You are on page 1of 48

DIAGNOSTIGO GENETICO PREIMPLANTACIONAL

Manuel Gasco 

El

diagnóstico genético preimplantacional (DGP) es el estudio del material genético del embrión para detectar determinadas alteraciones. alteraciones. Con este estudio genético parcial podemos seleccionar los embriones cromosómicamente normales antes de su transferencia al útero materno. materno.

Aneuploidías 
Monosomías  Trisomías  Triploidías 

La

técnica consiste en extraer una o dos células de un embrión de más de seis células para analizar su material genético. genético.

Three day old embryos 

FISH:

Hibridación "in situ" con sondas fluorescentes de DNA. DNA. 

PCR  Cromosomas:

X, Y, 13, 16, 18, 21 y 22

FISH 
Sondas

fluorescentes q se ligan a cromosomas específicos y son marcadas con biotina, estos son detectados con anticuerpos conjugados con fluorocromos específicos y se observan bajo microscopía de fluoerescencia. fluoerescencia.

Interphase nucleus

X

Y

Normal Diploid Normal Diploid

Triploid Triploid

Tetraploid Tetraploid

Missing chromosomes Missing chromosomes

PGD

Monosomy

Double trisomy

Lepidium meyenii (Maca) incrementa el tamaño de la camada en ratonas adultas normales
Ruiz Ana, Stephanie Salazar, Norma Aspajo, Julio Rubio, Manuel Gasco, Gustavo Gonzales.

Instituto de Investigaciones de la Altura Departamento Académico de Ciencias Biológicas y Fisiológicas Facultad de Ciencias y Filosofía Universidad Peruana Cayetano Heredia

INTRODUCCION
‡ Maca es una crucifera q crece exclusivamente entre 3800 y 4500 msnm en los andes centrales peruanos y ha sido utilizada por siglos como nutriente y como potenciador de la fertilidad. ‡ Estudios previos han demostrado efectos positivos de la maca sobre la espermatogénesis (Gonzales GF, 2001, 2003, 2004; Chung, 2005; Bustos-Obregòn, 2005) y sobre el comportamiento sexual (Zheng BL, 2000; Cicero AF, 2001, 2002) mientras que en hembras solo hay un estudio reportado donde determinan que la maca no modifica la tasa de implantación en ratonas (Oshima M, 2003).

OBJETIVO
‡ Determinar el efecto del extracto acuoso de Maca en ratonas adultas sobre los índices reproductivos y peso uterino (ratonas ovariectomizadas).

METODOS
‡ Ratonas de la cepa Balb/C, fueron divididas en 3 grupos:
Indices Reproductivos Sitios de Implantación Peso Uterino Ratas Ovariectomizadas

Vehículo

Maca
1 g/kg

Vehículo

Maca
1 g/kg

Vehículo

Maca
0.5 g/kg

Preparacion del Extracto Acuoso
‡ El hipocótilo seco molido se hierve en agua durante 2 hrs, se filtra y se refrigera a -70oC y luego al proceso de liofilizado. ‡ 2.2 g del liofilizado se diluye en agua destilada hasta obtener una dosis de 1g/kg.

Estudio de los sitios de Implantación
‡ El tratamiento fue durante 22-28 días (15 días previos a la monta y durante los primeros 7 días de gestación). ‡ Las ratonas fueron sacrificadas al día 7 de preñez, el útero fue removido y se observaron los sitios de implantación, los embriones fueron contados y pesados.

Estudio de los Indices Reproductivos
‡ 15 días previos a la monta, durante la preñez y 21 días post parto, las hembras fueron administradas con maca o vehículo. ‡ Se registró el número de crías vivas al día 4 y 21, el día de la abertura vaginal y la tasa sexual (fracción masculina).

Indice de Fertilidad
( preñadas/ copularon) X 100

Indice de Gestación
( con crías vivas/ preñadas) X 100

INDICES REPRODUCTIVOS

Indice de Viabilidad Post-natal
(crías vivas día 4/crías vivas) X 100

Indice de Viabilidad al destete
(crías vivas al día 21/crías vivas día 4) X 100

Efecto estrogénico de Maca

?

Ratonas ovariectomizadas 30d

Administró 42 días de Maca o Vehículo

Análisis Estadísticos
‡ Normalidad de los datos: Test de Kolmogorov-Sminorv. ‡ Peso corporal, sitios de implantación, longitud de la gestación y tamaño de camada se evaluaron con el test t de Student¶s. ‡ Analisis multivariado fue utilizado para determinar si el tratamiento con maca influye sobre el número de crías y sobre el día de la abertura vaginal. ‡ Los índices reproductivos fueron analizados con el test de proporción pareada. ‡ P<0.05 fue estadísticamente significante.

RESULTADOS
I DICES REPRODUCTIVOS E RATO AS QUE RECIBIERO MACA O VEHICULO
1 00 98 96 94 92

Vehículo Maca

%

90 88 86 84 82 80 Indice de Fertilidad Indice de Gestacio n Indice de Viabilidad P o snatal Indice de Viabilidad al Destete

Sitios de Implantación
Numero de implantaciones
15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1

Vehículo Maca

Sitios de Implantación

Longitud de la Gestación
21 20

Días de preñez

19 18 17

Vehículo Maca

16 15 Longitud de la Gestación

Efecto de la maca sobre el tamaño de la camada
1 3 1 2 1 1

*

*

Número de crías

1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1

Vehículo Maca

Día 1

Día 4

Día 21

* P<0.05 respecto al grupo vehículo

Día del Abertura Vaginal
35 Día de la abertura vaginal 30 25 20 15 10 5 0 <7 crías • 7 crías Vehículo Maca

Ratonas Ovariectomizadas
90 80 70

*

Peso uterino en mg

60 50 40 30 20 10 0

Vehículo Maca

Peso Uterino

CONCLUSIONES
La administración de maca (1 g/kg) a ratones hembras normales en edad reproductiva incrementa el tamaño de la camada, sin afectar los índices de fertilidad, de gestación, de viabilidad post-natal, de viabilidad al destete, número de implantaciones y apertura vaginal. La administración de maca (0.5 g/kg/) aumenta el peso uterino en ratonas ovariectomizadas, luego de 42 días de tratamiento.

RATAS TRATADAS CON MACA NEGRA (Lepidium meyenii) DURANTE UN CICLO ESPERMATOGÉNICO
J. Nieto, M. Gasco, J.Rubio, S. Yucra, GF Gonzales

Instituto de Investigaciones de la Altura Facultad de Ciencias y Filosofía Universidad Peruana Cayetano Heredia

INTRODUCCIÓN
‡ La espermatogénesis en rata dura 12.5 días. ‡ La Maca presenta diferentes ecotipos de acuerdo al color de su hipocotilos (13 descritos). ‡ La Maca amarilla, roja y negra obtenidas de Carhuamayo Junín, tienen diferentes componentes nutricionales al compararlos entre ellos. (Yllescas, 1994) ‡ 2005 : Effect of short-term and long-term treatments with three ecotypes of Lepidium meyenii (MACA) on spermatogenesis in rats. (C. Gonzales, J. Nieto, S Yucra, J. Rubio, M. Gasco, C. Góñez, S. Miranda and GF Gonzales) (en revisión) ‡ Maca Negra tuvo el mejor efecto en conteo de espermatozoides y motilidad; maca amarilla tuvo un efecto intermedio; mientras que maca roja no tuvo efectos a nivel de estos parámetros.

Efectos de diferentes ecotipos de Maca ( 42 días) en la longitud del estadío VIII del epitelio del túbulo seminífero (cm.), conteo de espermátides, producción diaria de espermatozoides (DSP) y tránsito de espermatozoides en ratas.

‡

Los datos son promedio ± EE. *P<0.01; **P<0.02 with respect to control group. Number of rats per group is between parentheses.respecto al grupo control. El número de ratas por grupo están entre los paréntesis.

OBJETIVO GENERAL
‡ Determinar el efecto de la maca negra, un ecotipo de la maca (Lepidium meyenii) sobre la producción diaria de espermatozoides, conteo de espermátides, conteo de espermatozoides y niveles de hormonas en un ciclo espermatogénico.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
‡ Determinar el efecto de la maca negra a diferentes tiempos de administración(1,3,5,7 y 12 días) durante un ciclo espermatogénico. ‡ Determinar el efecto de la maca negra en la histología del testículo y del epidídimo durante un ciclo espermatogénico. ‡ Determinar el efecto de la maca negra sobre los niveles de testosterona intratesticular y sérica.

MÉTODO
‡ Se administró a ratas Holtzman adultas 2gr/Kg de MN (666.6 mg.) y vehículo durante 1, 3, 5, 7, y 12 días. ‡ Un día después de cada tratamiento las ratas fueron sacrificadas y evaluadas. ‡ Se pesaron los órganos sexuales: epidídimos, testículos, vesícula seminal y próstata. ‡ Se evaluaron los niveles de testosterona sérica e intratesticular.

RESULTADOS

Producción Diaria de espermatozoides (DSP)
A
22,00

*
20,00 DSP (x10 6 )

a

18,00

cb

16,00

14,00

b
12,00

b
1 3 5 Treatment Time (days) 7 12

(p<0.05)

Conteo de espermatozoides en epidídimo
B
Epidydimal sperm count (x106 ) 230.00 210.00 190.00 170.00 150.00 130.00 110.00 90.00 70.00 1 3 5 Tim e of Treatm ent (days) 7 12 d a c d Black Maca Control

* *

*
cd

c

Conteo de Espermatozoides en el Conducto deferente
C
Vas deferens sperm count (x10 )
Black Maca Control

14.00 12.00 10.00 8.00 6.00 4.00

6

*

* *
c

1

3

5

7

12

Ti

of Treatment (days)

MN 7 DIAS VS MN 12 DÍAS

Área tubular y luminal maca negra durantepor animal, 100días 7 y 12 por grupo. Se contaron 20 tubulos
% o luminal area related to tubular area

30 25 20 15 10 5 0 7 Days 12 Days *

*P<0.05 respecto al area tubular

¡

35

 

ontrol

Blac Maca

Efectos de Maca Negra en los túbulos seminíferos administrada a ratas durante 7 y 12 días. A,C: Grupos controles de ratas tratadas durante 7 y 12 días, respectivamente; B,D: Maca Negra tratada durante 7 y 12 days, respectivamente. HE stain. ×100 magnification. Las barras representan 500 um.

Histología de la cola del epidídimo en ratas machos adultos tratadas con Maca Negra durante 7 y 12 días. A, C: grupos Control de ratas tratadas durante 7 y 12 días, respectivamente; B, D grupos de Maca Negra (2g/kg) tratada durante 7 y 12 días, respectivamente. HE stain. Magnificación: X 10. Las barras representan 500 um.

MACA NEGRA 7D TESTOSTERONA INTRATESTICULAR

Niveles de testosterona Intratesticular (TTI) y testosterona sérica (TS)- ng/g testículo

C

MN

TTI

16,89 ± 2.03

17,22 ± 3.67

T SERICA

264.73 ± 34.11

229.46 ± 47.18