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BANCO DE SANGRE

PREPARACIÓN DE CÉLULAS CONTROL DE COOMBS.

Células rojas humanas sensibilizadas con anti D (Ig. G), utilizadas para producir reacción
fuerte de aglutinación en la presencia de reactivos activos de antiglobulina humana

PROCEDIMIENTO:

1) Seleccione muestras de sangre “O” POSITIVO con anticoagulantes, centrifugue

por 5min a 3400rpm descarte el sobrenadante con pipeta Pasteur.

2) Lave las células 4veces con solución salina fisiológica, y centrifugue a 3400rpm por

5min.

Antes de cada centrifugación mezcle unas 10 veces por inversión hasta que no se

observen células adheridas al fondo del tubo. Descarte siempre la sol. Salina con pipeta

pasteur y en la ultima lavada eliminarla completamente.

3) Pipetear 750µl de paquete globular (para un frasco de 10ml) y colóquelos en un

Erlenmeyer de 25ml, o en un tubo de ensayo 16x100mm y agregue la cantidad de

anti-D necesaria para la sensibilización de acuerdo a su potencia (observando la

presencia de grumos).

4) Agregue por cada 0.5ml de células la cantidad de 4.5ml de solución salina

fisiológica. Mezcle bien y colóquelo en baño María a 37ºC por 30min, mezclándolo

cada 5min.

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5) Saque del baño Maria luego de la incubación y si la preparación se realiza en tubo

de 16x100mm proceda de una vez a la centrifugación. Si las células están en el

Erlenmeyer traslade a tubos de ensayo con tapón.

6) Centrifugue por 2min a 3400rpm, descarte el sobrenadante y lave el paquete de

células 4veces igual que en el paso 2.

7) Coloque 0.4ml de paquete globular en un frasco gotero previamente esterilizado y

etiquetado, destinado para su almacenamiento. Agregue 9.6ml de solución de

preservación o en su defecto solución salina fisiológica.

8) Separe en 2alicuotas: uno de los frascos como reserva y el otro para trabajo diario.

9) Almacene a temperatura de 4ºC (no dejarlos a temperatura ambiente si no se

utilizan, ya que tienden a Hemolizarse).

10) Coloque en un tubo de ensayo 12x75mm.1 gota de reactivo de anti-globulina

humana y agregue 1 gota de células control de coombs recién preparadas.

Centrifugue a 3400rpm por 15seg. La reacción obtenida deberá ser de 3+.

VIGENCIA DE 21DÍAS. EN SOL. SALINA MÁXIMO 7DIAS O HASTA PRESENTAR HEMÓLISIS.

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POOL DE CELULAS “O”.

Células Rojas preparadas en Vitro para utilización en el Coombs indirecto, las cuales nos
permiten determinar la presencia de anticuerpos irregulares (anti. Rh) en el suero de los
pacientes luego de una sensibilización.

PROCEDIMIENTO:

1) Seleccione de 4-5 muestras de sangre “O” POSITIVO con anticoagulante EDTA,


centrifugue por 5min a 3400rpm descarte el sobrenadante con pipeta Pasteur.

2) Coloque 1ml de paquete globular en un tubo 12x75mm y lave las células 4veces
con solución salina fisiológica por 3min.

Descartando el sobrenadante en cada lavada con pipeta Pasteur y mezclando entre lavado
observando que no se encuentren células adheridas al fondo del tubo. En el último lavado
descartar toda la solución salina.

3) Coloque 0.4ml del paquete lavado en un frasco previamente esterilizado y


etiquetado, destinado para su almacenamiento. Agregue 9.6ml de solución de
preservación o en su defecto con solución salina fisiológica.

4) Separe en 2alicuotas: uno de los frascos como stock y el otro para el trabajo
diario.

5) Almacene a temperatura de 4ºC (Si no se utilizan, no dejarlos a temperatura


ambiente ya que las células con altas temperaturas tienden a Hemolizarse).

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PRUEBA CRUZADA

Principio: Reacción de aglutinación en Vitro donde se mezclan células y suero del


paciente y del donante para determinación la compatibilidad de transfusión ABO. De
presentarse la aglutinación se interpreta como incompatible.

Esta técnica garantiza la ausencia de anticuerpos séricos en el paciente y en el


donante, como la detección de anticuerpos irregulares de otros grupos sanguíneos y la
presencia de auto anticuerpos en el paciente.

Procedimiento:
1) Preparar suspensión al 5% con solución salina fisiológica de células del donante y del
paciente, previamente lavadas.

FASE I:
2) Identificar 3 tubos debidamente rotulados como prueba: mayor, menor y control del
paciente. A los cuales se le agrega lo siguiente:
PRUEBA MAYOR PRUEBA MENOR PRUEBA CONTROL
2 Gotas de suero o 2 gotas de suero o 2 gotas de suero o
plasma del Paciente.
Paciente plasma del Donante.
Donante plasma del Paciente.
Paciente
1 gota de células 1 gota de células 1 gota de células
preparadas del Donante.
Donante preparadas del Paciente.
Paciente preparadas del Paciente.
Paciente

3) Mezclar y centrifugar por 30seg. A 1000rpm.


4) Observar sobrenadante para detectar hemólisis, desprender el botón de células del
fondo del tubo y observar si hay aglutinación. Anotar los resultados con tubo en mano.

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FASE II:

5) Agregar 2 gotas de Albúmina Bovina a cada uno de los tubos, mezclar e incubar en
baño María a 37ºC durante 15 – 30min.
6) Después del baño María centrifugar durante 15seg. Observar si hay hemólisis o
aglutinación, desprendiendo suavemente el botón de células del fondo del tubo y anotar
los resultados.

FASE III:

7) Lavar los hematíes 4veces con solución salina fisiológica y decantar totalmente el
sobrenadante en el último lavado.
8) Agregar 2gotas del reactivo de anti-globulina humana poliespecífico y mezclar.
9) Centrifugar inmediatamente por 15seg y leer desprendiendo el botón de células
suavemente observando si hay aglutinación con la ayuda de una lámpara o fondo blanco.
10) Sí la prueba resulta ser negativa Agregar una gota de células control de coombs,
Centrifugar por 15seg. Leer y anotar los resultados. (Siempre la reacción es positiva).

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:

 PRUEBA MAYOR: determina compatibilidad para paquete globular.

 PRUEBA MENOR: Determina compatibilidad para sangre total y plasma fresco


congelado.

 PRUEBA CONTROL: Determina la existencia de auto-anticuerpos en el mismo


paciente.

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TIPIFICACIÓN SANGUÍNEA
PRUEBA DIRECTA.

PRINCIPIO: Determinar por medio de reacción de aglutinación in Vitro y la utilización de


antisueros comerciales la existencia de grupo sanguíneo ABO en el paciente.

1) Preparar suspensión de células al 0.5% lavadas una vez con solución salina al
0.9%.
2) Rotular 3 tubos con la letra correspondiente y agregar:
A B AB RH
1 gota de anti A 1 gota de anti B 1 gota de anti AB 1 gota de anti D.
1 gota de suspensión de células del paciente a cada tubo.
3) Mezclar y centrifugar durante 15 seg. A 2500 p.m.
4) Luego de la centrifugación con movimientos suaves desprender el botón de
células del fondo del tubo y leer sobre una lámpara de lectura.
5) Anotar los resultados.

OJO: con cada tipificación sanguínea se monta un autocontrol del paciente, en el


cual se mezcla.
AUTO CONTROL DEL PACIENTE
2 gotas de suero o plasma del paciente
1 gota de suspensión de células del paciente.

RESULTADO S DE LA PRUEBA: se determinara por la aglutinación de los tubos


opciones A B AB TIPO El Rh solo puede ser “-“ ó
SANGUÍNEO “+” y también es dado por
Primera + - + A la aglutinación en el
Segunda + + + AB antisuero anti- Rh.
Tercera - + + B
Cuarta - - - 0 “+” AGLUTINACION
“-“ NO AGLUTINACION
TIPIFICACIÓN SANGUÍNEA
PRUEBA INVERSA.

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PRINCIPIO: Confirmar mediante la reacción de aglutinación in Vitro con los anticuerpos del
paciente y el uso de células preparadas en el laboratorio el grupo sanguíneo del paciente,
mediante la existencia de anticuerpos anti-A y anti-B.

1) Preparar suspensión de células al 0.5% lavadas una vez con solución salina al
0.9%.
2) Rotular 3 tubos con la letra correspondiente y agregar:

A B
1 gota de células A 1 gota de células B
2 gotas de suero del paciente

3) Mezclar y centrifugar durante 15 seg. A 2500 rpm.


4) Luego de la centrifugación con movimientos suaves desprender el botón de
células del fondo del tubo y leer sobre una lámpara de lectura.
5) Anotar los resultados.

RESUL TADOS DE LA PRUEBA:

REACCIONES PRIMERA SEGUNADA TERCERA CUARTA


Células A - + - +
Células B + - - +
TIPO SANGUÍNIO “A” “B” “AB” “0”

“+” Aglutinación Positiva “-” Aglutinación Negativa

COOMBS DIRECTO
PRINCIPIO: Determinar mediante una reacción in Vitro la presencia de eritrocitos
sensibilizados (recubiertos de anticuerpos anti Rh) en el paciente, debido a la exposición a
eritrocitos sin antígenos “Ag. D” de membrana” Rh” negativo, siendo éste Rh positivo

1) Preparar suspensión de células al 0.5% lavadas una vez con solución salina al
0.9%.
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2) En otro tubo colocar de 1-2 gotas de Glóbulos Rojos suspendidos en solución
salina fisiológica al 0.9%.
3) Se realizan 4 lavadas durante 3 min. A 3400rpm decantando en cada lavado la
solución salina y en el último eliminarla completamente.
4) Agregar 2 gotas de Anti-Globulina humana.
5) Centrifugar a 3000rpm por 15 seg.
6) Examinar el tubo sobre una lámpara de lectura para observar si hay aglutinación.
De estar presente se gradúa con cruces la intensidad de la reacción y se anotan los
resultados.

OJO:
Si hay ausencia de aglutinación debe de agregarse 1 gota de células control de
Coombs.
☺ Se mezclan y centrifugan por 15 seg. A 3000rpm.
☺ Nuevamente leer y anotar los resultados.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
POSITIVA:
Evidencia de aglutinación o hemólisis. Significa que hubo sensibilización en
vivo de los eritrocitos y se informa prueba de coombs directa positiva. Señalando
con cruces la intensidad de la reacción.

NEGATIVA:
Ausencia de aglutinación. Significa que no hubo o existió sensibilización
eritrocitaria.

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COOMBS INDIRECTO
PRINCIPIO: Determinar mediante una reacción de aglutinación in Vitro la existencia de
anticuerpos (anti Rh) circulantes en el suero del paciente, producidos luego de una
sensibilización al contado con eritrocitos de antigeno “D” en su membrana.

1) Agregar en un tubo 2 gotas de suero o plasma del paciente a estudiar.


2) Agregar una gota de pool de células “0” preparadas.
3) Centrifugar por 15 seg. A 3000rpm.
4) Desprender el botón de células del fondo del tubo suavemente y se anotan los
resultados
5) Agregar 2 gotas de Albúmina. Incubar a 37°C por 15min - 30min.
6) Centrifugar por 15 seg. A 3000rpm.
7) Desprender el botón de células suavemente y anotar los resultados.
8) Realizar 4 lavados durante 3min. A 3400rpm. Cuidando que en el último lavado se
elimine la solución salina completamente.
9) Agregar 2 gotas de Anti-Globulina humana.
10) Mezclar y centrifugar por 15seg. A 3000rpm. Y se procede a realizar la lectura
desprendiendo el botón de células suavemente.
OJO:
☺ si hay ausencia de aglutinación debe de agregarse 1 gota de células
control de Coombs.
☺ Se mezclan y centrifugan por 15 seg. A 3000rpm.
☺ Con movimientos suaves desprender el botón de células del tubo y leerlo
sobre una lámpara de lectura.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:


- prueba de antiglobulina humana negativa + prueba control de coombs positiva =
antiglobulina Negativa.
- Prueba de antiglobulina humana negativa + prueba control de coombs negativa
= prueba de antiglobulina invalida, en este caso debe repetirse el procedimiento
completo y tratar de averiguar la causa del error.

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PREPARACION DE CELULAS
”A”Y “B”
PRINCIPIO: Determinar mediante una reacción de aglutinación in Vitro la existencia de
anticuerpos en el suero del paciente que puedan reaccionar con estas.

1) Tomar muestras de sangre con anticoagulantes de por lo menos 4


pacientes (A+) y 4 pacientes (B+).
2) Centrifugar a 3500rpm por 5min para separar el plasma de los eritrocitos.
3) Descartar el sobrenadante con pipeta Pasteur y lavar 4 veces con
solución salina fisiológica al 0.9%. descartando el sobrenadante en cada lavada con
pipetas Pasteur y mezclando antes de cada lavada.
4) En el último lavado descartar completamente la solución salina.
5) Resuspender los glóbulos rojos con la solución salina fisiológica de 0.9%
a una concentración del 5%.
6) Rotular dos tubos “A” y “B” y agregarles una gota de anti-A en el tubo “A”
y una Gota de anti-B al tubo “B”.
7) Centrifugar por 15 segundos a 3400rpm y observar la reacción (debe de
existir aglutinación, de lo contrario las células no están bien preparadas).
8) Rotular 2 frascos goteros para almacenar como “A” y “B”, como también
su fecha de vencimiento.
9) Trasladar las células a cada uno de los frascos correspondientes y
guardarlos a una temperatura de 2ºC a 4ºC.

EN SOLUCION SALINA FISIOLÓGICA ESTAS CELULAS TINEN UNA VALIDEZ DE 7


DÍAS. GUARDAR LOS FRASCOS CUANDO NO SE ESTAN UTILIZANDO PORQUE
LAS CÉLULAS A UNA TEMPERATURA MAYOR TIENDEN A HEMOLIZARSE

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ALTERNATIVAS DE TRANSFUSION SANGUÍNE DE GRUPO ABO.

TODOS LOS RECEPTORES;


© Deberán recibir sangre total isogrupo en el sistema ABO ó Glóbulos ABO compatibles.

© El Rh Positivo podrán recibir sangre total o Glóbulos Rh Positivo o Rh Negativo.

© El Rh Negativo deberán recibir sangre total o Glóbulos Rh Negativo.

EN OTRAS CIRCUNSTANCIAS PODRÁN RECIBIR NO ISOGRUPOS EN EL ORDEN DE PREFERENCIA QUE

SEÑALA EL SIGUIENTE CUADRO.

GRUPO DEL PAQUETE GLOBULAR PLASMA


RECEPTOR 1 2 3 1 2 3
O O - - O AB AöB

A A O - A AB -
B B O - B AB -
AB AB BöA O AB - -
“-“NINGUNO DE LOS OTROS GRUPOS
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