Hibridación In Situ Fluorescente

Características generales y aplicaciones en Citogenética

y

Técnica molecular usada en la detección de secuencias de ADN o ARN específicas, mediante fluoróforos. el uso de anticuerpos y

FISH

Células Metafásicas FISH Células Interfásicas

En células metafásicas .

En células metafásicas .

En células metafásicas .

En metafase .

En l l nt rf i .

.

Painting cromosómicon (M ± FISH) .

Inmunodetección Directa .

Inmunodetección indirecta .

ARN o PNA¶s (ácido nucleico péptido) unidos a moléculas marcadoras. ¿Qué es una sonda? .y Una sonda es un fragmento monocatenario de ADN. en un proceso de hibridación. y Se emplean para el reconocimiento específico de un segmento determinado del ácido nucleico de cadena sencilla.

Desde oligonucleótidos a megabases. Tipos de sondas .Fragmentos de ADN - Fáciles de hacer. (cinética y propiedades). Mejor caracterizadas Gran disponibilidad.

Fragmentos de ARN - (ribosondas) No necesitan denaturación inicial. Son muy inestables. Desde oligonucleótidos a varios kilobases. Tipos de sondas . Hibridizan mejor que las sondas de ADN.

Hibridizan regiones envueltas en estructuras secundarias. - Hibridizan mas rápido que las sondas ADN.PNA¶s - Bases nitrogenadas unidas entre sí por enlaces peptídicos. - Poseen solubilidad baja y se producen de forma sintética. Tipos de sondas .

y y y NICK ± TRANSLATION RANDOM PRIMER EXTENSION OLIGONOCLEOTIDES PROBES Tipos de marcaje de sondas .

Longitud del fragmento marcado: 200 ± 500 d NTP Marcaje de SONDAS ³Nick translation´ translation´ .

Longitud del fragmento marcado: 200 ± 2000 d NTP Marcaje de SONDAS ³Random primer extension´ extension´ .

(TdT) Marcaje de SONDAS ³Marcaje de oligonucleótidos´ .

Peroxidasas) Quimioluminiscentes (ésteres de acridina) Moléculas marcadoras . 35S) De afinidad (Biotina. Digoxigenina) Enzimáticas (Fosfatasas.y y y y Radiactivas (32P.

Elaboración de una sonda .

Menor especificidad 16 bases Mayor especificidad 500 bases = límite máximo Longitud de una sonda .

Moléculas Marcadoras (Digoxigenina. Bioina) Sonda FISH .

Realización de FISH .

y Moléculas emitir luz que pueden de visible longitudes de onda de diferente naturaleza. Fl r r .

Fluorocromos .

Proteína que por oxidación y ciclación. sufre un cambio conformacional permitiéndole emitir fluorescencia. El lugar específico corresponde al tripéptido Ser ± Tir ± Gli. Green Fluorescente Protein .

temperatura de hibridación) ¿Qué factores afectan a la sensibilidad y especificidad de la reacción de hibridación? . -Condiciones de hibridación (pH.Actividad específica de la molécula marcadora.Concentración de la sonda.Complementariedad sonda-ácido nucleico.Concentración del ácido nucleico. ..Longitud de la sonda . . . fuerza iónica.

FISH Translocación 9.22.8 Telómeros . Cromosoma Filadelfia en la leucemia mieloide crónica Translocación 4.

XX.46.3) Cromosoma 1 derivado con material extra .der(1) t(1:12) (q43.p13.

XY. +psu idic(15) (q11) +psu idic(15) Cromosoma 15 isodicéntrico adicional .47.

FISH de regiones centroméricas (sondas alfoides) alfoides) .

Daltonismo -Ocasionalmente se ven anomalías cardíacas y convulsiones cereberales. Síndrome de Kallman .Cuarto metacarpio corto .Paladar hendido y labio leporino Ausencia de pubertad .Autosómica dominante y No hay secreción de GnRH del hipotálamo y y Síntomas: .Deficiencia olfatoria (hiposmia o anosmia) .

ADN + Sonda + Digoxigenina denaturación Incubación en: -Anti-digoxigenina -Anti-fluoresceína peroxidasa CISH (Hibridación In Situ Cromogénica) Cromogénica) .

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