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UNIVESIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLAS DE HIDALGO FACULTAD DE QUIMICO FARMACOBIOLOGIA

ANTÍGENO ´Hµ FLAGELAR DE SALMONELLA ENTÉRICA

INTRODUCCIÓN
Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula (excepto la especie S. typhi) ni esporas. Son bacterias móviles que producen H2S. Fermentan glucosa, pero no lactosa, y no producen ureasa. Tiene una estructura antigénica con tres tipos de antígenos: 1. Antígeno somático (O) 2. Antígeno flagelar (H) o (d) 3. Antígeno capsular o de envoltura (Vi) o (K) (específico para Salmonella typhi, dublin, y paratyphi C)

FUNDAMENTO ANTÍGENOS PARTICULADOS .

la diferencia radica en que en este caso el Ag no es soluble sino particulados. la diferencia entre una reacción negativa. sedimentará.AGLUTINACIÓN Los principios son los mismos que en la precipitación. . se formen o no los agregados. donde lo que vemos en el sedimento es sólo el Ag y una positiva. donde se forman los complejos. esta dada por la característica visual del sedimento que. La formación de las redes dará como consecuencia agregados en forma de grumos en el fondo del tubo. El Ag no se encuentra en solución sino en suspensión y al ser una partícula grande. en el primer caso será un botón homogéneo de células y en el segundo serán grumos.

SEMICUANTITATIVA Esta técnica se realiza normalmente en microtubos o placas de fondo en U y consiste. en colocar concentraciones constantes de uno de los reactivos en contacto con concentraciones variables del reactivo a determinar. . al igual que en el caso de la precipitación.

asimismo cada antígeno puede unirse a varios anticuerpos y formar un entramado de complejos antígeno-anticuerpo.Recordemos que« Las reacciones antígeno-anticuerpo tienen diversas consecuencias y existen varios tipos de reacciones: Relación de Aglutinación En las reacciones de aglutinación. . un anticuerpo puede unirse a la vez a dos antígenos.

TÉCNICAS .

Todos los pocillos contienen una suspensión antigénica celular.AGLUTINACIÓN EN MICROPLACA Sirve para determinar el titulo de anticuerpos. Si existen anticuerpos suficientes como para aglutinar las células. En las diferentes filas(A-H) se han añadido volúmenes iguales de diluciones dobles seriadas del suero problema. el entramado cae al fondo del pocillo a modo de película. NUMERO DE POCILLO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 DILUCION 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 Testigo antisuero Testigo antígeno .

debe incubarse en estufa a 37°C durante 48 hrs.AGLUTINACIÓN EN TUBO Es una prueba lenta. 1/8. Si se observa un aglutinado en el fondo del tubo y liquido claro es una reacción negativa.1/4. CONSIDERAR QUE: todos los tubos tienen el mismo volumen de antígeno y que las diluciones del suero son: ½ . ya que luego de mezclar en el tubo la suspensión del antígeno con el suero. 1/16«1/1024. .

METODOLOGÍA .

) *Agregar formaldehido a una concentración final del 0. 24-48 hrs.PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO FLAGELAR * Inocular 100 ml de caldo de soya tripticasa con la cepa de Salmonella entérica incubar (37°C / 18-24 hrs.) *Cosechar el cultivo por centrifugación a 3000 rpm/ 30 min. . (T°Amb.3%.

*En vasar la suspensión en un frasco ámpula esteril y mantenerlo en refrigeración. Salina formalinizada al 0.3 del nefelómetro de Mcfarland). Incubar a 37°C /24 hrs. .3% (igualar la turbidez con el tubo No. (Sembrar en caldo de soya tripticasa). *Probar la esterilidad del producto biológico.PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO FLAGELAR *Desechar sobrenadante y resuspender el sedimento bacteriano en sol.

OBTENCIÓN DEL SUERO TESTIGO .

5 ml 1 ml 2 ml 3 ml 3 ml 10 ml . Aplicación 1 2 3 4 5 Sangrado Dias 0 4 8 12 16 18 Fecha 5/10/2010 10/10/2010 14/10/2010 18/10/2010 27/10/2010 3/11/2010 Dosis 0.INMUNIZACIÓN DEL CONEJO Se realiza en las venas. las cuales están representadas en el borde exterior de la oreja del conejo. se tiene varias opciones para poder inocularlo.

OBTENCIÓN DEL ANTISUERO *Obtener de 10 a 50 ml de sangre del corazón *Separar suero (centrifugar a 3000rpm/10´). *Utilizar el antisuero para realizar la titulación correspondiente .

OBSERVACIONES Y RESULTADOS .

2ml Testigo antigen o 0.2ml 0.2ml 0.2ml SALINA 0.2ml 0.2ml 0. Y refrigerar por otras 24 hrs mas Reportar el titulo de suero hasta el ultimo tubo que se forme la malla en el fondo. .2ml 0.2ml 0.2ml SOLN.2ml 0.2ml 0.2ml ANTIS UERO 0.2 ag bact Incubar a 37ºC por 24 hrs. los títulos mayores a 1:64 se consideran representativos.REACCIONES DE AGLUTINACIÓN EN TUBO 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 DILUCION 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 TESTIG O antisue ro 0. 0.2ml 0.

TUBO 1 TUBO2 .SE OBTIENE«.

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SÓLO CAMBIA LA CANTIDAD: 50 MICROLITROS.AGLUTINACIÓN EN MICROPLACA SE REALIZA EL MISMO PROCEDIMIENTO. .

MICROPLACA .

revistaapi.salonhogar.com/ciencias/organismos/inmun idad.html .mx/books?id=MfW3TuHLa4g C&pg=PA226-IA15&lpg=PA226IA15&dq=aglutinacion+en+microplaca&source=bl&ots =4m69MJRSyG&sig=PcNlDVsc19Zqulvu1mtfzhc5DUo& hl=es&ei=7cDmTM3aH5K24Ab5pt34Ag&sa=X&oi=bo ok_result&ct=result&resnum=3&sqi=2&ved=0CCYQ6A EwAg#v=onepage&q&f=false http://www.com.com/2%20edicao%202006/pd fs/mat%2006.google.pdf http://www.REFERENCIAS ‡ ‡ ‡ http://books.

PRESENTARON: GUTIERREZ FRAZCO ELVIA MARIA MADRIGAL BEDOLLA SELENE YUNUÉN MALDONADO CIANCA PAULINA OCAMPO CATALAN LILIBET PEREZ CEBALLOS ELIZABET CICLO ESCOLAR AGOSTO 2010-FEBRERO 2011 .