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Clase Teórica

:
Papel del Laboratorio en el
diagnostico de Tuberculosis
OBJETIVOS
•Introducción a las bases del diagnóstico de
las enfermedades producidas por
Mycobacterium tuberculosis.
•Precisar el rol del Laboratorio en el
Diagnóstico de las enfermedades
producidas por Mycobacterium tuberculosis.

Introducción


Hoy hay en el mundo más
tuberculosis que en
cualquier otro momento de
la historia
Mortalidad: 1 paciente cada
20 segundos
De no tomar medidas,
1.000 millones de personas
contraerán
la enfermedad para 2020.

TB MULTIRRESISTENTE EN AMERICA .

año 2009. .Casos de TBXDR Perú.

.Personas con TBXDR en Lima.

. aerobios.  Bacilos ácido alcohol resistentes.  Pared celular rica en lípidos.Mycobacterium  Bacilos. inmóviles y no esporulados.  Cultivos requieren incubación de 8 semanas.

 Contenido de G + C (61-71%). .FISIOLOGÍA Y ESTRUCTURA  Ácido alcohol resistencia.  Presencia de ácido micólico con 70.  Pared celular compleja.90 átomos de carbono.

peptidoglicano Abundantes lípidos Arabinogalactano Ácidos micólicos Glucolípidos Membrama citoplásmica  Lipoarabinomananos .Pared celular      Similar a gram positivas.

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Micólico Cord factor .arabinogalactano polisacarido Acyl -lipido Lipoarabinomanano LAM (lipopolisacarido) Ac.

Cadena Epidemiológica  Agente    causal Complejo Mycobacteriun tuberculosis Depende de pH y O2 Replicación Lenta  Reservorio: fuente de Infección: Hombre sano infectado – hombre enfermo .

Transmisión   Núcleos suspendidos en pequeñas gotas que son expulsadas al hablar. Estas pequeñas gotas permanecen infectantes en el aire por horas. por lo que pueden ser inhaladas por otras personas. cantar o toser. .

Enfermedad    No todas las personas infectadas enferman.Infección . la enfermedad pulmonar es la más frecuente (80-85% de todos los casos diagnosticados) debido a que el bacilo necesita oxígeno para multiplicarse. M. las más susceptibles.tuberculosis se disemina por todo el organismo Sin embargo. sólo una de cada diez. SNC .

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Definiciones diagnósticas Tuberculosis pulmonar (TBp). Tuberculosis grave y no grave. . Tuberculosis extrapulmonar (TBe).

Bases del diagnóstico  Sospecha Clínica     Tos (sintomático respiratorio: SR) Baja de peso Sudoración Nocturna Anorexia  Técnicas diagnosticas: Demostrar la presencia del Mycobacterium    Microscopia Cultivo Técnicas moleculares .

Técnicas Diagnosticas  Baciloscopia    Cultivo     Coloración Ziehl neelsen Aureamina Medios a base de huevos: Lowenstein Jensen Ogawa Medios Líquidos: Middlebrook Automatizados: Bactec Técnicas de Biología Molecular .

En menores de 15 años se utiliza como apoyo al diagnóstico de la TB.1 ml. tuberculosis. de tuberculina vía intradérmica. Se aplica en el tercio superior. que se adquiere después de una infección producida por el mismo. La tuberculina es conocida como “derivado proteínico purificado” o PPD. . cara externa del antebrazo 0.Diagnóstico inmunológico Prueba de Tuberculina      Es una prueba cutánea que se realiza para conocer si el organismo de la persona presenta reacción frente a las proteínas del M.

Técnica de Mantoux a c b d .Prueba de la tuberculina.

Prueba de tuberculina. Lectura Incorrecto Correcto .

Técnica de elección para el  Diagnostico de Tuberculosis Pulmonar. Un programa para Laboratorios.  Monitoreo y respuesta del tratamiento.UICTER.CDC.BACILOSCOPIA    Primera prioridad Nacional para el control de la Tuberculosis en Países de alta prevalencia.OMS 2000 . Importancia en Salud Pública: Indica mayor capacidad de transmisión Baciloscopia Directa.

Neelsen .Microscopía  Coloración de Ziehl.

Varía de acuerdo al cuadro clinico Necesitan gran carga bacilar para que la baciloscopia sea positiva Baja sensibilidad en TBC extrapulmonar. reproducible. . rápida.BACILOSCOPIA VENTAJAS DESVENTAJAS Depende de la calidad de la muestra: Esputo/ saliva. Difícil detección en pacientes en estadios iniciales de la enfermedad (no expectoran) Técnica sencilla. Sensibilidad alta en sintomaticos respiratorios. accesible a laboratorios de 1er nivel y barata Alta especificidad en países de alta endemia.

10% .Baciloscopia: Sensibilidad  Varía de acuerdo al cuadro clínico TB cavitaria……80 – 90% TB Infiltrado……50 – 80% Miliar…………… 5 .

 De no ser trabajada el mismo día de su recolección. deberá ser refrigerada a 4º C y protegidas de la Luz . sobretodo las de Jugo gástrico.Baciloscopia: Toma de Muestra  La muestra debe recogerse en frasco ancho con tapa rosca. de material plástico y descartable.  No deben ser recolectada de 24 horas.  La muestra debe ser llevada al Laboratorio lo mas rápido posible. cierre hermético.

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En países de mediana-alta endemia. mas del 99% de los BK+ son Tuberculosis.Baciloscopia: Especificidad     Especificidad: 96 – 99 % Depende de la endemia del país. Falsos Positivos:     Nocardia Restos de alimentos Hongos Ralladuras .

Sintomático Respiratorio 2 Baciloscopias positiva negativa Radiografía pulmonar Dx TBC Algoritmo de Diagnostico Anormal Normal 2 Baciloscopias positiva Dx TBC negativa Cultivo Seguimiento diagnostico .

Necesita 10 a más bacilos/ ml de muestra. Ideal para muestras paucibacilares y extrapulmonares Base de las pruebas de sensibilidad Desventajas      Costo mayor que el de la baciloscopia Técnica más compleja Necesita personal adiestrado Adecuada Infraestructura Tiempo de incubación de acuerdo a Medio utilizado:   Medios Lowenstein Jensen / Ogawa de3 a 8 Semanas Medios Líquidos de 10 días a 4 semanas .Instrumentos Diagnósticos El Cultivo     Identifica 20% más que la baciloscopia en SR. en áreas de gran prevalencia.

Normas y procedimientos para el control de la tuberculosis en el Perú.Marzo 2001 .Seguimiento Diagnostico  Mientras se espera resultado de cultivo de 3 a 8 semanas   Dx diferencial con otras enfermedades Baciloscopias cada 2 semanas Actualización de la doctrina.

. Todos los menores de 15 años Control • • Muestras de pacientes en tratamiento con sospecha de fracaso Baciloscopia positiva en dos controles sucesivos después de un período de negativización.Indicaciones del uso de cultivo para Diagnóstico      Sintomático Respiratorio con Rx anormal y baciloscopía negativa con cuadro clínico sospechoso de tuberculosis Baciloscopia paucibacilar: 1 A 9 baar en 100 campos microscópicos observados Todas las muestras extrapulmonares Toda muestra pulmonar o extrapulmonar de los pacientes portadores del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH positivos) y sospecha de tuberculosis.

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 Primera línea  Segunda línea .Prueba de Sensibilidad  Examen auxiliar para determinar la sensibilidad o resistencia a los fármacos antituberculosos en los casos de fracaso a los esquemas de tratamiento antituberculosos.

. Cepas de cultivos positivos de pacientes con infección VIH o SIDA/TB Cepas de cultivos positivos de personal de salud con TB pulmonar baciloscopía positiva.Indicaciones para la Prueba de Sensibilidad a fármacos de Primera línea    Cepa del cultivo positivo que sirvió para el diagnóstico de fracaso a los esquemas de tratamiento.

Métodos Diagnósticos Moleculares H e r r a m ie n t a s d e B io lo g í a M o le c u la r H ib r id a c ió n p o r s o n d a s D e t e c c ió n d ir e c ta M u e s tra s C u lt iv o T é c n ic a s d e a m p lific a c ió n D e t e c c ió n d ir e c ta I d e n t if ic a c ió n R e s is t e n c ia a n t ib io t ic a T e c n ic a d e la h u e lla d ig it a l E s t u d io s e p id e m io lo g ic o s F u e n t e s d e in f e c c ió n R e c a id a s /r e in f e c c ió n .

De acuero a evidencia científica (metanalisis) un resultado de PCR negativo NO descarta el diagnostico de tuberculosis Técnicas moleculares son de PRIORIDAD para diagnostico de MDR o XDR . deberá evaluarse muy bien y siempre dentro de análisis crítico y juicio clínico adecuado.Conclusiones        Es erróneo pensar en reemplazar los exámenes convencionales por las técnicas moleculares. Por ahora no deberá sacrificarse una muestra para utilizarla en PCR como diagnostico de Tuberculosis. Baciloscopia muy útil : bien realizada. positivo o negativo. La interpretación de un resultado de PCR. El valor no debe subestimarse ni sobrestimarse. El cultivo en medio solidos o liquidos sigue siendo el patrón de oro.