EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE LÍPIDOS TERPENICOS CAROTENOS MANCILLA, C. G. E.; ROSAS, T. M; PÉREZ, S. L. J; CASTREJÓN, C. R. y BLANCO, E. Z.

Q.F.B.; V Semestre: Universidad del Valle de México, Campus Chapultepec
(Av. Constituyentes No. 151 Col. San Miguel Chapultepec. C.P. 11850 México, DF.)

Resumen………………………………………………………………..….1 Introducción……………………………………………………………..…2 I.- Lípidos…………………..……………………………………………….….…2 II.-Separación y análisis de glúcidos………………………………….…….…5 III. Terpenos……..………………..……………………………………………...6 IV. Carotenos……………………………..………………………………………7 Objetivos………….……………………………………….……………..…10 Hipótesis………...……………………………………………….……..…..10 Material………………...……………………………………….………...…11 Metodología…………….………………………………………….……..….11 Resultados………………………..…………………………………………..11 Discusión de Resultados………………………………….………… ……….13 Conclusiones…………………………………………….……………………13 Referencias……………………………………………….……………...…….13

RESUMEN: En esta práctica se podrá encontrar la definición de los lípidos, su composición, tipos y estructuras, además de algunos de los métodos más utilizados para analizar y separarlos. También se podrá encontrar la definición y tipos de terpenos que se encuentran en la naturaleza y que en esta práctica son objeto de estudio así mismo de los carotenos que son un tipo de tetraterpenos que constituyen tanto la coloración de las zanahorias (que son los vegetales utilizados para esta práctica) como su fuente nutrimental de aporte en vitaminas. Para la extracción y separación de los carotenos de la zanahoria, se utilizaron 10 gramos de zanahoria las cuales se picaron y se les extrajeron los pigmentos vegetales por medio de alcohol al 95% hasta dejar la zanahoria incolora. Después para separar los carotenos de las xantofilas se utilizó un embudo de separación en el cual se lavó la solución y en la fase acuosa quedaron las xantofilas y en la orgánica los carotenos. Después a los carotenos se les realizó una separación para obtener sus 3 tipos de componentes, es decir los alfa, beta y gama carotenos.

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Los aceites vegetales (ej. productos lácteos y grasas animales son en la capa de agua ordenada en la interfase lípido-agua. El grupo ácido carboxílico es polar (y ioniza a pH neutro) y justifica la ligera ℘ Glicerofosfolípidos: Regiones hidrofóbicas solubilidad en agua de los ácidos grasos de cadena compuestas por 2 ácidos grasos unidos al glicerol. Oliva) están formación y mantenimiento de estas estructuras. La cadena hidrocarbonada orientación de sus regiones hidrofóbicas e hidrofílicas apolar explica la poca solubilidad de ácidos grasos en dirige su empaquetamiento hacia la formación de agua. Las mixtos. Sus puntos de fusión (60-100ºC) son generalmente más elevados que los de los triacilgliceroles. esfingolípidos y esteroles son ℘ Triacilgliceroles simples: Mismo tipo de ácido graso virtualmente insolubles en agua ya que cunado se en las 3 posiciones y se denominan según el ácido mezclan con ella. Las ceras biológicas son ésteres de ácidos grasos e insaturados (14-36 átomos de carbono) con alcoholes de cadena larga (16-30 átomos de carbono). menor es la membranas: solubilidad del agua. Triestearina 16:0 y trioleína agregados lipídicos microscópicos en una fase separada de su entorno acuoso. Sus funciones son diversas. Tienen diversas aplicaciones en las industrias farmacéutica y cosmética. Los lípidos de las membranas son antipáticos. 2] ℘ Esfingolípidos: Se une un solo ácido graso a una amina grasa. Las moléculas lipídicas se 18:1. ℘ Esteroles: Sistema rígido de 4 anillos hidrocarbonados fusionados. corta. Los glicerofosfolípidos. grasas o grasas neutras) compuestos de 3 ácidos grasos en enlace éster con un solo glicerol. Cuanto más larga sea la cadena acíclica grasa y el bicapas membranosas. La oxidación completa de los ácidos grasos a CO2 y H2O en las células es muy exergónica. la esfingosina. Ej.3] Lípidos estructurales de las membranas La característica arquitectónica central de las Las propiedades físicas de los ácidos grasos y de los membranas biológicas es una doble capa lipídica que compuestos que los contienen vienen determinadas en constituye una barrera al paso de moléculas polares e gran parte por la longitud y grado de insaturación de la iones. grasas sólidas por hidrogenación catalítica que reduce algunos de sus dobles enlaces a sencillos.[1. reduce la cantidad de superficie hidrofóbica expuesta al La mayoría de las grasas naturales como los aceites agua. Se especifica el nombre y posición de cada entre sí y sus grupos hidrofílicos interaccionando con el agua circundante.[1. Estos últimos contienen diversos ácidos grasos interacciones hidrofóbicas entre las moléculas lipídicas que difieren en la longitud de cadena y grado de proporcionan la fuerza termodinámica motriz para la saturación. Las ceras también realizan diversas funciones en la naturaleza que están relacionadas con sus propiedades repelentes del agua y con su consistencia firme. ℘ Triacilgliceroles mixtos: 2 o más ácidos grasos agrupan con sus porciones hidrofóbicas en contacto diferentes.INTRODUCCIÓN LÍPIDOS Los lípidos biológicos constituyen un grupo químicamente diverso de compuestos cuyas características común y definitoria es su insolubilidad en agua. Los triacilgliceroles que solo contienen ácidos grasos saturados son sólidos blancos y grasos a temperatura ambiente. unos cuantos contienen anillos de 3 carbonos o grupos hidroxilo] son derivados de los ácidos grasos y sirven de almacenamiento de energía. [1. estos compuestos antipáticos forman graso que contienen. se pueden formar 3 tipos de agregados cuando se mezclan lípidos alinfáticos con el 2 . Tipos generales de lípidos de las menor número de dobles enlaces. la cadena hidrocarbonada. por lo que son líquidos a temperatura ambiente. se convierten industrialmente en Según sean las condiciones precisas y la naturaleza de los lípidos utilizados. Los lípidos más sencillos obtenidos a partir de los ácidos grasos son los triacilgliceroles (triglicéridos. con lo que se minimiza el número de moléculas vegetales. El agrupamiento de los lípidos ácido graso.4]] compuestos mayoritariamente de triacilgliceroles con ácidos grasos insaturados. mezclas complejas de triacilgliceroles sencillos y lo que se traduce en un aumento de entropía. [1] Lípidos de almacenamiento Las grasas y aceites [ácidos carboxílicos con cadenas hidrocarbonadas de 4-36 carbonos (en algunos completamente saturada sin dobles enlaces y sin ramificar y otros con uno o varios dobles enlaces).

Un segundo tipo de agregado lipídico en agua es la bicapa.5] Lípidos con actividades biológicas específicas Los lípidos de membrana representan del 5-10% de la masa seca de muchas células y los de almacenamiento más del 50% de la masa de un adiposito. 20:4 (∆5.14)] del que toman su nombre general (del griego eikosi. la proteína quinasa C. en la que se combinan 2 monocapas lipídicas formando una hoja bidimensional. Hay otro grupo de lípidos componentes celulares relativamente minoritarios en cuanto a masa con actividades biológicas específicas y esenciales. Al formar vesículas las hojas de bicapa pierden sus regiones hidrofóbicas de los extremos. Cuando la vasopresina se fija a moléculas receptoras de las membranas plasmáticas renales y de vasos sanguíneos. etc. Los grupos de cabeza hidrofílicos interaccionan con las 2 superficies de la bicapa. La formación de micelas está favorecida cuando el área de la sección transversal del grupo de cabeza es mayor que la de las cadenas laterales acilo. enzimas oxidativas actúan sobre los combustibles y las membranas lipídicas forman barreras impermeables que separan los compartimientos celulares.8. lisofosfolípidos (a los que les falta un ácido graso) y el detergente SDS. Las micelas son estructuras esféricas relativamente pequeñas en las que intervienen desde unas cuantas decenas a unos millares de moléculas ordenadas de modo que sus regiones hidrofóbicas se agregan en el interior excluyendo al agua. y los grupos de cabeza hidrofílicos están en la superficie en contacto con el agua. Dentro de los isoprenoides se encuentran las vitaminas A. “veinte”).5-trifosfato produce la liberación de Ca2+ secuestrando en los compartimientos celulares limitados por membrana. Dada la elevada afinidad de los receptores hacia la hormona. tal como sucede con los ácidos grasos libres. Se producen en un tejido y se transportan por el torrente circulatorio a tejidos diana donde se fijan a receptores proteicos muy específicos desencadenado cambios en la expresión genética y en el metabolismo. Las porciones hidrofóbicas de cada monocapa interaccionan excluyendo el agua. Todos los icosanoides provienen del ácido araquidónico [ácido graso poliinsaturado de 20carbonos. fiebre y dolor asociados a lesiones o enfermedades. Actúan sobre el tejido en el que se producen. Entre ellos se encuentran los esteroides. Estos lípidos juegan un papel pasivo en la célula. El fosfatidilinositol y sus derivados fosforilados son componentes de las membranas plasmáticas de todas las células eucarióticas. La formación de bicapas se da fácilmente cuando las áreas transversales del grupo cabeza y las cadenas laterales son similares. E y K (materiales graso esenciales para el crecimiento normal de los animales y numerosos pigmentos biológicos).4. y gran número de isoprenoides que se sintetizan a partir de precursores de 5 carbonos relacionados con el isopreno. Todas estas hormonas contienen un núcleo esteroide intacto. se activa una fosfolipasa que rompe el enlace entre el glicerol y el fosfato en el fosfatidilinositol-4.5-trifosfato y diacilglicerol.agua. activándola. El diacilglierol se fija a una enzima. tal como sucede con los glicerofosfolípidos y esfingolípidos. [1. El tercer tipo de agregado lipídico se forma cuando una bicapa lipídica se dobla sobre sí misma formando una esfera hueca denominada liposoma o vesícula.[1. desencadenando la activación de diversas enzimas dependientes de Ca2+ y respuestas hormonales.) El inositol1. Los principales grupos de hormonas esteroides son las hormonas sexuales masculinas y femeninas y las hormonas de la corteza suprarrenal. Actúan como depósito de moléculas mensajeras que se liberan en el interior de la célula cuando ciertas señales extracelulares interaccionan con receptores específicos de la membrana plasmática (Ej. Algunas de sus funciones son que intervienen en la función reproductiva. por lo que se crea un compartimiento acuoso separado. con lo que consiguen la máxima estabilidad en su ambiente acuoso. inflamación. son suficientes concentraciones muy bajas de hormona (hasta 10-9M) para producir el efecto sobre los tejidos diana. transportadores electrónicos o señales intracelulares. 6] Los icosanoides son derivados de ácidos grasos con una diversidad de acciones del tipo hormonal extremadamente potentes sobre varios tejidos de vertebrados. Otros lípidos “activos” son cofactores esenciales de enzimas.11.4. Hay 3 clases de icosanoides: prostaglandinas. Estas vesículas de bicapa contienen agua. D.5-bifosfato liberando inositol-1. Se producen en distintos tipos celulares mediante rutas sintéticas diferentes y tienen diferentes células diana y acciones biológicas. compuestos que comparten el núcleo esteroide de 4 anillos pero son más polares que el colesterol. 3 . el cortisol y la aldosterona. lo que conduce a la transferencia de grupos fosfato del ATP a varias proteínas citosólicas alterando de este modo sus actividades enzimáticas. tromboxanos y leucotrienos.

La sobreproducción de leucotrienos produce ataques asmáticos. Son producidos por las plaquetas y actúan en la formación de coágulos sanguíneos y en la reducción del flujo sanguíneo hacia el sitio de un coagulo.25-dihidroxicolecalciferol. Originalmente se definieron 2 grupos: PGE. La vitamina actúa en la formación de protombina. xeroftalmia. etc. La fuerte contracción de los músculos lisos del pulmón que tiene lugar en el shock anafiláctico es parte de la reacción alérgica potencialmente fatal. Funciona como anticoagulante. Otras afectan al flujo sanguíneo a órganos específicos. que es una proteína en el plasma sanguíneo esencial para la formación del coagulo de sangre. Debido a que el cAMP media la acción de muchas hormonas. aceites vegetales y germen de trigo. Prostaglandinas de un tercer grupo elevan la temperatura corporal (dando lugar a fiebre) y produciendo inflamación con el dolor consiguiente. penicilina y otros agentes. Abunda en aceites de hígado de pescado y se añade a la leche comercial como suplemento nutritivo. La deficiencia en vitamina K da lugar a una coagulación de la sangre más lenta que puede ser fatal a un animal herido. Su deficiencia conduce a la formación defectuosa de huesos (raquitismo). La warfarina es un análogo sintético de la vitamina K que actúa como inhibidor competitivo de la formación de protombina. Los tromboxanos se aislaron por primera vez de las plaquetas sanguíneas (trombocitos) y tienen un anillo de 6 átomos que contienen una función éter. debilidad muscular y esterilidad. Vitamina K: Cofactor lipídico necesario para la coagulación normal de la sangre. La uboquinona y plastoquinona (derivados isoprenoides) funcionan como transportadores de electrones en la producción de ATP en la mitocondria y en los cloroplastos. Tipos: ℘ Liposolubles: Solubles en disolventes orgánicos apolares (Ej. en individuos hipersensibles a las picadas de abeja. E y K son isoprenoides y se sintetizan por condensación de unidades de isopreno). Algunas prostaglandinas estimulan la contracción del músculo liso del útero durante el parto o la menstruación. La protombina es una enzima proteolítica que rompe enlaces peptídicos específicos de la proteína sanguínea fibrinógeno. Vitaminas A. Su nombre proviene del tejido en el que se identificaron (la glándula prostática). desarrollo y crecimiento retardados. La vitamina K1 (filoquinona) se encuentra en las hojas de las plantas verdes mientras que la K2 (menaquinona) es sintetizada por las bacterias que residen en el intestino de los animales. Vitamina E (tocoferoles): Contienen un anillo aromático sustituido y una cadena lateral hidrocarbonada larga. No se presenta en los vegetales. encontrados por primera vez en los leucocitos. PGE2. Son señales biológicas poderosas (ej. se forma en piel mediante una reacción fotoquímica accionada por el componente ultravioleta de la luz solar. membranas mucosas secas. la proteína fibrosa insoluble que mantiene unidos los coágulos de sangre. pero muchas plantas contienen carotenoides. al ciclo sueñovigilia y a la capacidad de respuesta de ciertos tejidos a hormonas como la adrenalina y el glucagón. Se encuentran en los huevos de gallina.[1. Actúan en muchos tejidos regulando la síntesis de la molécula mensajera intracelular AMP 3´. contienen 3 dobles enlaces conjugados. D. Los tocoferoles pueden experimentar reacciones de óxido-reducción del anillo aromático. Su deficiencia produce piel escamosa.7] Las vitaminas son compuestos esenciales para la salud del hombre y otros vertebrados que no pueden ser sintetizados por estos animales por lo que deben ser obtenidos en la dieta. soluble en éter y PGF soluble en tampón fosfato. esterilidad en animales machos y ceguera nocturna. Inducen la contracción del músculo que recubre las vías aéreas del pulmón. las prostaglandinas afectan a una amplia gama de funciones celulares y titulares. Por si misma no es biológicamente activa pero es precursor del 1. Cada uno contiene numerosos subtipos denominados PGE1. convirtiéndola en fibrina. La deficiencia de vitamina A produce piel reseca. La vitamina D3 (colecalciferol).5´-cíclico (cAMP). Previenen la destrucción oxidativa de lípidos de las membranas celulares al reaccionar con las formas más reactivas del oxígeno destruyéndolas y protegiendo a los ácidos grasos insaturados de la oxidación.Todas las prostaglandinas (PG) contienen un anillo de 5 átomos de carbono que originalmente formaba parte de la cadena de ácido araquidónico. ℘ Hidrosolubles: Solubles en disolventes acuosos en vitamina A (por rotura del β-caroteno) por la mayoría de los animales. pigmentos que absorben la luz y se pueden convertir enzimáticamente 4 . En la mayoría de los tejidos de mamíferos. Los leucotrienos. Vitamina D: Derivado del colesterol y precursor de una hormona esencial en el metabolismo de calcio y fosfato en vertebrados. la uboquinona (coenzima Q) tiene 10 Vitamina A (Retinol): Pigmento esencial para la visión.

En la cromatografía de adsorción se empaqueta un material polar insoluble. cloroformo. glúcidos) se sitúan en la fase polar de metanol/agua. Después de su separación se pueden detectar los lípidos pulverizando la placa con un colorante (rodamina) que presenta fluorescencia cuando se asocia con los lípidos. Se distribuye una fina capa de gel de sílice sobre una placa de vidrio a la que se adhiere. Los dolicoles de animales tienen entre 17-21 unidades isopreno (85-105 átomos de carbono). Una solución extractiva muy utilizada es una mezcla de cloroformo. se calientan primeramente los lípidos en 5 . Algunos lípidos son de naturaleza volátil pero la mayoría han de modificarse previamente para aumentar su volatilidad (disminuyendo su punto de ebullición). Cerebrosidos) se eluyen con acetona y los lípidos muy polares o cargados (ej. la cual se sumerge en un recipiente poco profundo con disolvente orgánico contenido dentro de una cámara cerrada saturada con vapor del disolvente. lavando la columna con disolventes de polaridad progresivamente más elevada.unidades de isopreno. en orden de polaridad creciente. En general las mezclas complejas de lípidos se separan por diferencia en su polaridad o solubilidad en disolventes apolares. El yodo reacciona con los dobles enlaces de los ácidos grasos confiriendo a los lípidos que los contenga un color amarillo o marrón. Su papel como transportadores de electrones pueden aceptar bien uno o 2 electrones así como 1 o 2 protones reduciéndose a la forma hidroquinona.8] SEPARACIÓN Y ANÁLISIS DE GLÚCIDOS Debido a que los lípidos son insolubles en agua. como el gel de sílice (una forma de ácido silícico. A medida que el disolvente asciende sobre la placa por acción de la capilaridad. La plastoquinona es equivalente en plantas a la uboquinona. Se aplica una pequeña muestra de lípidos disueltos en cloroformo cerca del borde de la placa. La cromatografía gas-líquido separa los componentes volátiles de una muestra según sus tendencias relativas a disolverse en el material inerte empaquetado en la columna cromatográfica y a volatilizarse desplazándose a través d la columna arrastrados por una corriente de un gas inerte como el helio. Los lípidos permanecen en el cloroformo y las moléculas más polares (proteínas. metanol y agua. metanol/agua (fase superior) y cloroformo (fase inferior). A continuación se eluyen los lípidos polares. Los lípidos polares sin carga (ej. su extracción de los tejidos y posterior fraccionamiento requieren la utilización de disolventes orgánicos y algunas técnicas poco usadas en la purificación de moléculas hidrosolubles como las proteínas y glúcidos. arrastra consigo los lípidos. Glicerofosfolípidos) se eluyen con metanol. Durante la formación de los glúcidos complejos de las paredes celulares bacterianas así como la adición de unidades polisacáridas a las glucoproteínas en eucariotas. Si(OH)4) en la columna de vidrio delgada y larga aplicándose la mezcla de lípidos (en solución clorofórmica) en la parte superior de la columna. La mezcla compleja de lípidos tisulares aún se puede fraccionar más mediante procedimientos cromatográficos basados en la diferente polaridad de cada clase de lípido.) se extraen fácilmente de los tejidos con éter etílico.[1. donde participam en reacciones de transferencia de glúcidos. se añade más agua al extracto resultante que se separa en 2 fases. disolventes en los que no se produce la agregación de lípidos promovida por las interacciones hidrofóbicas. pigmentos. etc. o bien exponiendo la placa a los vapores de yodo. pertenecientes al grupo de isoproenoides. Los lípidos neutros (triacilgliceroles. Para el análisis de los ácidos grasos presentes en una muestra de fosfolípidos. Los lípidos de membrana se extraen mejor con disolventes orgánicos más polares como etanol o metanol. Los lípidos polares se fijan fuertemente al ácido silícico polar mientras que los neutros pasan directamente a través de la columna y emergen en el primer lavado con cloroformo. las unidades glucídicas que se han de adicionar están activadas químicamente mediante la unión a los dolicoles. La cromatografía en capa fina sobre ácido silícico utiliza el mismo principio. benceno. que reducen las interacciones hidrofóbicas entre las moléculas de lípidos pero que también debilitan los puentes de hidrógeno y las interacciones hidrostáticas que unen los lípidos de membrana a las proteínas de membrana. los dolicoles bacterianos tienen 11 unidades y plantas y hongos tienen entre 14-24 unidades isopreno.8. v/v/v). inicialmente en proporciones inmiscibles produciendo una sola fase (1:2:0. anclando los glúcidos unidos a la membrana. Estos compuestos altamente hidrofóbicos tienen interacciones hidrofóbicas fuertes con los lípidos de membrana. Después de homogenizar el tejido en este disolvente para extraer todos los lípidos. Los lípidos que contienen ácidos grasos en enlace éster o amida se pueden hidrolizar (saponificar) tratándolos con ácido o álcali para analizar sus componentes. Para el análisis posterior se pueden rascar de la placa las regiones que contienen los lípidos separados recuperándolos por extracción con un disolvente orgánico. ceras.

Con la utilización de estas técnicas se pueden separar completamente mezclas de ácidos grasos con diferentes longitudes de cadena y diversos grados de insaturación. el limoneno. constituyen el esqueleto de los esteroides. o la posición de los dobles enlaces.[1. este tetraterpeno es un sólido rojo. los que se obtienen de las flores. Por ej. hojas o frutos. Por ej. Por ej. El orden de elución depende de la naturaleza del adsorbente sólido de la columna. y que se hallan muy difundidos en los reinos animal y vegetal. Triterpenos: formados por seis unidades de isopreno (treinta átomos de carbono). se ha desarrollado la siguiente clasificación:  Monoterpenos: formados por dos unidades de  isopreno (diez átomos de carbono). [10] Tomando como unidad terpeno la de diez átomos de carbono. libera un fosforil alcohol hidrosoluble (fosfocolina en la fosfatidilcolina) y un diacilglicerol soluble en cloroformo. Aquellos ésteres de acilo graso mayoritariamente solubles en el material de la columna se disuelven en el. contenida en la leche y en el aceite de hígado de bacalao. el caucho y la gutapercha. el escualeno y los esteroides. es de gran valor el análisis por espectrometría de masas de los lípidos o sus derivados volátiles.9] TERPENOS Se denominan así a cada uno de los hidrocarburos saturados o insaturados que se consideran constituidos formalmente por unidades sucesivas de isopreno (C5H8). Dentro de los terpenos se clasifica a los carotenoides que son tetraterpenos muy importantes en los mamíferos. el mentol y el alcanfor. Las unidades pueden arreglarse linealmente (como en el escualeno) o cíclicamente (como en la limonina). Politerpenos: formados por más de ocho unidades de isopreno (más de cuarenta átomos de carbono). que convierte los ácidos grasos que eterificaban al glicerol en su ésteres metílicos (tranesterificación). que se puede obtener a partir de las zanahorias y se emplea como colorante en la industria alimentaria . Por ejemplo. ácidos carboxílicos y ésteres). En la fotosíntesis desempeñan un papel clave absorbiendo energía luminosa de longitudes de onda distinta a las que capta la clorofila. el fitol. El caroteno es precursor de la vitamina A. El orden de elución depende de la naturaleza del adsorbente sólido de la columna y del punto de ebullición de los componentes de la mezcla lipídica. cada uno de los cuales puede caracterizarse separadamente para determinar la estructura del lípido intacto. los carotenoides y el licopeno. Sesquiterpenos: formados por tres unidades de isopreno (quince átomos de carbono). Las enzimas que hidrolizan específicamente ciertos lípidos también son útiles en la determinación de la estructura lipídica. mientras que los de peso molecular medio o alto. El ß-caroteno (C40H56O) tiene una estructura similar a la de la vitamina A1. Por ej. También las vitaminas liposolubles D (colecalciferol) y K son consideradas como terpenos. sobre todo en forma de derivados oxigenados (alcoholes. el geraniol. raíces (zanahoria) flores etc. La combinación de hidrólisis específica por caracterización de los productos por cromatografía en capa fina o cromatografía gas-líquido permite a menudo la determinación de estructura de un lípido. por ejemplo. Ciertas clases de lípidos son susceptibles de degradación en condiciones específicas. Diterpenos: formados por cuatro unidades de isopreno (veinte átomos de carbono). aldehídos. Las fosfolipasas A. mediante destilación con vapor de agua. [11]    6 .una mezcla metanol/HCl o metanol/NaOH. cetonas. todos los ácidos grasos unidos por enlace éster en triacilgliceroles. Para establecer sin ambigüedades la longitud de 1 cadena hidrocarbonada. denominados también terpenoides. La fosfolipasa C. Por ej. En este grupo son abundantes las xantofilas y carotenos. Tetraterpenos: formados por ocho unidades de isopreno (cuarenta átomos de carbono). Se cargan a continuación estos ésteres metílicos de los acilos grasos en una columna de cromatografía gas-líquido y se calienta para volatilizar los compuestos. Un diterpeno conocido es la vitamina A1 (C20H30O). C y D hidrolizan enlaces específicos en los fosfolípidos dando productos de solubilidad y comportamiento cromatográfico característicos. especialmente el βcaroteno que es precursor de la vitamina A (11-cisretinal). el guayacol y el farnesol. Por ej. Dan color a los frutos. los menos solubles son arrastrados por la columna de helio y emergen en primer lugar de la columna. fosfolípidos y ésteres esteriolo se liberan mediante tratamiento ácido o alcalino suave mientras que un tratamiento algo más fuerte libera los ácidos grasos unidos por un enlace amida de los esfingolípidos. Los terpenos de bajo peso molecular se encuentran sobre todo como componentes de los aceites esenciales. los carotenoides y el caucho. pigmentos vegetales amarillo y anaranjado respectivamente.

CAROTENOS Los carotenoides son los responsables de la gran mayoría de los colores amarillos. aunque los experimentos en los que se han utilizado suplementos han dado resultados contradictorios. formando parte del sistema de biosíntesis a partir de la energía de la luz. especialmente en reacciones de fotooxidación con el oxígeno singlete. coloreando algunas raíces. La condición fundamental para que tengan actividad vitamínica es que tengan cerrado y sin oxidar al menos uno de los anillos de los extremos de la estructura. Los animales no pueden sintetizar sustancias de este tipo. En general.[12] De los carotenoides conocidos. Consecuentemente. como el licopeno. cuarenta átomos de carbono). en algunos casos incluso evidenciando efectos perjudiciales. y su biosíntesis se produce a partir de isopentenil pirofosfato. y visibles. sino por reacción con los hidroperóxidos. Desde el punto de vista químico. mientras que los carotenoides son anaranjados o rojizos. pertenecen a la familia de los terpenos. aunque con bastantes limitaciones. las xantofilas producen color amarillo. que se dividen en dos tipos básicos: los carotenos. los más importantes entre ellos son el a caroteno y la b criptoxantina. solamente alrededor del 10% tienen valor como vitamina A. A estos tipos hay que unir los apocarotenoides. pero son mucho más abundantes. pero no de forma directa. Esto produce sus rasgos estructurales más evidentes. es decir están formados por unidades de isopreno (ocho unidades. de tamaño menor. Se conocen alrededor de 600 compuestos de esta familia. varios de los carotenoides más comunes. formados por ruptura de los carotenoides típicos. Además del β caroteno. zeaxantina y luteína no tienen valor como vitamina A. Los carotenoides pueden desempeñar un papel como antioxidantes en la protección del organismo frente a los radicales libres. la presencia de muchos dobles enlaces conjugados y de un buen número de ramificaciones de grupos metilo. que son hidrocarburos. y también de los colores anaranjados de varios alimentos animales. y las xantofilas. En los vegetales verdes se encuentran en los cloroplastos. frutas y flores. anaranjados o rojos presentes en los alimentos vegetales. También se oxidan en presencia de lipoxigenasas. Sí parece claro que la presencia en la dieta de alimentos con contenidos elevados de carotenoides tiene efectos preventivos frente a ciertas enfermedades. es decir. y pueden tener también actividad como antioxidantes. La presencia de gran número de dobles enlaces hace a a los carotenoides muy sensibles a la oxidación. sus derivados oxigenados. pero si pueden transformar una en otra. aunque esta cuestión está todavía en discusión. Dada su ubicuidad en el reino vegetal. Las reacciones de 7 . situados en posiciones constantes. aunque son muy importantes como pigmentos. la biosíntesis total anual de carotenoides se ha estimado en unos 100 millones de toneladas.

o bien por cultivo de Dunaliella salina.[15] Licopeno β-caroteno El β-caroteno fue el primer carotenoide purificado. como todos los carotenoides. Aunque su valor vitamínico es solamente de alrededor de un sexto del valor del retinol (la “vitamina A” en su forma metabólicamente activa). aunque menor que los demás carotenos. puede sufrir isomerizaciones en condiciones de procesado drásticas. El β-caroteno lo es en el mango y en el caki. en cambio. Dependiendo del producto y de las condiciones concretas. [14] El alfa caroteno es 38% más potente como antioxidante que el beta caroteno y 10 veces más efectivo inhibiendo el cáncer de hígado. En este caso. como la leche. También pueden alterarse por isomerización. Wackenroder lo aisló en forma cristalina a partir de la zanahoria. En las frutas. junto con xantofilas. se utiliza en forma de polvo extremadamente fino. los carotenoides naturales se encuentran siempre con todos los dobles enlaces en forma trans. no es fácil de utilizar. en partículas de alrededor de 0. exposición a la luz o de forma espontánea en ciertos disolventes o en presencia de superficies activas. aunque inferior a la de los carotenos alfa y beta.4 micras de diámetro. especialmente en los vegetales. La isomerización reduce el valor como vitamina A del β-caroteno. Generalmente. los vegetales verdes como la espinaca y algunas frutas. las repulsiones que inducen los grupos metilos laterales hacen que algunos de los dobles enlaces puedan pasar a la configuración cis. Los estudios preliminares demuestran una actividad antioxidante del gamma caroteno. un alga microscópica que prolifera en aguas con concentraciones muy elevadas de sal. como en el caso del enlatado. esta pérdida se ve compensada en general muy sobradamente por la mucha mayor biodisponibilidad del β-caroteno. En 1831. La forma 13-cis tiene aproximadamente la mitad de valor como vitamina A que a forma todo trans. mientras que la forma 9-cis tiene un valor vitamínico del orden del 40% de la todo trans. puede llegar a isomerizarse entre el 30% y el 40% del todotrans β caroteno presente. 8 . al desnaturalizarse en este proceso las proteínas a las que se encuentra unido en muchos alimentos. En los vegetales verdes el b caroteno se encuentra en los cloroplastos. como en algunas algas. derivado de la denominación latina de este vegetal (Daucus carota). Pero presenta menos actividad provitamínica a su vez. Salvo excepciones. Incluso en dietas relativamente pobres en productos vegetales. El gamma caroteno posee actividad de vitamina A. piel y pulmón (siendo potenciado este efecto cuando se consume combinado junto con vitamina E y selenio). una de sus principales aplicaciones. Esta isomerización puede producirse por calentamiento. el carotenoide mayoritario depende de la especie. fórmándose sobre todo los isómeros 9-cis y 13-cis. Dentro de los alimentos. hace de él una fuente fundamental de vitamina A para muchísimas personas. su abundancia en los vegetales y también en algunos alimentos animales. El β caroteno. Son ricas en b caroteno la zanahoria. los carotenoides representan alrededor del 30% de la ingesta total de vitamina A. Se obtiene de las algas. que se puede dispersar en el agua. Lo encontramos en la zanahoria y la calabaza. Sin embargo. con la ayuda de un polisacárido como la goma arábiga. por ejemplo para colorear bebidas refrescantes.oxidación dan lugar en todos los casos a la perdida de color. los carotenoides son mucho más resistentes a la oxidación que en materiales pulverizados y secos.[13] El β-caroteno se emplea mucho como colorante alimentario. o en extractos. dándole el nombre que lleva. Se obtiene actualmente por síntesis química. que contiene entre 70 y 140 mg/kg. Aunque en principio la configuración trans de los dobles sería la más estable. existe una gran dependencia entre la velocidad de oxidación y el ambiente en el que se encuentran. como es la estadounidense. y suele ser el carotenoide mayoritario. Al ser insoluble en agua.

contienen entre 14 y 40 mg/ kg. con el nombre de paprika) como especia. para dar color a su carne. en algunas variedades de maíz.03 mg/kg de peso. tipo de suelo. que es de color azulado. Junto con la astaxantina se encuentran cantidades menores de cantaxantina y de astaceno. Como los demás animales. Cantaxantina La cantaxantina se encuentra en la seta Cantharellus cinnabarinus . más intensamente coloreado. su utilización está limitada. La desnaturalización de la proteína. naturalmente también en el pimentón. En el pimiento y en sus extractos (polvo. dado que se deposita en la piel y permine obtener un tono dorado sin necesidad de sol. con ciertas limitaciones. En Internet se venden actualmente “suplementos bronceadores” con dosis que cantaxantina superan con mucho el límite de seguridad. Una diferencia fundamental entre la estructura del licopeno y la del β-caroteno es que los anillos de los extremos se encuentran abiertos. De hecho. Dado que en su utilización como bronceador aparecieron en los usuarios problemas de salud asociados con la deposición del pigmento en la retina. En los crustáceos muchas veces el color de la cantaxantina está enmascarado. la cantaxantina está formando parte de un complejo multimérico llamado crustacianina. y en el destinado a las gallinas y pollos. para dar color a la yema del huevo. y que pueden resultar peligrosos. oleorresina) 9 . Astaxantina La astaxantina es el carotenoide más común en los animales. Esto es importante en acuacultura. Ahora bien. Además su estructura tiene la particularidad de que el anillo de uno de sus extremos es solamente de cinco eslabones Su biosíntesis se produce a partir de la zeaxantina.El licopeno es el carotenoide más abundante en el tomate. También se encuentra presente en otras frutas de color amarillo o anaranjado. exposición a la luz (también aumenta). La ADI para humanos fijada actualmente es de 0. generalmente asociada a otros carotenoides. estos peces no pueden sintetizar los carotenoides “de novo”. pero es un antioxidante muy eficiente frente al oxigeno singlete. La astaxantina es también la causa del color rojo de la mayoría de los crustáceos. El licopeno no tiene actividad como vitamina A. que si pueden transformar unos en otros. La cantaxantina se utiliza como “bronceador químico”. Beta-criptoxantina La β-criptoxantina es el carotenoide predominante en las naranjas. el licopeno es el precursor biosintético del β-caroteno en el tomate. y de cuyo nombre latino procede el del carotenoide. Capsantina La capsantina es el principal carotenoide del pimiento común (Capsicum annuum). por lo que dependen de los contenidos en la dieta. ya que si se quiere obtener el color habitual en los animales salvajes. hace que aparezca el color del carotenoide sin modificaciones en su espectro. por su color y aroma. y de la variedad. puede considerarse representativa la cifra de 40 mg de licopeno por cada 100 gramos. deben incluirse carotenoides precursores en los piensos. el que más de todos los carotenoides comunes. utilizado extensamente en España (y en Hungría. Es el principal pigmento responsable del color rosa de la carne del salmón o de la trucha. La capsantina es un carotenoide bastante raro. y algunas consumidoras tomaban incluso más). en el que representa hasta el 60% del total de los carotenoides presentes. en el boniato y. En el caso del bogavante. como pigmento en los crustáceos y en la carne de salmón. y también de las huevas de algunos peces. acompañando a la zeaxantina. las dosis elevadas utilizadas (algunos fabricantes recomiendan más de 100 miligramos al día. que se transforma en anteraxantina (un epóxido). y después en capsantina. de donde se extrajo por primera vez. hasta el extremo de que esta unión modifica sus propiedades ópticas. El músculo del salmón del Atlántico contiene entre 4 y 10 mg de astaxantina por kilogramo. tanto en alimentos para uso humano como en piensos con efecto “colorante”. como la papaya o el melocotón. Aunque el contenido depende mucho del grado de maduración (aumenta con ella). La cantaxantina se utiliza extensamente como aditivo en los piensos destinados a los salmónidos. dado que se encuentra unida muy fuertemente a proteínas. por calentamiento. El color se obtiene por depósito directo o por transformación de la cantaxantina en otros carotenoides. por ejemplo. entendiendo como tal en primer lugar que prácticamente no se encuentra en otros vegetales. Tambiés es el más abundante en otras especies del mismo género y. También aparece la cantaxantina. mientras que el salmón del pacífico. a la piel y carne.

las espinacas o el broculi. uno de los componentes fundamentales del aroma del azafrán. la crocetina se une de forma sucesiva a unidades de glucosa. El segundo más importante es la capsorrubina. Primeramente se produce una oxidación a dialdehido. Se utiliza precisamente para añadirla al pienso de pollos y gallinas. pero no “destiñe”. que tienen pH ácido. A partir de la HIPÓTESIS zona central con dobles enlaces conjugados se forma la crocetina. La nor-bixina tiene una estructura semejante. como las judías verdes. la crocina es soluble en agua. acompañando a otros carotenoides. con aceite caliente. para colorear la piel. precipita la forma no ionizada. como “apocarotenoides”. la bija.[16] Aunque no tienen actividad como vitamina A. La picrocrocina es la responsable del sabor ligeramente amargo del azafrán. pero con los dos grupos ácidos libres. una buena parte de los cuales no se conoce con detalle. La luteína tienen dos grupos hidroxilo. Esto tiene la ventaja de que el alimento queda coloreado. Tanto ésta como la capsantina están mayoritariamente en forma esterificada. y luego a diácido. A partir de la picrocrocina se forma. También puede extraerse con disolventes como al acetona. durante el secado de la especia. a pesar del nombre). Una vez producida. aunque su color está enmascarado por el de la clorofila. La nor-bixina es soluble solamente en medio alcalino. Pigmentos de la bija La bija o achiote Bixa orellana. y se utiliza como sal sódica. pigmentos naturales de la zanahoria. y de ahí procede su nombre. dando lugar a la picrocrocina. Por medio de la técnica de cromatografía separar los 3 Tanto los pigmentos del azafrán como los principales tipos de carotenos que existen e identificarlos. es el carotenoide responsable del color de la yema de huevo. en los que es muy abundante. Las sustancias presentes en este pigmentos son principalmente dos apocarotenoides. dos en cada extremo (el disacárido gentobiosa) formando la crocina. pero se transforma en la forma trans con los tratamientos térmicos utilizados habitualmente en la extracción del pigmento. es un árbol de tamaño pequeño que crece en Sudamérica. donde absorben la luz de la zona azul del espectro. se encuentra como mono o di ésteres de los ácidos palmítico o mirístico. que es el principal pigmento del azafrán. A partir de los extremos de la estructura de la zeaxantina se forma primeramente el hidroxi-βciclocitral. y se venden extensamente como OBJETIVOS “suplementos dietéticos” con este fin. Esta flor es interesante porque precisamente de ella se extrae gran parte de la luteína comercializada (generalmente como oleorresina) como suplemento para piensos. También se encuentra en muchas bacterias. componentes del aroma y del sabor se forman por la oxidación biológica de la zeaxantina. La bixina se encuentra en forma cis. no existe ninguna prueba de que ese supuesto efecto protector Extraer por medio de disolventes orgánicos los sea cierto. Luteína La luteína se encuentra en muchos vegetales. mediante un enlace glicosídico. pero en los alimentos (como los indicados anteriormente) se encuentra generalmente en forma no esterificada. Este tipo de estructuras derivadas se conocen 10 . Esta sustancia se une por una reacción enzimática a una unidad de glucosa. En los pétalos de algunas flores. y también la utilizada en el mercado de los mal llamados “suplementos dietéticos” para humanos. Junto con la zeaxantina. De la pulpa que envuelve sus semillas se extrae un colorante.aparecen otros muchos carotenoides. utilizado para colorear alimentos y también en otras industrias. Es el carotenoide típico del maíz. la bixina y la nor-bixina. Tagetes erecta (oriundo de Méjico. También contiene cantidades significativas de β-caroteno Zeaxantina La zeaxantina se encuentra bastante distribuida entre los vegetales. carne y huevos. Separar los carotenos de las xantofilas que se Pigmentos del azafrán encuentran en las zanahorias. la luteína y la zeaxantina se encuentran presentes en la retina humana. el safranal. de modo que al mezclar el colorante con los alimentos. Debido a la presencia de los grupos de azúcar en los extremos de la cadena. del orden de 50. Aunque se ha indicado que podrían proteger de la enfermedad conocida como degeneración macular. como el llamado “clavelón de la India”.

extraer los pigmentos con 25 ml de alcohol al 95%.Si a una zanahoria se le extraen sus pigmentos naturales que le dan coloración por medio de disolventes orgánicos y después al obtener estos se realiza una separación de los pigmentos constituyentes MATERIAL               Bisturí Probeta 10. Volver la capa inferior al embudo y lavar con 2 porciones sucesivas de 10 ml c/u de éter de petróleo. caliente en un matraz de 250 ml (la muestra debe quedar incolora). 9. 2. Zanahorias casi incoloras después de extraer en alcohol 3. 6. 5. Evaporar el éter de petróleo calentando a menos de 40° C usando al vacío (manipule con cuidado). Picar 10 gramos de zanahoria perfectamente. 8. la superior de éter que lleva los carotenos y la inferior las xantofilas. Re extraer con otros 25 ml de alcohol y reunir los extractos. permitir reposo para que se separe en 2 capas. Calentar la solución amarilla y diluir aproximadamente al 85% de alcohol con H2O. B) SEPARACIÓN DE CAROTENOS  Disolver 20g de alúmina en metanol hasta cubrirla  Introducirla en la columna para cromatografía  Introducir la muestra por medio de una pipeta pasteur  Utilizar como eluyente éter de petróleo – acetona (95:5) RESULTADOS A) Extracción y separación de carotenos REACTIVOS      Etanol Agua destilada Éter de petróleo Alúmina Acetona MATERIAL BIOLÓGICO  10g de zanahoria EQUIPO  Parrilla de calentamiento  Rotavapor METODOLOGÍA A) EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE CAROTENOS 1. 4. Disolver el residuo en 2 ml de éter de petróleo antes de pasar a columna. Combinar los extractos de éter de petróleo y lavados con 10 ml de alcohol al 85% para quitar las xantofilas. entonces se podrán extraer los carotenos de la zanahoria y después a estos por medio de cromatografía de adsorción en columna se podrán separar en sus tres tipos de terpenos. 50ml 3 matraces erlenmeyer 250ml 1 agitador de vidrio 1 espátula Pinzas de 3 dedos Soporte universal Columna para cromatografía Vidrio de reloj Pipeta volumétrica 10ml 3 vasos de precipitados de 150ml Embudo de separación Pipeta pasteur Vial ámbar por medio de lavados. Agitar la solución en un embudo de separación con 25 ml de éter de petróleo. 7. enfriar a temperatura ambiente (agregar 9 ml de H2O). Separar y guardar la capa superior. 11 .

6ml) Carotenos β-caroteno (2.7ml) 12 .Evaporación del éter de petróleo en el rotavapor B) Separación de los carotenos Extractos de la zanahoria Preparación de la columna Separación de carotenos y xantófilas Tubos con los 3 carotenos extraídos Capa superior: carotenos Capa inferior: xantófilas α-caroteno (4.

"Química Orgánica". [15] Garcia Closas R. Lopez. El más conocido de los carotenos es el ß-caroteno (C40H56O). H. Pastor Ferrer C. Armenia. Y como estos se contienen en diferentes proporciones. Ed. J. Esto se realizó hasta que las zanahorias quedaron prácticamente incoloras.M. Interamericana de MacGraw Hill. Shurvert.  Al realizar la separación de los carotenos por el método de cromatografía en columna. “An Introduction to the Chemistry of heterocyclic compounds. Barcelona: Ed. 1993. 1984.  Se evaporo en el rotavapor el éter para obtener los carotenos y después estos se introdujeron en la columna de cromatografía por el método de adsorción. X. 2003.B. Murray. Streitwieser. 1998. Granner.19. FERNÁNDEZ y J. John Wiley and Sons. Mexico. Rodwell. J. Med Clin (Barc) 2002 Mar 2.. los carotenos. Barriga. “Tratado de Farmacología” 12ª. β y γ. A. REFERENCIAS γ-caroteno (6.1227. N.7ml) y γ-caroteno (6.4ml). [3] Bilbao.4ml) [1] Lehninger.R.X Webster. Limusa. J. que poseía una coloración más intensa. 1998. 1985. [5] Silverstein R. M.html [12] Robert K. C.M. 1974 [9] Irease G. el cuál es un tetraterpeno (hidrocarburos saturados o insaturados que se consideran constituidos formalmente por unidades sucesivas de isopreno (C5H8)). “Análisis Fitoquímico preliminar” Universidad del Quindio. β-caroteno (2. 2ª ed. D. Graham. Distribución de la concentración sérica de betacaroteno y alfa-tocoferol en una muestra representativa de la población adulta de Cataluña.determinar cualitativamente los 3 tipos de carotenos que existen: α. “Flora Medicinal de Colombia”. “Spectrometric Identification of Organic Compounds”. 240264 [2] Ascon-Bieto. 1989. seguido del alfa y por último el beta caroteno.F. [16] MÍNGUEZ. Manual Moderno. Ribas Barbay Vinas L et al.). esto debido a que estos pigmentos son insolubles en agua. 1974 [11] http://milksci. y C.México. Olmos Castellvell M. PEREDA.118(7):256-61. Mayes.A. estos junto con las xantofilas son los que le proporcionan el color naranja a las zanahorias ya que son los pigmentos vegetales que las constituyen.Y. Y. de cada uno se obtuvieron cantidades distintas habiendo más del gama caroteno. 1997 [4] Lambert. Jhonson. Ed. Ed. Six Edition. 3ª Edi.unizar.es/bioquimica/temas/pigmentos/ca rotenoides. CONCLUSIONES Por medio de esta práctica. “Determinación de Estructuras Orgánicas”. M. Mac Graw Hill. Edit. sin embargo para la finalidad de esta práctica se separaron las xantofilas de los carotenos para después por medio de cromatografía separar y 13 .J. [6] Acherson. Ed. and Ewvans W. “Fisiología y Bioquímica vegetal”. logramos extraer de la zanahoria. en la fase orgánica se separaron los carotenos por medio de lavados y en la acuosa a las xantofilas que después se desecharon debido a que el producto de interés eran los carotenos.. 10. M. “Organic Structural Spectroscopy”. 1996. N.R. Pimiento pimentonero (Capsicum annuun L.A. [13] Maria Luz P. 1990 [8] Dominguez. que se suele utilizar como colorante en la industria alimenticia. Reverté. Daryl K. y F. 701-704. de Portela. Ed. L. Prentice Hall.  La solución que se obtuvo fue de un color amarillo-naranja debido a la presencia de xantofilas y carotenos que son los pigmentos naturales de la zanahoria. se lograron obtener los 3 tipos de carotenos que existen: αcaroteno (4. Ed. Serra Majem L. 1191. Limusa.. Lightner. Wiley and Sons. Edición.6ml). Lípidos En Principios de bioquímica.1986 [10] Pasto D. “Métodos de Investigación Fitoquímica”. DISCUSIÓN DE RESULTADOS  Se picaron las zanahorias para extraer los pigmentos en alcohol al 95%. 1994 [14] A. 1993.  Para separar estos pigmentos se utilizó un embudo de separación. R.. Y Talon. Del R.H. "Vitaminas y Minerales en Nutrición". Omega. Roman B. Heathcock. "Bioquímica de Harper". [7] García.

14 .1 0.Relación entre los pigmentos carotenoides rojos y amarillos. Grasas y Aceites 3 5(1):4.

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