepatocite prezint un domeniu extracelular aminoterminal similar regiunii bogate n cistein a
imunoglobulinelor. Replicarea virusului se desfoar n citoplasm.

Virionii picornavirusurilor sunt adsorbii pe suprafaa celulelor int prin intermediul receptorilor
de virus, sunt internalizai prin viropexie, iar genomul ARN este eliberat n citoplasma celulei gazd.
Ulterior ARNm este tradus n poliproteina clivat n P1, P2 i P3.
Replicarea ARN se realizeaz prin intermediul unei structuri denumit intermediar de replicare.
Catena de ARN de polaritate pozitiv servete ca matri pentru sinteza unei catene de polaritate negativ.
n molecula dublu catenar, catena de ARN cu polaritate negativ servete ca matri pentru sinteza
ARNm i ARN genomic (aparatul enzimatic fiind acelai), n proporii de aproximativ 50%. n
transcrierea informaiei genetice nu sunt implicate funcii nucleare.
Asamblarea picornavirusurilor se face spontan, n funcie de concentraia local a componentelor
virale: poliproteina P1 clivat n VP0, VP1, VP3 se asociaz n ansambluri pentamerice i formeaz
capsomere, care se asociaz cte 12 ntr-o precapsid; ARN genomic se asociaz la exteriorul acesteia.
Clivarea final are ca rezultat formarea proteinelor VP1, VP2, VP3 i VP4, iar genomul se internalizeaz.
Studiul replicrii picornavirusurilor a relevat existena unei ARN polimeraze dependente de ARN,
a unei forme dublu catenare de ARN n timpul replicrii, precum i sinteza proteinelor virale sub forma
unei singure poliproteine mari iniiale, care va fi apoi clivat enzimatic.

VHA
(http://www.ibibiobase.com/projects/hepatitis/hepatitis-aA.htm)
(http://home.caregroup.org/departments/pathology/lab_manual/addinfo/Hepatitis/havstructure.html)
FAMILIA TOGAVIRIDAE
Familia Togaviridae cuprinde virusuri sferice nvelite, cu dimensiuni de 49-70 nm, capsida cu
simetrie icosaedric i genom ARN monocatenar cu polaritate pozitiv. Peplosul prezint spicule
glicoproteice. mpreun cu Familia Flaviviridae i Familia Bunyaviridae, Familia Togaviridae fcea parte
din grupul arbovirusurilor (arthropode borne viruses).
Cuprinde dou genuri:
- genul Rubivirus, cu o singur specie, virusul rubeolos, agentul rubeolei umane (pojarul german); rubeola
seamn cu rujeola (aspectul leziunilor de tip erupie maculo-papular fiind aproximativ la fel) i omul
este singurul rezervor de virus; se transmite pe cale aerogen; ftul poate fi infectat de la mama bolnav
i poate prezenta la natere diferite malformaii;
- genul Alphavirus (fostele arbovirusuri A) cuprinde 26 de membri, cu numeroase tulpini virale i
spectru larg de gazde, infectnd accidental omul; sunt arbovirusuri, care se transmit prin nari,
producnd de exemplu: encefalita ecvin de est i de vest, encefalita venezuelean.
Replicarea ARN de polaritate pozitiv se face prin sinteza unei catene de polaritate negativ, care
servete ca matri pentru sinteza ARNm i ARN genomic, ce va fi mpachetat n capsid. Virusul
rubeolos se asambleaz n complexul Golgi, n timp ce alfavirusurile se gsesc n citoplasm i se
matureaz aproape simultan cu nmugurirea celulei, dup care achiziioneaz peplosul i sunt eliminai.

(http://pathmicro.med.sc.edu/mhunt/rubella.htm)
FAMILIA FLAVIVIRIDAE
Familia Flaviviridae (fostele arbovirusuri B) cuprinde virusuri sferice nvelite (40-50 nm), cu
capsid cu simetrie icosaedric i genom ARN monocatenar de polaritate pozitiv, care seamn cu
picornavirusurile, cu excepia prezenei peplosului. Din aceast familie fac parte virusuri care sunt
transmise de artropode (virusul encefalitei West-Nile transmis de nari, virusul febrei Denga, virusul
febrei galbene transmis tot de nari, virusul encefalitelor transmise de cpue), dar i virusul hepatitei C.

virusul febrei galbene

(http://eee.uci.edu/clients/bjbecker/PlaguesandPeople/lecture13.html)
Virusul hepatitei C (HCV) este agentul etiologic al hepatitei non-A, non-B. Poliproteina
sintetizat este clivat att de proteaze celulare, ct i de proteaze virale. Proteina iniial conine o
secven semnal, care rezult n translatarea ribozomilor ataai reticulului endoplasmic. Exist 6
genotipuri majore ale acestui virus i peste 50 de subtipuri, cu o distribuie geografic diferit. Diversele
subtipuri rspund diferit la tratamentul cu interferoni, chiar dac sunt foarte puine diferene n severitatea
sau evoluia bolii. Genotipurile nu se schimb n timpul infeciei, iar cunoaterea acestora este util n
recomandarea tratamentului adecvat.
Virusul hepatitei C are form sferic i dimensiuni ntre 40 i 60 nm diametru. Genomul su este
de tip ARN monocatenar de polaritate pozitiv, nconjurat de o capsid proteic i peplos bogat n lipide.
n structura capsidei intr proteina C (core), iar peplosul conine dou glicoproteine virale, E1 i E2, care
se asambleaz sub forma unui heterodimer necovalent, prin intermediul domeniilor transmembranare. Se
pare c asocierea glicoproteinelor din peplos ar avea rol n ataarea virusul hepatitic C de receptorii de la
suprafaa celulei gazd.

Virusul hepatitei C are drept receptor celular antigenul CD81 i o lipoprotein cu densitate mic
(LDL) de pe hepatocite. De asemenea, se pare c se poate lega i de glicozaminoglicani. Rezervorul de
infecie este reprezentat de oameni i cimpanzei (la cimpanzei a fost identificat pentru prima dat i a fost
mult vreme cauza principal a hepatitelor post-transfuzionale).
Infectarea cu VHC se poate realiza ca o consecin a folosirii intravenoase a drogurilor, a
transfuziilor de snge sau a transplantului de organe, n urma expunerii la snge sau alte fluide biologice n
anumite profesii, ca infecie nosocomial. Este posibil transmiterea virusului de la mama infectat la ft
n timpul naterii (aproximativ 6% dintre nou-nscuii mamelor infectate cu VHC sunt i ei infectai,
procentul crescnd la 17% dac mama este infectat i cu HIV). Transmiterea virusului se face i prin
contact sexual cu o persoan infectat (transmiterea de la brbat la femeie este mai eficient dect de la
brbat la brbat).
Odat ptruns n circuitul sanguin, virusul ajunge la hepatocite, pe care nu le distruge dup infecie,
determinnd ns o infecie persistent. Simptomele hepatitei C se datoreaz efectului sistemului imun
asupra hepatocitelor infectate, rspunsul limfocitelor Tc fiind foarte important. Dup trei sptmni de la
infecie se poate detecta viremia (timp de cteva luni), simptomele de tip durere abdominal, dureri
articulare, grea, pierderea apetitului, urina nchis la culoare fiind prezente dup aproximativ ase
sptmni de la infecie. n faza acut a hepatitei virusul poate fi detectat cteva luni. n majoritatea
cazurilor persistena infeciei virale hepatice duce la o hepatit cronic activ, care poate dezvolta o ciroz
sau o insuficien hepatic. Simptomele din aceast perioad pot fi extra-hepatice (porfiria cutanea tarda,
neuropatia, glomerulonefrita crioglobulinemic), ajungnd s dezvolte o boal autoimun. Patogenitatea
virusului poate fi favorizat de consumul de alcool, co-infecia cu HIV sau hepatita cronic de tip B, fiind
crescut la populaia peste 40 de ani i la brbai. Exist rar situaii n care pacienii cu infecie cronic
dezvolt carcinom hepatocelular.
Diagnosticul infeciilor cu HCV este pus pe baza simptomelor, a enzimelor hepatice, a anticorpilor
anti HCV (prin teste ELISA, PCR). Titrul anticorpilor anti HCV crete dup dou luni de la infectare i
sunt detectabili civa ani la pacientul cu hepatit cronic.
Tratamentul infeciilor cu HCV se face cu interferon i substane antivirale (ribavirin, dup un
anume algoritm). Tipul de tratament difer n funcie de genotipul virusului.
n prezent, singurele posibiliti de prevenire a apariiei de noi cazuri de hepatit cronic C sunt:
monitorizarea analizelor sangvine, manevrarea cu atenie a produselor de snge, informarea populaiei
asupra factorilor de risc i asupra modului de transmitere a virusului.

1. Structura VHC (http://www.usg.edu/ehs/training/pathogens/10.phtml)


2. Genomul VHC (commons.wikimedia.org)

Replicarea VHC
(http://www.rockefeller.edu/pubinfo/hepc.jpg)
(http://www.nature.com/nrmicro/journal/v5/n6/fig_tab/nrmicro1645_F2.html)
FAMILIA CALICIVIRIDAE
Virusurile din aceast familie seamn cu cele din familia Picornaviridae, fiind virusuri nenvelite,
de form sferic, cu diametrul de 27 - 34 nm, cu genom ARN monocatenar de polaritate pozitiv. Din
aceast familie face parte virusul hepatitic E.
Virusul hepatitic E se replic n hepatocit i are transmitere fecal-oral (ca i virusul hepatitei A).
Replicarea iniial se face n intestin, dup care virusul ajunge n hepatocite pe care le lizeaz,
producndu-se o inflamaie datorit rspunsului imun al gazdei. Nu se cunoate foarte exact ciclul de
replicare viral i nu au fost semnalate situaii de cronicizare. Evoluia infeciei este benign cu excepia
celei survenite la femeile gravide.

Virusul hepatitei E (http://en.wikipedia.org/wiki/File:Hepatitis_E_virus.jpg)

FAMILIA RETRAVIRIDAE
Familia Retraviridae cuprinde virusuri patogene pentru om i animale, cu o structur uniform,
care manifest o gam variat de interaciuni cu organismul gazd, de la afeciuni uoare, pn la
imunodeficien i oncogenez. Virusurile acestei familii au diametrul de 70 - 130 nm, sunt sferice,
nvelite, cu o capsid cu simetrie icosaedric i genom de tip ARN monocatenar cu polaritate pozitiv,
prezent n dou copii identice. Aceste virusuri conin o enzim numit reverstranscriptaz, prezent n
virion sub forma a 10 copii, care catalizeaz reaciile de sintez a ADN-ului pe o matri de ARN (este o
ADN polimeraz dependent de ARN). Aceast enzim este codificat de gena pol, care are mai muli
produi de sintez:
- reverstranscriptaza, care copiaz ARN n ADN complementar;
- integraza, care determin integrarea genomului viral n genomul gazdei;
- o ribonucleaz;
- o proteaz, care este inta noilor medicamente anti-virale.
Familia Retraviridae se mparte n trei subfamilii, pe baza caracterelor de patogenitate:
a) Subfamilia Oncovirinae include agenii etiologici ai unor boli maligne (leucemii, limfoame,
sarcoame, carcinoame) ale omului, mamiferelor, psrilor i reptilelor. Oncornavirusurile (virusuri
oncogene cu genom ARN) au fost mprite n patru tipuri: A, B, C i D, n funcie de caracterele
morfologice ale particulelor virale:
La mamifere, principalele Oncornavirusuri sunt:
- Oncovirus tip A - Cisternavirus A (oareci, cobai, hamsteri)
- Oncovirus tip B - virusul tumorii mamare murine (MMTV)
- Oncovirus tip C:
- virusul leucemiei murine Moloney;
- virusul sarcomului murin (MSV);
- virusul leucemiei obolanului;
- virusul leucemiei hamsterilor;
- virusul leucemiei felinelor;
- virusul leucemiei bovinelor;
- virusul sarcoamelor primatelor;
- virusurile HTLV 1 i HTLV 2 (Human T-cell Lymphotropic Virus), care produc leucemii i
limfoame de tip T umane;
- Oncovirus tip D - virusul Masson-Pfizer la maimue.
La psri, din categoria oncovirusurilor de tip D fac parte:
- virusul sarcomului Rous la gini,
- virusul leucemiei aviare.
La reptile cel mai cunoscut este virusul Viperin.
b) Subfamilia Lentivirinae cuprinde virusuri exogene ce produc infecii pulmonare sau
neurologice lente, cu o perioad lung de incubaie, majoritatea letale, fr s fie implicate n mod direct n
oncogenez. Include HIV-1 i HIV-2 (Human Immunodeficiency Viruses), agenii etiologici ai sindromului
de imunodeficien dobndit (SIDA). Dintre Lentivirusurile animale pot fi amintite:
- virusul Visna/Maedi (virusul encefalitei/pneumoniei oilor);
- virusul imunodeficienei i encefalopatiei caprine (cAEV);
- virusul imunodeficienei pisicilor;
- virusul imunodeficienei bovinelor (BIV);
- virusul imunodeficienei simiene (SIV);
- virusul anemiei infecioase a cailor.

c) Subfamilia Spumavirinae, cu genul tip Spumavirus, cuprinde virusuri izolate de la primate


(inclusiv oameni), pisici, hamsteri, lei de mare. n culturi celulare aceste virusuri induc sinciii i
vacuolizri, determinnd un aspect spumos al celulelor. Se consider c produc neuroinfecii persistente
la maimue i cimpanzei, la om nc nu s-au dovedit a fi patogene.
Dintre oncornavirusuri cel mai bine studiat este virusul sarcomului Rous (VSR), descoperit n
1911 de ctre Peyton Rous, ca agent etiologic viral care induce formarea de tumori la pui.
Oncornavirusurile sunt virusuri nvelite, cu un peplos fosfolipidic ce prezint spiculi glicoproteici.
Nucleocapsida are aproximativ 390 capsomere, dispuse icosaedric; n interiorul ei se gsesc genomul i
3-4 proteine cu rol n replicare. Genomul este strns mpachetat, de tip ARN monocatenar, coninnd n
zona central proteina esenial a oncornavirusurilor, reverstranscriptaza.

Structura HIV 1
(http://www.stanford.edu/~rabriggs/hiv/hiv.html )
(http://trialx.com/curebyte/2011/05/29/what-does-hiv-1-look-like-are-you-also-searching-for-hiv-1-clinical-trials/)

Genomul retravirusurilor este diferit de al tuturor celorlalte virusuri, n primul rnd prin faptul c
este diploid (sunt dou copii de ARN), este replicat i prelucrat de aparatul de transcriere i replicare a
ARNm celular, este asociat cu ARN specific celulei, care are rolul de a iniia replicarea. Cele dou
molecule de ARN sunt identice, formeaz un ansamblu de 70S i au aceeai secven de baze.
Diploidia retraviridelor duce la o nalt frecven de recombinare, care permite o reparare eficient
a leziunilor fizice ale genomului. Ca i ARNm celular, genomul viral este modificat prin metilri interne la
nivelul unor resturi de adenin i are la captul 3 o secven de resturi poli-A.
Genomul prezint n regiunile terminale secvene necodificatoare,cu rol de semnal pentru sinteza
ADN sau ARN, iar n regiunile interne au funcii de codificare a proteinelor. Regiunea codificatoare
cuprinde gene aezate n aceeai ordine la toate retravirusurile:
- regiunea gag - codific antigenul specific de grup; ARNm este transcris din secvena gag, tradus la o
poliprotein precursoare, care apoi este clivat n 3-5 proteine capsidale; secvena gag codific: proteina
matriceal (MA), proteina capsidal (CA) i proteina asociat ARN genomic (NC, de dimensiuni mici, cu
rol probabil n asamblarea virionului);
- regiunea pro - codific proteaza care cliveaz poliproteinele gag i pol;
- regiunea pol - codific reverstranscriptaza (RT) i integraza (IN, care catalizeaz integrarea
genomului viral n genomul gazdei); att regiunea pro, ct i regiunea pol sunt coninute n proteina gag,
nu sunt gene distincte;
- regiunea env - codific o glicoprotein precursoare de nveli, clivat n glicoproteina SU (surface)
i glicoproteina TM (transmembrane), dar care rmn asociate prin legturi necovalente; proteina SU
recunoate receptorul celular, iar proteina TM ancoreaz de nveliul viral proteina SU-receptor; este
tradus dintr-un ARN subgenomic nndit.

Proteinele virale ale retravirusurilor ndeplinesc roluri structurale i enzimatice. Cele enzimatice
sunt reprezentate de:
- reverstranscriptaza - produs de sintez al genei pol, este o ADN polimeraz ARN dependent;
- integraza - enzim esenial n ciclul de replicare a virusului; mutantele care nu sintetizeaz
aceast enzim nu sunt capabile de multiplicare;
- proteaza - catalizeaz clivarea poliproteinei pentru formarea proteinelor gag i pol;
- proteinele de nveli SU i TM, glicozilate.
Ciclul de multiplicare a retravirusurilor oncogene, care are loc n celula gazd, cuprinde dou
etape distincte, separate de faza de integrare. n prima etap intervin enzimele virionului, iar n a doua faz
intervin enzimele celulare.
Virionii se ataeaz de receptorii celulari de pe suprafaa celulelor sensibile prin proteina SU; dup
fuzionarea nveliului viral cu membrana celular, nucleocapsida este eliberat n citoplasm i are loc
transcrierea invers a ARN genomic n ADN dublu catenar sub aciunea reverstranscriptazei.
Reverstranscriptaza duce la sinteza unei molecule de ADN complementare, care folosete ca
matri nu numai o caten de ARN, ci i una de ADN; aceeai enzim joac rol de ribonucleaz,
degradnd catena de ARN din hibridul ARN-ADN, lsnd un oligonucleotid ca primer pentru sinteza celei
de a doua catene de ADN. Activitatea reverstranscriptazei este dependent de un primer (care este un ARN
iniiator), sinteza fcndu-se n direcia 5-3.
Sinteza ADN linear are loc n primele 4-8 ore de la infecie, n citoplasm, dup care este
transportat n nucleu, iar capetele moleculei sunt reunite sub aciunea unei ligaze de natur celular,
formnd o molecul de ADN dublu catenar, circular, nchis covalent.
Integrarea genomului viral n ADN-ul celulei gazd este un proces specific retrovirusurilor.
Integraza de natur viral taie ambele catene ale ADN viral la situsuri specifice, dar i ADN cromozomial
celular. Ligazele celulare leag i repar capetele celor dou molecule de ADN. Dup integrare, ADN viral
devine provirus. Integrarea este specific din punct de vedere al asocierii secvenelor de ADN viral cu
ADN-ul celular, dar n privina situsului cromozomial specificitatea integrrii nu mai este att de nalt.
Integrarea ADN viral este stabil.
Replicarea genomului viral integrat se face prin transcrierea ADN viral integrat, sub aciunea
ARN polimerazei II celulare. Provirusul este transcris ntr-o singur molecul de ARN, prelucrarea n
ARNm sau ARN genomic fiind realizat tot de enzimele celulare.

(pathmicro.med.sc.edu)

O parte din copiile ARN sunt prelucrate prin adenilare i rezult ARN genomic, iar celelalte copii
sunt clivate i nndite pentru a forma ARNm care va tradus la proteinele virale gag, pro, pol, env. Primele
trei se sintetizeaz la nivelul polisomilor liberi, iar glicoproteina env la nivelul ribozomilor asociai
reticulului endoplasmic. Proteina este glicozilat la nivelul cisternelor aparatului Golgi, unde este i clivat
sub aciunea unei enzime celulare n unitile SU i TM, care se inser la suprafaa membranei celulare.
Asamblarea virionilor i nmugurirea au loc aproape simultan. Cea mai mare parte a proteinei gag,
neclivat, va face parte din structura virionului. Proteinele centrale se asociaz cu ARN genomic i
formeaz nucleocapsida.
Multiplicarea virusurilor oncogene nu duce la distrugerea celulelor, ci doar la transformarea lor
malign. Celulele gazd se divid i produc virus progen simultan, ntr-o transformare productiv. Prin
intermediul provirusului, starea malign i producerea de virus sunt transmise generaiilor urmtoare de
celule, integrarea ADN viral stnd la baza permanenei infeciei cu retravirusuri.

Virusul sarcomului Rous


(http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/R/RSV.html)

Ciclul de replicare a retravirusurilor


(pathmicro.med.sc.edu)
Virusul imunodeficienei umane dobndite (HIV)
Acest virus face parte din subfamilia Lentivirinae i are un tropism deosebit de pronunat fa de
limfocitele Th, dar poate infecta i macrofage, celule NK, eozinofile, celule dendritice. Receptorul pentru
virus este reprezentat de moleculele CD4, dar virusurile pot ptrunde n celule i prin medierea altor
receptori, receptorul pentru FC i receptorul pentru CD3.
Se multiplic n mononuclearele periferice i n limfocitele T4+, pe care le lizeaz, deoarece
infecteaz neproductiv celulele sensibile. Pentru infecia productiv, virusurile sunt dependente de factori
celulari. Infecia cu HIV a limfocitelor T mature, dar neangajate este abortiv, dar celulele T de memorie
sunt permisive i infecia este productiv. Limfocitele B sunt foarte sensibile dac au fost infectate cu
virusul Epstein - Barr.
Exist dou variante antigenice ale virusului, HIV 1 i HIV 2. HIV 1 produce imunodeficiene
severe, iar HIV 2 infecii cu efecte patologice din sfera imunitar. Se pare c exist i linii ale acestui virus
care nu produc mbolnviri.
Ciclul de multiplicare a HIV se face dup mecanismul comun retravirusurilor. Moleculele de
ARNm timpurii au greutate molecular mic i codific proteine cu rol de reglare a transcrierii i posttranscrierii. Expresia genelor de reglare este dependent de starea fiziologic a celulei gazd.

Odat ce ADN-ul proviral este integrat n ADN-ul celulei gazd, el nu mai poate fi eliminat sau
distrus dect prin distrugerea celulei. Celulele infectate pot elibera virionii prin nmugurire sau dup liza
celulei, ducnd la infectarea altor celule. Anticorpii anti HIV nu apar organismul mpotriva infeciei, iar
infectarea viral poate persista foarte mult, chiar n prezena unui titru nalt al anticorpilor.
Virusul se multiplic iniial la poarta de intrare, dup care disemineaz n ganglionii limfatici
locali i, trecnd n snge, disemineaz sistemic, producnd viremia primar. Genomul viral se integreaz
stabil n ADN-ul celular, determinnd o infecie fie cronic i productiv, fie latent. Infecia cronic
productiv este determinat de incapacitatea efectorilor rspunsului imun de a elimina virusul. Dac celula
gazd este incapabil s transcrie ARNm viral din provirusul integrat, virusul determin o infecie latent.
Persistena infeciei deriv i din diseminarea virusului prin contact intercelular, fiind inaccesibil
anticorpilor. Variaiile pe care le induc mutaiile reverstranscriptazei duc la noi variante antigenice, astfel
nct rspunsul imun este ineficient.

(www.aidscongress.net)

b) Virusuri cu genom ARN dublu catenar


FAMILIA REOVIRIDAE
Familia Reoviridae cuprinde virusuri care produc infecii la animale vertebrate, nevertebrate i la
plante. La om determin infecii respiratorii, digestive sau sistemice. Sunt virusuri sferice (60 - 80 nm diametru),
cu simetrie icosaedric i capsid multistratificat (capsid intern i extern), iar genomul este de tip ARN dublu
catenar segmentat (10 - 12 segmente, n funcie de gen). n familia Reoviridae sunt incluse n trei genuri:
- genul Reovirus (Orthoreovirus), cu trei serotipuri (1,2,3), au localizare respiratorie sau enteric,
mai rar pot determina meningite sau erupii maculo-papuloase; ARN-ul genomic are 10 segmente;
- genul Rotavirus cuprinde virusuri care determin gastroenterite acute la sugari i copii pn n 2
ani, dar i infecii simiene, bovine, porcine etc.; ARN-ul genomic are 11 segmente;
- genul Orbivirus, include peste 12 virusuri patogene pentru om i animale, transmise prin arthropode;
ARN-ul genomic are 10 segmente; din acest gen face parte i virusul febrei de Colorado, care are genomul
segmentat n 12 segmente dublu catenare de ARN.

(http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=cla1st&logNo=110003396477)
(http://www.thailabonline.com/virus3.htm)
Replicarea i asamblarea virionilor se realizeaz n citoplasm, fiind nsoit de formarea unor incluzii
fibrilare, mari, eozinofile.
Din punct de vedere medical rotavirusurile sunt mai importante. Se pare c la ptrunderea
virusului n celul intervine o proteaz care ndeprteaz straturile capsidale i genereaz o particul
subviral intermediar nainte ca virusul s ajung n citoplasm. O protein de ataare viral este expus
pe acest intermediar i se leag de receptorii celulari. n citoplasm genomul ARN, care nu funcioneaz
ca ARNm, este copiat de ctre o ARN polimeraz viral nc din interiorul nucleocapsidei, care are puine
proteine asociate. Dup bonetarea i metilarea ARNm, acesta este extrudat din nucleocapsid i tradus la
proteine, iar proteinele rezultate sunt asamblate pentru a forma o capsid imatur. Dup mpachetarea
ARNm n capsida imatur, acesta este copiat pentru a forma ARN genomic dublu catenar. Capsida imatur
nmugurete n lumenul reticulului endoplasmic i achiziioneaz tranzitoriu o anvelop care e pierdut
ulterior, cnd capsida se matureaz. Eliberarea virusurilor din celul se face probabil prin liza acesteia.

2. VIRUSURI CU GENOM ADN


a) virusuri cu genom ADN monocatenar
FAMILIA PARVOVIRIDAE
Familia Parvoviridae cuprinde cele mai mici virusuri cunoscute (parvus = mic), de 18-26 nm,
nenvelite, cu capsida icosaedric format din 32 capsomere, dintre care 12 sunt pentoni (n vertexuri), iar
20 sunt hexoni. Genomul este reprezentat de o molecul de ADN monocatenar de polaritate pozitiv sau
negativ, ambele forme fiind ntlnite n aceeai proporie. Sunt patogene pentru vertebrate (pentru cai,
bovine, roztoare) i om.
Familia Parvoviridae cuprinde 3 genuri:
- genul Parvovirus cu virusuri ce infecteaz mamiferele i omul (Parvovirusul Autonom- B 19,
ncriminat ca agent etiologic al crizei aplastice din anemia falciform i al eritemului infecios - boala a
5-a febril a copilriei);
- genul Dependovirus cuprinde virusuri adenoasociate, de exemplu AAV (Adeno-Associated Viruses),
care sunt virusuri defective ce solicit pentru replicare coinfecia cu un virus helper reprezentat de adenovirus
sau herpesvirus. AAV este capabil s inhibe oncogenitatea adenovirusurilor de tip 12, 18 i 21 fa de hamsterul
nou nscut.
- genul Densovirus cuprinde parvovirusuri ale insectelor.
Dup infectarea celulei, prin legarea virusului de un receptor reprezentat de acidul sialic, ADN
genomic ptrunde n nucleu, unde enzimele celulare l convertesc ntr-un ADN dublu catenar. Transcrierea
este iniiat numai odat cu intrarea celulei n faza S a ciclului celular de replicare. Intervin trei promotori,
iar ARN polimeraza celular face transcrierea n trei molecule diferite de ARNm. Rezult cteva proteine
cu secvene apropiate. Virusul codific o enzim de replicare fr funcie polimerazic, ce cliveaz
ADN-ul circular nchis pentru a rezulta ADN-ul genomic monocatenar.
Omul este gazd numai pentru parvovirusurile umane, pe cnd parvovirusurile care infecteaz
cinii i pisicile determin afeciuni foarte grave, cu letalitate ridicat datorit afectrii sistemului imun.
Parvovirusul B-19 uman produce la copii erupia numit i eritem infecios sau a cincea boal
febril, deoarece la copii este cel de-al 5-lea agent etiologic dintr-o serie de virusuri ce produc erupii
similare, dup rujeol, scarlatin, rubeol i boala lui Dukes (care este un exantem).

Parvovirus uman B-19


(http://www.wadsworth.org/databank/b19virus.htm)

b) virusuri cu genom ADN dublu catenar


FAMILIA ADENOVIRIDAE
Familia Adenoviridae cuprinde virusuri izolate iniial din esut amigdalian. Sunt ntlnite n cile
respiratorii superioare la om i animale, fiind patogene pentru om, maimue, bovine, ovine, psri. Unele
dintre ele (de exemplu AV12, AV18) produc tumori dac sunt inoculate subscapular la hamsteri nounscui.
Adenovirusurile au capsida nud, cu diametrul de 70-90 nm, format din 252 de capsomere (12
pentoni la nivelul vertexurilor, restul hexoni pe fee i muchii) dispuse dup o simetrie icosaedric.
Genomul este de tip ADN dublu catenar linear cu secvene repetitive inversate la extremiti. n interiorul
particulei virale, ADN este asociat cu proteine interne. La nivelul pentonilor se gsesc formaiuni numite
fibre.
Familia Adenoviridae prezint dou genuri:
- genul Mastadenovirus, n care intr 9 grupe de adenovirusuri ale omului, cu 47 de serotipuri
submprite n 6 subgenuri A, B, C, D, E, F i adenovirusuri animale patogene pentru porcine,
bovine, ovine, canine, ecvine etc.
- genul Aviaadenovirus, care cuprinde 5 grupe de adenovirusuri ale psrilor.
Adenovirusurile umane produc afeciuni acute respiratorii, conjunctivale, avnd tropism pentru esutul
adeno-faringo-conjunctival.

(http://www.virology.net/big_virology/BVDNAadeno.html)
(http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Adenovirus-based_Gene_Therapy:_a_Promising_Novel_Cancer_Therapy)

Adenovirusurile conin cel puin 12 proteine structurale distincte, care intr n alctuirea
virionului:
- proteina II intr n alctuirea hexonilor;
- proteina III intr n alctuirea bazei pentonilor
- proteina IV intr n alctuirea fibrei pentonilor
- proteina IIIa este asociat bazei pentonilor
- proteinele VI, VIII, IX sunt asociate hexonilor
- proteinele V, VII sunt asociate ADN
- proteinele X, XI, XII sunt asociate nanomerilor hexonici.

Adenovirusurile sunt variate din punct de vedere antigenic. Toate au pe faa intern a capsomerelor
hexonice un antigen de grup, comun, cu reactivitate ncruciat (proteinele asociate hexonilor). Proteinele
II i IV sunt cele care dau specificitatea antigenic de tip antigenic.
Ciclul de replicare al adenovirusurilor cuprinde faze timpurii i tardive i dureaz 32 - 36 ore.
Virionul se ataeaz de receptorul celular prin intermediul fibrei pentonice i ptrunde n celul
prin viropexie. Dup ruperea veziculei de endocitoz virionul este eliberat n citoplasm i capsomerele
pentonice se desprind din structura lui.
ADN-ul i proteinele asociate ptrund n nucleu. ADN-ul se complexeaz cu proteine histonice
celulare i formeaz un complex similar cu cromatina celular. Transcrierea ARNm este catalizat de
ARN polimeraza II celular. Se sintetizeaz iniial un ARN premesager, care este prelucrat prin clivare i
nndire alternativ, acest proces fiind o surs de variabilitate genetic a virusurilor.
Sunt sintetizate aproximativ 40 polipeptide diferite, dintre care 13 sunt structurale, restul fiind
nestructurale, cu rol n reglare, n replicarea ADN sau n morfogeneza virusului.
Asamblarea virionilor are loc n nucleu i ncepe cnd polipeptidele se reunesc n capsomere, la
nivelul citoplasmei. Se sintetizeaz i se asambleaz proteina hexonic, mediat de o protein de cofraj,
precum i proteinele pentonice, dup care capsomerele sunt transportate n nucleu. Capsomerele hexonice
vor forma capside la care se adaug i alte proteine componente, iar ADN-ul replicat ptrunde n capsid
printr-o deschidere la nivelul unui vertex al icosaedrului. Dup ptrunderea n capsid, ADN-ul se
asociaz cu proteinele specifice i se pliaz.
Eliberarea virionilor din celule se realizeaz prin moartea i liza celulei gazd.

(http://arthritis-research.com/content/4/Suppl%203/S215/figure/F1?highres=y)

(http://www.nature.com/jcbfm/journal/v23/n11/fig_tab/9591473f5.html)

FAMILIA HERPESVIRIDAE
Familia Herpesviridae cuprinde peste 100 virusuri complexe, nvelite, cu dimensiuni ce variaz
ntre 120 - 300 nm, patogene pentru om, primate, mamifere, psri, peti.
Capsida viral are simetrie icosaedric, cu 162 capsomere de forma unor prisme cu un canal axial
gol (12 pentoni i 150 hexoni) i genomul viral situat central, de tip ADN dublu catenar linear, asociat cu
proteine specifice, codific 50-70 proteine.
Att replicarea genomului, ct i asamblarea nucleocapsidei se realizeaz n nucleu. Eliberarea
virusurilor din celula gazd se face lent, fr nmugurire.
Familia Herpesviridae este divizat pe criterii morfologice, biologice i antigenice n trei subfamilii:
a) Subfamilia Alphaherpesvirinae cuprinde dou genuri:
- genul Simplexherpesvirus, cu dou specii patogene pentru om:
1.virusul Herpes simplex hominis tip 1 (HVS-1), care provoac leziuni periorale
2.virusul Herpes simplex hominis tip 2 (HVS-2), care induce vezicule sau ulceraii pe
mucoasa genital;
- genul Varicellavirus cu virusul Varicella - Zoster, care la copii determin varicela (vrsatul de vnt),
iar ia aduli zona zoster (o erupie vezicular tegumentar);
b) Subfamilia Betaherpesvirinae cuprinde genul Citomegalovirus cu specia virus citomegalic uman,
(CMV, virusul herpetic 5) care la sugari provoac boala incluziilor citomegalice cu o evoluie grav,
fatal, dar i virusurile herpetice umane 6 i 7 (HHV-6, HHV-7);
c) Subfamilia Gammaherpesvirinae cuprinde mai multe genuri:
- genul Lymphocryptovirus cu specii care prezint tropism pentru limfocitele B:
1. virusul Epstein-Barr (VEB), agentul etiologic al mononucleozei infecioase, asociat i cu
unele forme de cancer (limfomul Burkitt, carcinomul nazofaringian)
2. virusul herpetic uman - 8 (HHV-8), agentul etiologic al exantemului subit la copiii pn la 4
ani (o erupie de tip rubeoliform pe ceaf i urechi).

Simplexherpesvirus
Varicella - Zoster
Citomegalovirus
(http://www.virology.net/big_virology/bvdnaherpes.html)
Virionul este alctuit din 4 elemente structurale:
- regiunea central cu genomul i proteinele asociate
- capsida proteic, cu 8 tipuri de proteine; capsomerele au form cilindric i sunt goale la interior;
- tegumentul amorf reprezentat de spaiul dintre nveliul extern i suprafaa capsidei, cu cel puin
20 de componente proteice;
- peplosul, care prezint spicule.

Virusurile acestei familii au o structur unitar, dar se deosebesc prin proprietile lor biologice.
Au fost descrise trei tipuri diferite de virioni: capside goale, fr genom sau peplos; nucleocapside fr
peplos, virioni maturi cu toate elementele structurale.
Genomul herpesviridelor este de tip ADN dublu catenar, care se circularizeaz rapid n celula
gazd. Molecula conine secvene repetitive n ordine invers sau direct, la capete sau la interior, care
delimiteaz secvene codificatoare unice, L (Large) i S (Small) i conine un numr mare de gene.
Virionul conine poliamine (spermidina i spermina) care au rolul de a neutraliza gruprile acide
ale ADN i de a favoriza plierea moleculei.
n ciclul de replicare, virusurile se leag de receptorii celulari i ptrund n celul prin fuziunea
nveliului viral cu membrana celular. Nucleocapsida migreaz n citoplasm pn la membrana nuclear,
unde elibereaz genomul viral n nucleu.
Transcrierea genomului, replicarea ADN i asamblarea virionilor au loc n nucleu. ADN viral
este transcris n ARNm de ctre polimeraza II celular; acesta va fi bonetat, metilat i poliadenilat de
enzime codificate viral. Genele virale sunt transcrise succesiv:
- genele grupului alfa, n absena sintezei de proteine virale
- genele grupului beta, activate de genele alfa
- genele gama, proces dependent de replicarea ADN.
Proteinele virale sunt sintetizate pe polirobozomii liberi din citoplasm i pe cei asociai
reticulului endoplasmic; sunt prelucrate apoi prin clivare, fosforilare, glicozilare, sulfatare.
Replicarea ADN viral este catalizat de un numr mare de enzime virale, prin intermediul unor
molecule circulare sau al unor concatemeri lineari n conexiune cap - coad. Cel puin n faza tardiv a
ciclului de replicare, ADN se replic dup modelul cercului rotativ i se formeaz concatemeri care sunt
clivai n molecule de dimensiunea genomului, care vor fi mpachetate n capside.
Asamblarea capsidelor are loc n nucleu i ADN este mpachetat n capsidele preformate.
nveliul viral se formeaz la nivelul membranei nucleare, unde apar zone de membran reduplicate
(ngroate, concave sau convexe, care probabil sunt constituite din aglomerri de proteine virale).
Capsidele virale cu genomul ncorporat se ataeaz de lamela intern a membranei nucleare i se
nvelesc. Capsidele goale rmn nude, iar cele cu genom mai scurt sunt reinute n nucleu. Virionii sunt
transportai n cisternele reticulului endoplasmic, care fuzioneaz cu membrana citoplasmatic i se
elibereaz la exteriorul celulei.
Virusurile familiei Herpesviridae produc infecii latente, care pot fi reactivate periodic (sunt
recurente), producnd leziuni la locul iniial de replicare sau n apropierea acestuia.

(http://en.wikipedia.org/wiki/Herpes_simplex_virus)

FAMILIA POXVIRIDAE
Familia Poxviridae cuprinde cele mai mari virusuri, cu dimensiuni de 200 - 400nm/170nm, care
produc viroze la om i animale, determinnd leziuni de tip vezicular sau pustular, ori tumori benigne.
Sunt virusuri nvelite complexe, cu genom de tip ADN dublu catenar linear.
Poxviridele sunt ncadrate n dou subfamilii cu mai multe genuri:
 Subfamilia Chordopoxvirinae
o Orthopoxvirus, cu specii diferite ca:
 virusul small pox (Variola vera) - produce variola uman; are dou variante (variola major,
variola minor), care mbolnvesc doar oamenii;
 virusul vaccinal - tulpin de laborator derivat prin recombinri genetice din virusul
cowpox, folosit n vaccinarea antivariolic;
 virusul cowpox virusul variolei bovine i virusul variolei maimuelor (Monkey poxvirus);
o Parapoxvirus, cu dou specii care pot afecta accidental omul prin contaminare de la animale:
 virusul Orf agentul etiologic al dermatitei contagioase pustuloase;
 virusul paravaccinal care produce noduli pe mini i antebrae, nedureroi, benigni;
o Avipoxvirus
o Capripoxvirus
o Leporipoxvirus
o Suipoxvirus
o Molluscipoxvirus - cu Molluscum contagiosum, patogen exclusiv pentru om, la care formeaz
noduli multipli (de 2 - 5 mm) epidermici, benigni; boala persist timp de cteva luni, dup care
se poate vindeca spontan;
o Yatapoxvirus cu dou specii virale, care mbolnvesc maimuele africane i pot infecta
accidental omul. Boala uman se manifest prin febr i exantem nodular ulcerativ.
 Subfamilia Entomopoxvirinae
o Alfaentomopoxvirus
o Betaentomopoxvirus
o Gammaentomopoxvirus

(http://ictvdb.bio-mirror.cn/Ictv/fs_poxvi.htm)

(http://www.twiv.tv/virus-structure/)

Poxvirusurile sunt alctuite dintr-un nveli extern lipoproteic, cu uniti tubulare dispuse la
ntmplare, cu fosfolipide sintetizate n celul, nederivate din membranele celulare i la suprafa cu
proiecii de natur proteic; corpul central (nucleoidul) n form de halter, cuprinde genomul ADN
dublu catenar linear, doi corpi laterali n concavitile nucleoidului i peste 100 proteine, printre care: o
ARN polimeraz - ADN dependent, ce iniiaz transcrierea unui ARN-m care codific proteine timpurii,
necesare decapsidrii complete a virionilor, precum i o ADN transcriptaz ADN dependent.
Replicarea poxviridelor se realizeaz n citoplasm, cu formare de incluzii intracitoplasmatice.
Eliberarea virionilor progeni se realizeaz prin exocitoz sau prin prin liza celulei gazd.
Virusul vaccinal, n form de crmid cu colurile rotunjite, este cel mai bine cunoscut dintre
virusurile pox. Prezint central nucleoidul n form de halter, care conine ADN dublu catenar linear cu
130 300 pkb, cu capetele catenelor n ac de pr, cu secvene terminale repetate invers; la capete
catenele se leag covalent i rezult o monocaten circular. Nucleoidul este nconjurat de o membran
intern omogen i un strat extern, alctuit din subuniti cilindrice scurte, aranjate regulat, constituind
regiunea palisadic. Lateral, n concavitile nucleoidului exist doi corpi laterali, cu compoziie chimic
i funcie necunoscute. Virionul prezint i un nveli extern de natur lipoproteic, ce conine fosfolipide
nederivate din membranele celulare, cu un strat intern i unul extern.
Virusul variolei umane are dimensiunea de 302 - 305nm, cu genom ADN dublu catenar linear cu
186pkb, cu extremitile catenelor n ac de pr. Este strns nrudit cu Molluscum contagiosum, care, ca i
virusul variolei umane, are drept gazd doar omul, dar care produce infecii benigne. Pe lng cele dou
virusuri amintite, oamenii pot fi infectai accidental i de virusurile cowpox i monkeypox.
Compoziia chimic a poxvirusurilor este reprezentat de proteine (90%), lipide (5%), acizi nucleici
(3,2%). Ele au capacitatea de a codifica diverse enzime, eseniale pentru replicare: o ARN polimeraz ADN dependent, enzime de prelucrare post-transcriere a ARN, o ADN polimeraz, topoizomeraze ADN,
ligaze. Din punct de vedere antigenic, virusurile prezint un antigen comun de grup, legat de nucleoid (NP),
antigene specifice, de suprafa, dar i antigene solubile de la celula gazd.
Replicarea poxviridelor este n ntregime intracitoplasmatic, total independent de nucleul celulei,
spre deosebire de majoritatea virusurilor ADN, care se replic n nucleul celulei, cu implicarea
mecanismelor de replicare celulare; etapele replicrii cuprind:
 Legarea de un receptor de pe suprafaa celulei gazd, probabil factorul de cretere epidermic;
 nglobarea virusului n celul prin endocitoz;
 Fuziunea peplosului cu membrana veziculei de endocitoz, care duce la eliberarea genomului
n citoplasm;
 Sinteza ARNm sub aciunea ARN polimerazei virale (n cteva minute de la infecie);
 Sinteza proteinelor precoce nestructurale;
 Replicarea genomului la nivelul inciziilor monocatenare produse de o dezoxiribonucleaz
viral; genomul fiind de dimensiuni mari, prezint mai multe puncte iniiale ale replicrii; se
sintetizeaz nti un fragment mic de ADN, legat covalent de primerii ARN, fragmentele scurte
sunt ligaturate, rezultnd un intermediar de replicare, care este un concatemer dublu catenar,
format dintr-o pereche de genomuri; n faza tardiv a replicrii se transcrie restul informaiei
genetice;
 Eliberarea virionilor progeni prin exocitoz sau prin prin liza celulei gazd.
Multiplicarea virusului se desfoar n incluzii de tip B sau A, n care virionii se gsesc n diferite
stadii de asamblare. Se formeaz iniial virioni imaturi, cu o membran dubl sintetizat de novo, tapetat
cu spiculi proemineni, n care intr genomul viral i proteinele asociate acestuia i ncepe condensarea
nucleoidului. Poliribozomii lipsesc din incluziile de tip B, proteinele sintetizate fiind transportate pn la
ele pentru asamblare, dar sunt prezeni n incluziile de tip A. Virionii imaturi sunt transportai spre
periferia celulei, membrana dubl devine nveli intern, iar virionii se acoper cu o membran extern
dubl la nivelul reelei trans-Golgi. La nmugurire se pierde un strat din membrana extern dubl, prin
fuziunea acestuia cu membrana celular.

Numeroase proteine codificate viral au rol n infectarea celulei cu virus sau n influenarea
reaciilor de aprare ale gazdei. Ele pot fi proteine solubile, neeseniale, cu rol n virulen i reducerea
aprrii gazdei (hemaglutinina, prezent n nveliul viral i n citoplasma celulei gazd, viroreceptorii
care sunt proteine active cu omologie funcional cu receptorii celulari de citokine, care interfer cu
aprarea gazdei, virokinele, molecule cu omologie funcional cu citokinele, ca de exemplu: omologi ai
factorului de cretere a endoteliului vascular, un inhibitor al serinproteazei, ce inhib activarea citokinelor
i diminu procesul inflamator, proteine de legare a complementului) sau proteine sintetizate n celula
infectat, ca de exemplu proteinkinaze sau ribonucleotid-reductaza.
b) virusuri cu genom ADN dublu catenar cu reverstranscriptaz
FAMILIA HEPADNAVIRIDAE
Familia HEPADNAVIRIDAE cuprinde virusuri hepatitice, cu tropism pentru hepatocit, care produc
hepatite la om i animale. Spectrul de gazd este foarte ngust. Dup infectarea cu virus hepatocitele produc

cantiti mari de nveli viral neinfecios.


Ele sunt ncadrate n dou ordine, Ordinul Orthohepadnavirus i Ordinul Avihepadnavirus.

Virusurile hepatitice sunt foarte variate:


 Virusul hepatitei B umane (VHB) (Ordinul Orthohepadnavirus)
 Virusul hepatitei marmotei, cel al hepatitei veveriei
 Virusul hepatitei B al ratei de Pekin (Ord. Avihepadnavirus)
Sunt virusuri nvelite, cu capsid electronodens sferic, cu simetrie icosaedric, cu genom de tip
ADN dublu catenar.
Virusul hepatitei B umane (VHB) are form sferic, dimensiuni de 42-47nm i prezint un
nveli extern de natur proteic, cu distribuie ordonat, cu antigenul de suprafa (AgHBs) format din 3
proteine diferite: LHBs (large), cu subunitile pre-S1 i pre-S2, MHBs (Middle), cu subunitile S i
pre-S1, SHBs (Small), cu subunitatea S. La interior este situat o capsid alctuit din 180 capsomere
identice, cu proteina HBc (core), cu dou subuniti identice. Genomul este o molecul de ADN dublu
catenar circular, cu o poriune monocatenar de 15-60% din genom; una din catene este complet, de
polaritate negativ, cealalt, mai scurt, este de polaritate pozitiv.
VHB se gsete sub forma a trei tipuri structurale:
 virionul complet (particula Dane) - de form sferic, cu diametrul de 42 nm, cu AgHBc, care prin
clivaj proteolitic d natere antigenului solubil Ag HBe i unei ADN polimeraze care funcioneaz
ca reverstranscriptaz;
 particule sferice mai mici, cu diametrul de 15-20 nm, sintetizate n exces de celula infectat,
neinfectante deoarece sunt lipsite de genom; sunt constituite din subuniti virale HBs (doar SHBs
i MHBs); uneori sunt singurele din serul pacienilor, care este astfel neinfectant;
 particule filamentoase, obinute prin agregarea particulelor sferice, fr genom, neinfecioase.
La om virusul hepatitei B produce infecii persistente. Infecia cu VHB se poate asocia cu hepatit
acut i cronic, carcinom hepatocelular, maladii mediate de complexele imune, datorit producerii
antigenelor n exces.
Rezervorul natural de VHB este constituit de purttorii de virus hepatitic B. Cile de transmitere a
virusului sunt variate:
 parenteral (manevre medicale i nemedicale sngernde);
 perinatal (vertical);
 sexual;
 prin vectorii hematofagi (nari, plonie).
Receptorul de virus este reprezentat de orice individ uman, mai ales dac se ncadreaz n grupe de
risc: personal medical, utilizatori de droguri administrate intravenos, persoane cu parteneri sexuali
multipli, persoane cu handicap instituionalizate, hemofilici, persoane transfuzate frecvent sau cu sistem
imunitar compromis.

(http://www.doctortipster.com/998-viral-hepatitis-what-you-should-know-about-hav-hbv-hcv.html)
n replicarea virusurilor din familia Hepadnaviridae, dup ataarea virusurilor de membrana
celular i ptrunderea n celula gazd, genomul ADN migreaz spre nucleul celulei. Aici poate fi detectat
n nucleu sub form circular, deoarece se completeaz prin sintez catena mai scurt, sub aciunea unei
ADN polimeraze virale, ataat la captul 3 al catenei scurte.
ADN-ul viral dublu catenar circular are dou posibiliti de evoluie:
- se poate integra n cromozomul celulei gazd i catena de polaritate negativ este transcris
ntr-un ARN pregenomic de ctre ARN polimeraza celular II; este un evenimet frecvent, dar
neobligatoriu (cum este pentru retraviridae); infecia devine persistent, se sintetizeaz antigene virale;
integrarea destabilizeaz genomul gazdei prin mecanisme necunoscute;
- catenele se separ, cea de polaritate pozitiv se supraspiralizeaz i devine nefuncional, iar cea
de polaritate negativ este transcris ntr-un ARN pregenomic i ARNm necesar pentru sinteza la nivelul
ribozomilor a proteinelor virale majore: HBs, reverstranscriptaza (RT), proteina primer.
n citoplasm, ARN pregenomic se asociaz cu ADN polimeraza ARN dependent
(reverstranscriptaz), cu o protein cu rol de primer i cu proteina HBc i formeaz nucleocapside. n
fazele timpurii ale infeciei acestea migreaz spre membrana nuclear, se dezasambleaz i elibereaz
ADN nascent n nucleul hepatocitului, unde procesul se repet i crete concentraia de ARNm. Genomul
se matureaz n ADN dublu catenar circular, este transcris n ARN pregenomic i ARN mesager.
Majoritatea nucleocapsidelor rmn n citoplasm i se nvelesc prin asocierea cu proteine. La
nivelul cisternelor golgiene se asambleaz particule virale complete. Proteinele HBs se sintetizeaz n
exces, avnd rol probabil n inducerea toleranei imunologice, important n infeciile persistente (prin
blocarea receptorilor pentru VHB ai limfocitelor).
La majoritatea persoanelor adulte cu o infecie acut cu VHB, virusul este neutralizat cu succes i
imunitatea post-infecie este de lung durat. n hepatita acut perioada de incubaie poate dura ntre o
lun i ase luni, dup care se manifest simptomele: pierderea apetitului, senzaie de oboseal, scaune
decolorate i urin nchis la culoare. Numai aproximativ 1% dintre pacienii cu hepatit acut prezint
leziuni la nivelul ficatului.
Dintre persoanele cu form acut, numai un procent vor dezvolta o form cronic, n funcie de
vrst: 90% dintre nou-nscui, 50% dintre copii, 5% dintre aduli, deoarece sistemul imun nu poate
mpiedica virusul s se replice pentru o lung perioad n ficatul pacientului.

(http://journals.cambridge.org/fulltext_content/ERM/ERM3_10/S1462399401002812sup002.htm)

(http://www.nature.com/nri/journal/v5/n3/fig_tab/nri1573_f2.html)

IV. NOIUNI DE IMUNOLOGIE


1. ANTIGENELE
Antigenele complete sunt molecule strine care, dup ce au fost introduse ntr-un organism de
vertebrat pe o cale adecvat (parenteral, oral), induc un rspuns imun. Acesta const fie din producerea
de anticorpi specifici de ctre limfocitele B mature (imunitate umoral), fie din activarea proliferrii
limfocitelor T (imunitate celular). Antigenele se pot combina in vivo i in vitro cu anticorpii
specifici.
Un antigen complet este format din dou pri distincte:
- gruparea purttoare (carrier), care confer antigenului o anumit dimensiune, necesar pentru a fi
recunoscut de celulele sistemului imun;
- grupri determinante de specificitate (gds, epitopi), grupri mici, cu suprafa de aproximativ 7 m2,
accesibile celulelor sistemului imun, care confer moleculei de antigen specificitate antigenic
(reacioneaz cu anticorpii specifici), dar nu pot declana singure sinteza acestor anticorpi.
Numai complexul molecul carrier + epitopi, care reprezint un antigen complet, are o dimensiune
adecvat spre a declana un rspuns imun specific n organismul gazd.
Un antigen complet prezint dou proprieti distincte:
- imunogenitatea, proprietatea unei substane de a induce ntr-un organism un rspuns imun
(producerea de anticorpi specifici i activarea reaciilor de imunitate celular); substanele cu aceast
proprietate se numesc imunogene;
- antigenicitatea, proprietatea unei substane de a se uni in vitro sau in vivo cu anticorpii
specifici; se mai numete i specificitate antigenic.
Antigenele incomplete (haptene de la haptein (gr.) = a prinde, a atinge) sunt substane chimice
naturale sau de sintez cu greutate molecular mic, ce pot reaciona in vitro cu anticorpi specifici (au
proprietatea de antigenicitate), dar nu pot induce in vivo sintez de anticorpi specifici (nu au proprietatea
de imunogenicitate). Acest lucru se datoreaz dimensiunilor mici i au fost denumite jumti de
antigene. Pot deveni imunogene numai dac sunt cuplate cu alt molecul, numit molecul purttoare
(carrier), de exemplu unele proteine naturale (albumina, globulina), celule (hematii), virusurile (fagii),
copolimeri sintetici de aminoacizi.
Alergenii sunt acele antigene care se leag de IgE specifice i declaneaz o reacie alergic n
organism.
n natur exist o mare variabilitate de antigene, care pot fi clasificate n funcie de mai multe
criterii:
1) Gradul de complexitate a moleculei de antigen:
- Ag complete, care posed molecula purttoare i gruprile determinante de specificitate; sunt imunogene
i antigenice;
- Ag incomplete (haptene), care sunt fragmente de antigene complete, ce posed doar epitopii; au
capacitatea de a reaciona cu anticorpii (posed antigenicitate), proces vizibil in vitro prin reacii
serologice de diagnostic (reacii de precipitare, reacii de inhibare a hemolizei etc.); nu sunt imunogene,
deoarece au greutate molecular mic. Prin ataare de o molecul purttoare devin antigene complete.
2) Specificitatea n raport cu propria specie sau cu alte specii
- Ag specifice de organ sunt antigene proprii unor organe (ficat, rinichi, pulmon, cristalin), care difer de
proteinele altor organe ce aparin aceluiai individ. Ele sunt rezultatul particularitilor biochimice ale
celulelor din alctuirea organului (proteinele esutului renal difer de cele hepatice ale aceluiai individ).
- Ag specifice de specie sunt antigene comune tuturor indivizilor ce aparin aceleiai specii de animale,
plante, parazii, virusuri.
- Heteroantigene (Ag heterofile) sunt antigene comune existente la indivizi ce aparin unor specii
ndeprtate filogenetic. Inoculate la indivizi ce nu au aceste antigene induc formare de anticorpi specifici.

Ex.: Ag Forssman - antigen larg rspndit la diferite specii de animale (mamifere, reptile, peti) i
chiar la unele specii de microorganisme.
Organisme Forssman (+): esutul renal de cobai; oamenii de grup A(II); esuturile de cal, vulpe,
oarece, leu, tigru, cine, pisic, lup, capr, oaie, cmil, balen, psri domestice, broasc estoas;
Salmonella, Shigella, Clostridium, Pneumococcus;
Organisme Forssman (-): cobaiul, cu excepia esutului renal; omul, cu excepia grupului A (II);
obolan, cimpanzeu, goril, iepure, bovine, rae.
Ex.: Ag Rh este prezent pe esuturile maimuei Macaccus rhesus; inoculate la organisme care
aparin altor specii (de exemplu iepure), acestea vor induce sintez de anticorpi specifici anti-Rh; pentru
om, antigenul Rh este un antigen de grup, care difereniaz populaia uman n dou categorii (Rh (+) i
Rh (-)).
Ex.: Ag comune rickettsiilor i bacteriilor speciei Proteus vulgaris existena lor st la baza
unor teste de laborator folosite pentru diagnosticul tifosului exantematic, produs de Rickettsia prowatzecki.
Persoanele bolnave de tifos exantematic prezint n ser anticorpi anti-rickettsieni, care pot fi decelai n
reacii serologice (reacia Weil-Felix) cu ajutorul unei tulpini de Proteus vulgaris OX-19, evitndu-se
astfel folosirea n laborator a antigenelor rickettsiene.
3) Originea antigenelor
- Ag exogene, care provin din afara organismului; se numesc i antigene strine sau non-self;
A. Ag naturale se gsesc ca atare n natur; pot fi:
a) Ag de origine animal i uman sunt proteine sau glicoproteine care formeaz:
antigenele de histocompatibilitate (MHC); antigenele tumorale; antigenele de grup sangvin;
hormoni; enzime;
b) Ag de origine vegetal sunt proteine i glicoproteine;
c) Ag de origine bacterian - sunt proteine, glicoproteine, lipopolizaharide, care formeaz:
antigene din componena corpului bacterian (somatice); antigene ale peretelui celular, ale
capsulei, flagelilor, pililor sau fimbriilor; toxine (endotoxine, exotoxine);
d) Ag de origine viral: situate n nucleoproteina profund, slab imunogene (de exemplu
antigenul NP al virusului gripal); la nivelul capsomerelor virale, puternic imunogene (de
exemplu antigenele adenovirale, antigenele enterovirale); la nivelul peplosului viral (de
exemplu neuraminidazele i hemaglutininele virusului gripal); antigene exprimate n
interiorul sau pe suprafaa celulelor infectate cu virusuri oncogene.
B. Ag semisintetice sunt obinute n laborator; constau n cuplarea unei proteine naturale
purttoare (carrier) cu o hapten sintetic sau n cuplarea unei haptene naturale cu o molecul
carrier sintetic (de exemplu Sephadex).
C. Ag sintetice sunt antigene complete, cu ambele componente preparate i cuplate n laborator
(de exemplu homopolimeri sau heteropolimeri sintetici de aminoacizi).
- Ag endogene, care se formeaz n interiorul organismului respectiv, derivnd din antigenele proprii (self)
n urma denaturrii sau mbtrnirii lor.
4) Necesitatea prezenei limfocitelor T n producerea anticorpilor specifici
- Ag timodependente sunt antigene care, pentru a declana un rspuns imun, au nevoie de prezena
limfocitelor T, care se matureaz n timus. Cooperarea dintre limfocitele T i limfocitele B determin
producerea de anticorpi specifici acestor antigene de ctre limfocitele B mature (plasmocite). Majoritatea
antigenelor existente n natur sunt timodependente, nepolimerizate i cu un numr mic de epitopi.
- Ag timoindependente sunt antigene care nu necesit prezena limfocitelor T pentru declanarea unui
rspuns imun specific. Ele sunt capabile s activeze direct limfocitele B, transformndu-le n plasmocite,
care vor sintetiza anticorpi specifici acestor antigene. Antigene timoindependente sunt relativ puine:
endotoxinele bacteriene, flagelina, polivinilpirolidona. Aceste antigene au epitopi care se succed repetitiv,
determinnd sintez de anticorpi specifici din clasa IgM.

2. SISTEMUL IMUN
Rspunsul imun este urmarea conflictului dintre un agent agresor strin (virusuri, bacterii, toxine,
parazii etc.) i organismul gazd receptor. El este asigurat de un sistem specializat format din molecule,
celule i organe limfoide, numit sistem imun. Principalele componente ale sistemului imun sunt:
I. Moleculele sistemului imun
A. Imunoglobulinele (anticorpii)
- Imunoglobulinele G (IgG)
- Imunoglobulinele M (IgM)
- Imunoglobulinele A (IgA)
- Imunoglobulinele D (IgD)
- Imunoglobulinele E (IgE)
B. Sistemul complement
C. Modulatori ai rspunsului imun
- Interleukinele (IL) - limfokine, monokine
- Interferonii (IFN)
- Factorul de necroz tumoral (TNF)
II. Celulele sistemului imun
A. Sistemul fagocitar
- Sistemul fagocitar mononuclear
- Monocitele
- Macrofagele
- Celulele dendritice
- Sistemul fagocitar polimorfonuclear (granulocitele)
- Neutrofilele
- Eozinofilele
- Bazofilele
B. Sistemul limfoid (imunocitar)
- Limfocitele T
- Limfocitele TC
- Limfocitele TD (TDH)
- Limfocitele TH
- Limfocitele TS
- Limfocitele TCS
- Limfocitele B
- Celulele NK, K, LAK
III. Organele limfoide
A. Organele limfoide primare
- timusul
- bursa lui Fabricius
- mduva osoas
B. Organele limfoide secundare
- ganglionii limfatici
- splina, amigdalele, apendicele
- plcile Peyer intestinale

Structura moleculei de imunoglobulin


O molecul de imunoglobulin (monomer) este format n general prin asocierea a 4 lanuri
polipeptidice:
- dou lanuri grele H (heavy) identice, fiecare avnd aproximativ 450 aminoacizi, cu o greutate
molecular de 50-76 kdal;
- dou lanuri uoare L (light), fiecare avnd aproximativ 216 aminoacizi, cu o greutate molecular
de 25 kdal.
Pe lng aceste 4 lanuri polipeptidice se gsesc i molecule de glucide.
Lanurile H sunt situate central i sunt legate ntre ele prin dou legturi disulfidice (-S-S-).
Lanurile L, care flancheaz lanurile H (cu o singur excepie), sunt legate de acestea printr-o singur
punte disulfidic. La mijlocul lanurilor H se gsete o regiune format de obicei din 15 aminoacizi, unde
sunt grupate molecule de cistein, care formeaz cele dou puni disulfidice dintre lanurile grele. Aceast
regiune se numete regiunea balama. Ea permite ca unghiul lanurilor grele s varieze de la 0 la 180; de
obicei imunoglobulinele au forma literei Y. Este zona atacabil prin tratarea imunoglobulinei in vitro cu
enzime proteolitice (papain, pepsin, tripsin).
n funcie de secvena de aminoacizi, fiecare lan polipeptidic este format din dou mari regiuni:
 regiunea variabil (V) situat la extremitatea -NH2 a lanului polipeptidic, notat VL pentru lanurile
uoare i VH pentru lanurile grele; poriunea VL conine aproximativ 110 aminoacizi, iar poriunea VH
conine aproximativ 118 aminoacizi; cele 4 regiuni variabile (dou VL i dou VH) formeaz dou
situsuri de combinare specific a moleculei de imunoglobulin cu un anumit antigen (fiecare
format dintr-o regiune VL i o regiune VH); n funcie de antigen, exist o variabilitate n compoziia de
aminoacizi; de fapt, doar anumite zone din cadrul acestei regiuni au o variabilitate pronunat i se
numesc regiuni hipervariabile; ele sunt ncadrate de zone relativ invariabile, numire regiuni cadru,
care reprezint aproximativ 80% din lungimea regiunii variabile;
 regiunea constant (C) situat la extremitatea COOH a lanului polipeptidic; lanurile uoare au o
singur regiune constant, notat CL (compoziia n aminoacizi este constant la o clas de
imunoglobuline a unei specii date, nefiind influenat de epitopi); lanurile grele au 3 regiuni constante,
notate CH (CH1, CH2, CH3, numerotarea ncepnd de la regiunea variabil); dou clase de
imunoglobuline, IgM i IgE prezint i o a patra regiune constant, CH4.
Configuraia tridimensional a monomerului de imunoglobulin este asigurat de legturile
disulfidice. Acestea pot fi:
- legturi intercatenare ntre lanuri diferite ale aceleiai molecule (de exemplu ntre lanurile H sau
ntre un lan H i un lan L);
- legturi intercatenare ntre lanuri H aparinnd unor monomeri diferii, formndu-se complexe
moleculare polimerice;
- legturi intracatenare, n interiorul fiecrui tip de lan, asigurnd formarea domeniilor la nivelul
lanurilor uoare sau grele.
Domeniile sunt regiuni globulare stabilizate prin legturi intracatenare, cuprinznd secvene de
aproximativ 60 aminoacizi; fiecare lan L cuprinde dou domenii, unul pentru regiunea variabil i unul
pentru regiunea constant; lanurile grele cuprind mai multe domenii, cte unul pentru regiunea variabil i
3 (sau 4 n cazul IgM i IgE) pentru regiunea constant. Cooperarea funcional dintre domenii n regiunile
VH i VL constituie situsul combinativ al imunoglobulinei (paratopul), care are capacitatea de a lega
specific antigenul.
Domeniile unui lan formeaz cu domeniile omoloage ale lanului opus uniti funcionale numite
module.

Existena a dou situsuri identice de legare a antigenului permite ca molecula de anticorp s se lege
de dou molecule similare de antigen. Aceast proprietate este foarte important pentru nelegerea
mecanismului de aciune a anticorpilor n cazul unei infecii, tiind c fiecare antigen prezint mai muli
determinani antigenici identici. n prezena anticorpilor specifici, mai multe particule antigenice similare
vor fi legate ntre ele prin intermediul anticorpilor, formndu-se agregate mari (complexe Ag-Ac), care vor
fi recunoscute i apoi distruse de macrofage.
Lanurile uoare ale moleculei de imunoglobulin
Studiul secvenelor de aminoacizi ce intr n compoziia lanurilor uoare ale diferitelor molecule
de anticorpi a artat c la extremitatea -NH2 se nregistreaz o variabilitate deosebit, de aceea aceast
poriune se numete regiune variabil, notat VL. n schimb, extremitatea COOH a lanurilor uoare
prezint la aceeai specie de animal aceeai secven de aminoacizi i se numete regiune constant, notat
CL. Regiunea variabil a lanului uor cuprinde o secven de aproximativ 110 aminoacizi; aici exist 3
regiuni hipervariabile (sau regiuni ce determin complementaritatea epitop-paratop = RDC), care se
concentreaz n zona aminoacizilor din poziiile 24 - 34, 50 55 i 89 - 97. Regiunile dispuse ntre cele
hipervariabile se numesc regiuni cadru i sunt relativ invariabile n ceea ce privete secvena de
aminoacizi.
n funcie de compoziia n aminoacizi a regiunii constante a lanului uor, fiecare specie de
vertebrat poate prezenta dou tipuri de secvene, ntre care exist o omologie de 30-40%:
- secven de tip lambda ();
- secven de tip kappa (k).
O molecul de imunoglobulin va fi format din dou lanuri uoare fie de tip , fie de tip k,
niciodat dintr-un lan i unul k. S-a constatat c la o specie dat exist un singur tip k de regiune
constant a lanurilor uoare, dar pot exista mai multe tipuri de regiuni constante . De exemplu la oarece
se ntlnesc trei tipuri de regiuni constante : 1, 2, 3, omologia dintre ele find mai mare dect ntre
i k.
Lanurile grele ale moleculei de imunoglobulin
Fiecare lan greu al unei molecule de imunoglobulin conine 4 regiuni, una variabil, la
extremitatea NH2 (VH) i 3 regiuni constante ctre extremitatea -COOH (CH).
Regiunea variabil a lanului greu prezint o similaritate cu cea a lanului uor; marea
specificitatea a unei molecule de anticorp pentru un anumit determinant antigenic este dat de structura
tridimensional unic format la nivelul situsului combinativ de legare a antigenului i este dictat de o
anumit compoziie n aminoacizi a regiunilor variabile VL i VH.
Regiunea variabil VH cuprinde aproximativ 118 aminoacizi i prezint 4 regiuni hipervariabile
concentrate n zona aminoacizilor din poziiile 30 - 36, 50 - 56, 86 91 i 95 - 100. ntre aceste regiuni
hipervariabile se gsesc secvene cadru relativ invariabile. Cele trei regiuni constante ale lanului greu
prezint o puternic omologie ntre ele i cu regiunea constant a lanului uor. Prin proprietile
antigenice ale lanurilor H determinate de secvena n aminoacizi a regiunilor constante, imunoglobulinele
mamiferelor se mpart n 5 clase:
- IgG, cu lan greu de tip gamma ();
- IgM, cu lan greu de tip miu ();
- IgA, cu lan greu de tip alfa ();
- IgD, cu lan greu de tip delta ();
- IgE, cu lan greu de tip epsilon ().

Structura unei molecule de imunoglobulin

Pentamer al IgM

Sistemul complement
Complementul (alexina) este un complex de mai multe proteine cu activitate enzimatic
(proteaze), ce se gsete n stare inactiv n serul normal al omului i al diferitelor vertebrate. Proteinele
complementului, n concentraie relativ constant, reprezint aproximativ 10% din globulinele serice,
nivelul lor nefiind influenat de stimuli antigenici.
Complementul prezint 9 componente, notate de la C1 (C1q, C1r, C1s) la C9, care se activeaz n
cascad, ducnd n final la liza antigenului. Activarea complementului se poate realiza pe dou ci:
o calea clasic, n care activarea enzimelor este determinat de prezena complexului antigen - anticorp;
o calea alternativ (properdinic), n care activarea enzimelor se face n lipsa complexelor imune
antigen - anticorp de ctre bacterii sau molecule polimerizate, ori de ctre imunoglobuline din clase
care nu activeaz complementul (Ig A, Ig G4).
Componentele inactive ale complementului sunt clivate proteolitic dup activare n dou
fragmente:
o fragmentul a, numit i "minor", notat cu cifra componentului care este clivat (de exemplu C3a);
acesta nu are activitate enzimatic, nefiind implicat n citoliz;
o fragmentul b, numit i "major", implicat n citoliz; acesta prezint dou situsuri:
 un situs pentru ataarea de membrana celular
 un situs pentru activarea enzimatic a componentului urmtor al complementului (pentru
clivare).
Dac fragmentul b nu se ataeaz de pereii celulei strine, el este distrus.
Sistemul fagocitar
Sistemul celulelor fagocitare face parte din sistemele celulare implicate n rezistena nespecific
antiinfecioas. Ele sunt responsabile de fenomenul de fagocitoz. Sistemul celulelor fagocitare cuprinde
dou tipuri de fagocite:
 celulele sistemului mononuclear, numit i sistemul fagocitar mononuclear (monocite i macrofage);
 celulele sistemului polimorfonuclear (PMN): neutrofile, eozinofile (acidofile) i bazofile.
Sistemul fagocitar mononuclear cuprinde celule mononucleare cu capacitatea de a fagocita
virusuri, celule strine (bacterii, celule tumorale), molecule non-self; fagocitoza const n nglobarea i
distrugerea prin procese de digestie enzimatic intracelular a elementelor non-self.
Celulele de origine pentru sistemul mononuclear sunt celulele stem (celule matc, de origine,
primordiale) localizate n mduva osoas i pluripotente.
Monoblastul i promonocitul se gsesc n mduva osoas. Prin maturarea promonocitului se
difereniaz monocitul, care se elibereaz n snge n 60 de ore de la formare i se menine n circulaie 24
de ore, reprezentnd 3-8% dintre leucocite. Dac n organism apare un focar de inflamaie, monocitele
migreaz n esut spre acesta, se localizeaz i devin macrofage. Macrofagele sunt celule imobile i se pot
gsi fixate n diferite esuturi:
Sistemul fagocitar polimorfonuclear (granulocitele)
Polimorfonuclearele sunt elemente fagocitare de tip microfag (fagociteaz particule mici),
asigurnd prima linie de aprare a organismului fa de virusuri, bacterii, fungi, parazii. Reprezint
aproximativ 60 - 70% din totalul leucocitelor. i au originea n celula stem a mduvei osoase, din care se
formeaz sua hematopoietic. Polimorfonuclearele sunt prezente temporar n circulaie (triesc doar
cteva zeci de ore). La omul normal se distrug n fiecare or 5 miliarde de leucocite i 10 miliarde de
hematii. Dac o celul din aceast categorie a prsit sistemul circulator i a ptruns n esuturi, ea nu mai
revine n circulaie.
Dup caracterele morfologice i tinctoriale ale granulaiilor, se ntlnesc trei tipuri de
polimorfonucleare:
 neutrofile nesegmentate (3 - 5 % dintre leucocite) i segmentate (54 - 62 % dintre leucocite)
 eozinofile (1 - 3 % dintre leucocite)
 bazofile (0 - 0,75 % dintre leucocite).

Sistemul limfoid (imunocitar)


Sunt celule care n cursul elaborrii rspunsului imun reacioneaz specific cu un anumit antigen.
Ele se numesc imunocite sau limfocite. Originea lor este celula stem limfoidal, provenit din celula stem
pluripotent.
Limfocitul reprezint celula cheie a sistemului imun. El poart pe suprafaa sa molecule care au
capacitatea de a recunoate n mod specific diferite grupri determinante de specificitate (gds). Limfocitele
T au pe suprafaa lor un receptor al celulelor T, specific pentru un anumit epitop (RCT sau TCR).
Limfocitele B au pe suprafaa lor imunoglobuline specifice, mai ales IgM i IgD.
Populaia de limfocite care are receptori identici, ce recunosc un singur epitop, formeaz o clon,
care descinde din aceeai celul mam. n organism exist tot attea clone de limfocite cte tipuri de
determinani antigenici exist teoretic n natur. Specificitatea unui rspuns imun se bazeaz pe selecia i
activarea doar a acelor limfocite care prezint pe suprafaa lor receptori corespunztori epitopului
antigenului strin ptruns n organism.
ntr-un organism exist aproximativ 1012 limfocite, care aparin la 108 clone; o clon poate fi
format dintr-o singur celul sau dintr-un numr mare de celule de acelai tip. n sngele circulant
numrul limfocitelor este de aproximativ 1500 - 3000 celule/mm3, ceea ce reprezint 25 - 33% din
numrul total de leucocite.
Limfocitele sunt de dou tipuri:
 limfocite T, care sunt difereniate i maturate n timus
 limfocite B, care sunt difereniate i maturate la psri n bursa lui Fabricius, iar la mamifere n
viaa embrionar n splina i ficatul embrionar, i n viaa adult n mduva osoas.
Limfocitele T sunt mai numeroase, reprezentnd aproximativ 55 - 80% dintre limfocitele
circulante. Limfocitele provin din celula stem limfoidal, provenit la rndul su din celula stem
pluripotent. Unele celule merg spre timus, unde vor forma limfocite T, iar alte celule merg spre mduva
osoas, dnd natere limfocitelor B. Din punct de vedere funcional, limfocitele T i B se pot afla n trei
stadii de maturare:
 precursori (progenitori), care nu exprim pe suprafaa lor nici un fel de receptori pentru antigen; sunt
celule foarte tinere, n curs de maturare, care nu reacioneaz cu antigenul, din punct de vedere
imunologic fiind limfocite incompetente;
 celule virgine (naive, neangajate), care au pe suprafaa lor receptori specifici pentru un anumit antigen;
sunt celule imunocompetente, deoarece pot neutraliza antigenul corespunztor, dar nu au avut nc un
contact cu acesta i ca urmare sunt ntr-o stare de repaus;
 celule efectoare (angajate), care au venit n contact cu antigenul specific i, dup neutralizarea lui,
unele dintre ele devin celule de memorie, pstrnd amintirea acestuia. n acest fel, la rentlnirea cu
acelai antigen, celulele de memorie vor produce un rspuns imun rapid i amplificat, numit rspuns
imun secundar.
Limfocitele efectoare ale rspunsului imun au via scurt, dar cele de memorie au via lung, pot
trece mai mult de 10 ani fr s se divid. Ele se divid atunci cnd vin n contact cu antigenul cunoscut.
Celulele efectoare din seria T pot fi:
Limfocitele TC
Limfocitele TD (TDH)
Limfocitele TH
Limfocitele TS

Limfocitele TCS.

Limfocitele efectoare B sunt limfocite care vor produce imunoglobuline specifice din clasele IgA,
IgE, IgD, IgM i IgG.

Celulele NK, K, LAK


n rspunsul imun intervin i celulele NK (natural killer), celulele K (killer) i celulele LAK
(lymphokine activated killer).
a) Celulele NK reprezint o clas de limfocite granulare mari, distinct de limfocitele Tc, care
prezint capacitatea de a liza celulele tumorale i celulele infectate cu virusuri fr a mai depinde de
moleculele MHC i n absena anticorpilor specifici.
Celulele NK sunt celule cu via scurt. Ele nu prezint pe suprafaa lor markeri specifici CD4 sau
CD8 i nici receptori pentru antigen (cum au limfocitele B). De aceea se numesc i limfocite nude. Ele
pot distruge celulele infectate cu virusuri sau celulele tumorale n absena stimulrii printr-un antigen
specific.
Interaciunea dintre celulele NK i celula int se face printr-un receptor NK cu specificitate
nedefinit, care recunoate anumii determinani exprimai pe suprafaa celulelor tumorale sau a celor
infectate viral, numii determinani NK. Astfel celulele NK recunosc i distrug celulele int prin contact
celular direct, cu ajutorul unui factor litic, jucnd un rol important n rezistena natural a organismului;
ele intervin nainte de intrarea n aciune a limfocitelor Tc (care recunosc direct antigenul i MHC clasa I)
i naintea producerii de anticorpi specifici.
Activitatea celulelor NK este stimulat direct de toate categoriile de interferoni.
b) Celulele K (killer) sunt tot limfocite granulare mari, care prezint pe suprafaa lor receptori
pentru regiunea Fc a anticorpilor de tip IgG.
Mecanismul de aciune a celulelor K presupune ca celula infectat viral s exprime pe suprafaa sa
antigene caracteristice care s se cupleze cu IgG specifice lor. n acest fel IgG expun spre exterior
segmentul Fc (fragmentul cu regiuni constante ale lanurilor grele).
Celulele K, prin receptorii pentru Fc, recunosc celulele infectate viral nvelite de anticorpi de tip
IgG i determin liza acestora. Acest tip de aciune se numete citotoxicitate mediat de anticorpi (sau
citotoxicitate celular dependent de anticorpi, ADCC). Astfel celulele K distrug nespecific orice celul
int care a fost recunoscut specific de anticorpi IgG.
c) Celulele LAK (lymphokine activated killer) sunt celulele killer activate de concentraii mari de
limfokine. Celulele LAK sunt activate in vitro de IL2 sau de IFN. Limfocitele din sngele periferic
cultivate in vitro n prezena interleukinei 2 (IL2) i a antigenului tumoral devin intens citotoxice fa de
celulele tumorale omoloage.
Limfocitele Tc activate pot liza celulele int infectate cu un anumit virus dac sunt ndeplinite
dou condiii:
- celula int s fie infectat cu virusul care a provocat activarea limfocitelor Tc;
Ex: limfocitele Tc activate de virusul sarcomului Moloney nu lizeaz celulele normale i nici celulele
infectate cu alt virus.
- celula int trebuie s prezinte pe suprafaa sa aceleai antigene de histocompatibilitate de tip I ca i
limfocitele Tc. Celulele infectate cu acelai virus care a declanat activarea limfocitelor Tc, dar care au
origine diferit i antigene MHC clasa I diferite de ale limfocitelor Tc activate, nu vor fi lizate in vitro de
acestea.
Rolul moleculelor MHC clasa I n prezentarea i recunoaterea antigenelor virale existente pe
suprafaa celulelor infectate a fost dovedit experimental de Zinkernagel i Doherty n 1974.

Tipuri de celule care mediaz in vivo citotoxicitatea mediat celular


Organele limfoide
Organele limfoide primare se dezvolt precoce n viaa embrionar i conin celule precursoare ale
limfocitelor, avnd rol n dobndirea competenei imunitare a acestora. Ele sunt centre de proliferare,
maturare i diseminare a limfocitelor. La adult sufer o involuie progresiv, iar la vrstele naintate
aceast involuie este nsoit de o deficien a funciilor specifice imunitare. La nivelul lor activitatea
mitotic este intens i este independent de stimularea antigenic. Extirparea lor precoce duce la
reducerea numrului de limfocite i la diminuarea rapid a reactivitii imunitare.
Timusul este un organ limfoid voluminos, situat n partea superioar a mediastinului anterior; are
origine epitelial, derivnd din ectodermul perechii a III-a de pungi branhiale i din endodermul celei de a
III-a pungi faringiene. Este primul organ limfoid care apare la mamifere.
Timusul este alctuit din doi lobi mprii incomplet n lobuli de ctre septuri conjunctive. Lobulii
conin o reea de celule epiteliale, printre care se gsesc celule limfoide numite timocite. Timusul
evolueaz i involueaz cu vrsta. La om timusul are dimensiuni maxime la pubertate, apoi ncepe
involuia, dar nu dispare niciodat complet.
Bursa lui Fabricius este un organ limfoepitelial. Este un diverticul dorsal al intestinului terminal,
situat lng cloac. Celulele epiteliale ale bursei i celulele stem ale liniei limfoide prolifereaz n cursul
vieii embrionare i dou patru sptmni dup ecloziune. Bursa se menine pn la 4 - 6 luni, cnd
ncepe s involueze i se atrofiaz la maturitatea sexual.
Organele limfoide secundare reprezint sediul structural al rspunsului imun. Sunt de dou
categorii:
 entiti anatomice distincte i organizate (ganglionii limfatici, splina, plcile Peyer,
amigdalele);
 formaiuni limfoide difuze, neorganizate ca uniti structurale, care conin diferite categorii
de celule, predominnd limfocitele (esuturi limfoide asociate mucoasei gastrointestinale i
respiratorii).
Organele limfoide secundare sunt caracterizate printr-o limfopoiez diminuat sau inexistent. Ele
sunt populate tardiv cu limfocite maturate n organele limfoide primare i conin proporia covritoare a
limfocitelor. n prezena stimulului antigenic limfocitele prolifereaz i se difereniaz, rezultnd celule
efectoare i de memorie imunologic.
Ganglionii limfatici sunt organe limfoide secundare situate pe traseul vaselor limfatice. n
structura ganglionului limfatic se distinge stroma, alctuit din fibre i celule reticulare, printre care se
gsesc celule limfoide, macrofage, vase limfatice i sangvine. Ganglionii sunt acoperii la suprafa de o
capsul conjunctiv.

Zona cortical este divizat n dou: corticala extern, foarte bogat n limfocite B i corticala
profund, bogat n limfocite T. Zona medular conine un esut limfoid dens, sub forma unor cordoane,
n care predomin limfocitele B, asociate cu macrofage i celule T.
Ganglionii limfatici filtreaz limfa i fagocitele ganglionare rein componentele nonself (bacterii,
toxine). Ei reprezint suportul material al proliferrii limfocitelor dup stimularea antigenic.
Splina este cel mai mare organ limfoid, cu rol foarte important n imunitatea organismului. Ea
prezint la exterior o capsul conjunctiv, de la care pornesc trabecule ce mpart esutul splenic n
compartimente. n trabeculele conjunctive se gsesc artere trabeculare, care dau n parenchimul splenic
ramificaii laterale acoperite de un manon dens de esut limfoid, cu limfocite T n zona intern i limfocite
B n zona extern, formnd foliculi.
3. ANTIGENELE COMPLEXULUI MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE
Celulele animale exprim pe suprafaa lor glicoproteine puternic antigenice i deosebit de
polimorfe, care confer o specificitate biochimic esuturilor fiecrui individ. Aceste molecule joac un rol
foarte important n respingerea transplanturilor de organe de la o specie la alta, de la un organism la altul,
fiind numite antigene ale complexului major de histocompatibilitate (MHC). Antigenele complexului
MHC alctuiesc trei clase distincte de proteine: I, II, III.
Antigenele acestui complex sunt codificate de o regiune genetic distinct, numit complex major
de histocompatibilitate, care la om este format din mai multe gene codominante localizate pe braul scurt
al cromozomului 6, fiind un fragment de ADN lung de 2000-4000 perechi de kilobaze. La om complexul
major de histocompatibilitate se numete sistem HLA (Human Leucocyte Antigen), deoarece a fost
evideniat pentru prima dat pe suprafaa leucocitelor umane (Dausset, 1954).
Totalitatea genelor MHC transmise n bloc constituie un haplotip. Deoarece un descendent va avea
un haplotip matern i unul patern, numrul de combinaii aleatorii haplotipice este imens, de ordinul a
ctorva zeci de mii, iar cel al fenotipurilor este apreciat la 1090. Ca urmare, ansa de a ntlni doi indivizi
cu acelai haplotip este neglijabil, astfel explicndu-se importana sistemului HLA n determinarea
paternitii i n respingerea grefelor. Respingerea este de natur imun, n sensul c se produce o activare
a sistemului imun al receptorului, prin recunoaterea ca non-self a antigenelor de histocompatibilitate de
pe suprafaa celulelor grefei.
1) Antigenele complexului major de histocompatibilitate clasa I
Sunt glicoproteine membranare prezente pe suprafaa tuturor celulelor animale. Sunt formate din
dou lanuri polipeptidice asociate necovalent: lanul glicolizat i lanul 2-microglobulina.
 Lanul este alctuit din 5 regiuni: 3 regiuni extracelulare 1, 2 i 3, fiecare cu cte 90 aminoacizi,
o regiune transmembranar cu 23 aminoacizi i o regiune intracitoplasmatic spre extremitatea
COOH, cu 25 32 aminoacizi. Regiunile 1 i 2 sunt asemntoare i prezint o structur variabil,
alctuind situsul de legare specific a antigenului. Regiunea 3 prezint omologie cu regiunile
constante ale moleculelor de imunoglobulin.
 Lanul 2-microglobulin este neglicolizat, are o greutate molecular mic (12 kdal) i este ataat
necovalent regiunii 3. Are o structur similar domeniilor constante ale lanurilor grele ale
imunoglobulinelor. Sinteza 2-microglobulinei este codificat de gene situate pe cromozomul 15
uman, nu printre genele MHC. Lanul 2-microglobulin poate exista i singur n ser sau n urin.
Asigur transportul intracelular al moleculelor MHC clasa I i ancorarea acestui complex la nivelul
membranei celulare.
Antigenele, mai ales cele endogene, se leag de moleculele MHC clasa I ntr-o scobitur dintre
domeniile 1 i 2. Antigenele MHC clasa I sunt recunoscute de limfocitele TC prin determinantul lor CD8,
care se prinde de regiunea constant 3, n timp ce antigenul non-self situat ntre 1 i 2 este recunoscut de
ctre receptorul limfocitului TC (TCR).

2) Antigenele complexului major de histocompatibilitate clasa II


Antigenele MHC clasa II sunt exprimate pe suprafaa limfocitelor B, a monocitelor, a
macrofagelor, pe suprafaa altor celule care prelucreaz i prezint antigenul, a celulelor epiteliale i a
celulelor endoteliilor vasculare.
Sunt alctuite din dou lanuri polipeptidice glicolizate, i , fiecare alctuit din 4 domenii: dou
domenii extracelulare cu 90 aminoacizi ctre extremitatea NH2, notate 1 i 2 pentru lanul , respectiv
1 i 2 pentru lanul ; un domeniu transmembranar cu 30 aminoacizi i un domeniu intracitoplasmatic
cu 10 - 15 aminoacizi la extremitatea COOH. Domeniile 2 i 2 prezint o structur similar domeniilor
constante ale moleculelor de imunoglobuline. Domeniile 1 i 1 sunt variabile i formeaz o fant n care
se prinde antigenul care va fi prezentat limfocitelor TH. Antigenul va fi recunoscut de ctre receptorul
limfocitului TH, iar moleculele complexului major de histocompatibilitate clasa II vor fi recunoscute de
determinantul CD4 de pe suprafaa celulei T helper.
Antigenele MHC din clasa I i clasa II au importan deosebit n aprarea antitumoral i
antiviral , precum i n procesul de respingere a grefelor de organe i esuturi.
3) Antigenele complexului major de histocompatibilitate clasa III
Proteinele MHC din clasa III nu se gsesc n mod normal pe suprafaa celulelor, dar sunt
componente ale sistemului complement (C2, C4, factorul B). Fixarea de complexele antigen anticorp i
activarea n cascad a componentelor complementului duc n final la distrugerea antigenului sau la liza
celulelor care conin antigene strine.

Structura moleculelor complexului major de histocompatibilitate


clasa I (A) i clasa II (B)
4. BAZELE GENETICE ALE SINTEZEI ANTICORPILOR
n genomul celulelor embrionare ale liniei germinative ale limfocitelor B exist trei grupe distincte
de gene nelinkate, care controleaz sinteza lanurilor uoare de tip (L), a lanurilor uoare de tip k (Lk) i
a lanului greu (H). La om genele pentru lanul L sunt situate pe cromozomul 22, cele pentru lanul Lk pe
cromozomul 2, iar cele pentru lanul H pe cromozomul 14.
Regiunile variabile i zonele hipervariabile ale lanurilor uoare (L) ale imunoglobulinelor sunt
codificate de genele V (notate de la V1 la V300), regiunile constante de gena CL, iar ntre ele se gsete o
zon de jonciune codificat de 4 5 gene J, notate J1 J4 (J5).
Pentru sinteza lanului uor una din cele 300 de gene V se leag de una din genele J i de gena
pentru regiunea constant; ADN-ul format este transcris ntr-un ARN premesager, apoi ntr-un ARN
mesager i se ajunge la sinteza lanului uor.

Sinteza lanurilor grele ale imunoglobulinelor este controlat de un numr foarte mare de gene care
codific regiunea variabil (genele V, de la 1 la 400), gene care codific regiunea de diversitate (notate de
la D1 la D20), gene care codific regiunea de jonciune (J1 J4) i gene ale regiunii constante, notate , , ,
, .
Pentru sinteza lanului greu una din genele V se leag de o anumit gen D i o anumit gen J,
precum i cu una din cele 5 gene ale regiunii constante. Acest ADN este transcris ntr-un ARN
premesager, apoi ntr-un ARN mesager i n final n citoplasm are loc sinteza lanului greu.
Exist mai multe variante de recombinare, datorit existenei celor 4 - 5 gene de jonciune i a
numrului foarte mare de gene pentru regiunile variabile. Antigenul ptruns n organism va activa doar
acele combinaii de gene specifice lui.
Deoarece fiecare molecul de imunoglobulin are dou lanuri grele i dou lanuri uoare identice
ntre ele, fiecare situs de combinare al moleculei va fi alctuit din combinaia VH + VL. Potenialul de
variaie este mai mare, deoarece exist i numeroase mutaii somatice spontane care apar n cursul
diferenierii limfocitelor B.
5. PRODUCEREA ANTICORPILOR MONOCLONALI PRIN TEHNICA
HIBRIDOMULUI
Rspunsul imun fa de un anumit antigen const n activarea mai multor clone de limfocite B,
deoarece antigenul poate prezenta un numr mai mare de epitopi. Fiecare clon de limfocite B va
determina sinteza de anticorpi specifici unui anumit tip de epitop. Astfel, un antigen cu mai muli epitopi
va duce la sinteza mai multor tipuri de anticorpi, fiecare anticorp fiind specific unui anumit epitop.
Un antiser va conine astfel un amestec de anticorpi diferii fa de un antigen dat, n funcie de
numrul de epitopi prezentai de antigen. Un asemenea antiser se va numi antiser policlonal.
O serie de cercetri, mai ales medicale, necesit ns folosirea unor antiseruri uniforme molecular,
care s conin un singur tip de anticorpi, specifici pentru un anumit epitop. Astfel de anticorpi, cu
specificitate strict definit pentru un singur epitop, se numesc anticorpi monoclonali, iar serul care i
conine se numete antiser monoclonal.
Teoretic anticorpii monoclonali s-ar putea obine prin simpla cultivare in vitro a unei singure celule
B, care a fost activat de un anumit epitop i care va sintetiza deci un singur tip de anticorpi, monopecific.
Dificultatea obinerii de anticorpi monoclonali const n faptul c limfocitele B nu sunt uor de meninut
in vitro sub form de culturi celulare. Acest neajuns a fost ndeprtat prin fuzionarea celulelor B izolate de
la oareci imunizai n prealabil cu un anumit antigen cu celulele unei linii tumorale mielomatoase.
Celulele tumorale i pierd aderena de substrat i inhibiia de contact, n schimb sunt capabile de diviziune
i cultivare in vitro nelimitate.
O astfel de fuzionare a fost realizat n 1975 de ctre Khler i Milstein, care au obinut celule
hibride, pe care le-au denumit hibridoame (hybrid - mieloma), iar tehnica folosit a fost denumit tehnica
hibridomului. Ei au selectat acele clone de celule hibride care produceau anticorpi specifici doar pentru
un singur tip de epitop, anticorpi puri, monospecifici, care au primit numele de anticorpi monoclonali.
Etapele tehnicii hibridomului sunt:
- imunizarea animalelor de laborator (oareci, obolani) cu antigenul de interes (de exemplu hematii de
oaie), prin inoculare repetat intraperitoneal sau intravenoas;
- prelevarea de la animalele inoculate a splinei bogat n limfocite B (ce produc anticorpi monoclonali i
au dou enzime funcionale, timidinkinaza TK i hipoxantin-guanozin-fosforibozil-transferaza HGPRT) i degradarea mecanic a acesteia;
- cultivarea in vitro n paralel a unei linii tumorale mielomatoase, obinut prin mutagenez chimic,
lipsit de capacitatea de a produce anticorpi (Ig-) i TK-, respectiv HGPRT-;
- fuzionarea in vitro a celulelor limfocitare B cu celulele mielomatoase prin cocultivare aseptic pe
medii de cultur selective, n proporie de 10:1; fuziunea este stimulat de prezena unor substane

(PEG = polietilenglicol; dimetil-sulfoxid) sau a virusului paragripal Sendai, care are acelai rol de
favorizare a fuzionrii celulelor; limfocitele B sunt Ig+, TK+, HGPRT+, iar celulele mielomatoase sunt
Ig-, TK-, HGPRT-; se vor forma heterocarioni (celule hibride, ce conin nuclei de la ambele celule
parentale);
- selectarea celulelor hibride prin cultivarea lor timp de 4 5 zile pe medii selective, care nu permit
creterea celulelor parentale sau a altor hibrizi dect limfocit B celul mielomatoas;
Se poate folosi mediul selectiv HAT (hipoxantin-aminopterin-timidin). Pe acest mediu nu pot
crete celulele parentale (celule B, mielocite) i nici hibrizii mielom x mielom sau celul B x celul B.
Mediul HAT permite creterea doar a hibrizilor celul B x mielom datorit ingredientelor din compoziia
sa. Aminopterina este un omolog al acidului folic i prezena sa n mediul HAT blocheaz biosinteza
acizilor nucleici prin inhibarea sintezei bazelor purinice i pirimidinice, de aceea celulele mielomatoase nu
se dezvolt. n prezena aminopterinei celulele sunt obligate s foloseasc surse externe de baze
nucleotidice, motiv pentru care mediul HAT conine hipoxantin i timidin. n celulele normale
(HGPRT+TK+) hipoxantina este convertit de enzima HGPRT az n baze purinice necesare biosintezei
de acizi nucleici. Timidina este fosforilat de timidinkinaz la timidin monofosfat (TMP), apoi la TTP i
folosit n biosinteza bazelor pirimidinice.
Limfocitele B nu supravieuiesc mult timp in vitro, chiar dac sunt HGPRT+TK+, cultivarea
nelimitat fiind o caracteristic a celulelor tumorale.
6. PARTICULARITILE I ETAPELE RSPUNSULUI IMUN
Un antigen ptruns n organism vine n contact cu sistemul imun al acestuia i declaneaz o serie
de reacii n cascad, care vizeaz neutralizarea i eliminarea lui din esuturile organismului agresat.
Aceste reacii implic:
sinteza de anticorpi specifici de ctre limfocitele B activate i maturate, ajunse n stadiul de
plasmocite, sintez care constituie un rspuns mediat de anticorpi specifici, numit rspuns imun
umoral;
proliferarea clonelor de limfocite care au receptori specifici pentru determinantul antigenic; prin
intervenia direct a celulelor T efectoare (n special TC, dar i NK, K, LAK) acestea determin
distrugerea celulei int ce prezint pe suprafaa ei antigene strine sau tumorale, ceea ce constituie
un rspuns imun mediat celular.
n cursul acestor reacii complexe, celulele imunocompetente se activeaz, prolifereaz i se
difereniaz n:
 celule efectoare ale rspunsului imun:
o limfocite B
o limfocite T
 celule de memorie imunologic.
1) Declanarea unui rspuns imun umoral
Rspunsul imun de tip umoral presupune urmtoarele etape:
1) ptrunderea antigenului strin n organism pe diferite ci: prin tegument, prin mucoase (respiratorie,
gastrointestinal, urogenital, conjunctival), pe calea circulaiei sangvine;
2) captarea, nglobarea, prelucrarea i prezentarea antigenului pe suprafaa celulelor accesorii ale
sistemului imun, numite celule prezentatoare de antigen (APC);
n elaborarea rspunsului imun intervin i coopereaz celulele accesorii i celulele efectoare
(limfocitele B i T). Celulele prezentatoare de antigen nglobeaz antigenele corpusculare prin fagocitoz,
iar pe cele moleculare prin pinocitoz. Aceste celule prezint pe suprafaa lor antigenele prelucrate n
asociere cu moleculele complexului major de histocompatibilitate clasa I sau clasa II.

Celulele prezentatoare de antigen sunt de mai multe feluri: din linia fagocitar (monocite,
macrofage), din linia limfoid (limfocite B), celule dendritice.
Antigenele corpusculare exogene vor fi prelucrate i prezentate de ctre macrofage i limfocite B.
Macrofagul fagociteaz antigenele exogene corpusculare formnd o vezicul numit fagosom.
Fagosomul se va uni cu lizosomul macrofagului, alctuind un fagolizosom. n interiorul acestuia se
realizeaz o proteoliz a antigenului sub aciunea enzimelor lizosomale. Degradarea materialului fagocitat
se face cu protejarea epitopilor antigenului, care vor fi asociai cu moleculele complexului major de
histocompatibilitate clasa II n interiorul macrofagului, la nivelul domeniilor variabile 1 i 1 ale
complexului. Se formeaz astfel complexul de prezentare a antigenului, care este expus pe suprafaa
macrofagului i este prezentat limfocitelor TH (CD4+).
Antigenul (epitopul) va fi recunoscut de receptorul specific pentru antigen existent pe suprafaa
limfocitului TH, iar moleculele MHC clasa II vor fi recunoscute de determinantul CD4 al celulei TH.
Deoarece recunoaterea antigenului se face numai n corelaie cu recunoaterea complexului major de
histocompatibilitate, prezentarea antigenelor exogene de ctre macrofag se realizeaz sub restricie de
MHC.
3a) activarea limfocitelor TH cu receptor specific pentru antigen, care se face n trei faze:
recunoaterea complexului de prezentare a antigenului de ctre limfocitul TH (a epitopului i a MHC
clasa II);
sinteza de ctre macrofag a interleukinei 1 (IL1) i eliminarea acesteia n mediu, stimulnd astfel
limfocitele TH s sintetizeze interleukina 2 (IL2). IL2 activeaz limfocitele TH care recunosc antigenul,
deoarece acestea prezint un receptor pentru IL2. Limfocitele TH activate prolifereaz, avnd loc o
expansiune clonal;
cooperarea dintre limfocitele TH activate de ctre interleukina 2 i limfocitele B care au pe suprafaa
lor receptori specifici pentru acelai epitop; limfocitele TH activate sintetizeaz interleukina 2 (IL2),
interleukina 4 (IL4), interleukina 5 (IL5) i interferonul (IFN), care au rolul de a activa doar acele
limfocite B care au receptori specifici pentru antigenul prezentat limfocitelor TH.
4) proliferarea i maturarea limfocitelor B activate, care trec n stadiul de plasmocite; receptorii
limfocitelor B sunt reprezentai de imunoglobuline monomere de tip IgM i IgD; plasmocitele sintetizeaz
anticorpi specifici pentru antigenul prezentat de macrofag.
Limfocitele B ca atare pot fi celule prezentatoare de antigen. Cooperarea dintre limfocitele B ca
APC i celulele TH are loc n felul urmtor:
recunoaterea antigenului de ctre limfocitul B prin receptorii si pentru antigen (imunoglobuline din
clasele IgM i IgD);
internalizarea i prelucrarea antigenului n interiorul limfocitului B, cu menajarea epitopilor;
asocierea intracelular a epitopilor cu moleculele complexului major de histocompatibilitate clasa II;
prezentarea complexului epitop MHC clasa II ctre limfocitele TH;
Epitopul va fi recunoscut de receptorul specific pentru antigen existent pe suprafaa limfocitului
TH, iar moleculele MHC clasa II vor fi recunoscute de determinantul CD4 al celulei TH.
3b) activarea limfocitelor TH, care prezint receptor specific pentru antigenul prelucrat i prezentat de
limfocitul B; limfocitele TH sintetizeaz interleukina 2 (IL2), care determin activarea i proliferarea
limfocitelor B, ce recunosc specific antigenul (limfocitele B au pe suprafaa lor receptori pentru IL2);
limfocitele B maturate sintetizeaz anticorpi specifici antigenului implicat.
Rspunsul imun umoral const deci n producerea de anticorpi specifici antigenului care a
declanat rspunsul. Sinteza anticorpilor se face n urma cooperrii multiple ntre APC, limfocitele TH i
limfocitele B. Efectul anticorpilor circulani const n inactivarea virusurilor din snge, neutralizarea
toxinelor bacteriene i distrugerea bacteriilor. Imunitatea mediat umoral este transferabil de la un
organism la altul prin intermediul serului care conine anticorpi (ser imun). Existena anticorpilor
circulani st la baza stabilirii unui serodiagnostic n laborator, prin reacii serologice.

2) Rspunsul imun de tip celular


Rspunsul imun de tip celular este declanat n special n cazul antigenelor endogene (antigene
tumorale sau antigene specifice celulelor infectate viral). Aceste antigene endogene se asociaz
intracelular cu moleculele complexului major de histocompatibilitate clasa I, care se gsesc pe suprafaa
tuturor celulelor nucleate din organism. MHC clasa I prezint un situs specific de legare a antigenului,
reprezentat de domeniile variabile 1 i 2.
Etapele unui rspuns imun celular sunt urmtoarele:
 infectarea organismului cu antigenul viral, pe o cale specific;
 contactul ntre virus i celulele sensibile ale organismului gazd;
 ptrunderea virusului n celul, ndeprtarea nveliului proteic viral (genomul viral rmne liber n
celul), transcrierea informaiei genetice virale ntr-un ARNm, urmat de sintez de proteine virale;
 formarea complexului antigen viral molecule ale MHC clasa I;
 recunoaterea complexului de ctre limfocitele TC (CD8+) sub restricie de MHC; receptorul specific al
limfocitelor TC va recunoate antigenul viral exprimat pe suprafaa celulei infectate, iar determinantul
CD8 va recunoate moleculele MHC clasa I; limfocitele TC elibereaz o protein citotoxic
(perforin), care duce la liza celulei int, n prezena ionilor de Ca2+.
n acelai mod sunt distruse celulele tumorale din organism, care prezint pe suprafaa lor antigene
tumorale, recunoscute n mod specific de receptorul limfocitelor TC. n imunitatea de tip celular sunt
implicate i celulele NK (natural killer), K (killer) i LAK (lymphokine activated killer).
Imunitatea mediat celular confer organismului protecie fa de infeciile cu localizare
intracelular (bacteriene, fungice, virale), rezisten fa de multe tipuri de celule tumorale i are un rol
important n respingerea alogrefelor.

Stabilirea de conexiuni ntre celula prezentatoare de antigen i limfocitul T


3) Rspunsul imun primar i secundar
a) Rspunsul imun primar
La primul contact al unui organism cu antigenul se declaneaz un rspuns imun primar, care
variaz n funcie de tipul i doza de antigen, calea de administrare a antigenului, modul n care antigenul
este prelucrat i prezentat celulelor imunocompetente, starea de imunocompeten a gazdei.
Rspunsul imun primar evolueaz n 4 faze:
1) faza de laten (de lag) este perioada de timp cuprins ntre momentul contactului cu antigenul i cel al
apariiei primilor anticorpi, care la om i la o serie de animale sunt reprezentai de imunoglobuline din
clasa M. Aceast faz dureaz 2 - 5 zile, timp n care antigenul este fagocitat, prelucrat i prezentat de
ctre celulele prezentatoare de antigen limfocitelor T i B;

2) faza de cretere logaritmic se caracterizeaz prin apariia primilor anticorpi, de tip IgM, a cror
concentraie crete exponenial, atingnd un maxim la 12 - 14 zile de la infecie;
3) faza de platou dureaz 2 3 sptmni, timp n care anticorpii de tip IgM au un titru constant;
4) faza de declin const n scderea treptat a concentraiei anticorpilor de tip IgM, astfel nct ei dispar
dup aproximativ 4 sptmni de la contactul cu antigenul. Persistena lor n ser dup aceast perioad
sugereaz o cronicizare a infeciei respective.
Din a doua sptmn de boal ncep s fie sintetizai anticorpi de tip IgG, a cror concentraie
crete exponenial, atingnd un maxim aproximativ la 4 sptmni; perioada de platou pentru aceti
anticorpi poate avea o durat mare de timp, iar sinteza lor poate continua ani de zile.
Rspunsul imun primar este rapid, puin specific i temporar.
b) Rspunsul imun secundar
Reexpunerea unui organism la aciunea aceluiai antigen determin declanarea unui rspuns imun
secundar, care se deosebete de cel primar prin cteva particulariti:
- stimulul antigenic necesar declanrii unui rspuns imun este redus (cantitatea de antigen poate fi mai
mic);
- perioada de laten este mult mai scurt, iar durata fazelor de platou i de declin este prelungit;
- titrul anticorpilor este de 10 - 100 de ori mai ridicat, iar persistena la acest nivel a titrului este
prelungit;
- n rspunsul imun secundar anticorpii sunt n special de tip IgG, protejnd organismul fa de reinfecia
cu acelai antigen;
- anticorpii prezint o afinitate crescut pentru antigenul respectiv, fenomen numit maturarea
afinitii.
La baza declanrii unui rspuns imun secundar st existena fenomenului de memorie
imunologic, urmare a existenei limfocitelor B i T de memorie, care se formeaz dup un rspuns imun
primar.
Limfocitele B de memorie sunt celule sensibilizate n raport cu un antigen specific lor, capabile n
cazul unei reinfecii s produc timpuriu i timp ndelungat anticorpi, mai ales de tip IgG, caracterizai
printr-o afinitate crescut fa de antigenul corespunztor.
Limfocitele T de memorie sunt activate rapid la doze mici de antigen, ca urmare a existenei pe
suprafaa lor a unor receptori celulari cu afinitate mare pentru antigenul respectiv.
Diferenele dintre un rspuns imun primar i unul secundar sunt att de ordin cantitativ, ct i
calitativ. Diferenele cantitative constau n sinteza n cazul unui rspuns imun secundar a unor cantiti
foarte mari de anticorpi (de tip IgG), care se menin o perioad ndelungat de timp; diferenele calitative
se refer la faptul c dup stimulul primar imunoglobulinele sintetizate sunt din clasa IgM, iar dup cel
secundar sunt din clasa IgG.

(http://click4biology.info/c4b/11/hum11.1.htm)

7. REACIILE DE HIPERSENSIBILITATE
Rspunsurile imune improprii sau exagerate fa de un antigen cu care organismul a mai venit
anterior n contact constituie o reacie de hipersensibilitate.
n funcie de intervalul de timp dintre contactul cu antigenul declanator al reaciei i momentul
manifestrilor specifice, reaciile de hipersensibilitate se mpart n mai multe categorii (dup Gell i
Coombs):
1) Hipersensibilitatea imediat de tip I (anafilactic), declanat la aproximativ 12 ore de la
contactul cu antigenul declanator, const n reacii anafilactice mediate de anticorpi IgE (reagine)
sau alergii (atopii). Reaciile anafilactice se pot manifesta chiar i la 15-30 minute de la contactul
cu antigenul, care are loc n circulaie. n cazul alergiilor, contactul cu antigenul are loc pe
tegumente sau mucoase.
Alergenul poate fi inhalabil, inoculabil sau ingerabil, reprezentat de polen, spori de mucegai, praf,
pr de animale, diferite alimente (ou, lapte, cpuni, ciocolat etc.), seruri, medicamente, veninul unor
insecte.
n hipersensibilitatea de tip I, alergenul care a depit barierele mucoasei este preluat de celula
prezentatoare de antigen i prezentat limfocitelor Th, care vor sintetiza IL4 i IL13, care vor aciona asupra
limfocitului B, activndu-l. Acesta va deveni plasmocit i va sintetiza anticorpi IgE n loc de IgM.
Imunoglobulinele E se vor fixa citofil pe mastocite i bazofile, pe care le vor sensibiliza. IL5 sintetizat de
limfocitele Th va determina eozinofilie. Mastocitele pot rmne sensibilizate luni de zile, IgE fixate pe
suprafaa lor fiind foarte stabile.
n organism, mastocitele din mucoase reacioneaz mai ales n cazul alergiilor alimentare sau
infecioase, iar cele ale esutului conjunctiv n cazul alergiilor tractului respirator. Mai pot interveni i alte
tipuri de celule: monocitele, macrofagele alveolare, eozinofilele i trombocitele.
Activarea mastocitelor sensibilizate are loc la un nou contact cu alergenul. Acesta va interaciona
cu IgE de pe mastocite i prin degranulare, datorit influxului de Ca2+ sunt eliberai mediatorii din
mastocit: histamin, heparin, triptaz, serotonin, acid arahidonic, leucotriene.
Substanele eliberate n proporii diferite determin manifestrile alergiilor: bronhoconstricie,
secreie de mucus, edem al mucoasei respiratorii, urticarie, prurit, dureri de cap, n funcie de calea de
ptrundere a alergenului.
Cea mai grav form este anafilaxia sistemic, produs de alimente sau medicamente, manifestat
prin urticarie generalizat, spasm al muchilor bronici, edem laringian, dispnee sever, cianoz, oc
hipotensiv, tulburri gastrointestinale, tahicardie, stop cardiac i respirator.
Pentru detectarea hipersensibilitii se poate efectua un test intradermic cu o doz mic de alergen.
La cteva minute de la inocularea intradermic a unei mici doze de alergen, la persoanele sensibilizate,
apare o papul urticarian nconjurat de o aureol congestiv nsoit de prurit, fenomene care dispar
dup o or. Se iau msuri de precauie prin folosirea unor diluii mari de alergen i administrare de
medicamente antialergice n cazul unor manifestri severe.
2) Hipersensibilitatea de tip II (de tip citotoxic) const n reacii citolitice sau citotoxice,
mediate de anticorpi specifici fa de antigenele de pe suprafaa celulelor, cu participarea
complementului, celulelor K i macrofagelor. Ea are loc la 24, 48 sau 72 de ore de la contactul cu
antigenul, care deseori este o hapten.
Acest tip de hipersensibilitate se datoreaz anticorpilor IgG, mai rar IgM, fixatori de complement,
care se formeaz n organism fa de antigene situate la suprafaa unor celule sau esuturi. Dup legarea
anticorpilor de celula int cu activarea pe cale clasic a complementului, are loc citoliza consecutiv. n
acest tip de hipersensibilitate se ncadreaz toate procesele de citoliz imun prin fixare de complement, ca
de exemplu: reaciile posttransfuzionale, n care IgM interacioneaz cu antigenele de grup ABO

eritrocitare, le aglutineaz, activeaz complementul seric i se produce hemoliza intravascular; anemia


hemolitic a nou-nscutului, datorat incompatibilitii Rh, este produs de interaciunea anticorpilor
materni IgG ant Rh (factorul D) cu antigenele de pe suprafaa eritrocitelor nou-nscutului. Reacia de tip II
apare i n unele infecii streptococice, micoplasmatice, virale, parazitare.
Pentru c inta celular este prea mare ca s fie fagocitat, n reacia de hipersensibilitate de tip
citotoxic coninutul granulaiilor i lizozomilor este eliberat la contactul cu celula sensibilizat prin
exocitoz. Reaciile citotoxice dependente de anticorpi sunt consecutive aloimunizrii, adic au loc dup
contactul cu antigenele unui organism al aceleiai specii, dar cu o alt variant alelic a moleculelor CMH.
3) Hipersensibilitatea de tip III (dependent de complexele imune) const n reacii mediate de
complexe imune cu participarea complementului.
Antigenele care duc la astfel de hipersensibilitate sunt bacteriene, virale, parazitare (Streptococcus
pyogenes, Mycobacterium leprae, Treponema pallidum, Plasmodium sp., virusul hepatitei B, virusul
Epstein Barr).
Se formeaz complexe imune antigen-anticorp (IgM i IgG) n cantitate mare sau persistente n
circulaie, acestea ptrund prin epiteliul vascular i activeaz complementul, depunndu-se eventual n
esuturi. Fragmentele C3a i C5a cresc permeabilitatea vascular, iar C5a, fiind un factor chemotactic,
determin afluxul de polimorfonucleare, ale cror enzime lizozomale vor produce alterarea membranei
bazale. Antigenele care duc la formarea de complexe imune pot fi exogene, ptrunznd n mod repetat n
organism, dar i endogene, n bolile autoimune.
Reacia de tip Arthus
Este o reacie local ntr-un teritoriu limitat a complexelor Ag-Ac, determinat de inocularea
repetat de antigen la nivelul tegumentului, experimental. Este o reacie n interiorul vaselor i n jurul
pereilor vasculari. Se produce o necroz dermic.
Maladia pulmonar a fermierilor (plmnul de fermier) se produce prin inhalarea prafului de la
fnul mucegit, iar maladia pulmonar a cresctorilor de psri se produce prin expunere repetat la
antigene aviare. Lucrtorii care particip la procesul de fabricare a brnzeturilor fermentate de mucegaiuri
inhaleaz spori de mucegai.
Boala serului este o reacie de tip III generalizat, la pacieni crora li s-au administrat, n scop
terapeutic, doze mari de ser imun heterolog (de exemplu ser antidifteric sau antitetanic preparat pe cai).
Boala se manifest prin febr, adenopatie, splenomegalie, eritem i urticarie tegumentar,
proteinurie. Titrul proteinelor heterologe ncepe s scad dup 7-10 zile n ser, datorit formrii
complexelor imune, care se pot depune pe pereii vaselor, mai ales n ansele glomerulare renale.
Se descriu trei tipuri de reacii n boala serului:
- reacia de tip imediat are loc n 24 de ore, cu necroz tisular la locul injectrii serului, la
persoane cu reinjecia la 12-18 zile de la prima injecie de ser heterolog;
- reacia de tip accelerat, cu incubare de 2-6 zile, apare la persoanele la care reinjecia de ser
heterolog survine la 2-6 luni de la prima injecie; reacia local este foarte puternic, poate surveni
moartea;
- o reacie la 20-25 de zile se manifest dup administrarea unei singure injecii de ser heterolog i
se produce la 50% dintre indivizi.
4) Hipersensibilitatea de tip IV (ntrziat) cuprinde reacii mediate de limfocitele T
sensibilizate, fiind rezultatul unei interaciuni exagerate dintre antigen i efectorii imunitii
celulare.
Hipersensibilitatea ntrziat cuprinde toate reaciile care necesit mai mult de 12 ore pentru a se
manifesta. Prezint urmtoarele particulariti:
- apariie lent, cu amplitudine maxim la 24-72 de ore de la contactul secundar cu antigenul;

- nu afecteaz un anume organ int, ci este sistemic, cu simptome generalizate, ceea ce o


deosebete de reaciile de hipersensibilitate imediat;
- nu se produce liz celular, cu excepia cazurilor grave;
- nu este dependent de factorii umorali; depinde de limfocitele T sensibilizate;
- se manifest n esuturile vascularizate i nevascularizate.
Dup stimularea limfocitelor Th de ctre microorganisme cu localizare intracelular, acestea
secret limfokine, care vor activa macrofagele i vor atrage i alte celule n focarul inflamator.
Macrofagele activate vor secreta mediatori biologic activi, enzime lizozomale cu aciune antibacterian.
Dac microorganismul nu este ndeprtat, antigenele persistente vor determina o hipersensibilitate cronic
local, iar limfocitele Tdh sensibilizate vor elibera continuu limfokine, care determin acumularea n focar
a tot mai multe macrofage neinfectate. Acestea pot fuziona, formnd celule gigante, iar continuarea
stimulrii antigenice duce la o reacie granulomatoas.
Sunt cunoscute trei tipuri de reacie de hipersensibilitate de tip ntrziat:
- reacia ntrziat de tip tuberculinic, la 48 - 72 ore de la contactul cu antigenul, cu o induraie local,
produs de antigen de tip tuberculin; histologic se caracterizeaz prin infiltrare limfocitar i
mononuclear;
- hipersensibilitatea ntrziat de contact, la 48 - 72 ore de la contactul cu antigenul, maniferstat printro eczem produs de anumite substane aplicate pe tegument;
- hipersensibilitatea ntrziat granulomatoas, manifestat n 21-28 de zile, cu o consisten fibroas la
nivel local, produs de complexe Ag-Ac persistente.
Testarea reactivitii mediat celular se face prin intradermoreacie. Majoritatea persoanelor
rspund cu reacii de tip ntrziat la inocularea intradermic a antigenelor de candida, tuberculin etc. Un
rspuns negativ indic o deficien a reactivitii mediat celular, iar o reacie exagerat semnific o
hipersensibilizare la antigenul utilizat. Cea mai utilizat reacie este reacia Mantoux de testare a
reactivitii la tuberculin. Reacii asemntoare sunt produse de antigene ca: lepromina, brucelina.
Tuberculina este o substan proteic, netoxic, pe care celulele de M. tuberculosis o elimin
extracelular. Este inofensiv pentru organismele umane care nu au venit n contact cu M. tuberculosis sau
cu componente antigenice ale celulelor sale. La organismele infectate, reinjectarea celulelor de
M. tuberculosis vii sau moarte ori a tuberculinei, determin o reacie local de hipersensibilitate ntrziat
sever, cu producere de leziuni tisulare: induraie local, eritem cu reacie inflamatorie intens, puroi i
necroz, M. tuberculosis multiplicndu-se repede n esutul necrotic.
8. MECANISME SPECIFICE DE APRARE ANTIVIRAL
a. Imunitatea umoral antiviral
n urma infeciei cu un virus, organismul gazd rspunde prin producere de anticorpi specifici,
detectabili n ser, care pot s fie de tip IgM, IgG, IgA i foarte rar IgE.
Sinteza acestor imunoglobuline este determinat de factori antigenici reprezentai de proteine
virale, fie de la suprafaa virusului (de la nivelul capsidei la virusurile nude sau de la nivelul peplosului la
virusurile nvelite), fie de la interiorul acestuia (proteine interne). n cazul administrrii unor vaccinuri
virale inactivate, anticorpii specifici se formeaz numai fa de antigenele de la suprafaa virionilor.
Existena anticorpilor specifici antivirali din ser poate fi evideniat in vitro printr-o serie de reacii
serologice (reacii de fixare a complementului, de seroneutralizare, de hemaglutinoinhibare, de precipitare
n gel, de imunofluorescen direct sau indirect, reacii imunoenzimatice de tip ELISA).
La nivelul cilor de ptrundere a virusurilor n organism se sintetizeaz imunoglobuline de tip IgA,
de ctre formaiunile limfoide submucoase. Aceti anticorpi locali sunt secretai ca urmare a unor infecii
superficiale la nivelul mucoaselor respiratorii, intestinale, genitale i sunt prezeni n secreiile mucoase de
la suprafaa epiteliilor respective.

Anticorpii de tip IgA din secreiile nazale au un rol important n protecia fa de infecia, i mai
ales reinfecia cu virusuri respiratorii (gripale, paragripale), chiar dac titrul anticorpilor specifici din ser
este sczut.
La nivelul sistemului circulator se manifest imunitatea umoral n cazul virusurilor care sunt
diseminate n organism pe cale sangvin, producnd infecii generalizate. n aceste infecii, antigenele
virale circul libere n plasm, iar anticorpii specifici sunt sintetizai de ctre limfocitele B activate i
maturate (plasmocite), n urma cooperrii cu celulele prezentatoare de antigen i cu limfocitele T helper.
Anticorpii produi sunt iniial de tip IgM, apoi apar IgG, IgA etc.
Confruntarea unui organism cu un antigen viral, printr-o infecie sau prin vaccinare, determin un
rspuns imun complex, de tip umoral sau celular. Rspunsul imun umoral poate fi primar sau secundar, n
funcie de expunerea pentru prima dat sau reexpunerea organismului la aciunea acelui antigen.
Rspunsul imun secundar difer de cel primar printr-o perioad de laten mult mai scurt i
perioade prelungite de platou i de declin, printr-un titru mai ridicat al anticorpilor specifici i o persisten
ndelungat a acestora, prin maturarea afinitii anticorpilor pentru antigen i prin predominana
anticorpilor de tip IgG. La baza declanrii unui rspuns imun secundar se afl fenomenul de memorie
imunologic, bazat pe existena limfocitelor de memorie. Limfocitele B de memorie sunt sensibilizate n
raport cu un anumit antigen, capabile s produc timpuriu i pentru timp ndelungat anticorpi specifici cu
afinitate crescut, n cazul unei reexpuneri la antigenul respectiv. Limfocitele T de memorie sunt activate la
doze mici de antigen, prezentnd receptori cu afinitate mai mare pentru acesta.
n infeciile virale generalizate (viremii), n care virusul circul liber n plasm, antigenele virale
ajung mai repede la nivelul organelor bogate n celule productoare de anticorpi (splin, ganglioni
limfatici). Acolo se sintetizeaz o cantitate mare de anticorpi specifici de tip IgM, IgG i IgA, care au
capacitatea de a neutraliza infectivitatea virusurilor. Anticorpii serici circulani au un rol important n
limitarea diseminrii virusurilor n esuturile susceptibile.
Reinfecia cu virusuri care produc infecii generalizate este oprit nainte de apariia simptomelor,
deoarece se produce un rspuns imun secundar n perioada de incubaie a bolii. Astfel de infecii repetate
au rolul de a menine o imunitate umoral activ, determinnd persistena ndelungat a anticorpilor serici.
Imunoglobulinele A din secreii au rolul de a proteja mucoasele sensibile de infecii virale
localizate, mpiedicnd ptrunderea virusurilor n celule.
Imunoglobulinele E sunt sintetizate n concentraii foarte mici n infeciile virale i au rol de
mediatori ai reaciilor vasculare eritematoase, fiind implicate n iniierea reaciilor de hipersensibilitate
imediat.
Neutralizarea infectivitii virusurilor de ctre anticorpi se poate realiza prin mai multe mecanisme:
- legarea anticorpilor neutralizani de anumite situsuri critice de pe antigenele virale, pe care le
blocheaz;
De exemplu, infectivitatea virusului gripal este neutralizat de legarea anticorpilor specifici
antihemaglutinin viral, a adenovirusurilor de anticorpii antiproteine hexonice. Dac virusul are situsuri
critice multiple, fiecare situs n parte trebuie blocat de anticorpii neutralizani specifici.
- anticorpii cuplai cu antigenele de suprafa ale virusurilor interfer cu etapele timpurii ale ciclului de
replicare viral, blocnd iniierea infeciei; interaciunea virus - anticorp duce la modificri fizico chimice necovalente la nivelul capsidei virale, care influeneaz relaia normal virus - celul gazd;
- prin activarea sistemului complement este neutralizat infectivitatea virusurilor cu nveli extern.
Complementul activat acioneaz asupra lipidelor celulare nglobate n structura peplosului, ducnd
la eliberarea capsidei virale i la expunerea ei la aciunea distructiv a enzimelor i nucleazelor plasmatice.
Viroliza mediat de complement este mai accentuat n rspunsul imun primar, deoarece anticorpii
sintetizai n acest caz sunt de tip IgM, care au capacitate ridicat de activare a complementului.
Complementul poate inactiva virusul i prin alte mecanisme dect viroliza: prin fixarea proteinelor
sistemului complement pe nveliul viral, ducnd la blocarea adsorbiei i ptrunderii virusului n celul;
prin agregarea particulelor virale, n cazul virusurilor ce poart receptori pentru componente ale

complementului, localizai la nivelul suprafeei virionilor (de exemplu virusul polyoma are receptori de
suprafa pentru C3b).
La nou nscui concentraia de IgM este foarte mic, deoarece aceti anticorpi nu strbat placenta.
Nou nscuii sunt protejai de imunoglobulinele IgG materne n primele 6 - 9 luni de via. Efectul
protector n viroze al anticorpilor serici a fost demonstrat experimental prin administrare de seruri imune i
prin bursectomie la psri.
b. Imunitatea antiviral de tip celular
n viroze imunitatea de tip celular este foarte important, ducnd la liza celulelor infectate cu
virusuri i la vindecare. Spre deosebire de imunitatea umoral, care mpiedic diseminarea virusurilor pe
cale sangvin n organism, imunitatea mediat celular are rolul de a detecta celulele infectate viral i de a
le distruge nainte de terminarea ciclului de replicare viral.
Mecanismele de aprare imun antiviral care duc la distrugerea celulelor infectate sunt realizate
de diferite tipuri de celule: limfocite TC, celule K sau NK.
Reacia imun mediat de limfocitele T citotoxice se desfoar datorit detectrii celulelor
infectate viral de ctre aceste limfocite CD8+; antigenele prelucrate sunt prezentate pe suprafaa APC n
asociaie cu moleculele complexului major de histocompatibilitate clasa I. Limfocitele TC vor recunoate
prin intermediul receptorului specific numai acele celule infectate viral cu care sunt identice sub raport
MHC. Limfocitele TC activate elibereaz proteine citotoxice (perforin), ducnd la liza celulelor int n
prezena ionilor de calciu. Activitatea citolitic efectuat de limfocitele T citotoxice n asociaie cu
moleculele complexului major de histocmpatibilitate clasa I a fost demonstrat n infecia cu diferite
virusuri (rujeolic, urlian, virusul respirator sinciial, pxvirusuri).
Un alt tip de citotoxicitate mediat celular este cea dependent de anticorpi (ADCC - antibody
dependent cell cytotoxicity), realizat de celulele K (killer). Acestea acioneaz litic asupra celulelor
infectate viral, care prezint pe suprafaa lor molecule de IgG specifice antigenelor virale. Astfel, n
ADCC celulele K distrug nespecific orice celul int care a fost recunoscut specific de anticorpi.
Un al treilea tip de citotoxicitate este cea natural, realizat de celulele NK (natural killer).
Celulele NK lizeaz celulele int sensibile n absena anticorpilor specifici i fr restricie de MHC.
Celulele NK recunosc i se leag specific de celula int prin intermediul unui receptor cu specificitate
nedefinit. Activarea celulelor NK este stimulat direct de toate tipurile de interferoni i duce la liza
celulelor int nainte de activarea limfocitelor TC i a producerii de anticorpi specifici.
c. Interferena i interferonii (IFN)
Fenomenul de interferen const n inhibarea replicrii unui virus, in vivo sau in vitro, n cazul
existenei unei infecii multiple sau mixte a aceleiai celule gazd. Interferena viral este de trei tipuri:
a) interferena omolog (homotipic, autointerferen) este mediat de particule virale defectivinterferente, care mpiedic replicarea virusului complet; particulele defectiv-interferente (DI) sunt
mutani obinui prin deleia unui fragment din genomul viral normal, complet, n cazul infeciilor cu
inocul viral foarte concentrat. Infecia simultan a celulelor cu particule DI i cu particule complete duce la
inhibarea replicrii numai a virusului complet, omolog, din care au derivat particulele DI, nu i a altor
tipuri de virusuri.
b) interferena heterolog intrinsec se produce cnd dou virusuri diferite infecteaz succesiv
aceeai gazd; este urmarea competiiei dintre ele pentru etape ale ciclului de replicare viral: competiia
pentru receptorii celulari, inhibarea ptrunderii n celul a virusului adsorbit, sinteza de proteine de
interferen, codificate de genomul virusului interferent (primul care a infectat gazda), ce vor bloca replicarea
unui virus heterolog, suprainfectant, numit virus interferat; nu se datoreaz producerii de interfon i nu este
dependent de sinteza de ARN celular.

c) interferena heterolog extrinsec reprezint competiia dintre dou virusuri diferite, n care
replicarea unui virus (interferent) induce sinteza de interferon, care va inhiba multiplicarea celui de al
doilea virus, numit interferat; este urmarea unui factor extrinsec, interferonul.
Interferonii sunt glicoproteine monomere sintetizate n celule n urma unui proces de inducie,
promovat de o infecie viral sau de inductori nevirali. Interferonii pot fi sintetizai de celulele tuturor
animalelor vertebrate infectate cu diferite virusuri ADN sau ARN. Sinteza interferonilor reprezint un
important mecanism de aprare a organismelor, fiind indus la cteva ore de la producerea infeciei virale
(proces de aprare mult mai rapid dect cel reprezentat de imunitatea umoral sau celular).
Eliberate n mediu, aceste glicoproteine acioneaz asupra celulelor adiacente, pe care le protejeaz
de infecii virale ulterioare. Interferonii exercit o aciune complex antiviral, antitumoral i
imunomodulatoare, stimulnd numeroase funcii imunitare (au efecte antiproliferative i
imunomodulatoare asupra celulelor expuse la antigene virale sau de alt natur).
Interferonii sunt glicoproteine inductibile cu o specificitate de specie; aciunea lor maxim se
manifest n celule omoloage, care aparin aceleiai specii ca i celulele care au sintetizat interferonul.
Prezint aciune nespecific n raport cu virusul inhibat (protecia antiviral se manifest fa de un numr
mare de virusuri nenrudite), iar intensitatea efectului antiviral este variabil n funcie de tipul de virus;
prezint o aciune protectoare rapid, care dispare dup cteva zile.
Pentru ca o substan inhibitoare a multiplicrii virale s fie admis ca IFN trebuie s prezinte i
alte proprieti:
a) s se gseasc n organism sau n mediul culturilor celulare numai dup introducerea unei substane
inductoare adecvate, de natur diferit;
b) activitatea antiviral s fie mediat de derepresarea unor gene care sintetizeaz efectorii antivirali;
c) sinteza s depind de sinteza de ARN-m celular (care este inhibat de tratamentul cu actinomicin D)
i de protein celular (inhibat de tratamentul cu cicloheximid);
d) activitatea biologic s fie proporional cu afinitatea de cuplare a inhibitorului cu receptorii celulari
specifici pentru interferon i s fie inhibat de anticorpii antiinterferon;
e) s prezinte o aciune protectoare rapid, n decurs de cteva ore de la infecie, care dup o perioad
de cteva zile s dispar; se instaleaz o stare de inhibiie n care celulele nu vor mai rspunde la aplicarea
unor noi doze de IFN, stare care este pasager.
Abrevierea internaional este IFN, precedat de specificarea originii (Hu IFN = interferon uman,
Mu IFN - interferon de oarece, Rat IFN = interferon de obolan, Bov IFN = interferon bovin).
Interferonii umani au fost grupai n dou tipuri pe baza structurii moleculare i a specificitii
antigenice: tipul I cuprinde interferonii i (acidostabili), iar tipul II cuprinde interferonii (acidolabili).
- Interferonul (IFN ) este de natur proteic i este produs de leucocite, numindu-se i
interferon leucocitar; este acidostabil (rezist la pH = 2) i prezint o mare heterogenitate, fiind descrise
14 subtipuri diferite. IFN uman este codificat de 15 gene funcionale localizate pe braul scurt al
cromozomului 9 i de 10 pseudogene (care n urma unor mutaii nu se mai pot exprima). Subtipurile
interferonilor sunt alctuite din 166 aminoacizi, cu excepia unui subtip alctuit doar din 165
aminoacizi.
- Interferonul (IFN ) este produs n culturi de fibroblaste i este numit i interferon
fibroblastic; este acidostabil, de natur glicoproteic. IFN uman este codificat de dou gene situate pe
cromozomul 9; este posibil s existe dou subtipuri ale acestui interferon, fiecare cu cte 166 aminoacizi.
- Interferonul (IFN ) este produs de limfocitele T ca rspuns la aciunea unor substane
mitogene sau a unor antigene i mai este numit i interferon imun; este sensibil la pH = 2 (este acidolabil)
i este de natur glicoproteic. Sinteza IFN este codificat de o singur gen situat pe cromozomul 12,
cu structur discontinu. IFN este format din 146 resturi de aminoacizi.
Celulele vertebratelor nu produc n mod spontan interferoni, deoarece genele respective nu sunt
exprimate. Sinteza de IFN este indus, in vivo i in vitro, de o serie de stimuli. Exist dou tipuri de inductori:

a) inductori universali - activi att in vitro, ct i in vivo asupra majoritii celulelor: leucocite,
fibroblaste, celule epiteliale; n aceast grup intr virusurile, poliribonucleotidele sintetice, n general
stimuli a cror capacitate inductoare de IFN este corelat cu prezena unei molecule de ARN dublu catenar.
Toate virusurile ARN sau ADN sunt capabile s induc interferon n anumite condiii:
- prin contactul celulelor cu virus inactivat termic, sau prin tratare cu ultraviolete, sau cu particule
virale defective;
- dup inocularea unor celule nepermisive, cu virusuri normale infectante;
- dup infectarea celulelor permisive cu virus normal infectant, ducnd la sinteza de interferon n
paralel cu multiplicarea viral. Sinteza de IFN ncepe la 4-5 ore de la infecie, atinge un maxim la dou zile, dup
care sinteza se oprete i interferonul este excretat la suprafaa membranei celulare.
b) inductori speciali de IFN - acioneaz numai asupra anumitor celule (NK, limfocite T i B) i sunt
eficieni doar in vivo sau n culturi de leucocite; n aceast grup intr inductori heterogeni din punct de vedere
biochimic: bacterii (rickettsii, mycoplasme, brucelle), endotoxine bacteriene, lipopolizaharide bacteriene,
manani fungici (polizaharide), polimeri (polivinil sulfat etc.), substane mitogene; duc la sinteza unor
cantiti mai mici de interferon dect inductorii universali.
Efectele biologice ale interferonilor sunt variate i se manifest dup eliberarea din celula n care
au fost sintetizai i difuzia n celulele nconjurtoare. Nu sunt activi n celulele care i sintetizeaz i nu
au activitate antiviral direct, ci determin n principal o stare antiviral a celulelor nconjurtoare
neinfectate.
Principalele efecte biologice ale interferonilor sunt:
- inducerea strii de rezisten nespecific fa de infecia viral prin influenarea multiplicrii
virusului n diferite etape ale ciclului celular (n special prin degradarea preferenial a ARN-m
viral i inhibarea traducerii);
Dup eliberarea din celul, interferonii reacioneaz cu receptorii specifici de natur glicoproteic
de pe suprafaa celulelor nconjurtoare neinfectate; receptorii sunt diferii pentru IFN i fa de cei
pentru IFN ; la om, receptorii pentru IFN alfa/beta sunt codificai de o gen de pe cromozomul 21, iar cei
specifici pentru IFN gamma sunt codificai de o gen situat pe perechea 6 de cromozomi. Densitatea
acestor receptori pentru interferoni pe suprafaa diferitelor celule este variabil. Dup legarea IFN de
receptori (care se poate realiza i la temperatura de 4C), complexul IFN - receptor este introdus n celul
prin endocitoz. Internalizarea complexului declaneaz producerea unor enzime celulare care vor induce
o stare antiviral, interfernd fie cu sinteza de ARN-m viral, fie cu traducerea sa.
- inhib creterea i multiplicarea microorganismelor cu localizare intracelular;
- inhib multiplicarea celulelor tumorale;
- suprim sau stimuleaz rspunsul imun umoral; interferonul administrat dup sensibilizarea la
antigene produce o intensificare a proliferrii i diferenierii limfocitelor B n plasmocite, deci
o stimulare a sintezei de anticorpi;
- stimuleaz exprimarea pe suprafaa celulelor a antigenelor MHC clasa I i II, ceea ce determin
o mai bun prezentare a antigenului;
- stimuleaz aparia receptorilor fa de interleukina 2 pe suprafaa celulelor T, ceea ce determin
o intensificare a citotoxicitii specifice a limfocitelor Tc;
- amplific activitatea citotoxic a celulelor NK (prin stimularea diferenierii precursorilor NK i
a proliferrii celulelor NK mature);
- determin activarea macrofagelor, creterea lor numeric i intensific fagocitoza; stimuleaz
metabolismul oxidativ al macrofagelor i activitatea lor antitumoral;
- amplific citotoxicitatea celular dependent de anticorpi (ADCC) prin mrirea nivelului de
exprimare a receptorilor pentru Fc de pe suprafaa celulelorK.
Metode de producere a interferonilor
Folosirea clinic a interferonilor n infeciile cu etiologie viral i pentru tratamentul maladiilor
maligne umane necesit cantiti mari de interferon, obinute n condiii avantajoase economic.
Metodele clasice de izolare i purificare a IFN-ului s-au dovedit nesatisfctoare, att din punct de
vedere calitativ i cantitativ, ct i din punct de vedere economic.

Problema a fost rezolvat prin elucidarea structurii primare a interferonilor i producerea


interferonilor prin tehnologia ADN-recombinat (transferul genelor care codific sinteza IFN-ului la celule
de tip procariot (E. coli) sau eucariot.
Una dinte cele mai eficiente metode clasice a fost cea elaborat de Cantell (1973), ale crei
principale etape sunt: prelevarea aseptic a sngelui, separarea leucocitelor dup centrifugare; cultivarea
leucocitelor n condiii speciale, producerea de interferon fiind indus prin infectare cu virusul Sendai;
concentrarea i purificarea prin diferite procedee a interferonului sintetizat, produsul final coninnd
aproximativ 10 uniti/mg protein.
Ruffaut i Fanconnier (1980) au reuit obinerea de interferon n culturi celulare de splin uman,
stimulate prin infectare cu virus Sendai, cu un randament se pare superior metodei lui Cantell, dar cu
inconvenientul major legat de dificultatea obinerii de spline umane.
Producerea interferonului se realizeaz n culturi celulare de fibroblaste umane normale, n
care sinteza de IFN este indus de acizi nucleici bicatenari, cu dezavantajul c fibroblastele nu pot fi
cultivate n suspensie, ci doar ataate de un suport solid.
Tehnologiile moderne de producere a IFN-ilor la scar industrial, prin procedee de inginerie
genetic, s-au axat pe urmtoarele trei direcii:
a) Obinerea interferonilor cu ajutorul celulelor bacteriene modificate (procedeul Biogene)
Weissmann i colab (1980) au realizat transferul genei interferonului, sintetizat enzimatic, la o
tulpin de E. coli ( 1776) cu ajutorul unui vector plasmidic (pBR 322); interferonul a fost obinut prin
reverstranscrierea ARNm specific cu ajutorul reverstranscriptazei; are o activitate asemntoare celui
produs de leucocite, cu diferena c este neglicolizat (celula bacterian nu poate reraliza glicolizarea
proteinelor).
b) Obinerea interferonilor cu ajutorul drojdiilor (procedeul Genentech Inc.)
S-a realizat transferul genelor IFN-ilor umani n celule de Saccharomyces cerevisiae, cu ajutorul
unor vectori plasmidici; metoda a permis att exprimarea genelor respective, ct i eliberarea n mediul de
cultur a interferonilor sintetizai.
c) Obinerea interferonilor cu ajutorul viermilor de mtase (Maeda, Japonia)
Genele IFN-ilor umani au fost introduse n genomul virusului poliedrozei nucleare, obinndu-se
molecule de ADN-recombinat, cu ajutorul crora s-au infectat apoi viermii de mtase, care au produs
cantiti mari de IFN. Interferonii au fost izolai i concentrai din hemolimfa viermilor, care au continuat
i secreia de mtase.
Folosirea interferonilor n clinic
Organismul se poate apra mpotriva infeciilor virale prin intervenia rapid (n cteva ore) a
mecanismului interferon, care acioneaz la nivelul celulelor din apropierea celulei infectate, ntrziind
diseminarea virusului la acestea, prin inducerea unei stri de protecie antiviral.
Apoi intervine rspunsul imun mediat umoral sau celular, care devine activ la cteva zile de la
producerea infeciei i acioneaz asupra particulelor virale extracelulare i respectiv intracelulare.
Efectul protector, demonstrat in vitro i in vivo, att pe animale ct i pe om, s-a obinut mai ales
prin administrarea de IFN natural sau recombinat.
Administrarea IFN-ului se poate face local pe conjunctiv (picturi), ci respiratorii superioare
(instilaii), pe piele sau sistemic (prin injecie intramuscular, intravenoas, subcutanat).
Administrarea local a IFN a dus la rezultate clinice pozitive n tratamentul herpesului labial i
genital recidivant, a unor afeciuni virale oculare (keratit herpetic, kerato-conjunctivite cu adenovirus), a
unor afeciuni virale ale tractului respirator (grip, guturai) sau a unor infecii cu virusuri Papova (negi,
papilomatoz laringian juvenil).
Administrarea sistemic de IFN a fost eficient n tratamentul unor viroze (hepatit cronic cu
VHB sau VHC, zona zoster), a unor neoplazii (leucemii, limfoame, osteocosarcoame, melanoame),
ducnd la regresii pariale i uneori totale.

Tratamentul cu IFN exogen n encefalite, rabie, infecii cu virus citomegalic este mai puin eficient
datorit faptului c interferonul difuzeaz greu n creier, LCR, umori apoase sau vitroase.
Administrarea IFN-ului n doze mari este nsoit de apariia unor reacii adverse (febr, anorexie,
astenie, imunosupresie medular, mialgie), fapt explicabil prin dificultatea instalrii unei stri antivirale,
ce blocheaz replicarea virusului n celul, fr producerea unor perturbri la nivelul metabolismului
normal celular.
9. AGENII INFECIOI SUBVIRALI
Agenii infecioi subvirali sunt de dimensiuni mult mai mici dect virusurile, sunt foarte patogeni
i determin boli grave la plante i animale. Ei sunt reprezentai de viroizi, virusoizi i prioni.
Viroizii
Viroizii reprezint o categorie special de ageni infecioi subvirali, patogeni exclusiv pentru
plante, caracterizai printr-un genom alctuit din ARN pur, fr capsid proteic i fr stadiul de virion.
Informaia genetic este foarte mic, dar sunt capabili de replicare n celula gazd infectat.
Viroizii au fost descoperii accidental n 1971 de ctre Diener, care ncerca s caracterizeze agentul
etiologic al bolii tuberculilor fusiformi la cartof. Viroizii poart numele maladiei pe care o determin, de
exemplu: viroidul tuberculilor fusiformi la cartof, viroidul nanismului i marmorrii clorotice a
crizantemelor, viroidul nanismului hameiului.
Viroizii nu au specificitate de gazd. Acelai viroid poate infecta plante aparinnd unor specii
diferite, chiar i unor genuri diferite.
Virusoizii
Virusoizii sunt molecule mici de ARN monocatenar, circulare, covalent nchise, incluse n stare
fizic autonom n capsida unor virusuri fitopatogene cu genom linear segmentat sau integrate n genomul
viral. Spre deosebire de viroizi, genomul lor este ncapsidat i incapabil s infecteze plantele sensibile n
absena virusului helper.
Au fost descrii la o varietate de mozaic marmorat al tutunului. Uneori se comport ca molecule de
ARN satelit, nefiind implicai n replicare. Replicarea lor se realizeaz n citoplasma celulei gazd i nu
are loc n absena virusului helper. n unele cazuri, prezena lor asociat este obligatorie pentru producerea
infeciei.
Prionii (proteinele infectante)
n 1967, radiologul Alper i colaboratorii si au raportat despre un agent infecios foarte rezistent la
tratamentele care n mod normal distrugeau acizii nucleici, responsabil de transmiterea bolii scrapie. n
acelai an, pornind de la sugestia c acest agent infecios ar putea fi o protein cu o abilitate surprinztoare
de autoreplicare n organismul gazd, Griffith a formulat ipoteza proteinei infecioase (protein-only
hypothesis). Cercetrile ulterioare nu au dus la descoperirea vreunui virus sau vreunui acid nucleic asociat
cu acest agent infecios.
n 1980 Stanley Prusiner a studiat evoluia unor boli grave la animale i om i a gsit c agentul
patogen era o molecul de protein infecioas. El a introdus n biologia molecular termenul de prion cu
semnificaia de protein infecioas.
Prionii, cunoscui anterior ca protovirinae, virusuri lente, virusuri convenionale, reprezint o
categorie de ageni infecioi subvirali, cu greutate molecular de 27000 30000 Da, unici prin rezistena
lor la toate procedeele de inactivare care degradeaz acizii nucleici.

Prelucrarea ns a produsului patologic prin tratamente care degradeaz proteinele suprim i


capacitatea infectant a produsului.
Prionul e format exclusiv dintr-o molecul de protein care se replic n organismul gazd n
momentul n care e introdus n gazda respectiv.
Bolile prionice produse de aceti ageni infecioi de origine pur proteic au fost considerate drept
boli pseudoinfecioase, comparativ cu bolile infecioase clasice, ale cror ageni etiologici sunt
microorganisme ce conin acizi nucleici. Principalele caracteristici ale bolilor prionice sunt:
- afectarea sistemului nervos central, cu producerea de encefalopatii spongiforme;
- perioada de incubaie foarte lung, de la cteva luni la 37 40 de ani;
- evoluia lent, progresiv, letal;
- proteina celular normal (PrPc) din celula neuronal ar interaciona, n cazul unei infecii
prionice, cu izoforma ei infecioas (PrPres, rezistent la proteinaza K), suferind o modificare
conformaional patologic.
Absena timp ndelungat a oricrui semn clinic i lipsa total a vreunui rspuns inflamator au
constituit impedimente majore pentru gsirea unor posibiliti de diagnostic precoce al acestor boli.
Au fost descrise, pn n 1985, 3 boli prionice la om i 3 la animale:
- la om: - boala Kuru,
- boala Creutzfeldt Jakob,
- sindromul Gerstmann Strussler Scheinker,
- la animale: - scrapia (tramblanta oilor i caprelor),
- encefalopatia speciilor de cervicide,
- encefalopatia transmisibil a nurcilor.
n 1986 au fost semnalate n Anglia primele 63 de cazuri de encefalit spongiform la bovine
(ESB); ulterior au fost semnalate i la alte specii (de bovidee slbatice i felide slbatice captive, pisici
domestice) cazuri de encefalit spongiform scrapie like.
n prezent se cunosc 12 boli prionice, 6 descrise la animale i 6 la om.
Scrapia (tramblanta ovinelor)
Scrapia este o boal endemic, ntlnit n mod natural la capre i oi, care se transmite maternal i
orizontal. Aceast boal, cunoscut n Anglia de mai bine de 200 de ani, e rspndit n toat lumea, mai
puin n Noua Zeeland i Australia (unde este eradicat). Boala devine evident numai atunci cnd
agentul infecios a ajuns la nivelul SNC. Animalele prezint la nceput tremurturi ale corpului, urmate de
prurit foarte accentuat al pielii, ulterior apar tulburri legate de lezarea cerebelului (mers n zig-zag);
fenomenul se accentueaz pn la paralizia i moartea animalelor. Boala se agraveaz progresiv prin
distrugerea neuronilor animalelor.
n cazul n care se confirm anatomopatologic diagnosticul de scrapie chiar la un singur animal din
turm, se sacrific ntreaga turm prin incinerare i se autoclaveaz obligatoriu carcasele la 132 - 135C
minim 20 minute.
Boala nu se poate preveni prin vaccinare. Agentul etiologic este rezistent la dezinfectanii obinuii.
Pmntul contaminat rmne infecios mult timp. Reziduurile animale de la oi pot fi i ele infecioase. n
omogenatele de creier provenit de la oi bolnave de scrapie s-au izolat i purificat 2 izoforme de proteine
foarte apropiate ntre ele:
- o protein prionic,
- o protein normal, celular.
Proteina prionic celular purificat, inoculat la animale de laborator, nu este capabil s produc
boala. Proteina prionic propriu zis are toate particularitile unui agent infecios. Izolat n stare pur i
inoculat la animale de laborator, dup o perioad de inoculaie declaneaz boala.

Encefalita spongiform bovin


Aceast boal a devenit o problem european din cauza consecinelor ei foarte grave pe plan
mondial. A fost evideniat o legtur ntre agentul etiologic al encefalopatiei spongiforme bovine i
sindromul Creutzfeldt Jakob la om.
Din cauza lipsei de informaii suficiente asupra modului de transmitere a agentului prionic i
asupra perioadei de incubaie, nu se pot face predicii asupra numrului de cazuri de mbolnvire la om.
Un aspect important este cel al incidenei animalelor care, dei bolnave, nu prezentau semne clinice de
boal, problema infeciei prionice silenioase punndu-se i n cazul oamenilor potenial infectai cu
agent prionic.
Apariia cazurilor de infecie prionic la oameni n urma consumului de carne de vit infectat a
artat c proteinele prionice bovine pot traversa bariera de speice, aa cum se presupune c s-a ntmplat i
n cazul transmiterii agentului etiologic al scrapiei la bovine. Au existat ipoteze conform crora agentul
prionic s-ar putea transmite i prin lapte sau encefalopatia spongiform bovin ar putea s apar spontan la
bovine.
Primele cazuri au fost depistate n Marea Britanie n 1986. Nu s-a putut pune n eviden o cale de
transmitere a bolii, singura cale incriminat fiind utilizarea hranei preparate din pulbere de carne i oase de
animale. Din acest motiv, n rile Uniunii Europene a fost interzis acest tip de hran, dar mult vreme
interdicia nu a fost riguros respectat. ntre 1986 i 1993 au fost afectate aproximativ 300000 de vite
(peste 40% dintre vacile de lapte din Marea Britanie), iar sacrificarea ntregului efectiv de vite prin
incinerare, dei luat n calcul, nu s-a aplicat niciodat. Din 1989 au aprut cazuri de encefalopatie
spongiform bovin i n alte ri, unele dintre ele la vite importate din Marea Britanie n faza preclinic a
bolii. Se consider c perioada de incubaie a bolii este de aproximativ 10 ani, iar durata medie a bolii de
14 ani.
Boala Kuru
A fost descris exclusiv la populaia tribului Fore din Papua Noua Guinee.
Boala ncepe cu o febr puternic, dureri articulare, dificulti n mers, cu lips n coordonarea
micrilor (anarhice, neregulate) urmate de demen i moarte. S-a concluzionat c boala se transmite pe
cale oral datorit unor obiceiuri de canibalism ritual. Numrul bolnavilor la acest trib e n scdere de la an
la an i bolnavii sunt mai btrni dect cei din anii anteriori.
Perioada de incubaie este de aproximativ 30 ani, boala fiind asociat cu leziuni la nivelul
sistemului extrapiramidal, cu micri anormale, rigiditate, evoluie spre demen i moarte. n majoritatea
cazurilor a fost descris vacuolizarea neuronilor i proliferarea celulelor astrogliale.
Sindromul Jacob Creutsfeld (CJ)
Aceast boal are o frecven de 1 la un milion i apare n jurul vrstei de 60 de ani,
manifestndu-se prin micri anormale, rigiditate, tulburri psihice de tip demenial. Poate s apar
sporadic, ereditar familial sau prin infecie exogen, descriindu-se:
 Boala CJ sporadic descris la toate vrstele adulte, dar nu la copil (au fost descrise cazuri cu o
mare frecven la vrste ntre 70 79 de ani, un caz la 23 de ani i unul peste 88 de ani). La vrste de
peste 80 de ani apar de obicei alte tipuri de demen (boala Alzheimer, demena vascular de origine
genetic); boala este mai frecvent la populaia alb dect la cea neagr, la femei dect la brbai;
media de via este de aproximativ 7 luni, incidena bolii i mortalitatea fiind asemntoare n toate
rile europene; studiile genetice efectuate au artat c la pacienii homozigoi pentru metionin sau
valin la codonul 129 al genei PRNP (gena proteinei normale PrPc) evoluia bolii tinde s fie mai
rapid dect la pacienii heterozigoi la acest codon. Exist probabil o serie de evenimente care
determin apariia bolii la anumii oameni i care mpiedic apariia ei la alii. n cursul mbolnvirii,
proteina prionic se gsete n cantitate foarte mare n creierul bolnavilor. Iniial s-a crezut c ea se
replic la bolnavul respectiv. n realitate are loc o amplificare a sintezei proteinei ca urmare a trecerii
genei din stare de repaus ntr-o stare activ, fapt ce duce la o multiplicare a proteinei prionice.

 Boala CJ lent
- CJ iatrogen (CJi) aprut n special dup un tratament cu hormon de cretere recoltat de la
cadavre din glanda pituitar, dup o perioad medie de 12 ani; dup implantare de electrozi pentru
electroencefalogram sau dup folosirea de instrumente chirurgicale insuficient sterilizate; dup
grefe de cornee, timpan, piele, utilizarea de derivate de snge i plasm, manevre stomatologice. Se
consider c durata de incubaie depinde de calea de ptrundere a agentului prionic n organism.
- CJ conjugal probabil prin transmitere orizontal,
- CJ legat de profesiune (mcelari, personal medical).
 Boala CJ genetic (ereditar, familial) se pare c ar fi posibil prin mutaii punctiforme sau
inserionale.
Sindromul Gerstmann Straussler Scheinker (GSS) este o varietate natural a sindromului
CJ, caracterizat prin instalarea precoce a incapacitii de coordonare a micrilor, prin leziuni cerebeloase
i demen.
Insomnia familial letal (IFL) debuteaz cu tulburri ale somnului i ale sistemului nervos
vegetativ, urmate de demen.
Studiul bolilor prionice a dus la evidenierea unor aspecte noi pentru biologia molecular, i
anume:
- transmiterea unor boli prin intermediul unor proteine, n absena acizilor nucleici;
- mpachetarea proteinelor n diferite conformaii, care determin proprieti biologice i
funcionale diferite;
- transmiterea informaiei biologice prin multiplicare conformaiei proteice.
S-a conturat astfel un mecanism total nou de boal, acela al unei plieri greite (misfolding) a
moleculei proteice, prin alterarea structurii secundare i teriare a proteinei, ducnd la o conformaie
tridimensional i o funcie proteic alterat.