BIO-QUIMICA

LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

Dra. Rosilene Linhares Dutra

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Ramo do laboratório clínico no qual os métodos químicos e bioquímicos são aplicados para pesquisa de uma doença. Compreendem mais de 1/3 de todas as investigações laboratoriais de um hospital; Analitos testados: - sangue; - urina; - aspirado do suco gástrico; - Líquor;
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USO TESTES BIOQUÍMICOS
DIAGNÓSTICO EXCLUSÃO DE DIAGNÓSTICO MONITORAMENTO DE TRATAMENTO MONITORAMENTO CURSO DA DOENÇA ESTABELECER PROGNÓSTICO TRIAGEM

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PROCEDIMENTOS
PRÉ-ANALÍTICOS: - POP da coleta; - Orientações ao paciente; - Obtenção da amostra; - Tipos de amostra; - Processamento da amostra; - Armazenamento da amostra; - Transporte da amostra;

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ANALÍTICOS: - Equipamentos; - Metodologia: . reações segundo o produto formado; . reações segundo o procedimento técnico; PÓS-ANALÍTICOS: - Cálculos corretos; - Linearidade do método; - Valores dos controles; - Resultados x quadro clínico paciente; - Liberação do resultado;
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PROCEDIMENTOS PRÉ-ANALÍTICOS
  ORIENTAÇÕES AO PACIENTE: - Necessidade de jejum? Por quanto tempo? - Restrição alimentar? - Tipo de amostra

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RECEBIMENTO E LEITURA DA SOLICITAÇÃO MÉDICA;

- Fornecimento de frasco, orientações de coleta; - Quantidade de amostra que deve ser coletada; - Horário da coleta x horário entrega ao laboratório; - Cuidados com a manipulação da amostra, armazenamento, tempo.
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1.

COLETA DA AMOSTRA: - Quantidade adequada; - Identificação do paciente e da amostra; - Informações sobre o caso clínico; - Registro do paciente e da amostra; - Tipo de tubo para coleta; - Viabilidade da amostra;

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3.1) TIPOS DE AMOSTRAS PUNÇÃO VENOSA SORO: - Parte líquida do sangue; - Coletar sem anticoagulante; - Centrifugar após a coagulação PLASMA: - uréia, glicose, creatinina - coletar com anticoagulante inibidor de glicólise - Obtido após centrifugação SANGUE TOTAL - Hemoglobina glicada
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Sistema de Coleta com Vácuo

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PUNÇÃO ARTERIAL SANGUE ARTERIAL: Sangue oxigenado pelos pulmões e bombeado do coração para todos os tecidos; É essencialmente uniforme em composição em todo corpo; Nível hospitalar; UTI Gasometria: . ângulo de 30 a 45° (artéria radial); . ângulo de 45 – 60° (artéria braquial); . ângulo de 45-90° (artéria femoral)
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LOCAIS DE PUNÇÃO ARTERIAL

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PUNÇÃO CAPILAR - Controle da glicemia - Coagulação LÍQUIDOS CORPÓREOS LCR; Sinovial; Ascítico; Pleural; Pericárdico URINA - Provas bioquímicas; - TTGO
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3.2) SELEÇÃO DA VEIA Facilmente palpável; Braço sem realização de mastectomia;, Braço sem infusão IV; Local sem hematoma, edema, contusão; Local sem múltiplas punções; Uso de bolsa de água quente; NÃO APLICAR “TAPINHAS” NO LOCAL A SER PUNCIONADO; Não dobrar o braço após a coleta....aplicar pressão no local é suficiente; Retirar objetos do braço do paciente a ser puncionado;
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3.3) MICROCOLETA DE SANGUE CAPILAR E VENOSO PARA NEONATOS E BEBÊS:

-

Punção digital; Punção do calcanhar; Profundidade da lanceta: 2,4 mm Coletar em macas com auxílio de outro profissional.

- Coagulação – Punção lóbulo da orelha

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3.4) ERROS NA COLETA:

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- Técnica aplicada na coleta: hemólise, liberação de K+

das HM; - Estase prolongada (garrote > 2 minutos) durante a punção venosa; - Amostra insuficiente; - Erros na cronometragem: ex: Urina de 24hs - Recipiente incorretos; - Local de coleta inadequado; - Tubos de soro coletados antes dos tubos contendo anticoagulante; - Armazenamento incorreto:  K+,  PO42-,  enzimas das HM
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Hemólise

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1.

ARMAZENAMENTO, CONSERVAÇÃO E TRANSPORTE - Possibilitar a manutenção da integridade dos

elementos;

-Contribuir para estabilidade das substâncias químicas; - Orientações ao paciente; - Tempo máximo 1hora até o laboratório; - Refrigeração 2-10°C; - Atividade enzimática estável por 4 dias entre 1525°C; - Turbulência excessiva leva a hemólise; - Evaporação de amostras;
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PROCEDIMENTOS ANALÍTICOS
 EQUIPAMENTOS: - Centrífuga; - Espectrofotômetro; - Densitômetro para eletroforese; - Fotômetro de chama; - Deionizador; - Banho-maria; - Estufa para secagem

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CENTRIFUGAÇÃO: - Após repouso de 20-30 minutos para coagulação; - Suave; - Tempo determinado para o analito (3500rpm/10min); - Retirar o coágulo rapidamente.

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ESPECTROFOTÔMETRO

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• A espectrofotometria baseia-se na absorção da radiação

nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho; •Quando luz passa através de uma amostra ou quando ela é refletida de uma amostra, a quantidade de luz absorvida é a diferença entre a radiação incidente (I0) e a radiação transmitida (I). A quantidade de luz absorvida é expressa tanto como transmitância ou absorbância.

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COMPONENTES BÁSICOS DA FOTOMETRIA Fonte de energia elétrica Fonte de energia radiante
 

Lâmpada de Tunstênio – UV próximo e visível Lâmpada de Hidrogênio – região do UV

Monocromador Porta Cubetas
 

Quadradas Redondas

Detectores: E° radiante transmitida em E° elétrica Circuito medidor: E° elétrica emitida e medido em A e/ou T

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Io
feixe de luz de intensidade Io
solução 10 g/l

IT1

Io
solução 20 g/l

IT2

A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução por ela atravessada

Io
feixe de luz de intensidade Io
1 cm

IT1

Io
3 cm
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IT3

A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelo feixe luminoso através das amostras

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 Logo: Quando a E°radiante atravessa uma solução, a
quantidade de E° transmitida ↓ com: - ↑ espessura atravessada (LEI DE LAMBERT); - ↑ da concentração ou intensidade da cor da solução (LEI DE BEER); “LEI DE LAMBERT-BEER” A relação entre E emergente / E° incidente indica a transmitância da solução

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Se a luz passa em uma solução onde não há absorção nenhuma, a absorvância será zero e a transmitância será 100.

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ESPECTRO UV / VISÍVEL

Na faixa de leitura entre 400 – 700 nm
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ESPECTRO UV

O espectro UV está dividido em 3 partes: UVC (< 280nm), UVB (280–320nm), UVA (320–400nm).
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UVA – Luz Negra – 320:400 nm
 

Bronzeado; Formação da catarata;

UVB – Região do eritema – 280:320nm
 

Região potencialmente carcinogênica; Protetores solares;

UVC – Bactericida e Germicida - < 280 nm
 

Protegidos pela camada de ozônio; Lâmpadas de vidro bloqueiam completamente esses raios;

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PRINCÍPIO DA COR COMPLEMENTAR

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OU SEJA: “Uma solução AZUL absorve o VERMELHO com maior intensidade e portanto deve-se escolher a porção vermelha para medida da solução azul”

OBJETIVO: “Utilizar uma faixa no espectro na qual a E° radiante seja absorvida ao máximo ou aproximadamente”

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ESPECTRO IV
Útil na determinação de grupos funcionais em compostos orgânicos; Quando a ligação covalente entre os átomos sofre ação de E° elas vibram e deformam; O retorno ao estado original, libera E° que é medida;

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DENSITÔMETRO
-Instrumento de controle utilizado para medir a densidade óptica em amostras opacas;

- Uso em eletroforese de proteínas, lipídios e Hb;

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FOTÔMETRO DE CHAMA
Medida de concentração de um determinado produto químico, alcalino ou alcalino terroso, quando é introduzido em uma chama na forma de aerossol. Chama excita os átomos com produção de espectros característicos. Converte amostras líquidas em estados gasosos, decompondo em átomos.

Para dosagem de: - Na -K - Li - Ca
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DEIONIZADOR
São úteis para obter água desmineralizada com alto grau de pureza aniônica e catiônica;

Utiliza método de Resina de troca iônica: - Remoção dos cátions presentes na água bruta – RESINA H+; - Remoção dos ânions presentes na água bruta – RESINA HO-;

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Elementos retirados: - Cálcio; - magnésio; - Sódio; - Potássio; - Nitrato; - Sílica; - Hidrogênio; - Ferro; - Manganês; - CO2;

- Bicarbonato; - Cloretos - Carbonatos; - Sais;
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BANHO MARIA Aquecimento lento e uniforme sem exceder 100°C; Acima de 100°C, o calor transferido à água é transformado em energia cinética, formando vapor;

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ESTUFA PARA SECAGEM Não inserir vidraria volumétrica
• Vidraria volumétrica:

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• Vidraria Não-volumétrica:

- Balões volumétricos; Pipetas volumétricas.

- Tubos de ensaio; - Frascos para reagentes; - Funil; - Béquer **; - Proveta **;

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Problemas analítico: Calibração equipamento; Limpeza do instrumento; Qualidade dos reagentes; Controle de qualidade do equipamento; Manutenção de peças do equipamento;

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1.

METODOLOGIA:

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SEGUNDO PRODUTO FORMADO

AGLUTINAÇÃO

COLORIMÉTRICA

PRECIPITAÇÃO
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SEGUNDO PROCEDIMENTO TÉCNICO
REAÇÃO DE PONTO FINAL: Aquelas reações que formam produtos cuja concentração chega a um ponto máximo permanecendo estável por um certo tempo;

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REAÇÃO DE CINÉTICA CONTÍNUA: Reações que utilizam medidas contínuas da formação de produtos;

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REAÇÕES CINÉTICAS DE TEMPO FIXO: Reações que utilizam um tempo fixo de incubação sendo a formação de produtos interrompida por qualquer processo. REAÇÃO DE CINÉTICA DE 2 PONTOS: Útil para diminuir tempo de reação, eliminar interferentes.

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3. LIMPEZA MATERIAL LABORATÓRIO VIDRARIA Deve ser imersa, logo após o uso, em uma solução de detergente neutro (Extran) a 2,0%, por mínimo 1hora (over night); Secar a temperatura ambiente. PIPETAS E TUBOS: Colocadas após uso, submersas em frasco contendo solução de detergente a 2,0% Enxaguados exaustivamente com água de torneira e lavados no mínimo 2 x com água destilada ou deionizada; Secar em estufa a 80°C;
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PONTEIRAS: - Colocadas após uso, submersas em frasco de boca larga contendo solução de detergente a 2,0% ou de NaOH a 1%; - Agitar vigorosamente por cerca de 30 minutos e enxaguar exaustivamente com água de torneira e com água destilada; - Secar em estufa a 37°C; CUBETAS: - Lavadas após o uso com água deionizada;

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PROCEDIMENTOS PÓS - ANALÍTICOS
     Cálculos corretos? Há linearidade do método? Valores dos controles estão dentro do limite estabelecido? Há valores de referência? Resultados e quadro clínico são compatíveis?

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FATORES BIOLÓGICOS QUE AFETAM A INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Sexo; Idade; Dieta; Horário da coleta; Estresse e ansiedade; Postura do paciente; Exercícios; Histórico médico do paciente; Gravidez; Ciclo menstrual; Medicamentos;
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Classificação das CAUSAS DE ERROS nas dosagens bioquímicas

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ERROS INADMISSÍVEIS
ENGANOS: - Troca de rótulo;

- Troca de amostras durante o processamento; - Troca de amostras ou reagentes durante a pipetagem; - Leitura incorreta de instrumentos; - Cálculos errados; - Erro na transcrição de resultados;
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ERROS OCASIONAIS

ACIDENTAIS: - Presença de substâncias interferentes na amostra; - Tubos ou pipetas contaminadas; - Diferentes técnicos;

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ERROS SISTEMÁTICOS REPETITIVOS: - Técnicas de baixa precisão e exatidão; - Reagentes deteriorados ou de má qualidade; - Perda de precisão da vidraria e equipamentos; - Curva ou fator de calibração errados;

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Boa aula!!!!!!!!

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