UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA E.A.P. INGENIERÍA QUÍMICA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA ANALÍTICA E INSTRUMENTAL
PRÁCTICA Nº 2

TEMA: ESPECTROFOTOMETRÍA – ULTRAVIOLETA. ANÁLISIS DE NITRATOS DE AGUA

CURSO

: LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL

PROFESOR :RODRIGUEZ BEST, MARIA ANGELICA ALUMNA : DE LA ROSA HERRERA, ROCIO BEATRIZ CÓDIGO:04070083

Laboratorio de Análisis Instrumental

así como los fosfatos. rango para el cual se cumple la Ley de Beer. así como el amonio..1. La determinación de los nitratos en el agua de consumo humano es importante porque cunado estos se encuentran en concentraciones que sobrepasan los 10 ppm. El método fotométrico es muy bueno para muestras limpias y puede adaptarse bien para muestras con materia orgánica. Los nitratos. El primero. Teniendo en cuenta que tanto la materia orgánica como el ion nitrato absorben energía radiante a una longitud de onda de 220 nm yque la materia orgánica mas no el nitrato. Los nitratos suelen hallarse en aguas naturales en concentraciones traza o de unos pocos ppms. en particular con muestras complejas porque pocas veces se puede encontrar una longitud de onda en la que solo se absorba el analito. constituyen parte de los nutrientes esenciales para muchos organismos autrotofos o fotosintéticos y en este sentido. para concentraciones inferiores a 10 mg/l. su presencia en el agua. como N. con el objeto de corregir las primeras mediciones por la interferencia que halla podido ocasionar la materia orgánica presente en la muestra. los nitratos. 2. El grado de esta corrección empírica se reacciona con la naturaleza y concentración de la materia orgánica y puede variar a partir de un agua a otra. La filtración de la muestra se piensa para quitar interferencia posible de partículas suspendidas.FUNDAMENTO DEL METODO DE ANALISIS NITRATOS EN AGUA Los nitratos constituyen la especie nitrogenada más abundante y de mayor interés en todos los cuerpos de aguas naturales. Por otra parte. En ocasiones. Las mediciones se realizan utilizando un fotómetro a 220 nm. que se caracteriza por la dificultad de la sangre para absorber oxigeno. tales como las provenientes de plantas suministro y/o aguas subterráneas.. constituyen indicadores apropiados de aguas residuales domesticas. absorbe también a 275 nm. pero se evapora con facilidad y/o se absorbe fácilmente en el subsuelo.DESCRIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA La técnica empleada mide directamente la absorbancia del analito o después de que ha reaccionado con un reactivo y se forma un producto capaz de absorber la radiación. puede ocasionar fenómenos de eutrificacion en ríos y lagos. mientras que en aguas residuales domesticas y agrícolas pueden alcanzar niveles relativamente altos. pueden causar una enfermedad infantil conocida como “metahemoglobinemia”. las separaciones previas ayudan a eliminar las especies que puedan absorber e interferir con la Laboratorio de Análisis Instrumental . El segundo también típico de aguas residuales frescas. el método analítico realiza las mediciones a estas dos longitudes de onda. siempre que esta permanezca estable y constante. es típico de las aguas residuales domesticas frescas y es muy móvil y estable en condiciones aeróbicas. La primera técnica tiene más restricciones. Método Espectrofotometrico UV Visible Este método es aplicable a muestras limpias con bajo contenido de materia orgánica.

(es estable por 6 meses)  Preparación de solución patrón intermedia de nitrato de 100ppm a partir de la solución stock. los surfactantes.  Tratamiento de la muestra. y la materia orgánica disuelta también puede absorber a esta longitud de onda. Para corregir las interferencias debidas a la materia orgánica. 4. En la experiencia dada realizamos los siguientes pasos:  Solución stock de nitrato: se disolvió 0.3626g de KNO 3 . en 500 ml de agua y preservar por adición de 2 ml de cloroformo. donde no absorbe el nitrato. Cuando el cortador no desvía el haz. sobre 5 y 25 ml de muestra transparente. previamente secado a 105 C durante 24 horas. El ion nitrato absorbe a 220 nm. NO2.  Soluciones de patrón de nitratos: se preparan por dilución de la solución intermedia. Las sustancias inorgánicas se pueden compensar con un análisis independiente de concentraciones y la preparación de curvas de corrección individuales. Cuando el cortador desvía el haz a través de la cubeta de referencia. añádase antes de enrazar 1 ml se solución de HCl 1Ny mezcle vigorosamente.y Cr6+. El haz se corta varias veces por segundo. se toma una segunda lectura de absorbancia a 270 nm. y el circuito compara automáticamente P y P0. Aunque tome más tiempo a veces es preferible hacer una separación previa para eliminar las especies que interfieren.. Interferencias Interfieren la materia orgánica disuelta. la luz pasa alternadamente por la cubeta de la muestra y de la referencia.  Se prepara la curva de calibración y se lee la absorbancia de las muestras y patrones. el detector mide P0.  El blanco: en una fiola de 50 ml colóquese aproximadamente 45 ml de agua ultra pura. También es frecuente tratar la muestra con un reactivo selectivo. dirigida por un motor que gira un espejo.N a 50ml. Esta solución contiene 100 ppm de nitrato como N. añádase 1 ml de solución de HCl 1N y luego complétese el volumen hasta el enrase. que de esta manera entra y sale del paso de la luz. la luz pasa a través de la muestra. El cual resulta de 10 ppm. y el detector mide la potencia radiante que llamamos P. las interferencias se pueden corregir con una segunda medición de absorbancia. que no se encuentran normalmente en el agua natural. de modo que en la reacción se forme una especie que absorba una región donde no haya interferencias. De 0 a 5 ppm de NO3. Pueden interferir varios iones inorgánicos.DESCRIPCION DE LOS INSTRUMENTOS O APARATOS USADOS Espectrofotómetro de doble haz En un espectrofotómetro de doble haz. En otros casos. filtrada si fuera preciso. como clorito y clorato.determinación espectrofotometrica del analito. dando así la transmitan cía y la absorbancia. Un ejemplo de este segundo enfoque es la determinación de nitrato en muestras de aguas naturales (lo realizado). Este Laboratorio de Análisis Instrumental . El HCl tiene por objeto impedir interferencias por concentraciones de hidróxido o carbonatos que pueden estar en las muestras.

y una vez que pasa por las cubetas de la muestra y referencia. que entra en el monocromador. que produce una corriente eléctrica proporcional a la potencia radiante que llega al detector. es de rutina registrar primero el espectro de la línea base con las disoluciones de referencia (disolvente puro o blanco) en las dos cubetas. para obtener así la verdadera absorbancia de la muestra a las distintas longitudes de onda. y éste selecciona una banda aún más estrecha. Fig. La red de difracción 1 selecciona una banda estrecha de longitudes de onda. porque se comparan con mucha frecuencia la potencia que sale de las dos muestras.Cuando se registra un espectro de absorbancia. y la fuente ultravioleta es una lámpara de arco de deuterio. Después de cortado el haz.procedimiento permite hacer una corrección automática de las variaciones de intensidad de la fuente. y de la respuesta del detector con el tiempo y la longitud de onda. La luz blanca procede de una lámpara de halógeno de cuarzo (como la de luz larga de un automóvil). la señal es detectada por un tubo fotomultiplicador. que emite en el intervalo de 200-400 nm. 1 Diagrama esquemático de un espectrofotómetro de doble haz Laboratorio de Análisis Instrumental .En la figura 1 se muestra un espectrofotómetro visible de doble haz. En un momento dado sólo se utiliza una de ellas. Después se resta el espectro base de la absorbancia medida de la muestra. Los espectrofotómetros de mayor calidad destinados a investigación también permiten un barrido automático de longitudes de onda y un registro continuo de absorbancia. que es la que pasa a través de la muestra.

-CALCULOS DETALLADOS Laboratorio de Análisis Instrumental . 5. se pude trabajar con el espectrofotómetro usando la pantalla liquida que tiene o desde una computadora usando el software UV PROVE.Espectrofotómetro de ultravioleta visible El instrumento con el que se trabajo en la experiencia fue un espectrofotómetro SHIMADZU que es un espectrofotómetro de doble haz que nos evita estar en cada medida de absorbancia poner el blanco de referencia porque tiene un comportamiento para este. las celdas paralelopipedas con las que trabajamos fueron de cuarzo con un lado transparente a al radiación y el otro difuso por el no pasa la radiación y por donde se puede manipular.

N = 0.3ppm apartir de 5ppm en 50 ml 5ppm x V1 = 0.1ppm V1=1ml.. 3.11g/mol KNO3 500 ml Luego . se calcula el numero de mg NO-3 . P2 : Obtener 0...N / 1L solución: Entonces: 0. (100 ppm x V1 ) patrón primario = (100ml x 10ppm) solución patrón intermedia V1 =10 ml (tomar 100ml de la solución patrón y enrasarlo a 100 ml con agua destilada para obtener así la solución patrón intermedia. P1 : Obtener 0.2ppm V1=2ml.N / L = 100 ppm.Preparación de la solución patrón intermedia de 5ppm apartir de la la solcución patrón intermedia de 10 ppm.3626g X 14 g/mol NO-3 .Preparación de la solución patrón intermedia de 10ppm apartir de la la solcución patrón primario.0502 g NO-3 .1ppm apartir de 5ppm en 50 ml 5ppm x V1 = 0.-Preparación del patrón primario: Partiendo de la solución madre de KNO3 =0.2ppm apartir de 5ppm en 50 ml 5ppm x V1 = 0.Preparación de patrones a partir de la solución 5ppm.N 500 ml 101.0502 g NO-3 X X =  500ml  1 L =1000 ml 100 mg NO-3 .Cálculo de la concentración de la solución estandar madre en PPM 1. para 1L de solución: 0. x 50ml x 50ml x 50ml Laboratorio de Análisis Instrumental .3ppm V1=3ml.3626 g/500 ml. (10 ppm x V2 ) patrón intermedia de 10ppm = (50ml x 5ppm) V2 = 25 ml ( tomar 25 ml de solucion 100ppm y llebarlo a 50 ml para obetener 5ppm 4. P3 : Obtener 0. 2.

Concentración (gráfica Nº1). se garficó Absorbancia Vs.25 mg NO-3 – N x 62 g/ mol NO-3 L 14 g/ mol N CM1 = 36.1ppm V1=4ml.53 ppm NO-3 L Según el valor registrado en el espectrofotómetro Uv-visible : para una alícuota de 2ml de agua vida. Determinando la concentración de la muestra. CM1 x 2ml = C muestra 1 *50ml CM1= 0. De agua vida.80 nm. 5)CALCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA DE AGUA VIDA De todos los valores registrados en la tabla para λ máxima = 202.18 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3 L 14 g/ mol N Laboratorio de Análisis Instrumental .330ppm C muestra 2 = 0. P5 : Obtener 0.346ppm x 50ml x 50ml Pero los valores registrados en el espectrofotómetro: C muestra 1 = 0.5 ppm apartir de 5ppm en 50 ml 5ppm x V1 = 0. A) Para la muestra 1 -Con los datos de C muestra según grafico de papel milimetrado CM1 x 2ml = C muestra 1 *50ml CM1= 0.P4 : Obtener 0.334ppm Para una alícuota de 2 ml.400ppm C muestra 3 = 0.53 mg NO-3 – N = 36.4ppm apartir de 5ppm en 50 ml 5ppm x V1 = 0.327 x 50ml / 2ml CM1 = 8.5ppm V1=5ml.330 x 50ml / 2ml CM1 = 8.327ppm C muestra 2 = 0. Mediante esta grafica se obtienen C muestra 1 = 0.402ppm C muestra 3 = 0.

51 ppm NO-3 L C) Para la muestra 3 -Con los datos de C muestra según grafico de papel milimetrado CM3 x 2ml = C muestra 1 *50ml CM3= 0.05 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3 L 14 g/ mol N CM2 = 44.28 mg NO-3 – N = 44.400 x 50ml / 2ml CM2 = 10.31 mg NO-3 – N = 38.20 ppm NO-3 L B) Para la muestra 2 -Con los datos de C muestra según grafico de papel milimetrado CM2 x 2ml = C muestra 1 *50ml CM2= 0.20mg NO-3 – N = 36..28 ppm NO-3 L Según el valor registrado en el espectrofotómetro Uv-visible : para una alícuota de 2ml de agua vida.TABLA DE DATOS Y RESULTADOS Laboratorio de Análisis Instrumental .97 ppm NO-3 L 6.CM1 = 36.51mg NO-3 – N = 44. CM3 x 2ml = C muestra 1 *50ml CM3= 0.402 x 50ml / 2ml CM2 = 10.65 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3 L 14 g/ mol N CM3 = 38.346 x 50ml / 2ml CM3 = 8.31 ppm NO-3 L Según el valor registrado en el espectrofotómetro Uv-visible : para una alícuota de 2ml de agua vida.334 x 50ml / 2ml CM3 = 8.0 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3 L 14 g/ mol N CM2 = 44. CM2 x 2ml = C muestra 1 *50ml CM2= 0.97mg NO-3 – N = 36.35 mg NO-3 – N x 62 g/mol NO-3 L 14 g/ mol N CM3 = 36.

TABLA Nº 1 SOLUCIÓN ESTÁNDAR MADRE (100 ppm) Solución de KNO3 0. Patrón 1 2 3 4 5 TABLA Nº 3 Muestra de Agua Vida (botella de 625 ml) Muestra M1 M2 M3 Volumen (ml) 2 ml 2 ml 2 ml V(ml) 1 2 3 4 5 TABLA Nº 4 CURVA DE PATRONES Patrones P1 P2 P3 P4 P4 V de la solución estándar 1 2 3 4 5 Ppm NO-3 – N 0.2 0.2 0.3626 g /500ml TABLA Nº 2 Preparación de patrones a partir de la solución intermedia (5ppm).3 0.337 Patrón P2 P3 ABSORBANCIA 0.4 0.3 Laboratorio de Análisis Instrumental . CONCENTRACION λ MÁXIMA = 202.80 ABSOR 0.1 0.5 TABLA Nº 5 ABSORBANCIA Vs.112 0.200 CONCENTRACIÓN (ppm) 0.

327 0.334 0. no es un método específico para la determinación de ion nitrato en agua y debe ser utilizado con los recaudos necesarios. empleando como agente reductor al sulfato de hidracina. Entre los métodos que aparecen para la cuantificación de nitratos en aguas. El rango de aplicación de este método es de 0.51 36.20 44. método automático de reducción de cadmio. método del electrodo de nitrato.31 Según espectrofotómetro (ppm NO-3) 36.97 Absorbancia 0. El método de reducción de hidracina se basa en la reducción de nitrato a nitrito.-DISCUSIÓN DEL METODO EMPLEADO La determinación de nitratos en aguas es difícil dado los procedimientos complejos con los que se cuentan. longitud de onda que es absorbida por el colorante . que se forma por diazotación con sulfanilamida y apareamiento con diclorhidrato de N-(1-naftil)etilendiamina.P5 0. El método espectrofotometrico ultravioleta.56 44. método del cloruro titanoso. Luego el nitrito se determina espectrofotométricamente a 540 nm.401 0.5 TABLA Nº 6 Análisis de las muestras con el espectrofotómetro (vm = 2ml) Muestra M1 M2 M3 TABLA Nº 7 Calculo de la concentración de la muestra (Vm= 2 ml) Muestra M1 M2 M3 Por el método gráfico (ppm NO-3) 36. método de reducción de cadmio.Este método presenta la Laboratorio de Análisis Instrumental .348 Concentración (ppm NO-3) 0. se pueden citar: Cromatografía iónica. método automatizado de reducción de hidracina.01 a 10 mg N(NO3-)/L.402 0.334 7.28 38. método espectrofotométrico ultravioleta selectivo. la gran posibilidad de encontrar sustancias interferentes y los rangos de concentración limitados que presentan las diferentes técnicas.342 0.

la otra celda contiene el blanco. cloruros. Comparativamente.DISCUSION DE RESULTADOS OBTENIDOS  El λmax es igual a 202.dificultad de no ser adecuado para el estudio de aguas contaminadas.337. * En 1969 la Organización Mundial de la Salud (OMS) admitió como agua mineral natural toda agua no contaminada bacteriológicamente que procedente de una fuente subterránea natural o perforada.  Para la curva de patrones es a partir de la dilución de la solución intermedia. 8. es decir sólo es válida su aplicación para muestras de agua con bajo contenido en materia orgánica.  La celda utilizada es de cuarzo  En este equipo solo se cambia el contenido de la celda que tiene la muestra. esta es una ventaja frente al método de la reducción con hidracina.. La materia orgánica también interfiere. el método espectrofotométrico ultravioleta selectivo presenta como características principales la baja demanda de tiempo y reactivos necesarios y su fácil ejecución.  Para leer en UV no es necesaria que la muestra sea coloreada. etc. contiene una determinada mineralización y puede inducir efectos favorables para la salud. hidróxidos.80 nm con absorbancia de 0.  Se añade HCl 1N para las interferencias que haber en el agua como carbonatos.  Si se trabaja directamente con la solución stock habría nucho error por eso se trabaja con solución intermedia que es una solución diluida a partir de la solución madre. Así mismo La Organización Mundial de la Saludconsidera que la concentración máxima en agua potable debe ser de 50 miligramos por litro. Laboratorio de Análisis Instrumental . esto hace que los resultados sean mas precisos.  El blanco se utiliza para corregir (restar) las absorbancias de las interferencias. debiendo estar así reconocido por la autoridad pertinente del país de origen. Para la determinación de ion nitrato en aguas subterráneas.

9. La tecnica utilizada es solamente para seleccionar muestras con bajo contenido de materia orgánica.  Agitar vigorosamente los patrones y muestras antes de cada lectura ya que si no se efectúa este procedimiento el equipo no leerá correctamente las absorbancias.  Los resultados obtenidos de la concentración de NO3-. N.  El equipo utilizado es el espectrofotometro UV – visible.  Los instrumentos de doble haz hacen medidas de forma prácticamente continua de la luz que atraviesa las celdas de la muestra y de la referencia.. Laboratorio de Análisis Instrumental . Shimadzu 1700 de doble haz (puede leer a la vez dos celdas). 55 mgNO3-/L en Europa7 y 45 mgNO3-/L en Argentina. la concentración del mismo a sido limitada en aguas de bebida a 45 mgNO3-/L en Estados Unidos. Por tanto de esto se concluyó que el “Agua Vida” es apta para el consumo humano.son por debajo de lo permitido de 50 ppm según la OMS.CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES  Las sustancias absorben la luz que posse una longitud de onda caracteristica para dicha sustancia y una fuente de luz de deuterio.  La sensibilidad del instrumento empleado permite la identificacion de sustancias que pueden estar presentes como trazas.  En este metodo es necesario ser muy exactos en las mediciones porque se trata de cantidades muy pequeñas.  Para evitar los efectos adversos del nitrato sobre la salud humana.

gob. West D. Mc. Analisis Instrumental Edit.son por debajo de lo permitido de 50 ppm según la OMS.  La boca de la pipeta debe estar seca para que el líquido contenido baje con facilidad. N.  Los resultados obtenidos de la concentración de NO3-.mx/sma/download/archivos/secofi_nmx_aa_079_scfi_2001.htm Laboratorio de Análisis Instrumental .sma.BIBLIOGRAFIA  Skoog D. Por tanto de esto se concluyó que el “Agua Vida” es apta para el consumo humano. No tocar con los dedos las paredes de las celdas por donde debe pasar la luz.pdf  http://www..advmex.com/espectrofotometro_uv. las huellas dactilares dispersan y absorben la luz es por eso que se coge de las partes opacas. 10. Graw Hill Mexico 1992  http://www.df.

 http://www.pdf#search=%22determinacion%20de%20nitratos%20en%20agua %20mediante%20espectrofotometria%22  http://www.agua-mineral.scielo.net/592/manantial-de-agua-sin-nitratos/ Laboratorio de Análisis Instrumental .br  http://www.edu.udistrital.co/comunidad/grupos/fluoreciencia/capitulos_fluoreciencia/ca laguas_cap14.