UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

 MICROBIOLOGIA GENERAL  FACTOR

II

X y V, Haemophilus.

El género Haemophilus comprende un grupo de pequeños Bacilos pleomórficos, gramnegativos, con requerimientos nutricionales especiales, además de ser inmóviles. inmóviles.

El H. Influenza, como todos los miembros del género, es de Influenza, aspecto pleomórfico; los m.o son predominantemente pleomórfico; cocobacilares y de forma uniforme, midiendo 0.2 a 0.3 por 0.5 a 0.5 µm. µm. 

Para el crecimiento de diversas especies de Haemophilus en medios de cultivos artificiales, son necesarios factor X (hemina) y factor V (NAD), solos o en combinación. En combinación. el mercado se dispone de tiras o discos de papel filtro impregnados con factor X o V. 

Los factores X y V, al ser hidrosolubles, se difunden en medios de cultivo con agar. Las tiras o discos de papel agar. filtro impregnados con estos factores se colocan en la superficie de un medio deficiente de factores X y V, como BHI o AST, que se han inoculado con el m.o en estudio. estudio. 

El agar chocolate se prepara agregando sangre de carnero (7.5-10%) a una base que se encuentra a 10% (80°C) como para lisar los hematíes y liberar factor 80° X y V. Debe evitarse el calentamiento prolongado para no inactivar el factor V.
La desventaja de utilizar agar chocolate para el aislamiento primario de Haemophilus es que el medio no permite determinar las propiedades hemolíticas, que ayudan a diferenciar H. Haemolyticus y H. Parahaemolyticus de H. Influenzae. Influenzae. Debe usarse agar chocolate para el primoaislamiento de Haemophilus ya que asegura que cualquier especie se desarrollara en el. el. 

ESPECIES PARA HUMANOS H. influenzae H. para influenzae H. parahemolyticus H. aphrophilus H. paraphrophilus H. paraphrohaemoliticus H. segnis H. ducreyi

ESPECIES PARA ANIMALES H. parasuis (ganado porcino) H. paragallinarum (aves de corral H. paracuniculus (conejos) H. haemoglobinophilus H. felis (gatos)

MATERIAL Y METODOS   



Tiras o discos de papel filtro impregnados con factores X y V. Un medio agar deficiente de factores X y V. El agar tripticasatripticasa-soja o el agar infusión de cerebro-corazón. cerebroAgar sangre de carnero Cepa de Staphylococcus aureus CONTROL DE CALIDAD 

Haemophilus parainfluenzae: requiere solamente factor V Haemophilus influenzae: requiere tanto de factor X y V 

PROCEDIMIENTO
1. 2. 3.

Sembrar el m.o en cuestión sobre la superficie del agar deficiente de factores (BHI ± STA) Colocar una tira de factor X y factor V sobre la superficie del agar, con una separación aproximada de 1cm. Incubar la placa en CO2 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24 hrs.

1.

Sembrar Haemophilus en el agar BHI y en el agar sangre. 2. Colocar una estría de Staphylococcus aureus en cada agar. 3. Incubar la placa en CO2 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24 hrs.

X

V

X

V

X

V

X

V

V

Agar sangre

BHI

X

Agar sangre

BHI

XyV

Agar sangre

BHI

CUADRO PARA LA DIFERENCIASIÓN DE ESPECIES DEL GENERO HAEMOPHILUS.

ESPECIE H. inflenzae H. parainfluenzae H. ducreyi H. aegyptius H. parasuis

FACTOR X + + + -

FACTOR V + + + +

HEMOLISIS + -

REQUIERE CO2 + + + -

CATALASA +/+/+ + +/+/+/+/-

Genero/especie H. influenzae

Enfermedad Respiratoria alta (sinusitis, faringitis, epiglotitis, otitis media), bacteremia, meningitis. Respiratoria alta, comensal. Chancro blando, transmisión sexual. Conjuntivitis. Inf. En cerdos

H. parainfluenzae H. ducreyi H. aegyptius H. parasuis

GENERO HAEMOPHILUS
PERTENECE A LA FAMILIA : Pasteurellaceae Haemophilus Actinobacillus Pasteurella CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS: Cocobacilos Gram-, no esporulados, dificiles de crecer en medios sinteticos, requieren de factores de crecimiento ( X y V) hemina y NAD respectivamente ambos factores se encuentran en la sangre. Hi (Haemophilus influenzae) requiere ambos, se proporcionan en Agar chocolate al 10% por su incapacidad para lisar los GR.. Hi tiene 6 serotipos capsulares (a, b, c, d, e y f) puede expresar uno o ninguno. < 5% de las cepas aisladas del tracto respiratorio poseen capsula.

Biotipo I II III IV V

indol + + +

ureasa + + + + -

Ornitina descarboxilasa + + +

Reduccion de nitritos + + + + +

En exudados nasofaringeos humanos más del 80% de individuos están colonizados por Hi no tipificables. Como resultado del contacto intimo con aerosoles o por contacto directo con secreciones. La exposición inicia después del nacimiento, continuando por la infancia y el adulto. El estado de acarreador persiste por días y meses. 273/100 000, incidencia de infección invasiva con un 30% (81.9) de mortalidad.

DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD 1. Polisacarido capsular. 2. Lipopolisacarido 3. Pili y fimbria 4. Proteínas de membrana externa 5. Proteasa para IgA 6. Adquisición de fierro 7. Variación de fase e identificación de genes involucrados en la patogenicidad. Hi puede expresar uno o ninguno de los seis antigenos capsulares

PATOGENESIS
1. Hi coloniza eficientemente el tracto respiratorio superior y la nasofaringe de ahí se disemina a sitios alejados, esta mediada por la proteína P2 y P5 de ME y el ácido sialico conteniendo oligosacáridos de mucina.

2. Enfermedad localizada, Hi no tipificable causa bronquitis, sinusitis, conjuntivitis y otitis media con infección inicial en la nasofaringe. La otitis media Vía de la trompa de Eustaquio. 3. Bacteriemia, se ha usado el modelo de la rata infante, en la cual se observan los cambios patológicos en meninges virtualmente indistinguibles que en el niño afectado. La cápsula es el componente más involucrado en el proceso de bacteriemia. 4. Localización, la meningitis es la más devastadora consecuencia de la invasión por Hi, el modelo de la rata infante a proporcionado información al estudio de la patogénesis, Bacteriemia con > 105/ml dará un cuadro de meningitis. <103/ml no da meningitis.

BIBLIOGRAFIA   

M.RBREACH. MANUAL DE TÉCNICA BACTERIOLOGICA; EDITORIAL ACRIBA; 2da EDICIÓN; ZARAGOZA ESPAÑA; PÁG. KONEMAN, ELMER W.DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO, EDITORIAL PANAMERICANA; 5TA EDICIÓN; BUENOS AIRES, ARGENTINA 2003. PAG.357PAG.357-386. MAcFADDIN, JEAN F. PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DE BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLÍNIC; EDITORIAL PANAMERICANA; 3RA EDICIÓN.BUENOS AIRES ARGENTINA 2003, 422-424. 422-