Universidad veracruzana Facultad de Bioanálisis Bioquímica Laboratorio

Practica: No. 1 “Espectrofotometría” Fundamento: La espectroscopia o espectrofotometría en física y química es el estudio de los espectros. La espectroscopia se basa en que cada elemento químico tiene su espectro característico.

Los espectrómetros son instrumentos que generan, analizan y registran espectros. Aquí se ilustra el uso de un espectrómetro de absorción para determinar el espectro creado por una sustancia desconocida. Las lentes del instrumento enfocan la luz, mientras que un prisma central la divide en el espectro de los colores que la constituyen. Los colores que aparecen en la pantalla representan las longitudes de onda no absorbidas por la muestra.

El espectrofotómetro se usa para medir la intensidad de un espectro determinado en comparación con la intensidad de luz procedente de una fuente patrón. Esta comparación permite determinar la concentración de la sustancia que ha producido ese espectro. Los espectrofotómetros también son útiles para estudiar espectros en las zonas no visibles porque sus elementos de detección son bolómetros o células fotoeléctricas. Los primeros se aplican especialmente al análisis de espectros de infrarrojos, y los segundos al de espectros ultravioletas. Las redes de difracción pueden

emplearse, igual que los prismas, tanto en los espectrógrafos como en los espectrofotómetros. El color es la sensación resultante de la estimilacion de la retina por la luz en longitudes de onda comprendidas dentro del espectro visible. Los rayos de luz de diferentes longitudes de onda excitan a los mecanismos receptores del ojo en grados diferentes produciendo colores especificos, la longitud de onda en el rango visible para el ojo esta entre los 380 – 700 nm. Las longitudes de onda comprendidas a los extremos de éste rango no son detectados por el ojo humano. La radiación electromagnética esta compuesta por paquetes discretos de energia llamados fotones y recorren un camino ondulante, describiendo en su trayectoria crestas y valles.

APLICACIONES DEL ANÁLISIS ESPECTRAL Análisis químico El espectro de un elemento determinado es absolutamente característico de ese elemento. Sin embargo, elementos distintos producen en ocasiones líneas que están muy juntas, lo que lleva a posibles errores. Por ejemplo, la línea G de Fraunhofer, situada aproximadamente en 430,8 nm, corresponde a dos líneas diferentes, una debida al calcio, con una longitud de onda de 430,7749 nm, y la otra causada por el hierro, con una longitud de onda de 430,7914 nm. Líneas de Fraunhofer). Con un espectroscopio ordinario sería difícil distinguir estas dos líneas. Las otras líneas del calcio, sin embargo, son muy distintas de las otras líneas del hierro. Por tanto, la comparación del espectro completo de un elemento con un espectro conocido simplifica su identificación. Cuando se excita una sustancia desconocida mediante una llama, un arco voltaico, una chispa u otro método apropiado, un análisis rápido con un espectrógrafo suele bastar para determinar la presencia o ausencia de un elemento determinado. Los espectros de absorción son muchas veces útiles para identificar compuestos químicos.

Técnica:

T1

T2

T3

T4

T5

T6

Fotocolorímetro ABSORBANCIA

.4 .3 70 .2 .1 0 60

.5 50 40

.6 .7 30 .8 20 10 0 .9 1.0

TRASMITANCIA

80 90 100

Tabulacion: Fotocolorímetro Tubos Absorbancia 1 0

Trasmitancia 100

Blanco

2 3 4 5 6

.800 .700 .530 .351 .215 .660

15 20 29 44 61 22

Tubo Problema

Graficación:

Universidad veracruzana Facultad de Bioanálisis Bioquímica Laboratorio

Practica: No. 2 “Método de Dacie y Lewis” Fundamento: Eritrocitos Los glóbulos rojos, o células rojas de la sangre, tienen forma de discos redondeados, bicóncavos y con un Los eritrocitos, o glóbulos rojos de la micras. En diámetro aproximado de 7,5 sangre, son los transportadores primarios el ser humano y la mayoría de los mamíferos los eritrocitos maduros del oxígeno de células y de carecen de núcleo. En algunos vertebrados lasforma bicóncava nucleados. La son ovaleslos tejidos y del corporales. La eritrocito es una adaptación que hace que hemoglobina, una proteína de las células rojas de la sangre, es el pigmento el sanguíneo especial más importanteárea superficial, a través dióxido que y su función es de la transporte de el intercambia el oxígeno por de
carbono, sea la máxima posible. Su forma y la membrana plasmática flexible del eritrocito, le permite penetrar en los capilares más pequeños.

oxígeno desde los pulmones a las células del organismo, donde capta dióxido de carbono que conduce a los pulmones para ser eliminado hacia el exterior, su periodo de vida es de 120 dias.

En condiciones normales los eritrocitos se encuentran rodeados de un líquido extracelular isotónico, el plasma. Sin embargo, si se introducen en un medio hipotónico o disolvente puro, tienden a tomar agua y aumentar su volumen, produciéndose el fenómeno de turgencia, que lleva consigo la destrucción total de la célula a ésta ruptura se le conoce con el nombre de hemólisis. Material y equipo: Fotocolorímetro corning filtro verde. Centrífuga Clínica. 7 tubos de ensaye. Jeringa. Ligadura y torunda de alcohol Gradilla. Pipetas. Dos mililitros de sangre con una gota de EDTA (anticoagulante). Soluciones salinas amortiguadoras con fosfatos con un pH de 7.4 de las siguientes concentraciones: 0.85%, 0.55%, 0.50%, 0.45%, 0.35% y 10% Técnica: Siete tubos a) Depositar 5ml. De solución salina a cada tubo, con distintas concentraciones. -

1

2

3

4

5

7

5 ml.

0.10%

0.35%

0.40%

0.45%

0.50%

0.55%

0.85%

b) Colocar 0.05 ml. De sangre a cada tubo, agitar y dejar reposar. Reposar durante 30 minutos

0.05 ml de sangre a cada uno

Agitar

c) Centrifugar y aspirar el sobrenadante.

d) Lectura de absorbancia en el fotocoloríero. ABSORBANCIA

.4 .3 70 .2 80 .1 0 90 100 60

.5 50 40

.6 .7 30

TRASMITANCIA

20 10 0

.8 .9 1.0

Tabulación: Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Resultados: Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Gráfica: Observaciones: Porcentaje normal de hemólisis. Solución salina % Hemólisis % 0.30% 97 – 100 0.35% 90 – 99 Resultados 87.0 91.6 81.6 37.0 0 1.14 Concentración 0.30% 0.35% 0.40% 0.45% 0.50% 0.55% 0.85% Absorbancia 0.870 0.800 0.710 0.333 0.0 0.01 Trasmitancia 13 15 19 47 100 98

0.40% 0.45% 0.55% Universidad veracruzana Facultad de Bioanálisis Bioquímica Laboratorio

50 – 95 5 – 45 0

Practica: No. 3 “Escala calorimétrica de pH” Objetivo: Aplicación de la ecuación de Henderson Hasselbalch e interpretar el mecanismo de acción de las soluciones amortiguadoras en presencia de ácidos y álcalis.

Fundamento: pH, término que indica la concentración de iones hidrógeno en una disolución. Se trata de una medida de la acidez de la disolución. El término (del francés pouvoir hydrogène, 'poder del hidrógeno') se define como el logaritmo de la concentración de iones H+ (protones) cambiado de signo: pH = -log [H+], donde [H+] es la concentración de iones H+ en moles por litro. Debido a que los iones H+ se asocian con las moléculas de agua para formar iones hidronio, (H3O+), el pH también se expresa a menudo en términos de concentración de iones hidronio. En agua pura a 22 °C de temperatura, existen cantidades iguales de iones H3O+ y de iones hidroxilos (OH-); la concentración de cada uno es 10-7 moles / litro. Por lo tanto, el pH del agua pura es -log (0.107), que equivale a 7. Sin embargo, al añadirle un ácido al agua, se forma un exceso de iones H3O+ en consecuencia, su concentración puede variar entre 10-6 y 10-1 moles / litro, dependiendo de la fuerza y de la cantidad de ácido. Así, las disoluciones ácidas tienen un pH que varía desde 6 (ácido débil) hasta 1 (ácido fuerte). En cambio, una disolución básica tiene una concentración baja de iones H3O+ y un exceso de iones OH- y el pH varía desde 8 (base débil) hasta 14 (base fuerte).

La concentración molar del agua se obtiene dividiendo el número de gramos de agua contenidos en un litro entre el peso molecular gramo, o sea, 1000 / 18 = 55.5 molar. Dado que la disolución iónica del agua es: Constante de ionizacion del agua: Kw es el producto de las concentraciones molares de los iones H y OH- a una temperatura en particular. H2O⇒H + OH Kw = [H] [OH] = 1.0X10-14 H2O H+ + OH-

La importancia del conocimiento del pH radica en que determina varias de las características de la estructura y actividad de las macromoléculas biológicas, y por lo mismo determina la conducta de las diferentes células. Así en nuestro organismo, el pH del plasma sanguíneo y del liquido intersticial debe mantenerse entre 7.3 y 7.4 para que se conserve normal la actividad celular. Los líquidos intracelulares del músculo, por ejemplo, tienen un pH de 6.1 y los del hígado de 6.9; las secreciones del estómago tienen un pH de 1.2 a 3.0 y las del páncreas de 7.8 a 8.0 (Esquema 1). Para mantener estos valores constantes el organismo utiliza las llamadas soluciones buffer. Esquema 1: Escala de pH 1 2 3 4 5 6 7 neutra 8 9 10 11 12 13 14

ácida pH Solución Sangre L. intracelulares del músculo Hígado Estómago páncreas

alcalina

Ecuación de Henderson – Hasselbalch La cual nos permite calcular la modificación del pH que puede producir el par amortiguador, cuya formula es: pH = pK + [ácido] log
[sal]_

Material y equipo: Tubos de ensaye de 13 X 100. Pipetas graduadas de 1.2 y 5ml. Gradilla metálica. Colorímetro.

Técnica:

1

2

3

4

5

6

7

8

9

1 2 3 9 8 7 1 gota a todos. 1 gota a todos. 10 ml. A todos.

4 6

5 5

6 4

7 3

8 2

9 1

Naranja de metilo. HCl NaOH (ml) H2O (destilada)

Resultados: Ecuación de Henderson – Hasselbalch La cual nos permite calcular la modificación del pH que puede producir el par amortiguador, cuya formula es: pH = pK + log [ácido] Serie de tubos Tubo 1: [1]_ [9] pH = 3.7 + log Tubo 2: [2]_ pH = 3.7 +[8] log Tubo 3: [3]_ pH = 3.7 +[7] log Tubo 4: = 3.3 = 3.09
[sal]_

= 2.7

[4]_ pH = 3.7 +[6] log

= 3.5

Tubo 5: [5]_ pH = 3.7 +[5] log Tubo 6: = 3.7

[6]_ pH = 3.7 +[4] log Tubo 7: [7]_ [3]

= 3.8

pH = 3.7 + log Tubo 8:

= 4.0

[8]_ [2] pH = 3.7 + log Tubo 9:

= 4.3

[9]_ [1] pH = 3.7 + log

= 4.6

Propiedades físicas: En la serie de tubos con HCl se observó que el color disminuyó de intensidad del tubo 1 al 9 y en la serie de NaOH, el color se intensifico del tubo 1 al 9. Tabulación: Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Gráfica: pH 2.7 3.09 3.3 3.5 3.7 3.8 4.0 4.3 4.6 Absorbancia

Universidad Veracruzana Facultad de Bioanálisis Bioquímica (laboratorio) Práctica: No.4

“Determinación de glucosa” Fundamento: Glucosa, azúcar monosacárido, de fórmula C6H12O6. Se encuentra en la miel y en el jugo de numerosas frutas. El nombre alternativo azúcar de uva proviene de la presencia de glucosa en las uvas. Se produce en la hidrólisis de numerosos glucósidos naturales. La glucosa está presente en la sangre de los animales. Es un sólido cristalino de color blanco, algo menos dulce que el azúcar destinado al consumo. Las disoluciones de glucosa giran el plano de polarización de la luz a la derecha; de ahí el otro nombre alternativo dextrosa (del latín dexter, 'derecha'). La glucosa cristaliza en tres formas diferentes y cada una de ellas gira el plano de polarización de la luz en distinto grado. Es un cuerpo de sabor dulce, muy soluble en agua, pero poco soluble en los disolventes orgánicos, y no es volátil. Cristaliza con una molécula de agua en forma de prismas monoclínicos o bien anhidra en cristales rómbicos (p. f., 146,5° C). Presenta birrotación. Es reductora y se oxida con gran facilidad. Es fermentada por las zimasas segregadas por la levadura de la cerveza. La glucosa se forma en la hidrólisis de numerosos hidratos de carbono, como la sacarosa, maltosa, celulosa, almidón y glucógenos. La fermentación de la glucosa por la acción de levaduras produce alcohol etílico y dióxido de carbono. Industrialmente, la glucosa se obtiene en la hidrólisis del almidón bajo la acción de ácido diluido, o más frecuentemente, de enzimas. Su aplicación más importante es como agente edulcorante en la elaboración de alimentos. También se emplea en curtidos y tintes, y en medicina para el tratamiento de la deshidratación y alimentación intravenosa.

Molécula de glucosa: (representación lineal)

Reactivos:

-

Filtrado de Folin. Sol. Cuproalcalina. Sol. Fosfomolibdica. Sol. Patron de glucosa equivalente a 200 mg. / 100m.

Técnica:

1

2

3

4

5

6

7

Agregar patron glucosa

1

2

3

4

5

6

7

1

2

3

0

0.25

0.5

1

0

0

0

Solución cuproalcalina 1 ml. Mezclar y ebullir 5 min.

1

2

3

4

5

6

7

1

0.25

0.5

0

0

0

0

Tabulación:

Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Gráfica:

Patron de glucosa Agua destilada 0 1 0.25 0.25 0.5 0.5 1 0 0 0 0 0 0 0 Absorbancia 0 0.03 0.05 0.08 0.07 -

Filtrado de Folin 1 1 1

Universidad Veracruzana Facultad de Bioanálisis Bioquímica (laboratorio) Práctica: No.5 “Medición de la presión parcial simulada de CO2 pulmonar alveolar” Objetivo: Establecer la importancia del mecanismo respiratorio en el ajuste de la ventilación para mantener la presión de CO2 alveolar constante. Fundamento: La regulación respiratoria del equilibrio acido – base constituye un sistema de amortiguación de tipo físico de importancia casi igual a los sistemas amortiguadores. A pesar de la amortiguación de la sangre, se produce cierta desviación del pH normal cuando existen factores que aumentan y disminuyen la ventilación pulmonar. En primer lugar, el centro respiratorio es estimulado debido a un aumento en la presión de CO2 en sangre y de acuerdo con la ecuación de Henderson está conduciría a un pH más bajo y a una acidosis. Esta estimulación acelera y profundiza los movimientos respiratorios para eliminar el exceso de acido y CO2. En el caso contrario se daria lugar a una alcalosis, induciendo a una respiración lenta y superficial. En general, la tensión de oxigeno altera la tasa de ventilación, sólo cuando la tensión de CO2 es anormalmente baja o excesivamente alta. Material y equipo: - Matraz Erlenmeyer 125 ml. - Pipetas de 1,2,3 y 5 ml. - Perillas de caucho. - Manguera de caucho. - Colorímetro. - Tiras de pH. Reactivos: - NaHCO3 58 mg. / 500 ml.______0.50M. - Rojo de fenol. Técnica: Pipetear 5 ml de NaHCO3 y 200 mM y un ml de rojo de fenol y agua hasta un volumen de 10 ml Soplar con la perilla de caucho, medir pH y absorbancia. Después soplar con la boca, medir pH y absorbancia.

Tabulación: Matraz Caso 1 (perilla) Caso 2 (boca) Conclusión: Nos pudimos dar cuenta que la solución bajó en su concentración y aumento en su pH, dando lugar a una alcalosis respiratoria simulada. Graficación: pH 7 9 Absorbancia 0.28 0.13

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN – XALAPA Practica No. 9 Preparación de extracto de lípidos totales Objetivo:  Obtención de extracto de lípidos a partir de tejidos animales.  Establecer los procedimientos más comunes para la hidrólisis de las grasas.  Identificar los productos de la saponificación de las grasas y su aplicación en la actualidad.  Hacer la correlación bioquímica de la importancia del análisis de los lípidos con relación al cuerpo humano. Fundamento: Lípidos, grupo heterogéneo de sustancias orgánicas que se encuentran en los organismos vivos. Los lípidos están formados por carbono, hidrógeno y oxígeno, aunque en proporciones distintas a como estos componentes aparecen en los azúcares. Las grasas y aceites, también llamados triglicéridos, son también otro tipo de lípidos. Sirven como depósitos de reserva de energía en las células animales y vegetales. Cada molécula de grasa está formada por cadenas de ácidos grasos unidas a un alcohol llamado glicerol o glicerina. Cuando un organismo recibe energía asimilable en exceso a partir del alimento o de la fotosíntesis, éste puede almacenarla en forma de grasas, que podrán ser reutilizadas posteriormente en la producción de energía, cuando el organismo lo necesite. A igual peso molecular, las grasas proporcionan el doble de energía que los hidratos de carbono o las proteínas. Material y Equipo: Pipetas graduadas Matraces Elermeyer Vaso de precipitado Probeta graduada Embudo de vidrio Tripie Tela de asbesto Mechero Bunsen Papel filtr

Técnica (algoritmo):

Pasarlo a un matraz de 125 ml Ponerlo a calentar sin que hierva.

Añadir 5 ml de alcohol.

Enfriar con agua de la llave.

Añadir 5 ml de éter etílico.

Reposar hasta que sedimente.

Evaporar sin hervir.

Filtrar, repitiendo el procedimiento de 3 a 4 veces. Agregando cada vez 10 ml de éter.

Enfriar y agregar 10 ml de éter agitando para disolver los lípidos.

5ml del filtrado + 10 ml de KOH

Titular con HCl 0.1 N, hasta que aparezcan un color rojo.

En otro matraz agregar 5 ml de eter + 10 ml de KOH

RESULTADOS: Mililitros gastados de HCl gastados tubo problema blanco 11 =1 1 x .1 = 0.1 0.1 x 255 = 25.5 mililitros de HCl tubo 10

5ml 8grs. 25ml 100 % x = 127.5 1.593

25.5 x

127.5 x x=

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN – XALAPA Practica No. 10 Fundamento: Cuando se hacen variaciones discretas de las concentración de hidrógenos en medio donde se encuentran actuando las enzimas, la actividad de esta disminuye de una manera reversible si el cambio de pH no es muy importante: si la modificación de pH es grande puede provocar la desnaturalización de la enzima, con perdida irreversible de su actividad. Material y Equipo:  Vaso pp 50 ml  Tripie

       

Pinzas para bureta Tiras pH reactivas Pipetas Fenolftaleina Alanina 0.1m NAOH HCL Bureta. Titular hasta observar un viraje de color rojo y anotar los ml de NAOH gastados.

Algoritmo: En un vaso p.p 50 ml colocar 10 ml se alanina 0.1m y agregar 1 gota de fenolftaleina.

Al primer viraje pk1 se le mide el pH y se le agregan 2 gotas de timol hasta que observe un segundo viraje de color violeta y anotar los ml de NAOH gastados midiendo el pH.

Resultados: Pk1=23.5 pH=2 Pk2=18.5 pH=9
Cálculos: PI = pk1+ pk2/2 PI = 23.5 + 18.5/2 = 42.0 pH = 5

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN – XALAPA Practica No. 11 Cromatografía Objetivos: Aprender el concepto básico de lo que es la cromatografía. Comprender que la cromatografía s un método para separar las sustancias. Fundamento:

Cromatografía, técnica de análisis químico utilizada para separar sustancias puras de mezclas complejas. Esta técnica depende del principio de adsorción selectiva (no confundir con absorción). En la cromatografía en papel, una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel adsorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos. Otra técnica conocida como cromatografía gas-líquido permite la separación de mezclas de compuestos gaseosos o de sustancias susceptibles de vaporizarse por calor. El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolíferos y de fisión radiactiva. Material y Equipo:  Papel filtro  Capilares  Pinzas para tubo de ensaye  Tapon Algoritmo: En otro papel filtro En un papel filtro agregar anaranjado de agregar fenoftaleína metilo y en otro tubo de y en un tubo de ensaye amoníaco. ensaye amoníaco.

En otro papel filtro agregar juntos la fenoftaleína y naranja de metilo. Resultados RF = mm de distancia del origen al centro de la mancha_______ mm de distancia del origen del origen al frente del solvente FENOFTALEÍNA 8 .8 = 10 3= .31 9.5

ANARANJADO DE METILO MEZCLA

3.5 = .38 9 4.5 = .5 9

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN – XALAPA Practica No. 12 Separación de Aminoácidos por Cromatografía de partición de papel

Objetivos:  Establecer la relación del grupo amino de los AA reactivo de Ninhidrina.  Identificar el compuesto analizado en base a la posición en el cromatograma. con el

Fundamento: Aminoácidos, importante clase de compuestos orgánicos que contienen un grupo amino (8NH2) y un grupo carboxilo (8COOH). Veinte de estos compuestos son los constituyentes de las proteínas. Se los conoce como alfaaminoácidos (á-aminoácidos) y son los siguientes: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina. Todos ellos responden a la siguiente fórmula general:

Aparte de los aminoácidos de las proteínas, se han encontrado en la naturaleza más de 150 tipos diferentes de aminoácidos, incluidos algunos que contienen los grupos amino y carboxilo ligados a átomos de carbono separados. Estos aminoácidos de estructura poco usual se encuentran sobre todo en hongos y plantas superiores. Material y Equipo:  Tiras de papel Whatman  Pipetas Pasteur  Frasco grande  Parrilla eléctrica Algoritmo: En tres tubos de ensaye agregar de1 a 1.5 ml de propanol

Marcar con un punto el papel filtro donde se colocara la gota

Colocarlos en los tubos de forma que no se contaminen

Resultados:

mm de distancia del origen al centro de la mancha RF = mm de distancia del origen al frente del solvente

LEUCINA

6 = 10

0.6

ACIDO ASPARTICO

4.5 = 0.47 9.5

ÁCIDO ASPARTICO

6.5 9

= 0.7

LEUCINA

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN – XALAPA Practica No. 13 Hidrólisis de las proteínas, titulación con formol Objetivos:  Describir el fenómeno químico de la hidrólisis de proteínas.  Describir cuales son los productos de obtención al final de una reacción de hidrólisis de las proteínas.  Describir cuales son los grupos químicos funcionales al final de la hidrólisis en aminoácidos y péptidos.  Describir los diversos procesos de hidrólisis proteica. Fundamento: Las proteínas pueden romperse por hidrólisis en pépticos y aminoácidos. El tamaño y número de los fragmentos obtenidos ( grado de hidrólisis ), depende de diversos factores como la temperatura, tiempo de reacción o la naturaleza del catalizador. Existen varios tipos de hidrólisis: Hidrólisis, tipo de reacción química en la que una molécula de agua, con fórmula HOH, reacciona con una molécula de una sustancia AB, en la que A y B representan átomos o grupos de átomos. HIDRÓLISIS ACIDA: Consiste en el tratamiento de las proteínas con ácidos minerales concentrados en presencia de calor. HIDRÓLISIS ALCALINA: Consiste en que se obtiene la roptura de los enlaces peptidicos por la acción de soluciones alcalinas fuertes.

HIDRÓLISIS ENZIMATICA: Este método es el preferido, porque no destruye los aminoácidos Material y Equipo:  Tripie  Bureta  Soporte Universal  Termómetro  Pipetas  Mechero Bunsen  matraz  Tela de alambre conasbesto  1 vaso de precipitado  1 recipiente para Baño María  NaOH 0.02 N  Tripsina  Fenoftaleína  Gelatina 5%  Formol neutro Algoritmo: 50 ml de gelatina + 10 ml de tripsina

Pipetear 10 ml de la mezcla

Enfriar

Hervirlo durante 2 min.

Agregar 15ml de formol + 3 gotas de fenoftaleína

Titular con NaOH 0.02 N, hasta color rosa

Todo el tiempo mantener a B.M. , la mezcla inicial a 37 o C Resultados:

Tomar muestras cada 20 min

TIEMPO 0 min. 20 min 40 min 60 min

TUBO 1 2 3 2

Ml GASTADOS DE NaOH 24.3 28.2 29.6 29.8

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN – XALAPA Practica No. 14 Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de reacción enzimático Objetivos:  Describir el papel que juega la formación del complejo en cinética enzimática.  Interpretar los cambios que ocurren en la velocidad de reacción al aumentar la concentración de enzima. Fundamento: Las enzimas se clasifican en varias categorías: hidrolíticas, oxidantes y reductoras, dependiendo del tipo de reacción que controlen. Las enzimas hidrolíticas aceleran las reacciones en las que una sustancia se rompe en componentes más simples por reacción con moléculas de agua. Las enzimas oxidativas, conocidas como oxidasas, aceleran las reacciones de oxidación, y las reductoras las reacciones de reducción en las que se libera oxígeno. Otras enzimas catalizan otros tipos de reacciones. Las enzimas se denominan añadiendo asa al nombre del sustrato con el cual reaccionan. La enzima que controla la descomposición de la urea recibe el nombre de ureasa; aquellas que controlan la hidrólisis de proteínas se denominan proteasas. Algunas enzimas como las proteasas tripsina y pepsina, conservan los nombres utilizados antes de que se adoptara esta nomenclatura.  Material y Equipo.  Tubos de ensaye

        

Matraz Elermeyer Soporte Universal Bureta Pinzas para Soporte Universal Pizeta con agua destilada Soluciones Buffer Urea Bicloruro de mercurio Ureasa

.

Algoritmo:

Agregar Urea 0.25 M 7.5 ml a todos menos el tubo # 1

Agregar 1gota de solución de Buffer pH 7.2

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio solo al uno

Agregar 2 ml de Agua Destilada a todos

Agregar a todos los tubos 0.5 ml de ureasa a todos

Incubar 30 min.

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio excepto al tubo # 1 Tomar 5 ml de cada tubo y agregar 2 gotas de rojo de metilo y titular con HCl

Resultados: TUBO 1 HCl gastados .1

2 3 4 5 6 0.1 1 1.5 2.0 2.0 .5 .5 .5 .5 .5 = = = = = .2 x .5 x 1 x 1.5 x 1.5 x 50 50 50 50 50

.7 1.0 1.5 2.0 2.0 = = = = = 10 25 50 75 75

250 x .5 = 12.5 10 250 x 1 10 250 x 2 = 25 = 50 10

250 x 50 = 125 10 250 x 7.5 = 187.5 10

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS REGIÓN – XALAPA Practica No. 15 “ Efecto de la Temperatura en la Velocidad de la Reacción “Enzimatica” Objetivos:  Interpretar el efecto del tiempo de acción enzima sobre la velocidad de reacción Fundamento: En reacción enzimatica se mantienen en condiciones optimas todos los factores que le afectan y solo se varia en el tiempo de la acción de la enzima, tendremos que la transformación de sustrato en producto aumenta en forma directamente proporcional al tiempo de la incubación . El factor por el cual la velocidad de un proceso biológico aumenta con un incremento de la temperatura de 10. la velocidad de numerosos procesos biológicos, como la contracción del corazón de un corazón fuera de la actividad torácica, casi se duplica con una elevación de 10°c en la temperatura(Q10=2). Material y Equipo:  Tubos de ensaye  Gradilla metálica  Ureasa  Tripie  Mechero Bunsen  Tela de asbesto Algoritmo:

Agregar Urea 0.25 M 7.5 ml a todos menos el tubo # 1

Agregar 1gota de solución de Buffer pH 7.2

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio solo al uno

Agregar 2 ml de Agua Destilada a todos

Agregar a todos los tubos 0.5 ml de ureasa a todos

Incubar 30 min, excepto el tubo 0, 18, 37, 50, y 80 grados

Tomar 5 ml de cada tubo y agregar 2 gotas de rojo de metilo y titular con HCl Cálculos
Q10
=

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio excepto al tubo # 1

80 70

=

60 56

=

1.67

Q10 = 70 = 56 = 1.67 60 52 Q10 = 60 50
=

52 45

=

1.15

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