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CARACTERIZACIÓN, COMPARACIÓN DE CROMOSOMAS POLITÉCNICOS Y

UBICACIÓN DE MARCADORES CROMOSÓMICOS EN Gigantodax basinflatus Y


Gigantodax sp. (DIPTERA: SIMULIIDAE) BOGOTÁ-COLOMBIA.

Edison Arvey Alfonso Niño. Slendy Julieth Rodríguez Alarcón. Andrea Johana
López Moreno. Leidy Alejandra Rodríguez Aldana.1
1
Estudiantes de Licenciatura en Biología. Universidad Distrital Francisco José de
Caldas. Citogenética.

RESUMEN:

Los cromosomas politénicos son producidos por repetidos ciclos de ADN sin división
celular cuyas copias se organizan de manera continua formando un único cromosoma
gigante, manteniendo un permanente estado interfásico. Han sido encontrados en las
glándulas salivales de dípteros, ya que el patrón de bandeo de estos cromosomas permite
construir un mapa citogenético para un mejor análisis de especies de importancia
económica, clínica y veterinaria, como los de la familia simuliidae. Se colectaron larvas de
Gigantodax sp de la Quebrada la Vieja Bogotá-Colombia, identificando sus principales
marcadores cromosómicos para compararlos con los registrados de Gigantodax
basinflatus. Los cromosomas politénicos de Gigantodax sp se caracterizaron por
presentar inversiones en los cromosomas II, diferenciándose así las hembras de los
machos. Cada cromosoma posee un marcador que le identifica de forma más conspicua,
siendo este en el cromosoma I la región NOR, en el cromosoma II doble burbuja y en el
cromosoma III el telómero festoneado.

Palabras Clave: Cromosomas politénicos larvales, interfase, marcadores cromosómicos.

ABSTRACT:
Polytene chromosomes are produced by repeated cycles of DNA without cell division,
copies of which are arranged to form a continuous single giant chromosome, maintaining a
permanent interphase state. Has been found in the salivary glands of Diptera, as the
pattern banding of these chromosomes can build a cytogenetic map for better analysis of
economically important species, clinical and veterinary as the family Simuliidae. Larvae of
Gigantodax sp, were collected from Quebrada la Vieja Bogota-Colombia, identifying key
markers chromosome for comparison with basinflatus Gigantodax registered. Gigantodax
polytene chromosomes were characterized by sp investment in chromosomes II, differing
and females of males. Each chromosome has a marker that identifies more conspicuous
and this in chromosome I NOR region on chromosome II double bubble and the telomere
on chromosome III scalloped.

Key Words: Larval polytene chromosomes, interphase chromosome markers.


INTRODUCCION. principales transmisores de O. volvulus
son complejos de especies como S.
Los cromosomas politénicos son damnosum, S. guianense, S.
cromosomas gigantes que están oyapockense, S. ochraceum, S.
presentes en algunos ciliados, plantas metallicum y S. exiguum, siendo el
superiores y principalmente en glándulas principal transmisor para América Latina
salivares de Dípteros. Este tipo de S. ochraceum s.l (Rodríguez & Pérez,
cromosomas debe su tamaño, a un 2005).
fenómeno especifico en el cual los ciclos
de replicación del ADN se repiten Wygondzinsky y Coscaron reconocen
continuamente sin que haya una división ocho grupos de especies entre
de célula, en consecuencia estos Gigantodax, el G. brophyi, G. cilicinus,
cromosomas aumentan de tamaño y son G. cormonsi, G, cortesi, G, igniculus, G,
muy fáciles de observar al microscopio minor, G, multifilis y G. wrightik los
por la gran cantidad de detalles que ellos cuales contienen 17,11,10, 4, 2, 4,1 y 15
presentan (Karp, 2005). Fueron especies respectivamente (Moulton,
descubiertos en 1881 por Balbiani, 1996).
siendo comprendido hasta medio siglo
más tarde “(Kostoff, 1930; Painter, Rothfels (1981) encontró evidencias
1933,1934; Heitz and Bauer, 1933; King citológicas que soportan la hipótesis que
and Beams, 1934; Bridges, 1935) donde dice que estos dípteros retornan a sus
fueron analizados en las glándulas cursos de agua natales para ovopositar
salivales de larvas de los dípteros en especies como Prosimulium mixtum,
(Drosophila, Chironomus, Bibio)” en tres riachuelos cerrados y
(Lacadena, 1996), siendo estos encontrando que los riachuelos
individuos de gran aporte para este tipo contienen larvas de esta especie de
de estudios. dípteros, con inversiones especificas
Los simuliidae son una familia de para esta población en el brazo del
dípteros con distribución cosmopolita, cromosoma IIL y IS. Además los
encontrándose en Colombia los géneros cromosomas paternos de estas
Simulium de la subfamilia simiuliini, y poblaciones específicas se repiten año
Gigantodax de la subfamilia prosimuliini. tras año. (Lualon, 2006)
Ambos parecen idénticos, pero Simulium
presenta escotadura gular, esclerito anal Los estudios de los cromosomas de las
con un anillo incompleto que rodea los gandulas salivales han sido de gran
cercos dispuestos allí, branquias anales importancia en la taxonomía del número
con varias ramificaciones e histoblasto de dípteros en el mundo. Las diferencias
con cuatro filamentos cortos, gruesos y observadas en los patrones de bandeo
bien definidos (Needham, P.R, 1982). permiten el reconocimiento de especies
Mientras que Gigantodax no tiene hermanas biológicamente distintas lo
escotadura gular, presenta el anillo cual es útil para establecer la identidad
completo del esclerito anal, branquias de especies y sus relaciones
anales con tres ramificaciones bien filogenéticas (Coscarón, 1998). Por lo
definidas e histoblasto con ramificaciones cual, el propósito de este estudio fue
muy delgadas y largas (branquiales la caracterizar y comparar los cromosomas
mitad largos y la otra mitad cortos) politénicos de Gigantodax sp. de la
(Roldán, 2003). Estos simulidos tiene Quebrada la Vieja Bogotá-Colombia y
gran importancia tanto médica como Gigantodax basinflatus (Vargas, 2002).
veterinaria más que todo las hembras ya
que estas son hematófagas y transmiten
la filaria Onchocerca volvulus, los
MATERIALES Y MÉTODOS: lamina con acido acético al 60%, y
posteriormente se aplica una gota de
OLA (orecina lactoacetica), se deja
Las larvas de Gigantodax sp. con el actuar 10 minutos y se realiza un
histoblasto negro o gris fueron “squash” con la laminilla; el acido láctico
colectadas en la quebrada de la vieja, fluidifica el montaje y facilita el squash, y
ubicada a una altura de 2722 metros, a la orceina es un colorante del grupo de
4 grados, 39 horas y 23 minutos de las oxazinas, que tiñe específicamente la
latitud norte; y a 74 grados, 2 horas y 47 cromatina generando patrones negros en
minutos de longitud oeste, en Bogotá. Se las zonas donde se une con
siguió la metodología de Arteaga y heterocromatina (constitutiva y
Muñoz (1999) donde las larvas fueron facultativa), por ello se hace más fácil la
preservadas en Carnoy (tres partes de identificación de los marcadores
etanol al 90% por una de acido acético) y cromosómicos principales y específicos
refrigeradas hasta empezar el estudio del genero Simulium.
citogenético. Pasa a diferenciarse los
géneros Simulium y Gigantodax, Posteriormente se identificaron y
basados en el esclerito anal (completo en compararon los marcadores universales
Gigantodax e incompleto en Simulium), encontrados en Gigantodax sp. y de
luego las larvas se abren ventralmente Gigantodax basinflatus (familia
con un corte del sexto al noveno Simuliidae), con ayuda de la siguiente
segmento abdominal y se extraen las tabla (Muñoz de Hoyos, 1990):
glándulas salivares que están al lado del Además de construir el idiograma de
intestino. Estas glándulas se pasan a una Gigantodax sp.

IS: 3” basales (basal


“3”)
IL: marcador mayor (“marker”)
“3” subterminales (“subterminal 3”)
Patrón del telómero

IIS: anillo de Balbiani (“Balbiani ring”)


Cordón de zapato (“shoestring”)
central (“double Hubble”)
Doble burbuja (“trapezoide (al)”)
Trapezoide
tres bandas bien (“3 sharp”)
IIL: definidas (“parabalbiani”)
Parabalbiani

IIIS: grupo de bandas (“heavy band Group”)


pesadas (“blister”)
Ampolla (“frazzled end”)
Telómero festoneado

IIIL: banda basal pesada (“heavy basal band”)


Marcador basal (“basal marker”)
3 grupos pesados (“three heavy
groups”)
RESULTADOS Y DISCUSION:

I. MORFOLOGIA

En la quebrada de la Vieja, Bogotá


Colombia se encuentran larvas de la
familia Simuliidae, presentando dos
géneros, Simulium y Gigantodax,
identificadas para el presente artículo en
su totalidad como Gigantodax sp.
Fig. 2. ESCLERITO ANAL.
Estas larvas presentan una longitud de 5-
6 mm. Presentan una cápsula cefálica Los brazos del esclerito anal forman un
color marrón, los segmentos anillo y los dientes del submentòn se
abdominales presentan bandas marrones encuentran reunidos en 3 grupos
conspicuos (Roldán 2003).

Fig. 3. Filamentos Branquiales.


Gigantodax sp. Presenta cinco ramas
con 15 filamentos aproximadamente.
Fig. 1 Larva Gigantodax sp.
II. COMPLEMENTO
CROMOSÓMICO
El complemento cromosómico de todos con la Región Organizadora Nucleolar
los géneros de Simulidos estudiados es (NOR).
de tres pares de cromosomas (2n=6)
(Rothfles. 1979). El cromosoma I es En el cromosoma II no se observa
metacéntrico, mientras que el II y el III ninguna inversión siendo notorio el
son submetacéntricos con una relación “Antifaz” con Eucromatina a lado y lado
de 2:1 en el tamaño de los brazos (Hirai del Centrómero, en el IIS se observan el
et al. 1994, tomado de Arteaga & Muños, “Anillo de Balbiani”, “Trapezoidal” y
1999). Estos cromosomas politénicos “Doble Burbuja” con el “Cordón de
tienen gran importancia en la Zapato” central a ella, este ultimo más
investigación citogenética y “surgió a evidente en Gigantodax sp; en el IIL solo
partir de cuándo se demostró la se diferenció el “Parabalbiani”.
constancia del patrón de bandas
(Painter, 1933), lo cual permitió construir En cuanto al cromosoma IIIS fue común
los primeros mapas citológicos (Bridges, para ambos individuos el telómero
1935, 1938) y contribuir al desarrollo de festoneado, la “Ampolla” y el “Heavy”, y
la teoría cromosómica de la herencia por en el brazo largo el “3 heavy group”.
cuanto contribuyó a establecer la relación
entre la ordenación lineal de los genes Cromosoma I. Gigantodax sp.
sobre los cromosomas (Bridges, 1935
Citado en Lacadena, 1996)”. Este es el cromosoma más largo de los 3
(presenta en su totalidad 43 regiones), su
De esta manera, los idiogramas reflejan centrómero se encuentra en la mitad del
de mejor manera los marcadores cromosoma (en la región 22); en su
universales identificados en los Simulidos brazo S los marcadores NOR (región
Gigantodax sp. y Gigantodax basinflatus, 17 ), y “Two Blocks” (2B) en la región
donde el cromosoma I de ambos muestra 10,el Glazed en la región 6; y en el brazo
los “two blocks” (proximal al telómero en L el “Marker” (región 33 ) y “Heavy
IS), el “heavy” y “marker” (en IL), junto Bands” (HG) en la región 36 (figura 4).

Figura N.4 Cromosoma I Gigantodax sp.


Mientras que en Gigantodax basinflatus región 8,y el Glazed en la región 6; y en
el centrómero se encuentra ubicado en el el brazo IL el “Marker” (región 33 ) y
brazo corto del cromosoma (en la región “Heavy Bands” (HG) en la región 36
12); en su brazo IS los marcadores NOR (figura 5).
(región 16 ), y “Two Blocks” (2B) en la

Cromosoma II. Trapezoidal (Tp) muy cerca al


centrómero. En el brazo IIL se
El centrómero está ubicado en la sección observan“3 sharp” o 3 bandas ubicadas
55 (submetacéntrico). El brazo S proximales al telómero (sección 65 ),
evidencia los marcadores Anillo de constituidas por heterocromatina
Balbiani (AB) (próximo al telómero, en la facultativa y el Parabalbiani (PB) con una
región 46 ), el Cordón central a la Doble banda basal bien definida distal al
Burbuja (CCDB) ubicada en la parte centrómero (región 71). (figura 6).
distal del brazo, entre el centrómero y el
anillo de Balbiani (en la sección 48 ), y el
En Gigantodax basinflatus el centrómero Trapezoidal (Tp) muy cerca al
se ubica en la sección 54 centrómero en la región 53. En el brazo
(submetacéntrico). El brazo IIS evidencia IIL se observan“3 sharp” o 3 bandas
los marcadores Anillo de Balbiani (AB) ubicadas proximales al telómero (sección
(próximo al telómero, en la región 46 ), el 73), constituidas por heterocromatina
Cordón central a la Doble Burbuja facultativa y el Parabalbiani (PB) el cual
(CCDB) ubicada en la parte distal del no se diferencia de manera conspicua
brazo, entre el centrómero y el anillo de ya que se confunde con el cormosoma I.
Balbiani (en la sección 46 ), y el (figura 7).

Fig. 6 Cromosoma II Gigantodax sp., donde se observan los marcadores


Trapezoidal, el anillo de Balbiani y el Cordón central a la doble burbuja.
Cromosoma III. El cromosoma generalmente es
submetacentrico, pero no pudo verse, ya
En Gigantodax sp., esta caracterizado que no se realizo el método de bandeo
por presentar el telómero festoneado C, entonces es un poco complejo de
(TF) que sirve como partida para ubicarlo en el cromosoma; en el brazo
corto (IIIS) se encuentra la Ampolla (Am),
describir del brazo corto del cromosoma,
constituida por eucromatina
la FIG 8.A presenta un telómero abierto empaquetada en la sección 80, y el
lo cual indica un polimorfismo flotante ya marcador “Heavy” (H) constituido por una
que la presencia de fenomeno no se serie de bandas compuestas por
encuentra en todas las células como se heterocromatina facultativa en la región
puede observar en la FIG 8.B en el 84. En el brazo largo (IIIL), en la sección
telómero de este cromosoma III, se ubica 92 se presenta el “Marker” (pequeña
porción de eucromatina empaquetada), y
en la sección 77.
en la región 96 las 3 Bandas Pesadas
(3HG), con gran cantidad de
heterocromatina facultativa (figura 9).
Fig. 8. A. Cromosoma III Gigantodax sp., presenta el telomero festoneado. Perteneciente,
a una hembra. B. presenta una inversión, perteneciente a un macho.
Fig. 9. A, el cromosoma III, el brazo más corto esta caracterizado por un telómero
festoneado en la sección 2, un heavy en la sección 79, seguido de un blíster (BL), y
bandas oscuras en la sección 80. En el brazo IIIL encontramos las tres bandas pesadas
en la sección 95 y un área pálida formada por unas series de bandas marcadas en la
sección 96-98 en la parte distal del brazo. Hay una inversión paracéntrica simple flotante
entre la sección 85-90 lo cual indica que esta larva es macho. Mientras que en la figura
7B en el brazo IIIS se observa el heavy en la sección 79, el blister (BL) en la región 80, el
descondensamiento del DNA lo cual hace que la región tenga mayor tamaño, y al final del
brazo largo IIIL encontramos las tres bandas pesadas en la sección 95. No hay presencia
de inversiones por lo tanto esta larva es hembra.
El centrómero de este cromosoma en con gran cantidad de heterocromatina
Gigantodax basinflatus tampoco se pudo facultativa (figura 10).
ubicar, debido a que no se realizó el También se ha reportado la Región
bandeo C; en el brazo corto (IIIS) se organizadora Nucleolar en este
encuentra el telomero festoneado en la cromosoma de especies como Simullium
sección 81 la Ampolla (Am), constituida sumapazaense y G.basinflatus (Vargas,
por eucromatina empaquetada en la 2002), demostrando la gran movilidad de
sección 80, y el marcador “Heavy” (H) este marcador, probablemente en
constituido por una serie de bandas relación con su función de síntesis del
compuestas por heterocromatina ARNr, pues los genes que codifican esta
facultativa en la región 79. En el brazo molécula son muy específicos para cada
largo (IIIL), en la sección 86 se presenta especie y debido a esto necesitan una
el “Marker” (pequeña porción de asociación especifica con un cromosoma
eucromatina empaquetada), y en la en particular.
región 98 las 3 Bandas Pesadas (3HG),
Comparación de Idiogramas de se identifico y ubico los marcadores
Gigantodax sp. y G. basinflatus. cromosómicos universales
encontrándose las siguientes diferencias:
En el ideograma diseñado para
Gigantodax sp y Gigantodax basinflatus

A. Gigantodax sp.

Fig. 11. Distribución de secciones del complejo cromosómico: A. Idiograma Gigantodax


sp. Cromosoma I 41%, Cromosoma II 32% y Cromosoma III 29%. B. Idiograma
Gigantodax basinflatus Cromosoma I 43%, Cromosoma II 32% y Cromosoma III 25%.
B. Gigantodax basinflatus.

FIG 12. Distribución de secciones del complejo cromosómico: A Ideograma Gigantodax


basinflatus. Cromosoma I 43%, Cromosoma II 32% y Cromosoma III 25%.

En el cromosoma I: IL el marcador “two Gigantodax sp que en G. basinflatus, en


blocks” (2B) está en una posición más este ultimo el “2b” se ubica más cercano
proximal con respecto al telómero en al telómero. En IS se encuentra el NOR
en la posición específica para todo el la muestra posee inversión
género Gigantodax (Coscaron. 1998). incluyendo también el cromosoma
III lo que indica que la muestra es
En cuanto al cromosoma II se observa de un macho, contrastándose con
una inversión paracentrica en Simulium el de una hembra, los cuales
sp. desde el trapezoidal (Tp) hasta un ninguno de los dos cromosomas
poco antes del parabalbiani (PB). El NOR presentan inversiones.
puede encontrarse en IIS para la especie
Simulium metallicum (Arteaga & Muñoz .
1999). • En el cromosoma III se hace
imposible la identificación del
Finalmente en el cromosoma III, se centrómero en el caso de los
observa una inversión pericéntrica en en cromsomas III, trabajandose con
brazo S y el NOR puede encontrase en la posición de los marcadores
este brazo para la especie S. para indicar cuál es el brazo largo
sumapazense (Vargas. 2002). o corto del cromosoma. Cada
cromosoma posee un marcador
que le identifica de forma más
CONCLUSIONES conspicua, siendo este en el
cromosoma I la región NOR, en el
• A partir de la extracción, montaje cromosoma II doble burbuja y en
de cromosomas politénicos de el cromosoma III el telómero
Gigantodax sp y ubicación de festoneado.
marcadores universales y
específicos, se comparó con la
especie G. basinflatus con la REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
ayuda de un diseño de
ideogramas para el complemento - ARTEAGA L, MUÑOZ DE HOYOS P.
cromosómico de cada uno, 1999. New cytotype in the Simulium
encontrándose principalmente metallicum complex (Diptera: Simuliidae)
que las diferencias en la from Cundinamarca, Colombia. J Med
ubicación de los marcadores Entomol 36: 133-140.
tanto de Gigantodax sp.y
Gigantodax basinflatus se ven en - COSCARÓN, CECILIA. 1998. The
pequeñas distancias de dos o polytene chromosomes of Cnesia
máximo tres secciones separadas dissimilis (Edwards) and three species of
una de la otra, según sea el Gigantodax Enderlein (Diptera:
marcador, estas distancias están Simuliidae) from Lanin National Park
posiblemente dadas por las (Argentina). Catedra de Ecologia y
características de cada una de las Fitogeografia, facultad de Ciencias
especies o por una adaptación al Agrarias. Universidad Nacional de
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Argentina. Vol. 93(4): 445-458, Jul.
• Gigantodax sp. Presenta
cromosomas politénicos que - HIRAI H., Y K. UEMOTO. 1983. The
permiten realizar estudios de análisis of salivary gland chromosomes
marcadores universales con of Simulium ochraceum from Guatemala
bastante facilidad, estos and Mexico. Citado en ARTEAGA Y
marcadores han sido descritos y MUÑOZ. 1999. New Cytotype the
ubicados en su mayoría, cabe Simulium metallicum Complex (Diptera:
destacar que el cromosoma II de
Simuliidae) from Cundinamarac, - NEEDHAM, P.R. 1982. Los seres
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sumapazence Y Gigantodax basinflatus
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