EXPERIMENTO 10

PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

REQUISITOS Repasar las estructuras de los lípidos y sus reacciones. 1. FUNDAMENTOS

OBJETIVOS Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lípidos, algunas de las cuales pueden servirnos para su identificación

Los lípidos, son un grupo heterogéneo de compuestos, de naturaleza antipática, es decir que contienen regiones hidrofóbicas y regiones hidrofílicas (figura 1). La mayor parte de los lípidos abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), están formados por ácidos grasos de cadenas hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados (en CIS, figura 2). Los lípidos llevan a cabo múltiples funciones en el organismo, como: almacenamiento de energía, de transporte, cumplir funciones hormonales, actuar como vitaminas, formar parte de las membranas celulares confiriéndoles la propiedad de permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en determinada dirección, así como la conducción nerviosa y el transporte activo como la bomba de Na+/K+. A diferencia de los carbohidratos, proteínas y ácidos nucleicos, no forman polímeros, son mas bien moléculas pequeñas que presentan una fuerte tendencia a asociarse mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las propiedades de los lípidos pueden ser usadas para su reconocimiento, ya que pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose productos coloreados, desprendimiento de vapores, formación de jabones (figura 3), entre otros. Figura 1 Cabeza-Cola de los ácidos grasos

CH3 COLA

O C OH CABEZA

HO C O CABEZA COLA CH3

122

Figura 2 ionización CH3 Isomería CIS-TRANS de los ácidos grasos. 44o) COOH Figura 3 3HC Saponificación de un ácido graso COOH NaOH Ácido Palmítico Cabeza Polar 3HC COONa Cola Apolar Palmitato de sodio (Jabón) 123 . 13o -16o) COOH H 3C CH HC Ácido Elaídico TRANS (p. puentes de hidrógeno con el agua y su COOH CIS CH3 TRANS H O H O COOH CH3 TRANS C OH H O H R-COOH HC HC R-COO + H+ Ácido Oleico CIS (p.f.f.

cuya reacción se muestra en la siguiente figura. Figura 4 Reacción de la prueba de la acroleína CH2OH CHOH CH2OH GLICERINA SO4HK. siempre que se haga una hidrólisis previa.4 Prueba de Lieberman Se basa en la reacción coloreada (verde) que dan aquellas sustancias que tienen como núcleo el ciclo pentanoperhidrofenantreno. La reacción positiva se manifiesta por la reacción de un precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio. 124 .1.1 Fundamentos químicos de las pruebas para lípidos.1 Prueba de acroleína La positividad de esta reacción indica la presencia de glicerina y se manifiesta por el desprendimiento de vapores blancos irritantes de olor desagradable.2 Prueba de fusión (para investigar fósforo) La positividad de esta reacción indica la presencia de fósforo inorgánico. debido a que enlaza en el doble enlace (figura 6) Figura 6 Reacción de la prueba de Iodo I2 I I | | CH3-(CH2)7-CH-CH-(CH2)7-COOH (Di-iodo-9.1.esteárico) CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-COOH (ácido oleico) 1.1.10-ác.1. 1. ∆ 2 CH2 CH C O H ACROLEINA H2 O 1. Las sustancias orgánicas dan la reacción positiva.1.3 Prueba de Iodo: La positividad de esta reacción indica la presencia de ácidos grasos de la serie etilénica. La reacción positiva se manifiesta por la desaparición del color del Yodo. (Figura 5) Figura 5 Reacción de la prueba de fusión pH ácido (P) (NH4)3 [ p ( Mo3 O10 ) 4 ] (Fosfomolibdato de amonio) (NH4)6Mo7O24. 4H2O (Molibdato de amonio) 1.

P. mechero y pinzas de madera 2. Calentar fuertemente y observar si se desprenden vapores blancos irritantes.5 Prueba de saponificación Es una prueba para identificar ácidos grasos.5 1 ml 125 . P.OH | CH2OH Glicerol + CH2-OOC-(CH2)14-CH3 | CH-OOC-(CH2)14-CH3 | CH2-OOC-(CH2)14-CH3 Tripalmitoil-glicerol (Tripalmitina) 3 CH3-(CH2)14-COONa Palmitato de sodio (Jabón) 2. La figura 7 muestra la formación de un jabón Figura 7 Prueba de saponificación CH2OH | CH.1. dejar en reposo y observar. Sustancia problema Solución del colorante Sudán IV Agitar.1. Mezclar y observar. Volumen 1 ml 1 2 ml 1 0.2. las sales metálicas de los ácidos grasos superiores.2.1. Acroleína Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema Probar solubilidad por separado con éter. P.1 Materiales 2.3. Coloración 2. Sustancia problema1 g.2. cloroformo y agua. de olor desagradable. de la sustancia problema. Solubilidad 2. los lípidos toman la coloración. SO4HK. general para los lípidos que los contengan. Los jabones se define químicamente como. por lo tanto.2 Métodos Prueba 2.2. MATERIALES Y MÉTODOS Tubos de ensayo.

de glicerina. 4.5 P. Dibuje las reacciones para formar un jabón con 3 moléculas de ácido oleico Efectué un enlace ester. Sustancia problema (En una cápsula de porcelana colocar) Calentar ± 80ºC En un tubo de ensayo colocar: 1. Mezclar Reactivo de Hübl Mezclar y observar.2. agregar 5 ml. Reacción (+) desaparición del color del Yodo. 1. Dejar enfriar y observar Colocar en tubo de ensayo una porción del producto obtenido. Diga cuáles son los fundamentos químicos de las pruebas estudiadas.2. de agua y agitar. El reactivo se prepara con dos partes de carbonato sódico y una parte de nitrato potásico) Agua caliente (+80ºC Mezclar y dejar en reposo durante 10’ Ácido nítrico Mezclar. Agitar H2SO4 concentrado Agitar suavemente y observar Reacción (+) coloración verde. P. 126 . Esto se hace con el fin de observar sus propiedades espumantes Volumen 0.Prueba 2. 6. AUTO-EVALUACIÓN.7.. 3.5 ml 2. 5.5 ml 1 ml 6 ml 0. Para el colesterol diga cuales pruebas y porque serán positivas. Agregar esta mezcla al contenido de la cápsula Calentar a la llama. Defina los siguientes términos: aminoácidos. proteínas. Esperar 5’ para ver la reacción Sustancia problema Anhídrido acético. calentar suavemente a la llama sin dejar hervir Molibdato de amonio 4% Mezclar y observar. Saponificación 2 min 3.2.5 ml de KOH al 85% y 1 ml. 2.2. Sustancia problema Cloroformo. análisis cualitativo.5 ml 2 ml 2 ml 10 min 1 1 ml 1 ml 1 ml 1 gota 0. La positividad se manifiesta por la formación de un precipitado de fosfomolibdato de amonio.6 P. Fusión Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema Mezcla de carbonato de sodio y nitrato de potasio (se prepara en el momento de usarla Carbonato de sodio al 2% y nitrato potásico al 2%. cuantitativo. calentar ± 80ºC. Lieberman 2.4. Iodo 2. Cuales son las aplicaciones prácticas de las pruebas. P.

Grasas neutras (+) Color verde Colesterol (-) Otros colores Céridos Esfingomielinas Cerebrósidos (-) no hay acroleína Colesterol. céridos. grasos saturados Saponificable Ac. grasos etilénicos Saponificable (-) No hay precipit.4. Marcha analítica LIPIDOS Insolubles en agua Solubles en los solventes orgánicos Se colorean con colorantes especiales Prueba de Acroleína (+) Vapores irritantes de acroleína Glicéridos o Fosfoglicéridos Prueba de fusión (Investigar fósforo) (+) Precipitado Fosfoglicéridos (-) No hay precip. esfingomielinas o cerebrósidos (-) Color del Yodo (+) Desaparece el color del Yodo Prueba de Fusión (investigar Fósforo) Ac. Practicar Saponificación (+) Precipitado Esfingomielinas 127 Céridos Cerebrósidos .

Iodo P. para reportar la positividad o negatividad de la reacción. 128 . fusión P. INFORME 10 (PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LÍPIDOS) Nombres N° del mesón N° del estudiante Desarrollo Informe Definitiva Apellidos Grupo de prácticas Fecha Calificaciones Entrada 1. coloque el numero de cada tubo de las muestras problemas que se le entrego. sin anexar hojas. acroleína P. En la casilla “N0 Muestra”. Saponificación Nombre Del lípido de la muestra problema Anote para cada tubo la composición del lípido identificado por Ud. Sobre la base de los resultados de sus pruebas. Use los signos (+) o (-).5. Ud. Lieberman P. Complete el siguiente cuadro con la información deseada. N0 Muestra Solubilidad Agua Éter Cloroformo P. según las reacciones que utilice Nota: El informe debe ser entregado al finalizar la práctica. coloración P. puede identificar la muestra problema y escribir la composición mas resaltante en las casillas correspondientes.