CAPÍTULO 2.5.4.

ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

RESUMEN
La anemia infecciosa equina (AIE) está causada por un lentivirus. Se puede diagnosticar en base a los signos clínicos, lesiones patológicas y serología. Los caballos infectados continúan siendo portadores del virus de por vida y darán un resultado serológico positivo. Generalmente, la respuesta de los anticuerpos es persistente, y los animales con anticuerpos positivos mayores de 6 meses, se identifican como portadores de virus (en los menores de 6 meses, las reacciones serológicas pueden deberse a los anticuerpos maternales). Los animales infectados pueden transmitir la infección a otros caballos. Identificación del agente: Se puede aislar el virus en un caballo enfermo inoculando sangre sospechosa a un caballo susceptible o a los cultivos de leucocitos preparados a partir de caballos susceptibles. El reconocimiento de la infección en los caballos que han sido inoculados experimentalmente se puede llevar a cabo en base a signos clínicos, a cambios hematológicos y a una respuesta positiva de anticuerpos determinada por una prueba de inmunodifusión o por un enzimoinmunoensayo (ELISA). El aislamiento eficaz del virus en los cultivos de leucocitos de los caballos se confirma mediante la detección del antígeno específico contra la AIE por la prueba de inmunofluorescencia, la reacción en cadena de la polimerasa, la prueba RTA (reversetranscriptase assay) o por la inoculación de fluidos de cultivo en caballos susceptibles. Raramente se intenta el aislamiento del virus debido al tiempo, la dificultad y los gastos que conlleva. Pruebas serológicas: Las pruebas de inmunodifusión en gel agar (AGID) y ELISA son pruebas simples y fiables para demostrar la infección por AIE. Cuando las pruebas ELISA son positivas deben confirmarse mediante la prueba AGID. La precipitación del antígeno se puede preparar a partir de cultivos de tejido infectados utilizando la tecnología del ADN recombinante. Requisitos para las vacunas y los materiales de diagnóstico: No existen actualmente productos biológicos disponibles.

A. INTRODUCCIÓN
La anemia infecciosa equina (AIE) se presenta en todo el mundo. La infección se limita a los équidos. La enfermedad se caracteriza por episodios febriles recurrentes, anemia, pérdida de peso y edema de las partes bajas del cuerpo; tiende a convertirse en una infección asintomática sino se produce la muerte en el curso de los ataques clínicos agudos. Normalmente, el período de incubación es de entre 1 y 3 semanas, pero puede prolongarse hasta 3 meses. En casos agudos, los nódulos linfáticos, el bazo y el hígado se agrandan y se vuelven hiperémicos. Desde el punto de vista histológico, estos órganos están infiltrados con poblaciones de leucocitos inmaduros y de células plasmáticas. Las células de Kupffer, del hígado, generalmente contienen hemosiderina o eritrocitos. Se puede detectar hipertrofia del bazo mediante un examen rectal. Cuando el virus AIE infecta a un caballo, su sangre permanece infectada durante el resto de su vida. Ello significa que el caballo es un portador virémico y que puede transmitir la enfermedad a otros caballos (4). La transmisión se realiza por transferencia de la sangre de un caballo infectado. En realidad, es más probable que la propagación del virus se lleve a cabo por la interrupción de la alimentación de los tábanos que chupan la sangre a caballos clínicamente enfermos y luego pasan a caballos sanos susceptibles, o mediante la utilización de agujas contaminadas. Sin embargo, lo que sí se da es la infección in utero de un feto (8). El título del virus es más alto en caballos con signos clínicos y el riesgo de transmisión es más elevado desde estos animales que desde animales portadores con un título de virus inferior.

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Las comparaciones de secuencias de ácido nucleico han demostrado una relación estrecha entre estos virus. Generalmente. a un caballo que ha sido previamente examinado en busca de anticuerpos y da un resultado negativo. ésta se utiliza para confirmar los ELISA positivos. y permite una mejor estandarización de los reactivos. el antígeno AGID y el suero de referencia se pueden preparar como se describe a continuación. • Preparación del antígeno El antígeno específico para la AIE se puede preparar a partir del bazo de caballos infectados experimentalmente con enfermedad aguda (6). En otras circunstancias poco frecuentes. y si la cantidad inicial de anticuerpos nunca aumenta lo suficiente para que éstos sean detectables (16). Aunque con el ELISA se detectan los anticuerpos en concentraciones bajas antes que con la prueba AGID. artritis y encefalitis caprina. los caballos presentarán reacciones serológicas negativas.Capítulo 2.5. Apenas se intenta el aislamiento del virus debido a la dificultad para obtener cultivos de leucocitos de caballos. excepto para los animales que están en las primeras etapas de la infección. La prueba AGID tiene también la ventaja de distinguir entre la anemia infecciosa equina y las reacciones de los anticuerpos antígenos de AIE mediante líneas de identidad. Alternativamente. La preparación del antígeno a partir de cultivos infectados o mediante la técnica de ADN recombinante. se le debe realizar inmediatamente una transfusión de sangre del caballo sospechoso y debe controlarse el estado de sus anticuerpos y sus condiciones clínicas durante al menos 45 días. del cultivo de tejidos de caballos infectados (10). una subfamilia del Retroviridae. — Anemia infecciosa equina B. Cuando no se puede confirmar el estado exacto de la infección de un caballo. en las primeras 2–3 semanas después de la infección. Esto es debido a que los resultados falsos positivos han sido detectados con ELISA. Se ha descrito una prueba de la reacción en cadena de la polimerasa anidada. Están disponibles comercialmente reactivos para AGID de diversas compañías. En este caso. 1. pueden obtenerse resultados equívocos cuando la cantidad de virus que circulan en la sangre durante un episodio agudo de la enfermedad es suficiente para hacer que disminuya la cantidad de anticuerpos disponibles. no es necesario el aislamiento del virus para realizar un diagnóstico. a) Prueba de inmunodifusión en gel de agar (prueba prescrita para el comercio internacional) Los anticuerpos precipitantes se producen rápidamente como resultado de la infección por la AIE y se pueden detectar mediante la prueba AGID. en algunos casos.4. Identificación del agente Generalmente. Generalmente. 734 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004 . debería realizarse la inoculación de un caballo susceptible con sangre sospecha. proporciona un resultado más uniforme que utilizando las células del bazo. Se puede aislar el virus en caballos sospechosos inoculando su sangre en cultivos de leucocitos preparados a partir de caballos no infectados. el tiempo posterior a la infección previo a la aparición de anticuerpos detectables puede durar hasta 60 días. que incluye también maedi–visna. Pruebas serológicas Debido a la persistencia del virus de la AIE en los équidos infectados. 1–25 ml del total de la sangre inyectada en vena es suficiente para demostrar la infección. pero. para detectar el ADN provírico de la AIE en la sangre periférica de los caballos (12). por la prueba de la inmunofluorescencia o por subinoculación en caballos susceptibles. para los potros y para las madres infectadas. Las reacciones específicas se indican por las líneas de precipitación entre el antígeno de la AIE y el suero problema y se confirman por ser idénticas a la reacción que se da entre el antígeno y el suero estándar positivo. El virus de la AIE es un lentivirus. La producción de virus en cultivos puede confirmarse detectando el antígeno específico contra AIE por medio de un ELISA. (5) 2. TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO Las pruebas de inmunodifusión en gel de agar (AGID) (7) y los enzimoinmunoensayos ELISA (15) son pruebas precisas y fiables para la detección de la AIE en caballos.9). puede ser necesaria la utilización de un volumen mayor de sangre (250 ml) o de los leucocitos lavados de dicha sangre. de una línea celular de timo canino con infección permanente (3) o de proteínas recombinantes expresadas en bacterias o en baculovirus utilizando la técnica del ADN recombinante (2. En algunos casos. inmunodeficiencia bovina y los virus de inmunodeficiencia humana. la detección serológica de anticuerpos frente al virus de la AIE confirma el diagnóstico de la infección por dicho virus.

Tales animales deberían sangrarse de nuevo después de 3–4 semanas. El otro ELISA no competitivo incorpora la proteína del núcleo p26 y los antígenos gp45 (proteína transmembrana vírica). El virus se recoge de los cultivos por precipitación con polietilenglicol al 8%. Las proteínas del núcleo del virus de la AIE. Los pocillos serán de 5. Las líneas de referencia deben ser claramente visibles a las 24 horas y. Este suero debe producir una única línea de precipitación densa. y se indica mediante una pequeña inclinación de la línea de precipitación del suero entre el pocillo del antígeno y el pocillo del suero problema. por confección en pellets o por ultracentrifugación. es necesario determinar el estado de los anticuerpos procedentes de la madre. se separa del virus por tratamiento con detergente o éter. Interpretación de los resultados: Los caballos que están en las primeras etapas de la infección pueden no dar una reacción serológica positiva en la prueba AGID. entonces será necesario un período de 6 meses o más después del nacimiento para que el anticuerpo materno disminuya. y el bazo debe recogerse 9 días después de la inoculación. El ELISA competitivo y uno de los ELISAs no competitivos detectan los anticuerpos producidos contra el antígeno proteico del núcleo p26. Las concentraciones del reactivo deben ajustarse para formar una línea de precipitación estrecha aproximadamente equidistante de los dos pocillos que contienen el antígeno y el suero. un ELISA competitivo y dos ELISAS no competitivos. Es esencial equilibrar las concentraciones de antígeno y de anticuerpos. 13) Las reacciones de inmunodifusión se llevan a cabo en una capa de agar en placas de Petri. se somete al potro a una nueva prueba para determinar si una reacción positiva inicial se debió al anticuerpo materno o a la infección. cuando más alto es el título del virus y antes de que se produzca cualquier cantidad de anticuerpos precipitantes. Existen evidencias de variación de la cepa en la secuencia del aminoácido p26. Los sueros libres de anticuerpos de la AIE no formarán líneas de precipitación y no tendrán efecto sobre las líneas de reacción de los reactivos estándar. debe infectarse un caballo con una cepa muy virulenta del virus de la AIE. Una reacción positiva débil puede tardar 48 horas en formarse. La p26 es una proteína estructural interna del virus que está codificada por el gen gag. se infectan células de riñón fetal equino. se utilizan 15–17 ml de agar Noble al 1%. no proporciona un antígeno tan satisfactorio como una selección de bazos con un título alto del antígeno de la AIE. cualquier suero problema que sea fuertemente positivo también puede haber formado líneas idénticas a las que se dan entre los reactivos estándar. Los protocolos del ELISA típicos se utilizan en todas las pruebas. Si los materiales comerciales del ELISA Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004 735 . éstas pueden ofrecer una línea de identidad más marcada. La extracción del antígeno del bazo con una solución salina y una concentración con sulfato amónico. Transcurridas 24–28 horas. Los sueros con títulos de anticuerpos de precipitación altos. Si la yegua posee algún anticuerpo de la AIE. Con el fin de realizar un diagnóstico en un potro joven. • i) Procedimiento de la prueba (1. Alternativamente. sin diluir. se examinan las reacciones de precipitación con un haz estrecho de luz oblicua e intensa frente a un fondo negro. Se coloca el antígeno en el pocillo central y el antisuero estándar en uno de cada dos pocillos exteriores. • Preparación del antisuero estándar Se debe recoger un antisuero positivo conocido procedente de un caballo previamente infectado con el virus de la AIE. expresadas en bacterias o baculovirus están disponibles comercialmente y se utilizan como antígenos de alta calidad para el diagnóstico serológico.Capítulo 2. se utiliza como antígeno en la prueba de inmunodifusión(6). El antígeno de diagnóstico. células dérmicas o células del timo canino con una cepa del virus de la AIE adaptado para crecer en cultivo de tejido (American Type Culture Collection). Tales reacciones pueden confirmarse como específicas de la AIE por dilución al ½ o ¼ antes del contraensayo.5. con el fin de garantizar la sensibilidad óptima de la prueba. La pulpa del bazo.3 mm de diámetro y con una separación de 2. — Anemia infecciosa equina Para obtener un antígeno satisfactorio a partir del bazo. Se mantienen las placas a temperatura ambiente en un ambiente húmedo. sin embargo no hay evidencias de que esta variación influya en ninguna de las pruebas de diagnóstico (19). Este gen es estable y no se han encontrado variaciones entre las cepas (11).4. p26. que es específica para la AIE. en ese momento. Para placas de Petri de 100 mm de diámetro. Se perforan 6 pocillos en el agar en torno a un pocillo central del mismo diámetro. pueden formar bandas anchas de precipitina que tienden a extenderse. Las muestras del suero problema se colocan en los tres pocillos restantes. El período de incubación resultante debería durar entre 5 y 7 días. ii) iii) iv) v) b) Enzimoinmunoensayo Existen tres tipos de ELISAue han sido aprobados por el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos para el diagnóstico de la anemia infecciosa equina y que están disponibles internacionalmente.4 mm. tal como se ha demostrado mediante una reacción idéntica a la de un suero estándar conocido. Cada pocillo debe contener el mismo volumen de reactivo. 6.

. REFERENCIAS 1. SENTSUI H. & HARE W. Development of an enzyme–linked immunosorbent assay for equine infectious anaemia virus detection using recombinant Pr55gag. Proc. Se han publicado métodos uniformes para el control de la AIE (17).. a retrovirus. Biol.C. PANG H. & NUSBAUM S. Los Laboratorios de Referencia de la OIE tienen disponible un antisuero estándar para inmunodifusión que contiene una cantidad mínima de anticuerpo que debería detectarse en los laboratorios. Immunol. KONG X... BOUILLANT A. Antigenic variation during persistent infection by equine infectious anaemia. (1989).5. MALMQUIST W. III. Un resultado positivo obtenido mediante ELISA debe comprobarse de nuevo utilizando la prueba AGID para confirmar el diagnóstico. Animal Health Analysis Methods. Infect. Detection of Antibodies against Equine Infectious Anaemia by the Agar Gel Immunodiffusion Test.Capítulo 2. SAMAGH B..C. K. to serological diagnosis. WANG Z.. También se puede confirmar el resultado por la técnica inmunobloting. KEMEN M. COGGINS L. Vet. Kentucky. 6. Assoc. 14–22. Diagnosticians. Chem. 13. DAHLBERG J. Vet. Lab.. Equine infectious anaemia virus. (1976). (1979).C. Clin.. & COGGINS L. & COGGINS L. MATSUMOTO Y. J. 449–462. J.J. — Anemia infecciosa equina no están disponibles. 13. Am. 97–109. Arch. The technique and application of the immunodiffusion test for equine infectious anaemia. Rev. AFNOR. BARNETT D. Equine infectious anaemia: transmission from infected mares to foals..P.. YANIV A. Equine Infect.S. Assoc. puede emplearse un ELISA no competitivo utilizando antígeno p26 purificado procedente del material de cultivo de células (14).. (2001). (1973). NORCROSS N. Lexington.L... Microbiol. LACAL J. Application of equine infectious anaemia virus core proteins produced in a Baculovirus expression system. NORCROSS N. & KEMEN M. COGGINS L. PEARSON J. (1985). 1167–1173.. Methods. NELSON K. (Véase el cuadro que aparece en la parte 3 de este Manual para Animales Terrestres). Virol. 4.. Detection of horses infected naturally with equine infectious anemia virus by nested polymerase chain reaction. 2.R. 161.J. & MCGUIRE T.M. ONODERA T. Med. NF U 47–002. & ISSEL C. 8. GAZIT A. 496–499. 93571 Saint–Denis La Plaine Cedex. The persistent infection of a canine thymus cell line by equine infectious anaemia virus and preliminary data on the production of viral antigens. 7. 41. (1972)...A. 309–321. Vet.M. 27. REQUISITOS PARA VACUNAS Y MATERIALES DE DIAGNÓSTICO No existen productos biológicos disponibles en estos momentos. Protocol for the immunodiffusion (Coggins) test for equine infectious anaemia. 736 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004 .E. Inapparent carriers of equine infectious anaemia (EIA) virus. 16.C. 22.M.. & TRONICK S.R. CHEEVERS W.. 11 avenue Francis de Pressensé. SUGIURA T. 975–980. Methods.E. & SIMARD C.D.. University of Kentucky. 83–88.J. (1986). ASSOCIATION FRANÇAISE DE NORMALISATION (AFNOR) (2000).. (1984). (1973). Virol. & KEMEN M. immunopathogenesis and persistence. Production of equine infectious anaemia antigen in a persistently infected cell line. 361–370. 11–18.S. J. & BECVAR C. Dis. 94.4. 12. Res. C.. ARCHAMBAULT D. (1997). J.. PAREKH B. 3.. In: Proceedings of the IVth International Conference on Equine Infectious Diseases. France.L. Microbiol. 177–186.M. Gesamte Virusforsch. 9 10 11. COGGINS L. RUCKERBAUER C.J. 7. & AKASHI H. Am. ORREGO A. 10539–10544. J. MONTELARO R. debido a que se han detectado algunos resultados positivos falsos mediante ELISA.. J. 42. 33. Dis. NAGARAJAN M. Diagnosis of equine infectious anaemia by immunodiffusion test. 5. (1972).. USA. Am.

AUYONG D. Rec.C.C.usda.pdf 18. Microbiol.J. Enzyme–linked immunosorbent assay for detection of equine infectious anemia virus p26 antigen and antibody. 242–252. (1982). Sci. (1980). Res... 17. SHANE B. TOMA B. 16. Microbiol.int). 307–316.. 351–355...Capítulo 2. ZHANG W.4. Clin.. Enzyme–linked immunosorbent assay for diagnosis of equine infectious anaemia. — Anemia infecciosa equina 14. ISSEL C.L. Vet.gov/oa/pubs/eiaumr. 33. * * * NB: Existe un laboratorio de referencia de la OIE para la Anemia infecciosa equina (ver Cuadro en la Parte 3 de este Manual de animales terrestres o consultar el sitio Web de la OIE para encontrar el listado más actualizado: www. 19. Equine Infectious Anemia Uniform Methods and Rules. & MONTELARO R.5.aphis. 55–63. SUZUKI T. (1999). & SAMEJINA T. Natural variation of equine infectious anemia virus Gag–protein cytotoxic T lymphocyte epitopes.D. WEILAND F. & BOHM H. OAKS J. 19. J...oie. 261. Med. 15. Vet.. 7. Vet.S. & MCGUIRE T. 156. (1984). Equine infectious anaemia: detection of antibodies using an immunofluorescence test. Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004 737 . UEDA S. MATHEKA H. 347–350. UNITED STATES DEPARTMENT OF AGRICULTURE ANIMAL AND PLANT HEALTH INSPECTION SERVICE (2002). Virology. http://www.B. (1982). Réponse sérologique négative persistante chez une jument infectée.O.