Laboratory practice in Hematology

中國醫藥大學附設醫院 高吉鳳

內容
血液檢體的採集 血液常規檢查( Complete blood count ) 血液抹片及染色 網狀紅血球計算 白血球分類

一、血液檢體的採集
項目 CBC 血球形態 ESR 血小板計算及機能檢查 血紅素分析 PT 、 APTT 等凝固試驗 細胞化學 LAP 染色 紅血球脆性試驗 抗凝劑 EDTA EDTA Sodium citrate 較佳, EDTA EDTA EDTA Sodium citrate Heparin Heparin

使用抗凝劑注意事項 使用適量的抗凝劑和血液混合。抗凝劑不足則沒有抗 凝效果,過量則引起血球脫水 ( 乾粉劑 ) 或稀釋 ( 液 劑)。 乾式抗凝劑和血液混合要完全,來回至少搖 10 次或 1 分鐘。切勿猛搖,以避免溶血。血液若靜置後,檢 查前要充分混合,機械式混合更佳。 EDTA 之血液作各項檢查的儲存時限 : . 1 小時 : 血液抹片、白血球計算、網狀紅血    球、血小板、骨髓抹片、瘧疾原蟲。  . 24 小時 :RBC 、 Hb 、 Ht 。  . 48 小時 : 血型 .

monocyte. eosniophil.二、 CBC ( Complete blood count ) Cell Counts: RBC. basophil . MCHC .RDW. lymphocyte. WBC. PDW WBC differential count: neutrophil. Platelet Cell Indices: Hb concentration. MCH. MCV. MPV.

0-4.5×106 /uL HGB: 男 14-18 女 12-16 g/dL HCT: 男 39-52 女 35-48 % PLT: 130-400×103 /uL MCV:80-100 fl MCH:27-33 pg MCHC:32-36g/dL .5-5.99-10.5 女 4.39×103 /uL RBC: 男 4.CBC 參考值 WBC:3.

臨床意義 CBC 臨床意義 WBC :感染時 WBC 增加 RBC :貧血時 RBC 減少 HGB :貧血時 HGB 減少 HCT :貧血診斷之指標 MCV :區別貧血的種類為大球性或小球性貧血 MCH :判斷血球為低色性或高色性 MCHC :判斷血球為低色性或高色性 PLT :增加:骨髓功能亢進、急性感染、急性出血、溶血    減少:再生不良性貧血、骨髓不良症、 SLE 、輸血 後、 DIC .

Mean corpuscular constants Size of erythrocyte MCV : Mean corpuscular volume 平均紅血球容積 MCV = 【 Ht ( % ) /RBC ( 106/uL )】 ×10fl 以 Ht 除以 RBC 乘 10fl ( femtoliter:101 5 L) Normocytes Microcytes Macrocytes MCV 80-100 fl MCV <80 fl MCV>100 fl 7-8µm <6µm >9µm .

Color of erythrocyte MCH:Mean corpuscular hemoglobin 平均紅血球血紅素 MCH= 【 Hb ( g/dL ) /RBC ( 106/uL )】 ×10pg 以 Hb 除以 RBC 乘 10pg ( picogram:10-12 g ) Normochromic Hypochromic Hyperchromic MCH:27-33 MCH:<27 MCH:>33 central pale area=1/2d central pale area>1/2d central pale area<1/2d .

Color of erythrocyte MCHC:Mean corpuscular hemoglobin concentration 平均紅血球血紅素濃度 MCHC= 【 Hb ( g/dL ) /Ht ( % )】 ×100g/dL 以 Hb 除以 Ht 乘 100g/dL Normochromic Hypochromic Hyperchromic MCHC:32-36 MCHC:<32 MCHC:>36 central pale area=1/2d central pale area>1/2d central pale area<1/2d .

WBC DC 臨床意義 . NEUT% : (1) 增加:感染、發炎、組織壞死、代謝障礙、急性出血 或溶血 (2) 減少 : 感染、骨髓障礙、肝硬化、末梢血之血球破壞 . LYMPH% : (1) 增加 : 傳染性單核球增多症、傳染性淋巴球增多症、 德國麻疹 (2) 減少 : 免疫不全症候群、腎上腺皮質素增加、淋巴循 環缺損 .

WBC DC 臨床意義 MONO% 增加 : 感染性疾病、 SLE 、 RA 、斑疹傷寒、結核 病、單核球性白血病 減少 : 惡性貧血、敗血病、白血球高度增加。 ˙ EO% 增加:寄生蟲感染、過敏 ˙ BASO% 增加: CML 、天花、水痘、溶血性貧血、 Hodgkin 氏病、重金屬中毒。 .

RDW . Red cell distribution width: 紅血球分布寬度 .二種表示方法 : RDW-SD: 由測定的容積( uL )計算出之標準差( SD ) RDW-CV: 由統計出 SD 後,除以 MCV 值,乘 100% . RDW-CV>15%:Anisocytosis (紅血球大小不等症) a variation in the size of the RBC .

LYMPH%.EO#.MCH.MPV.MFR.HFR. IG# N: NRBC%.RET#.MONO%.RDW-CV.P-LCR D: NEUT%.HPC%.LYMPH#.BASO#.分析項目 37 個分析項目 .HGB.LFR.RBC.NRBC# R: RET%.PDW.EO%.PLT-O 37 .PCT.MONO#.BASO%.HCT.MCV. IG% NEUT#.IRF.MCHC.HPC#. 分別歸為 4 類 C: WBC.PLT-I RDW-SD.

分析原理 四種偵測原理 . BASO NEUT/BASO. HCT. PLT-O RBC. MCV. 七個偵測管路 Parameters WBC. MONO. IRF. LYMPH. PLT-I HGB HPC & Immature Cell Channel/Detector Principle WBC/Baso DIFF NRBC RET/PLT-O RBC/PLT-I HGB IM I Impedance Hydrodynamic Focusing SLS-Hb RF/DC Flowcytometry Semiconductor Laser w/wo Fluorescence . EO NRBC RET.

FCM/Laser/Fluorescence 原 理 Semiconductor Laser Laser beam: 633nm Flow Cell CELLPACK CELLPACK Sample .

光源結構 .

偵測的參數 側螢光 (SFL) DNA / RNA 資訊 側散亂光 (SSC) 細胞內顆粒、結構複雜性 前散亂光 (FSC) 細胞大小 .

WBC/Baso Scattergram 強酸性試劑 . 不影響白血球 的計數 SIZE 內容物結構 . 能有效的將紅 血球完全溶解 .

DIFF Scattergram DNA / RNA 含量 內容物結構 .

Young Cell 的 分佈 Aty-Lym ProMyelo Myelo Blast ta Me d Ban NR ec necser ou F ( l RBC Ghost Side Scatter ( 內容物結構 ) Resistant RBC 既沒有 RNA. 也沒有顆粒 . 因此即使有 紅血球破壞不全的現象 . 也不會干擾 WBC 的分類 .

PLT-O RBC. BASO NEUT/BASO.分析原理 -IMI Parameters WBC. MCV. LYMPH. IRF. EO NRBC RET. HCT. MONO. PLT-I HGB HPC & Immature Cell Channel/Detector Principle WBC/Baso DIFF NRBC RET/PLT-O RBC/PLT-I HGB IMI Impedance Hydrodynamic Focusing SLS-Hb RF/DC Flowcytometry Semiconductor Laser w/wo Fluorescence .

Immature WBC 偵測原理 -2 RF: Radio frequency 細胞核密 度 DC: Direct Current (Impedance) 細胞的大 小 .

“ 細胞核密度 ” 偵測 RF( 核密度 ) 細胞在成熟的過程中最 大的差異在於核密度的 Band 變化利用 RF 來偵測細胞核 的密度可以很敏感的 將 Blast. band 等分開 Metamyelocyte DC( 大小 ) Myelocyte Promyelocy te Blast .IMI Scattergram 以 “細胞膜脂質含量 ” . IG.

Lymphoblast XE-2100 提供 Blasts? 以及 L-Blast? 兩種 .Abnormal Cell 分佈 DIFF Aty-Lym ProMyelo Myelo RF( 細胞核的密度 ) ta Me d Ban IMI PLT Clump Blast ) AND ANR ec necser ou F . ( l A Left shift Immature Gran Lym Mono Eo No rm al t Neu normal B Blast DC( 大小 ) HPC Side Scatter (Internal structure) A 可偵測 Lymphoblast/Myeloblast B 可偵測 Myeloblast A+ B+ Myeloblast A+ B .

“ 細胞核密度 ” 偵測 偵測位置 :IMI Channel (IMI=Immature Myeloid Information 提供項目 :Blast?. Aty-Ly?. IG?. IG#&% (HPC:Haematopoetic Progenitor Cell. 造血前驅細胞 . 周邊血液幹細胞 ) . LS?. HPC#&%. “ 細胞內結構資訊 ” 偵測 偵測位置 :DIFF Channel 偵測原理 2:RF/DC 以 “細胞膜脂質含量 ” .Immature WBC 偵測 XE-2100 提供兩種分析原理偵測 Immature WBC 偵測原理 1:FCM/Laser Scatter Light/Fluorescence 以 “ RNA 含量 ” . 相當於 CD34+ Cell 也就是 PBSC.

PLT-O RBC. PLT-I HGB HPC & Immature Cell Channel/Detector Principle WBC/Baso DIFF NRBC RET/PLT-O RBC/PLT-I HGB IMI Impedance Hydrodynamic Focusing SLS-Hb RF/DC Flowcytometry Semiconductor Laser w/wo Fluorescence . MCV. LYMPH. BASO NEUT/BASO. EO NRBC RET.分析原理 -NRBC Parameters WBC. IRF. MONO. HCT.

NRBC Scattergram Forward Scatter (SIZE) Fluorescence (DAN/RNA 含量 ) .

MONO. IRF. HCT. PLT-I HGB HPC & Immature Cell Channel/Detector Principle WBC/Baso DIFF NRBC RET/PLT-O RBC/PLT-I HGB IMI Impedance Hydrodynamic Focusing SLS-Hb RF/DC Flowcytometry Semiconductor Laser w/wo Fluorescence . BASO NEUT/BASO. PLT-O RBC.分析原理 -RBC/PLT-I Parameters WBC. LYMPH. MCV. EO NRBC RET.

Impedance (DC Method) .

Impedance (DC Method) Internal Electrode Aperture External Electrode 電位 = 阻抗 x 電流 儀器供給固定的電流 . 阻抗與電位成正比 .

Hydrodynamic Focusing 原 理 ( 流體動力聚焦 ) 前後高壓導流 導正血球排列及方向 .

後導流液可防止迴流 . 大小測定失真 (Signal B) 2. 干擾血小板測定 (Signal C) Signal A OK Signal B NG Signal C NG . 前導流液可防止路徑偏斜 .Hydrodynamic Focusing 原 理 沒有流體動力聚焦 C A B Blood Cells Aperture Critical Zone 有流體動力聚焦 Hydrodynamic Focusing 可避免 1.

PLT Histogram RBC 的 Histogram PLT 的 Histogram .RBC.

RDW SD RDW-CV % = MCV X 100 = L2+L1 L2-L1 X 100 RDW-SD (RBC arithmetic distribution width) is the arithmetic distribution width measured at the 20% level when the peak is equivalent to 100% .

PDW. P-LCR .

PLT-O RBC.分析原理 -RET/PLT-O Parameters WBC. MCV. MONO. EO NRBC RET. HCT. LYMPH. BASO NEUT/BASO. IRF. PLT-I HGB HPC & Immature Cell Channel/Detector Principle WBC/Baso DIFF NRBC RET/PLT-O RBC/PLT-I HGB IMI Impedance Hydrodynamic Focusing SLS-Hb RF/DC Flowcytometry Semiconductor Laser w/wo Fluorescence .

Impedance/Hydrodynamic Focusing 原理 PLT-I 的 Histogram .

0 % 32.2%.0 % 61. 與手工法吻合 .網狀紅血球成熟度及比例 HFR.1% 7.5% .MFR.LFR 根據 Heilmyer’s Classfication Stage 0 Stage 1 Stage 2 Stage 3 Stage 4 Orthochromatic Normoblasts Dense Coherent Reticulum in non-nucleated Cell Extended Network of Loose Reticulum Scattered Granules with Residual Reticulum Scattered Granules 參考值 0.0 % Scg 中的分佈 HFR HFR MFR LFR Sysmex XE-2100 Retic 參考值 0.

大小 約 1 ~ 2μm. 由於是 DNA 成份 . 溶血性貧血 . 常見於脾切除 . 因此激發的螢光強度大於網狀紅血球 .Wright’s stain 呈藍黑色 . . 巨芽球性貧血 .Howell Jolly Body…NO Interference Howell Jolly Bodies: 細胞核殘留 DNA 成份 . 呈顆粒狀 (1 至數個 ). 海洋 性貧血 .

Pappenheimer Body…NO Interference
Pappenheimer Body: 紅血球合成血色素過程中 所用的鐵 , 以鐵蛋白型式 堆 積於紅血球中 , Wright’s stain 呈藍黑色 , 大小約 2μm, 較不呈顆粒狀 , 常 見 於脾切除 , 造血旺盛的溶 血 性貧血 , 由於是鐵蛋白成份 ,

Heinz Body…NO Interference

Heinz Bodies: 變異血色素殘留 , 常位於紅血球邊緣 , 大小約 0.3 ~ 3μm, 須經 BCB or Methyl violet 染成紫色 , 常見於脾切除 , G-6-PD 缺乏 , PK 缺乏 , 重型 海洋性貧血 , 由於是血色素成份 , 因此沒有螢光反應 , 不干擾網狀紅血球

分析原理 -HGB
Parameters WBC, BASO NEUT/BASO, LYMPH, MONO, EO NRBC RET, IRF, PLT-O RBC, HCT, MCV, PLT-I HGB HPC & Immature Cell
Channel/Detector

Principle

WBC/Baso DIFF NRBC RET/PLT-O RBC/PLT-I HGB IMI Impedance Hydrodynamic Focusing SLS-Hb RF/DC Flowcytometry Semiconductor Laser w/wo Fluorescence

SLS 試藥反應 Fe 2+ Fe 3+ Fe 3+ SLS SLS 親水端與球蛋白結合 立體結構的改變 氧化 : Fe 2+ --> Fe 3+ SLS 厭水端 與 Fe 3+ 鍵結 --> SLS-Hb .

8 ± 2. MD.RDW 應用 Comparison of Hemoglobin and Red Blood Cell Distribution Width in the Differential Diagnosis of Microcytic Anemia Chung -King Lin. 1992.7 3.116:1030 -1032 結論摘 要: RDW SD HDW *Mean ± SD αthallassemia 35.27 Iron defficiency Anemia 48.2 2.21 ± 0. Joeng Chang -Fang Chiu. Mei u -Lan Jiang.6 3.2 2.2 ± 2. MD. MT.7 ± 8.23 ± 0.19 RESUL T SIGNIFICANT DIFFERENCE NON -SIGNIFIC ANT DIFFERENCE . Sheng -Y Chen.86 Normal Control 42.9 ± 2. PhD -Shi Lin. MD. MD. Arch Pathol Lab Med.29 β -thallassemia 32.27 ± 0.87 ± 0.

• 這是由台北榮總針對  RDW-SD 及 HDW 對於小球性貧血的比較, 用 RDW-SD 來區分缺鐵性貧血與海洋性貧血,比用 HDW 要來得 敏感,因為缺鐵性貧血大於正常值而海洋性貧血則小於正常值, 而 RDW-SD 對於甲型及乙型也有很好的區分效果。 •反觀 HDW 則無法區分,因為海洋性貧血及缺鐵性貧血皆大於正 常值,且乙型海洋性貧血和缺鐵性貧血重疊性相當高,因此 HDW 並無明顯的臨床意義,用來做缺鐵性貧血,會有干擾。 .

•RDW-SD 對於 EPO 治療,更可以監控患者是否有缺鐵的現象, 先處理患者缺鐵的問題,而不會浪費在 EPO 治療上。 •Sysmex 的血球分析儀中, SF-3000 、 NE-8000 、 SE-9000 等 機型均可以偵測 RDW-SD ,並以 RDW-SD ,再根據 MCV 、 Hb 、 MCH 、 MCHC 等資料做為輔助參考判斷,可以直接自動提供 “Iron Dificiency Anemia” 或 “ Hb Defect” 等 flag ,更明確的提醒 使用者做必要處理。 .

RDW SD RDW-CV % = MCV X 100 = L2+L1 L2-L1 X 100 RDW-SD (RBC arithmetic distribution width) is the arithmetic distribution width measured at the 20% level when the peak is equivalent to 100% .

三、血液抹片及染色 .

Hematology Stain  Nonvital stains Methylene blue and eosin Wright-Giemsa stain. Liu’s stain • Prussian blue stain  Vital stains Reticulocyte (RNA stain) : buffered new methylene blue or brilliant cresyl blue (BCB) Heinz body (denatured Hb) : brilliant cresyl blue .

methylene blue 對細胞內之酸性物質如細胞核 ( 含 DNA 核酸 物 ) 及細胞質 RNA ,故此類酸性物質就被稱為「嗜鹼性」。 2.Liu’ stain Liu’A Eosin Y.methanol Liu’B methylene blue .azure B 可將白血球之初級顆粒染成紅紫色或藍紫色。 •Acidic dyes eosin Y 對鹼性物質(如嗜酸性顆粒)染成橘紅色,此類鹼 性 物質稱為「嗜酸性」。 •Neutral dye 嗜中性球細胞質顆粒,可同時被 methylene blue 及 eosin Y 染 上呈紫色,稱該顆粒為「嗜中性」。  細胞的成熟和紅血球相似逐漸由藍色 (RNA 減少 ) 變淡紅色。 . methylene blue .Azure B Basic dyes: 1.

網狀紅血球計算 .

Reticulocyte count 染料 :new methylene blue 染料 :Brilliant cresyl blue 取新鮮血液加等量 0.5-2% 。 診斷貧血症及監測貧血症治療效果極有價值。 有助於瞭解造血的反應及反應骨髓活性。 .5% new methylene blue 或 1%BCB 混合, 10 分鐘後作抹片。 乾燥後於 1000 倍油鏡下以視野縮小鏡計算 1000 個 RBC 之 RET 數,再算出 RET% 。 參考值 : 新生兒 2-6% ,小孩 :2-3% ,成人 :0.

.

WBC MORPHOLOGY .

.

Schilling’ hemogram Cell type % Band Neutrophil 0 .3 Basophil 0-1 Monocyte 4-8 Normal count / ul 80-60 2000-7000 1000-4000 50-400 0-50 300-700 .5 Seg Neutrophil 50-65 Lymphocyte 20-40 Eosinophil 1.

Myeloblast Size : 15-20 µm large round or oval nucleus evenly stained chromatin in stands or granules with reticular appearance pink parachromatin. 2-5 nucleoli present cytoplasm deep blue and shows paranuclear halo. may contains auer rods .

Band form  Size : 10-15 µm horse shoe shape nucleus nucleus is not segmented but it deeply indented chromatin is coarsely clumped cytoplasm is pink with specific granules .

Neutrophil  Segment Size : 10-15 µm eccentric nucleus with heavy thick chromatin masses shows 2-5 lobes which are connected by a thin chromatin bridges large pink cytoplasm has numerous.fine and evenly distributed purple granules .

Eosinophil  Size : 12-17 µm bilobed spectackle shape nucleus Cytoplasm is large and contains pink-orange coloured granules which are large in size spherical and do not cover nucleus .

Basophil  Size : 10-12 µm nucleus is indented bilobed or kidney shape difficult to see because of cytoplasmic granules which obscure the nucleus granules are deep purple and vary in size .

round.it stains pale blue in colour .deep purple staining nucleus which occupies most of the cell cytoplasm is very less only a thin rim arround the nucleus.Small lymphocyte Size : 6-9 µm.

unevenly stained and may be vacuolated it may contains fine azurophilic granules and often phago cytosed material . gray-blue.linear threads cytoplasm is abudant.chromatin network consists of coarse.Monocyte  Size : 15-20 µm nucleus is kidney shaped or round often lobulated (with 2 or more lobes) and at times folded at the periphery with brainlike convolutions. loose. opaque.

usually rounded.Platelets Size : 1-4 µm. light blue and contains purplereddish azurophilic granules which may be clumped centrally(chromomere) and a surrounding light blue cytoplasm (hylomere). .

ABNORMALITIES IN WBCs Toxic changes Transformed lymphocytes Dohle bodies Pelger-Huet anomaly Hypersegmentation Reider cells Hairy cells Auer rods Smudg cells Atypical or Reactive lymphocytes Shift to left & shift to right .

increase in number of granules and vacuolization in myeloid cells Intense purple-black In severe infection. malignancy and cytotoxic in myeloid cells EDTA preserved blood also produce this artifact . chemical poisoning.Toxic changes Form of denser granules. burns.

Cytomegalovirus.Atypical or reactive lymphocytes are seen in B streptococcus. viral hepatitis. syphilis. drugs. viral pneumonia. viral upper respiratory tract infection. toxoplasmosis. herpes zoster & simplex . vaccination. Epstein-Barr virus (Infectious mononucleosis).

RBC MORPHOLOGY .

Microcyte MCV > 100 fl Megaloblastic anemia Vit. hemoglobinopathies Sideroblastic anemia .Macrocyte vs. B12 or folate deficiency Hypersegmented neutrophils Chronic liver disease Target cells Increased erythropoiesis MCV < 80 fl Iron deficiency anemia Thalassemias.

紅血球形 MCV 低 .

Anisocytosis .

Poikilocytosis .

burr cell Acanthocyte Spherocyte Elliptocyte Schistocyte Stomatocyte Tear drop cell Agglutination Rouleaux formation .Red cell change (poikilocytosis) Target cell Echinocyte.

Target cells(Mexican hat)       A peripheral rim of HB with a dark. HB-contain area result from an abnormal ratio of membrane to internal content (increased membrane & decreased ) Hb Thalassemia I ron deficiency anemia hemoglobinopathies Chronic liver disease Aftersplenectomy .central.

Rouleaux formation Red cells align face to face in column Multiple myeloma Macroglobulinemia Increased gamma globulin Stacked coin-like .

Thanks you! .