ÍNDICE DE CONTENIDO

GENERALIDADES DE LA MICROBIOLOGÍA ____________________________ 4
Membrana citoplasmática bacteriana _________________________________________ 4 Pared bacteriana___________________________________________________________ 4 Endospora bacteriana ______________________________________________________ 4 Metabolismo microbiano ____________________________________________________ 5 Crecimiento microbiano_____________________________________________________ 5

INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL __________________ 6 MICROORGANISMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL _______________________ 7 MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES ______________________________________________________ 9 BÚSQUEDA DE NUEVOS METABOLITOS ______________________________ 10 MEJORA DE CEPAS DE INTERÉS INDUSTRIAL ________________________ 12 SUSTRATOS PARAMICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL _____________________ 15
Sustratos usados como fuentes de carbono ____________________________________ 15 Sustratos usados como fuentes de nitrógeno ___________________________________ 16

MÉTODOS DE FERMENTACIÓN A GRAN ESCALA______________________ 17
Modos de operación del biorreactor __________________________________________ 17 Biorreactores_____________________________________________________________ 17 Tipos de biorreactores _____________________________________________________ 18 Instrumentación y control del proceso ________________________________________ 18 Escalado_________________________________________________________________ 19 Técnicas de esterilización___________________________________________________ 19
Del medio de cultivo _____________________________________________________________19 Del aire de fermentación __________________________________________________________19

Proceso fermentativo ______________________________________________________ 19

RECUPERACIÓN DE PRODUCTOS FINALES ___________________________ 20
Separación de las células ___________________________________________________ 20
Filtración ______________________________________________________________________20 Centrifugación __________________________________________________________________20

Rotura celular ____________________________________________________________ 20 Aislamiento preliminar ____________________________________________________ 21 Purificación ______________________________________________________________ 21 Secado __________________________________________________________________ 21 Recuperación de productos de ADN recombinante______________________________ 21 Rendimiento _____________________________________________________________ 22

PRODUCCIÓN DE ALCOHOLES ______________________________________ 23

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Procesos de producción de etanol ____________________________________________ 23
Preparación del sustrato___________________________________________________________23 Fermentación ___________________________________________________________________23 Purificación ____________________________________________________________________24

Producción de acetona/butanol ______________________________________________ 24

PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS _______________________________ 25
Ácido cítrico _____________________________________________________________ 25
Medio nutricional _______________________________________________________________25 Procesos de producción ___________________________________________________________26 Procesos en superficie (o koji, del japonés). _________________________________________26 Procesos sumergidos o en profundidad. ____________________________________________26 Purificación ____________________________________________________________________26

Ácido acético _____________________________________________________________ 26
Producción_____________________________________________________________________27 Método Orleans _______________________________________________________________27 Método alemán _______________________________________________________________27 Generadores por goteo o reactor Frigs______________________________________________27 Procesos sumergidos ___________________________________________________________27

Ácido láctico _____________________________________________________________ 27 Ácido málico _____________________________________________________________ 27 Ácido fumárico ___________________________________________________________ 28

PRODUCCIÓN DE NUCLEÓTIDOS, AMINOÁCIDOS Y VITAMINAS________ 29
Nucleótidos ______________________________________________________________ 29
Hidrólisis enzimática del ARN._____________________________________________________29 Hidrólisis química del ARN. _______________________________________________________29 Fermentación del IMP. ___________________________________________________________29 Fermentación del GMP.___________________________________________________________29 Síntesis indirecta:______________________________________________________________29 Síntesis directa________________________________________________________________30

Aminoácidos _____________________________________________________________ 30
Glutamato _____________________________________________________________________30 Otros aminoácidos _______________________________________________________________30

Vitaminas________________________________________________________________ 30
Riboflavina (B2)_________________________________________________________________31 Cobalamina (B12)________________________________________________________________31 Ácido ascórbico (C)______________________________________________________________31

PRODUCCIÓN DE ENZIMAS _________________________________________ 32
Producción comercial ______________________________________________________ 32
Selección de cepas_______________________________________________________________32 Procesos de producción ___________________________________________________________32 Sobre sustrato sólido (procesos Koji) ______________________________________________32 Procesos en biorreactores _______________________________________________________32 Aplicaciones ___________________________________________________________________33 Detergentes.__________________________________________________________________33 Producción de quesos. __________________________________________________________33 Procesado del almidón__________________________________________________________33 Industria papelera. _____________________________________________________________33 Elaboración de zumos.__________________________________________________________33 Elaboración de vinos. __________________________________________________________33 Industria textil ________________________________________________________________34 Síntesis orgánica.______________________________________________________________34

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PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS __________________ 35
Antibióticos β-lactámicos ___________________________________________________ 35
Penicilinas _____________________________________________________________________35 Cefalosporinas __________________________________________________________________36 Nuevos productos _______________________________________________________________36

Antibióticos peptídicos _____________________________________________________ 36 Antibióticos carbohidratados _______________________________________________ 36 Antibióticos macrolídicos___________________________________________________ 37 Tetraciclinas _____________________________________________________________ 37 Antibióticos aromáticos ____________________________________________________ 37
Cloranfenicol ___________________________________________________________________37 Griseofulvina ___________________________________________________________________37

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE VACUNAS _______________________ 38
Métodos de producción ____________________________________________________ 38
Sistemas tradicionales ____________________________________________________________38 Vacunas de subunidades (técnicas de ADN recombinante) _______________________________38 Vacunas peptídicas ______________________________________________________________39

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE PROTEÍNAS TERAPÉUTICAS _____ 40
DNAsa __________________________________________________________________ 40 Eritropoietina (EPO) ______________________________________________________ 40 Somatropina _____________________________________________________________ 40 Insulina _________________________________________________________________ 40 Interferón _______________________________________________________________ 41 Interleuquinas ____________________________________________________________ 41 Activador del tejido plasminógeno ___________________________________________ 41 Colágeno ________________________________________________________________ 41

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE SCP ____________________________ 42
Producción de proteína unicelular ___________________________________________ 42
Sustratos ______________________________________________________________________42 Procesos de producción ___________________________________________________________43

Producción de levadura para panadería ______________________________________ 43

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GENERALIDADES DE LA MICROBIOLOGÍA
Microorganismo es todo organismo vivo que no es visible a simple vista: bacterias, algas, hongos, protozoos,... Se subdividen según los tipos de estructura celular: • Procariotas, que son las bacterias y arqueas (consideradas como bacterias simples y, por tanto, las menos evolucionadas). • Eucariotas, que son hongos, levaduras, protozoos, algas,... Los virus merecen una mención aparte dentro de esta clasificación, ya que no pueden ser considerados seres vivos en el sentido estricto (no poseen metabolismo, son incapaces de autorreplicarse, etc.) La principal diferencia entre procariotas y eucariotas es que los procariotas, a diferencia de los eucariotas, no poseen ninguna estructura nucleada que agrupe el material genético en una sola región, sino que éste se halla disperso por el citoplasma bacteriano. Además, los procariotas poseen una menor información genética y carecen de estructuras membranosas que delimiten orgánulos internos de funciones diferenciadas. Así, constan de una única macroestructura que desempeña múltiples funciones.

Membrana citoplasmática bacteriana
La estructura y composición son casi las mismas que en el caso eucariota. Sus funciones son: • Transporte de moléculas, efectuado por proteínas transportadoras embebidas en la membrana. • Contiene la cadena de transporte electrónico, que permite la fosforilación oxidativa y la producción de ATP. • Interviene en fenómenos de quimiotaxis (movimiento inducido por ciertos compuestos químicos, llamados quimioefectores), debido a que contiene receptores para los quimioefectores. • Juega un papel fundamental en la biosíntesis de moléculas como lípidos o polisacáridos. • Excreta proteínas que cumplen determinadas funciones en el exterior celular.

Pared bacteriana
Su principal función es dar rigidez a la bacteria, previniendo efectos osmóticos adversos, como la plasmólisis, además de preservarla de otras condiciones adversas. De hecho, una bacteria sin pared sólo puede sobrevivir en un medio isotónico con su citoplasma. La pared celular es una estructura tridimensional basada en la repetición de dos azúcares (Nacetilglucosamida y N-acetilmurano –NAG y NAM-), así como de un tetrapéptido. La principal diferenciación aplicada a las bacterias atiende al tipo de pared bacteriana: grampositivas o gramnegativas, o sea, sensibles o no a la tinción de Gram. En bacterias grampositivas, la estructura repetitiva es de gran tamaño y compacta, con pocas moléculas de otro tipo embebidas en la pared; mientras que en las gramnegativas es de tamaño notablemente menor, poseen muchas moléculas embebidas y presentan un denominado espacio periplásmico entre la pared bacteriana y la membrana plasmática. Así, una pared gramnegativa posee más funciones que una grampositiva.

Endospora bacteriana
Ciertas bacterias poseen dos estados en su ciclo vital: como célula vegetativa y como espora, no dándose ambos estados simultáneamente. El proceso de esporulación (formación de la espora) es bastante largo (810 horas). A diferencia con otras formas de vida, la espora no es un medio de reproducción, sino un cambio fisiológico. Las características más importantes de la espora son: - Presentan una mayor resistencia a condiciones extremas: altas temperaturas, compuestos químicos, desecación, radiaciones,... - Presenta una actividad metabólica casi nula. - Presenta una serie de capas de recubrimiento características: el exosporio, 3 cubiertas y el córtex. El exosporio y las cubiertas son proteicas, mientras que la otra es similar a la pared celular. - Prácticamente carece de agua, lo que le dota de resistencia térmica. - Contienen ácido dipicolínico, que asociado a iones calcio, permite mantener la estructura. Esta sustancia es típica de la endospora, ya que no se presenta en la célula vegetativa.

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de modo que va disminuyendo el número total de células hasta alcanzar un mínimo aproximadamente constante. o acíclica para organismos que sí lo producen. 5 . Este tiempo es variable según la especie y los factores ambientales y nutricionales. Así. causado por la aparición de condiciones adversas en el medio. De este modo.Fase Lag. - Metabolismo microbiano La diversidad en cuanto a rutas metabólicas entre las bacterias es enorme. Independientemente del tiempo de generación.Fase de muerte. disminuyen los daños causados en éste por las radiaciones ultravioletas y disminuyen las mutaciones.Contiene pequeñas proteínas ácido-solubles (SASP’s).Fase de crecimiento. El equilibrio entre células que nacen y células que mueren se rompe. bien sea cíclica para organismos que no producen oxígeno. hasta alcanzarse un equilibrio entre el número de células que nacen y las que mueren. Cuando finaliza. por procesos oxidativos parciales. y representa el tiempo que tardan los microorganismos en adaptarse a las condiciones del medio. ya que dota a las bacterias de mayor resistencia a los tratamientos. Crecimiento microbiano Se refiere al aumento del número de células de un cultivo. Consiste en el periodo de mayor actividad de las células. puede mantenerse por un tiempo ilimitado. por ejemplo. la fuente de carbono puede ser compuestos inorgánicos (autotrofos) u orgánicos (heterotrofos). pueden obtener la energía de la luz (fototrofos) o de reacciones de ciertos compuestos químicos (litótrofos o quimiotrofos). quimioautotrofos o quimioheterotrofos (son muy raros los microorganismos fotoheterotrofos). por lo que. Asimismo. ya que son ciertas bacterias los únicos organismos capaces de efectuar las reacciones que permiten fijar el nitrógeno atmosférico y convertirlo en las formas en que pueden asimilarlo el resto de los seres vivos. . los microorganismos pueden ser fotoautotrofos. • Los organismos fermentativos obtienen el ATP a través de fosforilaciones a nivel de sustrato. . así como el paulatino descenso de los nutrientes del mismo. la célula está preparada para desarrollar su actividad y multiplicarse utilizando los recursos que el medio le ofrece. Representa un tiempo variable dependiente de las condiciones del medio. ya sean aerobios o anaerobios. El estado de espora.En la industria. . de retardo o de adaptación.En la rama sanitaria. dividiéndose en cuatro fases: . • Los organismos respiratorios obtienen el ATP por fosforilación oxidativa. ya que dura sólo unos minutos). la esterilización debe realizarse en condiciones más críticas. Existe un metabolismo muy importante. Este proceso se caracteriza por el tiempo de generación. hasta que un medio favorable induzca la germinación de la espora (proceso muy rápido. que unidas al material genético. . así como una explosión demográfica debido a las condiciones favorables del medio. por lo que el número de células permanece aproximadamente constante. Debido a la acumulación de excreciones tóxicas al medio por la gran población microbiana. el del nitrógeno. La esporulación presenta dos aplicaciones fundamentales: . que es el necesario para que la población se duplique. se usan para sintetizar productos de interés. La forma de obtención del ATP por parte de los microorganismos es muy variada: • los organismos fotosintéticos obtienen el ATP por fosforilación.Fase estacionaria. las células van muriendo. la curva de crecimiento microbiano es siempre la misma.

• La nueva biotecnología. Sin embargo. que se basa en técnicas de ingeniería genética para obtener nuevos productos. Esto permite que. etc. destacan dos ramas principales: • La Biotecnología tradicional. por tecnologías de ADN recombinante. ya que la modificación del material genético de los microorganismos puede conducir a consecuencias inesperadas y potencialmente peligrosas. debido al relativamente pequeño tamaño de su ADN. entre los que se puede llevar a cabo casi cualquier reacción metabólica. La biotecnología. para los microorganismos. • Sencilla manipulación genética. 6 . Por ello.INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL Desde tiempos ancestrales se han obtenido productos en cuya fabricación han intervenido los microorganismos. La Biotecnología surge a finales de los 70 como punto de unión de diversas ciencias con el fin común de aprovechar los organismos vivos y sus cualidades para obtener beneficios económicos. Sin embargo. las cepas industriales pueden ser muy diferentes de las salvajes originales. Así. o incluso incorporar a los microorganismos de la maquinaria enzimática suficiente como para producir sustancias ajenas a ellos. sin embargo. Los primeros procesos industriales que aprovecharon la acción de microorganismos fueron procesos de obtención de alcohol y ácidos láctico y cítrico. vino. aunque no se haya tenido conciencia de ello. que se basa en la mejora de procesos ya establecidos. La primera prueba de la existencia de microorganismos se debe a los "animálculos” que Leuweenhoek observó gracias a su sistema de lentes en el siglo XVIII. supone un problema ético y legal importante. por lo general. La Primera Guerra Mundial potenció la fabricación de otros productos necesarios para la guerra por vía microbiana. y deben patentarse en alguna de las colecciones de cultivo existentes por el mundo. además de que facilita la separación del producto). y a pesar de su abundancia. o sea. como glicerol o acetona. dado que se desconocen sus efectos a largo plazo. es en la Segunda Guerra Mundial donde la necesidad de antibióticos. así como los cultivos en continuo y el conocimiento en procesos anaerobios. • Toman como base para su crecimiento sustratos económicos. las necesidades industriales son demasiado elevadas. Se aplica fundamentalmente a microorganismos. no fueron estudiados hasta el siglo siguiente por Pasteur. por lo que la búsqueda de una determinada especie con unas ciertas características es bastante compleja. entre otros. Sin embargo. se pueda mejorar la producción. a principios del s. Por ello. debido a sus peculiares características: • Elevada tasa de desarrollo. También con estas técnicas se pueden obtener cepas capaces de degradar productos xenobióticos (productos no degradables de origen humano). en los años 70 se perfeccionan las técnicas de inmovilización de células para aumentar el rendimiento económico de los cultivos (en medios sólidos. o bien para obtener productos ya conocidos por vías alternativas. • Contemplan una amplia diversidad metabólica. ácidos orgánicos o antibióticos. Es por ello que las cepas salvajes son sometidas a diversas alteraciones con el fin de inculcar a éstas las características buscadas. que en poco tiempo de cultivo son capaces de iniciar la producción al máximo de sus capacidades. lo que supone un alto número posible de productos y sustratos. da el impulso definitivo al estudio de las capacidades industriales de los microorganismos. la vida media de los cultivos es mucho mayor. Existe una amplísima diversidad de microorganismos. la legislación impone unas restrictivas medidas de seguridad con el fin de impedir la liberación de cepas modificadas al medio ambiente. descubiertos poco antes. como la producción de etanol. como hormonas humanas. Dentro de la biotecnología. como ocurría con la fabricación de queso. XX. sólo unas pocas presentan actualmente interés industrial. entre los que destacan los Pseudomonas. yogur. Además. cerveza.

Son estables genéticamente en el tiempo. Por lo general. de una especie pura. como Esclerichia coli. de Levaduras gran importancia en zonas con carencias de alimentos). cítrico y filamentosos láctico). Lácticos Embutidos y conservas Bacterias lácticas (el Probióticos (productos Bacterias grupo más importante) de efectos beneficiosos para la salud) Ácido láctico Saccharomyces cerevisiae Kluyveromyces fragilis Aspergillus niger (sobre todo en síntesis de ácidos orgánicos) Penicillium notatum 7 . para minimizar los riesgos en caso de que alguna célula viva escapara del fermentador al medio ambiente o al consumo. como melazas. tales como ciertas hormonas. Las cepas utilizadas han de carecer de carácter patógeno. que por lo general son residuos de otras industrias. filtraciones o centrifugaciones. son bastante más fáciles de manipular que otras. Setas. Síntesis de antibióticos. además de que facilita su conservación al hacerlas más resistentes.MICROORGANISMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL La principal característica de los microorganismos es su elevada razón superficie / volumen (debido a su reducido tamaño). son especies capaces de producir esporulación. esto presenta a su vez un inconveniente: son sustratos complejos y difíciles de metabolizar. Los principales usos de las distintas clases de microorganismos son: Industria panadera Bebidas alcohólicas Fuente de vitaminas y de proteína unicelular (SCP. como pectinasas (útiles para la elaboración de zumos). Es preferible que el tamaño de las células sea el mayor posible. Síntesis de proteínas de origen no microbiano. ciertas especies. Pueden crecer en medios líquidos de bajo coste. lo que requiere una modificación genética adicional de las cepas. Dado que las condiciones del medio de cultivo son variables (por tratarse de cultivos a gran escala). como la penicilina. Son de rápido crecimiento. a pesar de que hayan sido modificadas genéticamente en el proceso de obtención de la cepa industrial. Así. las cepas han de ser capaces de crecer aunque las condiciones no sean las óptimas ideales. sin presencia de otras células de otras especies diferentes). lo que permite iniciar la producción en periodos cortos de tiempo. más facilitada está la separación. con diversos fines terapéuticos. Hongos Síntesis de ácidos orgánicos (sobre todo. Deben ser más o menos fáciles de manipular genéticamente. Sin embargo. Esta característica es importante. por lo general. lo que permite una mayor facilidad de obtención de las cepas industriales buscadas. Otras características importantes de los microorganismos usados en industria son: Disponibilidad de cultivos axénicos (o sea. Síntesis de alcaloides. una mayor tasa metabólica. derivados de soja y ciertos quesos Producción de diversas enzimas. lo que facilita su manejo e inoculación. Esto se debe a que los procesos de separación son. son frecuentes las mutaciones. ya que una vez que se altera el material genético. en definitiva. Esto supone una gran capacidad de absorción y sintetización de sustancias. por lo que cuanto mayor sea el tamaño. importante complemento dietético de bajo coste. ya que esto facilita la separación de las células del producto.

presentes en suelos) Bacillus - Antibióticos Enzimas Inhibidores enzimáticos Corinebacterias. utilizadas en industria quesera y en síntesis de potenciadores de sabor Clostridium (organismos estrictamente anaerobios) Antibióticos peptídicos Bacillus thuringiensis Enzimas proteasas Insecticidas Síntesis de disolventes Degradación de sustratos complejos en combinación con otras especies de microorganismos 8 .Actinomicetos (similares a hongos por morfología y tipo de crecimiento.

Para esporas de mohos.Para mohos. se usa la genética. junto con la congelación. ya que presenta tres grandes inconvenientes: El tiempo de persistencia de las células es. Se usan congeladores normales (unos –30 ºC). Al igual que antes. Consiste en el paso de un inóculo de un cultivo agotado en otro fresco (preferentemente. se usan medios de congelación poco salinos. al finalizar el proceso. Desecación. Actinomicetos y arena estéril o silica gel. se sella el cultivo y se conserva en refrigeración. Este método. Subcultivo Desecación Congelación Liofilización Escasa supervivencia y Saccharomyces . . reduciendo así el metabolismo.En tierra o arena da buenos resultados en clostridios. por lo general. El proceso se produce a temperatura ambiente una vez añadidos los protectores.Para esporas de mohos estabilidad genética. Esto provocará la pérdida de agua de la célula por ósmosis. Se puede producir contaminación fácilmente. congelación en . No existe un único método.). se requiere la adopción de técnicas de conservación apropiadas que permitan preservar sus propiedades. la temperatura de congelación varía. se usan dos técnicas: Adición de compuestos protectores. líquido estéril. da resultados nitrógeno de una intermedios en precedida actinomicetos y desecación. actinomicetos. Para evitar la formación de cristales en el interior de las células. Para evitarlo. En él. sólido). Se hace una congelación previa antes de pasar al liofilizador. pero también es mayor el coste. el agua se sublimará por bajada de presión y el cultivo microbiano queda en el seno de una matriz porosa protectora (que por lo general es leche descremada o sacarosa). se sella a vacío. y alta estabilidad genética. Consiste en la eliminación de agua del microorganismo.MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN MICROORGANISMOS INDUSTRIALES DE Dado el alto coste de obtención de las cepas industriales. El inconveniente de este método es el gran aumento de la concentración de sales en el proceso de descongelación. etc. aumenta el riesgo de variabilidad genética en la cepa. Consiste en pequeños discos gelatinosos que se impregnan con el cultivo líquido y se secan por un proceso activo (temperatura. Según la técnica empleada. nitrógeno líquido. ya que cada especie presenta sus preferencias de conservación: Subcultivo. bastante bajo. Cuanto más baja sea la temperatura. de modo que se formen primero los cristales en el medio exterior. Para evitar que el proceso de desecación dañe las células. Un método alternativo es el del L-secado. dada la alta frecuencia de manipulación. Liofilización. . como dimetilsulfóxido.En bacterias lácticas. y también . hay una de supervivencia y alta supervivencia aceptable alta variabilidad cerevisiae. a la que las células pueden ser muy vulnerables.Para levaduras. se añaden compuestos protectores. 50 % . Congelación lenta. Este tiempo puede aumentarse por refrigeración a unos 4 ºC. No es la más apropiada para la industria. clostridios 9 . . Finalizado el proceso. Debido a la manipulación continua. Actinomicetos y clostridios. Debido a las características del método.Para levaduras. da buenos resultados suspensiones en tierra. que pueden producir daños en sus estructuras. industriales (-70 ºC) o nitrógeno líquido (hasta –200 ºC). Congelación. mejor es la conservación. se sella y se lleva a refrigeración. es el más valorado. ya que permite unos tiempos de conservación bastante altos.

El potencial del mundo microbiano en este aspecto es enorme: sólo el 1% aproximadamente de las especies microbianas es conocido con cierta profundidad como para conocer sus intereses potenciales. en función del microorganismo al que se pretenda cambiar el material genético. que permiten separar las células que nos interesan del resto del cultivo. y esperar su acción sobre las células. La creación de los nuevos genomas puede hacerse por diversos métodos: Mutagénesis. Así. y permite obtener cepas con nuevas características o con características propias mejoradas y potenciadas. la selección o screening consiste en la aplicación de procedimientos altamente selectivos para detectar y aislar exclusivamente las células o metabolitos de interés a partir de una gran población de microorganismos distintos. Escrutinio al azar. Consiste en la observación de alguna característica secundaria asociada a la actividad buscada y fácilmente observable. Selección de cepas mejoradas genéticamente. no lo hacen todas de la forma deseada. Para este proceso. Se distinguen varios métodos. 2. Una vez hallado el microorganismo en su hábitat. en discos separados. Es la más tradicional. Así. Existen dos métodos de separación de cepas: a. los mecanismos de degradación de la lactosa. hay que mejorarla y preservarla de futuras alteraciones. La creación de nuevos genomas microbianos utiliza técnicas de ingeniería genética. Por ello. con rendimientos más elevados y dotando a los productos de ciertas características importantes.BÚSQUEDA DE NUEVOS METABOLITOS Es costosa la búsqueda de nuevos productos o microorganismos capaces de producirlos. El problema de esta técnica es que la mutación producida es al azar. Requiere realizar ensayos de cultivo de todas y cada una de las células tratadas. al menos. Presenta dos problemas principales: es muy complicado identificar el producto o cepa de interés. Consiste en obtener la cepa de su hábitat común en la naturaleza. podremos ir eliminando las células no modificadas. lo que supone un alto gasto económico y temporal. b. Este gasto puede disminuirse si se efectúa la siembra sobre discos de agar. como isómeros puros. cuando sometemos una cepa salvaje a mejora genética para obtener la cepa optimizada para su uso industrial. etc. Reproducción sexual. Escrutinio racional. Consiste en la adición de una agente mutágeno. Reproducción asexual. Selección ambiental. para lo que hay que pasar a cultivos líquidos individuales). y se favorece cuando hay coincidencias en la secuencia (se facilita el trabajo de las enzimas de restricción usadas en estos procesos. es limitar la mutación al gen que queremos modificar. para poder separar las que presenten la cualidad buscada (aunque no sea posible analizar cuantitativamente dicha característica. por ejemplo. A través de factores ambientales a los que sean sensibles las células que no posean la característica buscada. (mecanismos que introducen material Consiste en la introducción de DNA extraño en la célula a través Transducción genético extraño en de su infección por un virus bacteriano. lo cual no es fácil de conseguir. debido a que es una fuente natural de variabilidad genética.): 1. es necesario establecer los métodos de separación apropiados para obtener la cepa de interés de forma rápida y con la mayor selectividad posible. Es una técnica aplicable a cualquier tipo de microorganismo. 10 . en la misma placa Petri y simultáneamente. como resistencia a antibióticos o degradación de compuestos cromógenos (como por ejemplo. Estos procesos requieren que el DNA introducido y el celular sean de estructuras similares. Sin embargo. existen diversas técnicas de selección (las dos primeras para seleccionar un microorganismo concreto y las otras dos para obtener un nuevo producto o una vía alternativa de síntesis de un producto ya conocido. y las que lo siguen. lo que permite cultivar varias células. por lo que puede darse cualquier tipo de variación sobre cualquier gen (o sobre varios de ellos). por lo que puede no darse si quiera la característica buscada. Sería la más adecuada. y una vez obtenida la cepa aislada. que son las que usan bordes complementarios en los fragmentos unidos). Dichas técnicas son: Consiste en la penetración de DNA libre presente en el medio en Bacterias Transformación el interior celular. lo que interesa. por lo que sólo puede aplicarse a ciertos hongos. Por definición. no todas las células sufren el proceso de mutación. a los que se pueden aplicar compuestos coloreados). ya sean especies nuevas o especies modificadas. es el medio de reproducción menos frecuente entre los microorganismos. es necesario emplear programas de selección.

son células mucho más sensibles. para poder mejorarlo y aumentar la producción. Así. puede haber errores. Biotransformación. más complejos. dando lugar a una nueva característica de la especie. que disminuyan dicha repulsión.la célula) Consiste en la formación de un puente físico entre dos bacterias (una de ellas debe tener pili para que esto sea posible). Es una técnica muy rápida y de buenos resultados. lo que facilita la entrada de DNA. se transfieren plásmidos entre las dos células. También se material genético favorece dicho proceso adicionando Ca2+. 1. pero como en ocasiones los plásmidos están fusionados con el cromosoma Conjugación bacteriano. sobre todo a fenómenos osmóticos. Las células producen dos tipos de compuestos químicos: metabolitos primarios y secundarios. el metabolismo secundario es un campo de pruebas de la célula. • En general. 2. al producirse la escisión del plásmido. De este modo. de modo que las células pasan al llamado estado competente (mayor disposición a la entrada de DNA). con lo que (para hongos) aparecen temporalmente poros en las cubiertas celulares. La teoría más aceptada sobre el origen del metabolismo secundario es la de Zähner. por lo general relacionadas entre sí. Fusión de Para que los protoplastos se fusionen. a través de la cual se convierte en producto mejorado. cuando una determinada sustancia producida por dicho metabolismo resulta beneficiosa para la célula. Las principales características de los metabolitos secundarios son: • Suelen ser producidos en exclusiva por un número limitado de especies. por lo que hay que cuidar que el trabajo sea en medios isotónicos. Consiste en sintetizar un producto químico para que luego el microorganismo efectúe alguna reacción enzimática sobre él y así transformarlo en producto. modificar su como etilenglicol. En general. se mantiene la información genética que define la ruta metabólica que la origina. con lisozimas). aunque en determinadas condiciones la síntesis de estas sustancias le confiera algún beneficio. por lo que se hace necesario añadir agentes. ya que dicha pared es la principal barrera al paso de DNA. Se obtienen por procesos químicos o enzimáticos (más concretamente. mientras que los secundarios son aquellos que la célula produce y no son vitales para que ella realice sus funciones vitales. Consiste en usar un metabolito microbiano como precursor de una reacción química ajena al microorganismo. Hongos Recombinación Se debe al proceso natural de reproducción sexual que siguen filamentosos mitótica estos microorganismos. cuando un metabolito secundario otorga a una célula una gran ventaja sobre otras que no lo tienen. los productos de interés industrial son metabolitos secundarios. por lo que es importante conocer los detalles del proceso de síntesis. por lo general. Esto genera mutaciones en las dos células por recombinación del DNA. Se aplican Electroporación pequeñas y breves corrientes eléctricas al cultivo. Los primarios son aquellos que la célula produce porque son imprescindibles para efectuar sus funciones vitales. Modificación química. Según ésta. Sin embargo. • Las condiciones ambientales determinan mucho su síntesis. Los protoplastos son células sin pared celular. 11 . hay que disminuir las Especies con gran protoplastos repulsiones electrostáticas entre sus membranas citoplasmáticas dificultad para (con carga negativa). En general. • Algunos metabolitos secundarios se obtienen como una familia de sustancias estrechamente relacionadas. intercambiándose fragmentos del DNA bacteriano entre las bacterias. las rutas metabólicas que los sintetizan están reguladas por mecanismos distintos a los de los metabolitos primarios y son. éste pasa a ser un metabolito primario.

es necesario conocer las posibilidades de regulación de la ruta que lo produce. Por ello. optimizarlo al máximo). entonces puede darse de varias formas: i. debido a que posiblemente se alteren otras características celulares que hacen disminuir el rendimiento posible. se alteran características originales que afectaban a la eficiencia del proceso de fermentación. En el caso de la inhibición acumulativa. Esto se debe a que. mediante las técnicas de DNA recombinante. que están reguladas de forma independiente.Unión de diferentes alelos que generan cantidades crecientes de metabolito. sin embargo.Sustitución de alelos mutantes desfavorables tras diversos ciclos de mutación. • Adecuar las características del microorganismo a las condiciones ambientales del lugar donde se lleve a cabo la fermentación: requerimientos de oxígeno (ya que. • Obtención de microorganismos capaces de sintetizar productos de interés biológico que no sean de origen microbiano. El producto final de cada ruta “hija” actúa como inhibidor de la primera enzima que ya no efectúa una reacción común al resto de las rutas relacionadas. La primera etapa de la parte común de la vía metabólica está regulada por distintas isoenzimas. obtiene resultados inferiores a los teóricos posibles. la inhibición sobre la ruta se produce también por todos los productos finales. En el caso de inhibición multivalente. Esto. Cuando la ruta es ramificada. más complicada será la regulación y control del proceso).MEJORA DE CEPAS DE INTERÉS INDUSTRIAL No todas las especies presentan la misma disposición a la modificación genética. . a su vez. más caros y complejos son los equipos. La dificultad de este proceso depende de la complejidad de modificar los genes que rigen el producto. para poder cruzarlas posteriormente con las células alteradas para recuperar las características originales. por lo que interesa disminuir el consumo de oxígeno o. cuantos más genes estén implicados. Además de alterar los mecanismos celulares para la obtención del producto que nos interese. por lo general. en ocasiones. . Así. disminuir el tiempo de fermentación (permite efectuar una producción mayor en menos tiempo) o aumentar la capacidad del microorganismo para nutrirse satisfactoriamente de un sustrato más barato. iv. mejorando los resultados de la mutación. mayor es el riesgo de que la mutación degenere. al menos. cuanto mayor sea el requerimiento de oxígeno. ii. por recombinación con células de la cepa original. • Eliminar la síntesis de compuestos colaterales para aumentar la pureza del producto. Dado que cuanto más se manipula un microorganismo mutado. disminuir la producción de éstos. La recombinación es el proceso que permite aumentar la variabilidad genética por medio de la unión de la información genética contenida en dos genotipos. y más dispersos se hallen en el genoma. de las primeras de la ruta) una vez que alcanza cierta concentración en la ruta. o a lo sumo. para facilitar su separación. Regulación de la actividad enzimática. los microorganismos utilizados son aerobios. a través de varios mecanismos distintos: . Esto se consigue mediante: . Consiste en que uno de los productos de la ruta metabólica actúa como inhibidor de una de las enzimas (por lo general. La regulación a este nivel puede producirse. iii. pero no se requiere que 12 . influyentes todos en la economía del proceso. en función de la especie de microorganismo y la complejidad de la información genética requerida por la característica que queremos incorporar al microorganismo (número y tipo de genes.Retroinhibición. la inhibición de la ruta se consigue sólo cuando todos los productos finales en los que desemboca alcanzan la concentración necesaria. son: • Incrementar la baja producción que se obtiene a partir de cepas salvajes. es necesario mantener células mutadas originales en reserva sin utilizar. Las principales razones que llevan a realizar los procesos de mejora genética. Estos mecanismos pueden ser: 1. dichas características pueden recuperarse.Recombinación con cepas salvajes que suelen tener mejores características fermentativas. al alterar las características que nos interesan.

.La inducción consiste en que el propio sustrato actúa como activador del sistema genético que codifica la enzima. por lo general.E. pero ésta no es capaz de usarlo como sustrato para su reacción. vitaminas.Regulatorios. Para evitar la detención del crecimiento celular. . Los genes implicados son: . Hay tres procesos para ello: . Regulación de la síntesis de enzimas. 4. Consiste en la degradación de enzimas inducibles por medio de la acción de otras proteasas específicas.- todos alcancen la concentración necesaria para detener la ruta. en células en la etapa de crecimiento estacionario. .Degradación de enzimas. Exceso de producción de metabolitos primarios. el producto de interés debe ser anterior en la ruta al punto de inserción del antimetabolito.Obtención de mutantes resistentes a antimetabolitos. . a enzimas inducibles. por determinadas circunstancias. Consiste en la activación o inhibición de una enzima debido a cambios conformacionales reversibles causados por la unión o no de un determinado grupo químico o molécula a la enzima.5ADP AMP + ADP + ATP Cuando el valor de este cociente es próximo a 1. a las rutas de síntesis de aminoácidos. a metabolitos primarios. 13 . por lo que han de suministrarse en el medio de cultivo. Regulación y superproducción de metabolitos secundarios. por lo que se usan para aumentar su producción.De resistencia. hemos de añadir el compuesto eliminado al medio de cultivo en cantidad suficiente como para que no se detenga el crecimiento celular pero tampoco la ruta deseada. . Así. . que están implicados en el metabolismo primario. pero pueden tener ciertos efectos laterales sobre el secundario. = ATP + 0. Asimismo.Modificación de enzimas. Un antimetabolito es una sustancia de estructura tan similar a la de un metabolito que es capaz de unirse a la enzima. sobre todo.La atenuación actúa en conjunto con los 2 sistemas anteriores. Carga energética. sino sólo cuando. . que dan resistencia a la célula frente a la acción del metabolito secundario (en el caso de que éste presentara actividad antimicrobiana). que codifican las enzimas implicadas en la síntesis del compuesto. se inhiben las rutas anabólicas y se activan las que lo producen (catabólicas).. A pesar de ello.. Existen tres mecanismos fundamentales de regulación: .De permeabilidad. destacando la obtención de cepas auxotrofas y la eliminación de compuestos colaterales.Estructurales.). Así. ya que están controlados por cuatro tipos de genes. que controlan el transporte de sustancias hacia y desde la célula. Un organismo auxotrofo para un determinado compuesto es aquel que no es capaz de sintetizar un producto que requiere para realizar sus funciones (algunos aminoácidos. se regulan por los mismos mecanismos que los primarios. cuando el valor se aproxima a 0. 2. indica una gran cantidad de formas energéticas del ATP.Eliminación de la retroalimentación: obtención de mutantes auxotrofos. Así. Estos metabolitos son más complejos de regular. sobre todo. Controla la síntesis de enzima modificando el ARNm que daría lugar a su síntesis. Este proceso permite que un producto que no es siempre requerido por la célula salvo cuando aparece el sustrato en el medio esté siempre activo. Afecta. . Este método de regulación aparece. Las enzimas inducibles son aquellas que no están siempre presentes en la célula.Convertir una enzima inducible en constitutiva.La represión consiste en la detención de la transcripción de enzima por la acción inhibitoria del producto final que genera. sino que el proceso es más gradual. Los procesos de regulación anteriores afectan. . 3. si eliminamos la capacidad de la célula para sintetizar una sustancia que actúa como inhibidor del proceso que nos interesa. Afecta. impedimos la inhibición de la ruta. se necesitan en un momento dado o aparece en la célula el sustrato sobre el que actúan. podemos hacer que la célula no requiera el producto final de la ruta o bien dotarla de capacidad para actuar sobre el antimetabolito. por lo que se activan las rutas que lo consumen (anabólicas) al tiempo que se inhiben las que lo producen. sobre todo. Se define la carga metabólica como: C..

se aumentará la competencia por presencia de iones calcio y/o electroporación. mientras que el resto morirán. • Inserción del gen en un plásmido.). podemos adicionar antibióticos o antimetabolitos a los que sólo la cepa mutada es resistente. las cepas auxotrofas (que no se desarrollarán en medio mínimo) no se verán afectadas. Éstos serán los vehículos a través de los cuales se introducirá el DNA en la célula. La ingeniería genética aplicada a la microbiología industrial permite introducir secuencias específicas de DNA en una célula. • Introducción en la célula hospedadora. se usa un taco de madera de igual forma que el fondo del cultivo y recubierto de terciopelo. Por comparación tras la incubación de ambos cultivos. se hacen coincidir las zonas adyacentes al gen con las secuencias de corte de las distintas enzimas de restricción.) y protección ambiental (degradación de productos xenobióticos. Para facilitar este proceso. Para el caso de auxotrofos se aplica la técnica de los dobles cultivos: uno en medio completo (contiene todas las sustancias que pueda requerir la célula) y otro en medio mínimo. es frecuente tratar primero la muestra con penicilina en medio mínimo. 14 . es aconsejable efectuar tratamientos cíclicos con distintos agentes mutágenos sobre las cepas mutadas. lo que se consigue a través de mecanismos genéticos. se impresiona éste en el terciopelo y se inocula éste en el medio mínimo. Una vez efectuado el cultivo sobre el medio completo. localizamos en el medio completo las colonias que no se han desarrollado en el mínimo. un fago o un cósmido (plásmido que contiene los genes que codifican la síntesis de la cápsida de un fago λ). Esto se realiza por acción de las endonucleasas de restricción. etc. eligiendo la que mejor se ajusta al proceso. para ello. y que son las colonias auxotrofas. Una vez delimitado el gen a clonar en el genoma. La técnica consiste en que las colonias de microorganismos estén en el mismo sitio en ambos medios.. que no contiene los nutrientes necesarios para las especies auxotrofas (por lo que éstas no se desarrollarán). • Selección de mutantes. obtención de medicamentos.. las etapas a seguir son: • Obtener la secuencia genética a clonar. Como la penicilina actúa sólo sobre células en crecimiento. Para reducir el número de pruebas de este proceso y aumentar el número de auxotrofos de partida.Para evitar desechar cepas que puedan presentar características interesantes. Otra forma de detectar los mutantes deseados es alterar algún carácter enzimático que origine una propiedad fácilmente observable. Para hacer una selección de mutantes selectiva. por lo que sólo ellas permanecen activas en el cultivo.. Las técnicas de ingeniería genética tienen diversas aplicaciones. sobre todo en biotecnología (prevención de enfermedades génicas. Para ello.

. así prima (zona. Dada su composición. Esto es particularmente crítico en lo referente a sustratos: en laboratorio. se pueden producir condensaciones de Maillard durante el Proviene como Presenta fuentes de carbono proceso de esterilizado. dando cebada en la variadas y ricas fuentes de compuestos de degradación muy fabricación de nitrógeno (aminoácidos. etc. Si el microorganismo pero otros. además de por su composición. por hidrólisis química u obtención su degradación. según origen Presenta formas asimilables (caña o remolacha) y cultivo de la materia Residuos de las de carbono y nitrógeno. • Tamponadores de pH. Es necesario degradarlos cuando los Son polímeros de azúcares microorganismos carecen de las amilasas: que requieren la presencia por adición de amilasas al medio de de amilasas específicas para cultivo. Para minimizar estos efectos. Debido a la actividad microbiana. etc. Si no fuese así.SUSTRATOS PARAMICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL Las características de los procesos microbianos a escala industrial presentan grandes diferencias con los procesos a escala de laboratorio. Se usa en Metanol producción de proteína unicelular y de ciertas vitaminas. Melazas Extracto de malta Almidón y dextrinas Desechos de madera e industrias papeleras Aceites vegetales Alcoholes de bajo número de carbonos 15 . Estas reacciones residuo del fácilmente asimilables se producen entre grupos amino y malteado de la (azúcares sencillos). Han de presentarse en formas asequibles por las células (no son válidas todas las formas). usar cepas mutadas capaces de degradarla. Los sustratos se escogen. Estos residuos han de cumplir los siguientes requisitos para poder ser usados como sustrato: • Contener una fuente de carbono y nitrógeno suficientemente rica. plantas como sales y . es necesario proporcionarlo en celulosa. La consecuencia es la cerveza proteínas y pépticos) disminución de los nutrientes asimilables por los microorganismos. microorganismos. como la no lo posee. mientras que a escala industrial esto no es posible por no ser económicamente viable. en función de si los productos producidos son los que buscamos.Composición muy variable. están perfectamente definidos en cuanto a composición. clima. requieren el medio. ya que así se disminuyen los costes de transporte. para su degradación. lo que puede interesarnos o no. Muchos de ellos son Al igual que el almidón. No son válidos como única fuente de carbono. el metabolismo del microorganismo puede desequilibrarse hacia procesos que no son los habituales. Se usa principalmente para la obtención de ácido acético. efectuar una hidrólisis química o tratamiento especial. por lo que se utilizan generalmente residuos de otras industrias. Sustratos usados como fuentes de carbono . la celulosa directamente aprovechables requiere de un sistema enzimático especial por los microorganismos. por lo general. Los sustratos industriales presentan el gran inconveniente de que. condiciones. su composición es desconocida y variable.). de mutantes capaces de producir amilasas. el pH del medio puede sufrir grandes variaciones. básicos para que los microorganismos efectúen sus funciones. • Cierto contenido en oligoelementos y sales minerales. por cercanía a la zona. pureza. Son pocos los microorganismos capaces de utilizarlo. se añaden tampones. lo que puede llegar a inhibir el crecimiento microbiano.Puede contener compuestos tóxicos de azucareras oligoelementos suficientes. aunque sí como complemento de medios con bajo contenido en carbono. • Su composición ha de ser lo suficientemente equilibrada: sin exceso ni limitación de ningún nutriente necesario. aunque se Etanol están adaptando procesos para sintetizar diferentes sustancias usándolo como sustrato. complejos. y carboxilo de proteínas y azúcares.

maíz 16 . lo que se hace es enriquecer los sustratos con especies químicas ricas en nitrógeno. de una misma clase. Estados intermedios de Son más homogéneas en su . Presentan los mismos Extracto de por plasmólisis (debido a la .. como urea o nitrato amónico. Se usan mucho como sustratos para la producción de Harina de soja antibióticos.Contienen una gran inconvenientes de adición de gran cantidad de variedad en fuentes de composición que las levadura NaCl) o termólisis.. ya que son muy indicadas para los hongos y actinomicetos que efectúan dichos procesos Líquidos de Procede de industrias Contiene fuentes muy ricas de nitrógeno fácilmente maceración del alimentarias asimilables. péptidos.Su composición varía Peptonas degradación de proteínas composición que el extracto según el origen. pero dentro de diversos orígenes. hay pocas diferencias. nitrógeno (aminoácidos. melazas. Sólo son válidos para unos pocos microorganismos. .Son bastante caras.. Sustratos usados como fuentes de nitrógeno En ocasiones.Es el extracto más usado Se obtienen de levaduras. por lo que su mayor inconveniente es que su precio está determinado por el precio del petróleo. para el aporte de nitrógeno.) y carbohidratos. de levadura. .Alcanos de 12 a 18 carbonos Son subproductos del petróleo.

que en la mayoría de los casos es acero inoxidable. predominante sobre el . Discontinuo. Es el más utilizado por su sencillez. ya que diferencias mínimas pueden alterar gravemente la producción. etc. Adición de antiespumantes. impidiendo que se estimulen mutaciones. Aunque teóricamente es el régimen de trabajo ideal. la concentración de nutrientes ejerce efectos inhibitorios sobre el proceso o el crecimiento del microorganismo.. Se retiran productos y sustrato agotado al mismo tiempo que se aporta la misma cantidad de sustrato fresco. Las células que quedan actúan como inóculos. . temperatura..Tasa de producción.Coeficientes de rendimiento de producción. en ciertos procesos. que sólo podemos conocer el nivel de crecimiento del microorganismo. que pueden alterar el desarrollo microbiano y la producción. por lo que no sabemos cuándo se habrá alcanzado el nivel de producción deseado. cuentan con diversos sistemas que permiten conocer cuándo se obtiene el nivel de producción adecuado. se llega a obviar. lo que se evita haciendo un aporte secuencial de los nutrientes. Diseño y modo de operación. temperatura.Transferencia de materia y calor. y según el proceso. 17 . entre otros. Cinética de crecimiento y producción del microorganismo. Potencial para el escalado creciente de producción.. Además. Control de las condiciones ambientales. muchas ocasiones. a pesar de su importancia. . lo que facilita la recuperación y purificación. rendimiento). de gran importancia.MÉTODOS DE FERMENTACIÓN A GRAN ESCALA Es preciso conjugar los aspectos microbiológicos del sistema de producción con los puramente técnicos. para evitar las variaciones de pH originadas por la actividad microbiana. 3. debido a que la espuma puede generar diferencias de temperatura y concentraciones dentro del tanque. . presentan numerosos inconvenientes técnicos.Productividad lo más elevada posible. c. Adición de buffers. para poder empezar a retirar caldo fermentativo e introducir sustrato fresco. para evitar gradientes de nutrientes. A tener en cuenta: Aspectos microbianos Aspectos técnicos . Características hidrodinámicas del reactor: es necesario minimizar los fenómenos de transporte en el reactor. lo que complica aún más el proceso. Para ello. hasta el punto de que. Continuo. Esterilización lo más barata posible. Adición de oxígeno. Biorreactores Están fabricados en materiales capaces de mantener las condiciones óptimas de presión.Velocidad de crecimiento del microorganismo (en producto (búsqueda de las condiciones óptimas). Inclusión de sistemas de oxigenación adecuados a las exigencias del microorganismo. El sustrato se aporta de forma secuencial (no todo el sustrato es añadido al principio). Se trata de sistemas cerrados en los que no se varían externamente las condiciones iniciales (lo que supone que la composición del medio va variando continuamente en el tiempo conforme se desarrolla el cultivo)..Eficiencia de la conversión del sustrato en . posible. y ciertos productos sólo se sintetizan en la fase estacionaria. Los criterios básicos de diseño de un biorreactor son: Características bioquímicas del cultivo a realizar.Obtención del producto en la mayor concentración . con la excepción de: a. Modos de operación del biorreactor 1. las condiciones óptimas para el crecimiento y para la producción serán diferentes. Se debe a que. Semicontinuo. Asegurar la estabilidad genética del microorganismo. Estos inconvenientes son. b. 2.

Presentan el inconveniente de que. No son muy corrientes. Materiales no tóxicos (ni para el microorganismo ni para el consumo). necesarias para la recuperación y purificación. De lecho fluidizado. De lecho de goteo. CO2. Temperatura. aportándose éste por la parte inferior del reactor. 5. La información suministrada por el procesado de los datos obtenidos permitirá controlar el proceso de forma más eficiente. Los microorganismos se encuentran en una matriz empaquetada. dados su alto coste y complejidad. que puede afectar negativamente a la producción). la demanda del producto es estacional. Influye en la cinética de las reacciones. como consecuencia del sustrato líquido ascendente. Instrumentación y control del proceso La información aportada por estas variables permite conocer la marcha del proceso fermentativo. pero es difícil aislar la enzima que nos interesa. El microorganismo permanece suspendido (debido a burbujeo continuo. por lo que la producción en continuo genera grandes cantidades en stock. Por lo general. Los medidores son sencillos de manejar. Informan sobre el nivel de producción de un determinado metabolito. Se insufla gas comprimido por la parte inferior que. 2. Son los más interesantes y novedosos. 3. De lecho fijo o empaquetado. Tipos de biorreactores 1. Biomasa. para mantener constantes las condiciones de temperatura (la actividad microbiana genera una gran cantidad de calor. 4. Favorecen la mutación de las cepas. dado que las células pueden participar en varios procesos fermentativos. Resistencia a la corrosión. el más usado. pH. El sustrato es el medio líquido en el que están inmersas las células. aumenta la inestabilidad genética. o atrapamiento mecánico en matriz o membrana) o químicos (enlaces covalentes). Se usan sensores situados cerca de las enzimas inmovilizadas de interés. y por lo tanto permite conocer las condiciones óptimas para la producción. Permiten reutilizar continuamente el biocatalizador. permite homogeneizar el interior del reactor. En columna de burbujas. junto con una serie de bucles externos. y la estabilidad y actividad enzimáticas. El sustrato se hace pasar lentamente por la matriz empaquetada que contiene al microorganismo (un proceso semicontinuo. por lo que no es viable el almacenamiento por tiempo indefinido. lo que no es fácil de conseguir) en el fermentador. producción y rendimiento. Se usan electrodos de membrana o técnicas espectrofotométricas o cromatográficas. Son los más tradicionales (similares a los de lecho fijo). es aconsejable disponer de diversos medidores. ya que un grupo de células puede participar en varios ciclos de producción. Oxígeno disuelto en el caldo de fermentación. Dicha inmovilización puede efectuarse por medios físicos (adsorción.- - Sistemas de muestreo para determinar las condiciones internas del biorreactor. La vida útil del producto puede ser limitada. 1. 2. la alimentación se produce de forma vertical en sentido ascendente. Adopción de refrigeradores. Se obtiene indirectamente por balances de materia. por lo que se mide como diferencia entre los flujos de entrada y salida. De enzimas o células inmovilizadas. aunque permiten trabajar también en discontinuo). 5. En grandes fermentadores. 6. aumentando la productividad. Los aparatos instrumentales son de difícil esterilización y baja fiabilidad. suprimiendo posibles gradientes. 4. Los principales inconvenientes de la producción en continuo: En ocasiones. Es más difícil obtener concentraciones altas. Afecta a la permeabilidad de la pared celular y al grado en que se producen las reacciones catalizadas por las enzimas presentes en ella. 18 . 3. Capacidad para soportar altas presiones. lo que supone la consideración de un tiempo de residencia en dicha matriz. Sondas de enzimas inmovilizadas. Los de enzimas presentan grandes ventajas. disminuyendo los costes.

que consiste en la recuperación de las células conservadas en condiciones adecuadas para su aplicación industrial. principalmente. • Agitación en función del tamaño del fermentador.Esterilización discontinua. es de alto coste (si no se puede reaprovechar el agua) y altera la composición del medio. Crecimiento del inóculo. así como la potencia consumida por unidad de volumen. Proceso fermentativo 1. 1. manteniendo una velocidad de transferencia de oxígeno constante. Éstas son.. no es viable) o liofilización (consigue un mayor número de células viables al usar agentes protectores). • Entre 0. estando éstas en los rangos: • Temperaturas para mesófilos (de 20 a 45 oC) y para sicrófilos (de 5 a 20 oC). al tiempo que el tamaño del cultivo se va aumentando en proporción 1:10. de 5 a 10% para hongos y actinomicetos y de 1 a 500000 esporas por litro de cultivo. Técnicas de esterilización Del medio de cultivo Se usan preferentemente métodos térmicos y filtros. 2. 2. ya que permite homogeneizar el medio de cultivo. o bien la aplicación directa del vapor sobre el medio de cultivo. Sus ventajas son que permiten reutilizar el agua y no alteran la composición del medio. Producción. se producen menores concentraciones de producto y unos mayores tiempos de retardo de los esperados.1 y 3% para bacterias. Precultivo. 19 . Preservación del inóculo por medio de prácticas de conservación que permitan que las cepas mantengan su capacidad biosintética. se aplica un proceso gradual. lo que evita las contaminaciones. los procesos de transporte y el comportamiento celular son diferentes. 3. debido a que la fluidodinámica del sistema. el almacenamiento a baja temperatura (poco útil). Si esto no se consigue.25 y 1 vvm de O2. Las condiciones de producción a pequeña escala no son.5 atm sobre la atmosférica).. por lo general. • Sobrepresión (de 0.Esterilización continua.2 a 0. congelación (aunque rápida. Se coloca el inóculo en contacto con los nutrientes que le servirán de sustrato y las condiciones en las que crecerá. Requiere grandes periodos de tiempo. que consiste en obtener la cantidad suficiente de células para poder usar como inóculo en la fase de producción.Escalado Es el proceso de conversión de un proceso productivo de pequeña escala a escala industrial. Estas cantidades son entre 0. Por ello. 4. Del aire de fermentación Se usan filtros profundos de lana de vidrio o de cartucho de fibra. Consiste en la obtención de altas temperaturas (140 oC) durante 120 s por inyección de vapor (intentando evitar su dilución) o cambiadores de calor (evitando la formación de depósitos de sales insolubles). Consiste en la inyección de vapor a la camisa del fermentador o los serpentines internos. extrapolables a la escala industrial. pero si es demasiado alta puede inhibir el crecimiento bacteriano.

desecación. • Aislamiento del producto. se depositan en la parte inferior.RECUPERACIÓN DE PRODUCTOS FINALES Al finalizar la fermentación. Centrifugación Es más versátil. • Purificación. Consiste en molinos de cuchillo. donde se obtienen ya altas concentraciones de producto. que separan las partículas en función de su gravedad específica. No se efectúa de un modo muy estricto. Se efectúa entonces la rotura: a. esto es. Permite facilitar la posterior purificación. lo que impulsa la filtración a través de la membrana. Estas características de los fluidos biológicos son: 1.. si no es así. También hay que tener en cuenta el diámetro de las partículas. bolas. presentan propiedades similares a éste. De cámara y disco. 4.. el producto de interés se encuentra en el caldo de fermentación junto con numerosos compuestos que. • Que permitan una alta velocidad de flujo. Así. La gran ventaja de este tipo de centrífugas es que. permiten efectuar separaciones líquido-líquido en función de la densidad. lo que dificulta la predicción de propiedades. y microfiltración para tamaños de partícula de entre 0. Rotura celular El proceso a seguir es: 1. • Con posibilidades de esterilización. Técnicas mecánicas (molienda). 3. En ellas. así. 2. generalmente. en muchas ocasiones.1 µm o tamaño molecular superior a 1000. no es necesario. además.. se usa la ósmosis inversa para partículas de 10-4 a 10-3 µm o tamaño molecular inferior a 1000.. pobre sedimentación y alta retención de agua.. para comercializar o conservar el producto. de las siguientes etapas: • Separación y rotura de células para el caso de que el producto se genere de forma intracelular. selectivos y de un determinado tamaño de poro. Separación de las células Filtración Se pueden usar dos tipos de filtros: de placa y malla (para volúmenes pequeños) o continuos de tambor rotatorio a vacío (para volúmenes grandes). • Acondicionamiento. Se diluyen las muestras en tampón. Baja filtrabilidad. Como las células son las más pesadas. lo que complica la purificación del compuesto final.2 y 10 µm.. 20 . Tendencia a formar emulsiones. Las características de los filtros utilizados son: • Resistentes. las suspensiones se proyectan sobre un material filtrante. los procesos de filtración constaran. Los tipos de centrífuga más usados son: De filtro de criba. Alta viscosidad y comportamiento no newtoniano del fluido. 2. Baja estabilidad térmica y química. la ultrafiltración para partículas de entre 10-3 a 0. por lo que sólo consigue elevar en parte la concentración del producto. ya que se puede aplicar a más casos y condiciones que la filtración. Se usan sobre todo en panadería y producción de proteína unicelular (SCP).

3. Consiste en la adición de alguna sustancia en alta concentración o modificar las condiciones. d. son muy eficientes e inertes para los compuestos. se usa la liofilización. En el proceso no debe haber pérdida de actividad. Extracción.Técnicas físicas: ultrasonidos (rompen la estructura celular). de modo que se provoca la precipitación de compuestos. los microorganismos y condiciones de la fermentación deberían ser tales que se minimice la complejidad del proceso. que al no disociarse se fija a la fase estacionaria de la columna cromatográfica. desecación violenta. Se usa para metabolitos hidrofílicos (con capacidad para ionizarse). las proteínas por alteración del pH más allá del punto isoeléctrico y en ocasiones por temperatura. para posteriormente desprender la humedad por una corriente de gas. que usa el carácter antigénico de los productos y una matriz de anticuerpos específicos. las levaduras y las células en fase estacionaria son más resistentes). antibióticos. solventes. Así. los polisacáridos pueden precipitar por adición de alcohol. Purificación Se utilizan principalmente técnicas cromatográficas. detergentes. no han sufrido todas las transformaciones o tratamientos a los que serían sometidos en una célula normal. El caso más extendido es el uso de calor húmedo. Enzimas: lisozimas. Recuperación de productos de ADN recombinante Los productos obtenidos por este tipo de técnicas muestran características que dificultan su recuperación. Aislamiento preliminar Se aplican tres métodos principalmente: 1. 2. • De afinidad (adsorción selectiva). no corrosivos y no alteren el producto. Dichos disolventes han de ser económicos. Las características fisiológicas de cada organismo determinan el método más adecuado para su lisis (las bacterias Gram-. son altamente rentables. que aunque son caras. Consiste en hacer pasar el caldo de fermentación por resinas de intercambio iónico. autolisis (la célula sintetiza enzimas que degradan las cubiertas. Adsorción. lo que les provoca la muerte) o bacteriófagos (provocan la lisis celular al infectar la célula). aunque en industria se prefieren los molinos de bolas y los homogeneizadores de alta presión.. Precipitación. homogeneizadores de alta presión o procesos cíclicos de congelación-descongelación. debido a que los mecanismos para obtenerlos son construidos de forma artificial. de baja volatilidad y viscosidad. Así. • De inmunoadsorción. 21 . Los tipos de cromatografía usados son: • De exclusión molecular. aunque puede provocar alteraciones sobre el producto. ácidos... c. Permite separar el producto en función de su solubilidad en diferentes líquidos inmiscibles. En el caso de que se requiera la presencia de células en el producto. Secado Es el punto final de la purificación en la mayoría de los casos. por ejemplo. que consiste en modificación del pH hasta alcanzar el punto isoeléctrico de la proteína. pero dado el alto valor de los productos. lo que le permite una altísima selectividad. lo que obliga a un tratamiento posterior. Aun así. b. Técnicas químicas: choque osmótico (plasmólisis de la célula al sumergirla en una solución muy salina). • De isoelectroenfoque. son procesos de separación muy complejos y costosos.

Rendimiento Las pérdidas producidas en la purificación del producto dependen del número de etapas de la purificación y la sensibilidad del producto frente a este tratamiento. 22 . Aun así. el coste del proceso de purificación suele ascender al 20% del total.

El etanol puede inhibir el crecimiento celular cuando se alcanzan concentraciones del 5%. Kluyveromyces fragilis o Zymomonas mobilis. no se puede usar Saccharomyces. lo que aumenta la viscosidad y genera gradientes en el seno del caldo de fermentación. Debido a las condiciones anaeróbicas... siendo las condiciones en este caso: Se produce un mayor control de la temperatura y el pH. Específicamente. jugos azucarados.. pero se usan más para otros procesos. hay que adicionar amilasas o hidrolizar dicho almidón (este microorganismo no puede hacerlo). 2.5 3% de inóculo 600m3 Aumentos de temperatura y cantidad de inóculo. capaces de efectuar dicha degradación. se sintetiza por levaduras y bacterias: Saccharomyces cerevisiae.). Se puede prolongar hasta 72 horas. se puede producir contaminación con bacterias lácticas. Teóricamente. Las condiciones de operación en este proceso son: 30-35 oC pH = 4. Fermentación Se dan principalmente procesos discontinuos en tres fases: 1.. Bioquímicamente. Se reduce la oxigenación. es necesario efectuar primero el crecimiento de las células en un medio aerobio para luego introducirlas en otro anaerobio y así comenzar la producción. los países con grandes superficies cultivadas son los principales productores de etanol por vía microbiológica (EE. En estas condiciones. Si se usan sueros lácticos..PRODUCCIÓN DE ALCOHOLES Dado que los residuos agrícolas son buenos sustratos para producir etanol (excepto el destinado a la alimentación).25-0. en particular. la síntesis de etanol requiere de medios anaerobios.5 l/g de células). Síntesis. Procesos de producción de etanol Preparación del sustrato • • • • Si se usa Saccharomyces cerevisiae y se proporciona un sustrato almidonado. ya que es incapaz de degradar la lactosa. Condiciones de microaerofilia (0. Se usan cultivos mixtos sobre el sustrato sólido de la levadura en cuestión con Clostridium thermocellum. Se usan cantidades limitantes de glucosa (< 1g/l). pueden reducir el tiempo de fermentación hasta lo 2 o 3 días. lo que produce la reducción del crecimiento celular y el inicio de la producción durante 24-36 h. Clostridium thermosaccharalyticum o Trichoderma reesei.UU. se puede efectuar destilación a vacío o limitar los nutrientes. A nivel industrial. el proceso de producción continuo dura unas 18 horas. Para evitarlo. que puede elevar la temperatura hasta los 40 oC. lo que vuelve a aumentar el crecimiento celular. el rendimiento de la reacción es elevado: 0. 23 . Leuconostoc. Celulosa: son difícilmente hidrolizables. Se detiene la síntesis por aumento de la oxigenación. También se han desarrollado procesos en continuo (en desarrollo). 3. con una efectividad del 91-95%. se libera calor. Desarrollo celular: se somete el cultivo a fuerte oxigenación durante 12-24 horas. que sintetiza dextrano (un polisacárido). pero el crecimiento de las levaduras productoras necesita del oxígeno. o incluso el proceso de síntesis (cuando la concentración es del 10%). Canadá. Como consecuencia del proceso. Por ello..5 g de alcohol por gramo de glucosa. la síntesis se produce por acción de la enzima alcohol-deshidrogenasa sobre el acetaldehído obtenido por reacción del piruvato. como melazas. Brasil. son adecuados.. Otros materiales azucarados. Se usan entonces cepas modificadas de Torula cremoris y Candida pseudotropoçicalis.

M. 2. 3. la producción se efectúa con C. han de extraerse las células por sedimentación (generalmente) o centrifugación y se elimina el CO2 tras etapas de lavado. usando CO2. Primero. Formación de ácidos acético y butírico (18 h). Producción de acetona/butanol Aunque descubierta por Pasteur. El proceso es de 36 horas de duración. fue Weizmann poco antes de la 1ª G. Sintetizan butanol y otro compuesto (convertible en etanol). Finalización del crecimiento y estabilización del pH (5. Se pueden producir contaminaciones por bacterias lácticas. Entonces. lo que causa una drástica bajada del pH hasta 5.Purificación El alcohol se obtiene por destilación.8): otras 18 horas. y se produce en tres fases: 1. butylicum Butanol + isopropanol C. Las especies usadas son todas del género Clostridium. ya que matan las células y detienen el proceso. 24 . acetobutylicum Butanol + acetona C. por lo que se obtienen ambos compuestos conjuntamente. dependiendo de la especie usada: C. Los microorganismos usados para la síntesis de butanol generan también acetona. caracterizadas por ser: • Bacterias anaerobias estrictas. • Generan esporas. Butylicum en fermentadores de 12 · 90 m3. se destila el caldo en columnas de rectificación. aunque tras la 2ª GM se prefiere la síntesis química. quien estableció el proceso de producción microbiano. Se extraen los productos por destilación fraccionada.2. Durante la guerra. en especial Lactobacillus (lo que supone una disminución del rendimiento) o por bacteriófagos. desplaza al oxígeno. se usa esta acetona de origen microbiano en la producción de TNT. con lo que sube el pH. Conversión de dichos ácidos en acetona y butanol (18 horas). que además de proporcionar agitación. que son más complicadas de tratar. generando condiciones de anaerobiosis. butyricum Butírico + acético En la actualidad. al estudiar la producción de butadieno para obtener caucho sintético.

Se obtiene en la fermentación del vino. antioxidante y saborizante para productos dulces. Por ello. debido a sus propiedades antioxidantes. como antiespumante y en la industria textil. más sencilla y económica. saborizantes o ingredientes químicos. por tanto. Si no se dan las concentraciones adecuadas. está en desarrollo la producción Ácido tartárico a partir de Aspergillus o la bacteria Alcaligenes. • Detergentes. como integrante de diferentes preparados. Las especies usadas son: • Aspergillus niger usando como sustrato sacarosa o melazas.PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS Son ampliamente usados en alimentación. la muerte de los organismos de dichas aguas. Se pueden obtener tanto microbiológica como láctico químicamente. pueden producirse por vía microbiológica.. Ácidos acético y Son los segundos en importancia. helados. Medio nutricional • • La fuente de carbono ha de tener una concentración de azúcares del 15-25%. Esto se consigue por adición de ferrocianatos (con lo que los cationes precipitan como complejos) o usando resinas de intercambio iónico. Así también.. Para ello. requiriendo unas condiciones diferentes para la fase de crecimiento y la de producción. como los ácidos oxálico y glucónico. aromatizante. como caramelos. la morfología del hongo no será la óptima y la producción se verá afectada. síntesis química o extracción de productos naturales. ya que se obtiene únicamente por vía microbiológica. Los procesos de fermentación se llevan a cabo con cepas modificadas genéticamente para aumentar la producción y disminución de compuestos colaterales. Los más importantes son: Ácido cítrico El más importante. son muchísimos los microorganismos capaces de sintetizarlos. como acidulantes. sólo unos pocos de estos ácidos son más rentables producidos por vía microbiológica que por vía química. fumárico Ácidos itacónico Se prefiere la síntesis química. Al producirse la descomposición anaerobia de toda esa materia orgánica. jarabe de caña de azúcar. zumos. 25 . Ácidos málico y Son de escasa demanda e importancia. como sustituto de los polifosfatos. en teoría. • Cosmética. • Farmacia: como preservante de la sangre. Las condiciones de este sustrato son: o Limitación del fosfato. o Ausencia de cationes metálicos. aunque está poco implantado. La abundancia de N y/o P favorece un altísimo desarrollo de las algas. lo que causa una disminución enorme de oxígeno en el agua y. • Química. melazas o sacarosa. La mayoría de los obtenidos microbiológicamente proceden del ciclo de Krebs. Actualmente. etc. ya que es más fácil obtener y glucónico de los microorganismos las enzimas que catalizan su formación que el producto en sí. ya que éstos pueden limitar la producción al superar los niveles traza. aunque sólo unos pocos en cantidades adecuadas para la aplicación industrial. • Metalurgia. ya que sólo se obtiene por vía microbiológica y además es el más utilizado. Su sabor agradable y elevada solubilidad hacen que tenga diversidad de usos: • Alimentación: como acidulante. hidrolizados de almidón. • Candida lipolytica con parafina como sustrato. se prefiere el ácido cítrico (aunque más caro). ya que muchos metales se extraen más fácilmente como citratos. por lo que. Así también. Minerales en las concentraciones adecuadas. Ácido cítrico Es el más importante. sueros lácteos.. se usan almidón de patata o hidrolizados de almidón (ambos requieren hidrólisis enzimática). sobre todo hierro. Esto es importante porque los polifosfatos son causantes de la eutrofización de las aguas dulces. los ríos y lagos se acaban convirtiendo en pantanos.

pH de 5) a la idiofase (de producción.• • Los requerimientos de pH varían de la fase de crecimiento (trofofase. Purificación Se efectúa en pasos: • Se retira el micelio del hongo. precipita citrato cálcico. Son más sencillos. pasteureanus Acetobacter peroxidans Gluconovçbacter Finalizan el proceso con la obtención del ácido acético. Es más complejo. • Los niveles adecuados de oxígeno son menores (0. MgSO4 y ZnSO4. • Al adicionar ahora calcio. agitados o de columna de aire. Como sustrato sólido: • Trigo u otro cereal • Se dispone en capas delgadas (3-5 cm) donde se colocan las esporas • Se mantiene a pH entre 4 y 5 y 28 oC durante 90 horas. se efectúa un lavado previo a la precipitación o filtración para retirar dicho micelio. • Se procede a la extracción del ácido cítrico mediante 5 volúmenes de agua caliente.2-1 vvm). se construyen en acero inoxidable). Ácido acético Es el principal componente del vinagre. Como el ácido cítrico estará atrapado en el micelio (debido a la alta densidad de éste). • Adición de cationes calcio a pH 3. complementadas con H2KPO4. construidos en materiales capaces de resistir pH’s ácidos sin liberar cationes metálicos (por lo general. • Se inoculan las bandejas con esporas (2-5 ·107 esporas / m2) • Se procede a incubación a 30 oC con pH entre 4 y 5. Es sintetizado por dos géneros de bacterias: Acetobacter aceti Acetobacter Son cepas superoxidantes. del japonés). pH inferior a 3). lo que hace que se pierdan los componentes volátiles interferentes. • Extracción del ácido cítrico a pH neutro con temperaturas entre 70 y 90 oC. • El citrato se purifica mediante resinas de intercambio iónico. lo que permite obtener el ácido cítrico. Se opera en discontinuo o semicontinuo con alimentación fraccionada. capaces de oxidar el producto hasta CO2 y agua. Debido a las diferentes condiciones para idiofase y trofofase es difícil establecer un proceso de producción en continuo. ya que éste inhibe la producción por encima del 10% de concentración. Dos factores importantes a tener en cuenta son: • La relación Fe/Cu ha de ser más controlada que en procesos koji para que el micelio adopte la forma adecuada. y la de producción entre 8 y 14 días. Procesos sumergidos o en profundidad. lo que hace que precipite oxalato cálcico. pero permite una mayor mecanización. sin una oxidación oxydans mayor. • Es necesario aportar suficiente oxígeno como para desplazar al CO2 producido. Se usan fermentadores pequeños (menos de 250 m3). Procesos de producción Procesos en superficie (o koji. pero requieren más mano de obra. Como sustrato líquido: • Se usan sacarosa o melazas. • Se mantiene la etapa de crecimiento durante 30 horas. 26 .

Las especies utilizadas preferentemente son: Lactobacillus Usa residuos líquidos de la industria papelera (licor de cocción del sulfito) como pentosus sustrato. sales y carbonato cálcico. Requiere unos fuertes niveles de oxigenación. necesitan suplementos: o fosfato amónico o sulfato magnésico o citrato y pantotenato cálcicos o hidrolizado de cereal Es de reducido coste y ocupamiento del espacio. • Hidrolizados de patatas o cereales. ya que es más barata) o enzimática (tradicionalmente.5 y 6. Ácido málico Se usa en alimentación como acidulante. además.Producción Método Orleans Es el más tradicional. La síntesis microbiológica usa: Aspergillus Con glucosa. a partir de extractos de zumo de manzana. Generadores por goteo o reactor Frigs Se usan capas de virutas de haya sobre las que se adhieren las bacterias (en cierto modo. ya que el proceso se detiene si el nivel de oxígeno es inferior al 5%. sobre todo bulgaricus de la producción de quesos. dada su riqueza en este compuesto) a partir de ácido fumárico. Brevibacterium ammoniagenes Brevibacterium flavum 27 . es precursor de los sistemas de células inmovilizadas). Presenta la ventaja de que con un coste mínimo obtiene una elevada eficacia. Procesos sumergidos En este caso. manteniendo altas temperaturas (45-50 oC) y pH entre 5. Según las características metabólicas de los microorganismos productores. Se usan procesos continuos. por lo que son preferibles) y heterofermentadores (producen. se distingue entre homofermentadores (sólo producen ácido láctico. su producción es poco satisfactoria. Son los más costosos. Las células se eliminan por filtración. Se obtiene por síntesis química (preferentemente. discontinuos y con células inmovilizadas. Se usa principalmente en alimentación (acidulante y saborizante. además de hallarse de forma natural en productos lácteos) y en farmacia. otras sustancias). se añade ferrocianuro potásico. son menos interesantes que para el ácido cítrico. lo que constituye su principal problema. Posteriormente. Lactobacillus Usa sueros o suero desproteinizado procedentes de la industria láctea.5. Sobre dichas capas de virutas se gotea el sustrato El sustrato usado es: • Un líquido de alto contenido alcohólico (vino. o bien alcohol técnico. Ácido láctico Fue el primer ácido obtenido por fermentación. Aporta un buen rendimiento (14%). y su producción es baja. que dado que son deficitarios en otros nutrientes. Método alemán Basado en procesos tradicionales. lo que permite sustraer los subproductos responsables de colorear el ácido acético. malta o sidra de baja calidad).

Ácido fumárico Debido a su baja higroscopicidad (tendencia a captar agua). como colorante (fija el color de la carne). emulsificante. 28 . acidulante y saborizante. Paralelamente. Se obtiene a partir del hongo Rhyzopus oryzae usando como sustratos derivados de soja o arroz. se usa en bebidas deshidratadas y revestimientos de golosinas (evita la entrada de agua a alimentos). su baja solubilidad limita otras aplicaciones (lo que se evita por adición de compuestos que aumentan su solubilidad). suavizante.

Las cepas usadas son principalmente Candida utilis o Saccharomyces cerevisiae. con lo que tenemos los nucleótidos sueltos en disolución. Síntesis indirecta: Se obtiene AICAR (5-amino-4-imidazol carboxamida ribosa) con cepas auxotrofas para la purina y mutadas en determinadas actividades enzimáticas (lo que facilita la acumulación sin inhibición). Es la más utilizada. con lo que se obtiene el IMP. Se produce la inosina usando auxotrofos de Bacillus subtilis. con la salvedad de que es preciso efectuar una fosforilación posterior. sino sólo los derivados de la purina (las pirimidínicas no tienen esta propiedad). con lo que nos quedamos con AMP y GMP. y posterior adición de HCl (preferentemente) o etanol. con lo que precipita y cristaliza. con lo que se adsorben sobre éste. en concreto. El GMP es producto. Fermentación del GMP. Se degrada el ARN hasta obtener los nucleótidos mediante Ca(OH)2 y 130 oC durante 3-4 horas. Este proceso es de un alto rendimiento (se obtienen 30-35 g/L). Nucleótidos Por sí mismos no confieren sabor. debido a la tendencia a sustituir los aditivos químicos por otros naturales. Se favorece la excreción del AICAR (intracelular) al caldo fermentativo: • Adición de una fuente de purina. El hecho de usar auxotrofos que sólo sintetizan inosina es para evitar la regulación por producto final. El resto del proceso es similar. eliminamos los nucleótidos pirimidínicos. Hidrólisis química del ARN. 11). El ARN se obtiene igual que en la hidrólisis enzimática. Su importancia es creciente. no todos presentan esta cualidad. lo que provoca la precipitación de este ARN. Adicionamos carbón activo. pero incrementan los sabores presentes (lo que se conoce como efecto umami). Brevibacterium ammoniagenes y Microbacterium que tienen bloqueada la síntesis de nucleótidos.PRODUCCIÓN DE NUCLEÓTIDOS. Se usan levaduras con alto contenido en ARN. como potenciadores del sabor (nucleótidos y aminoácidos) y para aumentar la calidad nutricional. La inosina producida se somete a pH básico (aprox. ya que entonces detienen la biosíntesis estructural. Por elución selectiva con una solución de metanol-amonio. sobre todo en Japón. los esfuerzos se centran en incrementar la competitividad de las fermentaciones por mejora de procesos de fermentación y purificación. que se cultivan hasta el final de la fase logarítmica de crecimiento (principio de la fase estacionaria). sin embargo. Así. aunque los productos microbianos son más caros. Se extrae el ARN usando agua caliente de pH alto (con lo que el ARN pasa a la disolución). Sin embargo. Hidrólisis enzimática del ARN. Estos productos también podrían obtenerse de los vegetales. Por ello. la vía microbiana presenta la ventaja de ser más fácil de mejorar y optimizar. Se separan los nucleótidos por cromatografía de intercambio iónico. se usan con preferencia. con lo que se obtiene IMP. y el AMP se desamina por cultivo con Aspergillus oryzae. el IMP (inosin-mono-fosfato) y el GMP (guanosin-mono-fosfato). Se produce la fosforilación. 29 . Fermentación del IMP. Se produce entonces la hidrólisis enzimática. lo que permite que se siga sintetizando AICAR hasta que la célula lo va expulsando por exceso. con una producción similar. AMINOÁCIDOS Y VITAMINAS Su principal uso se da en alimentación. Entonces se deshidrata el producto.

edulcorantes. Brevibacterium y Esclerychia coli. El proceso de producción es: 1. a 38 oC y pH de 7. precursor del glutamato. Se obtienen: • A partir de hidrolizados de proteínas. se acumula ácido α-cetoglutárico. Glutamato Se usa mucho como potenciador de sabor para la comida china.• Adición de un inhibidor ante la esporulación (como ácido butírico o reducción del oxígeno. destacando glutamato. Se usa sobre todo como antioxidante en zumos. lo que supone que muchos de los productos que de él se derivan siguen rutas alternativas y.. Se usa Corynebacterium glutamicum (el más usado) y Brevibacterium flavum. para permitirles degradar sustratos baratos (como glucosa.8. Debido a su similitud estructural. hidrolizados de almidón o n-parafinas) y mejorar la producción. 30 . • Por síntesis química. asparagina y tirosina. complemento nutricional. El proceso se realiza en discontinuo. 4. glutámico y purificar. Síntesis directa Es el menos usado. ya que se obtienen mezclas racémicas y sólo una de las formas es la activa. cistina.. Forman el aspartamo.) y en algunos productos cosméticos y farmacéuticos. como consecuencia. Todos se pueden obtener por vía microbiana. por lo que evita la esporulación). se transforma fácilmente en ácido glutámico. que evita un rápido agotamiento de los nutrientes. Se usan mutantes de Bacillus subtilis en los que se ha aumentado el número de copias del gen que codifica la enzima del paso limitante de la ruta de producción de guanosina (con lo que aumenta el número de enzimas del proceso y la producción aumenta). • Fermentación microbiana con mutantes de Corynebacterium. un dipéptido usado como edulcorante sin proporcionar aporte calórico. lista para el consumo tras fosforilarla. Se usa como antioxidante de la leche en polvo. con lo que se puede extraer el ác. 2. • Biotransformación enzimática. Se facilita la excreción de ácido glutámico por adición de biotina al medio. Aminoácidos Se usan sobre todo en alimentación (potenciadores de sabor. Otros aminoácidos Aspartato Alanina Cisteína Fenilalanina combinado con aspartato Triptófano combinado con histidina Metionina Lisina Treonina Triptófano Otros Se usan como potenciadores del sabor y edulcorantes. la única vía para obtener cisteína. usando glucosa y sacarosa como fuentes de carbono. Se obtiene guanosina. Vitaminas Hay muchos microorganismos capaces de sintetizar todas las vitaminas necesarias para los humanos.. metionina y lisina. es incapaz de completar el ciclo de Krebs. que requiere de separación enzimática posterior. 3. pero sólo B2 y B12 son de síntesis microbiana rentable frente a la síntesis química. Con una duración de 30-35 horas se obtienen del orden de 100 g/L. Se usan como suplementos en derivados de cereales o en complejos nutricionales. ya que endulzan pero no dan aporte calórico (sobre todo para zumos). leucina. En el caso del Corynebacterium. antioxidantes. aunque poco rentable.

Síntesis microbiana. con rendimientos de 6-7 g/L. Primera fase: anaeróbica. b. Cobalamina (B12) Sólo se obtiene por vía microbiana. usando Bacillus subtilis como productor de ribosa. Se emplea en suplementación de derivados de cereales y productos dietéticos. 3. Es la más tradicional. a. En ella se sintetizan los precursores de la vitamina. hígado y suplementos nutricionales. presenta una estructura central fija. 2. Pseudomonas denitrificans. Propionibacterium. Químicamente. por lo que no es rentable. b. Sin embargo. Con otros microorganismos (Candida flareri. verduras. La glucosa se convierte químicamente en sorbitol. está sujeto a patentes. Se encuentra en lácteos. con lo que los procesos se hacen muy específicos. Con Ashbya gossypii (hongo). Riboflavina (B2) Interviene en reacciones metabólicas redox y del metabolismo energético. 31 . La sorbosa es modificada químicamente hasta obtener ácido ascórbico.El organismo las utiliza principalmente como coenzimas en la mayoría de los casos. En la actualidad. Ácido ascórbico (C) Se utiliza como suplemento en bebidas y como antioxidante de productos envasados. Síntesis química completa. pero son menos rentables que los procesos químicos.5 g/L de Bacillus). Bacillus megaterium. 1. y la producción es muy variable (de 21 g/L de Candida a 4. que se transforma químicamente en riboflavina. Síntesis mixta (el más usado). por lo que son indispensables para muchos procesos. En ella se sintetiza la cobalamina siempre que se aplique el adecuado tratamiento térmico en presencia de cianuro. El sorbitol es transformado en sorbosa por acción del Acetobacter suboxydans. La síntesis más usada es: 1. en experimentación. se adaptan a una fuente de carbono concreta. 3. se están ensayando procesos en los que obtener intermediarios a partir de desechos contaminantes como sustrato. Hay tres vías de síntesis: 1. pero los sustituyentes constituyen varias formas. 2. Segunda fase: aeróbica. 2. 3. Se obtiene el mayor rendimiento. Hay microorganismos capaces de sintetizar la vitamina completamente (el alga Chlorella pyrenoidosa y la levadura Candida norvegensis). Saccharomyces cerevisiae o Bacillus subtilis). ya que la síntesis química es muy compleja y poco rentable. a. usando aceite de soja o maíz complementados con glicina y purinas (estimulan la producción). de las que la activa es la cianocobalamina.

papel.. Para el control del pH. Procesos en biorreactores Son más fáciles de automatizar al tratarse de medios líquidos y. Transferasas Transfieren grupos químicos. dispuestos en bandejas. es preferible buscar microorganismos de calidad GRAS. lácteos. que son las autorizadas legalmente para utilizarse en alimentación y medicina. Hay que tener en cuenta la mejora y adecuación de las características del proceso de producción al microorganismo. paja de trigo. procesado del almidón. como melazas. y con menos problemas de purificación. S y Ca. por lo tanto. hidrolizados de almidón o lactosa. por lo general..) y sus niveles de producción.. H o electrones. investigación biotecnológica (enzimas de restricción. aireación y humedad es difícil. Hidrolasas Hidrolizan moléculas.. solución de fosfato (que a la vez acúta como suplemento de fósforo). Se clasifican en: Oxidorreductasas Efectúan procesos redox y transferencias de O. pero es preferible el microbiano.). Procesos de producción Sobre sustrato sólido (procesos Koji) No son muy apropiados. • Son de bajon impacto ambiental. se adiciona algún tamponador. es necesario recurrir a manipulación genética para favorecer los inductores de la producción (se prefiere intentar que la modificación consiga obtener la enzima sin necesidad de presencia de inductores) e inhibir la producción de otras enzimas y procesos. • Presentan una mayor especificidad y con mayores rendimientos frente a estereoisomería. • Permiten el trabajo en sistemas no acuosos. dando información sobre las características de la enzima (condiciones óptimas de funcionamiento: temperatura. 32 . El grupo microbiano más usado al respecto son los microorganismos termófilos o termorresistentes. pH. Se usa como sustrato salvado. ya que pueden ejercer su función a estas temperaturas. • Requieren menos energía (tecnologías sencillas y ahorro al no necesitar altas temperaturas ni presiones). salvo para procesos con hongos. hidrolizados de levadura o geletina complementados con P. sobre todo si la enzima producida no es de origen microbiano. dada su inocuidad para el organismo humano y el medioambiente. pulpa de caña de azúcar o bagazo (medios sólidos o semisólidos porosos y sin agua libre). clonación. Ligasas Forman enlaces mediante el gasto de ATP.. ya que el control de temperatura. ya que no generan ni compuestos colaterales ni residuos de riesgo. además de que son muy propensos a las contaminaciones. etc. cereales.PRODUCCIÓN DE ENZIMAS El interés por los procesos enzimáticos se debe a varios factores: • No necesitan condiciones especiales de temperatura y presión (los valores ambientales). Dentro de este grupo. cáscara de arroz. Isomerasas Interconvierten isómeros. Por ello. textil. Liasas Rompen enlaces en procesos no redox ni hidrolíticos. por lo que sus enzimas son de gran interés. Pueden tener distintos orígenes. será más fácil el controlar las variables ambientales. Producción comercial Selección de cepas Los métodos de selección utilizados deben permitir diferenciar las especies capaces de producir una enzima basándose en determinados medios de cultivo.. ya que su producción es mayor y más económica. ausencia de compuestos colaterales. junto con soja. Se usan sustratos de bajo coste. cacahuete. que necesitan altas temperaturas para crecer (70-90 oC). Los principales usos de las enzimas son: detergentes.

mejorando el color y el sabor. posteriormente. Las enzimas más utilizadas son: • Subtilisina (una proteasa). que hidroliza el almidón totalmente hasta glucosa. Se obtiene de Aspergillus niger y Penicillium. se estudian procesos usando Esclerichia coli o Kluyveromyces lactis. procedente de Bacillus subtilis y Bacillus licheniformis. edulcorantes y helados. cervezas y zumos por acción del oxígeno. respectivamente. Produce la proteolisis parcial de la leche. Elaboración de zumos. se obtenía a partir del rumen de los rumiantes. Se obtiene de Bacillus y Streptomyces. Se obtiene principalmente de hongos y Bacillus. que hidroliza la sacarosa en fructosa y glucosa. que conduce a la formación de la cuajada y. a diferencia de los fosfatos. que actúan sobre la pectina. • • • β-glucanasas.Aplicaciones Detergentes.. paa aumentar la eficacia del detergente para atacar manchas con componentes proteicos. Elaboración de vinos. Producción de quesos. Se obtiene de Kluyveromyces marxianus. Se trata de pectinasas. La enzima utilizada es la renina o quimosina. sobre todo. clarificando y licuando el zumo. • Glucoamilasa. Procesado del almidón Los hidrolizados de almidón se utilizan en alimentación como edulcorantes y en clínica. por lo que se usa para la fabricación de siropes y en las industrias cervecera y panadera. Eliminan los β-glucanos aparecidos en la fermentación de vinos procedentes de uva infectada por Botrytis cinerea. hemicelulasas. Los microorganismos permiten obtener enzimas de las mismas características que las animales. Se utilizan también distintas lipasas. • Lipasas. Se obtiene a partir de Aspergillus niger y Rhizopus.). Anteriormente. • Invertasa. Rhizomucor pusilis. que al degradar ácidos grasos generan compuestos que otorgan sabor a los lácteos.. que convierte la glucosa en fructosa. restos de pulpa. • β-galactosidasa. Industria papelera. debido a su mayor facilidad para la manipulación genética. Otras ventajas son la disminución de los costes energéticos (al requerir temperaturas menores) y su carácter biodegradable. Degradan la materia sólida presente en el caldo de fermentación del vino (pellejos. por lo que minimizan el impacto ambiental. y se usa para producción de siropes y chocolates. • Glucosa isomerasa. 33 . por lo que se usa en la fabricación de alimentos para personas no tolerantes a la lactosa. • Amilasas. Se usan proteasas principalmente. Se obtiene de Saccharomyces cerevisiae.. por lo que se usa para producir edulcorantes bajos en calorías y jarabes de alto contenido en fructosa (HFCS). aunque actualmente las utilizadas son más resistentes a la temperatura y el pH. al queso. Actualmente. Se usan celulasas. que degrada el almidón en glucosa. lo que permite reducir el impacto ambiental de esta actividad (se generan residuos muy contaminantes) y mejoran la textura y aspecto del papel. pectinasas y lipasas. Glucosa oxidasas evitan daños sobre vinos. Celulasas y glicosidasas. Aspergillus niger y Aspergillus oryzae. obteniéndose principalmente de hongos (Rhizomucor miehei. que degrada la lactosa en glucosa y galactosa. Se obtiene de Aspergillus niger y Penicillium. Los tipos de enzimas más utilizados son: • α-amilasa. uno de los principales componentes de la materia vegetal. maltosa y maltotriosa. Aspergillus niger y Aspergillus oryzae. Este uso de las enzimas comenzó en los 50. con uan producción bastante baja. Aspergillus nidulans o Aspergillus niger). Se usan para degradar los principales componentes de la madera.

para retirar el almidón. y aumentando la pureza. Celulasas se usan para dar el aspecto de lavado a la piedra de vaqueros. También son muy útiles para la obtención de productos farmacéuticos. pelado. Proteasas y lipasas se usan para el procesado de pieles: lavado. evitando la separación de mezclas quirales y compuestos colaterales. 34 . Síntesis orgánica. Se usan para la síntesis de compuestos quirales puros. al obtener productos estereoquímicamente puros.Industria textil • • • Amilasas y celulasas se usan en el tratamiento de tejidos vegetales. desengrasado y pelado.

Sus principales características son: • Presentan una baja toxicidad para el organismo. debido a que los microorganismos demandan una gran cantidad de oxígeno en la fase de crecimiento. la mayoría se obtiene por modificación química de productos microbianos. Esta etapa es importante. se le llama quimioterápico. Si el producto tiene el mismo efecto. • Investigación bioquímica. pero continúa siendo rentable por la ausencia de compuestos efectivos frente a ciertas especies patógenas. pueden aparecer mutaciones que otorguen a los microorganismos resistencia frente a la acción de los antibióticos. Biosintéticas. 3. Durante la 2ª G. debido a la capacidad de algunos antibióticos de controlar el crecimiento de las células tumorales. • La búsqueda de nuevos antibióticos es cada vez más difícil y costosa. 2. obtenidos por modificación química del producto microbiano. esto puede hacer más acusada la aparición de resistencias. se produjo un importante desarrollo. El proceso de síntesis más destacado es el de las penicilinas G y V. Recuperación del Penicillium chrysogenum esporulado y liofilizado. Penicilinas Se obtienen de cepas de Penicillium y Aspergillus. Sin embargo. la estructura activa principal de la molécula. caracterizadas por el aumento de la actividad por medio de la incorporación de grupos químicos al anillo central. lo que los dota de actividad frente a bacterias gram+ por inhibición de la síntesis de la pared celular. Se obtienen añadiendo precursores del grupo a incorporar al antibiótico en el caldo de fermentación. 3. por lo que son resistentes a este tipo de antibióticos. Naturales. disminuyen los rendimientos en la fase de producción. pero no es de origen microbiano.M. hongos (Aspergillus y Penicillium) y actinomicetos (Streptomyces). • Alimentación. ya que de ella depende el compactamiento o no del micelio: si el micelio es compacto. Los usos más típicos de los antibióticos son: • Control de actividades infecciosas: o En plantas. se clasifican en: 1. aparecen resistencias. obtenidas directamente de la fermentación microbiana. para selección de poblaciones. para evitar el deterioro de los alimentos. Antibióticos β-lactámicos Se caracterizan por contener un anillo de ácido β-lactámico. Fermentación. Se descubrieron accidentalmente hacia los años 20. no se suele usar porque es más factible y económico el uso de agroquímicos y fitosanitarios. realizada en dos etapas: 35 . fue Florey quien.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS Un antibiótico es una sustancia producida por microorganismos. • Presentan dos problemas acusados: 1. y derivada de su metabolismo secundario. Sin embargo. se están sustituyendo por bacteriocinas de origen microbiano. Por ello. por tanto. por lo que se impone una legislación restrictiva. 2. por lo que los efectos secundarios son inexistentes o muy leves. Los volúmenes de los biorreactores son pequeños. que se extiende rápidamente. crean menos resistencias. que son menos agresivas y. que ha ido ampliando el número de antibióticos conocidos. 2. Sólo 123 se obtienen actualmente por vía microbiana. los valores más usuales son un volumen de 40 a 200 m3 con una oxigenación de 0. Semisintéticos. capaz de inhibir el crecimiento de otros microorganismos en concentraciones relativamente bajas.5-1 vvm. Las principales especies productoras son bacterias (Bacillus). obtenidos por vía biosintética. Ciertas especies son capaces de sintetizar β-lactamasas. más tarde. Las características del proceso (discontinuo) son: 1. hasta llegar a los 8000 que se conocen hoy día. En condiciones ácidas no son efectivos. fecha en que Alexander Fleming descubrió la penicilina por contaminación de un cultivo de Streptococcus con Penicillium. • Control de tumores. En función de su origen. ya que hidrolizan el anillo. o En animales. se propuso investigarlos. Debido a las características reproductivas de los microorganismos. pero diferenciados por la cadena lateral (ácido fenilacético para G y ácido fenoxiacético para V).

por lo que su uso está restringido a casos concretos. Co. a. en su defecto. El proceso de producción es: 1. 36 . 2.. Nuevos productos Se obtienen por adición de compuestos que confieren protección al anillo frente a las enzimas. este compuesto confiere resistencia a la degradación. sulfato amónico y carbonato cálcico. Sus características son: • Son activos frente a gram. Aunque no es un antibiótico en sí. Antibióticos carbohidratados Los más destacados son los aminoglucosídicos (oligosacáridos unidos a aminosacáridos). El sustrato es principalmente: i. Se aplica durante 6 horas. su amplio espectro de aplicación. debido al alto requerimiento de oxígeno necesario (aunque es una especie anaerobia facultativa. Destaca el ácido clavulánico. Destaca la bacitracina. Se usa glucosa complementada con almidón o dextrinas y harina de soja. 5. sintetizados mayoritariamente por Bacillus y Streptomyces. respectivamente.por inhibición de la síntesis proteica. pH 6. b. y pueden causar daños en riñón y oído. glucosa o melazas y harina de soja. Cultivo de mantenimiento a 37 oC durante 18-24 horas. Se caracterizan por: • Son muy comunes: estreptomicina. Se pasa a reactores de 800 L con una fuerte agitación (proporciona oxigenación) con el mismo medio de cultivo.5-3. aunque se obtienen también de Paecilomyces.por inhibición de la síntesis de la pared celular. lo que permite aumentar la eficiencia o recuperar una actividad perdida por aparición de resistencias). Recuperación de las esporas.. aunque ahora se sigue un proceso más complejo. extracto de carne (complemento) y acetato amónico. ii. en fermentadores de 90 m3 durante 30 horas. lactosa y líquidos de maceración del maíz (o. Fase de crecimiento. extracto de levadura o suero). se usan derivados semisintéticos de 2ª y 3ª generación (una o dos modificaciones químicas. Su principal característica es. pero se usa como sustrato sacarosa. Streptomyces (el más usado actualmente) y Nocardia. Prefermentación. El proceso de producción es: • El sustrato es glucosa y sacarosa. Fermentadores de 150 m3. seguida de otra de producción de 90-160 horas. 4. con una fase de crecimiento de 90 horas con alta aireación. 28-30 oC y pH neutro durante 4-7 días.4. 1. Se obtiene de Streptomyces clavuligerus. En la actualidad. Durante 120-160 horas.4 y ácido fenilacético (G) o fenoxicético (V). harina de soja. 0. 3. . Producción. Se usan recipientes de 1 L con sólo 200 mL de medio líquido (peptonas). o sea. • La fermentación se produce a 24-28 oC y pH 7. manteniendo su actividad o reforzándola. Fermentación con el mismo sustrato anterior (con el doble de glucosa). usado con la amoxicilina. • Son específicamente activos frente a gram. Se aporta un gran volumen de oxígeno durante unas 40 horas. producida por Bacillus licheniformis en procesos de superficie antiguamente. • Son tóxicos. además de su similitud con las penicilinas. Extracción del producto con acetato de amilo o acetato de butilo. Segunda prefermentación. • Son tóxicos. • Desarrollan resistencias rápidamente. además de NaCl. 2. Zn o Mn. según el antibiótico. Se efectúa en reactores de 3000 L. Antibióticos peptídicos Destacan los lineales y cíclicos. líquidos de maceración del maíz.5-1 vvm oxígeno. capaz de crecer anaerobiamente). Cefalosporinas Se descubrieron primero en Cephalosporium acremonium. a 0 oC y pH de 2.

aceites o almidón. • El proceso es aerobio y sumergido. aureofaciens. Son activos frente a gram+ y gram. lo que les da su carácter hidrofóbico y básico. sulfato amónico. pero puede causar lesiones en la médula ósea. Antibióticos aromáticos Cloranfenicol Es muy activo y eficaz. pero no la replicación del DNA. Destaca la eritromicina. cloruro sódico y carbonato cálcico. aunque actualmente se usa más S. por lo que se separa por columnas de intercambio iónico. se obtienen por procesos biosintéticos.por inhibición de la síntesis proteica. El proceso de producción es: • El sustrato es glucosa. con nitrato de sodio y cloruro potásico.5. Por lo general. Sus usos más destacados son: • Tratamiento de las salmonelosis. Actúan inhibiendo la síntesis de proteínas. con excepción de la eritromicina (33 oC). pero son poco demandados porque se prefieren las penicilinas de tercera generación. Es importante limitar el fosfato en el medio. Tiene un amplio espectro de aplicación. El producto es extracelular. Griseofulvina Es uno de los pocos antibióticos efectivos contra hongos. Tetraciclinas El primero descubierto fue la tetraciclina. por lo que su uso está restringido. ya que detiene la traducción. se separa por adición de ácido sulfúrico hasta pH 2-2. se efectúan a pH básico durante 3-7 días a temperaturas de 25-28 oC. evitando el crecimiento de las bacterias. El proceso se efectúa durante 7-9 días. Si está adherido a las células. aunque se puede emplear extracto de levadura. El sustrato es rico en glucosa. a 25 oC. • En medios de cultivo para hongos. pH neutro y 1 vvm. Se obtiene de Penicillium patulum por procesos aeróbicos. descubierta de Streptomyces viridofaciens. • Por lo general. harina de soja. La producción se efectúa en fermentadores agitados de 150 m3 con glucosa o almidón y alta oxigenación (1vvm) durante las primeras 12 horas. Antibióticos macrolídicos Contienen un anillo lactónico. usando Streptomyces erithreus. ya que actúa como inhibidor. 37 . debido a que detiene el proceso de traducción (síntesis de proteínas).3. • En biología molecular. Son eficaces frente a gram+ y son poco tóxicos.

38 . La enfermedad no sea causada por la actividad de las células. una enfermedad similar pero que afectaba a las vacas. El principal inconveniente es la posibilidad de aparición de reacciones (más leves que en vacunas vivas). ya que sólo se requiere de ellos su material genético. presenta ciertas dificultades importantes: • No se pueden obtener grandes cantidades de producto. Sin embargo. Evita riesgos para el personal de producción. obteniendo dichas subunidades de las proteínas. Vacunas de subunidades (técnicas de ADN recombinante) En muchos casos. lo que origina una modificación de la estructura original. sino una parte de su estructura (por lo general. por efectos colaterales de otras sustancias. Consisten en células muertas o proteínas tóxicas (toxoides) desactivadas. proteínas. Vacunas muertas. 2. Esto supuso la aparición de una idea intuitiva de inmunización frente a la viruela por padecer dicha enfermedad. sería posible provocar la respuesta inmune sin necesidad de inocular el microorganismo entero. Ésta también puede producirse si se introducen otras especies patógenas (sobre todo en vacunas víricas. que consisten en un híbrido entre una célula tumoral y otra de un tipo determinado. • Las proteínas obtenidas no son suficientemente activas. 3. La utilización de las vacunas presenta ciertas ventajas frente a los quimioterápicos. Métodos de producción Sistemas tradicionales Consisten en la obtención de la vacuna mediante el cultivo del patógeno. debido a que no es necesario manipular organismos patógenos vivos. • En las vacunas vivas existe el riesgo de la reversión (recuperación de la capacidad patógena). • En las vacunas muertas. b. debido a que es más barata su aplicación en masa para prevenir que la de los quimioterápicos para curar. de efectos más leves. Presentan un importante inconveniente: el acceso del patógeno al organismo puede desencadenar la enfermedad si. lo que facilita que su estructura se acerque a la real). Se pueden obtener mejores resultados que con las tradicionales. Permite obtener vacunas para patógenos que no se pueden cultivar en laboratorio. Son células con la capacidad patógena atenuada. debido al rápido y constante crecimiento del hibridoma. sino por alguna sustancia de su estructura. Esto supone una alta concentración de proteína activa (ya que se genera en el interior de una célula viva. se recurre al uso de hibridomas. recupera su capacidad patógena. Para evitarlo. donde la contaminación es muy difícil de controlar) o el hospedador presenta inmunodepresión (sistema inmune débil). lo que ocasiona la enfermedad. las endotoxinas de las bacterias gram.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE VACUNAS Fueron descubiertas por Jenner hacia el siglo XIX por estudios de incidencias de la viruela en personas afectadas de vacuna. no en laboratorio. como por ejemplo los lipopolisacáridos de las bacterias gram-. Vacunas vivas. y además permiten controlar la enfermedad de una forma mucho más eficaz. la capacidad para provocar la respuesta inmune no es la célula completa. Esto se debe a que las proteínas obtenidas presentan plegamientos inadecuados. debidas a: a. debido a la baja traducción del material genético patógeno. 2. El fundamento de estas vacunas es que. Posibilidad de que no todas las células estén muertas.pueden provocar reacciones. por alguna razón. de una o varias subunidades). 1. Los principales problemas de estos sistemas son: • No todos los patógenos se pueden cultivar en laboratorio. debido a que el sistema inmunitario del hospedador sea demasiado sensible o el microorganismo esté poco atenuado. obtenidas bien por conservación durante largo tiempo o por cultivo en medios no apropiados. pudiendo incluso erradicarla. Este método presenta ventajas: 1.

• Es difícil producirlos en grandes cantidades.• En ocasiones. al ser una secuencia pequeña. dada la alta especificidad que se requiere para su identificación. generando una mayor respuesta inmune. Esto favorece la multiplicación del antígeno. Presenta. y por otro lado. ii. se usan hibridomas de linfocitos B. En muchos casos. es difícil que los epítopes adquieran la estructura necesaria sin interaccionar con otras estructuras (con las que interacciona al ser sintetizado por una célula). Sin embargo. que permiten situar la proteína en una zona específica de la célula. denominada epítope. se puede construir. como secuencia de aminoácidos. Éstas. un adyuvante es una sustancia que favorece la acción de otro compuesto). Tembién se puede aportar el antígeno usando un virus o bacteria atenuados. varios problemas: • La identificación del epítope es compleja. ya que la unión entre ambas estructuras está más favorecida. generan una escasa respuesta inmune. Para ello. Vacunas peptídicas Por lo general. vuelve a presentar el inconveniente del trabajo con patógenos vivos. Éstos son sustancias portadoras del antígeno (en general. Por un lado. Para paliar este efecto: i. 39 . sino por una pequeña secuencia peptídica. con la evidente ventaja de la reducción de los efectos secundarios por la inoculación de la vacuna. Tembién se recurren a perfiles de hidrofobicidad. que reconocen el antígeno e inician la síntesis de anticuerpos monoclonales. por lo que no constituyen una vacuna efectiva. Aumento de la concentración de antígenos. sin embargo. mediante el uso de adyuvantes. lo que permitiría generar la respuesta inmune sin necesidad de usar el antígeno completo. corta y débil. es muy sensible frente a las mutaciones. el sistema inmune reconoce a los patógenos no por una estructura completa. se usan estructuras del propio patógeno.

Inicialmente se obtenía de cadáveres humanos. Fue el primer producto obtenido por métodos de ADN recomibnante aprobado para su empleo terapéutico. lo que disparaba el precio. pero sometidos a patentes farmacéuticas. Eritropoietina (EPO) Es una hormona glicoproteica producida en el riñón que interviene en la producción de eritrocitos. y su abuso un aumento (problemas de “dopping” en deportistas). Los preparados comerciales son muy específicos y eficaces (pulmozina de Genentech). El proceso de producción consiste en la producción de las subunidades proteicas que la componen por hospedadores diferentes (Saccharomyces cerevisiae. se tuvo que introducir en su genoma la maquinaria necesaria para ello. 40 . disminuyendo la viscosidad de la mucosidad. producida en la glándula pituitaria y usada en casos de enanismo por déficit hormonal y en enfermedades relacionadas con el envejecimiento. carecen de efectos secundarios (es prácticamente idéntica a la proteína humana) y se puede obtener en altas cantidades. Tradicionalmente.. en 1981. Su carencia origina la diabetes. provocada por priones y asociada al canibalismo (ingesta de cerebro humano. relacionada con el metabolismo de la glucosa y la regulación de su cantidad en sangre. pero ciertas enfermedades pueden disminuir la producción de dichas proteínas. generando enfermedades. DNAsa Es una enzima capaz de degradar el ADN. coli) y de forma separada. se usaba isulina de origen animal (ovejas y cerdos). se obtuvo de animales. Éste aumenta la viscosidad y densidad de la mucosidad. • Hay indicios de asociación con la enfermedad de Creutzfeld-Jakob (encefalopatía espongiforme). con la consiguiente liberación de su ADN. genera el aumento de la producción de mucosidad. pero presentaba problemas: • Se requerían muchos cadáveres para tratar un solo paciente. se combinan químicamente las subcadenas independientes. y se usa para tratar enfermedades que causen inmunodepresión (cáncer. Usando recombinación genética sobre Escherichia Coli (por transformación con un plásmido que contiene el ADN de la hormona). Actualmente se investiga su producción con otras especies (Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa). con dos problemas principalmente: su producción era escasa (lo que las encarecía) y suelen provocar efectos secundarios.) anemias e infecciones renales que afecten a su producción. de diferente gravedad según el órgano afectado.. Posteriormente. se usaban proteínas obtenidas de origen animal. pero daban problemas de abastecimiento (baja producción) y de pureza (por lo que solían producir efectos secundarios). Su carencia genera la caída del número de glóbulos rojos. usada en el tratamiento de la fibrosis quística. se obtiene una somatropina idéntica a la humana (sólo se diferencian en un aminoácido). pero se obtenían bajas eficacias. proveniente de información genética humana). al basarse en genes humanos. Anteriormente. En los pulmones. Insulina Es una hormona polipeptídica producida por el páncreas. sida. Somatropina Es la hormona del crecimiento. con la consiguiente transmisión del prión). creándose un círculo vicioso. Tras la síntesis. La DNAsa actúa hidrolizando el ADN liberado. Las proteínas obtenidas. Con las técnicas de ADN recombinante. se posibilitó la producción microbiológica de proteínas humanas (ya que los microorganismos no las producen naturalmente. el sistema inmune responde destruyendo las células. Ante ello. E.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA TERAPÉUTICAS DE PROTEÍNAS Las proteínas terapéuticas son producidas de forma natural por el organismo humano. taponando las vías respiratorias y favoreciendo las infecciones.. La fibrosis quísteca es una enfermedad genética degenerativa. el caso más grave. Se obtiene mediante técnicsa de ADN recombinante.

coli. trombosis y contusiones. En humanos. como leucemia.Interferón Es una proteína de la familia de las citoquininas que itnerviene en la regulación de la respuesta inmune. como ataques cardiacos. Se comercializa desde 1987. en concreto. usado en casos de hepatitis C y tumores. Se obtienen también de Escherichia coli. Los interferones β y γ. Actualmente. 41 . Interleuquinas Son un grupo de citoquininas formado por 15 sustancias distintas. 2. Activador del tejido plasminógeno Es una proteína constituyente del complejo implicado en la dilución de coágulos sanguíneos. Colágeno Se usa en suturas quirúrgicas. para tratar enfermedades con riesgo de bloqueo de vasos sanguíneos. Sólo una está comercializada actualmente. cáncer renal. y se usa en el tratamiento de carcinomas renales. mieloma múltiple o tumor genital. existen tres tipos diferentes. embolias. usados en procesos de esclerosis múltiple (el primero) y otros cánceres (el segundo). aunque hay procesos en investigación de producción con levaduras (Pichia augusta y Pichia pastoris) que eviten los riesgos de contaminación por virus y priones. se obtiene de cadáveres y vacas. que al transformarse en plasmina destruye la fibrina que mantiene unido el coágulo. Se obtiene de E. melanoma. usados en enfermedades que debilitan el sistema inmunitario: 1. activa el plasminógeno. El interferón α.

• No es dependiente del clima ni la estación. 1.). Residuos de otras industrias (residuos agrícolas. • Tolerancia al pH y la temperatura. se está recuperando. • Su degradación exija poca oxigenación. que puede generar enfermedades por acumulación). • Posibilidad de alteración genética y selección de cepas de forma relativamente sencilla. • El producto es. El producto en sí es una torta compacta de células muertas completas. generación de calor y formación de espuma. Alcoholes. Producción de proteína unicelular Las características más destacables del producto son: • Rápida velocidad de crecimiento y elevada productividad. • Alto contenido proteico (30-80%). en general. 2. perfil aminoacídico. pero son más sensibles frente al pH (prefieren pH neutro). se siguen los siguientes criterios: • Baratos • Alta producción de biomasa. que se transforman en ácido úrico. aroma. Sustratos Aunque son muchos los sustratos que pueden utilizarse. Las características de los microorganismos usados son: • Crecimiento a partir de sustratos de muy bajo coste. • Facilidad para la recuperación de las células. lo que se explica teniendo en cuenta que su origen no fue la obtención de la SCP. sueros lácteos o la industria maderera).. muy empleados al principio. especies aeróbicas (los fermentadores son más baratos). pero presentan problemas durante el proceso. color. de alta calidad. además del contenido en ácidos nucleicos: 1. Se prefieren. sino el tratamiento de residuos contaminantes. lo que. disminuye los riesgos de contaminación. En ciertos hongos (Aspergillus. 2. Es necesario eliminar las sustancias tóxicas y/o cancerígenas que pudieran generarse en el proceso. • Buenas características de requerimientos de oxígeno. pero después fue más rentable usar residuos de otras industrias. • Estructura y composición del producto final: contenido proteico. así como ingrediente de piensos animales. • Ocupación de suelo baja. textura y (muy importante) nivel de ARN (la degradación de los ácidos nucleicos genera purinas. Usa residuos de otras industrias como sustrato. sobre todo. de alto contenido proteico (de ahí el nombre). A la hora de buscar nuevos sustratos. • Estabilidad genética. Actualmente. 42 . con el fin de reducir los problemas ambientales que podrían causar. en países en vías de desarrollo y como complemento dietético. regular la presencia de aflatoxinas. sobre todo. Los problemas a subsanar de este tipo de productos son. • Capacidad para utilizar una amplia variedad de fuentes de carbono. • Las levaduras son de crecimiento más lento. cultivos iniciadores par alimentación (levaduras para panadería) y consumo humano (poco extendido en occidente).. sabor. y cada grupo microbiano presenta sus ventajas e inconvenientes: • Las bacterias son de crecimiento más rápido. además.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE SCP Se usa principalmente para la producción de piensos animales. pero pueden trabajar a pH ácido. • Los hongos son los qua más fácil se recuperan del cultivo.. se elige el más adecuado en función del precio de éstos. • Se aplica desde los 70.

partiendo . Bel . metano proporcionan el sustrato.Destinado a la producción de piensos.55 g por g de lactosa. y se destina a la producción de piensos. Los biorreactores utilizados son pequeños. ambientales de los residuos de patata.El sustrato contiene gran cantidad de almidón. utiliza Candida utilis (levadura).Desarrollado en Suecia. seguidos de tratamientos para reducir el contenido en ácidos nucleicos (choque térmico y adición de RNAsa) y acondicionamiento (pasteurización. En general. el único destino de este ICI .Las condiciones de fermentación son: humano y animal Biorreactores de 22 m3. pero hay pocas plantas industriales. El Con campos de gas del Mar del Norte más utilizado es Methylococcus capsulatus. las etapas de estos procesos son: 1. producto contiene un 59 % de proteínas. humano. 3.El inconveniente del Fusarium es su alto producto. Se efectúan procesos de filtración y purificación. mejora de la eficacia. Aireación de 1700 m3/h. que que Candida no puede degradar. Fácil eliminación de compuestos tóxicos.Parte de suero lácteo con Kluyveromyces lactis o K. lo que favorece la no necesidad de utilizar cambiadores de calor. . deshidratación y empaquetado). influencia del CO2 o la presión hidráulica. . Procesos de producción Existe una gran cantidad de plantas piloto. El primer proceso con hongos.Se debe ajustar el contenido en lactosa del sustrato a 34 g/l.• • No generen calor al degradarse. Su producción se efectúa en discontinuo: 1. Los liófilos se recuperan en medio sólido. Producción de levadura para panadería El iniciador en los productos de panadería es Saccharomyces cerevisiae. . disminuyendo el coste. principalmente arqueas.Los microorganismos metanógenos son sólo Importante en Noruega. y complementarlo con La SCP obtenida se destina a consumo minerales.El producto contiene un 70 % de proteínas. marxianus. . debido a que surgen problemas de escalado por la diferencia de condiciones: requerimientos de oxígeno. el Finlandés de residuos de papeleras y madereras. contenido en ARN. aparición de gradientes térmicos y nutricionales. 38 oC y pH de 3. disminución de los costes de purificación o acoplado de procesos secundarios pueden contribuir a la extensión de estos procesos. .45 y 0. lo que exige un Symba necesitan un alto consumo de oxígeno tratamiento previo con Saccharomyces fibuligera. . 2. manteniendo las condiciones límite (óptimas) de crecimiento del organismo.Se efectúa en condiciones asépticas y con nutrientes de grado alimentario. Es uno de los pocos procesos que operan en continuo.Se produce entre 0. . incremento del valor nutricional del producto. Aplicación de tratamientos previos al sustrato para su adecuación. .Se emplea Fusarium venenatum por sus El primero aprobado para el consumo características de estructura y textura. donde los unas pocas especies.Se obtiene un producto con un 45 % de proteínas y el poder contaminante del sustrato se reduce un 90 %. El empleo de sustratos más económicos. Se utiliza para disminuir los efectos .5. para degradarse. lo que obliga a la realización de un tratamiento de eliminación a 64 oC durante 30 minutos. Los procesos más comunes son: . lo que también repercute en el precio. y por medio de un proceso de escalado en diferentes etapas (hasta 8) se llega a los cultivos líquidos. 43 .

lo que lleva a la producción de sabor y aroma. • Altos niveles de osmotolerancia.5). 44 . Se efectúa a pH ácido (4-4. desecado y conservación en refrigeración. 3. 4. Las células se purifican por centrifugación. lavado. enfriado (2-4 oC). Se requiere un gran aporte de oxígeno. Las características principales del producto son: • Elevado poder glicolítico (capacidad para procesar azúcares). 2. 5. • Alta generación de CO2.El sustrato utilizado son principalmente melazas provenientes de industrias azucareras. durante media hora tras finalizar el proceso para adecuar las características de la célula (proceso de maduración). complementadas con compuestos nitrogenados (principalmente. así como sales minerales. • Perfil metabólico adecuado. sales de amonio) y aminoácidos (que a su vez actúan como factores de crecimiento).

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