Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
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Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Q.F.B LUCÍA BAILÓN LIRA
Q.F.B. ROBERTO C. GONZÁLEZ MELÉNDEZ M. en C. ARMANDO CERVANTES SANDOVAL

MEDIOS DE CULTIVO

TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

Ingraham J.L.2000. .

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MEDIOS DE CULTIVO

Definición

Medios básicos Medios enriquecidos Pruebas bioquímicas
Medios selectivos diferenciales y de enriquecimiento

Medios especiales Por consistencia Por composición Otras clasificaciones
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TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

Tipos de asas

Medio líquido

Inoculación en tubo Inoculación en placa

Medio sólido

Medio semisólido

Estría

Vaciado en placa

Estría cruzada

Estría simple

Estría en Z

Inoculación masiva

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FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS

REDUCCIÓN DE LA LECHE CON AZUL DE METILENO

PRUEBA DE FENILALANINA

PRUEBA DE CITRATO

PRUEBA DE OXIDACIÓN Y FERMENTACIÓN (O/F)

S I M

LICUEFACCIÓN DE GELATINA

PRUEBA DE UREA

T S I

LECHE CON TORNASOL

REACCIÓN RMVP

L I A

REDUCCIÓN DE NITRATOS
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M I O

Un medio de cultivo es cualquier sustancia que pueda ser usada para el cultivo de microorganismos.

Los medios sirven para uno de dos propósitos principales: Fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las características de cultivo. Facilitar algunas reacciones bioquímicas que luego puedan ser demostrables por observación directa o bien indirectamente por la reacción en presencia de algunos reactivos adicionales. Todas las reacciones de cultivo así como las bioquímicas, dependen de la composición del medio y de la naturaleza del cultivo que se estudie.
Los medios de cultivo se pueden clasificar en: 1. Medios básicos 2. Medios enriquecidos 3. Medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento 4. Medios especiales
Koneman,1992

Placas de agar soya tripticasa inoculado con una bacteria que produce un pigmento amarillo, importante característica diferencial para identificar bacilos gram negativos no fermentadores.

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MENÚ

MEDIOS DE CULTIVO

Son aquellos medios que solo contienen algún extracto de carne u otra infusión simple, peptona, sal y agua. El extracto o la infusión de carne proporcionan al organismo los aminoácidos, vitaminas, sales, y pequeñas cantidades de carbono, nitrógeno, hidrógeno y otros elementos. Las sales usualmente cloruro de sodio sirven para obtener isotonicidad requerida para el mantenimiento de presiones osmóticas constantes. El agua sirve como disolvente, como medio de transporte o para ambos fines. Los medios de cultivo que solo contienen extracto de carne, peptona, sal y agua, son líquidos; para el estudio de las características de las colonias es indispensable el uso de medios sólidos. La solidificación se consigue agregando agar, gelatina, albúmina de suero o de huevo, a los otros ingredientes.

 

Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio sólido que no se desintegra por los medios físicos usados en el cultivo de la mayoría de los microorganismos. Ejemplos
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Ejemplos de medios básicos
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Caldo nutritivo Agar nutritivo

Caldo de triptona y soya
Caldo de infusión de cerebro y corazón Agar de infusión de cerebro y corazón Caldo de infusión de corazón Agar y extracto de hígado Dextrosa de Saboraud
Koneman,1992

Agar EMB con crecimiento de E. coli, colonias de color verde birillante, las especies de Shigella no fermentan lactosa, por eso se ven translucidas.

Son aquellos medios básicos que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Ejemplos:  Agar sangre  Agar sangre chocolate  Caldo de suero  Agar con suero  Suero de Loeffler con sangre  Medios inclinados con suero  Agar de Bordet Gengou  Medio de Levinthal  Agar de Mueller-Hinton  Agar infusión de cerebro corazón  Agar proteosa
Hacer clic

Hemólisis
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Los medios selectivos son usualmente medios de agar básico, o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias, permitiendo por lo tanto el aislamiento de unas cuantas seleccionadas en los especimenes que contengan grandes números de organismos indeseables. Los medios diferenciales son medios básicos o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que reaccionarán con algunos tipos específicos de bacterias en cierta forma observable. Los medios de enriquecimiento son por lo general medios líquidos enriquecidos, que contienen algunas sustancias inhibidoras, con lo que se crea un medio ambiente especialmente favorable para límites más bien estrechos de bacterias. Ejemplos

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MEDIOS DE CULTIVO

Ejemplos de medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento


      


Medio de Thayer Martin Agar con feniletanol Agar con sangre y bilis al 40% Agar con esculina y bilis Agar con sangre y telurito Medio de Tinsdale modificado Agar con Lowenstein Jensen en tubos inclinados Agar con citrato y desoxicolato Agar de sulfito de bismuto Caldo de selenito de sodio Agar XLD (xilosa, lactosa, desoxicolato)

   


       

Agar de Mac Conkey Agar Salmonella – Shigella Agar con eosina y azul de metileno (EMB) Agar de bilis y rojo de violeta Agar dextrosa y tripticaseina Agar entérico Hektoen Agar S-110 Agar tergitol 7 Agar verde brillante Agar Vogel Jhonson Agar Baird-Parker Agar sal y manitol Agar sangre con azida

Son los medios que no pueden ser fácilmente agrupados bajo alguno de los anteriores grupos. La mayoría de ellos serán medios empleados para comprobar una o más a características bioquímicas, lo cual facilita la clasificación, en este caso de las bacterias y hongos. Ejemplos: Pruebas bioquímicas

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MEDIOS DE CULTIVO

Koneman,1992

Koneman,1992

1.

Medios sólidos. Son útiles para el crecimiento, aislamiento y obtención de cultivos puros de bacterias.

2.

Medios semisólidos. Útiles para la observación de metabolismo, así como la propagación y obtención de cultivos de bacterias anaeróbicas.
Medios líquidos. Permiten la difusión del microorganismo.
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3.

Medios sintéticos
Es aquel en el que se conoce la composición química exacta de los ingredientes.
Hacer clic Clasificación de reinos

Medio no sintético

No se conoce de una manera definida la composición precisa de alguna o de todas las sustancias nutritivas.
Koneman,1992

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MEDIOS DE CULTIVO

Por picadura en forma vertical
Cuando se inocula agar semisólido en un tubo para pruebas de motilidad (aunque no sea la única prueba que se valora) es importante que el asa de inoculación sea retirada a lo largo del mismo camino que se usó para atravesar inicialmente el medio. Solo se pica el agar con un movimiento uniforme y recto y para ello se utiliza el asa recta.
Documento electrónico FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic

Difusión

  

Los medios líquidos se inoculan como en el método ilustrado; el tubo debe inclinarse aproximadamente 30°, con un asa de inoculación se toca la superficie interna del vidrio, exactamente por encima del punto donde la superficie del medio forma un ángulo agudo. Se debe utilizar el asa con arillo. Posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posición erecta, el área de inoculación queda sumergida en el medio. Agitar suavemente cada tubo. No dejar que el líquido salpique la tapa del tubo. Sí se inocula una batería con una misma especie de bacteria no hay necesidad de pasar por la llama entre cada inoculación. Cuando se utiliza una aguja o asa para inocular una batería con un solo inóculo, el traspaso de azúcares de un tubo a otro es tan infinito que no hay problema de que un tubo contenga una mezcla de carbohidratos. Sí se inocula una batería no es necesario observar en forma apreciable el inóculo en cada uno de los tubos. Un solo inóculo espeso tomado de cultivo contiene millones de bacterias que son suficientes para inocular cada tubo con un número apreciable de bacterias necesarias para que se produzca el metabolismo.

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TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

Documento electrónico Hacer clic

Pico de flauta o cola de pescado (en tubo) a) Por punción (picadura) b) Por estría c) Por punción y estría Los picos de flauta (planos inclinados) de agar se inoculan de la siguiente forma: primero se atraviesa todo el fondo del agar con el asa recta de inoculación, esto cuando sea necesario ya que no todos los medios lo requieren, posteriormente éste se retira con un movimiento en “S” a través del agar, con lo que se disemina el inóculo. Se utiliza el asa recta.

b)

a)

c)

Documento electrónico TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic

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TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

Hacer clic Documento electrónico

Estría simple

Estría en Z

Inoculación masiva
Documento electrónico FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic

MUESTRA POR SER CONTADA

9 ml DE SOLUCIÓN. SALINA

COLONIAS

AGAR FUNDIDO VERTIDO EN PLACA
Ingraham L.J. 2000, modificado

COLONIAS AISLADAS

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TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

Hacer clic Vaciado en placa

Asa en arillo

Asa recta

Hisopo
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

Documento electrónico Hacer clic

Medio de cultivo Fundamento Inoculación

Condiciones de incubación

Consistencia del medio

Aplicaciones
Reporte de resultados

Interpretación Resultados
ATLAS FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

a) b) c) d) e)

Medio de cultivo: Caldo básico rojo de fenol y carbohidratos. Composición: Peptona Extracto de carne Cloruro de sodio Agua destilada Indicador de pH: Rojo de fenol  Ácido: Color amarillo (pH = 6.8)  Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4)  Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4)

Tinción de Gram: Micrococcus sp

Se pueden utilizar los siguientes carbohidratos: glucosa, manitol, inulina, lactosa, inositol, sacarosa, salicina y rafinosa, principalmente.
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

Esta prueba determina la capacidad de un organismo de fermentar (degradar) un carbohidrato específico incorporado a un medio básico. La fermentación es un proceso metabólico de oxido-reducción que ocurre en un medio ambiente anaerobio y, en lugar de oxígeno, un sustrato orgánico sirve como el aceptor final de hidrógeno (electrones). En los sistemas de prueba bacteriológicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se forman productos ácidos. Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentación un carbohidrato es degradado y descompuesto en dos moléculas de carbono (triosas) que son nuevamente degradadas en un número de compuestos de 1,2,3 y 4 carbonos. Los productos finales varían con cada especie bacteriana y depende del sistema enzimático existente en la especie y las condiciones del medio ambiente. El más importante ciclo fermentativo de la degradación de la glucosa es el ciclo de Embden - Meyerhof aun cuando éste también puede producirse por la derivación de pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos hidratos de carbono.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

Utilizando un indicador de pH con un determinado carbohidrato puede determinarse si una bacteria ha degradado el mismo en varios productos terminales, observando un cambio de color visible en el medio.

bacteria
Indicador de pH + CHO

glucólisis

H2CO2 (aldehídos) + cambio de color

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Líquido

Condiciones de incubación
Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura: 35 - 37° C

Inoculación
Por difusión, inóculo denso

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Interpretación
Positiva = Color amarillo (ácido) Negativa = Color rosa – rojizo (alcalina) Color anaranjado

Reporte de resultados
Koneman,1992 Agar XLD con crecimiento de E. coli a las 24 horas. El aspecto amarillo alrededor de las colonias indica utilización de lactosa y sacarosa, por que se ha producido una caida suficiente del pH por debajo del punto decisivo del indicador rojo de fenol.

A = ácido K = alcalino G = gas

Identificación de Staphylococcus Hacer clic

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO
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NEGATIVO
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

Microorganismos Fermentadores de Carbohidratos:
 

Fermentadores de glucosa: Todos los miembros de las Enterobacteriaceae. Fermentadores de glucosa y lactosa: Escherichia coli, Klebsiella y grupos

Ingraham L.J. 2000

Enterobacter.


 


 

de manitol: Staphylococcus aureus Fermentadores de inositiol: Proteus rettgeri Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica Fermentadores de adonitol: Providencia alcalifaciens Fermentadores de inulina: Streptococcus salivarius y Streptococcus sanguis Fermentadores de sacarosa: Yersinia enterocolitica Fermentadores de salicina: Listeria monocytogenes Fermentadores

Yersinia enterocolitica. American Museum of Natural History, 1998.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Microorganismos no Fermentadores de Carbohidratos:


No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patógenas como Salmonella y Shigella. No fermentadores de manitol: Staphylococcus

epidermidis

No fermentadores de salicina: Especies de


   

Corynebacterium No fermentadores de rafinosa: Otras especies de Aeromonas No fermentadores de inositol: P roteus morganii No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D
No fermentadores de sacarosa: Otras especies de

Escherichia coli vista en microscopio electrónico

Yersinia

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Medio de cultivo

Condiciones de incubación

Fundamento

Inoculación

Consistencia del medio

Interpretación

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Aplicaciones

Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. El medio incluye citrato de sodio un anión como única fuente de carbono, y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno. Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin la intervención de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa. El oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismo del citrato.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio: pH básico: Citrato CO2 + ácido fórmico + 2 ácido acético

pH ácido: 2 Piruvato 2 Piruvato

acetato + CO2 + lactato acetoína + 2CO2

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Medio de cultivo: Citrato de Simmons Composición: a) Sulfato de magnesio b) Monofosfato de amonio c) Fosfato dipotásico d) Citrato de sodio e) Cloruro de sodio f) Agar g) Agua destilada h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH = 6) Alcalino : color azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)
Ingraham L.J. 2000

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Sólido inclinado (pico de flauta)

Inoculación
Se inocula como una estría única en la superficie del pico de flauta.

Black, 1996 Pseudomona sp, (8100x)

Incubación
Tiempo = 24 - 48 horas Temperatura = 35 - 37° C

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Interpretación
Hacer clic

Características de Corynebacterium diphteriae

Positivo : Crecimiento aunque no exista cambio de color. Crecimiento y el medio de color azul intenso en pico de flauta. Negativo : No se observa crecimiento y medio de color verde. Si se utiliza carbono a partir de citrato de sodio, también se extrae nitrógeno del fosfato de amonio contenido en el medio, liberándose amoniaco. En ocasiones se detecta un crecimiento visible a lo largo de la línea de siembra antes de la aparición de color. Este crecimiento visible también indica resultado positivo.

Ingraham L.J. 2000

Reporte de resultados
Negativo Positivo (-) (+)

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO POSITIVO
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POSITIVO
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

Microorganismos positivos
Especies de :

     

Microorganismos negativos
      

Salmonella Arizona Citrobacter Enterobacter Klebsiella Serratia licuefaciens Pseudomonas cepacia

Edwarsiella Yersinia enterocolitica Escherichia coli Shigella Yersinia pseudotuberculosis
Otras especies de

Moraxella Proteus morganii
Black J.G. 1996

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Medio de cultivo

Condiciones de incubación

Fundamento

Inoculación

Consistencia del medio

Interpretación

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo : Gelatina nutritiva Composición: a)Extracto de carne b)Peptona c) Gelatina d)Agua destilada
Streptococcus sp.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

 

Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina. Las proteínas que se producen naturalmente son demasiado grandes para entrar en una célula bacteriana; por lo tanto, para que una célula utilice las proteínas, primero debe ser catabolizada en componentes más pequeños. Las enzimas exonucleares de tipo protelítico, gelatinasas, son secretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las proteínas y esta capacidad ayuda a la identificación bacteriana. gelatinasas polipéptidos proteasas

Proteína + H2O

gelatinasas
Polipéptidos + H2O aminoácidos individuales peptidasas

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Semisólido
Black J.G. 1996

Inoculación
Picadura en posición vertical hasta una profundidad de 2 - 2.5 cm, inóculo denso.

Colonias de Serratia marcescens en agar EMB, produciendo pigmento

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37° C

Condiciones de incubación

Al termino de la incubación se coloca el tubo en un refrigerador o baño de hielo durante dos horas para determinar si se ha producido o no la digestión de la gelatina (licuefacción).
Pseudomona aeruginosa University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Interpretación
Positivo : Medio licuado (estado líquido) Negativo : Medio sólido

Hacer clic Identificación de Staphylococcus

El medio de gelatina nutritiva para punción no es conveniente para las pruebas de rutina de la actividad de la gelatinasa, dado que muchas especies requieren una incubación prolongada antes de que aparezcan muestras de licuefacción. En los métodos diagnósticos de rutina para identificar bacterias, la duración de la incubación deberá alcanzar un período razonable.

Reporte de resultados
Positivo Negativo (+) (-)

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Microorganismos positivos
     

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis (lenta) Serratia liquefaciens Serratia marcescens Pseudomona aeruginosa (rápida) Especies de Flavobacterium

Microorganismos negativos

Listeria monocytogenes

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Medio de cultivo

Condiciones de incubación

Fundamento

Inoculación

Consistencia del medio

Interpretación

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo: Medio de leche tornasolada Composición:

1.

2.
3.   

Leche descremada Agua destilada Indicador de pH: Tornasol Ácido : Color rojo (pH = 4.5) Alcalino : Color azul ( pH = 8.3) Medio no inoculado: Azul purpúreo (pH = 6. 8)

Clostridium perfringens, tinción de Gram.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Permite diferenciar organismos sobre la base de sus múltiples reacciones metabólicas en un medio lácteo como: fermentación de lactosa, caseólisis, y coagulación de la caseína. El tornasol incorporado a la leche es un indicador de pH y de oxidación-reducción que hace que el medio pueda indicar diversas funciones metabólicas. La leche contiene lactosa, caseína, lactoalbúmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostrar una o varias propiedades metabólicas en la leche tornasolada ayudando así a la identificación bacteriana:

1. 2. 3. 4. 5.

Fermentación de lactosa Reducción del tornasol Formación de coágulo Peptonización (digestión) Formación de gas

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Fermentación de lactosa

Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produce principalmente ácido láctico, con una condición ácida indicada por el cambio de color del medio que se vuelve rojo rosado. A veces el ácido butírico es el producto final. Ciertas bacterias que forman álcalis no fermentan lactosa, pero actúan sobre las sustancias nitrogenadas que se encuentran en la leche liberando amoniaco, y dando en consecuencia un pH alcalino que se manifiesta por un color púrpura azulado. Lactosa glucosa + galactosa ácido láctico ácido butírico CO2 + H2

Glucosa

ácido pirúvico

Reducción del tornasol

El tornasol es un indicador de pH y un indicador de oxidación reducción; algunos organismos son capaces de reducir el tornasol a una leucobase.
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

Formación de coágulo

Las enzimas proteolíticas provocan la hidrólisis de las proteínas de la leche lo que resulta en su coagulación. La principal enzima responsable de la formación de coágulo es la renina. La formación del coágulo es causada por la precipitación de la caseína, por la formación de ácidos o por la conversión de la caseína en paracaseína por la enzima renina. La caseína es una fosfoproteína compleja y es la proteína más importante de la leche.

Formación de un coágulo ácido  La precipitación de la caseína provocada por los ácidos orgánicos a partir de lactosa en condiciones ácidas produce un coágulo firme, gelatinoso que no se separa de las paredes del tubo. caseasa Lactosa ácido Láctico + caseínato de Ca caseinógeno (pp)

Otra forma de coágulo es el coajo, o sea el proceso de coajado de la leche por la conversión de la caseína en paracaseína por las enzimas renina, pepsina o quimiotripsina contenidas en la leche. La renina provoca el coajado de la leche convirtiendo la sal de caseína soluble en una paracaseína insoluble que es el cuajo o requesón. renina Caseína paracaseína (pp) Ca

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Peptonización (digestión)
La hidrólisis de la caseína por la actividad enzimática produce una conversión final del precipitado caseinógeno en un líquido claro; el proceso se denomina peptonización y se manifiesta por una aclaración acuosa del medio causada por una digestión del precipitado (coágulo) y las proteínas de la leche por las enzimas proteolíticas de las bacterias. Sin embargo, solo se produce una peptonización cuando la bacteria que se desarrolla en la leche tornasolada contiene la enzima proteolítica caseinasa.

Formación de gas
Los gases CO2 y H2 se forman como resultado final de la fermentación de la lactosa.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio Inoculación

Líquido

Difusión

Condiciones de incubación

Tiempo : 24 - 48 horas
Ingraham L.J. 2000

Temperatura : 35 - 37° C

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Hacer clic

 

Rojo rosado: Ácido; fermentación de lactosa Azul purpúreo: No fermentación de lactosa; sin cambio del indicador de pH.

Diferencición de especies de Streptococcus

Azul : Alcalino; Ausencia fermentación de lactosa. El organismo ataca las sustancias nitrogenadas que se encuentran en el medio. Blanco : Reducción del tornasol a una leucobase.
Formación de coágulo : Coagulación de la proteína de la leche. Aclaración del medio : Digestión; se ha ingerido la proteína de la leche.

 

Gas : Producción de burbujas en la campana de Durham.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

En la tabla de resultados solo se escribirán las letras que aparecen dentro del paréntesis.


   

Rojo rosado (A) Azul purpúreo (SC) Azul ( K) Blanco (Red) Coágulo (C) Digestión (D) Gas (G)

Encarta 2002

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

MEDIO NO INOCULADO

FINALIZAR

FERMENTACIÓN DE LACTOSA

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

DIGESTIÓN

NO FERMENTACIÓN DE LACTOSA

MENÚ

COÁGULO

REDUCCIÓN DE TORNASOL

Ayuda a la diferenciación de especies sobre todo del género

Clostridium.

Sin crecimiento:
 


 

Clostridium choleraerium Clostridium difficile Clostridium putrefaciens Clostridium tetanomorphum Streptococcus equinus

Con crecimiento:

Streptococcus bovis
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Características de especies de Bacillus y Clostridium Hacer clic

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Medio de cultivo

Condiciones de incubación

Fundamento

Inoculación

Consistencia del medio

Interpretación

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo: Medio de leche Composición:

1.

2.
3.

Leche descremada deshidratada Agua destilada Indicador : Azul de metileno Incoloro : Estado reducido Azul : Estado oxidado ; medio no inoculado (pH= 6.4)

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Diferencía organismos por su capacidad de reducir el azul de metileno en un medio con leche. El sistema citocromo oxidasa activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno molecular que a su vez actúa como un aceptor de electrones en el periodo terminal del sistema de transferencia de electrones. Cuando existen condiciones aeróbicas el oxígeno es el aceptor final del hidrógeno, produciendo agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana y su sistema enzimático. Los sustratos artificiales como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptores de electrones naturales en cualquier lugar de la cadena de transporte de electrones, donde actúan como reductores del sistema citocromo. Cuando se agrega el colorante sintético reducible, azul de metileno a un medio que contenga organismos metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Cuando se agrega el colorante a un medio con organismos metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Anaerobicamente la forma oxidada del color azul es reducida por un organismo a un compuesto incoloro, hidrogenado, leuco-azul de metileno.

FINALIZAR
Custom Medical Stock, 1999.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

N

El azul de metileno, sal básica, es un indicador de la oxidación reducción que cuando es incorporado a un medio, indica los cambios en el potencial de oxidación-reducción producidos por un organismo. Algunos organismos, utilizando el oxígeno disuelto en un medio, son capaces de reducir el potencial redox, la reducción es catalizada por la enzima reductasa, enzima respiratoria vinculada con la oxidación celular.
Diferenciación de especies de Streptococcus
Hacer clic FINALIZAR

(CH3)2N

Azul de metileno (estado oxidado color azul) Reductasa
H N

N(CH3)2

(CH3)2N S Leuco-azul de metileno (estado reducido, incoloro)

N(CH3)2

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Líquido


Black J.G. 1996

Inoculación
Difusión, inóculo denso

Enterococcus feacalis, fisión binaria.

Condiciones de incubación
Tiempo: 18 - 24 horas

Black J.G. 1996

Beta hemólisis

Temperatura : 35- 37° C
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

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MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Interpretación
Positiva : Incoloro; reducción

Negativa : Azul; no hay reducción

Ingraham L.J. 2000

Streptococcus sp,
tinción de Gram

Reporte de resultados
R = Reducción (-) = Negativo, sin cambio de color

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Hacer clic Características bioquímicas de especies de Streptococcus

Esta capacidad enzimática se utiliza fundamentalmente para diferenciar los enterococos (especies de Streptococcus del grupo D) de otros miembros del género Streptococcus.

Microorganismos positivos

Enterococos (Streptococcus del grupo D)

Microorganismos negativos

Especies de Streptococcus que por lo general no son Enterococos.
La oxidación del azul de metileno reducido produce peróxido de hidrógeno como su producto final. La mayoría de las bacterias contienen la enzima catalasa, que degrada el peróxido de hidrógeno, dado que su acumulación es tóxica. Sin embargo, las especies de Estreptococos no producen catalasa y por lo tanto mueren. Los Enterococos del grupo D si producen catalasa sobreviviendo al medio.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Medio de cultivo

Condiciones de incubación

Fundamento

Inoculación

Consistencia del medio

Interpretación

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo : Medio básico de Hugh Leifson, medio OF Composición:
1.

2.
3. 4. 5. 6. 7.

Peptona Cloruro de sodio Fosfato de potasio Hidratos de carbono ( glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa ) Agar Agua destilada Indicador de pH : Azul de bromotimol Ácido : Color amarillo (pH = 6) Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado : Verde (pH = 7.1)

Se deben tener dos tubos para esta prueba uno abierto y otro con sello de parafina.

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Semisólido (también permite la observación de movilidad).

Inoculación
Picadura, inóculo poco denso. Picar ambos tubos aproximadamente hasta 0.6 mm de fondo.

Condiciones de incubación
Tiempo : 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37° C

Aislamiento de bacterias en heces Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ


Amarillo: ácido Burbujas : Gas Verde : alcalino

Incubación

Oxidativo No fermentador

Fermentador

No oxidativo No fermentador

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

METABOLISMO

TUBO CON REACCIÓN

TUBO SIN SELLO

TUBO CON SELLO

Oxidación (O) Fermentación (F) Fermentación (F) Ni fermentación ni oxidación (-) Fermentación y oxidación (O+F)

Abierto Cubierto Cubierto Ninguno Ambos

Amarillo (A) Amarillo (A) Amarillo (AG) Azul o verde (-) Amarillo (A ó AG)

Verde (-) Amarillo (A) Amarillo (AG) Verde (-) Amarillo (A ó AG)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

MEDIO NO INOCULADO

OXIDATIVO NO FERMENTADOR

FERMENTADOR
FINALIZAR

NO OXIDATIVO NO FERMENTADOR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

1.Fundamentalmente para diferenciar géneros intestinales no entéricos, gram negativos de las Enterobacterias. 2. Ayuda a la diferenciación entre los géneros de la familia Micrococcaceae.
 

Micrococcus oxida glucosa Staphylococcus fermentan glucosa.
3. Ayuda a Enterobacterias la identificación de

 

Fermentadoras de glucosa: Escherichia

coli

Oxidativas de glucosa: Pseudomonas

aeruginosa No sacarolítico: Especies de Moraxella

Características de la Familia Micrococcacea Hacer clic FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ
World Book, 1991

Medio de cultivo

Condiciones de incubación

Fundamento

Inoculación

Consistencia del medio

Interpretación

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo: Agar urea de Christensen Composición:

a) Peptona b) Cloruro de sodio c) Fosfato monopotásico d) Glucosa e) Urea f) Agar g) Agua destilada h) Indicador de pH : Rojo de fenol Ácido: Amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4) Medio no inoculado : Amarillo (pH = 6.8)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la descomposición de los compuestos orgánicos.

H2 N

NH3 (NH4)2CO2 H2 N
urea

C=O

+

2 HOH

CO2 + H2O + 2
Carbonato de amonio

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Sólido en pico de flauta (cola de pescado)
Koneman,1992

Inoculación
Estría en pico de flauta (no hacer punción).

Cultivo mixto de crecimiento de 24 horas en agar sangre de colonias no pigmentadas, mucoides y relativamente grandes de Klebsiella, en comparación de las colonias amarillas más pequeñas de S. aureus.

Condiciones de incubación
Tiempo : 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37° C
Efecto swarming producido por Proteus vulgaris

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO

POSITIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Interpretación

Positivo : Rojo rosado intenso en el pico de flauta
Negativo: Amarillo

Reporte de resultados

Positivo (+) Negativo (-)
Black J.G. 1996

OBSERVACIONES En muchas especies, la reacción positiva de ureasa se detecta primero por un cambio de color rojo en la parte de pico de flauta, el cual, al principio se vuelve rojo porque la acción alcalina, resultado de la degradación de pequeñas cantidades de urea, es aumentada por las aminas formadas a partir de la descarboxilación oxidativa de los aminoácidos en la parte del medio expuesta al aire.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Se usa para diferenciar los organismos Proteus rápidamente ureasa positivos de otros miembros de las Enterobacterias, otros géneros pueden ser positivos retardados.

   

Klebsiella sp (+) Escherichia coli (-) Proteus sp (+ rápido) Providencia sp (-)
Koneman,1992

Placa de agar sangre que indica un patrón de swarming como ondas de una cepa móvil de Proteus.

Pruebas para la identificación de Enterobacterias Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretación Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculación

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubación

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo : Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP) Composición:
1. 2.

3.
4. 5.

Polipeptona Dextrosa Fosfato de potasio Agua destilada Indicador: rojo de metilo  pH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo.  Ácido: rojo (pH = 4.4)  Alcalino: amarillo (pH = 6)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de ácido (determinación de pH). Las bacterias que principalmente siguen la vía de fermentación de ácidos mixtos a menudo producen suficiente ácido para mantener un pH menor de 4.4. La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la concentración de iones hidrógeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen ácidos estables manteniendo una alta concentración de iones hidrógeno hasta alcanzar cierta concentración y entonces cesa toda actividad. Los organismos RM negativo también producen ácidos pero tienen una menor concentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidad debida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos. La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubación suficiente como para permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Los organismos en estudio se incubarán por lo menos 2 días, lo que permite que todos los organismos con baja proporción gaseosa muestren su límite en la concentración de iones hidrógeno.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetoína a partir de la fermentación de glucosa.

La reacción de VP se basa en la detección de acetoína como producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizada en ácido pirúvico, intermediario clave en la glucólisis. A partir del ácido pirúvico, una bacteria puede seguir muchas vías. La producción de acetoína (precursor de la producción de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para la degradación de la glucosa en las bacterias. La formación de acetoína y butilenglicol es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico. Las bacterias que utilizan esta vía producen solo pequeñas cantidades de ácidos mixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocas excepciones son RM negativas y viceversa.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

El primer reactivo agregado a una alícuota incubada es el catalizador alfa-naftol porque este actúa como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la reacción sin pérdida de su especificidad. El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la absorción de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionará con la peptona dando un color rosado salmón y con el agregado posterior de alfa-naftol no habrá alteración del color. El hidróxido de potasio actúa como agente oxidante para apresurar la oxidación de la acetoina en diacetilo. El diacetilo es la sustancia reactiva activa por ello esta prueba se basa en la reacción entre el diacetilo y el núcleo guanina presente en la peptona, en condiciones alcalinas. Por lo tanto cuando se mezclan cantidades correctas de diacetilo, la peptona y el alfa-naftol, se produce casi instantáneamente un color rojo en la superficie del medio. La velocidad de desarrollo de color depende del volumen de acetoína que se encuentra en el cultivo de prueba.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

OH

CH3

CH3

KOH
+ C O C O

O2 OXIDADO
CHOH C

O

Alfa-naftol (catalizador)
CH2 CH2

Acetoína

Diacetilo
+ NH2

Color rojo rosado

condensación
C NH NH

R

Núcleo de guanidina

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio

Líquido

Inoculación

Difusión

Condiciones de incubación
Salmonella typhi, tinción de flagelos, observada en microscópio electrónico

Tiempo : 24 - 48 horas Temperatura: 35 - 37° C

Coprocultivo
Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Reactivos adicionales para Rojo de Metilo

Rojo de metilo. Adicionar 5 gotas al tubo previamente incubado. Interpretar el resultado del color inmediatamente. Conservación: Guardar el reactivo en refrigeración (4° C) mientras no se usa. Reactivos adicionales para Voges Proskauer Alfa naftol al 5%, intensificador del color Hidróxido de potasio 40%, agente oxidante

Agregar directamente los reactivos al tubo después de la incubación en el siguiente orden : 1) 0.6 ml de alfa naftol 2) 0.2 ml de KOH 3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la interpretación.
PRECAUCIONES  El orden de adición de los reactivos es importante, ya que la inversión de incorporación dará como resultado un débil positivo o falso negativo.  No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una reacción VP débilmente positiva. FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

MEDIO NO INOCULADO

POSITIVO

NEGATIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Reacción de rojo de metilo
No debe intentarse interpretar un resultado con el rojo de metilo después de menos de 48 horas de incubación. Positiva: Rojo en la superficie del medio (pH = 4.4) Algunas bacterias pueden producir menores cantidades de ácido a partir del sustrato por ello es posible que aparezca un color naranja. Esto indica una prueba positiva. Negativo : Amarillo (pH = 6) ó naranja

Reacción de VogesProskauer
Positivo: Rojo rosado en la superficie del medio (presencia de acetoína) Negativo : Amarillo. Puede formarse un color cobrizo pero aún así la reacción es negativa.

Reporte de resultados
(ambas reacciones)
Positivo (+) Negativo (-)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Prueba de rojo de metilo
Microorganismos positivos

Pruebade Voges Proskauer
Microorganismos positivos
 

Escherichia coli Especies de Yersinia

Klebsiella pneunoniae Yersinia enterocolitica

Microorganismos negativos
  

Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Klebsiella

Microorganismos negativos
 

Escherichia coli K. ozaenae

Urocultivo Hacer clic
Encarta, 2002

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretación Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculación

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubación

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo: Caldo con nitrato Composición:
   


Extracto de carne Peptona Nitrato de potasio Agar Agua destilada pH inicial = 7.0

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Determina la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o en nitrógeno libre. La reducción de nitrato en nitrito y en gas nitrógeno tiene lugar generalmente en condiciones anaeróbias, en las cuales un organismo obtiene su oxígeno del nitrato. El oxigeno sirve como un aceptor de hidrógeno. Esta respiración anaerobica es un proceso de oxidación por el cual las sustancias inorgánicas, especialmente nitrato y sulfato o raramente hidratos de carbono proporcionan oxígeno para que sirva como aceptor de electrones para suministrar energía. Reducción del nitrato en nitrito NO3 + 2 e + 2 H Nitrato Nitrato en nitrógeno molecular 2 NO3 + 10 e + 12 H+
+

NO2

+ H2O Nitrito N2 + 6 H2 O

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

La reducción de nitrato en nitrito está indicada por la aparición de color cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La reacción de color resultante se debe a la formación de un compuesto diazoico, p-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina. El enlace del grupo azo –N=N- da como resultado un compuesto coloreado por medio de una reacción nitrosa. El colorante diazoico se forma por acoplamiento a través del enlace azo de una amina aromática con un compuesto de tipo fenólico por lo general en la posición para de un grupo (OH) o amino. La reducción de la sal diazóica por el agente reductor polvo de zinc, en presencia del ácido acético produce un compuesto coloreado, la arilhidracina.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

NH2

N

N

+ HNO2

SO2H

NH2

SO2H

NH2

Ácido sulfanilico (incoloro)

Alfa-naftilamina

P-sulfobenceno-azo-affanaftilamina (rojo)

N

N

Zn

+

CH2COOH
Ácido acético

(C6H3NHNH3) – OSO3H
Arilhidracina

SO2H

NH2

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Hacer clic Características de Bacterias Gramnegativas no fermentadoras

Consistencia del medio
Líquido

Inoculación

Difusión, inóculo denso.

Condiciones de incubación

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura 35 - 37 ° C
Raramente es necesaria una incubación prolongada de hasta 5 días. La mayoría de los organismos capaces de reducir el nitrato, lo hacen dentro de las primeras 24 horas.

Crecimiento de Salmonella thypi en agar sangre, observese la producción de H2S (colonias de color negro).

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

1. Alfa - naftilamina 0.05% 2. Ácido sulfanílico 0.8 %

Adicionar directamente al tubo de reacción en el siguiente orden:

1. Alfa - naftilamina 1ml. 2. Ácido sulfanílico 1 ml.
Conservación: Guardar ambos reactivos en el refrigerador mientras no se usan. Por lo general se mantienen estables durante tres meses.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Interpretación

Se interpretan los resultados un minuto después de adicionar los reactivos.
Positivo: intenso Rosado a rojo

Reporte de resultados
Positivo (+)
Negativo (-)

Negativo: Amarillo
PRECAUCIONES Una prueba negativa indica que los nitratos, no han sido reducidos o que han sido reducidos a otros productos, como amoniaco, nitrógeno molecular, oxido nítrico u óxido nitroso e hidroxilo. Dado que los reactivos de prueba detectan solo nitritos, este último proceso llevaría a una lectura falso – negativa. Por ende es necesario agregar una pequeña cantidad de polvo de zinc a todas las reacciones negativas. Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y la aparición de color rojo después del agregado de zinc indica una reacción positiva.
Koneman,1992

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Aplicaciones
Ayuda a la identificación de Enterobacterias que por lo general son positivas. Todas las Enterobacterias, con excepción de ciertos tipos de Enterobacter agglomerans y especies de Erwinia, reducen nitratos a nitritos.

MEDIO NO INOCULADO
POSITIVO NEGATIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretación Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculación

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubación

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo: medio de fenilalanina Composición:
1. 2.

3.
4. 5. 6. 7.

D-L-fenilalanina Extracto de levadura Cloruro de sodio Fosfato de sodio Agar Agua destilada pH inicial = 7.3

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Determina la capacidad de un organismo de desaminar la fenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática, con la consiguiente acidez resultante. El aminoácido aromático fenilalanina sufre una desaminación oxidativa catalizada por un aminoácido oxidasa para producir el ácido cetónico.

La desaminación oxidativa da como resultado la extracción del grupo amino del aminoácido para formar un doble enlace alfacetoácido y libre de amoniaco. Este es un proceso en dos etapas: La extracción del hidrógeno dando un aminoácido y un hidrógeno, se combina con el oxígeno para formar agua. El aminoácido es hidrolizado en un cetoácido.


1.

2.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

CH2

CH

COOH

- 2H NH2 + 1/2 O FLAVOPROTEÍNA

FENILALANINA CH2 C COOH

O

+

NH2 AMONIACO

ÁCIDO FENILPIRÚVICO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Como la fenilalanina se encuentra desaminada, el color producido como consecuencia del agregado de cloruro férrico al 10% se debe a la formación de un cetoácido, el ácido fenilpirúvico. La reacción positiva con este reactivo se debe a la formación de una hidrazona. El cloruro férrico actúa como agente quelante actuando con el ácido fenilpirúvico para formar un color verde. Cuando se expone al oxígeno atmosférico un tubo de cultivo con fenilalanina después del agregar el cloruro férrico aumenta la producción y la intensidad de la reacción positiva.
CH2 C COOH CH2 C COOH

N O + RNH

NHR

- NH2
Fenilhidrazona

Hidracina Ácido fenilpirúvico

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Sólido en pico de flauta

Reactivos adicionales
Cloruro férrico 10%

Inoculación
Estría en pico de flauta, inóculo denso.

Adicionar de 4-5 gotas a un tubo incubado
Hacer rotar suavemente el tubo para que el crecimiento se separe. Esperar de 1 a 5 minutos para leer la reacción Guardar los reactivos en refrigeración y colocarlos en frascos oscuros para evitar la descomposición.
Características de Bacilos Gramnegativas oxidasa positivas
Hacer clic

Condiciones de incubación

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura 35 - 37 ° C

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

NEGATIVO

MEDIO NO INOCULADO

POSITIVO

NEGATIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Interpretación

Aplicaciones
Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y del grupo Providencia, y se usa para separar estos dos géneros de otros miembros de las Enterobacterias

Positiva: Verde claro a intenso en el pico de flauta. Negativo: Amarillo

Reporte de resultados

Positivo (+) Negativo(-)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretación Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculación

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubación

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo: Medio SIM Composición:

    

Extracto de carne Peptona Hierro peptonizado (Indicador de SH2) Tiosulfato de sodio (indicador de SH2) Agar Agua destilada pH = 7.3

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Prueba de ácido sulfhídrico
La proteolisis de las proteínas en aminoácidos (aa.) individuales, algunas especies bacterianas son capaces de liberar azufre enzimaticamente de los diferentes aa. que las contienen, produciendo el gas ácido sulfhídrico (SH2). La peptona, cisteína y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. que contienen azufre para producir SH2. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa.

Primera etapa La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción de reducción que da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiración anaeróbica donde el átomo de azufre sirve como aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos orgánicos. El tiosulfato reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo. Segunda etapa El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio para producir un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso. Bacteria (medio ácido) SH2 + iones férricos + tiosulfato de sodio gas SH2

sulfuro ferroso (pp. negro)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. Diversas enzimas intracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpírúvico. La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. El ácido pirúvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucolítico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran producción de energía. El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminoácidos empleando la energía que se encuentra para la reacción anabólica. La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentación de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El agregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa la inhibe.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

La prueba de indol se basa en la formación de un complejo de color rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído de pdimetilaminobenzaldehído (sustancia activa del reactivo de Kovacs).
COOH

NH2 N

H

Triptofanasa H2O Desaminación

L - Triptófano

O

+
H3C N COOH

+

NH3

H Indol Ácido Pirúvico Amoniaco

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Xileno
P-dimetilaminobenzaldehído Color rojo

INDOL

PIRUVATO

NH3

TRIPTÓFANO
Triptofanasa

BACTERIAS
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Determina si un organismo es móvil o inmóvil. Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmóviles.


Black J.G. 1996 Black J.G. 1996

Monotricas

Atricas

Las bacterias móviles pueden contener un solo flagelo o muchos; además su localización varía con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo.
A veces, las bacterias con movilidad producen variantes no móviles que parecen ser estables y raramente se revierten en formas móviles. Los organismos no móviles carecen de flagelos.

Black J.G. 1996

Black J.G. 1996

Lofotricas

Peritricas

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Medios para la detección de H2 S

Medios para la detección de movilidad
 


 


 


Agar sulfito de bismuto Agar citrato sulfuro Agar desoxicolato-citrato Medio LIA Medio TSI Agar acetato de plomo Agar S-S Agar XLD Medio SIM

SIM MIO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Semisólido en forma vertical

Consistencia del medio

Picadura en forma vertical
Salmonella typhimurium, tinción de Gram.

Inoculación

Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura 35 - 37° C
Los cultivos que van a someterse a pruebas de indol deberán ser incubados aeróbicamente el descenso de la tensión de oxígeno disminuye la producción de indol.

Condiciones de incubación

Klebsiella pneumoniae en sedimento, tinción de Gram

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Reactivo de Kovacs
Composición: Alcohol amílico p-dimetilaminobenzaldehído HCl Adicionar 5 gotas directamente al tubo después de la incubación. Agitar suavemente Leer inmediatamente la reacción
Coprocultivo FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

a)

b)
c)

  

MENÚ

Hacer clic

H2S NEGATIVO

H2S POSITIVO

MEDIO SIN INOCULAR

INDOL NEGATIVO

INDOL POSITIVO GAS MOVILIDAD
MENÚ

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Positivo: Ennegrecimiento del medio Negativo: Sin ennegrecimiento

Ácido sulfhídrico

Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.
La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.
Black J.G. 1996

Indol

Streptococcus pneumoniae: las cápsulas se observan de color blanco.

Positiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el medio provocando turbiedad. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.

Movilidad

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Bacteria

Salmonella thypi Salmonella sp. E. coli Klebsiella Enterobacter Citrobacter Shigella

Producción Prouducción de H2S de indol +o+o+

Movilidad + + +o-

+ +oFINALIZAR

+o+oPRUEBAS BIOQUÍMICAS

+ + +oMENÚ

Medio de cultivo

Inoculación

Consistencia del medio

Reporte de resultados

Interpretación
Condiciones de incubación

Resultados

Fundamento
ATLAS FINALIZAR

Aplicaciones
PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo: Agar hierro triple azúcar (Agar Hierro de Kliger, AHK)

1. 2. 3.

4.
5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.   

Composición: Extracto de carne Extracto de levadura Peptona Proteasa Lactosa Dextrosa Sulfato ferroso Cloruro de sodio Tiosulfato de sodio Agar Agua destilada Indicador : Rojo de fenol Ácido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: anaranjado rojizo (pH = 7.4)

Koneman,1992

Superficie de agar Mac Conkey con crecimiento de 24 horas de colonias fermentadoras de lactosa rojas.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

No fermentador
No fermentación pH = 7.4

O2

Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina

No fermentador de lactosa

Dextrosa
Ácidos mixtos Dextrosa Ácidos mixtos Fermentador de lactosa (sacarosa)
Dextrosa + lactosa Ácidos mixtos

O2

Pico de flauta ácido/profundidad ácida Reacción inicial

O2

Pico de flauta alcalino/profundidad ácida Reacción retardada

O2

Pico de flauta ácido/profundidad ácida

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Sólido en pico de flauta

Inoculación
Picadura y estría en pico de flauta

Condiciones de incubación
Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura: 35 - 37 ° C

Urocultivo Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Klebsiella pneumoniae agar Mac Conkey. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradación aeróbica de glucosa Amarillo en capa profunda: ácido; degradación anaeróbica de la glucosa 2. Amarillo en pico: ácido Amarillo en capa profunda: ácido

3. Rojo en pico de flauta: alcalino Sin cambio de color en capa profunda: alcalina. Producción de H2S: precipitado negro Producción de gases: Producción de burbujas, descomposición del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondo dejando un espacio libre.
OBSERVACIONES Una bacteria productora de H2S puede dar tal cantidad de precipitado negro de sulfuro ferroso que oculte completamente la acidez producida en la capa profunda. Sin embargo, si se forma H2S es que existe en la capa profunda una condición ácida, aun cuando no se observe, y debe ser registrada como tal. Es esencial que se interprete la fermentación al término de 18 – 24 horas de incubación, ya que una interpretación prematura o demorada dará formas de fermentación no válidas que llevarán a errores en el agrupamiento del género o especie.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

1. K / A (Fermentación de glucosa solamente) 2. A / A (Fermentación de glucosa y lactosa) 3. K / K (No fermentación de glucosa y lactosa). Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. Primero la reacción del pico de flauta seguida por la reacción de la capa profunda, separadas por una barra. Reacciones de TSI  Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentación de hidratos de carbono. Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas

aeruginosa.

Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de Shigella.
Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada; producción de H2S. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona, Citrobacter y algunas especies de Proteus.

Pico de flauta ácido / profundidad ácida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas. Característico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella-

Enterobacter.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Este tipo de pruebas se utilizan principalmente para la identificación primaria de los miembros de las Enterobacterias.

Especie bacteriana
Enterobacter
Hafnia Klebsiella E. coli Shigella

Superficie inclinada
A
K A A K

Fondo
K
A A A A

Gas
++
+ ++ + -

H 2S
-

Salmonella thypi

K

A

-

+

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

S. parathypi

K

A

+

-

S. choleraesuis
Otras Salmonellas

K
K

A
A

+
+

+++

Citrobacter
Edwarsiella

K
K

A
A

+
+

+++
+++

Serratia
Proteus vulgaris

K
K

A
A

+

+++

P. mirabilis
P. morganii

K
K

A
A

+
-

+++
-

P. retgeri
Providencia

K
K
FINALIZAR

A
A

+oMENÚ

-

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo

Inoculación

Consistencia del medio

Reporte de resultados

Interpretación
Condiciones de incubación

Resultados

Fundamento
ATLAS FINALIZAR

Aplicaciones
PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo: base de descarboxilasa de Moller
agar sangre.University of MissouriComposición: Columbia,1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm Peptona Extracto de carne Piridoxal L-lisina Citrato de amonio Tiosulfato de sodio Glucosa Agua destilada Agar Indicador de pH: Púrpura de bromocresol Ácido: color amarillo (pH = 5.2) Alcalino: color púrpura (pH = 6.8) Medio no inoculado: color púrpura intenso brillante (pH = 6.0)

Crecimiento de Pseudomona aeruginosa en

1. 2.

3.
4. 5. 6. 7. 8. 9.

10.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido (lisina y arginina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produce anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal. El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa. El aminoácido L-arginina es catabolizado a través de dos sistemas que pueden ocurrir simultánea o separadamente. Estos sistemas son de arginina deshidrolasa y arginina descarboxilasa.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Consistencia del medio
Sólido en pico de flauta

Inoculación
Por picadura y estría, inóculo liviano
Koneman,1992

Condiciones de incubación
Temperatura: 35 – 37° C Tiempo: 18 – 24 horas

Superficie de placa de agar EMB que ilustra el brillo verde producido por miembros de Enterobacterias fermentadoras de lactosa, como Escherichia coli.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

K/K = azul de Prusia /azul de Prusia Desaminación oxidativa / descarboxilación K/A= azul de prusia / lila No desaminación Producción de H2S = Ennegrecimiento del medio Producción de gas = Burbujas o levantamiento del medio del tubo.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

   

A = Ácido K = Alcalino N = Neutra R = Rojo ( desaminación oxidativa)

Hacer clic Clasificación y pruebas para Streptococcus

Encarta, 2002

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

K/K

H2S

K/A

GAS
MEDIO NO INOCULADO PRODUCCIÓN DE H2S

K/K

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Especie bacteriana

Superficie inclinada K K

Fondo KoN A

Gas -o+ -

H2S -

E. coli Shigella

Salmonella thypi
S. parathipy Otras Salmonellas

K
K K

K
A KoN

+o-

+o-o+ +

Arizona
Citrobacter

K
K

KoN
A

-o+

+
+o-

Edwarsiella

K

K

- o+

+

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Klebsiella

K

K oN

+o-

-

Enterobacter cloacae
E. aerogenes E. hafniae Proteus vulgaris P. mirabilis P. morganii P. rettgeri Providencia

K
K K R R KoR R R

A
KoN KoN A A A A A

+o+ -o+ -

-

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretación Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculación

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubación

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo Composición:  Extracto de levadura  Peptona  L- ornitina  Dextrosa  Agar  Agua  Indicador de pH: púrpura de bromocresol Ácido: color amarillo (pH = 5.2) Alcalino: color púrpura (pH = 6.8) Medio no inoculado: color púrpura intenso brillante (pH = 6.0)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

La prueba MIO se utiliza para la identificación de Enterobacterias sobre la base de movilidad, la producción de ornitina descarboxilasa y de indol. Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido (ornitina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad.

La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produce anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal.
El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa.

El aminoácido L-ornitina es descarboxilado por la enzima ornitina descarboxilasa para dar la diamina putrescina y CO2, producidos en condiciones anaerobias.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Semisólido en forma vertical
 Inoculación Por picadura, en forma vertical

Consistencia del medio

Reactivos adicionales

Prueba de indol
Reactivo de Kovacs

Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo
Interpretar inmediatamente.

Temperatura: 35 – 37° C Tiempo: 24 – 48 horas

Condiciones de incubación

Conservación: Los reactivos deberán guardarse en el refrigerador (4° C) mientras no se usan su estabilidad es variable, por lo tanto se hará todas las semanas un control de calidad, desechándolos si muestran una reacción débil o negativa con un organismo positivo conocido.

Black J.G. 1996

Exudado faringeo Hacer clic

Bacteria flagelar mostrada por la técnica de anticuerpo fluorescente

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

ORNITINA POSITIVO MOVILIDAD NEGATIVO

ORNITINA NEGATIVO MOVILIDAD POSITIVO (turbidez)

INDOL NEGATIVO MEDIO NO INOCULADO

INDOL POSITIVO

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

 Ornitina descarboxilasa Positivo: color púrpura del medio Negativo: Color amarillo en el fondo del tubo que puede ser púrpura al final  Indol Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color anaranjado en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.
La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.

 Movilidad Positiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el medio provocando turbidez. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra. Se leen las reacciones de movilidad y de ornitina descarboxilasa antes de agregar el reactivo de Kovacs para la prueba de indol.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Prueba

Positivo

Negativo

Bacterias

Indol + +o-

Movilidad + + + -

H2S +o+o-

Salmonella thypi

Movilidad

+

-

Otras

Salmonellas E. coli

Indol

+

-

Klebsiella

Enterobacter

+o-

+
+ +o-

+ -

Ornitina

+

-

Citrobacter Shigella

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Microorganismos ornitina positivos

Microorganismos ornitina negativos

 

Especies de


Enterobacter Proteus mirabilis Proteus morganii Yersinia enterocolitica

Especies de Klebsiella


 

Enterobacter aglomerans Proteus vulgaris Proteus rettgeri Yersinia pestis Yersinia pseudotuberculosis

Urocultivo Hacer clic

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

Robert Koch (1843-1910), científico alemán galardonado con el premio Nóbel iniciador de la bacteriología médica moderna; aisló varias bacterias patógenas, incluida la de la tuberculosis, y descubrió los vectores animales de transmisión de una serie de enfermedades importantes. Nacido en Klausthal-Zellerfeld el 11 de diciembre de 1843, Koch se incorporó a la Universidad de Gotinga en 1862, donde estudió botánica, física y matemáticas e inició la carrera médica, que ocuparía el resto de su vida. Tras breves estancias en el Hospital General de Hamburgo y en una institución para niños discapacitados psíquicos, comenzó a ejercer la medicina privada. Sus actividades profesionales no le impidieron desarrollar otros intereses como la arqueología, la antropología, las enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y el emergente campo de la bacteriología. Su primer descubrimiento importante se produjo en la década de 1870, cuando demostró que el carbunco infeccioso, también conocido como ántrax, sólo se desarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguíneo contenía bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. El aislamiento del bacilo del carbunco por parte de Koch constituyó un hito histórico, ya que por primera vez pudo demostrarse sin duda cuál era el agente causante de una enfermedad infecciosa. Quedó claro que las enfermedades infecciosas no estaban causadas por sustancias misteriosas, sino por microorganismos específicos, en este caso bacterias. Koch mostró también cómo debe trabajar el investigador con dichos microorganismos, cómo obtenerlos a partir de animales infectados, cómo cultivarlos artificialmente y cómo destruirlos. Koch comunicó sus observaciones al gran patólogo alemán Julius Friedrich Cohnheim y sus colaboradores, uno de los cuales era el bacteriólogo Paul Ehrlich, pionero de la inmunología moderna.



 

Prueba Prueba Prueba Medios Medios

del ácido sulfhídrico de indol de movilidad para la detección de H2S para la detección de movilidad

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

PRUEBA Sulfuro Indol Movilidad

POSITIVO + + +

NEGATIVO -

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

K/A

K/K

GAS

MEDIO

A/A

H2S

NO INOCULADO

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

En 1880, tras finalizar un importante trabajo bacteriológico sobre infecciones en las heridas, fue nombrado consejero del gobierno en el Departamento Imperial de la Salud en Berlín, donde, a partir de entonces, llevó a cabo la mayoría de sus investigaciones. En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al año siguiente anunció que había aislado el bacilo responsable de tan terrible enfermedad. Sus hallazgos fueron confirmados por investigadores de todo el mundo. El descubrimiento permitió mejorar las técnicas diagnósticas mediante la identificación del bacilo en las excreciones corporales, especialmente en los esputos. Koch dedicó entonces su atención al cólera, que en 1883 había alcanzado niveles de epidemia en la India. Se desplazó allí, identificó el bacilo causante de la enfermedad y descubrió que era transmitido a los seres humanos sobre todo a través del agua. Más tarde viajó a África, donde estudió las causas de las enfermedades transmitidas por insectos. En 1891 Koch fue nombrado director del Instituto de Enfermedades Infecciosas de Berlín (que en la actualidad lleva su nombre), creado para la investigación médica especializada. Permaneció al frente del mismo hasta el día de su jubilación en 1904. En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiología y Medicina. Murió el 27 de mayo de 1910 en el balneario alemán de Baden-Baden.

Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos

Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono. La utilización que una bacteria hace de los hidratos de carbono tiene lugar por alguno de dos procesos, de fermentación o de oxidación. Algunas bacterias son capaces de metabolizar un carbohidrato solo en condiciones aeróbicas, mientras que otras producen ácido tanto aeróbica como anaeróbicamente. La diferencia principal entre el metabolismo fermentativo y oxidativo depende de los requerimientos de oxígeno atmosférico y de la fosforilación inicial. La fermentación es un proceso anaeróbico que requiere la fosforilación inicial de la glucosa previamente a su degradación, mientras que la oxidación, en ausencia de compuestos inorgánicos como nitrato y sulfato, es un proceso estrictamente aeróbico que comprende la oxidación directa de una molécula de glucosa no fosforilada (inicialmente). La fermentación produce una acidez más elevada que el proceso metabólico oxidativo.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ


     

Tamaño: diámetro en mm. Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide. Elevación: plana, sobreelevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada. Margen (borde): entero, ondulante, lobulado, lacerado, filamentoso, rizado. Color: blanco, amarillo, negro, marrón, naranja, etc. Superficie: brillante, opaca, erizada, rugosa Densidad: opaca, translúcida, transparente, etc. Consistencia: cremosa, seca, mucoide (viscosa), membranosa, quebradiza.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/labindex.html

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Hacer clic

Los tres tipos generales de reacciones producidas por bacterias que crecen en agar hierro de Kligler. En A se ilustran bacilos no fermentadores que son incapaces de producir ácidos a partir de la fermentación de glucosa o lactosa; no existe ningún cambio en el medio.

B ilustra una acidificación inicial de la profundidad y el pico de flauta del medio por bacterias que fermentan glucosa, pero el pico de flauta retorna a un pH alcalino a medida que se forman aminas alcalinas a partir de la descarboxilación oxidatíva de péptidos (derivados de proteínas en el medio) cerca de la superficie.
C ilustra la completa acidificación permanente de la profundidad y el pico de flauta por bacterias que fermentan lactosa.

Black J.G. 1996

Black J.G. 1996

Beta hemólisis. Zona de aclaramiento total de sangre alrededor de las colonias debido a la lisis de los eritrocitos.

Alfa hemólisis. Aclaramiento parcial de sangre alrededor de las colonias con coloración verde del medio, contorno de los eritrocitos intacto.

Prueba con Rojo de Metilo

Prueba de Voges - Proskauer

Bases bioquímicas

Reacciones

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

http://www.mco.edu/depts/micro/awards.html
© Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Hacer clic

REINO
Monera

PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS
Organismos procariotas unicelulares.

EJEMPLOS DE ORGANISMOS
Bacterias

Protistas

Organismos eucariotas unicelulares y sus descendientes más inmediatos.

Algas, protozoos

Hongos

Organismos heterótrofos que obtienen su alimento por absorción. No realizan la fotosíntesis. La pared celular contiene generalmente quitina.

Levaduras, setas

Vegetal

Organismos inmóviles que realizan la fotosíntesis. Pared celular compuesta de celulosa.

Musgos, helechos, árboles Moluscos, peces, aves

Animal

Organismos móviles sin pared celular. Ingieren el alimento. Presentan tejidos diferenciados.

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COPROCULTIVO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar entérico Hektoen Agar de eosina y azul de metileno Agar ENDO Agar XLD Agar Salmonella Shigella Agar verde brillante PARA ENRIQUECIMIENTO Base de caldo tetrationato Caldo de selenito y cistina PARA IDENTIFICACIÓN Agar de hierro y triple azúcar Caldo rojo de fenol y carbohidratos Medio urea Medio SIM Agar hierro y lisina Medio MIO Agar citrato de Simmons

AISLAMIENTO
PLACAS: Agar S-S, verde brillante, sulfito de bismuto. Agar sangre

ENRIQUECIMIENTO

TUBOS: Caldo tetrationato y/o caldo selenito PLACAS: Agar verde brillante,sulfito de bismuto,XLD,EMB, ENDO, Mac Conkey.

INCUBACIÓN 24 hs – 37° C PLACA: Agar EMB ó ENDO, XLD, Mac Conkey

IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA
TSI, MIO, LIA, SIM, fenilalanina, RMVP,Citrato de Simmons, urea

Principales Pruebas para la identificación de Enterobacterias
BACTERIA OXIDASA INDOL VP RM CITRATO SH2 UREA MOVIL IDAD GELA TINA LISINA DESC. ARGI NINA DESC . + -

E. coli Shigella Edwardsiella

-

+ + +

-

+ + +

-

+

-

-

-

+

Salmonella
Arizona Citrobacter

--

-

-

+
+ +

+ +

+
+ +

-

+ -

+ -

+
+ -

+
+ -

Klebsiella
Enterobacter

-

+
-

+
+

-

+
+

-

+
-

+

+

+
+

-

Serratia
Proteus vulgaris

-

+

+
-

+
+

+
+

+

+

+
+

+
+

+
-

-

Providencia

-

+

-

+

+

-

-

-

-

-

Hacer

http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.html

Bacterias Gramnegativas no Fermentadoras
Prueba bioq.
O/F glucosa Oxida sa Catala sa Reducci ón de NO2 Variable Red.ucc ión de N2 Variable Movilida d Mac Conkey SS Agar pseudo cel +

Géneros
Pseudonomas
O + + +
(excepto P. mallei)

+

+

Acinetobacter
Achromobacter Alcaligenes Eikenella corrodens Flavobacterium Grupos del CDC Moraxella

O
O Inactivo Inactivo O Variable Inactivo

-+ + + + + +

+
+ + + + +

+ Variable + Variable Variable

Variable Variable

+ + Variable -

+
+ + -

V
+ V V -

V V -

ESTAFILOCOCOS
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar S-110 Agar sal y manitol Agar de Vogel Johnson PARA IDENTIFICACIÓN Medio CTA Caldo rojo de fenol Caldo SF
Tinción de Gram

1.Examen directo

2. Siembra

Agar S-110
Agar sal y manitol Agar de Vogel Johnson

3. Frotis
4. Pruebas bioquímicas Coagulasa Catalasa Fermentación de

manitol
Susceptibilidad a
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm

novobiocina

Hacer clic

FAMILIA MICROCOCCACEA
CARACTERÍSTICA Racimos irregulares Tetradas

MICROCOCCUS
+ +

STOMATOCOCCUS
+ -

PLANOCOCCUS
+ -

STAPHYLOCOCCUS
+ -

Cápsula
Movilidad Crecimiento Gfurazolidona Fermentación de glucosa

+ -

+
+

+ -

+

Oxidasa
Resistencia de lisostafina

+
R

R

No desarrolla
R

S

Glicina de péptidoglicana
Ácidos teicoicos en pared celular

-

-

-

+
+

Identificación de Staphylococcus
PRUEBA
Pigmento colonial Coagulasa Factor de agregación Nucleasa termoestable Fosfatasa alcalina Ornitina descarboxilasa Ureasa Beta-galactosidasa Producción de acetoína Resistencia a novobiocina Resistencia a polimixina Trehalosa Manitol Manosa Xilosa Celulosa Maltosa Sacarosa

S. aureus
+ + + + + 10-90% cepas + + + + + + + +

S. epidermidis
+ 10-90% cepas + + + + + + +

S. saprophyticus
10-90% cepas + + + + + + 10-90% cepas + + +

ESTREPTOCOCOS
Especie
Susceptibili dad Susceptibili dad

bacitraci na Estreptococos betahemolíticos Grupo A Grupo B Enterococos No enterococos

optoquin a

Hidrólisi s hipúrat o

Hidrólisi s esculina

Crecimient o en bilis

Crecimient o en NaCl 6.5%

CAM P

Fenómen o satelitism o

S R R R R

R R R R R

+ + -

+ -

+ + -

+ + -

+ -

+

S. viridans

S. pneumoniae

R

R

-

-

-

-

-

http://www.medschool.lsumc.edu/Micr/COURSES/DMIP/dmex16.htm

Hacer clic

Diferenciación de especies de Streptococcus
Especie
Reducción

de Azul de metileno

Crecimieto en Litmus milk

Lactosa

Trehalosa

Sorbitol

Manitol

Sacarosa

HEMOLÍTICO PIOGÉNICO

S. pyogenes S. agalactiae S. equi
ORALES

+ +

+ +
+ + +

+ + + + +
+ +

+ + + + -

+ -

+

+ + + +

S. salivarius S. Mutanm S. termophilus
DEL ÁCIDO LÁCTICO

S. lactis S cremoris
ENTEROCOCOS

E. feacalis S. liquefaciens S zymogenes

+

+

+

Características
Morfología
Cápsula Hemólisis Crecimiento en caldo Solubilidad en bilis Fermentación de inulina Sensibilidad a Optoquina

S. pneumoniae
Diplococo lanceolado
+ Alfa Turbio uniforme + + +

Streptococcus sp.
Pequeñas cadenas de cocos
Alfa Crecimiento granuloso -

Virulencia para ratón

+

-

http://catalog.cmsp.com/datav3/it010019.htm Hacer clic

HEMOLISINAS DE STHAPYLOCOCCUS
Tipo serológico Eritrocitos susceptibles Conejo Borrego Borrego Humano Conejo, humano, borrego, cobayo, rata Conejo, humano, borrego, cobayo, rata Conejo, humano, ratón, cobayo Leucocitos susceptibles Conejo Humano Ninguno Toxicidad

ALFA

Dermonecrótica para conejo Letal para conejo en grandes dosis Dermonecrótica para conejo y cobayo; letal para conejo Edema en conejo y cobayo

BETA

GAMMA

DELTA

BACILLUS Y CLOSTRIDIUM
CARACTERÍSTICA Forma Esporas Movilidad Crecimiento en: Aerobiosis Anaerobiosis

Bacillus
Bacilos + +

Clostridium
Bacilos + +

+ +
+

+ +

Catalasa
Ácido de glucosa

Diferencias de especies de Bacillus
Características
Ácido de: Arabinosa Glucosa Manitol Salicina
Cápsula Crecimiento en: Agar penicilina Anaerobiosis Citrato Glucosa O/F

B. anthracis
+ +

B. cereus
+ +/-

B. megaterium
+ + + -

B. subtilis
+ + + +/-

+ + F

+ + + F

+ O

+ O

Hemólisis ASC
Hidrólisis de: Almidon Gelatina Indol Movilidad Peptonización LT Reducción de Nitratos Virulencia de ratón Voges-Proskauer

-

BETA

-

+/-

+ + + + +

+ + + + + +

+ + + +/-

+ + + + + +

Diferencias de especies de Clostridium
Características Ácido de: Glucosa Lactosa Maltosa Manitol Sacarosa Sorbitol Trehalosa Crecimiento aeróbico Esporas Hemólisis ASC H2S Indol Leche tornasolada Movilidad Reducciónd de nitratos Voges - Proskauer

C. perfringes

C. botulinum

C. tetani

+ + + + Variable Subterminal + ACG Variable Variable

+ Variable Variable Variable Variable Subterminal +/+/+ -

-

Terminal + Variable Variable Variable + -

CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
Especie Morfología celular Morfología en ASC Crecimiento en caldo Hemólisis Fermentación

Glu
Variedad gravis Bacilos cortos Colonias 2-4mm, grises, cabeza de margarita, planas Película +

Sac
-

Alm
+

Variedad mitis

Bacilos largos, con granos en los extremos
Bacilos largos en bastón

Colonias 1-2mm, negras, convexas, lisas y brillantes
Colonias >0.5mm, negras, planas, secas, duras

Difuso

+

+

-

-

Variedad intermedius

Sedimento granular

-

-

-

-

EXUDADO FARINGEO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar sangre Agar eosina y azul de metileno Agar sal y manitol Agar S-110 Medio de transporte Stuart Agar BIGGY

Tinción de Gram
Hemolítico grupo A

Streptococcus

Disco de bacitracina Disco de optoquina

Agar sangre Agar eosina y azul de metileno Agar S-110, sal y manitol Agar BIGGY

Neumococos

Solubilidad de bilis

Enterobacterias

TSI, LIA, MIO, citrato y urea

Staphylococcus aureus y otros Micrococcus Candida albicans

Catalasa y coagulasa

Tubos germinales y clamidiosporas

UROCULTIVO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar sangre Agar EMB Agar S-110 Agar sal y manitol Agar Biggy PARA IDENTIFICACIÓN

TSI, Caldo rojo de fenol
Urea, SIM, MIO, LIA, Citrato de simmons

PARA SENSIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS Agar de Mueller Hinton Agar soya tripticaseína

Orina

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

Tinción de Gram

Agar sangre, identificación de:
Estafilococos

Agar EMB Identificación de: Enterobacterias Pseudomonas Salmonella y Shigella

Agar S-110 ó sal y manitol
Identificación de Staphylococcus y otros Micrococos

Estreptococos
Neumococos Observación de hemólisis

Aislamiento de bacterias patógenas en heces
Salmonella, Shigella, Escherichia coli, Y. enterocolitica

Materia fecal
Mac Conkey EMB o XLD Sulfito de bismuto Caldo de selenito

Seleccionar colonias lactosa (-)= Salmonella Lactantes: colonias lactosa (+)= E. coli y

Colonia negra = Salmonella

Sulfito de bismuto

XLD, VB

Shigella

Certifique Y. enterocolitica

Colonia negra

Salmonella

(-)=Salmonella typhi

Colonia lactosa

Hacer clic
http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/coursew are/infect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html

Clasificación y pruebas para Streptococcus
Grupo de Lancefi eld Especie Hemóli Habitat sis humano Enfermedades Pruebas de laboratorio

A

S. pyogenes

beta

Faringe, piel

Infecciones primarias: Faringitis aguda, erisipela, celulitis, impétigo, septicemia Secuelas postinfecciosas: Fiebre reumática, glomerulonefritis, endocarditis reumática.
Sepsis puerperal, endocarditis, neumonitis, neumonía, meningitis, septicemia. Infecciones en heridas, sepsis puerperal, celulitis, endocarditis.

Disco de bacitracina A Aglutinacion en látex

B
C

S. agalactiae

beta

Faringe, vagina

Prueba de CAMP Bilis esculina Aglutinación en látex

S. equi S. equisimilis S. dysgalactiae

beta beta alfa

Faringe, vagina, piel

Hidrólisis de hipurato, Fermentación de glicerol, trehalosa, sorbitol Aglutinación al látex

Grupo de Lancefi eld

Especie

Hemóli Habitat sis humano

Enfermedade s

Pruebas de laboratorio

D

Enterococos:

Intestino grueso

E. faecalis E. faecium E. turans
No enterococos:

Alfa Beta Gama Alfa Beta
Boca, dientes, faringe

Infecciones en tracto urinario, abcesos pelvianos, peritonitis, infecciones en heridas, endocarditis.

Hidrólisis de bilis esculina Aglutinación al latex Tolerancia a 6.5% NaCl

S. bovis S. equinus

F
H K

S. anginosus

Sinusitis, caries dental, meningitis, abceso cerebral, neumonía Caries endocarditis, septicemia dental,

Producción de ácido a partir de glucosa, maltosa, salicina y sacarosa Aglutinsación al latex Fermentación de inulina

S. sanguis

Alfa

Boca, dientes, faringe

S. salivarius

Alfa

Faringe, boca

Endocarditis, septicemia, sinusitis, meningitis Neumonía septicemia, meningitis, endocarditis lobar, otitis,

Ácido aprtir de glucosa, sacarosa y maltosa Serotipíficación Reacción de quellung Solubilidad en bilis Susceptibilidad a optoquina

S. pneuomoniae

Alfa

Faringe, boca, traquea

la

BACILOS GRAM NEGATIVOS OXIDASA POSITIVOS
Prueba

Aeromonas
+
+

Plesiomonas
+
+ -

Vibrio
+
+ +

Pseudomonas

Fermentación de glucosa
Crecimiento en NaCl 6.5% Ácido de inositol Ácido de manitol

No aplicable No aplicable

Crecimiento en TCBS Licuefacción de gelatina

+

-

+ +

Variable

Bacteria con forma de bastón (bacilo), que pertenece a la familia de las Enterobacteriaceas; está considerada como el material biológico más utilizado en experimentación. Esta bacteria se encuentra en el tracto intestinal de los mamíferos. La especie comprende varios grupos que se establecen según su actividad. Las especies de Escherichia coli oportunistas producen infecciones sólo si abandonan el colon. Otros grupos producen hasta el 90% de las diarreas infantiles y la denominada diarrea del viajero. Esta última no es grave, pero la gastroenteritis aguda de los niños puede provocar la inflamación de la mucosa intestinal, dando lugar a deshidratación grave y heces purulentas. La Escherichia coli es un organismo adecuado para la investigación por su crecimiento rápido y porque su cultivo es sencillo. Ha facilitado descubrimientos muy importantes sobre metabolismo, reproducción celular e ingeniería genética.
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http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm

Streptococcus, bacteria Gram positiva de forma esférica. Los estreptococos aparecen en pares o cadenas, y algunas especies son patógenas en los seres humanos. Las infecciones estreptocócicas comprenden la faringitis, la escarlatina, erisipelas, fiebre puerperal y algunas neumonías. Los fármacos de elección en el tratamiento de estas infecciones son la penicilina y la eritromicina. Los cultivos de los estreptococos no patogénicos lácticos se emplean en la fermentación de productos lácteos como el queso y la mantequilla.
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La bacteria Staphylococcus aureus es un patógeno común en el ser humano que se localiza principalmente en las mucosas y la piel. Puede originar abcesos y forúnculos en la piel además de provocar osteomielitis, endocarditis y otro gran número de infecciones.
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La bacteria Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea, una enfermedad infecciosa que origina fiebre alta, erupción de manchas rojas en tórax y abdomen y a veces diarrea y hemorragia intestinal.
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Estructura proteica de un microtúbulo Los microtúbulos son tubos finos y huecos que ayudan al soporte de ciertas estructuras celulares como cilios y flagelos. Éstos son orgánulos filamentosos, destinados a la locomoción y a la obtención de alimento, que están incrustados en la membrana celular de algunos organismos eucariotas. Las paredes del tubo están formadas por dos tipos de subunidades de una proteína globular, la alfa y la beta tubulina, que se reúnen para formar un dímero. Los dímeros se ensamblan, se enrollan y componen un tubo de la longitud necesaria. Dentro de cada cilio (corto) o flagelo (largo), aparecen nueve pares de microtúbulos que rodean a un décimo par central.
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El ciclo de Krebs empieza y acaba con la combinación de la acetil coenzima A (acetil Co A) y el oxalacetato para formar ácido cítrico. Este compuesto ácido tiene seis átomos de carbono y experimenta una serie de reacciones químicas catalizadas por enzimas que separan dos de estos átomos. Las enzimas también modifican la estructura del compuesto, que se transforma en oxalacetato al final del ciclo. Éste se combina a continuación con la acetil Co A para iniciar de nuevo la cadena de reacciones. Cada ciclo genera una molécula de ATP rico en energía (que se forma por liberación de cuatro electrones) y otra de GTP.
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Esta micrografía electrónica ilustra la bacteria Vibrio cholerae, causante del cólera, una grave enfermedad infecciosa del hombre. Produce una toxina que induce la secreción de grandes cantidades de líquido en el intestino delgado, lo cual determina un cuadro de vómitos, diarrea, calambres musculares y, a veces, la muerte. Hay una vacuna preparada con bacterias muertas que proporciona protección parcial.
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Bacilos Gram positivos grandes que se agrupan formando cadenas, forman esporas y son aerobios La mayor parte de las especies de Bacillus producen catalasa, y la esporulación no es inhibida por la incubación aerobia característica positiva que ayuda a la diferenciación del género Bacillus del Clostridium. El Bacillus anthracis causa antráx en animales y humanos. El Bacillus cereus ha sido asociado con brotes de intoxicación alimentaría.

Ingraham L.J. 2000

Black, 1996

Ingraham L.J. 2000

Diplococos Gram positivos, frecuentemente lanceolados y agrupados en cadenas, poseen una cápsula formada por polisacáridos que permite una fácil tipificación con antisueros específicos. Pueden ser lisados con facilidad por agentes tensoactivos, como las sales biliares. Estos organismos son habitantes del aparato respiratorio superior del hombre, y pueden causar neumonía, sinusitis, otitis, bronquitis, meningitis entre otros.

Corynebacterium diphteriae en tinción de Gram. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

Son bacilos Gram positivos, inmóviles y no esporulados, que frecuentemente presentan sus extremos en forma de mazas, así como gránulos irregularmente teñidos. A menudo se encuentran formando asociaciones características, semejando letras chinas o palizadas. Algunas especies forman parte de la flora normal del aparato respiratorio del hombre. C diphtheriae produce una poderosa exotoxina que causa la difteria en el hombre.

Corynebacterium diphtheriae en medio Tinsdale. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

Streptococcus

en fisión binaria, coco Gram positivo, flora normal del intestino grueso, sin embargo causa infecciones en el tracto genitourinario y en sistema cardiovascular. Los enterococos se pueden desarrollar típicamente en medios con concentraciones de NaCl al 6.5% o bilis al 40%, son inhibidos pero no destruidos por las penicilinas.

faecalis

http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm

Estafilococo, nombre común de un género de bacterias parásitas (Staphylococcus) de forma redondeada, que se encuentran habitualmente en el aire, el agua, la piel (especialmente en zonas con pelo o vello) y la parte alta de la faringe humana. Son de naturaleza patógena, y cuando abandonan su localización en la piel y pasan a invadir otras estructuras pueden producir procesos como los forúnculos, infecciones de heridas (abscesos; neumonía; meningitis; septicemia). Casi siempre existe una puerta de entrada a través de la piel o la faringe. El tratamiento de las infecciones estafilocóccicas se realiza mediante antibióticos, como los de la familia de las penicilinas y sulfamidas, pero es frecuente la existencia de cepas resistentes a los antibióticos habituales, que requieren antibióticos más específicos para su control.
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Helicobacter pylori, bacteria implicada en el desarrollo de gastritis y úlceras pépticas. Se asocia también con algunos cánceres de estómago. Con toda probabilidad, la infección por Helicobacter pylori se produce en la edad infantil. Es un bacilo Gram negativo corto, helicoidal, con múltiples flagelos, microaerófilo (con preferencia por medios escasos en oxígeno), que coloniza las capas profundas del moco de recubrimiento gástrico y duodenal y se adhiere a las células epiteliales superficiales de la mucosa del estómago y duodeno, sin invadir la pared. La bacteria segrega amoníaco, alcalinizando el medio; así se protege de la acción acídica del jugo gástrico (pH 3). El amoníaco además irrita la mucosa, ayudado por proteasas y fosfolipasas bacterianas que destruyen el moco protector. La mucosa y su lámina propia son invadidas por un denso infiltrado de células inflamatorias, especialmente neutrófilos. Se ha relacionado con el 95% de las úlceras duodenales, el 70% de las úlceras gástricas, el 100% de las gastritis crónicas activas y el 100% de las gastritis crónicas tipo B. DIAGNÓSTICO Las pruebas que se utilizan para diagnosticar esta infección pueden ser directas, si se basan en la identificación del microorganismo (histología y cultivo) e indirectas, cuando estudian alguna característica del germen (prueba de la ureasa y pruebas en aire espirado) o bien los anticuerpos producidos por el paciente (serología). Las muestras utilizadas para el diagnóstico pueden obtenerse por métodos invasivos (biopsia durante la endoscopia) o no invasivos (suero, saliva, aliento).
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Beyong,2001:http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html

Salmonella, género de bacterias patógenas descubiertas por el veterinario americano Daniel Elmer Salmon en 1885. El organismo se transmite por determinados alimentos contaminados como carne de ave, huevos u otras carnes. Se divide en tres especies: Salmonella typhi, S. choleraesuis y S. enterititis. Ésta última presenta más de 1.400 variedades antigénicas distintas. La S. typhi produce la fiebre tifoidea. Las diferentes S. enteriditis, la más típica de las cuales es la S. typhimurium, producen gastroenteritis (salmonelosis) que son intoxicaciones alimentarias que producen dolor abdominal, fiebre, náuseas, vómitos y diarrea. El periodo de incubación varía entre 8 y 48 horas y la duración de los síntomas oscila entre 3 y 7 días. Los casos leves se tratan con dieta y limonada alcalina (preparado rehidratante y reponedor de las pérdidas de electrolitos); no se deben usar antidiarreicos porque pueden transformar al enfermo en portador crónico de salmonelas. Los casos graves deben hospitalizarse y tratarse con rehidratación intravenosa y, en ocasiones, con antibióticos. La prevención de estas infecciones pasa por extremar la higiene, la limpieza cuidadosa y el aumento del tiempo y la temperatura en la preparación culinaria de los alimentos.
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Las arquebacterias constituyen un grupo de bacterias adaptado a vivir en condiciones extremas. La especie Methanospirillum hungatii es una arquebacteria metanogénica Gram negativa presente en ambientes carentes de oxígeno. Estas bacterias producen metano a partir de dióxido de carbono e hidrógeno. En la fotografía aparece la bacteria en fase de escisión, es decir, mientras se está dividiendo para dar lugar a dos células hijas.
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Las espiroquetas son bacterias con una morfología y mecanismo de movilidad únicos. Se encuentran diseminadas en ambientes acuáticos y en los cuerpos de animales. Algunas de ellas causan enfermedades como la sífilis, originada por Treponema pallidum. La célula espiroqueta es delgada, flexuosa y de forma helicodal.
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bacteria Neisseria meningitidis que muestra esta imagen, produce meningitis bacteriana así como otras enfermedades. Su carácter Gram negativo se debe a su incapacidad para captar un tipo específico de colorante bacteriano denominado tinción de Gram. La
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Neiseria meningitidis University of MissouriColumbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

COOH

NH 2 N

H L - Triptofano

COOH

O N

H Indolpiruvico

DESAMINACIÓN

N

H Indol

H C O N

H Indolacetaldehído

CH3 COOH N N

H Escatol (metilindol) incubación de largo término

H Ácido Indolacético(indolacetato). Incubación de corto tiempo

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MENÚ

G L U C O L I S I S
Glucosa
ATP ADP 2 ADP

2
2 ATP

fosfoenolpiruvato

2

piruvato H2O 2 2-fosfoglicerato

Glucosa-6-fosfato

Fructosa-6-fosfato
ATP ADP

2 3-fosfoglicerato
2 ADP

2 ATP

Fructosa-1,6-bifosfato

2 1,3-bifosfoglicerato
2 NAD 2 PO4

2 NADH

Dihidroxiacetona fosfato

3-fosfogliceraldehído

NADH

NAD

CoA

Piruvato

CoA

CO2

Acetil CoA

oxalacetato

DE KREBS

citrato

NADH NAD

malato
isocitrato
H2O NAD CO2 NADH

CICLO

fumarato
FADH2 FAD

Alfa-cetoglutarato
NAD NADH CO2 CoA

succinato
CoA

Succinil CoA

GTP

GDP

VIA HEXOSA MONOFOSFATO
NADP
NADP

Glucosa

Glucosa-6-fosfato

5-P-gluconato

Ribulosa-5-P
NADPH NADPH CO2

Ribosa-5-p

Xilosa-5-P

GLUCOLISIS

Gliceraldehído-3-P

Sedoheptulosa-7-P

Fructosa-5-P

Eritrosa-4-P

Gliceraaldehído-3-P

Fructosa-5-P

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Bacillus subtillis

Proteus vulgaris

Microbiology lab index, 2002: http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html

Streptococcus pyogenes

Staphylococcus aureus

Microbiology lab index, 2002: http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html

University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides .htm

Staphylococcus aureus

Staphylococcus epidermidis Streptococcus pyogenes

Streptococcus viridans

Streptococcus faecalis

Streptococcus pneumoniae

Homepage of Microbiologia clínica, 2000 http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm#topo

   


En algunos casos es necesario sembrar una muestra para conocer el número de células viables o vivas, en este caso bacterias. Para ello se realiza entre otros métodos el vaciado en placa. Para obtener el número apropiado de colonias, usualmente se debe diluir la muestra a contar. Es común usar varias diluciones decimales de la muestra. Para la dilución se toma 0.1 ml de muestra problema y 9.9 ml de diluyente. En la mayor parte de los casos se necesita realizar diluciones seriadas. Cuando se hacen diluciones es importante que se utilice una pipeta diferente para cada dilución, aun cuando sea de la misma muestra. Las cuales deben estar esterilizadas previamente al igual que todo el material que se utilizará. Esto se debe a que la muestra inicial, que contiene la mayor cantidad de organismos, no se expulsó a todos los microorganismos de la pipeta al expulsar el contenido de esta. Los organismos que se adhieren a las paredes de la pipeta pueden ser arrastrados fuera en diluciones posteriores y ocasionar un serio error en la cuenta final que se obtiene. El número de colonias obtenidas sobre una placa no depende solamente de la cantidad del inóculo, sino también de los adecuado del medio de cultivo y de las condiciones de incubación. No todas las células depositadas sobre la placa formarán colonias a la misma velocidad y si se usa un tiempo corto de incubación, se puede obtener menos del máximo de colonias. El recuento de viables está sujeto a gran error. Si se desean cuentas exactas, se debe tener gran cuidado y se deben preparar muchas placas por duplicado. Para expresar el resultado, el recuento de viables se expresa como el número de unidades formadoras de colonias (UFC).

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