You are on page 1of 8

PERANAN ISOZIM PROTEIN KINASE C-ΑLPHA DALAM MEMEDIASI

EFEK ANTIPROLIFERASI ALPHA-TOKOFEROL PADA SEL STROMA
PROSTAT
Basuki B. Purnomo

ABSTRACT

Objective: Alpha tocopherol, also has a non anti-oxidant activity that correlates with inhibition of PKC-alpha isozyme
activity. Several studies confirmed its role in inhibition of vascular smooth muscle proliferation. Inhibition of stromal
cell proliferation is an alternative method of prevention of BPH. The aim of this in vitro study is to confirm that alpha-
tocopherol, by its ability to inhibit PKC-alpha activity, has the capability to inhibit human prostatic stromal cell
proliferation. Materials & Methods: Primary cultures of human prostatic stromal muscle cells were obtained from 4
patients with bladder outlet obstruction. The effects of various concentrations of alpha-tocopherol (20, 30, 40, 50, and
60 microM) were examined by cell proliferation and PKC-alpha isozyme activity assay. The cell proliferation study
was performed using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay method. A
caspase-3 activity assay was also performed to examine apoptotic mechanism. Results: The MTT method, which is
used to count viable cells, showed that exposures to various doses of alpha-tocopherol resulted in a decreased
proliferation rate. The decrement of proliferation rate is linear with the increment of alpha-tocopherol dose.
Immunocytochemistry staining with anti caspase-3 antibody showed that no cells developed apoptosis. Alpha-
tocopherol also inhibits PKC-alpha activity. Isozyme activity is reduced along with the increment of the dose (dose-
dependent). There is a correlation between PKC-alpha activity with cell proliferation rate after exposure to alpha-
tocopherol (R2=0,9279; p=0,000). Conclusion: Alpha-tocopherol at different concentrations reduces prostatic
stromal cell proliferation, without an effect on apoptosis. This antiproliferative property correlates with a decreased
activity of PKC-alpha isozyme.

Keywords: Protein kinase c-alpha, primary culture, human prostatic stromal cells, antiproliferative effect.

Correspondence: Basuki B. Purnomo, c/o: Lab. Ilmu Bedah/SMF Urologi, FK Universitas Brawijaya/RS Dr. Saiful Anwar.
Jl. J.A. Suprapto No. 2, Malang.

PENDAHULUAN berupa kesulitan miksi hingga terjadi retensio urine.
Pembesaran massa ini lebih banyak disebabkan
Hiperplasi prostat jinak (Benign Prostate
karena penambahan sel prostat, yakni sel stroma dan
Hyperplasia) adalah penyakit yang banyak dijumpai
epitel; namun penambahan sel stroma lebih banyak
pada pria berusia lanjut. Sebetulnya, hyperplasia ini 2
sudah dijumpai sejak pria berusia 30 tahun, dan dibandingkan dengan epitel, yang pada umumnya
3
hyperplasia ini meningkat selaras dengan disebabkan peningkatan laju proliferasi.
bertambahnya usia. Pada usia 51 – 60 tahun
prevalensinya 50%, dan pada usia di sekitar 80 tahun, Protein Kinase C (PKC) adalah salah satu protein
prevalensinya menjadi lebih kurang 80%.
1 enzim yang berperan dalam transduksi sinyal
intraseluler yang berhubungan dengan proliferasi,
Massa prostat yang membesar dapat menyumbat permeabilitas, kontraksi, migrasi, apoptosis, dan
4-6
uretra posterior, dan memberikan manifestasi klinis sekresi. Salah satu isoformnya, yakni PKC-alpha,

29

direndam pada 1% bovine serum albumin TUJUAN PENELITIAN (BSA)/NGS dalam PBS selama 10 – 30 menit pada suhu ruang. kemudian dicacah hingga ukuran ± 1 mm lalu Pengamatan dengan mikroskop cahaya pada 30 . Dicuci dengan air kran selama 3 kali Chips dicuci kembali dengan RPMI 1640 yang 5 menit. dicuci dalam PBS pH 7.4 selama 5 menit 3 kali. setelah 6-7 hari hanya mampu menurunkan laju proliferasi sel. Dipilih kerokan yang paling besar.2 μg/mL selama 3 kali 5 menit. Sesuai enzim.15 prostat. Kultur yang aktivitas enzim PKC dan selanjutnya enzim ini diperlakukan sebagai kontrol. Secara dari berbagai dosis.8 kalsium. ditambahkan kromogen DAB dengan larutan garam fisiologis. diulang 3 – 4 kali. sehingga obat ini pada masa mendatang 7. mendapatkan perlakuan. Dalam hal ini. yakni rabbit anti human PKC-alpha.2 μ (seluruh jaringan terendam adalah melalui jalur mitogen activated protein kinase media).7. Diinkubasi dalam inkubator Co2 bersuhu (MAPK). Kultur yang 13 14. Dicuci dalam PBS pH 7. Kemudian dilakukan fiksasi dengan metanol stroma prostat dapat menurunkan massa prostat pada absolut selama 5 menit. dan 1 μg/mL fungizone. 17 60 μM yang kemudian diinkubasi selama 48 jam dalam inkubator 5% CO2. Dicuci dalam DI water prostat dimasukkan ke dalam medium RPMI 1640 (mengandung 200 U/mL penisillin. dicuci selama 3 kali 5 menit.4 selama 5 menit 3 kali.9 Supernatan dibuang dan endapan dicuci dengan PBS yang mengandung gentamicin.salah satu vitamin E yang kali. terbukti dapat FBS 10% dalam plate selama 14 hari. Dilakukan counterstain dengan streptomisin. Meyer hematoxilen eosin (HE) selama 20 menit pada suhu ruang. transduksi sinyal pada jalur ini. penelitian ini bertujuan membuktikan pengaruhnya terhadap sel stroma Sel yang telah konfluen diletakkan pada obyek prostat. Kemudian antibodi sekunder anti rabbit IgG BAHAN DAN CARA selama satu jam pada suhu ruang. Setelah itu sebagian kultur Pengaruh alpha-tokoferol terhadap laju dilakukan (1) pengecatan imunositokimia.4 selama 3 kali 5 proliferasinya menit. Di klinik. 5 menit. dan salah satunya dengan saringan 0. Juli 2009: 29-36 diaktifkan oleh diasilgliserol (DAG) dan ion dimasukkan ke dalam media RPMI yang mengandung 4. No.4 (TURP). dan membuang (3. untuk menilai aktivitas isozim tidak langsung. 50. Dikeringkan dan dilakukan mounting. Vol. dan direndam dalam 3% diharapkan dapat dipakai sebagai salah satu obat hidrogen peroksida (dalam distiled water) selama 5 – untuk mencegah progresifitas BPH. (2) isolasi proliferasi sel stroma prostat belum diketahui. PKC-alpha memfosforilasi 37°C selama 18 jam. suatu protein yang sangat penting dalam tube 15 ml. 0. Ditambahkan antibodi primer selama satu jam pada sel stroma prostat dapat menurunkan aktivitas pada suhu ruang. 7.JURI. 40. selain dilakukan pemakaian vitamin E dengan dosis yang dianjurkan penggantian medium tumbuh juga ditambahkan dapat mencegah timbulnya penyakit kanker prostat. Chips 10 – 20 menit pada suhu ruang. 2. isozim PKC-alpha dan menurunkan laju kemudian dicuci dalam PBS pH 7. Dicuci dalam PBS pH 7. 10 menit. disentrifuge 1000 rpm selama 1 menit. Obyek menurunkan laju proliferasi sel otot polos vaskular diperlakukan dengan memaparkan alpha-tokoferol 10-12 melalui mekanisme non-antioksidatif. sampai terutama pada perokok. 16 alpha-tokoferol. 30. Diharapkan penurunan laju proliferasi sel gelas.4 selama 3 kali 5 menit. Dicuci dalam PBS pH 7. dan (3) penghitungan proliferasi sel dengan dengan penelitian tentang manfaat alpha-tokoferol metode spektrometri. dicuci dengan PBS pada pH BPH. kemudian dipakai aquades selama 3 kali mengandung Gentamycin 50 mg. maupun memacu apoptosis. diulang sebanyak 3 Alpha-tokoferol. mulai dosis 20.3– diaminobenzidine tetrahydrochloride) selama jaringan yang terbakar karena kerokan listrik. 16.4 selama 3 kali 5 Membuktikan bahwa paparan alpha-tokoferol menit. Endapan ditanam pada media kultur RPMI + dikenal sebagai antioksidan. Secara dilakukan penggantian medium tumbuh RPMI 1640 molekuler dapat dibuktikan bahwa vitamin E mampu yang mengandung 2 mM lL-glutamin (MP menurunkan laju proliferasi sel turunan kanker Biomedicals) dan 10% FBS (Gibco). Peranan PKC-alpha pada proses colagenase tipe I 0. Ditambahkan SA–HRP Jaringan prostat diperoleh dari pasien BPH (Strep Avidin–Horseradish Peroxidase) selama 30 – bergejala yang menjalani reseksi prostat transuretra 60 menit pada suhu ruang. pada sel otot polos vaskular. alpha-tokoferol menghambat PKC-alpha dan menilai proliferasi sel.5 mg/ml yang sudah disaring proliferasi sel telah banyak diteliti. Setelah itu dipindahkan dalam raf-1.

disajikan pada Gambar 1. ditambah dengan 1 mL larutan ATP 125 ppm dan 1 mL larutan histon 74 ppm kemudian Hasil imunositokimia yang menilai pengaruh diinkubasi pada temperatur 35°C selama 1 jam. Selanjutnya dihomo- ditambahkan 1 mL RPMI 1640. Kemudian sebanyak 10x volumenya.01 mm. melalui suhu 4°C selama 10 menit. yakni tampak warna coklat pada sel membran. disajikan pada tabel 1. Penilaian perubahan lalu disentrifugasi dengan kecepatan 1500 rpm pada aktivitas isozim PKC-alpha secara kuantitatif. kuantitatif memakai metode kolorimetri. Kultur mengandung larutan ATP sisa. disonikasi selama 15 Diinkubasikan selama 4 jam dalam inkubator CO2. A B C D kontrol 20 μM 50 μM 60 μM Gambar 1: Pewarnaan imunositokimia yang menunjukkan pengaruh paparan alpha-tokoferol terhadap aktivitas isozim PKC-alpha. Sel yang telah dipapar dengan alpha-tokoferol 20 μM ekspresi warna coklat pada sel membran mulai menipis dan tampak warna coklat banyak berada di sitoplasma. Sel stroma diwarnai dengan antibodi primer rabbit anti human PKC-alpha. dicuci mengandung sukrosa 0.25 M dan imidazol 3 mM dua kali dengan medium RPMI 1640. berdasarkan Untuk mengetahui kemungkinan adanya sel yang atas proses reduksi metabolik zat warna kuning mengalami apoptosis. 100 μL MTT. terazolium atau 3–(4. kemudian diberi pewaranaan DAB sehingga berwarna coklat. dilakukan counterstain dengan Meyer hematoxilen eosin. bagian kultur yang men. 60 μM. Enzim yang telah diisolasi ditentukan aktivitasnya dengan cara sebagai berikut. diukur absorbansinya sel dari keenam sumur tersebut setelah diwarnai. B. stroma. Dewi (2000).5- dapat perlakuan di atas dilakukan pewarnaan diphenyltetrazolium bromide (MTT) menjadi imunositokimia seperti pada prosedur di atas tetapi formazan ungu yang tidak larut setelah bereaksi dengan memakai antibodi primer rabbit polyclonal dengan enzim suksinil dehidrogenase mitokondria sel anti caspase-3. dan hampir tidak dijumpai di sel membran. 31 . temperatur 4 C selama 1 jam. Supernatan yang dengan dilakukan perulangan sebanyak 3 kali. C. kecepatan 6000 rpm. Supernatan dan endapan metode spektrometri. genkan dengan alat vortex. berbagai dosis alpha-tokoferol pada sel stroma prostat Selanjutnya ditambah 1 mL trikloroasetat (TCA) 8%. 1 bar = 0. dengan metode spektrofotometri seperti metode dari 19 18 seperti pada metode Guh et al (1998). Purnomo: Peranan isozim protein kinase c-alpha perbesaran 400x dan dihitung jumlah sel per 100 sel yang diperoleh dipisahkan.5-dimethylthiazol-2-yl)-2. diperhatikan ekspresi isozim berupa warna coklat pada sel. Pemeriksaan ini secara empiris membedakan antara sel mati dengan sel yang masih hidup. ditentukan aktivitasnya spektrometri dengan panjang gelombang 540 nm. Sel yang Hasil kultur sel dari berbagai pengamatan telah dipapar dengan alpha-tokoferol dari berbagai ditambah dengan buffer ekstrak pH 7. A: Sel yang tidak dipapar dengan alpha-tokoferol (kontrol) menunjukkan isozim PKC-alpha dalam keadaan aktif. yang mungkin banyak terdapat di membran Proliferasi kultur sel stroma prostat diukur secara sel atau sitoplasma. dan pada panjang gelombang maksimumnya. Panah biru g menunjukkan ekspresi isozim PKC-alpha dan panah merah g menunjukkan sel membran.4 yang konsentrasi dan diinkubasikan selama 48 jam. Kemudian absorbansi larutan dibaca pada Supernatan yang diperoleh. Paparan 50 dan D. kolom 1. menit dan dilanjutkan dengan sentrifugasi pada o kemudian ditambahkan isopropanol HCL 1cc. menunjukkan aktivitas enzim semakin berkurang dengan ditandai ekspresi warna coklat banyak terdapat di sitoplasma. dipipet 1 mL HASIL PENELITIAN enzim PKC-alpha.

Ordinat sebelah Didapatkan korelasi negatif yang kuat antara paparan kiri menunjukkan aktivitas PKC dalam unit (grafik warna merah muda). 1 bar=0.530 ± 0.6 0.12 Laju proliferasi (absorbansi MTT) tokoferol yang dipaparkan dengan aktivitas isozim PKC-alpha. 0 0 0 1 2 3 4 5 6 PKC Secara tidak langsung. dan 60 μM (6).0008 e 20 μM 0.0021 d 30 μM 0. dengan FBS 10% tanpa (kontrol) atau dipapar alpha-tokoferol Selanjutnya sel restimulasi dengan FBS 10%.790 ± 0. Absis Untuk menilai hubungan antara dosis alpha.0008 a Gambar 2: Efek paparan alpha-tokoferol pada apoptosis sel stroma prostat.031 d 0. p = 0. p=0. Uji maupun yang dipapar alpha-tokoferol dosis 30 analisis Tukey menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang μM (C).975. dilakukan analisis Pearson dan dilan. 32 . No.05). dosis 20 μM (2).103 ± 0.036 c 0.0014 b 50 μM 0. 1.098 ± 0. seperti terlihat pada tabel 1. bahwa tidak didapatkan sel yang mengalami apoptosis pada semua perlakuan. menunjukkan dosis tokoferol mulai dari tokoferol yang dipaparkan dengan laju proliferasi kontrol (1). semakin rendah rerata aktivitas isozim 3. Juli 2009: 29-36 Tabel 1.06 Jumlah sel stroma di dalam suatu lapangan 0.047 e 0. pada berbagai paparan. 40 μM (absorbansi MTT).02 gambar ini dapat diketahui. Terlihat semakin tinggi sitokimia dengan antibodi primer anti kaspase- paparan tokoferol.0005 a 60 μM 0. laju proliferasi ditentukan MTT dengan menghitung absorbansi MTT pada panjang Dosis alpha-tokoferol gelombang 540 nm. Demikian pula rerata laju proliferasi sel menunjukkan bahwa pada berbagai sediaan (absorbansi MTT) menunjukkan bahwa semakin tinggi dosis yang tidak dipapar sebagai kontrol (B) alpha-tokoferol semakin rendah absorbansinya (kolom 3). Rerata (x ± SD) Dosis alpha tokoferol Aktivitas isozim Laju PKC -Alpha proliferasi 0 (Kontrol) 1. sedangkan ordinat dosis alpha-tokoferol dengan absorbansi MTT kanan menunjukkan absorbansi MTT (r= -0. (4).08 dengan aktivitas isozim PKC-alpha (r=-0. dan 50 μM menunjukkan tidak tampak ekspresi kaspase berupa warna coklat bermakna pada rerata aktivitas PKC dan laju proliferasi sel hitam di dalam sel. 0. dengan Proliferasi Sel Untuk menilai hubungan antara dosis alpha. 1 0.0017 c 40 μM 0.917 ± 0. Terdapat korelasi negatif yang antara paparan dosis alpha-tokoferol 0. Pengaruh alpha-tokoferol terhadap perubahan aktivitas isozim PKC-alpha dan laju proliferasi sel.973. kecuali pada paparan 50 dan 60 μM.JURI. Pengamatan dengan mikroskop cahaya PKC-alpha (kolom 2). Sel stroma prostat (A) yang Keterangan: Sel stroma yang telah konfluen direstimulasi dihasilkan dari kultur sebelum diperlakukan.127 ± 0. dan kemudian diwarnai dengan imuno- dari berbagai dosis selama 48 jam. Pada 0.039 b 0.089 ± 0.1 Aktivitas PKC-alpha (Unit) jutkan dengan analisis regresi. 16.2 0.04 pandang setelah terpapar alpha-tokoferol disajikan pada pewarnaan imunositokimia pada gambar 2.8 0. aktivitas isozim PKC-alpha dan laju prolifersi (absorbansi MTT) sel stroma prostat.000) (grafik warna biru).077 ± 0. 50 μM (5).084 ± 0.041 a 0.077 a 0.4 0.078 ± 0.000).2.670 ± 0.2 0. Vol. dilakukan analisis Pearson. Notasi yang berbeda pada superscript menunjukkan beda yang Hubungan antara Aktivitas Isozim PKC-alpha nyata (α<0. Gambar 3: Pengaruh paparan alpha-tokoferol terhadap kolom 3.01 mm.560 ± 0. 30 μM (3).

Kemungkinan kedua ini tampaknya pa- menyebabkan translokasi enzim PKC dari sitosol ke ling banyak dibuktikan oleh berbagai penulis.10.000) Alpha-tokoferol adalah suatu antioksidan yang antara aktivitas PKC-alpha dengan laju proliferasi saat ini telah diyakini dapat mencegah timbulnya sel stroma setelah terpapar alpha-tokoferol (Gambar risiko penyakit jantung koroner maupun penyakit 4). Seperti yang ditulis oleh Boscoboinik enzim tersebut. laju proliferasi (absorbansi MTT) dengan akti.4 1. Purnomo: Peranan isozim protein kinase c-alpha Penurunan aktivitas enzim PKC diikuti dengan jumlah ATP yang dipindahkan ke dalam substrat.2 0. Pada analisis Pearson. yakni 0.20 - berbagai sel.0437x + 0. Analisis regresi didapatkan hubungan antara keganasan. Kemungkinan lain dari penurunan aktivitas enzim PKC akibat paparan tokoferol adalah terjadinya peningkatan aktivitas enzim PP2A. membran sel. adalah Absorbansi MTT= 9.12 (PP2A). Kemampuannya dalam menu (0. 0 0 0. atau Pemberian SNP (sodium-nitroprusid). ternyata semakin rendah aktivitasnya. Melalui pewarnaan imunositokimia. (2) menghambat ekspresi DAG yang ada 0.22 di permukaan membran.04 21.11 0.2 1.6 1.8 (kontrol) aktivitas isozim PKC-alpha pada stroma prostat. 10 menjadi 8. yakni dengan menghitung dalam sel untuk merubah GTP menjadi cGMP.02 23 molekul NO.0549 PKC-alpha terjadi secara tidak langsung. sedangkan pemberian alpha-tokoferol rena itu jalur ini paling mungkin untuk menerangkan 100 μM menyebabkan rasio ekspresi PKC di dalam mekanisme hambatan alpha-tokoferol terhadap sitosol/sel membran meningkat dari 1.8 Diasilgliserol bersama-sama dengan ion kalsium Aktivitas isozim PKC-alpha ( Unit ) berfungsi dalam mengaktifkan isoform enzim cPKC di permukaan sel. Hal ini dengan laju proliferasi sel stroma prostat. Semakin tinggi dosis alpha- et al (1991) bahwa pemberian PMA 300 nM (suatu tokoferol yang dipaparkan. isozim PKC-alpha menurun setelah dipapar alpha. Di samping efeknya sebagai antioksidan.0549 runkan laju proliferasi sel otot polos vaskular dapat 0.4 0.24 Pada penelitian ini dibuktikan bahwa aktivitas sehingga menyebabkan aktivitasnya berkurang. Semakin tinggi penelitian ini dapat dibuktikan bahwa aktivitas isozim dosis alpha-tokoferol. sedangkan pemberian beta- sebelum dan sesudah dipapar alpha-tokoferol tokoferol tidak menyebabkan peningkatan aktivitas 12 (Gambar 1).08 dengan (1) mengaktifkan enzim protein fosfatase 2 A 0. terbalik dengan dosis yang diberikan. diketahui dari berkurangnya enzim yang Absis menunjukkan aktivitas isozim PKC- alpha dan ordinat menunjukkan laju proliferasi bertranslokasi dari sitoplasma ke dalam permukaan (absorbansi MTT).8 1 1. Enzim PEMBAHASAN PP2A ini menyebabkan defosforilasi enzim PKC 11. (2001) pada sel stroma vaskular yang dipapar alpha- tampak bahwa lokasi ekspresi warna coklat (yang tokoferol 50 μM menunjukkan adanya peningkatan menandakan isozim PKC-alpha) berbeda pada saat aktivitas enzim PP2A.14 dipakai untuk mencegah terjadinya penyakit Absorbansi MTT540 nm 10. oleh ka- membran sel. aktivitas PKC maupun laju setelah terpapar oleh alpha-tokoferol berbanding proliferasi sel semakin menurun (absorbansi MTT). atau (3) mengaktifkan 0.06 1. sehingga penurunan ekspresi DAG Gambar 4: Korelasi antara aktivitas isozim PKC-alpha menyebabkan penurunan aktivitas enzim itu. suatu sebagian besar enzim dalam keadaan inaktif.963. Keadaan ini dapat dimengerti karena NO dapat dihitung secara in vitro dengan ataupun tanpa mempengaruhi enzim guanilil siklase yang ada di 25 melibatkan zat radioaktif. Hal ini menujukkan bahwa ekspresi enzim PKC lebih banyak di dalam sitosol.1 tokoferol dalam mempengaruhi aktivitas isozim y = 0.0437 aktivitas PKC) + 0.6 0. Penelitian in vitro yang dilakukan oleh Ricciarelli et al tokoferol. 33 . donor NO pada sel stroma prostat dibuktikan dapat meningkatkan kadar cGMP (siklik Guanosin Mono 19 Secara kuantitatif aktivitas isozim PKC-alpha Fosfat). secara in vitro alpha-tokoferol terbukti dapat menurunkan aktivitas isozim PKC-alpha pada vitas isozim PKC-alpha.12 atherosklerrosis dan hipertensi. Mekanisme alpha- 0. semakin tinggi aktivitas aktivator PKC) pada sel otot polos vaskular A7r5 enzim PP2A. p=0.10.6. Pada penurunan laju proliferasi sel stroma. didapatkan korelasi positif yang kuat dan bermakna (r=0.12. yakni semakin tinggi dosis.

yang secara tidak langsung dapat isozim PKC-alpha menurun. pada membran sel. 16. 19. dapat menerangkan jika dipakai growth factors. selain ditentukan yang ditimbulkan oleh TPA. suatu donor nitrik oksid (NO). aktivitas isozim PKC-alpha dengan laju proliferasi sel stroma setelah terpapar oleh alpha-tokoferol dari Pada tabel 1 terlihat bahwa bertambahnya dosis berbagai dosis. di antaranya untuk mengukur laju dimediasi oleh enzim PKC. seperti yang ditunjukkan oleh 35-37 alpha tokoferil suksinat. terlihat yang diberikan.26 erat antara aktivitas isozim PKC-alpha yang dipapar alpha-tokoferol dengan laju proliferasi sel. Demikian pula sebaliknya pemberian proliferasi sel. kemungkinan pengaruh alpha-tokoferol terhadap mungkin dapat menghambat proliferasi hingga aktivitas enzim PKC melalui mekanisme ketiga. atau forbol 30 aktivator PKC. Juli 2009: 29-36 Demikian pula pemberian SNP dapat menurunkan stroma vaskular tidak lebih dari 75%. bahwa alpha-tokoferol tidak alpha-tokoferol dalam menghambat laju proliferasi meningkatkan laju apoptosis (Gambar 2). Guh et al (1998) 50 μM hanya mampu menghambat laju proliferasi sel mendapatkan bahwa paparan SNP menyebabkan 34 . Data tersebut perubahan populasi sel sudah dikembangkan oleh lebih meyakinkan bahwa hambatan laju proliferasi berbagai peneliti. Hambatan tersebut tergantung pada Penelitian ini mengaitkan hubungan antara besarnya dosis yang diberikan (dose dependent). 2. menyebabkan berkurangnya laju bahwa setelah terpapar oleh alpha-tokoferol. 23 alpha-tokoferol meningkatkan ekspresi NO. Kemampuan suatu obat dalam inhibitor PKC mampu menurunkan laju proliferasi sel menghambat laju proliferasi sel. penurunan laju proliferasi dapat pula diamati pada sel jukkan bahwa jika memakai serum atau FCS 10% otot prostat yang dipapar oleh sodium nitroprusid sebagai stimulator pertumbuhan sel. stimulus yang sering dipergunakan dalam enzim PKC dalam kaskade MAPK ini terlihat 13. Metode MTT dalam mengukur laju proliferasi yang juga menurun. dan diikuti pula dengan diamati dengan menghitung jumlah sel yang hidup melalui uji MTT. Mekanisme vitamin E dalam intrasel ke dalam retikulum endoplasma.34-36 spesifik untuk memicu penyimpanan ion kalsium antioksidasi. ketiganya adalah aktivator peningkatan ekspresi isozim PKC-alpha dua kali lipat. atau memacu menyebabkan berkurangnya aktivitas enzim PKC. timbulnya apoptosis.28 Di dalam eksperimen in meliputi: raf-1→ MEK→ ERK. alpha-tokoferol (SNP). di antaranya PDGF. bombesin. Vol. 25 menghambat pertumbuhan jaringan adalah dengan 10-13 Berkurangnya kadar ion kalsium intraseluler cara menghambat laju proliferasi sel. asam lisofosfatidat. Dari Proliferasi sel dapat dibangkitkan oleh suatu rumus tersebut dapat dihitung laju proliferasi sel = stimulus atau ligan. kemudian mengaktifkan beberapa protein di dalam sel melalui fosforilasi. yang pertumbuhan suatu jaringan melalui mekanisme non- kemudian cGMP mempengaruhi protein kinase 10-12. Pemberian TPA menyebabkan mirislate asetat (PMA). Uraian penelitian yang dipakai endothelin. Pada tabel 3 dan gambar 5. yang dan endotelin. oleh jenis obat yang dipaparkan.0437 x aktivitas isozim PKC-alpha) + 0.0549. Keterlibatan vitro. Guh et al laju proliferasi sel hingga kurang dari 50%. apalagi 19 25 (1998). 10 peningkatan fosforilasi ERK dan JNK. yakni kurang 25%. Mitogen tersebut memberikan selanjutnya diikuti dengan peningkatan laju kuantitas efek yang berbeda dalam meningkatkan proliferasi sel. Transduksi Berbagai penelitian menunjukkan bahwa sinyal tersebut diteruskan ke dalam inti sel untuk transduksi sinyal intraseluler pada proliferasi sel mengaktifkan faktor traskripsi yang selanjutnya stroma prostat melalui kaskade MAPK (yang 26.39 mengaktifkan siklus sel.38.27.23 Selain mempunyai kemampuan sebagai anti- selanjutnya NO menurunkan aktivitas enzim PKC. 19. 12-0- 30 rhambdomiosarkoma yang diberi TPA. Vitamin E terbukti dapat menghambat dengan cara meningkatkan ekspresi cGMP. aktivitas proliferasi sel. sel stroma prostat yang distimulasi oleh FBS 10% (Gambar 3). No. dan Lue (2002). suatu tetradekanoil forbol-13-asetat (TPA). 31-33 19 oksidan. Ligan berikatan dengan reseptor (0. PKC. juga ditentukan oleh jenis mitogen yang dipakai. Terlihat hubungan yang proliferasi sel otot polos prostat.19. Akan tetapi jika 19 aktivitas enzim PKC. menun. Untuk itu pada penelitian Secara kualitatif dapat dibuktikan kemampuan ini telah dibuktikan. growth factors. Hasil penelitian yang Efek penurunan aktivitas enzim PKC terhadap 10 disajikan oleh Boscoboinik (1991) et al.29 pada penelitian in vitro pada kultur sel penelitian adalah serum forbol ester. alpha-tokoferol mampu menekan 23 dikemukakan oleh Ganz & Seftel (2000).JURI. 7.

270: 28495–8. bahwa penurunan 8. sedangkan rerata penurunan aktivitas isozim 10. Dempsey EC. Aramburu E. 9. J. namun jika alpha-tokoferol diberikan signal transduction in normal and neoplastic cells. 11. Insel PA. Burke A.1991. Helzlsouer KJ. Egger T. Vitamin E: protective semakin besar dosis yang dipaparkan. 1995. Walsh PC. Bartoli GM. J Urol 1997. interupting sphingolipid synthesis. 16. Purnomo: Peranan isozim protein kinase c-alpha penurunan aktivitas enzim PKC. Hensey C. 15: 2314–25. Protein kinase C and dengan serum. d-α-Tocopherol inhibition of vascular smooth SIMPULAN muscle cell proliferation occurs at physiological concentration. Discovery and Prospect of Protein Penurunan laju proliferasi sel yang diakibatkan oleh Kinase C Research: Epilogue. Morpho-metric quantitation γ–Tocopherol or combination of vitamin E forms of stroma in human benign prostatic hyper- induce cell death in human prostate cancer cells by plasia. Claus S. Ewing LL. 2. γ-Tocopherol. Szewczyk A. Chem. Nas. tokoferol terhadap penurunan laju proliferasi sel otot Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2000. Coffey DS. yang dimediasi oleh isozim PKC-alpha. In setelah itu. Wong J. Berges R. Association Between α- 4. 1996. setelah sel yang telah dibiarkan quiscent dirangsang 7. Demikian pula halnya yang Philadelphia: Lippincott-Raven . PNAS 2002. J Natl Cancer Inst 2000. 132: 474-9. tidak nampak lagi hambatan terhadap laju Sirica (ed) Cellular and molecular pathogenesis. Biochem J 2003. Selenium. Hoffman S. Messing EM. ini hampir mirip dengan sel otot polos prostat yang Role of protein kinase C. Zingg JM. Fields AP. 10 yang dipapar oleh alpha-tokoferol. J Biol. Protein kinase C pertama setelah dimulainya fase G1. 92: 2018–23. J Urol 2002. Newton AC. Sci.9 ± 5. 13.04% (Tabel 1). Norkus EP. maupun laju proliferasi semakin menurun. 99: 7408-13. Protein kinase C: Structure. Kazanietz MG. 2001. et al. Yeh S. 11 proliferasi sel. Vitamin E (α-tocopherol) attenuates Rerata persentase penurunan laju proliferasi sel cyclo-oxygenase 2 transcription and synthesis in stroma prostat oleh alpha-tokoferol pada penelitian ini immortalized murine BV-2 microglia. 133: penurunan aktivitas isozim PKC terjadi pada saat 155–8. 279: L429- polos vaskular hanya dapat diamati pada 6 – 9 jam L 438. pertama setelah sel yang dibuat quiscent dirangsang FASEB J 1999. Ron D. PKC-alpha adalah 46. 44: 64-70. Boscoboinik D. 266: 19 dipapar oleh SNP. Deering RE. p. development of human benign prostatic hyperplasia Vitamin E succinate inhibits the function of androgen receptor and the expression of prostate-specific antigen with age. Mochly-Rosen D. Huang H-Y. Azzi A. Penemuan Inhibition of cell proliferation by alpha-tocopherol. correlates with protein kinase C Paparan alpha–tokoferol dari berbagai dosis inhibition. Cell kinetic in 17825-30. 1. Fyrst H. siklus sel fase G1. 1. and is independent of its antioxidant mampu menghambat laju proliferasi sel stroma properties. Ricciarelli R.19 Fase G1/S terjadi pada 6 jam 6. Kazanietz MG. Tasinato A. 12190-4. 11. King J. function. Ni J. J Biol Chem 1995. Hambatan tersebut bersifat dose dependent. 158: 217-21.389-402. and Subsequent regulation. Malle E. Saba JD. Protein kinase C isotypes and their 19 menyebabkan penurunan laju proliferasi sel. 169: 1578-82. Yang CR. PNAS 2004. Ames BN. didapatkan oleh Guh et al (1998). 35 . Newton AC. Efek alpha- isozymes and the regulation of diverse cell responses. Acad. Boscoboinik D. Amann R. Chang E. Brawer MK. Maroni P. et al. epithelium and stroma of benign prostatic hyperplasia.7 ± 370: 459-67. Senge T. aktivitas enzim role of a Janus molecule. Blumberg PM. USA: Proc. Biochem 2003. The 14. 101: 3. Schulze H. Schuligoi R. Jiang Q. Wintersperger A. Azzi A. Sattler W. Klotz LH. Azzi A. in prostate cancer cells.181%. maupun sel otot polos vaskular 6188-94. FASEB J. J Urol 1984. yakni 12. jika diberikan dosis maksimum 60 μM adalah 74. yang selanjutnya 5. 15. Bigler SA. 13: 1658–76. specific functions. Alberg AJ. and Tocopherol. Berry SJ. Zhang Y. 19 oleh FCS 10%. Choongkit taworn M. Venkateswaran V. Prostate Cancer. New insights into the regulation laju proliferasi sel hanya dapat disaksikan pada 6 jam of protein kinase C and novel phorbol ester receptors. Modulation of cell proliferation and cell cycle regulators by vitamin DAFTAR PUSTAKA E in human prostate carcinoma cell lines. Nishizuka Y. 92: prostat.Urology1994. Fleshner NE. Reyland ME.

WC.M 2000. Vitamin E prevents diabetes. Cell communication. 2000. Aratri E. Schwinn Publishing. Molkentin JD. muscle cells by nitric oxide donor.E. pathophysiology of erectile dysfunction and priapism. Bouche 18. Biochem J 2002. and kinase C-α hasil isolasi dari serum darah penderita pre- p38 activation regulates the myogenic program in ekalmsia. Koul HK. Jing Ma. J Urol 2001. Weber C. 98: 386–94. Supplemental vitamin E intake PKCα regulates the hypertrophic growth of and prostate cancer risk in a large cohort of men in the cardiomyocytes through extracellular signal-regulated United States. FASEB J. 171: 1674-81. Roberts K. Modulation of LM.Cell muscle cells. 709-15 26. et al. Ballas 34. Jour Cell Science 19. Physiology of penile erection and 37. Lai M-K. 16. et al. 43:1372-7. Bursell SE. 1591-618. Lin T-J. King Age-dependent increase of collagenase expression can GL. Price DT. J Urol 2004. NewYork: Garland 39. Ishii H. DA. Luttrell LM. Willett 29. and metabolism. Mol Pharm 1998. and E. 30. Spycher S E. Juli 2009: 29-36 17. Cancer Epidemiology.JURI. Nawata H. diakses dari: Walter P. 13: 1145–55. 8: 893–9. edisi ke 7. Hwang TL. 166: 347-53. Mauro A. Am J Physiol 447: 91–4. Gapor A. JNK. Philadelphia: causing lysosomal instability. 22. Lu M. Ozer N. Karakterisasi ekstrak kasar enzim protein M. Activation of extracellular signal- 28.S. Traber MG. Teng CM. P. Ciccarelli C. Kunisaki M. human rhabdomyosarco-ma cells. Guo Y. Free Radic. Bueno OF. Chen J. 1999. inducesapoptosis by Retik AB. Am J Physiol 2000. min A. McIntyre BS. 21. Normalization of diacylglycerol-protein kinase C be reduced by alpha-tocopherol via protein kinase C activation by vitamin E in aorta of diabetic rats and inhibition. Boudreau RTM. Endocrinol. Biomarkers & kinase 1 / 2 (ERK 1 / 2 ).B. 5: 905-19. Marcus R. 2001. p. 362: WB Saunders Co. Koul S. Metab. DEWindt LJ.E 152. J Urol 1999. Molinaro M et al. Vascular incorporation of α-tocopherol th Pharmacolocical basis of therapeutics 10 ed. Sylvester PW. Vaughan ED. Skripsi. FEBS Lett. Glucose-induced changes in Antiproliferative and apoptotic effects of tocopherols protein kinase C and nitric oxide are prevented by and tocotrienols on preneoplastic and neoplastic mouse vitamin E. Briski KP. 2002. Albert B. Diabetes 1994. Raff M. Vita- 53: 467-74. Ostermann G. Induction of cancer cell apoptosis by α- aeruginosa-induced interleukin 6 production by mast tocopheryl succinate: molecular pathways and cells. Neuzil J. Xu A. 31. Breyer I. Vol. Rimm EB. Sticha M. et al. Shwaery GT.edisi ke-4. In: Hardman JG. Keaney JF. Cesaris PD. Invest.biosignaling. Lai MK. Johnson A. Zhao M. relevance to the urologist. Azzi A. 278: mammary epithelial cells (44544). Giovannucci EL. Clermont AC. Unibraw. Maroni PD. Fat soluble vitamins. an agent with In: Campbell's Urology. D. GilmanAG (editor). Kunisaki M. Ko FN. 1995. FASEB J. a-Tocopheryl succinate. Protein phosphatase 2A and protein kinase Cα are physically 36. Chan JM. Med. 35. Cunningham D. 224: 292-301 24. Meacham RB. 162: 1537-42. Scoglio A. Clin.1996. Prevention 1999. 27. associated and are involved in Pseudomonas Gellert N. J. 36 . Della Roca G. 32. Ostermann G. Inc. Vitamin E: Function glucose levels. 115: 3587-99. Teng C-M. Communication and Signaling 2004. Guh J-H. 23. editor: Walsh PC. Chueh SC. prevents endothelial dysfunction due to oxidized LDL p. 269: E239-46. Dalam Molecular http://www. Ballo MS. Chueh S-C. Umeda F. PKCα-mediated ERK. Bursell SE. by inhibiting protein kinase C stimulation. Braz TC. 15: 403–15 25. Brigelius-Flohe R. Antiproliferative effect in human prostatic smooth 2002. Dual effects of ouabain on the regulation of Mitogen Activated Protein kinase signal proliferation and apoptosis in human prostatic smooth transduction pathways in the prostate. Garduno R. Lue TF. Zingg J M. diacylglycerol-protein kinase C pathway. Weber T. Azzi A. No. structural.1733-91. J. Guo C. Jirousek MR. DeWolf WC. Gellert N. J. Ricciarelli R. Schroder A.com/content/2/1/5 biology of the cell. 1999. alpha-tropomyosin expression by alpha-tocopherol in induced abnormal retinal blood flow via the rat vascular smooth muscle cells. Guh JH. E 146. Goodman & Gilman's The Vita JA. 38. Chem 2002. Stampfer MJ. 1999. 227: 5322-9. Coulston AM. and 20. Gaston SM. Cell Biol 2002.831-906. 2001. dan Wein AJ. The cell cycle and its regulated kinase in human prostate cancer. Lewis J. 2002. Limbird LE. Seftel A. cultured rat smooth muscle cells exposed to elevated 33. Neuzil J. Biol. Maroni P. Ganz MB. 2. Biol. 27: 729–37. in vivo anti-tumour activity. Dewi N.