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Conceptos básicos
Definición de enzimas
Fuentes de enzimas
Campos de aplicación enzimas
Clasificación de las enzimas
Cinética enzimática
Sitio activo y actividad enzimática
Parámetros cinéticos
Inhibición enzimática
Enzimas
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REACCION NO CATALIZADA
El agua no es capaz de pasar
sobre la montaña
ENERGIA DE
ACTIVACIÓN
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Sin enzima
Con enzima
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Enzima vs Catalizador
Tanto la enzima como el catalizador aceleran la
velocidad de una reacción química.
FUENTES DE ENZIMAS
Las enzimas pueden ser de origen vegetal, animal y
microbiana.
Entre las enzimas de tipo vegetal, se encuentran las proteasas,
carbohidrasas ( las cuales descomponen residuos de azúcares
de carbohidratos superiores, amilasas y -amilasa
Entre las enzimas de tipo animal están las esterasa ( Lipasa se
produce en la mucosa gástrica, el páncreas, fosfotasas: Se
obtiene de tejidos animales óseo, muscular, tripsina y
quimotripsina se produce en el páncreas )
Las enzimas del tipo microbiano provienen de bacterias,
arqueas y de hongos.
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Número EC
Enzyme EC 2.7.1.1
Comission Subgrupo
Grupo
EC 1.x Oxidorreductasas
EC 2.x Transferasas
EC 3.x Hidrolasas
EC 4.x Liasas
EC 5.x Isomerasas
EC 6.x Ligasas
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Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreducción, en que
átomos de oxigeno ó hidrogeno son trasladados entre
moléculas:
Ared + Box Aox + Bred
AH2 + B A + BH2
En las reacciones redox, siempre tienen que estar presentes a
la vez el aceptor y el dador electrónico.
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de átomos ó grupo de
átomos entre moléculas:
A-X + B A + B-X
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Grupo 3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrólisis y también su reverso. Son
las más comunes en el dominio de la tecnología enzimática:
Grupo 4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de remoción de grupo de
átomos del sustrato (este grupo no incluye las hidrolasas):
A-B A+ B
Ejemplo
Nombre sistemático:
Histidina amonio-liasa (EC 4.3.1.3)
Nombre común:
Histidasa
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Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerización moleculares
A B
Ejemplo:
Glucosa isomerasa (EC 5.3.1.5)
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unión de dos grupos químicos a expensas
de la hidrólisis de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.).
Nombre sistémico:
G-L-glutamilo-L-cisteina:glicina ligase
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Cinética Enzimática
Es el análisis cuantitativo del efecto de cada uno de los
factores que intervienen en la actividad enzimática, que se
evalúa a través de la velocidad de la reacción catalizada.
Las variables más importantes son:
• Concentración de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
• pH
• Temperatura
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Complementariedad
geométrica
Complementariedad de
cargas, uniones iónicas
Modelos:
Llave – cerradura.
Encaje inducido
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Substrato Enzima
Substrato Enzima
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Enzima + sustratos
Una enzima puede
unir más de un
sustrato en su sitio
activo
ADP + PEP
COMPLEJO
ENZIMA-SUSTRATO ATP + PIRUVATO
Enzima + productos
Baja
concentración
de sustrato
ALTA
concentración
de sustrato
SATURACION
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Enzima
Sustrato(s) Producto(p)
dp ds
v
dt dt
d[P]
[ ] v = dt , t 0
p
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Vmax
Velocidad de la reacción (v)
Vmax/2
Vmax * s
v=
Km + s
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Significado de la constante Km
1. Constante de equilibrio de disociación del complejo ES
(en condiciones de equilibrio rápido)
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Vmax
Velocidad de la reacción (v)
Vmax/2
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Representación directa
v
100
Vmax
80
60
Vmx s
v
40 Km s
20
s
0
0 20 40 60 80 100
Km
0.04
1/v
0.03
1/Vmax
0.02
1 Km 1 1
-1/Km
0.01 v Vmx s Vmx
0.00
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6
1/s
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Actividad Enzimática
dp ds
a vt 0
dt t 0 dt t 0
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Efecto del pH
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Efecto de la temperatura
k = A exp (-Ea/RT)
Temperatura
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Coenzimas-Cofactores
Las coenzimas son pequeñas moléculas
orgánicas, que se unen a la enzima.
Las coenzimas colaboran en la reacción
enzimática recibiendo transitoriamente
algún grupo químico: H+ , OH, CH3 .
La enzima sin la coenzima recibe el
nombre de APOENZIMA
Sustrato
oxidado
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Isoenzimas o Isozimas
Son formas moleculares diferentes de una
misma enzima
Catalizan lamisma reacción
Ejemplo: Lactato deshidrogenasa
Lactato + NAD ==== Piruvato + NADH
Se diferencian por su movilidad electroforética
Usadas en clínica: sueros normales y sueros con
alguna patología
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Inhibición enzimática
Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimática, a través de
interacciones con el centro activo u otros centros específicos
(alostéricos).
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E+I EI
ES + I ESI
Inhibición reversible
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Inhibidores Competitivos
Compiten con el sustrato por el sitio activo
de la enzima
Se une solo a la enzima libre
V máx no se altera y K M cambia
S
E ES E+P
I
Inhibición
Competitiva
EI
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Inhibición Competitiva
S
E ES E+P [E] [I]
Ki =
I [EI]
Se define una constante de
equilibrio de disociación del
EI inhibidor:
Vmx s
v
i
Km 1 s
Ki
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Inhibidor competitivo
Al aumentar la cantidad de SUSTRATO el inhibidor
competitivo es desplazado y se forma producto
Inhibidor competitivo
su estructura es similar a la del sustrato
No se forma producto
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Características:
• Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente
exclusivas
• A muy altas concentraciones de substrato desaparece la
inhibición
• Por lo general, el inhibidor competitivo es un análogo
químico del substrato.
• El inhibidor es tan específico como el substrato
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Inhibidor competitivo
Sin inhibidor
Con inhibidor
El inhibidor competitivo
aumenta la Km
Km Km
Sin con
inhibidor inhibidor
0.05
0.04
1/Vmax
0.03
0.02
-1/Km
0.01
1/s
0.00
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
-1/(Km(1 + i/Ki))
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Inhibidor No Competitivo
Se une a un lugar diferente del sitio activo
la enzima
Se une a la enzima libre y también al
complejo enzima-sustrato
Por acción del inhibidor disminuye la Vmáx
pero el valor de KM no se altera
S
E ES E+P
I I
Inhibición
S No Competitiva
EI ESI
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Inhibidor NO competitivo
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima en un
sitio diferente del sitio activo
Inhibidor Incompetitivo
Se une a un lugar diferente del sitio activo
de la enzima
Se une sólo al complejo enzima-sustrato
Los efectos que tiene: disminuye el valor
de KM y también el de Vmáx
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S
E ES E+P
I
Inhibición
Anticompetitiva
ESI
Inhibidores Irreversibles
Producen inactivación permanente de la
actividad enzimática
Se interfiere con el normal desarrollo de
una reacción o vía metabólica
Ejemplos: p-cloromercuribenzoato,
yodoacetato, diisopropilfluorfosfato
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Inhibición Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
químico de la enzima, modificándola covalentemente
E+I E’
- A diferencia de la inhibición reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuación
del inhibidor.
2. Organofosfóricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados
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Enzimas Alostéricas
Son enzimas cuya estructura proteica está
formada de varias subunidades
No se rigen por la cinética de M - M
Además del sitio o centro activo tienen sitios
alostéricos o de regulación
Sitio activo/sustratos;
Sitio alostérico/moduladores o reguladores
La relación entre la velocidad de reacción y la
concentración de sustrato sigue cinética
sigmoídea
Enzimas alostéricas
Las enzimas alostéricas
presentan estructura
cuaternaria.
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de una
molécula de sustrato
La unión del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad
presenta una forma
sigmoidal
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RESUMEN
Las enzimas son proteínas que catalizan
las reacciones biológicas
Presentan especificidad por su sustrato
Cada enzima presenta dos parámetros
importantes Vmax (saturación de la
enzima) y la Km (medida de la afinidad
por el sustrato)
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