Tema

Curva de crecimiento bacteriano

Clasificación bacteriana

Metabolismo y Fisiología
Biología Celular

Nutrientes
1- Fuente de energía luz química

2- Macronutrientes H K O Mg C Na N 95% Ca S Fe P 3- Micronutrientes (elementos traza) Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W 4- Factores de crecimiento ‡Vitaminas ‡Purinas y pirimidinas ‡Aminoácidos

Macronutrientes
Fuente de carbono - CO2 - Compuestos orgánicos Carbohidratos, azúcares, proteínas, aminoácidos, lípidos, ácidos grasos, glicerol NH4, NO3-, N2 Proteínas, peptonas, aa, bases púricas y pirimídicas, urea Fosfatos Esteres del ácido fosfórico Sulfuros y sulfatos Aminoácidos sulfurados, vitaminas

Fuente de nitrógeno

- Inorgánica - Orgánica

Fuente de fósforo Fuente de azufre

- Inorgánica - Orgánica - Inorgánica - Orgánica

Tipos nutricionales

Fuente de energía

Fuente de C

Ejemplos

Cianobacterias, Luz CO2 bacterias Fotoautótrofos púrpuras y verdes Compuestos Algunas Luz orgánicos bacterias Fotoheterótrofos púrpuras y verdes Algunas Compuestos Eubacterias y Quimioautótrofos o inorgánicos CO2 muchas Archaea ej.: H2, NH3, litótrofos NO2-, H2S La mayoría Quimioheterótrofos Compuestos Compuestos Eubacterias, orgánicos orgánicos algunas Archaea o heterótrofos

Condiciones para el crecimiento microbiano Medios de cultivo
Nutrientes agua fuente de energía fuentes de C, N, otros elementos micronutrientes, factores de crecimiento

Crecimiento
temperatura pH

Condicione s de cultivo

luz ventilacion actividad de agua potencial redox

Factores de crecimiento
Microorganismos auto o heterotrófos pueden requerir pequeñas cantidades de ciertos compuestos orgánicos que no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases púricas y pirimídicas * aminoácidos esenciales proteica * vitaminas

ADN, ARN síntesis coenzimas

Aislamiento

Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una población mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los microorganismos en cultivo puro Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra cuando el o los microorganismos están en una proporción adecuada., se realiza por estrías (agotamiento) con o sin dilución previa de la muestra (suelo, alimentos), en medio sólido Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporción en la muestra, se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en medio líquido. Luego de varios pasajes se aisla por el método de estrías.

Clasificación de los medios de cultivo
Según su naturaleza física
* líquidos * sólidos - solidificante: agar-agar, silico-gel * semi-sólidos

Según su composición
* definidos o sintéticos: composición química conocida * no definidos o complejos: composición química no definida, enriquecidos con peptonas, extracto de carne, de levadura, de suelo, sangre

Según su uso en el laboratorio
* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, además de los nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya composición permite el desarrollo de un grupo determinado Ej.agar-antibióticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl superior a la concentración fisiológica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en él. Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Según su uso en el laboratorio
* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, además de los nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya composición permite el desarrollo de un grupo determinado Ej.agar-antibióticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl superior a la concentración fisiológica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en él. Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Cultivo en medio líquido ‡ Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento. Cultivo en medio sólido ‡ Puede ser en tubos o placas a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar. b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura. c) Siembra en placas. Puede ser en superficie (por estrías o bañado) o incorporada (mezclando el inóculo con el agar semifundido)

Aislamiento

Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una población mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los microorganismos en cultivo puro Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra cuando el o los microorganismos están en una proporción adecuada., se realiza por estrías (agotamiento) con o sin dilución previa de la muestra (suelo, alimentos), en medio sólido Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporción en la muestra, se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en medio líquido. Luego de varios pasajes se aisla por el método de estrías.

Cultivo puro
‡ Las colonias se describen por examen macroscópico en función del tamaño, la forma, el borde, la elevación, la transparencia y el color. Esto resulta a veces muy útil en la identificación

‡ A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un examen microscópico que debe mostrar células razonablemente semejantes respecto al Gram y a la morfología.

‡ Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no selectivo por el método de estrías. Esto se conoce como reaislamiento.

Factores del ambiente

‡ físicos: temperatura, gases, pH, presión osmótica ‡químicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas ‡biológicos: otros microorganismos, micro y mesofauna, vegetación, afectan las actividades microbianas

Los distintos factores actúan simultáneamente y resulta difícil el análisis integrado de los efectos.

‡ Sicrófilos - rango: < 0-20°C, óptimo < 15oC
± organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada), bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium ± membrana contiene alto % de ácidos grasos insaturados

‡ Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos - rango: 0-35°C, óptimo 20-30oC
± Pseudomonas - crecen en el refrigerador

‡ Mesófilos - rango: 15-45° C, óptimo: 30-40°C
± la mayoría de los microorganismos (del suelo, aguas, patógenos)

‡ Termófilos - rango: 40-70°C, óptimo de 55-65oC
± membrana contiene alto % de ácidos grasos saturados ± enzimas estables al calor ± Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje

‡ Hipertermófilos - rango: 80-113°C, óptimo > 90oC
± Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)

Oxígeno

Clasificación de los microorganismos según el efecto del oxígeno:  Aerobios pobligados: requieren oxígeno (21% o más) Ej. Bacillus, hongos, etc. pmicroaerofílicos: lo requieren pero a niveles menores que el atmosférico (5-10%) Ej. Azospirillum  Anaerobios pfacultativos: no requieren oxígeno, pero el desarrollo es mejor con oxígeno. Ej. Levaduras, E. coli paerotolerantes: no son sensibles al oxígeno (crecen en ausencia o presencia de oxígeno). Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp. . pobligados: no toleran el oxígeno, muere en su presencia Ej. Methanobacterium, Clostridium

Cultivos en anaerobiosis
‡tubos con medio de cultivo llenos por completo. ‡medios con sustancias que reaccionan con el oxígeno y lo excluyen. ‡dispositivo especial (cámara anaeróbica) ‡cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada, centeno)

Otros gases
componente principal de de la atmósfera (78%). Gas inerte: no es usado por la mayoría de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado
CO tóxico para la mayoría de los organismos (cadena respiratoria)

N2

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos
CH4

liberado a la atmósfera por microorganismos metanogénicos, gas con efecto invernadero, puede ser oxidado a CO2 por bacterias metanotróficas
CO2

importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y anaerobios, fotosintéticos o quimiosintéticos. Muchos hongos lo requieren a niveles superiores a los atmósfericos, para ciertas síntesis
H2 poco usado, tóxico para la mayoría de los microorganismos, brinda

energía a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP

pH El pH es la acidez o alcalinidad de una solución, medida por el log 1/(H+) Clasificación de los microorganismos según su pH óptimo

 Neutrófilo: pH óptimo 7 - Ej.: bacterias
patógenas humanas.
 Acidófilo: pH óptimo 7 - Ej.: muchas de archeobacterias y hongos.  Basófilo: pH óptimo " 7 - Suelos y aguas ricas en carbonatos

las

Crecimiento Microbiano
‡ Concepto: es el aumento poblacional de una especie microbiana en un medio de cultivo provisto de todas las necesidades del microorganismo (cantidad de Nutrientes,
Temperatura, Grado de Humedad, gases y pH) ‡ Par la cuantificación del crecimiento se utilizara el método de espectrofotometría en donde se observa el aumento de la población de microorganismos por el aumento en la longitud de honda del espectro de absorción.

División celular: fisión binaria

Gemación , ej. levaduras

Fisión Binaria

Crecimiento de un microorganismo en medio de cultivo líquido

1- Fase de latencia 2- Fase exponencial 3- Fase estacionaria

Fase de latencia
‡La fase de latencia representa un periodo de transición para los microorganismos cuando son transferidos a una nueva condición. ‡En esta fase se producen las enzimas necesarias para que ellos puedan crecer en un nuevo medio ambiente. ‡En esta fase no hay incremento en el número de células, pero hay gran actividad metabólica, aumento en el tamaño individual de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células.

Fase crecimiento exponencial
‡ Es el período de la curva de crecimiento en el cual el microorganismo crece exponencialmente, es decir que cada vez que pasa un tiempo de generación la población se duplica. ‡ Bajo condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es máxima. Las condiciones ambientales (temperatura, composición del medio de cultivo, etc.) afectan a la velocidad de crecimiento exponencial.

Fase estacionaria
‡ En cultivos en recipientes cerrados una población no puede crecer indefinidamente en forma exponencial. ‡ Las limitaciones del crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de productos tóxicos, porque se alcance un número de células elevado para el espacio disponible o por una combinación de las causas anteriores.

Fase de muerte
‡ Si la incubación continúa después de que una población microbiana alcanza la fase estacionaria, las células pueden seguir vivas y continuar metabolizando, pero va a comenzar una disminución progresiva en el número de células viables y cuando esto ocurre se dice que la población ha entrado en fase de muerte.

Curva de crecimiento bacteriano

CLASIFICACION BACTERIANA
La comprensión de la relevancia y de la compleja nomenclatura de los centenares de bacterias importante puede constituir un considerable desafío. Sin embargo, la clave de esta tarea depende de la organización sistemática del desconcertante conjunto de diferentes microorganismos en unas relaciones lógicas (es decir, de una clasificación taxonómica de los microorganismos).

Clasificación fenotípica de las bacterias
‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Morfología microscópica Serotipo Morfología macroscópica Patrones de antibiograma Biotipo Fagotipo

Clasificación analítica de las bacterias
‡ Análisis de los ácidos grasos de la pared celular ‡ Análisis de los lípidos celulares totales ‡ Análisis de las proteínas celulares totales ‡ Electroforesis enzimática tipo multifocus locus

Clasificación genotípica de las bacterias
‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Relación guanina cítosina Análisis de la secuencia del ácido nucleíco Análisis de plásmidos Ribotipifícación Fragmento de ADN cromosómico

Cocos Gram positivos aerobios
Cocos catalasa-positivos
‡ Micrococcus ‡ Staphylococcus

Cocos catalasa-negativos
‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Aerococcus Alloiococcus Enterococcus Lactococcus Leuconostoc Pediococcus Streptococcus

Cocos y cocobacilos ‡ Branhamella ‡ Moraxella ‡ Neisseria ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡

Helicobacteriaceae Helicobacter Pseudomonadaceae Pseudomonas Pasteurellaceae Actinobacillus Haemophilus Pasteurella

Bacilos

Vibrionaceae

‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡

Enterobacteriaceae Citrobacter Enterobacter Escheríchia Ktebsiella Morganella Plesiomonas Proteus Salmonella Serratia Shigella Yersinia

‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡

Vibrio Aeromonadaceae Aeromonas Campylobacteriaceae Arcobacter Campylobacter

Otros géneros ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Acinetobacter Bartonella Bordetella Brucella Burkholdería Capnocytophaga Cardiobacteríum Eikenella Francisella Kingella Legionella Stenotrophomonas Streptobacillus

Bacilos grampositivos aerobios
Actinomicetos con ácidos micólicos en la pared celular

‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡

Corynebacterium Gordonia Nocardia Rhodococcus Tsukamurella Mycobacteríum

Actinomicetos sin ácidos micólicos en la pared celular ‡ Actinomadura ‡ Dermatophüus ‡ Nocardiopsis ‡ Oerskovia ‡ Rothia ‡ Streptomyces ‡ Actinomicetos termofílicos ‡ Saccharomonospora ‡ Saccharopolyspora ‡ Thermoactinomyces ‡ Tropheryma

Otros bacilos grampositivos ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Arcanobacteríum Bacillus Brevibacterium Erysipetothrix Gardnerella Listeria Turícelía

Bacterias grampositivas y gramnegativas anaerobias
Cocos grampositivos

Cocos gramnegativos ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Anaerococcus Finegoldia Micromonas Peptostreptococcus Schleiferella ‡ Veillonella

Bacilos grampositivos ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Actinomyces Bifidobacteríum Clostrídium Eubacterium Lactobacillus Mobiluncus Propionibacterium

Bacilos gramnegativos ‡ ‡ ‡ ‡ Bacte mides Fusobacterium Porphyromonas Prevotella

Bacterias diversas con importancia médica
‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Mycoplasmataceae Mycoplasma Urea plasma Spirochaetaceae Borrelia Treponema Leptospiraceae Leptospira ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Chlamydiaceae Chlamydia Chlamydophila Otras bacterias Coxiella Ehrlichia Oríentia Rickettsia

Es todo por hoy