octubre de 1998 .C.MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD MANUALDE GARANTÍA DE CALIDAD EN QUÍMICA CLÍNICA Y HEMATOLOGÍA EDITORES EDITH MORENO CÁRDENAS VISITACIÓN NOY BALLESTEROS ANA LIDA MORENO MARTÍNEZ Santa Fe de Bogotá. D. .

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Sin previa autorización escrita de la institución. diagramación e impresión: División Biblioteca y Publicaciones. 1991 Tercera edición. INS ISBN-958-13-0110-0 . 1998 1000 ejemplares Edición. 1986 Segunda edición..C.Derechos reservados por el Instituto Nacional de Salud Prohibida toda reproducción parcial o total. Colombia Primera edición. D. Instituto Nacional de Salud Avenida Eldorado con carrera 50 Santa Fe de Bogotá.

DIVISIÓN DE LABORATORIO REFERENCIA MERCEDES GONZÁLEZ DE GUEVARA NACIONAL DE COORDINADORA.REPÚBLICA DE COLOMBIA MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD DIRECTOR GENERAL MOISÉS WASSERMAN LERNER SECRETARIA GENERAL GLADYS MORA SERRANO SUBDIRECTOR DE EPIDEMIOLOGÍA Y LABORATORIO NACIONAL DE REFERENCIA SANTIAGO NICHOLLS OREJUELA JEFE. LABORATORIO DE QUÍMICA CLÍNICA ANA LIDA MORENO MARTÍNEZ REVISIÓN JORGE RAAD ALJURE. SUBDIRCTOR DE EPIDEMIOLOGÍA Y LABORATORIO NACIONAL DE REFERENCIA DURANTE EL PERIODO ENERO 1996 – ENERO 1998 .

por su apoyo para realizar esta publicación. Al ingeniero JORGE AGUDELO de la Oficina de Sistemas del INS por su ayuda desinteresada. por el diseño de algunos gráficos del manual. por sus aportes técnicos durante el desarrollo del manual. A la bacterióloga rural GLORIA ISABEL BARAJAS B.HILL INTERAMERICANA. por su asesoría n la realización de este manual.AGRADECIMIENTOS A McGRAW . Secretaria General del INS. Al químico farmacéutico FRANCISCO VARELA. por otorgar el permiso para incluir el dibujo Constituyentes celulares normales en la sangre humana adulta en la portada de la presente publicación. A la doctora GLADYS MORA. paciencia y dedicación. A la bacterióloga MARTHA ALONSO AVELLANEDA. .

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3.............37 5.38 5.....................................3........................................35 5........1.........4........... 32 4............. Remisión de las muestras a otro laboratorio .......6..................................6... 19 3........................................... Reactivo grado purificado....................... 35 5.1................................. ...........4.5............. 19 3........ 37 5....... Balones volumétricos ................................... Pipetas ........................................ Limpieza del material ................................4............................................................1......... ........................... ...............4....... 37 Pipetas de vidrio ...2...................................................................................3.................................. Reactivos químicos .............................................. 29 4................................................... 30 4....1........1...........6............................................................................4......................5. Reactivos grado técnico o comercial .1................. .............................................3................................................................. 25 3.3..19 3.. Recomendaciones en el manejo de liofilizados ..................................4................. 33 MATERIAL DE USO N EL LABORATORIO .............38 Pipetas automáticas ........ Causas frecuentes de error en la toma y procesamiento de las muestras ........2.............................................................38 5.................3.....6.29 4............3............ práctico o puro ..2...... 30 4... ...............2.............31 4..............................................4................35 5..........3.....4................................ Material de vidrio ........................ 36 5...... INTRODUCCIÓN ......37 Para dispensar o de transferencia ...................................................2...................................4....... Grado de pureza de los reactivos ...............36 5.........................2... 29 4............... Estuches comerciales ..... 23 3..........................6............. 29 4. 32 4...... 5....3..........3..........29 4.... Clasificación del material volumétrico . Calibración de pipetas .................. Muestras con anticoagulante ............. 30 4....5............ Borosilicato ........ Reactivo grado químicamente puro (QP) ...................... 37 Para contener ........2..........................................1.... 17 GARANTÍA DE CALIDAD DE LA MUESTRAS .........31 4.1........... Recomendaciones en el manejo de las muestras ....25 REACTIVOS COMERCIALES ........3.......................... Estándares primarios ...........3.................................... Almacenamiento .. 3.......3.............................................21 3......... Libro de registro .........................39 4.....3....... Buretas y tubos d centrífuga ......TABLA DE CONTENIDO 1.. Material volumétrico ...... Estándares ..................1......4................35 5....... Grado reactivo analítico (RA o ACS) ...1..............................2...........6.. Instrucciones de manejo para estuches comerciales ..23 3......... Aluminosilicato ......................29 4.................................... Material para química clínica ........................ 23 3.............................3................... Manejo de las muestras sin anticoagulante ...5............................35 5.................................... 24 3..............................................35 5.................................... Orden médica ..... Criterios de selección ...................29 4. Estándares secundarios ....................................................... 30 4................................ 35 5.....6.......................2..............1.............................25 3.......3......1...... Recomendaciones para la recolección de la muestra . Recomendaciones para el uso correcto de las pipetas ........................... Reactivos grado USP y NF .15 ORGANIZACIÓN DEL SERVICIO DEL LABORATORIO CLÍNICO......... Condiciones del paciente para la toma de muestras .............. Aspectos administrativos del manejo de reactivos ........................ 21 3........1............... Material de plástico .....1..............................................3..... Toma de muestras .................... 2..........................................3............................................5....................................

...................... 5..............4.1...................... 40 5.........................5.............49 Absorbancia .........................4.............................1..1.... Generalidades sobre espectrofotometría .... 43 6..40 5..........................41 6............... Tipo III ........... Tipo II ............................................................................ 5................................... Espectrofotómetros y fotómetros .................... espectrofotometría .............6. 51 Selección de la longitud de onda .......................................... Bidestilación .................43 6.. Tipo I ............................................... 5..................................................................................... Presencia de grasa .....1...4...................................................2.......49 7...... Métodos de purificación del agua ............. Análisis cualitativo del agua grado reactivo ....................3.....................46 Cloruros ......................................................46 Dureza total ................... 51 Zona óptima de lectura ..............3.........5......................................................................4............................................4...............................3.......................... manchado o grasoso ..................................................5......... 40 5..........................41 6......................4...............................39 Pipetas de Westergreen y tubos de Hematocrito de Wintrobe .1......................................1....... 51 7........................................ Ultrafiltración ..........51 Luz extraña............1.................................. 54 Filtros ................2................................1.................................................................................................................................................... ...................................1.............3..............56 Errores fotométricos .......................53 Hendidura de entrada ................................ Material para determinación de iones ....8.................10.....................................43 6......2....54 Pureza de la longitud de onda .................................. Especificaciones para el agua grado reactivo .......4................................................................. Desionización .................52 7........ AGUA GRADO REACTIVO ........................... Control de limpieza y almacenamiento del material .................................................................. Celdas de absorción (cubetas) ........ Osmosis inversa ..............................................................................1.......................... 49 Ley de Beer .......................3.................. 40 5.....9..............44 Sulfatos ......................................53 Selector de la longitud de onda ........53 7........................................2.......... Control de calidad del agua grado reactivo ..............11..................4........................1..................41 6....... Fotometría ............................................ Componentes de fotómetros y espectrofotómetros ..2.....................43 6...41 6...42 6...........2.....................................45 Calcio .....................1........................................................................ ........................ 49 7......................40 6.43 6................................................................................................ 39 Material nuevo....4..................... 49 Longitud d onda ...54 Monocromadores ............................41 6.............................7........ 47 INSTRUMENTACIÓN Y CONTROL DE EQUIPOS ..49 Linealidad …………………………………………………..........1.................................44 6.........47 Tiempo de reducción del permanganato de potasio ................................................. parásita o espúrea ..........39 Material para hematología ................5................................ 5..............................1...................................56 7.................... 39 Limpieza de las pipetas ....49 Tramitancia o porcentaje de transmisión ..................... 7........44 Análisis químico .................................................... Generalidades ...................3............54 Hendidura de salida ..........................4....................................................................39 Láminas porta objetos ............................………................2......................... Destilación ............................... 54 Cubetas ......................................................... 44 Análisis físico ....... 44 6..2....................2.......1............... 5...................54 Detectores ......56 Pantalla ............................ 53 Fuente de luz ............4....................................................4...............1.......... Material para pruebas de coagulación ....4................................................................................................................3.........

94 Suero liofilizado ....................3.................. Media aritmética o promedio ........................................2........2........................90 9... 7..............................95 9........90 Límite de detección .......94 10.....3....................................87 9............................ Control de espectrofotómetros y fotómetros .................................. 58 Pareamiento de cubetas ......................................... 60 Preparación de reactivos ..................................................................1........1....................................................................................................1............79 8...........1.................. Medidas de tendencia central ................................4................ 71 Pipetas automáticas ..........................................3............................................... Medidas de variación .......................... Varianza .............................................................. 8............ 56 Ancho de banda inadecuado ...........79 8. Analítica .......................................................4..............................................86 9...3...................... Control de fotómetros ....... 85 9..90 CONTROL DE CALIDAD EN QUÍMICA SANGUÍNEA .4..... Medina ...2..................6......6.........86 9.........................................................................2..........4............................................................................................................................3..................2..66 Microcentrífugas ....88 Control de calidad de equipos .........................5... 7.................................................... Selección de métodos .............................................................. 78 8...................10............... 88 9.............................................................................2................................... 7......... 94 10... 10................ Métodos de control de calidad interno en química clínica ................... ....... 7....73 Termómetros ............................................ Errores que afectan los analitos de laboratorio ................... 93 10.......... 56 Exactitud de las medidas de absorbancia .......85 9.........94 Suero líquido ..........................88 9............ 57 Inexactitud de la longitud de onda .......................... Errores analíticos .................................................................................73 ESTADÍSTICA APLICABLE EN EL LABORATORIO CLÍNICO ................................................................2....... Programa de garantía de calidad .. Distribución normal por frecuencias ...................................... Errores de la muestra ..... 63 Balanzas analíticas y de precisión ............................................................... 7........ Fases para estandarizar un método en el laboratorio .................. Preanalítica ............... DE o s) .......3............ Generalidades .........9.................................................................................................. 85 9................................2..........................2....................................1..........................Jennings ..... Errores fotométricos que se originan en el instrumento ...........68 Refrigerador y congelador ......................................... 81 8... 59 7................ 57 Errores fotométricos que se originan en l muestra ......................................81 8................. 7.................3.... 58 7.72 Potenciómetro .7................................ Control de calidad interno ...............68 Microscopio ........ ......7............86 9..........94 Gráficas de Levey ................................3............................................................. 88 Control de reactivos ........2.............................................2.......... Postanalítica .....................................2...... Coeficiente de variación ..2.............................................................88 Linealidad ...... Desviación estándar (DS.......................81 8..................1..................................................................................................... 7...................................................... 7......................................90 Exactitud ..3.................... ................72 Dispensadores ...........................80 8....................88 Precisión .....................................................................2........3................... 7...........81 8...........................1................ Errores administrativos ..........1........3.... .1............................ Sueros control y gráficas de Levey -Jennings ................... Moda ....................... 59 Selección de la longitud de onda ........................... 65 Baños serológicos .............................. 77 8...................8.......................................................................... 93 10............4....3...............66 Centrífugas ......11.........7..1....83 ESTANDARIZACIÓN DEL MÉTODO PARA DETERMINACIÓN DE UN ANALITO EN QUÍMICA SANGUÍNEA ..........................

... Velocidad de sedimentación globular ......120 14.......... 14.....7........... Fase analítica ......... 113 13.. Material contaminado para eliminación ..............................................................6..7.........................101 11..........................5..... 127 BIBLIOGRAFÍA ...........................5......103 11....5....3..........3...........103 11........100 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGÍA ............................................111 13.............9..............................................................120 14...............2.....2..........................................6........................5.........................117 14........ 115 BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO ..................................5..5. Muestra .2......5....................................................11.........2......................6......................118 14....125 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD EN LOS LABORATORIOS CLÍNICOS ................2..........3..................... 11........................2... 13............................119 14........... 97 Interpretación de gráficas cuando se usan dos controles ......114 13...104 11............... Interpretación de gráficas cuando se usa un suero control ............... Material contaminado reutilizable...............1......... Normas básicas de funcionamiento ...........1..120 14............. Categorías de riesgo ......................1.....2........2..............................................121 14..122 14.2............. Método paramétrico ......... Determinación de los intervalos de referencia ............. transporte y envío de muestras ...........121 14.... Responsabilidades y deberes ...........101 11.......................... Microhematocrito .........1.......1...... Técnicas de gráficas ...................................2.... Riesgos químicos ......................................3................10........................102 11.................................. Escalas de peligrosidad . 15........................ Control de calidad de la correlación ............2............ 119 14.........................................122 14...120 14............ Hemoglobina .................................. 124 14...............................3...........104 EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD ................4........1...................10......................................................... Periodicidad y calificación .............1....9...... 103 11................................ 97 CUSUM o suma acumulativa .. Material de bioseguridad ................. Seguridad (R-S) .............5................................................................2................................................. Controles de precisión ................... Valores de referencia del mismo individuo .....112 13.. Recuentos celulares .4.. 124 14................2.............. Origen endógeno ....1.......................10.................... Factores de exógenos ..........................................................99 Media diaria de pacientes ....... Muestras radiactivas infectadas ......... ...............3................ Fórmula leucocitaria ............. Método no paramétrico .111 13............... ..........................9......................................................................104 11................2......................................122 14.....5........... Manipulación................................. 122 14......... 16........... 10.....................114 13.................................. 124 14......................................2....8.............................................................................................. Control de calidad de plaquetas ..........................139 12.103 11.... Técnicas de cálculo ......... 104 11...............................................108 INTERVALOS DE REFERENCIA ..5..2..........4.........3........117 14............................. Fase preanalítica ................................... Desechos no contaminados .......................................1......... Fase postanalítica .....................................7....104 11. Características de un laboratorio básico ......5..........1..........1.... Correlación .......11...................................5.2....................................................2.....................................5.. Capacitación .107 12... Programa de bioseguridad en el laboratorio ...........108 12......2....8...... Manejo de reactivos ................... 101 11.......................... Descontaminación y eliminación de desechos ..............3......102 11..................120 14.................................... Riesgos eléctricos y protección contra incendios ...........101 11..........................5............. Símbolos de peligrosidad ..................................................... Almacenamiento de reactivos .............. 97 Renovación de la gráfica de control de calidad interno ..........3..9...........2...........122 14.............................

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La presente edición es un compendio de los temas básicos y de los procedimientos que llevados a la práctica contribuyen a desarrollar un adecuado programa de garantía de calidad y un Mejoramiento Continuo de la Calidad en química clínica y hematología que. la Resolución 4252 de 1997 y el Manual de normas técnicas y administrativas del ministerio de Salud. Es nuestro deseo que este manual sea un documento de consulta diaria para lograr la excelencia que se verá reflejada en los resultados. tratamiento y seguimiento del paciente. El término calidad ha cobrado en los últimos años un significado trascendental en todos los campos. a su vez. los Decretos 2174 de 1996 y 77 de 1997.científico. El programa de garantía de calidad comprende todas las actividades de orden administrativo.INTRODUCCIÓN La constitución Nacional de Colombia. exigen la prestación de servicios de alta calidad por parte de las Instituciones Prestadoras de Servicios (IPS) y demás entidades o personas involucradas. técnico . En el laboratorio clínico. El control de calidad interno como parte fundamental del programa debe asegurar la confiabilidad de los resultados para hacer un adecuado diagnóstico. proporciona una herramienta útil y confiable para que los resultados requerida en la prestación del servicio y la estandarización de técnicas en el laboratorio clínico. . como empresa de servicios que es.ISO 8402) del cliente o paciente. de procedimientos y de personal que conjugadas aseguran la prestación de un servicio óptimo para el cliente. la calidad se define como la totalidad de las características de una entidad (productos. la Ley 100. procesos o actividades) que le otorgan su aptitud para satisfacer las necesidades expresas o implícitas 8NTC .

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1 ORGANIZACIÓN DEL SERVICIO LABORATORIO CLINICO I N T E R R E L A C I Ó N Especificación del servicio Resumen del servicio Proceso de diseño Especificación de la presentación del servicio I N T E R R E L A C I Ó N Paciente Laboratorio Especificación del control de calidad Laboratorio Paciente Necesidades del servicio Proceso de mercadeo Proceso de entrega Resultado del servicio Análisis y mejoramiento de la prestación del servicio Evaluación del laboratorio Evaluación del Paciente .ORGANIZACION DEL SERVICIO DEL LABORATORIO CLINICO El laboratorio Clínico como una empresa de servicios que es. debe atender las necesidades de los pacientes y de los médicos para ofrecer pruebas útiles. El servicio debe ser reconsiderado periódicamente para implementar las medidas necesarias en el programa de mejoramiento continuo de la calidad Flujograma No. 2. oportunas y de la mejor calidad.

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2. 8. 3. etc. Sexo. Fecha de solicitud del análisis. por los auxiliares de laboratorio.GARANTIA DE CALIDAD DE LAS MUESTRAS La preparación adecuada del paciente y la buena calidad del espécimen son factores determinantes. Registrar todo tipo de información suministrada por el paciente momentos antes de la toma de muestra como: restricciones dietéticas. contaminación. y así llevar la estadística del número de exámenes y pruebas solicitados. los requisitos y los pasos a seguir. 4. 3. Condiciones del paciente para la toma de muestras La información acerca de la preparación del paciente para cada uno de los exámenes. administración de medicamentos. para todos los exámenes. 5. Después de esta hora se permite un vaso con agua. los resultados no solamente serán inútiles para un diagnóstico.1 Orden médica El médico debe solicitar al laboratorio. estado de reposo del paciente o si ha estado practicando algún ejercicio físico. Es importante tener en cuenta: a) La dieta.1 Es recomendable que las órdenes de exámenes de pacientes hospitalizados sean recogidos muy temprano. para preparar el material necesario para la toma de muestra. o cualquier otra clase de información importante que no este incluida en el cuadro 3. ruptura del tubo.m. Nombre y apellidos del paciente. Edad. Nombre del médico remitente. Se recomienda la última comida normal a las 8:00 p. Explicar detalladamente. .m. 6. para la obtención de resultados acordes con la realidad. 10. Número de identificación. debe darse por escrito. La orden debe tener la siguiente información: 1. Si éstos aspectos son inadecuados o descuidados. Señalar si es examen control. sino confusos y algunas veces hasta perjudiciales para el paciente implicado. hora de recolección de la muestra. registro médico y teléfono. y para el perfil lipídico la comida debe ser baja en grasas. Cuando el paciente es ambulatorio es importante tener su dirección y número telefónico con el fin de solicitar una nueva muestra en caso necesario por ejemplo. Diagnóstico clínico. procedencia. etc. 2. la realización de los exámenes a un paciente mediante una orden que se deja en el laboratorio para anotar en el cuaderno de registro. Observaciones. 3. hemólisis. ocupación. 7. hasta las 10:00 p. en forma clara y sencilla. 9.

fósforo. gama glutamil transferasa. d) La ingestión de alcohol produce cambios en la composición de los fluidos del cuerpo. Uratos y lactatos son a veces afectados. Glucosa.Cuadro No.1 FORMULARIO DE ADMISIÓN Fecha______________________________________________________________________ Paciente remitido por el doctor__________________________________________________ Dirección_________________________________________Teléfono __________________ INFORMACION DEL PACIENTE Nombre completo____________________________________________________________ Edad___________________Género________________________Peso__________________ Dirección__________________________Teléfono__________________________ Procedencia_______________Ocupación_________________________________ Ambulatorio___Hospitalizado___ Embarazo: Sí____ Meses____ No___ Medicamento Hora de administración Vía de administración ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ______________ Consumo de cigarrillo Sí ____ No_____ Cuántos?__________ Consumo alcohol Sí_____No _____ Cantidad_______________ Examen de control Sí_____No______Ultimo Control Fecha_______ Lugar ___________ Ha tenido fiebre u otro tipo de enfermedad en los últimos 10 días? Si________ NO________ Especifique ___________________________________________________________________________ INFORMACION EXCLUSIVA PARA EL LABORATORIO Fecha de recolección: ____________ Hora: __________ Dieta _____________________ Hora última comida _________Ingirió licor la noche anterior? SI___ NO___Hora____ Cuánto?_____________________________ Practica ejercicio habitualmente? SI____ NO____ Lo practicó el día de hoy?__________ Observaciones: ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ b) El ayuno es condición necesaria para una buena interpretación de los exámenes de glicemia. 3. triglicérido. triglicéridos. . De especial interés son las enzimas del hígado Ej. etc. : fosfatasa alcalina aspartato transaminasa. la LDH y disminuye el hierro. c) El ejercicio aumenta las catecolaminas la creatin fosfocinasa (CK).

de ( 0. incluyendo las del crecimiento. 4. Se debe tratar al paciente con amabilidad para darle confianza. El área de toma de muestras que debe contar con un espacio amplio. Si se encuentra inconsciente verificar su identidad a través de la enfermera. 2. torniquetes en banda. iluminado. con buena ventilación y una temperatura entre 20 .Toma de muestras El sitio de toma de muestras consta de: Sala de espera donde el paciente debe guardar reposo 15 minutos antes de la toma de la muestra.4. cortisol. Es importante informar al paciente el tiempo que va a permanecer en el laboratorio. 3. glucosa y la absorción gástrica como en la prueba de tolerancia de la glucosa. . Recomendaciones para la recolección de la muestra La muestra de sangre destinada para análisis bioquímico y hematológico es obtenida por punción venosa y debe ser extraída por un profesional. 3. Es importante realizar este procedimiento en la misma posición siempre para estandarizar la toma de las muestras. El estrés mental estimula la producción y secreción de hormonas.1 mm) 19 -20 G para química y 23 .e) El cigarrillo afecta la lipasa. lancetas. Exámenes a realizar. prolactina. Escribir las iniciales del profesional que toma muestra.3. Identificar el recipiente en el que se va a recibir la muestra con un rótulo que debe incluir: 1. alcohol yodado. Si el paciente está consciente. 6. jeringas o tubos al vacío. (0. láminas. Una silla segura y firme para apoyar cómodamente el brazo o en su defecto una camilla. algodón. amilasa. 3.8 mm) 21G para hematología. En pacientes hospitalizados se debe anotar el número de la historia clínica. El profesional debe informar al paciente sobre el procedimiento al cual va a ser sometido. Número de identificación. Fecha. Verificar que la identificación de la muestra corresponda a la orden médica. servicio y cama. renina.25°C. El material debe ser el adecuado y en suficiente cantidad: Tubos con y sin anticoagulante. preguntarle su nombre completo y fecha de nacimiento. colesterol. Nombres y apellidos del paciente. 5. familiar o un acompañante. agujas de bisel mediano.9 a 1. curitas y un botiquín de primeros auxilios.25G para niños menores de cinco (5) años.

el tobillo y la mano. No usar alcohol para pruebas de alcoholemia. Esto produce un 10-20% de hemoconcentración con un incremento en la concentración de moléculas complejas como proteínas y de aquellas sustancias que están unidas a ellas como el cortisol.Es obligatorio utilizar guantes para la venopunción. EDTA) o la ausencia de este. En este momento se inserta el tubo hasta el fondo del soporte permitiendo que se llene de sangre hasta la marca. hay movimiento de ultra filtrados de la cavidad intravascular a la extravascular del fluido extracelular.Cuadro hemático El orden anterior. La desinfección se realiza con movimientos circulares de adentro hacia afuera. para evitar la hemoconcentración y éstasis venosa.Suero 2. En lo posible evitar las laterales. tiroxina y algunos medicamentos. No es conveniente dar palmadas en el área de venopunción. porque se producen cambios en los niveles de los constituyentes sanguíneos.. citrato de sodio. Este sistema hace posible la extracción de la sangre venosa en forma aséptica. práctica y estandarizada. ni hacer el ejercicio de abrir y cerrar la mano. Especial cuidado se debe tener al llenar los tubos con anticoagulante ya que un cambio en la proporción sangre / anticoagulante puede alterar los resultados. proceso que se inicia en el momento de hacer la venopunción. por lo tanto se debe trabajar aplicando las normas de bioseguridad. para evitar alteraciones en los valores de coagulación. para evitar la hemólisis.. alterando los valores de: proteínas. Recordar que todas las muestras son potencialmente peligrosas. Seleccionar el anticoagulante adecuado para la prueba. en cuanto la aguja haya sido insertada en la vena. este debe dejarse por un tiempo no mayor de 30 segundos y retirarse tan pronto la sangre empiece a fluir. En los cambios de postura de pie a reposo. dejar que la zona se seque sin tocar nuevamente. El sitio de venopunción no debe presentar hematomas o cualquier otra clase de lesión. Las venas más comúnmente seleccionadas son: media cubital y cefálica. La secuencia recomendada es la siguiente: 1. moléculas ligadas (hierro). Al utilizar tubos al vacío. Para limpiar y desinfectar el área de humedece una torunda de algodón con solución de alcohol yodado. Con el bisel hacia arriba atravesar la piel formando un ángulo de aproximadamente 15° con el brazo. Revisar la jeringa antes de hacer la punción. se sujeta el soporte de la aguja contra el brazo para que esta no se mueva.Coagulación 3. componentes celulares y enzimas. El émbolo se hala suavemente a medida que la sangre va fluyendo. Desinfectar con alcohol al 70% cuando en la prueba a realizar se utilice yodo radiactivo. siguiendo la dirección de la vena. . También se pueden canalizar venas de la muñeca. Los colores de los tapones de caucho permiten distinguir si el tubo contiene un determinado anticoagulante (oxalato.. y en extracciones problemáticas recurrir a la femoral o yugular (procedimiento médico). (etanol al 70% más tintura de yodo al 1%). Si es indispensable el uso de torniquete para la selección de la vena.

Se recomienda como rutina utilizar esta técnica para el extendido de sangre periférica. 3. Recomendaciones en el manejo de las muestras 3.Una vez tomada la muestra.6°C no más de 2 horas o congelar a -20°C no más de 8 días y descongelar a 37°C antes de realizar la prueba. Dispensar la sangre suavemente por las paredes del recipiente para evitar la hemólisis y la formación de aerosoles. Libro de registro El laboratorio debe tener un libro de registro diario de exámenes ordenados (que son los relacionados en la orden médica) y otro de exámenes realizados (número de pruebas que se realizan para hacer un examen ordenado como son: blanco.5. La mayoría de las pruebas de coagulación requieren plasma pobre en plaquetas. estándar. 3. . Marcar el recipiente del plasma y conservar en el refrigerador de 4 . Hacer una punción de 2 a 3 mm.p. con el propósito de obtener la información necesaria para efectos estadísticos y de costos que debe ser llevado por el profesional encargado. limpiar la primera gota de sangre y utilizar la siguiente para la prueba. Este se obtiene centrifugando a 2500 r. (Cuadro No. tapar y mezclar suavemente por inversión mínimo seis veces. durante 15 minutos. alcohol yodado y lancetas deshechables. Tener en cuenta las siguientes recomendaciones: Romper la aguja con el destructor ó quitarla mediante el uso de pinzas y descartarla de acuerdo a las normas de BIOSEGURIDAD.6. colocar sobre el sitio de la punción.2 ) Observar y anotar si hay presencia de hemólisis. una torunda de algodón seca y ejercer presión para facilitar el proceso de coagulación. Muestras con anticoagulante Tener en cuenta la tabla de interferencias de anticoagulantes para las pruebas de química. Para las pruebas de coagulación recibir las muestras en tubos plásticos o en tubos recubiertos con silicona. ictericia o lipemia en el respectivo cuaderno de registro. 3. En caso de trastornos o colapsos debido a lipotimia u otras causas tener a la mano alcohol o amoníaco. Para realizar punción capilar se utiliza algodón. controles) en cada sección.6. la gota debe fluir naturalmente.m. Depositar la sangre en el recipiente. Desinfectar las manos en forma intensiva antes y al terminar la toma de muestra.1. Indicar al paciente que mantenga el brazo extendido y permanezca en el laboratorio por lo menos cinco minutos.

Dentro de la media hora siguiente a la extracción.. para verificar resultados cuando sea necesario.peroxidasa Estándar-optimado (n-acetylcisteina) Jaffé con y sin desproteinización Acetato de celulosa Bessey . Manejo de las mue stras sin anticoagulante Dejar coagular la sangre en el recipiente tapado a temperatura ambiente. debe conservarse herméticamente cerrado y congelado durante 8 días. en cuanto a estabilidad y conservación.Fishman Bessey .p.2.Frings Enzimático . K. Tener en cuenta las consideraciones especiales de cada analito. 3. Cuadro No.m. Una vez procesado el suero.Grof Cresolftaleina complexona Titulación con nitrato de mercurio Pearson Stern.Subbarow Oxidasa .75 mg/ml EDTA 1mg/ml Sal de litio 0 0 X 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 X 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Sal Di sódica 0 X 0 0 0 X 0 0 0 0 X 0 0 X 0 X X 0 0 0 0 0 0 0 0 Oxalato 2mg/ml Sales de Li.Lowry Fiske .2. Observar y anotar en el cuaderno de control si hay hemólisis.La Due y Henry Diacetil monoxima Berthelot Biuret Reitman y Frankel Wroble .3.colorimétrico Sal Sódica o potásica X 0 X 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 X 0 0 0 X X 0 0 0 0 0 Sal de amonio 0 0 X 0 0 0 0 0 0 0 0 0 X 0 X 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 X X X X X X X 0 X X X 0 X X 0 X X X X X X X X x X 0: Ninguna interferencia x: Interferencia en la determinación . INTERFERENCIA DE ANTICOAGULANTES ANTICOAGULANTES CONCENTRACION EN SANGRE Componentes Método Heparina:0. ictericia o lipemia.500 r.6.peroxidasa Hexoquinasa Wroblewski . con el tubo tapado. centrifugar 10 minutos a 2.Wski Karmen Neri . Na X X X X 0 X 0 0 X X X 0 X X 0 X X X X X X X X x X Citrato 5mg/m l Fluoruro 2mg/ml Sal sódica X X X X X X X 0 X X X 0 X X X 0 O X X X X X X x X Ácido úrico Albúmina Bilirrubina Calcio Cloruros Colesterol Creatincinasa Creatinina Electroforesis de proteínas Fosfatasa ácida Fosfatasa alcalina Fósforo inorgánico Glucosa Lactato deshidrogenasa Nitrógeno ureico Proteínas totales Transaminasas Triglicéridos Caraway Uricasa-Peroxidasa Verde Bromocresol Malloy Evelyn Jendrassik . Mc. Gavack Oxidasa .

éstas se pueden dejar a temperatura ambiente durante este lapso. Aspirar o vaciar rápidamente la jeringa.3. Dado que muchos de los exámenes que se solicitan a los laboratorios de referencia no se consideran urgentes y su procesamiento puede llevar un tiempo largo.).8 mm de diámetro (21G). exposición a la luz. comunicar al paciente y al personal médico cuando se hizo el envío de la muestra y cuando se esperan los resultados. (nombre del paciente. Utilizar agujas de menos de 0. Hemólisis intravascular Contaminación con agentes antisépticos Residuos de jabón en el material. se recomienda. 4.6. los cambios en el pH. 3. Separar el suero y enviar en frasco herméticamente cerrado. Hemólisis. (Evaporación. la sangre total debe enviarse dentro de la primera hora después de su recolección. 7. para evitar la hemólisis y la utilización de la glucosa por las enzimas glicolíticas presentes en los eritrocitos. creatinina. La hemólisis interfiere considerablemente con las determinaciones de potasio. hemoconcentración. GOT. Si no es posible separar el suero. el intercambio de electrolitos entre el glóbulo rojo y el suero y la difusión de proteínas o enzimas desde el interior de la célula roja hacia el suero.3. GPT. Causas frecuentes de error en la toma y procesamiento de las muestras. contaminación. número) Trascripción equivocada de la historia clínica. LDH. orina u otros. 1.4. . Incorrecta identificación de la muestra. Almacenamiento Para los análisis de química sanguínea se utilizan muestras de suero.6. 5. Remisión de muestras a otro laboratorio Cuando las circunstancias exijan el envío de muestras a otros laboratorios se deben tener en cuenta las siguientes recomendaciones: Recoger y conservar apropiadamente la muestra ( Ver tabla 3. 2. fosfatasa ácida. dentro de las dos horas siguientes a su recolección. 3. Proporción inadecuada de anticoagulante. Sin embargo el crecimiento bacteriano y la actividad enzimática pueden alterar drásticamente el valor de los componentes sanguíneos. Se debe tener cuidado al separar el suero del coágulo. plasma. Uso prolongado del torniquete. Cambios en la concentración de los componentes. Si los análisis se van a efectuar dentro de la hora siguiente a la recolección de las muestras. 6. bilirrubina. 3. temperatura de almacenamiento inapropiada. fraccionamiento de proteínas y lipasa entre otras.5.3.6.

se congela inmediatamente) O 4 horas O 24 horas O 10 días ( usar preservativo para orina de 24 horas) S 3 días S 3 días No se recomienda S 12 horas S 3 días S 6 meses P 12 horas P 3 días P 6 meses O 24 horas O 4 días O 2 semanas ( con preservativo) ( con preservativo ) S 6 días S 10 días S 2 meses O 6 horas O 4 días O 2 semanas ( con preservativo ) (con preservativo) LCR 2 días LCR 2 semanas LCR 6 meses S 48 horas S 7 días S 2 meses S 12 horas S 3 días S 2 meses P 12 horas P 3 días P 2 meses Fosfatasa ácida Fosfatasa alcalina Fósforo inorgánico Glucosa LDH Nitrógeno ureico Proteínas Totales Transaminasas Triglicéridos .3 ESTABILIDAD DE LA MUESTRA DESPUES DE SU OBTENCION EN QUIMICA CLINICA COMPONENTE T. Para estabilizarlo.AMBIENTE 20-25 oC S 3 días P 3 días O 2 días (con preservativo) S 6 días O 24 horas LCR 2 días S 6 horas O 2 días S 4 horas (en oscuridad) S 10 días O 6 horas S 7 días O 7 días S 6 días P 6 días S 4 horas P 4 horas O 5 días REFRIGERACIÓN 2-8 oC S 5 días P 5 días O4 días (con preservativo) S 10 días O LCR 15 días S 2 semanas O 2 semanas CONGELACIÓN 20 oC S 6 meses P 6 meses O 2 semanas (con preservativo) S 2 meses O LCR 4 meses Ácido úrico Albúmina Amilasa Bilirrubinas Calcio Cloruros Colesterol Creatincinasa S 10 días O 7 días S 7 días O 7 días S 6 días P 6 días S 24 horas P 24 horas O 3 semanas ( con preservativo) S S 8 meses 7 días S 6 meses P 6 meses S 6 meses P 6 meses O 6 meses (con preservativo) Electroforesis de proteínas S 24 horas S 8 días S 6 meses O 24 horas O 48 horas O 7 días LCR 24 horas LCR 48 horas LCR 7 días S 7 días S 7 días S 6 meses Suero estabilizado.Cuadro No. diluir con 5 mg NaHSO4/1ml suero S 4 horas S 7 días S 7 días S 2 días S 7 días S 10 días O 6 horas O 8 días SoP 2 horas SoP 8 horas SoP 10 días ( Si se separa antes de media hora. 3.

si el análisis no se hace inmediatamente.3. para impedir la evaporación y la contaminación. 1 año Son inestables por lo tanto. secos y cubrirlos con tapones de caucho.0 2-4°C ó congelar temperatura ambiente nitrógeno ureico proteínas totales 24 horas 24 horas 4-8°C 4 días menos 20°C. la muestra se debe congelar a -20o C.Cuadro 3. Almacenar en tubos limpios. Evitar que las muestras queden destapadas.4. 2-4°C ó congelar pH< 2. según se muestra en la Cuadro 1. el suero o plasma se debe guardar en nevera a 4o C.1 ALGUNAS PRUEBAS QUIMICAS EN MUESTRAS DE ORINA ANALITO ácido úrico albúmina bilirrubina calcio creatinina glucosa MUESTRA 24 horas 24 horas orina fresca 24 horas 24 horas 2 horas PRESERVATIVO NaOH sin preservativo sin preservativo 10 ml de HCl 6 mol/L sin preservativo 5 ml de ácido acético glacial 5 g de benzoato de sodio ó fluoruro de sodio refrigerar ó adicionar timol refrigerar durante su colección OBSERVACIONES temperatura ambiente 2-4°C ó congelar evitar la luz. El líquido cefalorraquídeo los exudados y trasudados deben analizarse rápidamente o refrigerarse a 4°C. Colocar el suero o plasma a la temperatura más conveniente. se debe hacer inmediatamente después de la separación de los glóbulos rojos. Si demora más de cuatro horas. Las muestras que requieran oscuridad se deben cubrir con un forro de papel aluminio. . teniendo en cuenta la estabilidad del analito a determinar. La refrigeración y congelación de las muestras de suero y plasma.

.

1 Estándares Estándares primarios Son sustancias químicas que tienen la pureza más alta que la tecnología actual puede ofrecer. 4. Un patrón primario debe reunir los siguientes requisitos: 1. 4. No ha de ser higroscópico a fin de poder efectuar pesadas exactas sin que absorba humedad. Tener una pureza superior al 99%. 2.2. . denominación que se encuentra en los catálogos y debe conocerse antes de pedir el reactivo. datos que van consignados en el boletín de garantía (etiqueta) que lleva el frasco. exige características especiales para la obtención de resultados confiables.1.3. Reactivos químicos Es importante conocer los grados de pureza que ofrecen las casas comerciales. con el fin de que los errores de pesaje tengan solo un efecto mínimo. cuando se puede trabajar con uno de precio más económico. 4.1. sobre la concentración de la solución patrón. Grado de pureza de los reactivos 4. Debe tener un peso equivalente relativamente alto. 4.1.2. 6. porque ello evita adquirir un reactivo de uso general cuando el que se requiere. 3. 4. Estándares secundarios Son soluciones cuya concentración o pureza se determina por comparación con un estándar primario y son los que se utilizan a diario en los laboratorios clínicos.1. sin que se altere su composición. Ser una sustancia estable de composición definida. son utilizados para ensayar una solución volumétrica de concentración desconocida o para preparar una solución con concentración conocida. En ocasiones se podría estar solicitando un reactivo costoso. Grado reactivo analítico (RA o ACS).3. Debe ser una sustancia que se pueda analizar con exactitud. Estos productos químicos se han analizado en un laboratorio de control para determinar su pureza y la cantidad real de impurezas. Poder desecarse a temperatura entre 105-110°C. 5. Cada casa comercial da una denominación especial a los reactivos de más alta pureza. El uso de sustancias químicas "Grado Reactivo" es esencial para obtener resultados precisos en los análisis de laboratorio clínico.REACTIVOS COMERCIALES Las sustancias químicas tienen diversos grados de pureza dentro de los cuales los más importantes son: 4.

3. Utilizar agua grado reactivo.4.4.3.3. Reactivo grado químicamente puro (QP) Estos reactivos no llevan en su boletín de garantía el contenido de impurezas.).3. para evitar pérdida de la solución durante la mezcla. Los productos que pertenecen a esta categoría. Medir exactamente la cantidad de ácido y de solvente necesario para la solución y mezclar. Cuando la concentración del ácido es alta. de modo que el contenido sea perfectamente homogéneo antes de completar el volumen hasta la marca. Emplear solamente productos químicos de grado reactivo para análisis (R.A. Reactivos preparados en el laboratorio Al preparar reactivos químicos en el laboratorio. Reactivo grado purificado. 2. no resultan lo suficientemente puros para aplicaciones analíticas. 4.3. Reactivos grado USP y NF Estos productos químicos se fabrican para satisfacer especificaciones fijadas en la farmacopea americana o europea. Las soluciones preparadas en balones volumétricos deben mezclarse varias veces durante la dilución. Asegurarse que el tapón de los balones volumétricos quede debidamente ajustado. práctico o puro Son los grados de menor pureza y no deben utilizarse en análisis químico clínico. leer la parte inferior del menisco y en soluciones coloreadas leer la parte . 5. Aunque estos grados son adecuados para el consumo humano. se deben tener en cuenta los siguientes parámetros: 1. puesto que la reacción es exotérmica. 4.3. a menos que el químico Analice en su totalidad el reactivo antes de emplearlo para asegurar la ausencia de impurezas que interfieran el análisis. Reactivos grado técnico o comercial Se usan en general sólo para procesos de industriales. 4. 4.6. la dilución debe hacerse en baño de hielo. No completar volumen porque quedaría más diluida. La lectura del menisco en los balones aforados debe hacerse así: en soluciones transparentes. no son de confianza para investigación ni para las técnicas de química clínica.5. Al preparar soluciones con ácidos concentrados tener en cuenta que el ácido se agrega lentamente sobre el agua.2. 4. 6. Tener en cuenta las moléculas de agua que poseen algunos reactivos en los cálculos de pesaje.3.

8. ésta no debe pesarse sobre papel. 3. Criterios de selección Cuando se adquieren estuches comerciales es importante tener en cuenta los siguientes parámetros: 1.4. Evitar la contaminación de los reactivos por el uso de recipientes y/o pipetas sucias.4. Estuches comerciales 4. 10. la temperatura de la solución debe estar entre 20 y 25°C. No dejar destapados o mal tapados los reactivos para evitar su evaporación y contaminación. 4. . pero ello puede conducir a la contaminación del estándar y cambiar su valor. Al preparar un reactivo que requiera el pesaje de una sustancia sólida. Para completar el volumen hasta la marca. Muchos analistas toman directamente los productos de los recipientes de soluciones estándar. Principio o fundamento químico en que se basa el método. 7.superior de la columna líquida. Para llevarla después al volumen deseado en volumétrico aforado. sacar la cantidad ligeramente superior a la necesaria en otro recipiente como un vaso de precipitado y descartar el sobrante. ejemplo: En vidrio neutro oscuro los ácidos o en frasco de polietileno los álcalis. Envasar los reactivos una vez preparados en material apropiado.1 Rótulo de los reactivos NOMBRE DEL REACTIVO COMPONENTE ACTIVO CONCENTRACION TECNICA CASA COMERCIAL FECHA PREPARACIÓN FECHA CADUCIDAD TEMPERATURA PERSONA QUE LO PREPARO ________________________________________________ ________________________________________________ ________________________________________________ ________________________________________________ ________________________________________________ ________________________________________________ ________________________________________________ ________________________________________________ ________________________________________________ 4. No introducir pipetas ni espátulas en los frascos de reactivo puro. Rotular el recipiente de la siguiente forma: Cuadro No. Fecha de expiración del reactivo y número de lote. Presentación del reactivo 2. Utilizar vidrio de reloj o vaso de precipitado que permita disolver la sustancia. 9. composición exacta del reactivo.1.

qué diluciones hacer y con qué diluir la muestra. También es posible disminuir considerablemente los costos si la selección de los equipos se hace adecuadamente. 5. con lo cual se logra una marcada diferencia entre las muestras y los blancos a umentando así la sensibilidad de la prueba. 4. 8. Solicitar a la casa comercial. Escoger la longitud de onda indicada en el inserto para la lectura final de la reacción. reactivos con una fecha de expiración amplia y tener en cuenta la estabilidad de los reactivos una vez reconstituidos. 4. 6. los cuales deben seguirse exactamente: 1. porque a medida que aumenta la complejidad de la técnica aumentan las posibilidades de error en la ejecución de la misma.4. 10. Límite de linealidad. .2. Si un método es rápido se podrán suministrar los resultados oportunamente al paciente y disminuir los costos. Cálculos y magnitudes. 6. 3. Uso del recipiente adecuado para envasar los reactivos. En caso de que sea indispensable el uso de éstos seguir recomendaciones necesarias. 9. La automatización trae consigo una mayor reproducibilidad y disminución en la posibilidad de error. etc. 8. 2. Otros controles que se deben usar: estándares. Temperatura de almacenamiento. Reconstitución de los reactivos. 7. suero control. Los reactivos deben ser estables. Estabilidad después de reconstituidos.4. La coloración final de la prueba debe ser definida y estable por un tiempo lo suficientemente largo para que permita una medición confiable. Una buena técnica debe ser susceptible de automatizar. La técnica debe ser sencilla de ejecutar. La absorbancia del blanco usado en la prueba debe ser baja. 5. Instrucciones de manejo para estuches comerciales. En caso de sobrepasar estos límites. 7. calibradores. Según el instrumento. Los estuches comerciales incluyen insertos con las instrucciones para cada prueba. Los reactivos empleados en las técnicas deben ser lo menos peligrosos posibles.

estándar. Al recibir los pedidos tanto de proveedores como del laboratorio. Las características especificadas en la orden de pedido (catálogo. El reactivo seco sin reconstituir debe ser un polvo uniforme de color blanco. podrá mediante l estadísticas hacer el análisis del consumo mensual de reactivos y material empleado. pueden adaptar sus productos a los diferentes equipos. con el objeto de garantizar una cantidad suficiente en existencia. 7. Esta adaptación se específica por el número de catálogo consignado en el manual de procedimientos que viene con el equipo. Llevar un control estadístico de las pruebas ordenadas y las realizadas (incluye blanco. La fecha de expiración del producto. Mantener los reactivos liofilizados a la temperatura recomendada por la casa comercial. El jefe del laboratorio o persona encargada de hacer os pedidos. Debe ser de fácil y rápida reconstitución (más o menos 5 minutos).4. Obtener la linealidad indicada en el método y los valores del suero control deben estar dentro del rango de valores asignados. 3. En los laboratorios que dispongan de equipos automatizados. Un profesional del laboratorio debe estar encargado de manejar el depósito de reactivos y material. Recomendaciones en el manejo de liofilizados. 4. 4. no debe presentar grumos. es importante tener en cuenta: 6. 5. si esta absorbancia no se obtiene.4. para lo cual se recomienda: 1. 6. tener en cuenta que las diferentes casas comerciales. Aspectos administrativos del manejo de reactivos Con el fin de garantizar el correcto funcionamiento del laboratorio es necesario tener un control de suministros. debe dar la absorbancia indicada en el inserto.5. Al reconstituir el reactivo debe hacerse lentamente por rotación circular o inversión suave. descartar el reactivo. 2. 2. etc.). 3. 4. 7. 1. Nunca mezclar reactivos de estuches de diferentes lotes y menos aún reactivos de diferentes casas comerciales. Al reconstituirse con agua grado reactivo y con el volumen exacto recomendado.3. número de lote. 5. sin agitación fuerte a fin de evitar la formación de espuma. suero control) diariamente en el laboratorio. . Mantener una misma línea de productos para las determinaciones clínicas.

10. La distribución de los reactivos de acuerdo con sus características de almacenamiento (temperatura. desecación). Llevar un Cardes donde se registra entrada y salida de cada uno de los reactivos. Los estuches comerciales deben almacenarse en orden a su fecha de vencimiento con el objeto de gastar primero los de fecha expiración más próxima. 9.8. No almacenar reactivos vencidos. .

fuertes.1 Borosilicato El vidrio de esta composición química tiene ventajas como: Resistir altas temperaturas (hasta 820°C) Resistir ataques químicos Varían en mínima cantidad su volumen por efectos de la temperatura.1. Las resinas más empleadas para su elaboración son entre otras: Polipropileno y policarbonato (resisten altas temperaturas) Polietileno (bajas temperaturas). zinc.MATERIAL DE USO EN EL LABORATORIO 5.1.1. arsénico y antimonio. 5. porque corroen el vidrio y alteran la calibración. metales pesados. 5. Las materias primas más utilizadas en la elaboración del vidrio para uso en el laboratorio son: 5.2 Material de plástico Los materiales sintéticos utilizados en la fabricación de elementos de laboratorio. El vidrio corriente suele ser atacado por soluciones pH superior a 6. ácidos oxidantes ni solventes orgánicos. el material volumétrico se ha clasificado en A y B. debe ser de la mejor calidad para lograr una mayor exactitud en las medidas y obtener mejores resultados.2 Aluminosilicato Además de las ventajas del borosilicato tiene una alta resistencia mecánica. El vidrio tiene un bajo contenido de álcali y carece de calcio.0 contaminándolas con iones metálicos. magnesio. . la fidelidad en la medida de los volúmenes y el mantenimiento del mismo.3. El material plástico es ideal para almacenar soluciones acuosas. Las soluciones ácidas atacan menos el vidrio. 5.3 Material volumétrico En el trabajo del laboratorio es fundamental tener en cuenta la selección del material volumétrico. No se deben almacenar soluciones alcalinas concentradas en vidrio de borosilicato. Material de vidrio El material de vidrio es el más usado en el laboratorio. son los más recomendables actualmente debido a que son irrompibles e inertes como intercambiadores iónicos.1 Clasificación del material volumétrico No utilizar con ácidos Según las recomendaciones de la O ficina Nacional de Estándares. 5.

05 0.08 0.3 Buretas y tubos de centrífuga.02 0.05 0.12 0.20 0.0 3.08 0.10 2.006 0. (Cuadro No.01 0. .50 0.006 0.03 0. Cilindros graduados.006 0.03 0. En el cuello tiene una marca fina que indica la capacidad del balón a una temperatura definida.05 0.Clase A: De mayor exactitud (menor tolerancia) Clase B: De menor exactitud (mayor tolerancia). 5.10 0.14 0.01 0.2 Balones volumétricos Tiene cuello largo y angosto para hacer posible el ajuste del volumen total con facilidad y precisión. reactivos y en general para soluciones de gran exactitud.5 1 2 3 4 5 10 15 20 25 50 100 200 250 500 1000 2000 0.1 ) Cuadro No.05 0.01 0.65 1. 5.1 Limites de tolerancia para el material de vidrio volumétrico de clase a como especifica la Oficina Nacional de Estándares (National Bureau Of.03 0. Se utilizan para preparar estándares.03 0.3.02 0.08 0. por lo tanto es recomendable mantener cada balón con su tapa original.03 0.30 0.05 0. El doble de la clase A.3.01 0.02 0. erlenmeyer y vasos de precipitado.01 0. Standars – NBS) LIMITES DE TOLERANCIA (ml) CAPACIDAD ( ml ) PIPETAS PIPETAS VOLUMETRICAS DE MEDIDA BURETAS MATRACES VOLUMÉTRICOS PROBETAS 0.02 0.015 0.5.01 0.10 0.03 0.02 0.015 0.20 0.35 0. Cada balón trae su tapa correspondiente con la cual ha sido calibrado. Son utilizados para medir volúmenes de orina y para preparar soluciones que no requiere gran precisión.02 0.01 0.10 0. Esta marca generalmente indica el volumen "contenido" a una temperatura de 20-25°C. En medidas volumétricas donde se requiere gran exactitud se debe utilizar material clase A.5 5.

En soluciones transparentes se lee la parte inferior del menisco mientras que en soluciones coloreadas se lee la parte superior. las que no tienen estos anillos debe dispensarse el líquido en posición vertical. Con la pipeta a calibrar.6.3. Estas han sido calibradas con agua y son por lo tanto diseñadas para medir soluciones acuosas. . con papel absorbente. indican que se debe soplar la última gota. No pipetear directamente con la boca. ausencia de humedad y rupturas antes de tomar el líquido. Secar la parte exterior de la punta de la pipeta. Para contener Las pipetas capilares son calibradas para contener volúmenes muy pequeños. Verificar la limpieza. Al usar estas pipetas se debe dispensar el contenido y lavar varias veces en la respectiva solución. las volumétricas (con bulbo central) y las de Mohr (se mide en la región graduada solamente).3. utilizando uno diferente para cada muestra.5.4 Pipetas Estas se dividen en T. Para dispensar o de transferencia. 5.D. 3. La lectura del menisco debe hacerse a la temperatura de calibración de la pipeta (2026°C) en posición vertical y frente a los ojos. Repetir este procedimiento 21 veces. dispensadores mecánicos o eléctricos para evitar la contaminación con material biológico o vapores tóxicos. Pesar un recipiente de vidrio de boca angosta.5 Recomendaciones para el uso correcto de las pipetas Seleccionar la pipeta que más se acerque al volumen que se va a medir. dispensar cuidadosamente el volumen de agua destilada en el recipiente previamente pesado y anotar la lectura. 5. Utilizar bombas de caucho. Cualquier error al medir o dispensar podría causar variaciones importantes. Dentro de este tipo de pipetas se encuentran las serológicas (graduadas hasta la punta).3. Existen otras convenciones en las pipetas como: Las pipetas que tienen dos anillos esmerilados. Calibración de pipetas Pipetas de vidrio 1. Dispensar libremente el líquido de la pipeta en posición vertical. la última gota cae al tocar las paredes del recipiente. y T. cerca de su extremo de succión. en una balanza de precisión digital o analítica y determinar su peso mínimo dos cifras decimales. evitando absorber el líquido por la parte inferior.C. 2.

(Dharan M. pipetas. 5. 6. a una concentración del 2 al 5 % .Control de Calidad en los Laboratorios Clínicos. Leer cuidadosamente las instrucciones del fabricante (inserto). durante 2 horas. descartar adecuadamente los residuos biológicos (esterilizar e incinerar) y colocarlo en un recipiente que contenga agua con hipoclorito de sodio 1. 4.4. Observar que el conducto de salida de aire de la pipeta este limpio. Observar que las puntas no estén rotas. Inmediatamente después de usar el material: tubos. Determinar la densidad del agua según la temperatura observada 7. 3. 5. El procedimiento de calibración se realiza de igual manera que para las pipetas de vidrio hasta el numeral d . biodegradable y de pH neutro. Escoger la pipeta que más se ajuste al volumen requerido y utilizar la punta correspondiente. 2. 6. Comparar el volumen hallado con el teórico.000 p. Calcular el volumen del agua según la fórmula: Peso del H2 O Volumen =_________________________________ Densidad del H2 O a la T° observada 8. 5.0% (10 g/L) para una concentración de 10. etc.4 Limpieza del material Es importante que el material de vidrio esté perfectamente limpio. Calcular la diferencia de peso entre cada una de las pesadas (20 datos). Esta solución descontamina el material antes del lavado. Consultar tabla de densidad del agua libre en gramos por cm3 a varías temperaturas. Editorial Reverté). coagulación etc. Tomar la temperatura del agua. Pipetas automáticas 1. ( las g rietas. bordes o superficies ásperas llevan a resultados incorrectos) En las pipetas que tienen dos topes es aconsejable aspirarlos ambos y dispensar uno.m. con el fin de evitar que se quede muestra en la punta o se formen burbujas. para garantizar que las reacciones químicas sean confiables. Calcular la media la DE o el CV%. Todo el material que se usa en el laboratorio debe lavarse por separado: química. Colocar el material desinfectado en detergente líquido. Obtener la media aritmética del peso.m. hematología. Mirar en el inserto los limites permitidos. ..

El resto a 100°C. Usadas: Lavar con detergente líquido al 5% y cepillo suave Enjuagar bien con agua de la llave Lavar con agua destilada Colocar en alcohol isopropílico o etílico al 70% Secar con paño limpio que no suelte motas. Cu. Todo el material calibrado debe secarse a 37°C para evitar su descalibración. El enjuague final de todo el material que se usa en el laboratorio debe hacerse con agua destilada. 5.2.Cualquier residuo de detergente puede causar interferencias. enjuagar varias veces con agua de la llave hasta quitar todo indicio de solución limpiadora. Pb. .4. Material para Hematología Láminas porta objetos Nuevas: Lavar con abundante agua caliente Enjuagar con agua destilada Colocar en alcohol isopropílico o etílico al 70% Secar con paño limpio que no suelte motas. Enjuagar por lo menos 4 veces con agua de la llave. Los elementos d vidrio. etc. Para eliminar los residuos proteicos de las puntas que se reutilizan. Secar Limpieza de las pipetas Después de desinfectar las pipetas. Fe. 5. Material nuevo manchado o grasoso Sumergir en detergente biodegradable de tipo alcalino al 5% durante 24 horas según la grasa presente. Después de lavar como se indicó anteriormente.4. ya que la presencia de sustancias contaminantes puede alterar los resultados. deben ser sometidos a un lavado especial según su e uso posterior. colocar en u solución de ácido nítrico al na 20% durante 12 a 24 horas. Zn.1. Guardar separadamente en una caja. Las pipetas con coágulos se colocarán en una solución de hidróxido de potasio al 10% durante una noche. Material para química clínica Material para determinación de iones (Na. hemólisis y/o alteraciones de los procedimientos. Lavar 3 veces con agua destilada.). Ca. Guardar separadamente en una caja. lavar con ácido clorhídrico al 1% y luego con hidróxido de sodio a la misma concentración. Enjuagar por lo menos 4 veces con agua desionizada. Enjuagar y seguir el lavado de rutina.

Para secar las cubetas evitar altas temperaturas. El mojado imperfecto o la presencia de gotas de agua indican la presencia de grasa. realice la siguiente prueba: Por cada mililitro de agua destilada. Secar.5. Control de limpieza y almacenamiento del material 5. El cambio de color de amarillo a verde o azul es considerado como positivo para residuos de detergente alcalino. Celdas de absorción (cubetas) Las celdas deben permanecer limpias. No deben tocarse las superficies ópticas. Material para pruebas de coagulación El material usado para las pruebas de coagulación debe ser plástico o de vidrio previamente tratado con una solución de silicona al 2 % durante 5 segundos.4. 5.5.1. No colocar las celdas en ácidos concentrados. (Excepto para la retracción del coagulo). Esta solución es fuertemente corrosiva. 5. agregar dos gotas de indicador azul de bromotimol (1mg/mL en etanol al 96%).4. Presencia de grasa Llenar el recipiente a examinar con agua destilada. álcalis u otros que puedan atacar las superficies ópticas. Vaciar y examinar las paredes en busca de una fina película de agua. Si el detergente utilizado es de uso casero. De la misma forma lavar con agua destilada.4. Mezclar en partes iguales Después de 2 horas enjuagar con agua bidestilada. No usar cubetas rayadas.3. . Después de su uso lavar con agua destilada. Para cubetas de cuarzo llenar las cubetas con la siguiente mezcla: Ácido sulfúrico (H2 SO4 ) al 50% y peróxido de Hidrógeno (H2 O2 ) al 10%.Pipetas de Westergreen y tubos de hematocrito de Wintrobe Llenar con solución desinfectante la pipeta o el tubo de Wintrobe. Utilizar aire limpio y seco. 5. porque las manchas de grasa son difíciles de quitar. Lavar con agua de la llave.

Este método tiene varias limitaciones: 1.1. Desionización Es un método de purificación en el cual el agua pasa a través de un a columna portadora de una resina intercambiadora de iones. los patrones de calidad del agua deben ser tan estrictos como los de cualquier reactivo que se emplea en el análisis. Las materias no volátiles como sodio. La purificación implica solo eliminación de materias no volátiles. . 2. Bidestilación Cuando se necesita agua de mayor pureza se destila el agua destilada con solución de permanganato de potasio en un equipo de cuarzo o de estaño macizo. la cual es capaz de eliminar iones cargados positiva o negativamente. 3. calor. por tanto. potasio. Métodos de purificación del agua Los métodos de purificación del agua se pueden clasificar en las siguientes categorías: 6. Debido a que el agua obtenida de la columna está virtualmente libre de iones. En el sistema de desionización el agua se hace más pura porque está recirculando continuamente por las columnas y este flujo continuo evita el crecimiento de bacterias que se presenta en aguas estancadas. 6. dependiendo de la eficiencia de la columna. La solución de permanganato oxida la materia orgánica.1.3. Las impurezas líquidas y los componentes orgánicos con punto de ebullición mayor o igual a 100oC se evaporan y condensan junto con el agua destilada.2. magnesio. Destilación Es el método clásico más utilizado para la purificación del agua.1. puede tener una resistencia específica hasta de 18 megohms. Este proceso incluye Los destiladores más usados son de acero inoxidable o cobre plateado con estaño para evitar la corrosión metálica y contaminación del agua. 6. totalmente libres de trazas de metales. También los hay de vidrio.1.1. vaporización y condensación.CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA GRADO REACTIVO El agua es el elemento más importante empleado en todos los procesos del laboratorio como medio de reacción. 6. carbonatos y sulfatos se quedan en el destilador formando una capa que causa corrosión y deterioro en los destiladores metálicos.

Este proceso tiene varios inconvenientes: 1. Preparación de soluciones estándar. 6.2. Osmosis inversa Consiste en una purificación.22 micras.) ha clasificado el agua grado reactivo en tres tipos. 6. Además. este sistema tiene una bomba de recirculación que recicla el agua purificada por una columna para evitar el estancamiento. en la cual para a través de una membrana semipermeable que atrapa material orgánico e inorgánico. para el análisis de enzimas se recomienda el uso de agua desionizada. 6.5.1. Tipo I espectrofotometría de absorción atómica. 2. No elimina los componentes orgánicos. Soluciones amortiguadoras de referencia. se recomienda solamente como sistema de purificación preliminar para el agua que va a ser desionizada. Ultrafiltración Consiste en una unidad de ósmosis inversa.1. conviene guardarla en frascos de vidrio de borosilicato o en material plástico.A.P.2.4.1. Fotometría de llama. dos unidades de intercambio iónico y una unidad de filtración para eliminar las partículas mayores de 0. ni los microorganismos. las partículas. Debe utilizarse agua que ha pasado por una purificación preliminar. . El recipiente empleado para guardar el agua puede tener efectos sobre la pureza del agua y de los reactivos que con ésta se prepara. una unidad de carbón vegetal. pH y determinación de iones. 6. Enzimología. Las soluciones que se guardan en recipiente de vidrio de sosa se contaminan más fácilmente con iones metálicos. Gases sanguíneos. Cuando se almacena agua durante largo tiempo. El agua desionizada puede usarse en substitución de agua destilada en la mayoría de las operaciones del laboratorio. pero deja pasar hasta un 10% de impurezas. Especificaciones para el agua de grado reactivo El Colegio americano de Patólogos (C.

su calidad se controla semanal y mensualmente según indicaciones dadas al final del capítulo. microbiológicos e inmunológicos. Así. La mayoría de procedimientos cualitativos.2.3. Análisis de orina y parasitología.1. Tipo II La mayoría de pruebas analíticas de laboratorio. por ejemplo. Procedimientos hematológicos. pueden producir importantes efectos sobre los valores enzimáticos. serológicos.2.2.Control de calidad del agua grado reactivo 6.Reconstitución de material liofilizado. 6. Ver cuadro comparativo del agua. y se produce disminución del pH de ésta. Mantener el recipiente bien tapado. Para cada prueba realizada en el laboratorio debe tenerse en cuenta el tipo de agua necesaria para evitar la interferencia con la especificidad. No introducir pipetas en el agua grado reactivo. 6.3. Tipo III Procedimientos histológicos. en sitio fresco alejado de los rayos solares o del calor. lavado de cristalería. precisión y exactitud de los resultados. Cuando se tenga agua en depósito para uso del laboratorio. 6. No usar agua que tenga más de una semana de destilada. . se sabe que los contaminantes metálicos. El agua grado reactivo debe mantenerse en recipientes de vidrio pirex (borosilicato) o plástico (polipropileno) perfectamente limpios. El CO2 presente en el aire se disuelve en el agua expuesta a él. Generalidades Controlar la calidad del agua siempre que se use un nuevo lote o pedido.3.

0 0 .1 .5 .60 1 -5 DE AGUA DESTILADA 6 -7 1 -5 negativo AGUA BIDESTILADA 6 -7 2. Si no se dispone de un conductivímetro.2. La conductividad es inversamente proporcional a la resistividad y ésta medida se hace en el conductivímetro.3. Análisis cualitativo del agua grado reactivo Análisis físico pH: Se mide potenciométricamente o con tiras de papel indicador.0. Análisis químico Resistencia específica: Es la resistencia eléctrica entre los lados opuestos de un centímetro cúbico de agua a 25°C.1 negativo 5 . el pH debe estar entre 6 y 7.1. El agua desionizada se opone al paso de la electricidad.3 negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo 6.Agua de uso en el laboratorio CARACTERISTICAS pH CONDUCTIVIDAD TURBIEDAD (unidades nefelométricas) UTN COLOR (unidades platino cobalto) UPC CLORO RESIDUAL LIBRE (mg/L) HIERRO (mg/L) AGUA GRIFO 6.15 0.0 50 .0 negativo AGUA DESIONIZADA 67 0. La resistividad se mide en meg ohms (106 ohms). la calidad del agua a usar en el laboratorio clínico se puede controlar realizando pruebas cualitativas para identificar la presencia de iones de la siguiente forma: .9. por consiguiente. el grado de resistencia es proporcional al grado de pureza del agua.

2 Control de calidad del agua grado reactivo ANALISIS FÍSICO pH: Medir potenciométricamente o con papel indicador ANALISIS QUÍMICO CANTIDAD AGUA (ml) INTERPRETACIÓN POSITIVA NEGATIVA PRUEBA REACTIVOS SULFATOS CALCIO DUREZA 10 10 10 0. Sulfatos: Determinar con cloruro de bario (BaCl2 ) Reactivos: Solución de BaCl2 .04 ml de permanganato de potasio color en 1 No cambia el 0.Cuadro No. Usar como control positivo agua del acueducto y control negativo agua destilada. 6.44 mg indicador 2 gotas de Ácido Nítrico RA+ 0. Mezclar por inversión. .1 ml solución tampón + 0.1 ml de BaCl2 12 g/dL.1 N Turbidez Turbidez Violeta No turbidez No turbidez Azul CLORUROS 10 Opalescente No opalescente REDUCCIO 100 N DE PERMANGA NATO Cambio de 0. Procedimiento: Medir 10 ml de agua a controlar en un tubo de ensayo. en balón aforado. Interpretación: El agua grado reactivo no debe presentar turbidez.1 ml Nitrato de Plata 0.1N hora color *Las pruebas para el agua grado reactivo deben ser negativas.2 ml de Oxalato de amonio 3. Agregar 0. Preparación: Disolver 12 g exactamente pesados de Cloruro de Bario en agua desionizada y llevar a 100 ml. 12 g/dL.5 g/dL 0.1 ml de Cloruro de bario 12 g/dL 0.

5 g/dL. Procedimiento: Medir 10 ml de agua a controlar en un tubo de ensayo. fundamentalmente. sal disódica (EDTA -Na2) (Titriplex III). El fundamento del método se basa en que los iones forman complejos con el ácido etilendiamino tetracético.1 ml de solución tampón Añadir aproximadamente 0.Calcio: Determinación con oxalato de amonio (NH4 )C 2 O4 H2 O. hay interferencia por iones de metales pesados (Fe+++ y Cu++).5 g exactamente pesados de oxalato de amonio en agua desionizada y llevar a 100 ml en balón aforado.5 g/dL Preparación: Disolver 3. Dureza total: Cuando el agua contiene minerales que reaccionan con el jabón dando grumos insolubles se dice que el agua es dura.2 ml de la solución de oxalato de amonio 3. Reactivos: Indicador negro de eriocromo T: mezcla seca de una sal inerte con el indicador que es estable indefinidamente. La determinación de la dureza se hace por lo general complexométricamente. Mg++. Adicionar 0. Mezclar por inversión Interpretación: El agua grado reactivo no debe presentar turbidez. Reactivos: Solución de oxalato de amonio 3. Fe++. La determinación se hace en presencia del indicador negro eriocromo T. Solución tampón: Disolver 50 g de NH4 Cl en aproximadamente 200 ml de agua desionizada Agregar 350 ml de amoníaco concentrado (25%) Completar exactamente a 1 litro en volumétrico aforado Envasar en frasco de vidrio ámbar Procedimiento: Medir exactamente 10 ml de agua a examinar Agregar 0.44 mg de indicador . La dureza es debida a la presencia de Ca++. el agua debe estar tamponada (pH 9-10).

Inclinar el tubo y observar la turbidez u opalescencia en el fondo y a contra luz Tiempo de reducción del permanganato de potasio KMnO 4 : Esta prueba es usada como indicador del contenido de materia orgánica del agua. Verificar el pH antes de iniciar la titulación. Procedimiento: Medir en un erlenmeyer 100 ml de agua a examinar. . Reactivos Solución de permanganato de potasio 0.1 N.A.1 N.1ml de solución de Nitrato de Plata 0. Preparación: Disolver exactamente 1. Utilizar ampollas comerciales de KMnO4 0. Tapar y mezclar. Agregar 2 gotas de ácido nítrico. NOTA: Todas las reacciones anteriores se deben leer después de 15 minutos. 0.10).1 N. Añadir 0. La dureza del agua produce un color violeta. Procedimiento: Medir 10 ml de agua a probar.699 g de AgNO3 en 100 ml de H2 O desionizada.). la solución se torna color azul. Cloruros: Determinación con el test de Nitrato de Plata (AgNO3 ) Reactivos: Solución de Nitrato de Plata 0.1 N. Este debe ser alcalino y estar entre (9 .04 ml de solución de permanganato 0.Mezclar por inversión Si no hay presencia de promotores de dureza. Mezclar por inversión Resultado: El agua grado reactivo no debe presentar opalescencia. Ácido Nítrico (R.02 M que diluida en un litro dan la normalidad deseada.

pH. Llenar la parte refrigerada con una solución de HCl al 0. Mensualmente: Limpieza general del destilador . Interpretación: El agua grado reactivo no debe cambiar de color. tiempo de reducción del permanganato o realizar las pruebas de calidad anteriormente mencionadas.5% para destiladores metálicos y más concentrado si se trata de destiladores de vidrio. comenzar la destilación y medir el pH hasta obtener un pH neutro. Enjuagar con suficiente agua. Realizar las pruebas de calidad del agua.Dejar en reposo 1 hora. En los laboratorios que dispongan de destilador o desionizador deben llevarse a cabo los siguientes controles al agua con la frecuencia indicada a continuación: Semanalmente: Resistencia específica. .

Absorbancia Este concepto es sinónimo de densidad óptica y de extinción. Tramitancia o porcentaje de transmisión Es la cantidad de energía radiante que transmite o deja pasar una sustancia a una determinada longitud de onda.1.1.INSTRUMENTACION Y CONTROL DE EQUIPOS 7.1. la concentración de una sustancia es directamente proporcional a la cantidad de luz absorbida. la cual se expresa en nanómetros (nm).log % T donde: A = Absorbancia a = Absortividad o coeficiente de absorción. se define como la cantidad de energía radiante que una sustancia absorbe a determinada longitud de onda.c. y actualmente alrededor de una cuarta parte de los análisis en el laboratorio clínico de rutina se realizan por estos procedimientos. equivalente a 109 m.1. El valor real de esta depende de la exactitud de la longitud de onda en que se efectúen las medidas de absorbancia. Generalidades sobre espectrofotometría Los métodos fotométricos se han venido desarrollando en el campo de la química clínica para los análisis cuantitativos. Espectrofotómetros y fotómetros 7. b = Longitud del paso de la luz en centímetros. %T= Porcentaje de tramitancia Gráficamente la ley de Beer se puede ilustrar en la figura 7. = 2 . o inversamente proporcional al logaritmo de la luz transmitida y se expresa matemáticamente así: A = a. c = Concentración de la sustancia a analizar. Ley de Beer La mayoría de las medidas espectrofotométricas se basan en la Ley de Beer. Longitud de Onda La energía radiante viaja en forma de onda y la distancia entre los picos que las forman se denomina longitud de onda.b. .

5 4 3 .5 0 C o n c e n t r a c i ó n R E P R E S E N T A C I O N P A P E L G R A F I C A L E Y D E B E E R S E M I L O G A R I T M I C O 5 4 .5 2 1.5 4 3. 5 3 2 . 5 0 C o n c e n t r a c i ó n R E P R E S E N T A C I O N P A P E L M I L I M E T R A D O 1 G R A F I C A L E Y D E B E E R Tramitancia 0 C o n c e n t r a c i ó n . 5 Tramitancia 2 1 .5 Absorbancia 3 2. 5 1 0 .1 R E P R E S E N T A C I O N G R A F I C A L E Y D E B E E R P A P E L M I L I M E T R A D O 5 4.Figura 7.5 1 0.

3 3. espejos. Equipos modernos dan lecturas confiables en rangos más amplios Ej. el color complementario es el que se observa en la cubeta de medición por ejemplo: el color final de la reacción de glucosa es púrpura (color complementario).1.560 nm Cuadro No 7.1 . lentes. el color del filtro que debe escogerse es el verde y el rango al cual debe leerse está entre 500 . SELECCION DE LA LONGITUD DE ONDA nm 350-430 400-450 450-480 480-490 490-500 500-560 560-590 590-625 625-750 COLOR FILTRO Violeta Violeta Azul Azul verdoso Verde azuloso Verde Amarillo Naranja Rojo COLOR COMPLEMENTARIO (cubetas) Amarillo azuloso Amarillo verdoso Amarillo Naranja Rojo Púrpura Azul Azul verdoso Verde azuloso . debe escogerse el filtro de máxima absorción para la sustancia que se está midiendo. o fisuras.0 de absorbancia y entre 80 . parásita o espúrea Se refiere a aquella energía radiante procedente de la luz de la habitación o a la luz no deseable procedente del instrumento. debida a ralladuras en las superficies ópticas de prismas. Zona óptima de lectura Es la región en la cual la lectura ( en porcentaje de Tramitancia o Absorbancia ) del equipo es confiable.20 % de tramitancia.Linealidad Es la capacidad del instrumento para registrar una señal proporcional a la intensidad de la luz.1. Selección de la Longitud de Onda Para seleccionar una longitud de onda en el espectro visible entre 400 y 700 nm. -0. Luz Extraña. Generalmente se encuentra entre 0. Cada rango corresponde a un color de filtro.0 de absorbancia.

Si una solución absorbe luz.700 nm). Para la selección de longitud de onda se utilizan rejillas de difracción o prismas. 7. Espectrofotometría Es la medición de la intensidad de la energía radiante en un estrecho intervalo de longitud de onda del espectro.1. (200 . (700 . entre 400 y 450 nm (violeta) tendrá un color amarillo verdoso.V. por lo tanto el amarillo verdoso es el complementario del violeta. Las primeras y últimas radiaciones no pueden ser registradas por el ojo humano pero s on detectadas mediante fotodetectores apropiados. La frecuencia comprendida entre los 200 y 2000 nm es la más importante en fotometría de absorción y de acuerdo a esta longitud de onda puede dividirse en: Zona de radiación visible (380 .380 nm).2.2.000 nm).2 Espectro de luz .R. Espectro de energía radiante La energía radiante se caracteriza por su longitud de onda. Zona de radiación ultravioleta U. 7. Figura. Zona de radiación infrarroja I.Colores Complementarios 400 Violeta Rojo 625 Naranja Amarillo Verde Azul 475 540 .

es la lámpara de tungsteno. así como la de yoduro de cuarzo. Figura No. pero una pequeña área superficial. . Extenso rango espectral. B Hendidura de entrada. Las lámparas de deuterio. Salida estable. Fuente de Luz De ésta depende en gran parte la calidad de la medición fotométrica. C Selector de la longitud de onda ( prismas o rejillas y filtros). E Cubeta y porta cubetas. F Detector y G pantalla. Las características de una buena fuente de luz incluyen: Alta intensidad. Ausencia de líneas de emisión agudas que dispersen su escala espectral. D Hendidura de salida. hidrógeno y de vapores de mercurio irradian alta energía en la región ultravioleta.1.3 se muestra esquemáticamente los componentes básicos de todos los fotómetros y espectrofotómetros. cuya mayor intensidad se obtiene en la región cercana al infrarrojo.3. La lámpara de tungsteno halógeno tiene su actividad en las regiones visible y ultravioleta.3.7. 7. favoreciendo el cumplimiento de la ley Beer. Fotometría Es el procedimiento por el cual se efectúan mediciones de energía radiante utilizando filtros para aislar parte del espectro. La misión de la fuente de energía es proporcionar energía radiante en forma de luz visible o no visible. Componentes de Fotómetros y Espectrofotómetros En la figura 7. La hendidura regula también el ancho de banda del monocromador.3 C O M P O N E N T E S D E U N F O T O M E T R O ? ? ?? ? ? ? ?? A B C D E F G 7. Larga duración a precio razonable. La más sencilla de las fuentes luminosas. Hendidura de entrada Su función es reducir al máximo la luz difusa (luz extraña) y evitar que la luz dispersa penetre en el sistema de filtros monocromáticos.1. A una fuente de energía radiante.

Fig. indica la cantidad variable de luz de otras longitudes de onda que pasan a través de la cubeta que contiene la muestra. que es el rango de longitudes de onda que pasan a través del orificio de salida de la longitud de onda seleccionada. En la región cercana a ultravioleta (340 a 380 nm) en donde las longitudes de onda. Si fuera posible aislar la luz monocromática pura se obtendría una línea vertical. pero en lugar de esto obtenemos una curva que indica que está pasando luz de distinta longitud de onda desde 500 a 600 nm. Una pureza espectral alta sobre una escala extensa. Hendidura de salida De esta depende el ancho medio de banda del equipo. mn. El elemento que dispersa la luz puede ser una rejilla o un prisma.4. Son utilizados en los fotómetros. puede conseguirse mediante filtros o monocromadores. es el intervalo correspondiente a la anchura del triángulo en su altura media y que se indica por la línea m`n` Fig. en las cuales se coloca la muestra para las determinaciones químicas.4) que proyectada perpendicularmente al eje de las abcisas demarca el ancho medio de banda. o sea que el ancho de banda sea mínimo para que la energía radiante se concentre y proporcione su mayor intensidad.Selector de la Longitud de Onda La selección de la longitud de onda o banda espectral requerida. Tomemos como ejemplo una longitud de onda a 550 nm. (7. Pureza de la Longitud de Onda: El ancho de banda espectral expresado en nanómetros. Monocromadores: Son capaces de dar bandas espectrales mucho más estrechas que los filtros y tienen la ventaja adicional de poderse ajustar fácilmente dentro de una amplia zona del espectro. son más cortas que en la región visible. Alto grado de precisión en la selección de la longitud de onda. el ancho de banda. Dentro de éstos podemos enumerar los filtros de cristal y los de interferencia. Si se admite una distribución triangular de la intensidad de la luz de varias longitudes de onda. Filtros: Son fabricados con material que transmite selectivamente la banda espectral deseada absorbiendo todas las demás longitudes de onda. Cubetas Las cubetas son uno de los componentes más importantes del sistema espectrofométrico. es necesario que la energía sea lo más monocromática posible. 7. Las características que debe tener un filtro incluyen: Una absorción mínima de luz cuando ella pasa a través del sistema. . Se utilizan comúnmente en los espectrofotómetros.

para no falsear resultados. Los últimos fotómetros utilizan cubetas más angostas. entre 320-950 nm. con un sistema de corrección para que se cumpla la Ley de Beer. Cubetas redondas: Se pueden utilizar en la región visible para las determinaciones clínicas cuando el rayo luminoso y la posición de la cubeta se encuentran correctamente alineados entre sí. 7. éstas reducen al mínimo los errores ópticos y permiten efectuar mediciones exactas.4. Para que se cumpla la Ley de Beer se debe utilizar siempre cubetas con 1 cm de paso de luz. Aunque estas también pueden usarse en longitudes de onda más altas. preferiblemente cuadradas. El control de temperatura se hace generalmente por el sistema peltier. Facilidad de empleo por menor necesidad de manipulación.Figura No. cuarzo o plástico. Es necesario usar cuarzo sílica. . Cuando se utilizan varias cubetas para hacer mediciones en serie de una misma sustancia. OBTENCION ANCHO MEDIO DE BANDA Absorbancia m’ n’ Longitud de Onda m n Ancho Medio de Banda Pueden ser de vidrio blando. Para determinaciones por debajo de 320 nm. Las ventajas fundamentales de los sistemas de flujo son: Buena reproducibilidad. Cubetas cuadradas o de superficies planas: Sirven para efectuar mediciones en la región visible o cercana al ultravioleta. Los autoanalizadores tienen cubetas con un ancho hasta de 6 mm. Cubetas de flujo continuo: Permiten trabajar satisfactoriamente en longitudes de onda comprendidas entre 320-800 nm. borosilicato. Uso de la misma cubeta para todas las muestras y lectura más rápida. Las cubetas de vidrio pueden utilizarse para mediciones en la región visible. se debe tener en cuenta que estas cubetas den lectura en absorbancia y % tramitancia muy cercana entre si.

Este sistema puede sufrir agotamiento por lo que las lecturas tienden a bajar. Por este motivo es conveniente leer las concentraciones altas al final. Los dos más importantes son: Celda fotoeléctrica y Tubos fotomultiplicadores. La luz se absorbe por medio de un metal fotosensible y emite electrones en proporción a la cantidad de energía radiante recibida. Estos electrones pasan por 10 a 15 etapas en cada una de las cuales se va multiplicando su corriente eléctrica.1. Daños del selector de longitud de onda. 7. La digitación pasa los valores análogos a un código binario que es transformado por los correspondientes mecanismos electrónicos en un valor numérico de varias cifras. Tubos fotomultiplicadores: Son tubos electrónicos capaces de amplificar de forma significativa la intensidad de una corriente eléctrica. 3. Las causas de error en éstas medidas son las siguientes: 1. Forma digital: Con la cual se puede obtener directamente lecturas en unidades de concentración. o sea que después de hacer una medición y desocupar la cubeta pueden quedar residuos adheridos a su superficie y esto puede afectar las mediciones subsecuentes por cambios en su concentración.5 Errores fotométricos Errores fotométricos que se originan en el instrumento Exactitud de las medidas de absorbancia: La exactitud en las medidas de absorbancia es esencial para cualquier medida fotométrica. Es conveniente en estos casos hacer la lectura cada 30 segundos. con un sistema para la elaboración de gráficas de control interno que incluye las reglas de interpretación de Westgard. En la actualidad algunos equipos cuentan con un sistema para la identificación del paciente por código de barras. Niveles excesivos de la luz extraña.Teniendo en cuenta que la cubeta se desocupa por el sistema de vacío. . 2. Celda fotoeléctrica: Al incidir la luz sobre ciertos metales semiconductores fluyen electrones en proporción a la intensidad de luz incidente. se puede presentar el fenómeno de arrastre. Fuente de luz (Lámpara en el punto de agotamiento). Enfoque imperfecto de la fuente de luz a la ranura. Detectores Son los encargados de poner de manifiesto la energía luminosa bajo la forma de señal eléctrica. Pantalla Existen 2 formas de salida de la corriente del fotómetro o espectrofotómetro: Forma análoga: En la cual una aguja indica sobre una escala o panel galvanométrico el % de transmisión y la absorbancia simultáneamente. 4.

incluyendo la cubeta que puede ser de mala calidad. Defectos mecánicos en las escalas métricas de absorbancia o fallas eléctricas en las pantallas digitales. y celdas fotoeléctricas) que no producen una señal electrónica proporcional a la luz incidente. y un cambio en la selección de longitud de onda de 5 a 10 nm. anotaremos los errores que pueden presentarse en cada caso. no está relacionada con la concentración del soluto o solvente. Detectores defectuosos (fotomultiplicadores. En los fotómetros 1. Daño en el montaje de las rejillas de difracción del monocromador produciendo variabilidad en su posición con relación a la hendidura de entrada de la luz. 8. después de un mantenimiento técnico. El uso de microcubetas que reducen el paso de luz a menos de 1 cm. 2. puede ser mecánico en las escalas métricas o electrónica en las pantallas digitales. Falla en el indicador de la longitud de onda. . 3. 7. 6. Defectos en el sistema mecánico que conecta la parte óptica del monocromador con el indicador de la longitud e onda. Este error se minimiza con el uso de soluciones estándar tratadas en condiciones idénticas a la de la muestra. no introduciría un serio error en la lectura final. En los filtros de interferencia se producen variaciones en la longitud de onda si hay algunas desviaciones en el ángulo existente entre la radiación incidente y el filtro. Ancho de banda inadecuado: La región ultravioleta se debe trabajar en instrumentos cuyo ancho de banda sea menor de 8 nm. puede producir un alineamiento incorrecto y provocar una reflexión de la luz incidente en las superficies verticales internas. con reducción de su intensidad la cual. donde el pico de mayor absorbancia es relativamente ancho. en donde el pico de la absorbancia máximo es muy estrecho y cualquier cambio es la longitud de onda puede representar un error muy significativo. En los espectrofotómetros 1. Sustitución de filtros entre sí. Teniendo en cuenta que en la selección de la longitud de onda es diferente en los fotómetros y espectrofotómetros. Este ancho de banda es útil también para realizar técnicas que requieran lectura en la región visible.5. por ejemplo en la mayoría de análisis de rutina en bioquímica. Elementos ópticos sucios o defectuosos. el producto final es una solución coloreada que se lee en la región visible del espectro. 2. No ocurre lo mismo cuando la solución a medir está en la región ultravioleta del espectro. Inexactitud de la longitud de onda: Los requerimientos de exactitud en la escala de longitud de onda varían con la aplicación.

6. Muchas reacciones coloreadas que se miden fotométricamente en el laboratorio de rutina. por lo tanto. de ahí la importancia de tener en cuenta el tiempo y la estabilidad de la reacción. Control de espectrofotómetros y fotómetros. Un error que comúnmente se puede cometer en el laboratorio se basa en no tener en cuenta que a medida que las lecturas de absorbancia se desvían más y más de la zona óptima de lectura. ictérica. Hay varias posibilidades para llevar la reacción a la zona óptima de lectura: Ajustando las concentraciones mediante la variación del volumen de la muestra (dilución o concentración). temperatura ambiente antes de efectuar la lectura. Errores fotométricos que se originan en la muestra Las medidas fotométricas que se efectúan a temperatura ambiente. hemolizada o filtrados mal hechos etc.) Ruido y deriva Ruido es la falta de estabilidad del equipo. Existen en la actualidad varios instrumentos con mecanismos de termostatización. (lipémica. Deriva es la tendencia de las lecturas a ser mas alta o más bajas durante un período de tiempo determinado. Midiendo el problema frente a un patrón en vez de hacerlo solamente frente a un blanco. pueden verse alteradas cuando la temperatura de la cubeta se eleva.1. 7. Las muestras sometidas a altas temperaturas de incubación. se modifican en un intervalo de tiempo relativamente corto.3. debe efectuarse siempre a una temperatura definida. Consideraciones generales: Debido a la sensibilidad de estos equipos deben estar conectados a un estabilizador de voltaje . se van produciendo errores cada vez mayores en las medidas de concentración. puede variar la lectura de la absorbancia. Debe tenerse en cuenta que cualquier desviación de la longitud de onda hacia una zona en la que la absorbancia no sea máxima. con los cuales se obtiene una temperatura estable durante la reacción. deben dejarse llegar a la Se recomienda que toda medida fotométrica ya sea de punto final. la intensidad de color puede incrementarse o decrecer desviando la zona óptima de lectura y desplazando el punto máximo de absorción. cinética dos puntos o cinética. se transforma automáticamente en una disminución de la precisión. La turbidez es producida generalmente por la muestra. después de tener el equipo prendido por largo tiempo.

Este filtro tiene la absorbancia máxima (o el más bajo % de tramitancia) a 585nm. Selección de la longitud de onda Tener en cuenta que todas las medidas espectrofotométricas se basan en la ley de Beer: La exactitud de la longitud de onda depende de la pureza y la calibración de ésta.005. Pareamiento de cubetas.05 N controla el espectro entre las longitudes de onda de 240 a 500 nm.03 mg/dL en hidróxido de potasio (KOH) 0. Luego leer la otra cubeta y anotar la lectura en %T. fusibles y otros accesorios de fácil cambio. Para espectrofotómetros con un ancho de banda espectral de 2 a 8 nm usar un filtro de oxido de holmio. . Si las cubetas están húmedas realizar este procedimiento llenando las cubetas con agua destilada. Encender el equipo el tiempo indicado por la casa comercial o por lo menos 15 minutos antes de proceder con las mediciones fotométricas. Anotar en el cuadro de control la fecha de cambio de lámpara del equipo. Pasar estos dos datos a absorbancia y establecer la diferencia que no debe ser mayor de 0. Los problemas causados por la luz monocromática impura. La exactitud de absorbancia de los espectrofotómetros y fotómetros se puede comprobar con las siguientes soluciones: Dicromato de potasio (K 2 Cr2 O7 ) 3. En espectrofotómetros con pantalla galvanométrica colocar la aguja en la mitad de la escala 50%T.Verificar que los equipos eléctricos tengan la conexión a tierra adecuada. (Ver lectura de referencia control semanal). Mantener siempre repuestos. cuya absorbancia máxima se obtiene a 360 nm. así como las horas de vida de la misma. Además las lecturas a 460 y 550 nm deben encontrarse: la primera en la región ascendente del espectro y la segunda en la descendente. colocar una cubeta como blanco y anotar el 50%T. cuanto más pequeño sea éste. Si no se dispone de los anteriores filtros usar la solución de sulfato de níquel (NiSO4 6H2 O) 20 g/dL en ácido clorhídrico (HCl) al 1% con ésta solución la tramitancia máxima debe alcanzarse a 510 nm. La pureza está relacionada con el ancho de banda espectral. leer contra aire la absorbancia de cada cubeta y observar la diferencia. en 500 nm o un filtro cercano a esta longitud de onda. se pueden solucionar midiendo la absorbancia de un patrón junto con la muestra desconocida o preparando una curva de calibración. La longitud de onda se puede controlar usando un filtro de didimio en un espectrofotómetro que tengan un ancho de banda espectral de 20 nm. mayor es la Absortividad y mejor es el análisis. Para los fotómetros digitales.

Una vez hecha la gráfica. Estabilidad del equipo. La gráfica normal tiene forma de campana. Polvo en los lentes de salida del sistema óptico. Elaborar la gráfica colocando en el eje de las X los filtros y en del de las Y el porcentaje de tramitancia. 7. 2. oscurecida o sucia SOLUCIÓN Limpiar o reemplazar la lámpara y controlar nuevamente la calibración. Pareamiento de cubetas. 6.5% demanda servicio de mantenimiento. Comprobación de la exactitud de absorbancia. (Ver lecturas de referencia bibliográfica control semanal). Control diario 1.7.1. CAUSAS Lámpara vieja. Prueba de linealidad. Limpiar los lentes. . Pareamiento de cubetas. 3. 3. Leer la solución contra el blanco de ácido clorhídrico al 1% en cada uno de los filtros del espectro visible.5 ± 2% 87% T o Mayor 79% ± 2% menos de 2% T Interpretación de los resultados: Las lecturas a 400 y 700 nm permiten detectar luz extraña ( se observa elevación con respecto al eje de la X ). 400 nm: 460 nm: 510 nm: 550 nm: 700 nm: menos de 4% T. Un valor por encima del 3% del valor inicial en cualquiera de las dos longitudes de onda demanda corrección del equipo. Limpieza del pozo de cubeta: Puede hacerse con un escobillón humedecido con agua destilada. 2. el control diario se hará leyendo el filtro que presente la mayor tramitancia. Control de fotómetros 1. 5. cuando se cambie la lámpara o después de realizar mantenimiento técnico. Es necesario que el encargado de supervisar los equipos tenga bien claro este concepto y permanezca alerta a cualquier cambio.Sulfato de cobre (CuSO4 5H2 O) 2 g/dL en ácido sulfúrico (H2 SO4 ) al 1% controla el espectro comprendido entre las longitudes de onda de 400 a 700 nm. Calibración de la longitud de onda. Se recomienda hacer el espectro completo con cada una de las soluciones antes anotadas al iniciar el control de espectrofotómetros y fotómetros. Calibración de la longitud de onda: Esta gráfica se hará al iniciar el control del equipo con la solución de sulfato de níquel (NiSO4 H2 O) g/dL en ácido clorhídrico (HCl) al 1%. Ruido y deriva. Limpieza del pozo de cubeta. 52. Una disminución en las lecturas superior al 1. Tener cuidado de no tocar la parte óptica. 4.

La lectura a 510 nm sirve para detectar los siguientes problemas: CAUSAS Torsión o curvatura del filamento de la lámpara. Apertura de salida dañada en el orificio de las cubetas. SOLUCIÓN Cambiar la lámpara y revisar nuevamente la calibración. Necesita servicio profesional

Las lecturas a 460 nm 550 nm están relacionadas entre sí y permiten detectar los siguientes errores: CAUSAS Las lecturas a 460 y 550 nm cambian en direcciones opuestas . SOLUCION Ajuste la calibración de la longitud de onda con el tornillo para obtener la lectura a 550 nm. La lectura a 460 debe corregirse hasta más o menos 1.5% T de su valor original. Necesita servicio profesional

Cambios en las lecturas pero no en dirección opuesta. Control semanal

4. Comprobación de la exactitud de la absorbancia: Leer la absorbancia de las soluciones de dicromato de potasio (K 2 Cr2 O7 ) 3.03 mg/dL en KOH 0.05 N. frente a un blanco de KOH 0.05 N a las longitudes de onda de 340, 370, 400, 405 y 415nm se deben obtener los siguientes valores de absorbancia: 340 nm: 370 nm: 375 nm: 400 nm: 415 nm: 450 nm: 0.316 ± 0.002 0.987 ± 0.002 0.991 ± 0.002 0.396 ± 0.002 0.144 ± 0.002 0.033 ± 0.002

Leer las absorbancias de la solución de sulfato de cobre (CuSO4 5H 2 O) 2 g/dL en H2 SO4 al 1% frente a blanco de H SO4 al 1% a las longitudes de onda de 600, 650 y 700 nm. La 2 absorbancia será respectivamente: 600 nm: 650 nm: 700 nm: 0.051 ± 0.002 0.155 ± 0.002 0.337 ± 0.002

Anotar las lecturas en la hoja de control de cada fotómetro y compararlas con el espectro inicial. Las lecturas de referencia dadas para cada solución pueden no coincidir exactamente con su equipo por diferencias en le ancho de banda, pero los controles no deben cambiar con respecto al espectro inicial en mas de 1.5 %.

Interpretación: Colocar en la gráfica, los filtros en la ordenada y la absorbancia en la abcisa. Cualquier desviación significativa en los resultados obtenidos requiere revisión. La absorbancia de algunos espectrofotómetros no puede calibrarse. En tales casos, si no se obtiene la absorbancia esperada, es prueba de que el instrumento debe revisarse. La longitud de onda debe calibrarse antes que la absorbancia. Posterior a la elaboración de la gráfica, se leerá una vez a la semana el filtro de mayor absorbancia. Control mensual 1. Pareamiento de cubetas. 2. Limpieza de pozo de cubeta. 3. Calibración de la longitud de onda. 4. Comprobación de la exactitud de la absorbancia. 5. Linealidad 6. Estabilidad del equipo. 5. Linealidad: Este control puede realizarse con las soluciones de comprobación de exactitud de la absorbancia en la siguiente forma: Dicromato de potasio (K2 Cr2 O 7 ) Solución stock, concentración 3.03 mg/dL. Tomar 5 ml de la solución y completar a 10 ml en un volumétrico aforado con KOH 0.05 N; Esta solución equivale a una concentración de 1.51 mg/dL. Tomar 2.5 ml de la solución stock y completar a 10 ml en un volumétrico aforado con KOH 0.05 N; Esta solución equivale a una concentración de 0.75 mg/dL. Leer cada una de las diluciones frente a blanco de KOH 0.05 N a la longitud de onda donde se obtenga mayor absorbancia con la solución concentrada. Hacer la gráfica respectiva. Los 3 puntos deben unirse formando una línea recta. La absorbancia de estas tres soluciones debe estar en la relación 1: 2: 4. Sulfato de cobre (CuSO 4 5H 2 O). Solución stock, concentración 2 g/dL. Tomar 5 ml de la solución stock y completar a 10 ml en volumétrico aforado con H SO4 al 2 1%. Esta solución equivale a una concentración de 1 g/dL. Tomar 2.5 ml de la solución stock y completar a 10 ml en volumétrico aforado con H2 SO4 al 1%. Esta solución equivale a una concentración de 0.5 g/dL. Leer cada una de las soluciones frente a blanco de H2 SO4 al 1% a la longitud de onda donde se obtenga mayor absorbancia con las soluciones stock concentrada. La absorbancia de estas tres soluciones debe estar en la relación 1: 2: 4.

6. Estabilidad del equipo. Ruido y deriva Ruido: Controlar la estabilidad del equipo con dos cubetas, una con H SO4 y otra con la 2 solucione de CuSO4 ya mencionadas. Utilizar el filtro donde se obtiene la mayor absorbancia.

Hacer la lectura de la solución con su respectivo blanco la primera vez, sacar la cubeta que contiene la solución coloreada del pozo de cubeta. A los 15 minutos leer nuevamente la absorbancia sin blanquear. Repetir la lectura a los 30, 45 y 60 minutos. El promedio de variación con respecto a la primera lectura, en una hora no deber ser mayor de 0.005. Deriva: Observar las lecturas obtenidas en la prueba de ruido. La deriva se refiere a una tendencia de las lecturas a aumentar o a disminuir en un período de tiempo. Un equipo puede tener ruido sin deriva, pero no al contrario, ya que la diferencia entre las lecturas debe ser superior a 0.005 en absorbancia. Un instrumento con ruido o deriva no debe usarse para realizar pruebas cinéticas. Si se observa inestabilidad es indispensable leer el blanco cada 3 a 5 muestras. Volumen mínimo de lectura: en el filtro 620 o cercano, coloque en una cubeta 0,1 mL de sulfato de cobre 2g/dL y haga la lectura en absorbancia. Coloque 0,1 mL más de la solución y vuelva a leer. Siga aumentando el volumen hasta que la lectura se estabilice. Utilice en la rutina el mínimo volumen donde no obtuvo variación de la lectura. Preparación de reactivos Para controlar los espectrofotómetros y fotómetros prepare los siguientes reactivos:

Sulfato de níquel (NiSO 4 6H2 O) 20 g/dL en HCl al 1%. Pesar 20 g de NiSO4 6H2 O Disolver en aproximadamente 50 ml de HCl al 1% Completar a 100 ml en un volumétrico aforado, con Cl al 1% Mezclar y almacenar en frasco de vidrio neutro ámbar. La solución es estable por un año a temperatura ambiente. Ácido Clorhídrico (HCl) al 1% Medir 99 ml de agua destilada. Medir 1 ml de HCl R.A. Mezclar y almacenar en frasco de vidrio neutro ámbar.

Sulfato de cobre (CuSO4 . 5H2 O) 2 g/dL en H2 SO4 al 1% Pesar 20 g de CuSO 4 . 5H2 O Disolver en aproximadamente 300 ml de H2 SO4 al 1% Completar a 1 litro en volumétrico aforado en H2 SO4 a 1% Mezclar y almacenar en frasco de vidrio neutro ámbar.

26 g de KOH (PM 56.La solución es estable por 6 meses. NOTA: Todas las soluciones se deben filtrar antes de usarse. Mezclar y almacenar en un frasco de vidrio neutro ámbar.11) Disolver y completar a un litro en volumétrico aforado con agua destilada. Mezclar y almacenar en recipiente plástico. Hidróxido de potasio (KOH) 0. Dicromato de potasio (K 2 Cr2 O7 ) 3.3 g/L Pesar 40 mg de K2 Cr2 O7 previamente desecado durante toda la noche a enfriado a temperatura ambiente en desecador. Disolver en aproximadamente 300 ml de KOH 0.05 N Mezclar bien y almacenar en recipiente plástico.05 N = 3. 110°C y .03 mg/dL en KOH 0.05 N Completar a un litro en volumétrico aforado con solución de KOH 0.A. Ácido Sulfúrico (H2 SO4 ) 1% Medir 1 ml de H2 SO4 R. Esta solución es estable por 2 años a temperatura ambiente y protegida de la luz. Medir 99 ml de agua destilada.05 N Pesar 3.

Pesar las sustancias en un vidrio de reloj o en un vaso de precipitado. .Cuadro No. Serie):__________ MES:_________ AÑO:___________ Actividad Dia 1 2 3 4 5 6 7 8 9 # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # FIRMA Limpieza pozo Filtro de Didymium Filtro de Oxido de Holmio NiSO4 400nm NiSO4 460nm NiSO4 510nm NiSO4 550nm NiSO4 700nm K 2 Cr 2 O 7 340nm K 2 Cr 2 O 7 400nm K 2 Cr 2 O 7 405nm CuSO 4 . El brazo debe soltarse suave y lentamente.7. debe disponer de dos tipos de balanzas: Una de precisión con a una reproducibilidad de 5 mg y una analítica de 1 mg o menor. No pesar objetos calientes ya que estos pueden generar corrientes de aire en el interior de la balanza. Colocar la sustancia a pesar cuando la balanza se encuentre en posición de reposo. El sitio para la balanza analítica debe ser fuerte y firme. No exceder el peso máximo permisible por la balanza. Las corrientes de aire dentro de la balanza producen inestabilidad e inexactitud en el pesaje. para evitar colocar sobre el cualquier objeto. Si hay oscilación en la escala que dificulte la lectura. Precauciones para asegurar el uso correcto de la balanza: Observar que la balanza esté limpia. en el centro del platillo. Verificar que la nivelación de la balanza y el cero estén correctos. Los objetos fríos pueden también condensar agua lo cual puede incrementar el peso.2 Hoja de control de espectrofotómetros y fotómetros LABORATORIO:______________ EQUIPO (No. alejada de la luz solar directa. libre de humedad. El mesón se construirá del tamaño de la balanza preferiblemente. ondas magnéticas. Colocar el objeto a pesar.5H 2 O 700 nm Linealidad K 2 Cr 2 O 7 Linealidad CuSO 4 5H 2 O Aceptable Aceptable No Aceptable No Aceptable Control otros equipos 7. cubra el recipiente. corrientes de aire. Se requiere de 15 a 30 segundos. alterando la lectura.2. Colocar la balanza en un lugar fresco.5H 2 O 600nm CuSO 4 . vibraciones. Balanzas analíticas y de precisión El l boratorio químico-clínico. para que la lectura se estabilice. es necesario llamar al técnico.5H 2 O 650nm CuSO 4 . después de cerrar las puertas. Al pesar sustancias corrosivas o líquidos volátiles.

7. Un mantenimiento inadecuado puede producir la ruptura de los tubos con la pérdida a veces irreparable de las muestras. Hay dos factores que influyen en la velocidad de la centrifuga: El motor y la carga.No adicionar sustancias al recipiente cuando el botón de lectura este en libertad. Colocar unas gotas de azul de metileno. pues esto puede causar reducción en la velocidad de la centrífuga. 7. Controlar la nivelación.4 Centrifugas Es uno de los equipos mas utilizados en el laboratorio clínico. Se recomienda colocar sílica gel dentro de la balanza para evitar la proliferación de hongos. por lo tanto requiere especial atención. verificar que la balanza quede en cero. La velocidad del motor varía inversamente con la carga. limpiarlo cuidadosamente y llenarlo con agua destilada. Evitar las vibraciones. con la puerta cerrada y cubierta con una funda plástica. La burbuja de aceite debe estar centrada en el orificio circular. Mantener la balanza limpia. baños serológicos. Precauciones para asegurar un correcto uso de la centrífuga: Mantener la centrífuga limpia. . para inhibir el crecimiento bacteriano. Control diario Limpiar el platillo y la cámara.3. Cambiar el agua cuando se riegue algún líquido. Leer y seguir las instrucciones del manual de fábrica. A menor carga. mayor velocidad. Controlar el cero. La centrífuga debe colocarse en un mesón similar al de la balanza y en un sitio donde no quede conectada en la misma línea eléctrica con los siguientes equipos: neveras. Control mensual Controlar la exactitud con pesas de referencia certificadas por NBS (National Bureau Of Standars). estufas. Ajustar la temperatura si es necesario. Baños serológicos Control diario Controlar diariamente la temperatura del agua y registrarla en un cuadro. Al terminar una operación. Mantener el agua en el nivel adecuado. Control semanal Desocupar el baño.

Cuando se utilizan centrífugas grandes. de lo contrario disminuye la velocidad. Para garantizar el correcto funcionamiento. Los envases metálicos deben tener un tapón de caucho en el fondo para amortiguar la presión. Los dos tubos deben tener igual peso. Serie):__________ MES:_________ AÑO:___________ Actividad Limpieza General Control Revoluciones No. se debe lavar bien el envase y los tapones amortiguadores. Si se rompe una muestra. En caso de que se rompa un tubo. Usar tubos de centrífuga idénticos con el fin de obtener cargas opuestas iguales en masa y que tengan el mismo centro de gravedad. Verificar que el cabezal esté bien apretado. Reemplazar los envases que estén abollados. se deben efectuar periódicamente los siguientes controles: Control diario Limpiar la centrífuga incluyendo los tubos metálicos. porque esto causa suspensión del sedimento y provoca desgaste de las escobillas. Una vez utilizada la centrífuga limpiarla y dejarla destapada. No utilizar tubos en mal estado porque se pueden romper. . Centrifugar los tubos tapados para evitar la producción de aerosoles. de Revoluciones Control de Tiempo Cambio de Escobilas Observaciones: Día 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 FIRMA Evitar el uso del freno a menos que sea absolutamente necesario. Cuadro 7. Cada vez que se centrifugue equilibrar los tubos opuestos.Mantener las escobillas del motor limpias y en buen estado para evitar que se produzcan chispas y se pierda la velocidad.3 HOJA DE MANTENIMIENTO DE CENTRIFUGAS LABORATORIO:______________ EQUIPO (No. el reóstato debe moverse lentamente hasta alcanzar las revoluciones deseadas. La centrifugación debe hacerse con la tapa cerrada. para evitar que algún pedazo de vidrio produzca desequilibrio. no se debe abrir la centrífuga hasta que haya parado completamente.

Mantener el microscopio esté escrupulosamente limpio. Verificar las revoluciones de la centrífuga con un tacómetro electrónico o manual. Microscopio El microscopio es un instrumento delicado. o hidróxido de amonio y sodio que puedan dañar la cubierta. Control de tiempo: Controlar con cronómetro digital graduado en décimas de segundo el tiempo de cada ciclo de la microcentrífuga. acetona. cuando ha sido utilizada un promedio de 10 horas por día es un tiempo aproximado de 1 año. Si las escobillas están desgastadas.000 y 15. Microcentrífugas La inadecuada calibración de las microcentrífugas puede originar resultados erróneos en la prueba. Precauciones para asegurar el buen funcionamiento del microscopio: Colocar el microscopio en un mesón con base firme. Evitar para ésta el uso de tetracloruro de carbono. tolueno. Hacer control de empaquetamiento como se indica en el capitulo 9 Control anual Revisar las escobillas después de 2. Hacer revisar las balineras del motor pues cualquier defecto en ellas produce pérdida de energía.6. Control mensual Control de las revoluciones con un tacómetro. Estas deben estar entre 12. 7. hidrocarburos aromáticos como benceno. . cloroformo. Se deben efectuar los siguientes controles periódicos: Control diario Limpiar la parte interior y exterior de la Microcentrífuga con un paño humedecido en un detergente suave.500 ciclos. Controlar el tiempo del reloj. nivelado y alejado de instrumentos que produzcan vibración. xileno. gasolina. 7. por lo tanto debe manejarse cuidadosamente. Para conservarlo en buenas condiciones y para asegurar resultados confiables en el laboratorio. se deben cambiar siguiendo cuidadosamente las instrucciones del fabricante.5.000 rpm.Control mensual Reemplazar las escobillas cuando sus 3/4 partes estén desgastadas.

utilizar ambas manos. lo cual se logra por medio de un bombillo de 40 batios colocado bajo una rejilla que sostenga el microscopio. retirar la lente más alta y limpiar las lentes inferiores empleando sólo aire Nunca utilizar trapo o papel (esto desprenderá la capa antirreflejante). dentro del tubo del microscopio con el aire de una pera de goma. aunque siempre cerca de un sitio soleado y cubierto con funda de dril negro. Limpieza de oculares: Limpiar la superficie de la lente más alta (en la que se coloca el ojo) con un trapo suave o papel de lentes. si se forman. Nunca se debe guardar el microscopio en su estuche de madera. Se deben efectuar los siguientes controles periódicamente: Control diario Limpieza de los objetivos Objetivos secos: Eliminar las partículas de polvo utilizando la pera de goma o un pincel fino. Se puede colocar el microscopio a la sombra. en las roscas de los tornillos y debajo de las capas de pintura. Limpiar los objetivos y la platina inmediatamente después de su uso con papel para lentes o con un pañuelo de lino suave. Al trasladar el microscopio de sitio. Nunca utilizar xilol o cualquier tipo de solvente. Al emplear el objetivo de inmersión. Limpiar la superficie inferior de la lente más baja. retirar el aceite y a plicar otra gota.Limpiar las superficies de las lentes expuestas al polvo. Objetivo de inmersión en aceite: Quitar el aceite con papel especial para lentes o papel absorbente. posteriormente limpiar con un trapo suave o con papel para lentes. . ya sea en 40 X ó 100 X. Observar inicialmente la preparación con objetivo de 10 para v isualizar la distribución de los elementos en la lámina y escoger el sitio más apropiado para su observación detallada. No olvidar que en climas cálidos y húmedos es común que proliferen hongos en el microscopio. Si hay polvo en el interior del ocular. Esto se puede evitar así: Guardar el microscopio por la noche en un armario metálico templado. una en el pie y otra en el bastidor. Si quedan vestigios de aceite de inmersión viejo humedecer el papel ligeramente con la mezcla etanol-éter en proporción 9:1 y limpiar el lente otra vez con papel seco. especialmente en la superficie de las lentes. evitar que se formen burbujas de aire. El objetivo no debe permanecer en aceite de inmersión sino el tiempo necesario para observar la preparación.

Precauciones para asegurar un correcto uso de los refrigeradores y congeladores: Observar que el refrigerador o congelador esté limpio para evitar la contaminación por microorganismos. etc. . Control mensual Revisar la parte mecánica del carro y lubricar con aceite. alimentos. En ningún caso se debe permitir el almacenamiento de bebidas.7. se aconseja sacar de una vez todos los reactivos que se vayan a utilizar en la mañana o en la tarde. 7. Para evitar las fluctuaciones de temperatura por abrir y cerrar la nevera frecuentemente. Guardar los reactivos de uso frecuente cerca de la puerta. La temperatura de la nevera del banco de sangre debe controlarse constantemente y debe tener un sistema de alarma audiovisual que se dispare cuando las variaciones de temperatura sobrepasen el límite de tolerancia de 1 a 6°C. a menos que los orificios se taponen. los demás en el fondo. con el fin de retardar el crecimiento bacteriano o la descomposición de los reactivos y la reacción entre los diferentes componentes químicos de los mismos. La temperatura de todos los refrigeradores del laboratorio debe anotarse diariamente. Limpiar el espejo con un trapo suave humedecido con la misma mezcla. Control diario Controlar la temperatura de los refrigeradores. Limpieza del bastidor y la platina.No dejar el microscopio sin los oculares. Limpieza del condensador y del espejo Limpiar el condensador de la misma manera que los objetivos con un trapo suave o papel de seda ligeramente humedecido con la mezcla de etanol-éter 9:1. Refrigerador y congelador Los refrigeradores se usan en laboratorio clínico para guardar reactivos y muestras de pacientes de 2 a 8 °C. La platina se puede limpiar completamente usando papel absorbente impregnado de vaselina. Limpiar con un trapo suave que no desprenda pelusa. Nunca deben estar conectados a través de cables de extensión. El refrigerador siempre se debe colocar por lo menos a 13 cm de la pared para que tenga una adecuada circulación con aire y no se recaliente la unidad compresora. Nunca se debe usar xilol ya que puede arrancar la pintura del microscopio.

Control anual Aspirar o retirar el polvo del resorte del condensador en la parte trasera del refrigerador. La temperatura de los refrigeradores debe mantenerse entre 2 °C y 8°C. El registro de la temperatura se debe hacer a la misma hora todos los días de preferencia en la mañana.Colocar un termómetro vertical dentro del refrigerador en un sitio apropiado. el cual. siguiendo de igual manera las instrucciones adjuntas. si el promedio para la semana no fue de 6°C. una vez esté congelado se invierte y cuando se encuentre vacío indica que en algún momento se descongeló. La temperatura de los congeladores más utilizadas en el laboratorio clínico oscila entre -¬20 y -30°C. La temperatura de la nevera de banco de sangre debe controlarse utilizando un termopar. Control trimestral Comprobar el sistema de alarma de la nevera de banco de sangre. este debe tener un control de temperatura que se dispare cuando ésta se encuentre por encima de los -25°C. Pipetas automáticas Control diario Limpiar la pipeta con un paño húmedo.8. procurar mantener a 30°C el congelador del banco de sangre usado para g uardar plasma. Usar termómetro de mercurio para los refrigeradores y alcohol o digitales para los congeladores. al abrirlos por primera vez en el día. 7. Control semanal Limpiar el conducto de salida de aire de la pipeta. se debe ajustar a este nivel de temperatura. calentando y enfriando el termopar y apuntando los resultados adecuadamente. cuando sea necesario. Control semestral Descongelar los refrigeradores. . Control semanal Ajustar la temperatura si es necesario. Como control práctico de estabilidad de la temperatura de congelación se sugiere mantener en el congelador un tubo pequeño con agua hasta la mitad.

002 volt. Observar que los resultados obtenidos se encuentren dentro de los márgenes aceptados por el fabricante.001 a 0. 7. estén limpios.Control mensual Realizar un control de la calibración de la pipeta de acuerdo a las instrucciones descritas en el capítulo 3. 7. Antes de realizar operaciones de rutina calibrar el potenciómetro como sigue: Leer un primer tampón estándar (solución amortiguadora) pH ácido. ajustar el valor si es necesario valor de esta solución. observar en el inserto el volumen al cual se debe efectuar la calibración... Precauciones para el correcto uso de los dispensadores: Control diario Observar que el conducto de aspiración del líquido como el conducto de salida. con una exactitud de por lo menos 0.5 volt. . En el caso de las pipetas de volúmenes graduables. Si no lee adecuadamente se debe ajustar el "Slope". Leer un segundo tampón después de ajustar la lectura con el primero. Dispensadores Son utilizados para medir volúmenes en serie de líquidos en general. Control semanal Se debe comprobar su exactitud semanalmente dispensando el volumen de reactivo en un balón volumétrico de la misma medida. Hundir y soltar el embolo suavemente. al tomar el líquido para asegurar una medida exacta. Pero preferiblemente de 0. o un tubo de centrífuga calibrado.9. Verificar que el electrodo tenga suficiente cantidad de KCl saturado.01 volt. Potenciómetro Recomendaciones para asegurar el buen funcionamiento del potenciómetro: Observar que el electrodo este limpio.10. Seguir las instrucciones de manejo suministradas por el fabricante. Para llevar a cabo valoraciones potenciométricas es necesario un instrumento capaz de medir potenciales comprendidos entre 0 y 1.

en aquellos potenciómetros donde no esté contraindicado. 3. el orificio de llenado del electrodo de referencia debe mantenerse cerrado. Calibración Precauciones para el correcto uso de los termómetros: . La exactitud de los termómetros depende de tres factores: 1. Enjuagar con agua destilada después de cada medida. adecuados para medir temperaturas entre 2°C y . Control mensual Lavar el electrodo con agua tibia. Condiciones de la columna de líquido. 2. Calidad térmica del vidrio. Mantener el electrodo de medida sumergido en agua destilada para prevenir desecamiento cuando sea necesario. Termómetros Los termómetros de mercurio de vidrio son satisfactorios generalmente para el uso en un laboratorio clínico.No retirar el electrodo de la solución mientras esta en posición de lectura para prevenir la polarización de éste. 7. Efectuar los siguientes controles periódicos: Control diario Calibración de pH.11. Cuando el electrodo no este en uso. Control semanal Cambio de la solución interna KCL saturada del electrodo.30 ° C Los criterios para una adecuada selección: El diámetro del capilar no debe ser muy pequeño porque el desplazamiento del líquido dentro de un capilar pequeño puede ser espasmódico.

Cuantificar las horas de trabajo de los accesorios. Usar el termómetro dentro del rango de temperatura para la que fue calibrado. . así un equipo que ha necesitado de muchos servicios técnicos en el año. en posición vertical. control. dejar enfriar lentamente el termómetro si va a ser usado inmediatamente para medir una temperatura baja (esto es necesario para una medición exacta). se les debe abrir una "Hoja de vida”. Control mensual Verificar la temperatura de los termómetros por medio de un termómetro de referencia que fabrica la Oficina Nacional de Standard (NBS). Esto tiene varias ventajas: Seguir el funcionamiento del equipo a través del tiempo. que éste. Leer la temperatura sólo después de que la columna de líquido se haya estabilizado. es indicativo de que éste es de mala calidad o está demasiado viejo y necesita cambiarse o bien. de otra forma. Después de medir altas temperaturas. Planificar con el debido tiempo los suministros y la cantidad de repuestos necesarios. Registro de mantenimiento A todos los equipos que se tengan en el laboratorio. sostener el termómetro por el anillo superior.Usar termómetros en posición vertical. mantenimiento y reparación que se efectúa por parte del representante o técnico de la casa comercial correspondiente. el delicado bulbo soportará el peso de la totalidad del termómetro lo cual no es conveniente. No usar termómetros con columnas de líquido rotas. Mientras se mide la temperatura de un baño u otro aparato. que pueden variar con las condiciones especiales de un laboratorio dado. Permitir que el termómetro vuelva a la temperatura ambiente en la posición vertical antes de guardarlo. Sumergir el bulbo completamente en el baño antes de hacer la lectura. Calcular el costo "real" del equipo. Guardar el termómetro en posición vertical. aunque sea bueno no se adapta para ser utilizado en la rutina diaria por ser muy delicado o exigente para las condiciones del laboratorio clínico de rutina. anotando en su hoja de registro.

4 HOJA DE REGISTRO DE SERVICIO TÉCNICO DE INSTRUMENTOS INSTRUMENTO____________________________ MODELO___________SERIE___________ FECHA COMPRA________________________CIA. PRESTA SERVICIO_________________ LABORATORIO__________________________________________________________________ FECHA FALLA ENCONTRADA MANTENIMIENTO O REPARACIÓN REPUESTOS FIRMA .Cuadro No 7.

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Estadística no paramétrica: Los datos estadísticos no asumen una distribución normal o simétrica. Espécimen: Material disponible para la cuantificación de un analito. Desviación Estándar: Raíz cuadrada de la varianza. Se resumen a continuación los conceptos más importantes: Aleatorio: Al azar. Histogramas: Representación gráfica de datos en la cual la frecuencia de ciertos valores es colocada sobre una escala de todos los valores. en la determinación de los valores de referencia y en la Evaluación Externa de la Calidad (EEC). Igual que serie. recordaremos las bases estadísticas y su aplicación en el programa de Garantía d Calidad. la sustancia que se propone medir.ESTADISTICA APLICABLE EN EL LABORATORIO CLINICO En el Laboratorio Clínico la estadística es esencial si pensamos en la organización y el análisis de datos de los pacientes. La diferencia conserva el signo (+ ó -). específicamente en los e capítulos de control de calidad interno (CCI). se mide por el grado de inexactitud. en las áreas de Química Clínica y Hematología. La exactitud no tiene valor numérico. Corrida: Grupo de pruebas consecutivas que se realizan en un momento. Coeficiente de variación: Es la desviación estándar relativa calculada al multiplicar por 100 la desviación estándar. Inexactitud: Es la diferencia entre la media de un grupo de datos obtenidos por repetición y el valor verdadero. Desvío: Inexactitud. Imprecisión: El coeficiente de variación ó la desviación estándar de los datos obtenidos de mediciones repetidas de una misma muestra. Especificidad: Es la capacidad de un método analítico para determinar única y exclusivamente. . Calibración: Colocar en condiciones óptimas de lectura. de la estandarización de los mismos. de los suministros. de los analitos. Exactitud: El valor hallado coincide con el valor verdadero. de la selección de métodos. Estándar: Solución o material contra el que se compara otro para hallar su concentración. Esta puede expresarse como un porcentaje de desviación con respecto al valor verdadero. En este capítulo. Error: Diferencia entre el valor hallado y el valor verdadero.

las mismas condiciones y por el mismo analista se observará que no es p osible obtener el mismo valor en las 30 determinaciones. Valor asignado: Es obtenido por métodos seleccionados o por métodos que tienen un sesgo desconocido. Distribución normal por frecuencias Al efectuar 30 determinaciones repetidas del mismo espécimen.Media: Promedio aritmético de un grupo de datos. Moda: El valor o intervalo que ocurre con mas frecuencia. Valor: Cantidad detectable de un analito. En este caso hablaremos de datos clasificados. Se expresa en términos de imprecisión. Prueba t: Prueba estadística usada para determinar cuando hay diferencia entre dos medias o entre un valor dado y la media calculada. Esto se debe a muchas causas que se pueden minimizar pero no eliminar. Varianza: Término estadístico que se usa para describir la distribución o la dispersión de datos en una población. Tiene el mismo número de datos menores y mayores. Sesgo: Factor sistemático que introduce inexactitud.1. Sensibilidad: La capacidad de un método analítico para detectar pequeñas cantidades del componente a medir. Mediana: Un valor o intervalo de valores que corresponde a la mitad de los valores de una población. Podemos graficarlos en un histograma según su frecuencia. Precisión: Reproducibilidad entre medidas repetidas de una misma muestra. Valor verdadero: Es el obtenido por un método definitivo. Se hace necesario agruparlos inicialmente en orden creciente para poder observar su comportamiento. Un grupo de datos sin ningún ordenamiento es lo que llamamos datos crudos ya que no podemos visualizar su comportamiento. Muestra: Una parte representativa de un espécimen que se emplea en el análisis. Prueba F: Prueba estadística utilizada para determinar las diferencias entre dos varianzas. A continuación podemos agruparlos en intervalos y contar el número de valores que cae dentro de cada intervalo. utilizando el mismo método. 8. mediana y moda son medidas de tendencia central. Media. Es importante recordar que las investigaciones generan datos y la estadística nos permite interpretarlos y presentarlos adecuadamente. Tendencia central: Valor alrededor del cual una población de datos es centrada. .

104. La dispersión de los resultados en cada caso puede representarse gráficamente.2.104.100.102.102.104. mg/dL 8.102. se observará que los valores individuales se agrupan en torno a la media. 104.104.103.7% +1DE +2DE +3DE Ejemplo de un suero control para colesterol se obtienen los siguientes valores: 103.103.103.102. La media aritmética o promedio ? i x x = n Donde: (media) = 102.102. 104.105.102.102.100.101.83 n (número de datos) = 30 ? i(sumatoria)=3085 . obteniéndose una curva en forma de campana que se denomina curva de distribución normal o Gaussiana.103.103.103.2.101.105.105.103. Figura.103. Medidas de tendencia central 8. 8. CURVA DE DISTRIBUCION NORMAL (GAUSS) F 14 R 12 E C 10 U 8 E N 6 C 4 I 2 A 0 68% 95% -3DE -2DE -1DE x 99.1.Si se calcula la media aritmética de estas determinaciones.103.1. colocando los valores obtenidos frente a su frecuencia.

103.104.104. 8.103.100.104.102.2.103.102.103. 103.101.104.103.102.103.105.Distribución por frecuencias FIG 8.104.103. .102. 105.101.102.102. CURVA DE DISTRIBUCION NORMAL (GAUSS) 12 F R E C U E N C I A 10 8 6 4 2 0 100 101 102 103 104 105 CONCENTRACION mg/dl DISTRIBUCION POR FRECUENCIAS 12 F R E C U E N C I A 10 8 6 4 2 0 100 101 102 103 104 105 CONCENTRACION mg/dl En el eje horizontal (X) se coloca la concentración de colesterol dividida en pequeños rangos convenientes.104.105.103. En el eje vertical (Y) la frecuencia.102.103.2. 2. La mediana Se ordenan los valores en magnitud creciente así: 100.

pero como una se utiliza como punto de referencia sólo tendrá n-1 grado de libertad.Si existen diferencias entre la media aritmética. Se utiliza para menos de 30 datos. cuando se lleva a cabo una serie de análisis en una muestra o cuando la misma muestra es analizada en días diferentes. Matemáticamente es igual a: ? (xn-1 Donde: (x . 8. Desviación estándar ( DS. DE ó s) La desviación estándar (DE) es la medida de la dispersión de las observaciones con respecto al valor medio ( x ). La varianza Es la suma de los cuadrados de las diferencias dividido por el número de observaciones menos uno.3. El número de observaciones es n. Estas son dados por la varianza s2 . Medidas de variación Indicadores de la variación de medidas o la dispersión de la distribución. 8.5 será el promedio entre la 15 y la 16 dividida por 2 o sea m=103. La moda Es el valor que más se repite.3. n .2.1. 8. se deduce que la distribución no es simétrica.5 Esta es la posición en la serie que corresponde a la mediana. x )2 s2 = .3.1 = Un grado de libertad. la desviación estándar (DE) y el rango. debida a errores indeterminados o aleatorios. por lo tanto la posición 15 corresponde al valor 103 y la 16 al mismo valor. En este caso es 103.(n+1) m= 2 30 + 1 En el ejemplo: m= 2 m = 15.x )2 = suma de los cuadrados de las diferencias entre la observación individual y el promedio de observaciones. La desviación estándar describe la variación de los valores de medidas individuales. 8. la moda y la mediana de una población.3.2. La posición 15.

8 1.2 0.2 0.84 0.44 0.8 1.8 0. Cuadro No.2 0.24 0.2 0.04 4.2 1.8 0.2 2.64 0.2 2.8 0.8 0.04 1.64 1.2 2.04 0.64 0.84 0.84 0.04 0.2 0.x 0.04 1.2 1.44 7.04 4.04 0. 8.04 0.64 1.2 0.2 0.84 3.1 Desviación estándar x i mg/dl 103 102 104 100 102 105 101 103 103 102 104 103 102 104 102 103 104 101 103 104 102 102 103 105 103 103 104 100 103 105 x .64 1.2 1.2 0.2 ( x? x ) 0.24 0.2 1.2 0.8 1.? DE= ? s 2 = (x? x) n?1 2 en donde: x = Valor individual ? = Sumatoria n = Número de valores x = Valor promedio 2 ( x ? x ) = Cuadrado de la diferencia entre el valor individual y el valor medio.44 7.8 2.8 0.84 2 .44 0.44 0. 8 0.04 1.2 1.44 3.64 0.8 0.2 2.04 0.64 4.

Coeficiente de variación Es usado para expresar la variación al azar de los métodos analíticos en unidades independientes a la concentración analítica. Si una población está normalmente distribuida se puede describir con facilidad desde el punto de vista estadístico por medio de la media y la DE.26 % caerá dentro de ± 1 DE de la media. el 95. Esto quiere decir. el 68.31 Se denominará sigma ( ? ) a la DE obtenida de los datos directamente. el 95. Se llamará s cuando la media se calcula de una submuestra.44 % dentro de ± 2 DE y el 99. El rango es útil para indicar la dispersión especialmente cuando n es pequeño.31/102.27 Rango Es la diferencia entre los valores mas alto y más bajo de una serie.3.13 8.26 % del área de la curva esta comprendida entre la media y ± 1 DE. Estas se describen capítulo de Control de Calidad interno.8 s2 = 36.3. se puede demostrar que el 68.8.44 % ± 2DE y el 99. el 95. .44 % ± 3DE.126 x = 102. s = 1. que en los análisis repetidos que se hacen sobre una muestra.44 % entre la media y ± 2 DE. uno de 20 datos (5 %) caerán por fuera de 2 ± DE.88/29 =1. y el 99.7 % dentro de ± 3 DE . En otras palabras. Cuando en la curva se dibuja la escala de desviación estándar. %CV ? DE 100 x = 1.? x i =3085 s = 1. Intervalos de confianza Es la porción representativa de los datos en el caso de la curva Gauss el 68.7 % entre la media y ± 3 DE. La confianza en la validez de los datos aumenta a mayor número de datos.26 % ± 1de. tanto en sentido positivo como negativo a partir de la media. Estos son la base de las reglas del Control de Calidad Interno para dar por aceptados o rechazados los datos de una serie.27 n = 30 s ó DE = 1. 100 = 1. Este es independiente de la distribución de los datos. 2 datos de 3 caerán dentro de ± 1 DE y 1 de 400 caerán en mas de ± 3DE.

ESTANDARIZACION DEL METODO PARA DETERMINACION DE UN ANALITO EN QUIMICA SANGUINEA Los métodos para determinación de analitos en química sanguínea están basados en su mayoría en técnicas fotométricas. Es indispensable que todas las pruebas utilizadas en el Laboratorio Clínico sean de comprobada confiabilidad, debido a la gran responsabilidad que tiene éste en el diagnóstico, seguimiento y tratamiento del paciente. 9.1. Generalidades Estandarización es el proceso mediante el cual un método o procedimiento analítico, es calibrado para producir resultados exactos, es decir, que reflejen la concentración real de un analito en una muestra determinada. La finalidad de estandarizar un método es establecer las características y los objetivos de este, diseñar y realizar experimentos o procedimientos que verifiquen en forma objetiva el rendimiento real del método en las condiciones de cada laboratorio, teniendo en cuenta las indicaciones dadas por el fabricante y las necesidades médicas de cada institución. Los métodos definitivo, de referencia, y de rutina forman parte de los aspectos técnicos de la estandarización. El método definitivo es el mas seguro, y sus resultados son los valores "verdaderos"; son despreciables las fuentes de error. Su ejecución es muy costosa. El método de referencia aunque es menos complejo y no tiene sesgo con respecto al método definitivo, no se implementa en la mayoría de los laboratorios. Es empleado por los fabricantes para asignar los valores de sus calibradores que luego son usados en los laboratorios para estandarizar sus propios métodos. Existen clase A, B Y C, clasificación que esta relacionada con su grado de exactitud con respecto al método definitivo. El método de rutina es ampliamente empleado en los laboratorios clínicos para el análisis de las muestras de pacientes. Comparado con el método de referencia no tienen sesgos o inexactitud, aunque tiene menos precisión. Los hay clase A, B Y C cuando su exactitud ha , sido comparada con el método de referencia respectivo. Para hacer la estandarización existen materiales de referencia tales como reactivos puros, estándares y sueros control. 9.2. Errores que afectan los análisis de laboratorio

El análisis de una muestra puede ser afectado por errores producidos durante el desarrollo de los procedimientos, los cuales se deben evitar, detectar, reducir y/o eliminar, como parte del control de calidad.

Los errores se clasifican en dos grupos: 9.2.1. Errores administrativos. Se originan en las operaciones administrativas que pueden suceder desde el momento que se solicita el análisis hasta que el médico recibe los resultados. Los errores más comunes son: Paciente equivocado (en hospitales). La enfermera equivoca el nombre de la placa del paciente, hay dos pacientes con el mismo nombre y se remiten los resultados analíticos de un paciente por el otro, la bacterióloga no identifica correctamente al paciente antes de la toma de muestra. Muestra o espécimen equivocado por: cambio de rótulo del tubo o separación del suero en un tubo no correspondiente, dos muestras con el mismo número. Entrada equivocada por: transcribir datos de diferente muestra, informe de un análisis por otro, cambio de cifras de un análisis informado por el laboratorio. 9.2.2. Errores de la muestra Preparación inadecuada del paciente. Algunas veces ni el médico, ni el profesional del laboratorio instruyen adecuadamente a los pacientes sobre las precauciones que deben tener respecto a dieta, ejercicio u otras variables que alteran los resultados de la prueba de laboratorio. Toma de la muestra. Uso prolongado del torniquete, empleo inadecuado de anticoagulante, etc. Muestra inapropiada. Por hemólisis, ictericia, lipemia e interferencia por drogas entre otras. Tratamiento incorrecto de la muestra. Incluye contaminación, evaporación, falta de homogenización, turbidez. 9.2.3. Errores Analíticos. Se clasifican en: Errores determinados o sistemáticos. Están fundamentalmente relacionados con el método, el personal y los instrumentos. Pueden ser ocasionados por sustancias interferentes, muestra inapropiada, funcionamientos incorrectos de los instrumentos ( longitud de onda, linealidad), mala calibración del instrumento debida al deterioro del estándar, utilizar una curva de calibración no válida para los reactivos e instrumentos empleados, ausencia de blanco de muestra, deficiente calidad de los materiales (vidrio o productos químicos). Errores Indeterminados o aleatorios. Influyen en la reproducibilidad de la medición y se presentan como consecuencia de entrenamiento deficiente, inexperiencia, fatiga del personal del laboratorio, diferencias de observación (aforo, visualización del color o aspecto). Hay factores que contribuyen al error aleatorio tales como: vencimiento de los reactivos y calibradores, inestabilidad del instrumento, variación del tiempo y la temperatura, fluctuaciones de la corriente eléctrica, empleo de material inexacto (pipetas, buretas, pareamiento de cubetas), cambio de marca o lote de reactivos, variabilidad interpersonal respecto a técnicas de manejo como pipeteo, mezcla y control de tiempos, inexactitud de la pesada.

9. consiste en agregar a una muestra la supuesta sustancia interferente cuyo volumen no debe ser mayor al 10% de volumen de la muestra. teniendo en cuenta criterios de tipo práctico y analítico. eficiencia y disponibilidad de servicio técnico especializado. precisión. El procedimiento para evaluar el efecto de sustancias interferentes. DGKC Sociedad Alemana de Química clínica etc. Criterios prácticos o de aplicación: Son diferentes para cada laboratorio y se basan en los requerimientos clínicos y la disponibilidad de recursos. Consiste en dividir una muestra en dos alícuotas: A una alícuota se adiciona una cantidad exacta del analito (el volumen añadido debe ser menor del 10%) y a la otra se agrega una cantidad equivalente del solvente utilizado para disolver el analito. volumen de muestra. exactitud. precisión. toxicidad de l s reactivos. A otra porción de muestra se adiciona una cantidad igual del solvente empleado para diluir el interferente. tiempo de análisis. sensibilidad. nivel de complejidad del servicio. Las determinaciones se hacen por duplicado y la diferencia entre los resultados de ambas muestras es la sustancia interferente. Selección de métodos Los métodos que se van a utilizar en el laboratorio clínico deben ser cuidadosamente seleccionados. Criterios analíticos: Se refieren a los parámetros que proporcionan información sobre la fidelidad del método tales como linealidad. tipo de muestra. En este capítulo se mencionan de manera sencilla los experimentos para verificar la linealidad. Ej. Están relacionados con el número de pacientes. equipos existentes en el laboratorio. Es importante hacer una revisión bibliográfica previa a la selección del estuche de prueba para conocer las limitaciones y las aplicaciones reales del método. También se pueden realizar estudios de recuperación e interferencia. Las muestras se analizan por duplicado. NOTA: Todo método a seleccionar debe tener la certificación de una Institución normadora del país de fabricación. exactitud y el límite de detección de un método en el laboratorio. o costos de los reactivos y equipos. infraestructura física del laboratorio.3. IFCC Federación Internacional de Química Clínica. . La recuperación se expresa en porcentaje y se define como la relación entre la cantidad recuperada y la cantidad agregada. especificidad y estabilidad de los reactivos. personal calificado.Para estimar la magnitud de los errores sistemáticos y aleatorios se realizan experimentos que midan precisión para el primer caso y recuperación e interferencia para el segundo.

Analítica Linealidad La linealidad se emplea para establecer el rango analítico del método.20 °C en alícuotas y en tubos adecuados para evitar la evaporación y el deterioro. Se establece un rango de concentraciones que abarque los límites de linealidad indicados por el fabricante y a partir del estándar y una muestra concentrada se preparan de tres a cinco diluciones de diferentes concentraciones distribuidas uniformemente en todo el intervalo de interés y se analizan por duplicado. Se elabora una curva de calibración con los datos de absorbancia en función de la concentración presente en cada dilución. que vienen con el equipo o el procedimiento descrito en el capítulo de control de fotómetros y espectrofotómetros de este manual.4. pipetas. congeladores. Idealmente la línea debe pasar por cero (origen).4. Se hace con patrones acuosos. 9. Control de calidad del agua Se hará siguiendo las indicaciones del Manual de Garantía de Calidad. La parte recta de la curva corresponde al rango lineal del método. Es importante mezclar muy bien antes de hacer las alícuotas.2. El suero control una vez reconstituido se congela a . Fases para estandarizar un método en el laboratorio 9. celdas de medición. cuando se requiere agua destilada el volumen se mide con balones aforados y pipetas volumétricas.1. Cada vez que se realice la prueba se controlará y anotará la absorbancia del reactivo leído contra agua destilada y la absorbancia del estándar leído contra el blanco de reactivo. micropipetas y demás que intervengan en la conservación y el análisis de la prueba.4.9. La solución de trabajo se reconstituirá según las indicaciones dadas por el fabricante. pero también se recomienda analizar muestras diluidas de suero u orina para obtener información acerca del efecto de la matriz biológica sobre el método. Preanalítica Control de calidad de equipos Seguir las instrucciones que generalmente se incluyen en los manuales del fabricante. Control de calidad de reactivos Los estuches se almacenarán a la temperatura recomendada por la casa comercial y hasta la fecha de caducidad. Además controlar otros equipos. balanza. No hacer dilución seriada. elementos y materiales tales como refrigeradores. Algunas recomendaciones para construir una curva de calibración son: .

nombre del profesional que la elaboró y la lista de estándares en concentración con la absorbancia correspondiente. La identificación de la curva consta de: Nombre del analito. al efectuar. Trazar la curva de calibración que sigue la Ley de Beer en papel milimetrado. Hacer mediciones por duplicado para cada concentración.Realizar las determinaciones empleando estándar y reactivos que garanticen óptimas condiciones. si no cumple con este requisito la curva se gráfica en papel semilogarítmico o se siguen las recomendaciones de la casa comercial. Es importante anotar que cada uno de los estándares utilizados ( puntos de la curva) deben prepararse en forma independiente haciendo la dilución con la mayor exactitud posible a partir del patrón de referencia. En las determinaciones que no siguen la ley de Beer. La curva de calibración se debe renovar cuando se cambie de técnica en el laboratorio.1 CURVA DE CALIBRACION DE GLUCOSA 5 4 ABSORBANCIA 3 2 1 0 100 200 300 400 500 CONCENTRACION mg/dl Precisión La precisión es la expresión de la reproducibilidad del método. Figura No. es necesario obtener mayor número de puntos para poder tener una descripción adecuada de la curva. fecha de realización. equipo de medición. método. cambio de reactivos o cualquier modificación del equipo. En las determinaciones que siguen la Ley de Beer. el otro punto debe estar situado hacia la mitad y el último representa la menor concentración e indica el grado de sensibilidad del método empleado. jamás obtener los puntos experimentales haciendo diluciones seriadas. 9. longitud de onda. Actualmente se puede obtener la gráfica y otro tipo de información al introducir los datos en un programa de computador. la curva de calibración debe tener mínimas tres concentraciones distribuidas de tal manera que un punto represente la máxima concentración que se encuentra en la práctica e indique hasta donde es lineal. Tiene dos componentes: . lote de reactivo.

D) se expresa así: L. El porcentaje de inexactitud se calcula así: VT ? VH X100 VT VT: Valor teórico VH: Valor hallado Se acepta hasta el 10%.D = Xb ± 3DE 9. Postanalítica En esta etapa se procede a elaborar el manual de procedimientos para el método estandarizado. Si no es posible realizar ésta con tres niveles de concentración se puede hacer con dos niveles. a tres niveles de concentración que abarquen el rango del analito de interés (" bajo.4. en las mismas condiciones y en el mismo grupo.3. Para medir este parámetro se analiza veinte veces el estándar internacional o estándar certificado y la media se compara con el valor verdadero. Precisión interensayo o entre corridas Mide la imprecisión de los resultados en análisis repetidos de la misma muestra. Exactitud Indica si el valor obtenido se acerca al valor real. Para este e nsayo se requiere una cantidad suficiente de sueros y además garantizar su preservación para evitar alteraciones de manera que la concentración del analito no varíe durante el período de tiempo que dure el ensayo. Este componente se mide así: Se analizan los mismos tres sueros control durante un mes ( mínimo 20 veces ). en diferentes series o en diferentes días.Precisión intraensayo o dentro de la corrida Es la medida de la imprecisión o variación de los resultados en análisis repetidos de la misma muestra. alto") y se analizan en la misma corrida por lo menos veinte veces. El límite de detección (L. Evaluación del equipo. luego se calcula la media y la desviación estándar. normal. Se realiza midiendo 20 veces el blanco. Limite de detección. Los parámetros a incluir son. Calibración de longitud de onda y exactitud de la absorbancia. Se define como la mínima concentración que puede ser detectada en una muestra. . La variación se reporta en términos de coeficiente de variación (CV%) como en el caso anterior. Este componente se determina como se describe a continuación: Se toman 3 sueros control. La variación se expresa en términos de coeficiente de variación (CV%).

en cuyo caso puede ser aceptable un error analítico del 10%. Intraensayo e interensayo Exactitud Rango lineal Límite de detección Error analítico total: Es la variación que resulta del efecto combinado de los componentes de precisión descritos anteriormente. Se calcula mediante la siguiente ecuación Ea =? 1/2 CV2 intraensayo + CV2 interensayo Generalmente. un buen método es aquel que tiene un error analítico inferior al 5%. aunque esto depende de la complejidad del método. .Evaluación de reactivos. Precisión. Según el propósito cada laboratorio debe decidir el grado de exactitud y precisión aceptables.

.

Programa de garantía de calidad Es el conjunto de actividades planeadas y sistemáticas necesarias para dar resultados precisos y confiables que garanticen el diagnóstico tratamiento y seguimiento adecuados del paciente. el buen mantenimiento de los equipos. los horarios de . personal inexperto. reactivos y equipos de comprobada estabilidad y eficiencia. 10. los laboratorios. el procesamiento de la muestra. Cuando a criterio del usuario el servicio cumple con mas especificaciones esperadas éste se considera de buena calidad. la prueba de proficiencia o la evaluación externa de la calidad EEEC y mejoría continua de la calidad. profesionales bien entrenados. La buena calidad en el laboratorio se puede lograr teniendo manuales de procedimientos estandarizados. estimulados y comprometidos con el sistema de mejoría continua de la calidad y por último estar inscritos en buen programa de control externo. El control sobre este complejo proceso lo reflejan en buena parte el control de calidad interno CCI . la limpieza del material . los fabricantes de reactivos y equipos y principalmente nuestros propios consumidores “los pacientes” ya que tendremos a nuestra disposición productos de mejor calidad. materiales y elementos. personal temporal. las instituciones reglamentadoras y el personal de laboratorio deben establecer una alianza. la correcta selección de métodos.CONTROL DE CALIDAD EN QUIMICA CLINICA La baja calidad de los resultados en los laboratorios clínicos se puede deber a: confusiones. la colección del espécimen. En el área de Química Clínica la calidad se debe asegurar desde la preparación del paciente pasando por la identificación.1. La calidad se debe garantizar en cada una de las fases preanalítica . normas e inspecciones en busca de un verdadero sistema basado en la calidad . un adecuado control de calidad. La calidad "esperada" por el consumidor se puede definir como la aptitud de un producto o SERVICIO para satisfacer las necesidades del usuario. Pérdida de tiempo y dinero. la capacitación del personal . Mas análisis de los necesarios. a bajo costo con resultados de alta confiabilidad. analítica y post-analítica. Retardo en la acción sobre al paciente. En una verdadera “ alianza de calidad” se beneficiaran las instituciones normadoras. Los interesados en la teoría de la calidad: la industria. Si éste no reúne la totalidad de las especificaciones la calidad es mala. reactivos. Estamos en un momento de transición de leyes. sobrecarga de trabajo. Cuando el control de calidad interno en el laboratorio clínico es deficiente se tendrán consecuencias como: Tratamiento equivocado o no tratamiento de una enfermedad. imprecisión . Pérdida de la credibilidad.

Métodos de control de calidad interno en Química Clínica Existen varios sistemas para realizar este control. bovino o porcino e forma líquida o n liofilizada. c) Puede tener defectos de fabricación.trabajo. por lo tanto el uso de computadores en las áreas de química clínica y hematología es prioritario. Se pueden utilizar uno o varios a la vez ya que algunos de éstos son complementarios. 10. el flujo de trabajo la bioseguridad. Suero control y gráficas de Levey-Jennings El material utilizado puede ser suero humano.3. . equino. A continuación los mencionaremos pero se explicarán solamente los mas utilizados: Suero control y gráficas de Levey Jennings. Suma acumulativa ó CUSUM Promedio diario de pacientes normales Correlación de pruebas bioquímicas Datos absurdos o incompatibles. Control de calidad interno Una vez asegurada la calidad de todos los aspectos contemplados anteriormente. Suero liofilizado Ventajas a) Es mas estable Desventajas a) Alto costo b) La matriz se altera c) Mayor margen de error por alícuota de reconstitución d) La calidad del agua utilizada. Doble ciego Confirmación médica.1. La sistematización es esencial para lograr la calidad. se procede a hacer el seguimiento de las condiciones reales de trabajo de cada laboratorio.3. 10.2. y la documentación adecuada de todos los procedimientos. Suero líquido Ventajas a) Bajo costo b) No necesita reconstitución Desventajas a) Interfiere con algunos análisis por efectos del preservativo. 10. que permite ver a diario la confiabilidad de los resultados con base en la precisión o la reproducibilidad. El 95 % de los errores en el laboratorio se presentan al comienzo y al final del proceso analítico.

Acumule los datos respectivos. Para realizar en forma óptima el control de calidad interno es importante usar reactivos de la misma casa comercial y del mismo lote para un año. (Ver capítulo de manejo de reactivos y seguir las normas estandarizadas de procedimientos establecidas en cada laboratorio). El suero control se puede analizar en cualquier momento El uso de métodos estadísticos para controlar la calidad comenzó en el campo de la industria con Sheward en 1931. En la práctica es aconsejable correr un suero normal y dos mas con los niveles de decisión alto y bajo. La variación debe ser mínima si los reactivos son utilizados adecuadamente. En 1981 Westgard propuso las reglas de interpretación de las gráficas cuando se utilizan dos sueros control. Estas son conocidas en la actualidad como gráficas de control de Calidad de Sheward y de Levey -Jennings respectivamente. NOTA: Es importante anotar en una hoja de registro diario la lectura del blanco de reactivo ( leído contra agua destilada) en absorbancia . En 1950 Levey y Jennings introdujeron este sistema en el área de la Química Clínica. Los pasos a seguir para la elaboración de las gráficas de Levey . e) Cuando tenga entre 20 y 30 valores haga el análisis estadístico como se indica a continuación. Evite la formación de espuma. elementos . b) Prepare el reactivo cuidadosamente y reconstituya el suero control en la misma forma. Cuando se cuenta con equipos sistematizados se deben seguir las instrucciones de calibración y hacer controles periódicos de ésta utilizando calibradores vigentes de otro lote preferiblemente y/o estándares analizados como muestras. Para hacer un buen uso del suero control es necesario leer cada vez la absorbancia tanto del reactivo (contra agua destilada) como del estándar (contra blanco de reactivo).Jennings son los siguientes: Recolección de datos a) Asegúrese que sus equipos.así se podrá detectar un cambio importante en el reactivo que pueda afectar los resultados de los pacientes. Es recomendable hacer una curva de calibración con el estándar nuevo y comprobar la vigencia de la curva (y del factor) leyendo otro estándar periódicamente. Gráficas de Levey .Jennings Este es el mejor sistema de control interno ya que se usa material de control que permite detectar errores aleatorios. Mientras reúne los datos utilice el rango de referencia asignado por la casa comercial. . reactivos y todos los procedimientos que anteceden a la fase analítica estén bajo control. d) Procese la alícuota y registre el resultado del suero control en un formato o cuaderno especial y/o en el computador.c) La matriz no se altera b) Estabilidad mas corta. materiales. c) Mezcle suavemente el suero control y sepárelo en alícuotas Congele a -20 °C.

b) Sobre un papel milimetrado o similar.x 101.9 --------------------------------.1 --------------------------------. e) Puede comenzar a colocar el resultado del día de hoy de su suero control del mismo lote. Se recomienda hacer una gráfica para el estándar obteniendo los límites como se explica para el suero control. Recordemos que el suero control refleja el estado de todos los componentes del sistema. lote.+1DE 102. 8.-3DE Cálculo del v alor de cada línea localizada dentro de cada DE . c) Calcule los valores intermedios dividiendo la DE por 5.8 --------------------------------. Procesamiento estadístico a) Calcule la media o promedio ( x ) la desviación estándar (DE) y el coeficiente de variación (CV %) para cada analito. rango asignado ( x ± 2 DE) y CV%.26. valor medio asignado.2 --------------------------------. grafique los valores de la media ( x ). Las gráficas se pueden llevar simultáneamente para detectar si el dato que se encuentra fuera de control es debido al reactivo . x ± 1 DE.5 --------------------------------.31 mg/dL CV. el equipo.27% Figura No. A cada lado de la media deben quedar 15 divisiones de las cuales 5 corresponderán a ± 1 DE. Gráfica de Levey . Ver Gráfica de Control de calidad. ( ver capítulo de estadística ) Media: 102. la longitud de onda.4 -------------------------------. d) Identifique la gráfica con el nombre del analito. DE/5 = 0.-2DE 98. al estándar o al suero control. Informe o retenga los resultados de los pacientes según el dato obtenido teniendo en cuenta las reglas de interpretación de las gráficas. Se encuentran en el comercio calculadoras que realizan los cálculos estadísticos rápidamente o analizadores bioquímicos sistematizados que cumplen esta función.8 mg/dL. x ± 2 DE y x ± 3 DE sobre la carta de control.7 ---------------------------------+3DE 105. equipo utilizando. % : 1.1 ELABORACION DE LA GRAFICA 106. En el mismo ejemplo: . DE: 1.-1DE 100. marca del suero control. 10 a ± 2 DE y 15 a ± 3 DE. Sume o reste este valor para asignar el valor a cada una de las 5 divisiones.La absorbancia diaria del estándar es útil para calcular la media la DE y el coeficiente de variación.Jennings EJEMPLO: Elaboración de la gráfica de control interno para el suero control normal de glucosa.+2DE 104.

x 102. 1. 4.5------------------------------------. ACCIÓN. Renovación de la gráfica de Control de Calidad interno Con los datos obtenidos (30) cada mes se recalcula la media. Esto sucede 1 vez en 20 .104. Rechazar la serie si el valor del suero control cae entre X ± 2DE y X ± 3DE en 2 días consecutivos. Rechazar si hay una diferencia de mas de 2 DE de un día para otro. 7. Si ambos controles se encuentran por fuera de la media ± 2DE se retienen los resultados.9------------------------------------103. ACCIÓN.. 6. Es necesario retener los resultados y revisar equipos y pipetas en especial. 5. Aceptar la serie si por un solo día el resultado del suero control cae entre ± 2DE y ±3DE. pero al día siguiente se retienen si el error no se corrige. se informan los resultados. Si uno de los controles se encuentra dentro de la media ± 2 DE y el otro dentro de la media y el límite entre ± 2DE y 3DE se pueden informar los resultados ese día ALERTA . Se obtiene la media objetiva ( XO ) sumando a la última media la del mes anterior y dividiendo por 2 y la desviación estándar usual (DEU) se calcula de la misma forma.3------------------------------------102.+1DE 103. Con las XO y DEU se elabora la nueva gráfica.1------------------------------------102. ACCIÓN. Los datos deben distribuirse a lado y lado de la media. 3. ACCIÓN. Esto sucede 1 vez en 400. No debe haber aumento o disminución gradual en mas de 5 análisis consecutivos. Rechazar si 5 valores caen a un mismo lado de la media.1------------------------------------.6------------------------------------103. ALERTA.6------------------------------------102. Si además de lo anterior ambos se desplazan en la misma dirección el analista se encuentra ante un error sistemático. ACCIÓN. la DE y el CV % .-1DE Interpretación de las gráficas cuando se usa un suero control.1------------------------------------101. Interpretación de las gráficas cuando se usan dos controles 8. El suero control debe caer el 95% de las veces dentro de los límites de ± 2 DE con respecto a la media. 9.8------------------------------------. 10. Si ambos controles caen dentro del rango de la media ± 2DE.4------------------------------------103.8------------------------------------101. Rechazar la serie si el valor del suero control cae fuera de 3± DE.Al final del año se calculan la XO y la DEU así: x o ? x 1 ? x DE 2 ? n x 3 ? x 4 DEU ? DE 1 ? 2 ? n DE 3 ? DE 4 . 2.

. . Figuras 10.G R A F I C A S D E C O N T R O L D E I N T E R N O D E S P L A Z A M I E N T O + 2 D E + 1 D E X .4 .. .3 D E . . 10. .1 D E . . .2. . . . . . .2 D E . . . . . .2 D E TENDENCIA +2DE +1DE X -1DE . . . .1 D E . . . . . X . . . -2DE D I S P E R S I O N + 3 D E + 2 D E + 1 D E . . . 10. . .3. . . . . . . . . . . . . . . .

10. La diferencia entre la media y el valor diario del suero se anota. Esta permite visualizar de manera mas clara los desvíos o las tendencias que este presentando el suero control. . la interpretación . 10. Este sistema permite detectar de una forma mas clara los errores sistemáticos. Se basa en tomar el promedio como valor de comparación para los datos diarios del suero control. Actualmente los autoanalizadores multipruebas pueden realizar el control de calidad durante todas las etapas del proceso analítico minimizando al máximo los errores. Cada unidad con signo positivo anula una unidad con signo negativo. Cuando no hay diferencia el CUSUM es 0 Se puede llevar en forma de cuadro o de gráfica. La ventaja mas importante de ésta es que elimina las variaciones a corto plazo pero resalta las variaciones persistentes o recurrentes.4 . CUSUM 0 . teniendo en cuenta el signo. CUSUM o Suma Acumulativa: Esta técnica suele acompañar a las gráficas de control interno cuando su interpretación se hace difícil.el seguimiento y la renovación de estas gráficas ya que en nuestro país cerca del 70 % de los laboratorios clínicos utilizan sistemas de medición manuales.2.4 .0 Figura No.Aquí hemos explicado en detalle la construcción.5 Grafica de Cusum . Ej: Un suero control para glucosa contiene ( promedio de 20 valores) x = 103 s = 2. . . -5. 5. .1s .3. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 días 15 Para elaborar el cuadro o la gráfica CUSUM debemos establecer los siguientes límites: k u = límite superior que corresponde a + 1s k l = límite inferior que corresponde a .

3.h u = límite máximo aceptable + 2 s h l = límite mínimo aceptable . Tiene como desventaja que la media diaria puede verse afectada por la población de pacientes anormales que asista en un día determinado. El sistema de control de calidad que utilicemos identifica solamente los desvíos o la variación en la rutina. En los días siguientes el promedio diario debe caer dentro de los límites predeterminados de X ± 2DE. Por lo tanto es importante minimizar las posibilidades de variación y los errores al azar mediante el control de cada paso del proceso de análisis. en un momento determinado.2 s En el ejemplo estos límites son: k u = 105 hu= 4 k l = 101 h l = -4 ( límites de control CUSUM ) Cuadro No. Entre mas grande sea el número de pacientes para el cálculo inicial es mas confiable el método. Media diaria de pacientes Esta técnica se puede utilizar cuando nuestro control de calidad interno es óptimo con cualquiera de los otros métodos.1 Cuadro Cusum x =103 s= 2. Este es especialmente útil para controlar equipos automatizados aunque puede ser utilizado para métodos manuales. . En éste método se obtiene la media de un mínimo de 20 pacientes diarios durante 11 días y se calculan los límites de ±2DE. Esta es el único sistema de c ontrol interno que evalúa la calidad del espécimen. 10.0 ku =105 kl=101 Diferencia +1 0 -2 -3 +2 -1 -3 -2 +1 +2 -1 -2 -3 +4 hu= 4 CUSUM +1 +1 -1 -4 -2 -3 -6 -8 -7 -5 -6 -8 -11 -7 hl= -4 Comentario Observación 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Valor 104 103 101 100 105 102 100 101 104 105 102 101 106 107 Se inicia CUSUM Fuera de control Fuera de control Fuera de control Fuera de control Fuera de control Fuera de control Fuera de control Fuera de Control 10.3.

En técnicas automatizadas es aceptable hasta el 2% y en . Para toda prueba que se realice en el laboratorio el paciente debe recibir el día anterior las instrucciones por escrito sobre su preparación y la hora de llegada. 11. el almacenamiento y las características finales de la muestra. La estandarización del método de sangría minimiza el coeficiente de variación. El control de Calidad interno en esta etapa se puede realizar en general con diferentes métodos.2. normal y anormal alto. Es importante recordar que cualquier variación en l proporción de anticoagulante puede ser causa de error en los a resultados. la hora de llegada de la sangre al laboratorio. la comunicación (que debe preceder a la toma de la muestra) con el paciente. la preparación del extendido y su coloración son definitivos en la correlación de las pruebas por lo tanto en el diagnóstico final. La experiencia del personal es otro factor importante de tener en cuenta ya que además de la toma de la muestra. El uso prolongado del torniquete afecta los recuentos celulares y altera las pruebas de coagulación entre otras. 9. Ver cuadro No. Este control debe hacerse en cada una de las fases del proceso analítico las cuales revisaremos a continuación: 11.1. comparando los valores encontrados con rango asignado. el estado del paciente antes de la punción. por lo tanto se recomienda correrlos diariamente y verificar la linealidad del equipo.2. El control de la precisión se hace con uno de los calibradores o con una muestra al leerlos 11 veces y calcular el coeficiente de variación. Controles de precisión Técnicas de gráficas Técnicas de cálculo Control de correlación 11. el procedimiento utilizado en la recolección de la misma. Controles de precisión Todos los contadores automatizados vienen con calibradores de niveles anormal bajo.CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGIA El control de calidad en Hematología es fundamental en el diagnóstico tratamiento y seguimiento del paciente.1. Fase preanalítica Esta comienza desde la solicitud de la prueba mas indicada para hacer el diagnóstico. Fase analítica A partir de una buena muestra los procedimientos en Hematología se deben realizar dentro de los límites de tiempo que garanticen estabilidad. de una buena mezcla del espécimen.1.

HCM y VCM) calculados a partir de mas de 20 pacientes diarios por 11 días.1 % CV = DE / x . Técnicas de Cálculo En el caso de contadores automatizados. Cuando hay suficiente número de pacientes. 100 Seleccionar una muestra al azar y leerla nuevamente es otra prueba de precisión. Se utilizan los índices eritrocitarios (CMHC. as muestras de pacientes se pueden utilizar en el control de calidad interno. Para iniciar el uso de las gráficas recordemos lo siguiente: Para la determinación de la Hemoglobina el método de referencia es cianometahemoglobina leída a 540 nm.manuales hasta el 5%. Se recomienda hacer la curva de calibración a partir de estándares que viene en distintas presentaciones según la casa comercial.Jennings y CUSUM.2. .3. se pueden utilizar como un sistema de control de precisión de autoanalizadores cuando: Los calibradores del equipo están vencidos. Otro sistema consiste en correr 10 muestras diferentes por duplicado. obtener las diferencias entre los duplicados y calcular la DE que en este caso es la raíz cuadrada de la sumatoria de las diferencias al cuadrado dividido entre 2n. La lectura diaria del reactivo de Drabkin contra agua destilada es 0.2. Los pacientes anormales no se deben incluir en el cálculo estadístico 11. Se utilizan las gráficas de Levey .2. La diferencia que sea superior al límite calculado indica que la lectura de esa muestra se debe repetir porque no es confiable. No olvidar que para calcular la DE en un grupo de menos de 30(n) datos se debe restar un dato así: DE = ? (x . Es importante recordar que cuando el equipo es nuevo o ha sido reparado recientemente. según la región geográfica y el área de influencia.005 indica deterioro del reactivo.x )²/ n . (Ver capítulo de estandarización de técnicas). La curva debe cubrir todo el rango de concentración posible de acuerdo con la población de pacientes que se reciban. Técnicas de Gráficas La determinación de Hemoglobina es una p rueba bioquímica utilizada en hematología. Mas de 20 diarios en laboratorios pequeños y de 40 a 60 en laboratorios grandes. por lo tanto se utilizan para el control de calidad interno los mismos criterios que para química sanguínea.000 Si la extinción es superior a 0. este sistema no es aplicable. (Ver capítulo de Control de calidad en química). Este control se hace periódicamente y se calcula así: DE = ? ? d2 / 2n Los resultados de los índices eritrocitarios de los pacientes. 11. Este es el único método que evalúa la calidad de la muestra. Establecer el límite de +2DE y compararlo con cada una de las 10 diferencias.

el estroma de las plaquetas nítido. Filtrar el colorante de uso diario. Un buen colorante hematológico utilizado con un buffer de pH neutro y un procedimiento estandarizado.4. 11. En esta práctica una extendido de aproximadamente 3cm. Continuar el procedimiento hasta que las dos últimas lecturas sean iguales.5. .7. La media de los días siguientes debe caer dentro de estos límites. con una parte gruesa. una medianamente gruesa donde los glóbulos rojos queden uno al lado del otro y una delgada (cola) es básico. de largo. la membrana de los neutrófilos bien definida. Fórmula leucocitaria: Debe ser realizada por personal idóneo.A estos índices se les calculan la media ± 2DE. Control de calidad de la coloración: Cada nuevo lote de colorante se estandariza teniendo en cuenta la cantidad de colorante utilizado por lámina y el tiempo de acción así como del buffer (pH 6. Leer los hematocritos y colocarlos nuevamente en la microcentrífuga. sin precipitados ni artefactos.7. Escoger el menor tiempo en el que se obtenga el mayor empaquetamiento. 11. una CMHC baja por una hipocromía.8 .2. las granulaciones de los monocitos de color rosado. Si el hematocrito es mas bajo.2. el núcleo de los linfocitos morado intenso. nos permitirá observar los glóbulos rojos de color rosado intenso.6. Correlación Esta es una práctica fundamental que se realiza permanentemente ya que cada prueba realizada es corroborada por otra. Como regla general se debe correlacionar con el extendido todos los hallazgos ya sea por métodos automatizados ó manuales Todos las pruebas deben tener su control de calidad que mencionaremos a continuación: 11. Microhematocrito: La microcentrífuga se controla llenando dos capilares con la misma muestra y centrifugando durante el tiempo establecido en cada laboratorio. centrifugar durante un minuto mas y leer. Se utiliza el mismo sistema en el control de calidad del recuento de reticulocitos se sigue el mismo procedimiento.2). Cuando se trabaja con técnicas manuales solo se utiliza CMHC.2. Centrifugar durante un minuto. En estas condiciones se podrá correlacionar si un VCM aumentado es confirmado por la presencia de macrocitos. una falsa leucocitosis con un recuento aumentado de glóbulos rojos nucleados. Todo laboratorio debe tener láminas de referencia que sean leídas como muestras ciegas para medir el porcentaje de concordancia. Ver capítulo de control de calidad interno. En química. que ponga en práctica el protocolo establecido en el laboratorio para la lectura de los extendidos. Cubrir con laminilla y líquido de montaje las láminas de referencia. 11. leer y comparar con la primera lectura.2.

por lo tanto informar falsos recuentos bajos de plaquetas.3. de Identificación de la muestra . En la fórmula leucocitaria mas de 10 % de estos hacen necesaria una corrección: Recuento de leucocitos corregido = RL/mm3 x 100 / 100 + % EN RL : recuento de leucocitos EN : eritrocitos nucleados 11.Jennings o CUSUM como en química Clínica.2. Los métodos automatizados son los más precisos sin embargo es muy importante tener en cuenta que el anticoagulante EDTA puede inducir agregación plaquetaria. Control de calidad de plaquetas: Es la prueba de hematología que presenta el mayor coeficiente de variación El método de referencia se realiza con oxalato de amonio al 1 % ( guardar a 4°C) y se lee en cámara de Neubauer con m icroscopio de contraste de fases. 11. En el caso de contadores electrónicos el conteo de partículas de la solución debe ser mínimo. Montar muestras al azar permite evaluar la reproducibilidad. Hemoglobina: Se corre un hemolizado diariamente. Recuentos celulares: Se hacen los controles de precisión mencionados en la fase analítica de este capítulo. se reúnen 20 a 30 valores y se realizan los cálculos estadísticos para utilizar las gráficas de Levey .000 ).9. fragmentos de eritrocitos y polvo. En casos de anemia se pueden presentar recuentos elevados de eritrocitos nucleados que son contados como leucocitos.11. La información que se incluye en el formato es la siguiente Nombre de la Institución y/o del laboratorio Nombres y apellidos del paciente.2. Número de cédula Número de Historia No. Este "producto" del laboratorio debe ser revisado con cuidado por e profesional antes de firmar su informe.10. Este hallazgo debe ser confirmado por medio del extendido en donde se considera normal un recuento (en 1000 aumentos) entre 7 y 21 plaquetas ( factor 21.2. Fase postanalítica El resultado de un análisis debe darse oportunamente y en forma clara para que pueda ser útil tanto para el paciente como para el médico.11. Los recuentos se pueden afectar por presencia de crioglobulinas. 11. Velocidad de sedimentación globular: Es importante recordar que este parámetro se puede alterar por la temperatura alta (aumento) por las vibraciones (aumento) y por el desnivel.8.2. 11.

de obtención de la muestra y de entrega del resultado. Leucocitos Rto. De plaquetas Hematocrito Fragilidad osmótica V. T.G. P.S. Cuadro No.1 ANTICOAGULANTES DETERMINACION Hemoglobina Hematocrito V. sería recomendable conversar con los médicos sobre este importante tema para lograr la unificación internacional. 1 a 2 mg/ml Colorante de Romanowsky de sangre Azul de cresil brillante Metabisulfito de Sodio Rees Ecker. las observaciones acerca de la muestra. de Neubauer ó autom. Brecher y Cronkite Capilar Heparina Dacie Westergreen Quick .P. Diferencial Reticulocitos Falciformación Rto. las posibles interferencias.G. Fibrinógeno METODO ANTICOAGULANTE Cianometahemoglobina Capilar y Wintrobe Wintrobe K2 EDTA C.Stanley Citrato de sodio Langdell . Aunque en nuestro país no es corriente utilizar unidades internacionales.S. P.Wagner Clauss . el método utilizado para la determinación y en condiciones ideales se debería hablar con el médico. valor numérico y unidades Intervalo de referencia Firma del responsable Adicionalmente se podría informar el desvío analítico o CV % de la técnica. T. Nombre del análisis solicitado.Edad y fecha de nacimiento Ubicación del paciente Fecha y hora de solicitud del examen. 11.

Aumentan por adrenalina y vincristina. El exceso de anticoagulante encoge células. Hemoglobina 24 h.000/ mm3 48 h. falciformes ni esferocitos. Disminuyen por drogas o por crioaglutininas. 11. Disminuyen por plaquetas gigantes Sangre capilar satelitismo y agregación. 12 h. 48 h.S. contadores automatizados disminuyen por drogas. 12 h.2 ESTABILIDAD DE LAS MUESTRAS PARA PRUEBAS DE HEMATOLOGIA NOMBRE DE LA PRUEBA TEMPERATURA OBSERVACIONES 23°C Hematocrito 6h 4°C 48 h. 48 h Se encuentra aumentada en hipertrigliceridemia . No hay sedimentación en presencia de Cel. Recuento de leucocitos 24 h Recuento de eritrocitos 24 h.Cuadro No. Citrato de Na Westergren EDTA Wintrobe 2h 2h . Recuento de plaquetas 5 h. en recuentos de mas de 25. 24 h.G. 3h V.

Otros objetivos de la EEC son: Conocer los estándares de desempeño o "estado del arte" de cada laboratorio (depende del nivel metodológico alcanzado). Servir como estímulo educativo a los profesionales cuando investigan. Aunque la mayoría d esfuerzos se hacen para reducir la variación en las fases preanalítica. Disminuir la variación interlaboratorios.EVALUACION EXTERNA DE LA CALIDAD El concepto de pruebas de proficiencia interlaboratorios para apoyar la calidad del trabajo intralaboratorio en Química Clínica comenzó con Belck y Sunderman en 1947. errores al azar y dar una visión general del desempeño del laboratorio. El control de calidad interno (CCI) evalúa la precisión en el desempeño de un laboratorio en un momento determinado y aunque los resultados sean buenos es necesario compararse con otros laboratorios. . El CCE debe detectar además de errores sistemáticos. Una vez que el CCI está funcionando correctamente. poco dinero se gasta en la interpretación de las pruebas de proficiencia. El llamado Control de Calidad Externo (CCE) se refiere a algo muy puntual o de momento ya que mide la precisión de un laboratorio en particular. Respaldar el CCI individual. donde se expliquen los detalles de su funcionamiento del mismo incluyendo el sistema de calificación. es necesario inscribirse en un Programa de Evaluación Externa de Calidad. Un programa de Evaluación Externa de Calidad es bueno cuando reúne los siguientes requisitos: Al iniciar la participación cada laboratorio debe recibir el protocolo del programa. en especial cuando lo que se busca es una acreditación. mientras que el término Evaluación Externa de la Calidad (EEC) mide la precisión de un laboratorio en el tiempo y a su vez lo compara con otros laboratorios con base en la desviación con respecto a los demás participantes. porque sus resultados no son correctos. La mayor frecuencia de las distribuciones del material de referencia hace mas útil el programa. Este se realiza mediante el análisis de la misma muestra por varios laboratorios y la comparación de los resultados entre éstos (consenso) y la respuesta correcta (referencia). Facilitar la comparación de cada laboratorio con los demás participantes. e analítica y postanalítica por medio del control de calidad interno. las cuales se usan para determinar la existencia de condiciones de error potencialmente corregibles.

Debe quedar establecida la fecha límite para el retorno de los resultados, así como la de envío de la calificación obtenida. El formato de calificación debe ser conciso y claro. Remitir una calificación consolidada de la evaluación anual. El espécimen debe ser estable, homogéneo, de fácil reconstitución y similar a las muestras de origen humano. La identificación de cada laboratorio debe ser anónima. 12.1. Periodicidad y calificación

Existen varias modalidades de programas de EEC: algunos envían muestras quincenales, otros mensuales, otros bimestrales o trimestrales. Unos envían una sola muestra por distribución, otros dos y otros 5. En Hematología se envían diferentes muestras generalmente dos muestras para cada determinación las cuales se califican con las gráficas de Youden. La calificación en química sanguínea se hace midiendo el grado de desviación del valor informado por el laboratorio con respecto a un valor predeterminado. La calificación se puede realizar: 1. Estableciendo valores de consenso calculando la media de todos los resultados, teniendo en cuenta los métodos respectivos; después de excluir los valores extremos o/y los absurdos, se calcula la media y los intervalos de confianza. 2. Se utiliza el valor obtenido en un laboratorio de referencia o el promedio de varios laboratorios de referencia para la comparación. 3.Otro sistema de calificación es referido al método para el cual es indispensable tener un rango de valores asignados; en este sistema suele haber diferencia entre los métodos. 4. Los histogramas de frecuencia son otro sistema muy práctico para calificar. Estas gráficas generalmente se acompañan de tablas que contienen los datos estadísticos útiles para la comparación de los laboratorios. Lo más importante es que el sistema de calificación particular debe ser claramente explicado a los participantes, así como el sistema de evaluación anual sobre el desempeño. 12.2. Muestras

El material de referencia utilizado en estos programas puede ser suero de origen humano, ovino, porcino, bovino ó equino preparado adecuadamente para que simule un suero humano; estos sueros suelen tener valores asignados. Ocasionalmente se envían estándares ó muestras de pacientes (modelo de München). Es recomendable guardar una alícuota de la o las muestras de cada envío con el fin de repetir las pruebas que obtuvieron calificación insatisfactoria. Si no hay corrección se está

demostrando una desviación a largo plazo. Si se corrige la falla es un error al azar que se presentó en el momento de analizar la primera muestra. Los factores que afectan la calificación en el C C E son: los errores al azar, la demora en el transporte, los efectos de m atriz, los problemas de reconstitución etc. Los cuales pueden alcanzar hasta un 50 % de margen de error. Sin embargo una buena técnica es definitiva. En hematología se utiliza sangre humana o sangre de aves estabilizada o partículas de látex suspendida en un hemolizado para determinar el recuento de leucocitos. . También se distribuyen láminas para recuentos diferenciales, reticulocitos y hemoparásitos. El sistema de calificación en hematología se basa al igual que en Química Clínica en determinar el desvío de acuerdo con unos rangos preestablecidos. Los requerimientos para Hematología son básicamente los mismos de Química. Para los recuentos se establece la concordancia. En hematología las principales causa de error son: la mala calidad del espécimen, la mala mezcla del mismo, problemas de calibración de los equipos, error de cálculo y personal mal entrenado.

En este capítulo recordaremos los principales factores que afectan los valores de referencia y en forma sencilla y práctica como establecerlos en nuestro laboratorio. geográfica. Los niveles de progesterona se encuentran disminuidos en la mujer de la tercera edad si se comparan con los de una joven.INTERVALOS DE REFERENCIA El concepto de intervalos de referencia fue inicialmente propuesto por Dybkaer en 1973 que posteriormente en 1987 fue reemplazado por el comité de expertos sobre la teoría de valores de referencia. La determinación de éstos valores permitirá una interpretación real y confiable de los informes emitidos por el laboratorio. Finalmente en 1992 el comité Nacional para la estandarización de laboratorio Clínico NCCLS retomó el término de Intervalos de referencia.1 Origen endógeno Hormonas: Una mujer en estado de embarazo modifica muchos de sus valores si se compara con una mujer no embarazada. italianos etc. que no pueden ser modificados y los de origen EXOGENO que son modificables. los hábitos alimenticios. En este caso la gonadotropina coriónica. La fosfatasa alcalina de un adolescente se encuentra elevada normalmente. los leucocitos y la velocidad de sedimentación aumentan. Género: Esta diferencia se manifiesta en todas las poblaciones y se puede incluir dentro de las modificaciones de origen hormonal. debe ir acompañado de los valores de referencia anteriormente llamados "normales" para poder ser interpretado. las diferentes costumbres y creencias determinan la diferencia. generalmente alemanes. no así en un hombre adulto sano. . Es una práctica común que los laboratorios utilicen valores de referencia foráneos. El resultado de laboratorio de todo paciente. Los factores que influyen de manera importante pueden ser de origen ENDOGENO o sea propio del individuo. los cuales han sido obtenidos en poblaciones completamente ajenas a la nuestra donde la variabilidad genética. ORIGEN ENDOGENO Hormonas Sexo Raza Edad Factores genéticos ORIGEN EXOGENO Alimentación Posición geográfica Actividad corporal Consumo de drogas Educación Estrés Religión Hábitos 13.

Hábitos: Tales como el alcohol y el consumo de cigarrillo. que es inestable y no se puede determinar con exactitud. Estrés: Se ha demostrado que este es un factor determinante en la actualidad de alteraciones tanto fisiológicas como sicológicas. porque no son iguales los valores de un recién nacido a los de un adulto. que pueden provocar resultados " anormales". Lo mismo sucede con las proteínas. Creencias: Algunas de éstas pueden ocasionar desnutrición o desbalances nutricionales importantes. afectan los análisis de laboratorio.2 Factores exógenos Alimentación: Son diferentes los valores de una persona que consume a diario una dieta balanceada basándose en proteínas.Raza: Recordemos que existen patologías propias de determinadas razas como la anemia de células falciformes propia de la raza negra. que unidas. El valor diagnóstico de un procedimiento de medición es su capacidad de discriminar entre dos o más situaciones clínicas. diferentes a los de una que vive a 2000 metros de altura. enfermedades que se encuentran en el genoma y que se manifiestan con distintos grados de intensidad. mientras que la probabilidad de que la prueba resulte negativa cuando la enfermedad esta ausente depende de la especificidad de la misma. deficiencias enzimáticas. Sensibilidad: La capacidad del procedimiento para indicar una enfermedad cuando existe. pueden ocasionar alteraciones en los valores de referencia. vegetales y vitaminas. a una que únicamente consume carbohidratos. De ahí la importancia de estandarizar la toma de la muestra. 13. Estas características se describen a través del cálculo de probabilidad condicional conocido como teorema de Bayes que se explicará de manera sencilla mas adelante. el uso de Sulfas pueden alterar la determinación de la hemoglobina porque en vez de formarse cianometahemoglobina se forma sulfohemoglobina. La probabilidad de que la prueba resulte positiva cuando la enfermedad está presente depende de la sensibilidad del procedimiento. Se ha demostrado que el colesterol varía de un 8 % aun 10 % con el cambio de posición de sentado a acostado. Factores genéticos: Hay enfermedades subclínicas determinadas genéticamente como diabetes. Consumo de drogas: El uso continuo o esporádico de ciertas drogas pueden alterar por ejemplo el PT y el APTT. si nuestro interés es la determinación de éstos en individuos sanos o en enfermos. Edad: Existen valores de referencia para los distintos grupos de edad. Los métodos seleccionados para establecer los valores de referencia son fundamentales. como enfermedad y salud. es decir. Actividad corporal: Un ejecutivo que permanece sentado mucho tiempo. la hipertensión arterial entre otras. . tiene valores diferentes a los de un deportista profesional. Ubicación geográfica: Los valores de una población que vive a nivel del mar son completamente. la probabilidad de que un individuo afectado por una enfermedad obtenga un resultado positivo (aumentado o disminuido según el caso). Educación: El nivel educativo de la población influye en los hábitos alimenticios e higiénicos y por lo tanto en su salud.

Valor predictivo positivo: Predicción de una enfermedad si la prueba es positiva Valor predictivo de negativo: Predicción de salud si la prueba es negativa. Se deben tener en cuenta los procedimientos de manejo de las muestras y su estabilidad.Determinación de los intervalos de referencia Una vez que se han estandarizado tanto la toma de la muestra (seguir recomendaciones en el capítulo de toma de muestras) como los procedimientos de análisis y el control de calidad interno es bueno. La selección de la población depende del interés de cada laboratorio por ejemplo: alcohólicos. adultos normales entre 15 y 45 años etc. 13. Se deben llenar el formulario No.1 y seguir los manuales de procedimientos al pie de la letra. Entre mas pacientes se incluyan en el estudio más confiables serán los resultados. niños de 5 a 10 años. embarazadas. . la probabilidad de que un individuo que no tiene la enfermedad obtenga un resultado negativo (no aumentado/ no disminuido).1 Teorema de Bayes Enfermedad Presente vp a fn c a+c Ausente b fp d vn b+d Total a+b c+d a+b+c+d Prueba + - a= verdaderas positivas = vp b= falsas positivas = fp c= falsas negativas = fn d= verdaderas negativas= vn Sensibilidad Especificidad valor predictivo positivo valor predictivo negativo Índice de falsos positivos Índice de falsos negativos = S = ( a/a+c)100 = E = ( d/b+d)100 = VPP = (a/a+b)100 = VPN = (d/c+d)100 = IFP = (b/a+b)100 = IFN = (c/c+d)100 13. El número es mínimo 50 e idealmente 200 pacientes. fumadores. se puede seleccionar la población a estudiar.Especificidad: La capacidad del procedimiento de indicar la ausencia de enfermedad cuando ésta no existe.3. Índice de falsos positivos: Porcentaje de pruebas positivas en individuos sanos Índice de falsos negativos: Porcentaje de pruebas negativas en enfermos. esto es. Cuadro No.

La diferencia entre ellos es 5 y el 77 % de 5 es 3. 83. Es necesario contar con 120 pacientes por lo menos. 233 ng/dl r = 0.3. Determinar el rango de referencia por el método no paramétrico. 2.5 aplicando la siguiente fórmula: r = 0.8 = 76. 225. El tercer y el cuarto valor del final de la serie(97. La diferencia entre ellos es 2 y el 77 % de 2 es 1. Se eliminan los valores extremos y los absurdos. Método Paramétrico 1. 86.1. el método PARAMETRICO.025 (150 + 1) = 3. 78. se analiza la distribución por frecuencias de estos. por lo tanto el límite mas bajo del intervalo de referencia es 73 + 3. 224. 221. 13. 13.8.5 y 97. Se observa que no haya ningún valor fuera de las 4 DE y se establece el rango de referencia que se encontrará entre .3. 73. 85.5%) está entre 288 y 226. el cual es el 77 % de la diferencia entre el tercero y el cuarto valor.2. se eliminan los percentiles 2. 84.2 DE y +2 DE NOTA : Se analizan todos los datos en conjunto y separados por sexo para ver si hay una diferencia significativa.Una vez obtenidos los datos.5 % es el tercer valor (3).8 ng/dL. 65. 3.77 El percentil 2. Al iniciar la serie el tercer valor es 73 y el cuarto es 78. . Se calcula la media ± 4 DE.1. 231. 87 220.5 por lo tanto el límite superior del intervalo es 228 . Si la distribución de los datos no es normal se utiliza el método NO PARAMETRICO. Si la distribución es normal (distribución Gaussiana). en este caso se aplica para el análisis estadístico.025 ( n + 1 ) Donde: r= percentil n = número de datos Ejemplo: Se han analizado 150 muestras de individuos sanos para determinar triyodotironina (T3) por radioinmunoanálisis.5ng/dl. En este caso se ordenan los valores de menor a mayor. 223. Si la hay se continúa el procesamiento por separado. Se obtiene la media y la DE. Método no Paramétrico La utilidad de este método es independiente de la distribución de los valores encontrados.5 = 226. 222. 68.

Sin embargo pueden ser “normales” para el individuo. Esta consiste en Calcular el 2. Vale la pena recordar que entre más sensible y específico sea el método más pequeña será la zona de incertidumbre. Si la segunda vez nos dan valores diferentes. Al descartar los 3 valores más bajos y los 3 mas altos el rango queda de 78 a 226.75. Niveles de decisión clínica: Este término se refiere al valor que se encuentra en el límite entre lo normal y lo anormal. si tenemos en cuenta la variabilidad biológica de paciente.3. en otras palabras el valor que indica la necesidad de intervención Médica.5 % de 150 muestras es 3. descontar el número de datos correspondientes al entero tanto en el límite superior como en el inferior. que no es muy diferente del primer cálculo.5 % de cada extremo de la serie. El médico debe ser cauto en el diagnóstico de ciertas enfermedades y el laboratorio debe estar preparado para afrontar esta posibilidad.3. . Generalmente aparecen en los límites altos de la normalidad. establecerían la zona de incertidumbre. nivel de decisión 1 ó ND1 y los valores bajos de una anormalidad ND2. es conveniente repetir las determinaciones de los valores extremos. Ej. En el ejemplo anterior el 2. Con el objeto de eliminar los errores sistemáticos causados por problemas técnicos. 13.Existe otra forma sencilla que aunque no es tan exacta como la anterior también puede ser utilizada. Valores de referencia del mismo individuo En algunos casos los resultados de un paciente resultan anormales con los intervalos de referencia de una población. En cuanto a los niveles de decisión es importante que cada laboratorio y de común acuerdo con el personal médico se establezcan ó adopten los valores que consideren críticos. El rango de valores que se encuentra dentro de estos límites es la zona de incertidumbre ZI. el entero es 3. es necesario eliminar estos valores. : un valor de glucosa de 110 mg/dL y otro de 140 mg/dL determinados con el mismo método.

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Deben existir instalaciones para manejar y almacenar en condiciones de seguridad solventes.: Sustancias inflamables. gafas.1 Características de un laboratorio básico Al diseñar un laboratorio se deben tener en cuenta características que requieren especial atención tales como: Espacio amplio. los objetivos principales de este capítulo son proporcionar información general sobre las normas básicas de bioseguridad y sugerir parámetros generales para establecer un programa. Los techos. tóxicas. Deben existir lavamanos con agua corriente preferiblemente cerca de la salida de cada área de trabajo. Prevención ej: Uso de guantes. las paredes. como de aquellas que estén expuestas indirectamente. disolventes orgánicos y el calor moderado. fáciles d e lavar. Contar con Duchas y sistema de lavado de ojos. Bioseguridad es un conjunto de normas y procedimientos que contribuyen a reducir los riesgos y asegurar el bienestar.BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO El trabajo del laboratorio implica además de calidad y responsabilidad. materiales radiactivos y gases comprimidos. 14. . Salvamento Ej. tanto de las personas que trabajan en el laboratorio. impermeables a los líquidos y resistentes a la acción de desinfectantes. Suministro de agua de buena calidad. Sala y equipo de primeros auxilios. iluminado y con buena ventilación. muchos riesgos para el personal que labora en él. El piso debe ser antideslizante. agua no potable. por esta razón.: Puesto de socorro. salida de emergencia. Señalización visible y clara indicando zonas de: Libre acceso Prohibición ej: No fumar. Disponer de sistemas de seguridad contra incendios y accidentes eléctricos. los pisos y las superficies de las mesas deben ser lisos. Autoclave u otro aparato adecuado para descontaminar material infeccioso de desecho. ácidos. Almacén y depósito adecuado para guardar productos de uso inmediato Las puertas de cierre automático y con mirillas. Advertencia Ej. álcalis. Los vestieres y cafetería independientes y fuera del área de trabajo.

Proporcionar al personal del laboratorio manuales con instrucciones claras y precisas acerca de los riesgos y como evitarlos. no soplar la última gota de la pipeta. Los riesgos de formación de aerosoles se disminuyen cuando se utilizan las buenas prácticas de laboratorio. El director del laboratorio debe designar la zona "limpia" (ejemplo secretaría) o/y "contaminada" (ejemplo sección de hematología). No se permitirá la entrada de animales. u niformes) u otras prendas deben llevarse al sitio especial de lavado. animales y sustancias infecciosas. decantar adecuadamente. centrifugar las muestras tapadas. así como antes de salir del laboratorio. al menos una vez al día y cuando se viertan sustancias potencialmente peligrosas. En el laboratorio no se permitirá comer. guardar alimentos. viseras u otros dispositivos especiales. fumar. Mantener el laboratorio limpio y ordenado. Todos los sólidos o líquidos contaminados. La ropa del laboratorio (batas. Proteger los ojos y la cara de salpicaduras. Normas básicas de funcionamiento El paso a la zona de trabajo del laboratorio. Descontaminar el área de trabajo con hipoclorito de sodio al 0. etc. utilizando gafas de protección. No pipetear con la boca. . tales como: usar frascos o tubos tapados. Periódicamente se harán controles para identificar una posible contaminación.1%. Toda persona que ingrese a trabajar en un laboratorio debe someterse a una evaluación médica y de laboratorio con el fin de determinar su estado de salud. beber. con hipoclorito de sodio al 1% u otro desinfectante. Llevar un registro de cada caso para la evaluación. Evitar formación de aerosoles. que no tengan relación con el laboratorio. tóxico. otros líquidos corporales y material infeccioso. Lavarse las manos después de manipular muestras de sangre. vigilancia y tratamiento médico apropiado. se descontaminarán antes de eliminarlos o de reutilizarlos. radiactivo. estará restringido a todas las personas ajenas a éste. Utilice un destructor de agujas o colóquelas en un recipiente resistente.2. Evite colocar las agujas en su funda plástica. ni aplicarse cosméticos. Usar dispositivos de aspiración mecánica.14. Utilizar guantes para manipular sangre. Notificar inmediatamente al director todos los accidentes y exposiciones a material infeccioso. Desinfectar las prendas contaminadas.

guantes apropiados. limpieza y Descontaminación. y la tercera es para el archivo del laboratorio. Este material ( sustancia infecciosa. tapabocas. Manipulación. La selección de un método específico para tales procesos depende de su eficacia. Material de bioseguridad Representa una barrera primaria. La elección del material de bioseguridad depende del tipo de trabajo que se realice en el laboratorio. La información necesaria referente al material se elabora por triplicado y se procede así: Una copia se adhiere por fuera al recipiente secundario. Fácil manejo. muestras de diagnóstico) debe ir muy bien rotulado.3. dispositivos de pipeteo. podría estar constituido por bata. gafas. si es sustancia infecciosa. Recipiente secundario resistente (metálico). es decir. gorro. gafas-careta. disponibilidad comercial y de las necesidades particulares del laboratorio. Además el transporte extiende el ámbito de riesgo al público. cuando puede reducir al mínimo el riesgo de infección. pueda identificar y manipular el material en condiciones de seguridad. El paquete que contiene sustancias infecciosas o muestras de diagnóstico debe empacarse así: Recipiente primario impermeable o plástico para colocar la muestra. muestra de diagnóstico o producto biológico. sin embargo. costo. 14. El envío se efectúa de acuerdo a la clase de material.5. la segunda se envía por correo al laboratorio receptor. Descontaminación y eliminación de desechos La desinfección y la esterilización son la primera fase de la eliminación. transporte y envío de muestras El manejo de las muestras implica riesgo para el personal del laboratorio y administrativo. Sin rupturas ni bordes cortantes. Cerrar herméticamente. esterilización mediante calor seco (horno).4. Los métodos recomendados son: Esterilización mediante calor húmedo (vapor o autoclave). Material absorbente para envolver el recipiente de la muestra y prevenir fugas accidentales. desinfección por ebullición. 14. bata-delantal. Resistente a la corrosión e impermeable a líquidos. de tal manera que. etc. El material que ofrece garantía de seguridad reúne los siguientes requisitos: Diseño que limita el contacto entre el operador y el agente infeccioso. cámaras de seguridad.14. Envoltura exterior para proteger la integridad del material a transportar. autoclave. desinfección con . frascos y tubos con tapa. campana extractora de gases.

Se recomienda preparar las soluciones de hipoclorito a las siguientes concentraciones de cloro libre: Desinfección general (1 g/L = 1000 p. porque se degrada con facilidad. yodóforos.m. 1% u otras.productos químicos (hipoclorito de sodio. Salpicaduras de sangre (10 g/L = 10000 p. El hipoclorito de sodio con diferentes concentraciones de cloro libre. lancetas.1%. glutaraldehído.5%. es un desinfectante efectivo y activo contra los microorganismos. utilizando la fórmula V1 C1 = V2 C2 Ejemplo: A partir de un blanqueador de uso doméstico de concentración 5%.) y radiación. Clorox) son soluciones de hipoclorito de sodio que suelen tener una concentración de 5%. El material de desecho puede clasificarse e identificarse de la siguiente manera: 14. Estos se pueden utilizar para preparar las diluciones de 0. Superficies (5 g/L = 5000 p. = 0.m.m.5.5. formaldehído. .1%).1% V1 = ? V2 = 1000 ml 14.2. Material contaminado para eliminación Los elementos cortopunzantes tales como agujas hipodérmicas. C1 = 5% C2 = 0. Los blanqueadores de uso doméstico (Decol.1%.1% = 20 ml 5% Se requieren 20 ml de hipoclorito concentrado (5%) para preparar un volumen de 1000 ml de hipoclorito al 0. Concentración conocida Concentración deseada Volumen a medir Volumen total a preparar V1 C1 = V2 C2 V1 = 1000 x 0.m. Desechos no contaminados Se colocan en bolsas de color negro y se eliminan en la basura corriente.1%. = 1%).m. 0. jeringas. se depositan en recipientes resistentes a las punciones y con desinfectante.5%). = 0. El hipoclorito es corrosivo para los metales. Es necesario preparar la dilución antes de su uso. etc.1. alcohol etílico.m. bisturís. Cuando estén llenos se tapan y son colocados en bolsas de color anaranjado para desechos contaminados y le llevan al incinerador. compuestos fenólicos. preparar 1000 ml de hipoclorito de sodio al 0.

Sustancias tóxicas (T). Pueden ocasionar intoxicaciones graves e incluso la muerte según la concentración. tiempo y eficacia de las mismas. aislar las sustancias de fuentes de ignición. Luego se colocan en bolsas anaranjadas y se trasladan hasta el incinerador. Como medida de seguridad. los sólidos. Material contaminado reutilizable Se deposita en recipientes impermeables poco profundos que contengan una cantidad de desinfectante suficiente para cubrir el contenido y luego se colocan en autoclave.3. deben ir directamente a un recipiente con desinfectante.5°C). Aunque el organismo incorpora éstas sustancias se producen efectos nocivos relativamente leves para la salud.1. Muestras radiactivas infectadas Se descartan en las bolsas amarillas para desechos radiactivos. Solicitar a la casa comercial el catálogo que incluye recomendaciones para el manejo de reactivos. 14.4. la sangre y sueros se introducen en recipientes impermeables y se esterilizan en autoclave.6. 14.6. gasas. Símbolos de peligrosidad Sustancias fácilmente inflamables (F).5. acerca de los riesgos a tener en cuenta al manipular la sustancia. papeles contaminados se introducen en bolsas de color rojo y se llevan a incinerar.5. llamas y chispas. Evitar el contacto con el cuerpo humano así como la inhalación de vapores. . los líquidos o gases inflamables y las sustancias que al contacto con el agua producen gases fácilmente inflamables. 14. inhalación de sustancias venenosas o la absorción de sus vapores a través de la piel y las membranas mucosas. se procede a efectuar el lavado correspondiente. Solamente después de haber descontaminado el material en autoclave. Evitar la ingestión. Los algodones. 14. Riesgos químicos Los reactivos químicos tienen en sus etiquetas información visual rápida y clara tales como letras. Sustancias nocivas (Xn). Las bolsas anaranjadas y rojas se recogen dos veces al día y se llevan al incinerador a 1500°F (815. A este grupo pertenecen las sustancias auto inflamables. frases o pictogramas. Los efluentes de los instrumentos para analizar sangre o suero. Evitar contacto con el aire y la formación de mezclas inflamables gas-aire.Los cultivos.

Es el peligro o. Evitar cualquier contacto con sustancias combustibles tales como ropa. . madera y materiales parecidos. fricción. percusión.6. agua u otras sustancias. Riesgos específicos (frases R): Proporcionan información adicional acerca de los riesgos que involucra el uso de una sustancia química. Riesgo de inflamabilidad. con la piel. No inhalar vapores. Ejemplo. al producir oxígeno reaccionan violentamente con sustancias inflamables que las incendian sin que exista otra fuente de ignición. formación de chispas y acción del calor sobre estas sustancias. S:30 nunca agregue agua a este producto. ni exponer la piel o las mucosas al contacto con estas sustancias.Sustancias corrosivas (C). 14.6. Evitar choque. porque producen irritación especialmente en el sistema respiratorio. Sustancias explosivas (E). Consejos de prudencia (Frases S): Se refiere a recomendaciones de seguridad acerca del manejo del reactivo o como reaccionar en caso de accidente. Estas sustancias no son inflamables por sí solas.S) La etiqueta presenta las letras R y S con un o unos números cuyo significado se debe consultar en las tablas diseñadas para este propósito. Categorías de riesgo El riesgo se puede clasificar en 4 categorías : Riesgo para la salud. Sustancias comburentes o de fácil combustión (O). papel. Evitar el contacto de estas sustancias con la piel. 14. Tendencia de la sustancia a incendiarse. Seguridad (R . efecto tóxico que produce una sustancia al inhalada ingerida o absorbida. aunque.3. R:35 provoca quemaduras graves. Potencial de una sustancia violentamente con aire. El peligro que una sustancia presenta al entrar en contacto ojos y membranas mucosas.2. Ejemplo. Sustancias irritantes (Xi). ojos y membranas mucosas. Sus vapores producen irritaciones y la sustancia destruye el tejido según su concentración. Riesgo de reactividad. para explotar o reaccionar ser Riesgo de contacto.

Los reactivos se pueden almacenar adoptando alguno de los siguientes sistemas: Orgánicos / Inorgánicos. . de contacto respectivamente. polvo de madera. ya que se desarrollan gases nitrosos e inflamables. Almacenamiento de reactivos Antes de almacenar reactivos es conveniente solicitar asesoría profesional y conocer las propiedades fisicoquímicas de estos. 14. NFPA. Si no existe desnivel en el piso utilizar un medio absorbente. En caso de que un ácido se derrame .4.6. No absorba el HNO3 concentrado con material inflamable (papel. Utilizar guantes y gafas de protección.14.5.6. rojo. blanco. Escalas de peligrosidad Según el grado de peligrosidad las sustancias suelen ser clasificadas en una escala de 0 a 4. Utilizar agentes neutralizantes y grandes cantidades de agua. Retirar inmediatamente salpicaduras y derrames. neutralizar o colocar arena. Cinco colores. El color anaranjado es para las sustancias con categoría de riesgo menor de 2 y cualquiera de los colores mencionados pero con rayas corresponde a los reactivos no compatibles. amarillo. de reactividad. 14. Recoger la mezcla y lavar con abundante agua.6.6. de inflamabilidad. Manejo de reactivos Reactivos tóxicos corrosivos No transportar en bolsillos No pipetear con la boca Manipular en campana extractora o en un sitio ventilado. celulosa). Este último se hace utilizando los colores azul. CERO (0): UNO (1): DOS (2) : TRES (3): CUATRO (4) : Nulo Ligero Moderado Severo Extremo Una sustancia clasificada en 3 ó 4 en cualquier categoría de riesgo. muestra también un símbolo de advertencia. IMCO. Las sustancias neutralizantes como bicarbonato de sodio (NaHCO3 ) cal apagada (contra ácido fluorhídrico) deben mezclarse con agua para mayor eficacia. que indican riesgos para la salud.

mucosas Lavar las salpicaduras sobre la piel con abundante agua. ojos. El lavado de los ojos se hace así: Paciente en posición supina Lavar con abundante agua Mantener los párpados abiertos Realizar movimientos de rotación en el ojo 14. 14. Responsabilidades y deberes Es responsabilidad del director de la institución o del laboratorio el desarrollo de programas de bioseguridad.7.1. Sin embargo puede delegar la organización y gestión de la seguridad en un inspector de seguridad el cual será miembro del comité de seguridad encargado de la evaluación y revisión de programas y de la aplicación de las normas. reacciones químicas y riesgos asociados a equipos electrónicos. incluyendo aquel que trabaja en la noche o en fines de semana. Reactivos ácidos y álcalis Almacenar en el piso Manipular con gafas. Merece especial atención los nuevos procesos y el personal nuevo. está la revisión de la polaridad. evacuación y manejo de los diferentes extintores. La evaluación del riesgo se debe hacer al comienzo y a través del proceso teniendo en cuenta. para evitar el uso de adaptadores múltiples. Debe establecerse un programa de entrenamiento sobre seguridad contra incendios que incluya reconocimiento de la alarma o señal de notificación. reactivos usados. Programa de bioseguridad en el laboratorio 14.8. . Lavar inmediatamente las salpicaduras en los ojos con abundante agua y consultar al médico. Todo el personal debe participar mínimo una vez al año en un simulacro de evacuación. Riesgos eléctricos y protección contra incendios Como parte del programa de mantenimiento preventivo de los instrumentos de laboratorio. de los cables averiados y de la distribución apropiada de las conexiones eléctricas.8. guantes protectores Evitar contacto con la piel.Los ácidos desprenden vapores tóxicos y al entrar en contacto con metales ligeros producen hidrógeno aumentando el peligro de explosión.

Primeros auxilios. Descontaminación y eliminación. Una de las formas de evaluar el programa de seguridad es elaborar una lista de comprobación para determinar su existencia. ejemplo: Existen equipos para la prevención de incendios? . establecer planes de emergencia. reactivos y equipos. transporte. Derechos y deberes de los trabajadores relacionados con la seguridad. Equipo de protección personal. cerciorarse de que todo el personal haya recibido instrucciones.2. La bioseguridad del laboratorio compromete también a todo el personal y cada uno debe cumplir estrictamente todas las normas de seguridad establecidas. vigilar casos de enfermedad o de ausencias laborales. con el fin de garantizar el bienestar individual y colectivo de la institución.Las funciones del inspector de seguridad son: Comprobar el cumplimiento de las normas de bioseguridad. Manejo de material. Almacenamiento. 14. químicos y físicos. Los temas que pueden constituir un cursillo básico son: Fuentes de infección Riesgos biológicos. Capacitación La organización y puesta en marcha del programa de bioseguridad incluye capacitación para el personal técnico y auxiliar con el fin de fomentar las prácticas correctas de laboratorio.8.

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recursos y conceptos que satisfagan las necesidades actuales.1. comportamiento y participación del recurso humano. trabajo en grupo. (Organigrama 15.2. facilita y apoya el mejoramiento continuo de los laboratorios clínicos del país. 15. Legislación vigente Con la Ley 10 de Enero de 1990 y la Ley 100 de 1993.).ASEGURAMIENTO DE LA EN LOS LABORATORIOS CLINICOS 15.) ADMINISTRACIÓN DE CALIDAD FUNCIÓN GENERAL DEFINIR RESPONSABILIDADES POLÍTICA DE CALÍDAD OBJETIVOS ESTABLECER SISTEMA DE CALÍDAD CONTROL DE CALÍDAD ASEGURAMIENTO DE LA CALÍDAD MEJORAM I ENTO DE LA CALÍDAD PLANIFICACIÓN DE CALIDAD La adecuada disposición de elementos. cooperación y buen desempeño de todos los integrantes del laboratorio. capacitación.1. Concepto La Calidad Total es un método científico. en los próximos años el país sufrirá un cambio institucional cuyos lineamientos serán regidos por los principios de equidad.1. basado en el mejoramiento permanente y continuo para alcanzar la satisfacción de las necesidades del paciente y en la que se encuentra involucrada toda la entidad mediante la fortaleza en la calidad de la educación. . (Figura15.

garantizándole la calidad en la prestación de los servicios esenciales y dice: " La ley regulará el control de calidad de bienes y servicios ofrecidos y prestados a la comunidad así como la información que debe suministrarse al público en su comercialización.Cambio de subsidio a la oferta por subsidio a la demanda . de la Constitución Nacional defiende los derechos del ciudadano. representación. transparencia. personalizada. Los conceptos contemplados dentro del Sistema de Seguridad Social en Salud. universalidad. Los sistemas de garantía existentes se reducen a controles de calidad al interior de algunos laboratorios privados y públicos por iniciativa propia. . humanizada..tendrá la oportunidad de escoger la IPS y los profesionales entre las opciones que cada EPS ofrece¨. dificultando la unificación de medidas de control y la estandarización de normas y procedimientos.Oferta de servicios independientes. establece: " . El capitulo 3 . que no generan impacto alguno sobre el mejoramiento y diseño de procesos efectivos. en todas las instancias de asociación. integral. eficiencia y calidad entre otros... prestadoras de servicios y administradoras del Sistema de Seguridad Social en Salud. continua y de acuerdo con estándares aceptados en procedimientos y práctica profesional¨.159 de la Ley 100 de 1993. sobre la exigencia y garantía de la calidad se basan en: El Art. Por otra parte el usuario tendrá participación ya sea en forma individual o grupal. autónomos y de libre escogencia .libre escogencia.. promotoras. Artículo 78. que se fundamentan en aspectos importantes como son: . " El principio de Calidad se describe en la Ley 100 de 1993 como: " El sistema establecerá mecanismos de control a los servicios para garantizar a los usuarios calidad en la atención oportuna.Libertad del usuario para escoger el servicio Como resultado de estos cambios los usuarios exigirán la calidad en la prestación de los servicios y la utilización de herramientas necesarias para que esta sea tenida en cuenta dentro de los procesos adelantados. veeduría de las entidades rectoras.

b. Calidad La calidad es un concepto que debe interpretarse en dos dimensiones íntimamente relacionadas e interdependientes. El Decreto 2174 de 1996. d. humanas. oportunidad. la limpieza y las condiciones internas del laboratorio. además del Decreto 4252 de Noviembre de 1997. Contenidos Técnicos: Se refiere a los criterios. como complemento del anterior. la disponibilidad y suficiencia de recursos. Las características principales de la calidad de la atención en salud. Una técnica representada por la aplicación de conocimientos y técnicas para la solución del problema del paciente y una interpersonal. e. La calidad integra características adicionales como la idoneidad. en el proceso de atención a los u suarios desde el punto de vista técnico y humano para alcanzar los resultados deseados. que pueden evaluarla por sí mismos. Integridad: Es la capacidad de identificar todas las necesidades del usuario y procurar su rápida resolución. la seguridad y la racionalidad técnica. bajo la responsabilidad de las personas e instituciones que integran el sistema y la correcta utilización de los servicios por parte de los usuarios. Continuidad: Es la característica del servicio para realizar actividades sin interrupción o ruptura del proceso de atención. organiza el Sistema Obligatorio de Garantía de Calidad del Sistema de Seguridad Social en Salud y establece la Calidad de la atención en Salud como el conjunto de características técnico científicas.15. muestran respeto y consideración por los pacientes . Los siguientes son los elementos de un servicio con calidad: a. la continuidad. . la eficiencia. desde la toma de la muestra hasta la entrega final del producto. son: la accesibilidad. Es el conjunto de requisitos que deben cumplir los servicios de salud. la atención humanizada y la satisfacción del usuario con la atención recibida. representada por la relación que se establece entre el proveedor del servicio y el receptor del mismo. destrezas y recursos necesarios para la atención del usuario. actitudes. financieras y materiales que debe tener la Seguridad Social en Salud. Oportunidad: Periodo transcurrido entre el recibo de la orden médica y la entrega de los resultados o productos en el laboratorio dentro de los límites de tiempo aceptables. el trato que el personal dá al usuario. que establece los requerimientos esenciales.3. la integralidad. Calidad Humana: Cuando las relaciones interpersonales. capacitación. el orden. habilidades. c. la competencia profesional.

el manejo manual o automatizado de la identificación del paciente y de la muestra. entendido como el conjunto de acciones sistemáticas y continuas tendientes a incrementar beneficios y a evitar riesgos para los pacientes mediante la evaluación y monitoreo de procesos. su análisis.4.15.Nivel de eficiencia RESULTADO Entrega al usuario Figura 15. La garantía de la calidad es un componente esencial en la práctica moderna. la validación y la transmisión de los resultados . con miras a asegurar la calidad. si el personal tiene en cuenta los siguientes principios: SISTEMA DE GARANTÍA DE CALIDAD INSUMO Demanda del servicio PROCESO .15.).Verificación de la calidad del servicio .2 . desarrollo y cambios organizacionales . la toma de la muestra. El estado del paciente. Este sistema hace posible implementar estrategias de evaluación y de mejoramiento continuo de la calidad con un programa gerencial que facilita al laboratorio mantener un alto nivel en sus productos y servicios. diseño. crean situaciones susceptibles de error que deben ser previstas y corregidas oportunamente. programas y sistemas efectivos de gestión. Garantía de la calidad Es el conjunto de todas las actividades necesarias para producir resultados seguros y confiables determinados en la adopción de normas. Con miras a lograrlo se han desarrollado los denominados sistemas de garantía de la calidad (Figura.2.

con base en procesos y técnicas diseñadas para detectar reducir y corregir deficiencias. que comprende las siguientes fases: a. error total c. interferencia Límite de detección.5. Fase Preanalítica: Preparación y recepción del paciente Preparación y manejo de la muestra Almacenamiento y transporte de la muestra Flujo de datos b. se refiere al muestreo. Claridad en funciones y forma de desarrollarlas.1. Control de la calidad Uno de los principales componentes de orden técnico y administrativo de la garantía de la calidad. Dar ejemplo de responsabilidad y ejercicio ético 15. Fase postanalítica: Confirmación de los resultados Intervalos de referencia Puntualidad Reporte de resultados .5. verificación del cumplimiento de las especificaciones y la correcta aplicación. lectura y desarrollo de las pruebas.Reconocimiento de la importancia de la calidad y el nivel en la prestación de servicios. Los programas de control de calidad se clasifican teniendo en cuenta dos aspectos: 15. Control de Calidad Interno: Procedimientos establecidos por el laboratorio o conocidos usualmente como programa interno. Fase analítica: Capacitación requerida Disponibilidad de reactivos Requerimiento de equipos Tiempo de ejecución Costo Seguridad Control de precisión y exactitud Linealidad Especificidad. intervalo de medición.

Mediante la acreditación los prestadores de servicios de salud podrán solicitar . cuando se considere oportuno llevar a cabo el proceso de valoración. Instrumentos de apoyo al control de la calidad total a. asesorar y trabajar conjuntamente en busca de soluciones.Confidencialidad 15. Proporcionar un apoyo al programa de control de calidad interno. Validación: Parte del programa de garantía que evalúa por anticipado las etapas que se recorren en los procedimientos operativos o en la preparación de un producto de manera que se asegure su calidad. que permite vigilar la calidad del sistema de garantía. Programa de Evaluación Externa de la Calidad (E. Auditoría: Es un instrumento de gestión. Los objetivos del programa son: Establecer el grado de correlación de los resultados entre los laboratorios participantes y un laboratorio de referencia. su eficacia y su confiabilidad. c. Intercambiar experiencia y conocimientos. ante las instancias competentes la verificación y certificación de los servicios que han superado los requisitos esenciales para la prestación de servicios de salud. .C. en una revisión de todos los factores que intervienen en productos y servicios destinada a identificar problemas y enfoques para su solución. 15. este es un proceso esencial para garantizar la armonía o transferencia de resultados entre distintos laboratorios y para identificar errores.E. Consiste en síntesis.6. Ubicar los problemas técnicos. pueden surgen errores que solo son detectables con la Evaluación Externa de la calidad (Control de Calidad Externo ó Prueba de Proficiencia). Acreditación: Es un procedimiento sistemático voluntario y periódico. b. orientado a demostrar el cumplimiento de estándares de calidad superiores a los requisitos esenciales establecidos para la prestación de servicios de salud.5.): Aún cuando se tomen todas las precauciones para emitir resultados confiables mediante el control interno.2.

Los problemas de organización pueden ser internos o ser causados por factores externos. además. del manual de cargos. No siempre se deben a falta de conocimientos o de aptitudes o a problemas de mentalidad. puede facilitar el que se cometan errores. Disponibilidad y organización de los recursos en cantidad y calidad adecuados para suministrar el servicio. análisis de requerimientos. a. La formación. Los errores técnicos pueden ser causados por el personal o por defectos en los reactivos y/o el equipo. Requerimientos para implementar la calidad Identificación. Disponibilidad. la sobrecarga en el trabajo. son de tipo administrativo. Gestión de la Calidad Conjunto de acciones encaminadas a planificar. sino que resultan de la trascripción ilegible de letras o números y a veces a la excesiva complicación de procedimientos e informes. Es importante investigar a fondo cualquier error técnico que pueda producirse.7. b. . necesidades cliente externo. Vigilancia de la Calidad Parte de la garantía de la calidad que se ocupa del mantenimiento y mejoramiento de la calidad así como de la identificación y uso de los indicadores que permitan detectar variaciones con respecto a las normas y especificaciones. cumplimiento. suficiencia. Muchos de los errores administrativos pueden tener graves consecuencias. c. A efecto de facilitar el trabajo. continuidad. se recomienda tener en cuenta los siguientes criterios: Fuentes de error: Las principales fuentes de error. accesibilidad y conocimiento de protocolos de procedimientos en cada área. y aspiraciones del Disponibilidad y conocimiento de todos los miembros del equipo. Las estrategias para mejorar la calidad. de organización y técnicos.d. porque revela una falla en el sistema. conducen a la disminución en los costos. funciones y responsabilidades. Determinación y análisis periódico del servicio relacionados con la oportunidad. así mismo. definición. debido a que el número de eventos o procedimientos que deben repetirse se presentan con menor frecuencia. precisión. son necesarios para reducir su frecuencia. e. los retrasos en procesos y procedimientos. vigilancia y readiestramiento. porque se hace una mejor utilización de los recursos 15. organizar y controlar el buen funcionamiento del laboratorio. pertinencia y confiabilidad.

3. sin vencimiento y/o expiración. Dar a conocer los estándares de calidad a los funcionarios del laboratorio. entrenamiento y experiencia para cada cargo. supervisión. plan en ejecución de mantenimiento preventivo y correctivo. discusiones científicas. Programa de personal Facilitar la capacitación requerida para garantizar la calidad del servicio y el mejoramiento del desempeño del cargo. Existencia de recurso humano que cumpla con los requisitos de capacitación. etc. oportuno y confiable.9. Definir en una propuesta clara. . Pasos para mejorar la calidad de los servicios del laboratorio 1. a través de acciones de supervisión. Funcionamiento de sistemas de información ágil.Existencia y buen funcionamiento de equipos. ayudas audiovisuales. 2. Clasificar estándares de calidad Prevenir errores y evitar que se repitan Tener claridad de los problemas prioritarios Hacer las cosas bien desde el principio No bajar la guardia Enfocar el trabajo hacia la perfección y mejoramiento Tener visión prospectiva 15. (qué tiene que hacer cada uno). asesoría. Definir estándares de calidad utilizando recursos que faciliten su implementación. 15. la estrategia del servicio al usuario.8. además de indicadores medibles y observables. Existencia suficiente de reactivos.(evaluación permanente.). cursos o sesiones de entrenamiento La calidad de los laboratorios se fortalece conservando los principios de control de calidad como: Asimilar la responsabilidad personal y no trasladarla a otros. sencilla y muy corta. disponibilidad de biblioteca.

Si no se averigua cómo. se deberán aplicar y fortalecer las siguientes estrategias: Asistencia Técnica: Es el conjunto de planes. Beneficios del sistema de calidad total 1. Evaluación permanente de la calidad 7. la particular importancia que tiene la formación de personal. La formación debe estar planificada y debe ser permanente. los factores humanos constituyen las variables más importantes de cualquier procedimiento. programas y actividades que tienen como fin orientar técnicamente el desarrollo de los procesos de mejoramiento y fortalecer la capacidad de los diferentes actores institucionales para llevarlos a efecto. 6. c. cuándo o dónde se ha producido un error. Prevención de errores. diálogo. Mayor prestigio. Usuarios satisfechos 2. No basta con detectar los errores. Aplicación de innovaciones y tecnología moderna. . servicio oportuno). Los círculos de calidad están constituidos por grupos pequeños de una misma área de trabajo que se reúnen periódicamente para resolver problemas referentes al trabajo y acordar conjuntamente planes de acción (Figura. d. Mejor calidad de productos y servicios a menor costo 3. 15. que a todos los nuevos miembros del personal se les oriente y revalide en el lugar de trabajo. proceden de errores humanos.14. Evaluación sistemática del rendimiento de los funcionarios.).11. 7. 5.4. Por consiguiente. sino que es igualmente importante analizarlos y clasificarlos. Crecimiento del laboratorio por reconocimiento de la gestión 5. no podrán adoptarse las medidas adecuadas para corregirlos. será preciso. 15. (amabilidad. b. proyectos. Recomendaciones generales a. Incremento en la productividad y en la satisfacción por el trabajo 4. así como su evaluación. e. ignorancia o descuido y por la utilización de técnicas defectuosas. Aumento de la demanda 6. Una buena parte de las fallas.3.10. Esto explica. Diseñar sistemas para darle un servicio atractivo al usuario. Para estimular la calidad en las instituciones públicas prestadoras de servicios de salud. El protocolo de la formación deberá ser objeto de constante evaluación y siempre que sea necesario se actualizará.

es fundamental que las observaciones sobre problemas se hagan en forma constructiva. proyectos. La fase final y la más importante es la autoevaluación.Análisis del problema y la situación actual .Estímulos que son el conjunto de planes. FASES A SEGUIR EN LOS PLANES DE A C C I Ó N DE LOS CÍRCULOS D E CALIDAD PLANEACIÓN . programas e iniciativas que premian y fomentan el desarrollo de procesos de mejoramiento en la prestación de servicios de salud. para permitir una efectiva evaluación y posibles de alcanzar con los recursos disponibles. Periódicamente.Aprovechamiento de recursos VERIFICACIÓN .Fijación de objetivos .Derminación de estándares de calidad . Cuáles? y Cómo? EJECUCIÓN . deben ser suficientemente concretos. son mucho más fáciles de alcanzar que las que requieren un cambio de actitud del personal.Contratación con estándares de calidad . el laboratorio debe seleccionar uno o varios objetivos para su evaluación. para asegurar que esta satisface los objetivos propuestos. Para mantener el buen espíritu del personal.Acuerdo sobre lo esperado . Los objetivos seleccionados para la evaluación deben ser aquellos que permitan lograr la misión del laboratorio.Planteamiento de problemas . Figura 15. Se debe recordar que las mejoras que se derivan de un cambio en los procedimientos.3.Selección de alternativas .Determinación de Quién?. Qué? . Dónde?.Ejecución de las medidas tomadas .Confrontación de resultados .

Revisar los controles y la vigilancia de la calidad. incluso los procedimientos operativos normalizados. seguir los conductos regulares y las normas de control interno. establecer las normas. procedimientos. además que debe estar dispuesto a comunicarse dentro de los parámetros de respeto y los lineamientos establecidos para tal fin. los retrasos en la programación. Uso de controles positivos y negativos en pruebas serológicas. Sacar conclusiones y formular recomendaciones. reactivos y equipos. con todo el personal del área. control de la calidad. El personal que se encargue del programa debe ser responsable. desperdicio de energía y empleo de esquemas obsoletos. organizado. Uso de estándares para calibración de instrumentos. La calidad total permite contrarrestar las fallas internas y externas del laboratorio. Control de funcionamiento de equipos. capacitado. Proceder a una nueva evaluación del personal. Control de esterilidad. Asegurarse de que han sido validados. Desarrollo de recurso humano. asegurando que estas satisfacen las especificaciones nacionales. para realizar un verdadero trabajo de equipo. Para que puedan adoptarse las medidas correctivas será preciso: Investigar el error. los métodos. h. En cooperación con todo el personal. Iniciar las investigaciones y tomar medidas correctivas siempre que se observe algún error. la repetición de errores. Asumir las siguientes responsabilidades: Organizar todos los documentos. reactivos. Preparar informes y tomar las medidas correspondientes. monotonía. en cuanto al rechazo del paciente. capaz de trabajar en equipo. artículos de consumo y equipos.f. Debe incluir dentro de las normas básicas de calidad: Programas de mantenimiento de equipos. . g. el nuevo personal.

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